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एन्गुस्टिफोलियस ल्यूपिन (एनएलएल, ल्यूपिनस एन्गुस्टिफोलियस एल.) एक फलीदार पौधा है जिसका उपयोग खाद्य उत्पादन और मिट्टी सुधार के लिए किया जाता है।एक फसल के रूप में एनएलएल के वैश्विक विस्तार ने ल्यूपिन एन्थ्रेक्नोज सहित कई रोगजनक कवक को आकर्षित किया है, जो विनाशकारी एन्थ्रेक्नोज रोग का कारण बनता है।दो एलील, Lanr1 और AnMan, जो बढ़े हुए प्रतिरोध प्रदान करते हैं, का उपयोग NLL प्रजनन में किया गया है, लेकिन अंतर्निहित आणविक तंत्र अज्ञात हैं।इस अध्ययन में, यूरोपीय एनएलएल नमूनों की स्क्रीनिंग के लिए Lanr1 और AnMan मार्करों का उपयोग किया गया था।नियंत्रित वातावरण में टीके के परीक्षण से दोनों प्रतिरोधी दाताओं की प्रभावकारिता की पुष्टि हुई।विभेदक जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग प्रतिनिधि प्रतिरोधी और अतिसंवेदनशील रेखाओं पर की गई थी।एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन ऑन्टोलॉजी शब्दों "जीओ:0006952 डिफेंस रिस्पांस", "जीओ:0055114 रेडॉक्स प्रोसेस" और "जीओ:0015979 प्रकाश संश्लेषण" की अतिअभिव्यक्ति से जुड़ा था।इसके अलावा, Lanr1(83A:476) लाइन ने टीकाकरण के बाद तेजी से महत्वपूर्ण ट्रांसक्रिप्टोम रिप्रोग्रामिंग दिखाई, जबकि अन्य लाइनों ने इस प्रतिक्रिया में लगभग 42 घंटे की देरी दिखाई।रक्षा प्रतिक्रियाएं टीआईआर-एनबीएस, सीसी-एनबीएस-एलआरआर और एनबीएस-एलआरआर जीन, रोगजनन में शामिल 10 प्रोटीन, लिपिड ट्रांसफर प्रोटीन, एंडोग्लुकन-1,3-β-ग्लूकोसिडेज़, ग्लाइसीन-समृद्ध कोशिका दीवार प्रोटीन और ऑक्सीजन के प्रतिक्रियाशील पथ से जीन से जुड़ी हैं।83ए:476 की प्रारंभिक प्रतिक्रियाएं, जिसमें प्रकाश संश्लेषण से जुड़े जीनों का सावधानीपूर्वक दमन शामिल है, कवक जीवविज्ञान के वनस्पति विकास चरण के दौरान सफल सुरक्षा के साथ मेल खाती है, यह सुझाव देती है कि एक प्रभावक प्रतिरक्षा को ट्रिगर करता है।मंडेलूप प्रतिक्रिया धीमी हो गई है, जैसा कि समग्र क्षैतिज खिंचाव है।
नैरो-लीव्ड ल्यूपिन (एनएलएल, ल्यूपिनस एंगुस्टिफोलियस एल.) पश्चिमी भूमध्यसागरीय क्षेत्र1,2 में उत्पन्न होने वाला एक उच्च प्रोटीन अनाज है।वर्तमान में इसे जानवरों और मनुष्यों के लिए खाद्य फसल के रूप में उगाया जाता है।सहजीवी नाइट्रोजन स्थिरीकरण बैक्टीरिया द्वारा नाइट्रोजन स्थिरीकरण और मिट्टी की संरचना में समग्र सुधार के कारण इसे फसल चक्र प्रणाली में हरी खाद भी माना जाता है।पिछली शताब्दी में एनएलएल में पालतू बनाने की तीव्र प्रक्रिया हुई है और अभी भी उच्च प्रजनन दबाव3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 है।एनएलएल की व्यापक खेती के साथ, रोगजनक कवक के उत्तराधिकार ने नए कृषि क्षेत्रों का विकास किया और नई फसल-नष्ट करने वाली बीमारियों का कारण बना। ल्यूपिन किसानों और प्रजनकों के लिए सबसे उल्लेखनीय एन्थ्रेक्नोज की उपस्थिति थी, जो रोगजनक कवक, कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (बॉन्डार) निरेनबर्ग, फीलर और हेजडॉर्न13 के कारण हुई थी। ल्यूपिन किसानों और प्रजनकों के लिए सबसे उल्लेखनीय एन्थ्रेक्नोज की उपस्थिति थी, जो रोगजनक कवक, कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (बॉन्डार) निरेनबर्ग, फीलर और हेजडॉर्न13 के कारण हुई थी। Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появ अधिक पढ़ें ल्यूपिन किसानों और प्रजनकों के लिए सबसे उल्लेखनीय एन्थ्रेक्नोज का उद्भव था जो रोगजनक कवक कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (बॉन्डार) निरेनबर्ग, फीलर और हेजडोर्न13 के कारण हुआ था।对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原真菌कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (बोंडर) निरेनबर्ग, फ़ेइलर और हेजडोर्न13 की रिपोर्ट।对于羽扇豆农民和饲养者来说,最引人注目的是炭疽病的出现,它是由病原真菌Colletotrichum lupini (Bondar)嵵बालों वाली。1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является पॉलिटोट्रिचम ल्यूपिनी (बॉन्डर) निरेनबर्ग, फेयलर और हेगडोर्न13 को एक पेशेवर एजेंट के रूप में जाना जाता है। ल्यूपिन किसानों और प्रजनकों के लिए सबसे अधिक चौंकाने वाली बात रोगजनक कवक कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (बॉन्डर) निरेनबर्ग, फीलर और हेजडॉर्न13 के कारण होने वाले एन्थ्रेक्नोज का उद्भव है।इस बीमारी की सबसे पहली रिपोर्ट ब्राजील और संयुक्त राज्य अमेरिका से आई थी, जिसके विशिष्ट लक्षण क्रमशः 1912 और 1929 में दिखाई दिए थे।हालाँकि, लगभग 30 वर्षों के बाद, रोगज़नक़ को कोलेटोट्राइकम ग्लियोस्पोरियोइड्स (पेन्ज़) पेन्ज़ के रूप में नामित किया गया था। और सैक., टेलोमोर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड। और सैक., टेलोमोर्फ ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड। और सैक., टेलेमोमोरोप ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड। और सैक., ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड का टेलोमोर्फ। और Sacc., मैं एक विशेषज्ञ के रूप में काम करता हूं ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड。 और Sacc., मैं एक विशेषज्ञ के रूप में काम करता हूं ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड。 और सैक., ग्लोमेरेला सिंगुलाटा (स्टोनमैन) स्पाउल्ड और सेलेनापोलोमोग्राफ़ी। और सैक., ग्लोमेरेला सिंगुलता (स्टोनमैन) स्पाउल्ड लक्षित आकृति विज्ञान में। और एच. श्रेन्क,. और एच. श्रेन्क,.और एच. श्रेन्क. और एच. 施伦克,。 और एच. 施伦克,。और एच. श्लेन्क,.20वीं सदी के मध्य में किए गए प्रारंभिक रोग फेनोटाइपिंग ने एनएलएल और पीली ल्यूपिन (एल. ल्यूटस एल.) परिग्रहणों में कुछ प्रतिरोध दिखाया, लेकिन परीक्षण किए गए सभी सफेद ल्यूपिन (एल. एल्बस एल.) परिग्रहण अत्यधिक संवेदनशील15,16 थे।अध्ययनों से पता चला है कि एन्थ्रेक्नोज का विकास बढ़ी हुई वर्षा (वायु आर्द्रता) और तापमान (12-28 डिग्री सेल्सियस की सीमा में) से जुड़ा हुआ है, जिससे उच्च तापमान 17, 18 पर प्रतिरोध का उल्लंघन होता है। वास्तव में, कोनिडिया के अंकुरण और बीमारी शुरू होने के लिए आवश्यक समय, उच्च आर्द्रता की स्थिति में 12 डिग्री सेल्सियस (16 घंटे) की तुलना में 24 डिग्री सेल्सियस (4 घंटे) पर चार गुना कम था।इस प्रकार, चल रही ग्लोबल वार्मिंग के कारण एन्थ्रेक्नोज का प्रसार हुआ है।हालाँकि, इस बीमारी को फ्रांस (1982) और यूक्रेन (1983) में एक आसन्न खतरे के अग्रदूत के रूप में देखा गया था, लेकिन उस समय ल्यूपिन उद्योग द्वारा इसे स्पष्ट रूप से नजरअंदाज कर दिया गया था।कुछ साल बाद, यह विनाशकारी बीमारी पूरी दुनिया में फैल गई और ऑस्ट्रेलिया, पोलैंड और जर्मनी जैसे प्रमुख ल्यूपिन उत्पादक देशों को भी प्रभावित किया।1990 के दशक के मध्य में एन्थ्रेक्नोज के प्रकोप के बाद, व्यापक जांच के परिणामस्वरूप एनएलएल19 नमूनों में कई प्रतिरोधी दाताओं की पहचान हुई।एन्थ्रेक्नोज के लिए एनएलएल प्रतिरोध को विभिन्न जर्मप्लाज्म स्रोतों में पाए जाने वाले दो अलग-अलग प्रमुख एलील्स द्वारा नियंत्रित किया जाता है: कल्टीवेर तंजिल और वोंगा में लैनआर 1 और कल्टीवेर में अनमैन।मांडले 25, 26। ये एलील आणविक मार्करों के पूरक हैं जो प्रजनन कार्यक्रमों 25,26,27,28,29,30 में प्रतिरोधी जर्मप्लाज्म के चयन का समर्थन करते हैं।लैनआर1 एलील को ले जाने वाली प्रतिरोधी प्रजनन लाइन 83ए:476 को एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध के लिए अलग होने वाली आरआईएल आबादी प्राप्त करने के लिए अतिसंवेदनशील वाइल्ड लाइन पी27255 के साथ पार किया गया था, जिससे लैनआर1 लोकस को क्रोमोसोम एनएलएल-1131, 32, 33 को निर्दिष्ट करना संभव हो गया। एक जीनोमिक ढांचे के साथ फ्लैंकिंग प्रतिरोध लोकी से एन्थ्रेक्नोज तक लिंकेज मैप मार्करों का संरेखण, एनएलएल ने सभी तीन एलील्स के स्थान का खुलासा किया। एक ही गुणसूत्र (एनएलएल-11), लेकिन विभिन्न स्थितियों में29,34,35।हालाँकि, आरआईएल की कम संख्या और मार्करों और संबंधित एलील्स के बीच बड़ी आनुवंशिक दूरी के कारण, उनके अंतर्निहित जीन के बारे में कोई विश्वसनीय निष्कर्ष नहीं निकाला जा सकता है।दूसरी ओर, ल्यूपिन में रिवर्स जेनेटिक्स का उपयोग उनकी बहुत कम पुनर्जनन क्षमता के कारण मुश्किल है, जो आनुवंशिक हेरफेर को बोझिल बना देता है।
83ए:476 (लानआर1) और मैंडेलुप (एनमैन) जैसे समयुग्मजी अवस्था में वांछित एलील ले जाने वाले घरेलू जर्मप्लाज्म के विकास ने जंगली आबादी में एलील्स के विरोधी संयोजनों की उपस्थिति के सामने एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध का अध्ययन करने का द्वार खोल दिया है।आणविक तंत्र की संभावनाएँ.विशिष्ट जीनोटाइप द्वारा उत्पन्न रक्षा प्रतिक्रियाओं की तुलना करें।इस अध्ययन ने सी. ल्यूपिनी टीकाकरण के प्रति एनएलएल की प्रारंभिक प्रतिलेखीय प्रतिक्रिया का मूल्यांकन किया।सबसे पहले, 215 लाइनों वाले एक यूरोपीय एनएलएल जर्मप्लाज्म पैनल को आणविक मार्करों का उपयोग करके जांचा गया था जो लैनआर 1 और एनमैन एलील्स को चिह्नित करते हैं।एन्थ्रेक्नोज फेनोटाइपिंग को नियंत्रित परिस्थितियों में पहले से आणविक मार्करों के लिए चयनित 50 एनएलएल लाइनों पर किया गया था।इन प्रयोगों के आधार पर, दो पूरक दृष्टिकोणों का उपयोग करके अंतर रक्षा जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइलिंग के लिए एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध और Lanr1/AnMan एलील संरचना में भिन्न चार पंक्तियों का चयन किया गया था: उच्च-थ्रूपुट आरएनए अनुक्रमण और वास्तविक समय पीसीआर मात्रा का ठहराव।
मार्कर Lanr1 (Anseq3 और Anseq4) और AnMan (Anseq4) और AnMan (AnManM1) के साथ NLL जर्मप्लाज्म (N = 215) के एक सेट की स्क्रीनिंग से पता चला कि केवल एक लाइन (95726, सलामांका-बी के पास) सभी मार्करों के लिए "प्रतिरोध" एलील को बढ़ाती है, जबकि "'अतिसंवेदनशील' एलील्स की उपस्थिति" में 158 (~73) में सभी मार्करों का अनुपात पाया गया। 5%) लाइनें।तेरह लाइनों ने Lanr1 मार्कर के दो "प्रतिरोधी" एलील का उत्पादन किया, और 8 लाइनों ने Lanr1 के "प्रतिरोधी" एलील का उत्पादन किया।मार्कर.AnMan मार्कर का "प्रतिरोध" एलील (पूरक तालिका S1)।Anseq3 मार्कर के लिए दो रेखाएँ विषमयुग्मजी थीं और AnManM1 मार्कर के लिए एक विषमयुग्मजी थीं।42 लाइनें (19.5%) Anseq3 और Anseq4 एलील्स के विपरीत चरणों को ले गईं, जो इन दो लोकी के बीच पुनर्संयोजन की उच्च आवृत्ति का संकेत देती हैं।नियंत्रित स्थितियों के तहत एन्थ्रेक्नोज फेनोटाइप (पूरक तालिका एस 2) ने परीक्षण किए गए जीनोटाइप के प्रतिरोध में परिवर्तनशीलता का खुलासा किया, जो एन्थ्रेक्नोज की गंभीरता में परिलक्षित हुआ।औसत स्कोर में अंतर 1.8 (मध्यम प्रतिरोधी) से 6.9 (अतिसंवेदनशील) और पौधे के वजन का अंतर 0.62 (अतिसंवेदनशील) से 4.45 ग्राम (प्रतिरोधी) तक था। प्रयोग की दो प्रतिकृतियों में देखे गए मूल्यों (रोग गंभीरता स्कोर के लिए 0.51, पी = 0.00017 और पौधे के वजन के लिए 0.61, पी <0.0001) के साथ-साथ इन दो मापदंडों (− 0.59 और − 0.77, पी < 0.0001) के बीच एक महत्वपूर्ण सहसंबंध था। प्रयोग की दो प्रतिकृतियों में देखे गए मूल्यों (रोग गंभीरता स्कोर के लिए 0.51, पी = 0.00017 और पौधे के वजन के लिए 0.61, पी <0.0001) के साथ-साथ इन दो मापदंडों (− 0.59 और − 0.77, पी < 0.0001) के बीच एक महत्वपूर्ण सहसंबंध था। Выявлена ​​​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в дву х повторностях эксперимента (0,51 для баллов тяжести болезни, P = 0,00017 и 0,61 дл और अधिक पढ़ें 0,0001) 0,0001). प्रयोग के दो दोहरावों में देखे गए मूल्यों (रोग गंभीरता स्कोर के लिए 0.51, पी = 0.00017 और पौधे के वजन के लिए 0.61, पी <0.0001) के साथ-साथ इन दो मापदंडों (- 0.59 और -0.77, पी <0.0001) 0.0001) के बीच एक महत्वपूर्ण सहसंबंध पाया गया।0.51，P = 0.00017，植0.61，P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P < 0.0001)。0.5 वर्ष से अधिक समय तक कोई भी ऋण प्राप्त नहीं किया जा सकता है (0.5) 1 ， p = 0.00017 ， 植物 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（- 0.59 和– 0.59 和– 0.59和– 0.59 和- 0.77，पी < 0.0001)。 Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести заболевания 0,51, P = 0,00017 и масса растения 0, 61, पी <0,0001), और и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, पी <0,0001। डुप्लिकेट में देखे गए मानों (रोग गंभीरता स्कोर 0.51, पी = 0.00017 और पौधे का वजन 0.61, पी <0.0001) और इन दो मापदंडों (-0.59 और -0 .0001) 0.77, पी <0.0001 के बीच एक महत्वपूर्ण सहसंबंध था। ).अतिसंवेदनशील पौधों में देखे जाने वाले विशिष्ट लक्षणों में तने का सिकुड़ना और मुड़ना शामिल है जो "चरवाहे के धनुष" जैसी संरचना जैसा दिखता है, इसके बाद नारंगी/गुलाबी स्पोरोज़ोइट्स के साथ अंडाकार घाव होते हैं (पूरक चित्र 1)।Lanr1 (83A:476 और Tanjil) और AnMan (Mandelup) जीन वाले ऑस्ट्रेलियाई परिग्रहण मध्यम प्रतिरोधी हैं, 0.0331 और 0.0036)।कुछ पंक्तियाँ जिनमें "प्रतिरोधी" Lanr1 और/या AnMan एलील्स भी मौजूद हैं, रोग के लक्षण दिखाती हैं।
दिलचस्प बात यह है कि कुछ एनएलएल लाइनों में किसी भी "प्रतिरोधी" मार्कर एलील की कमी के कारण एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध का उच्च स्तर (लानर 1 या एनमैन जीनोटाइप के लिए तुलनीय या अधिक) पाया गया, जैसे कि बोरेगिन (दोनों मापदंडों के लिए पी मान <0.0001), बोजर (स्कोर के लिए पी मान <0.0001 और पौधे के वजन के लिए 0.001) और जनसंख्या बी-549/79बी (स्कोर के लिए पी मान <0.0001 और गैर-महत्वपूर्ण) वजन के लिए) दिलचस्प बात यह है कि कुछ एनएलएल लाइनों में किसी भी "प्रतिरोधी" मार्कर एलील की कमी के कारण एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध का उच्च स्तर (लानर 1 या एनमैन जीनोटाइप के लिए तुलनीय या अधिक) पाया गया, जैसे कि बोरेगिन (दोनों मापदंडों के लिए पी मान <0.0001), बोजर (स्कोर के लिए पी मान <0.0001 और पौधे के वजन के लिए 0.001) और जनसंख्या बी-549/79बी (स्कोर के लिए पी मान <0.0001 और गैर-महत्वपूर्ण) वजन के लिए) इसके अलावा, यह एनएलएल का एक छोटा सा टुकड़ा है, जो "उड़ान भरने वाला" है ркерного аллеля, показали высокий уровень устойчивости к антракнозу (сопост авимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 या AnMan), таких как Boregine (значение P) <0,0001 для обоих параметров), बोजर (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы раст ения) और популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). दिलचस्प बात यह है कि, किसी भी 'प्रतिरोधी' मार्कर एलील की कमी वाली कई एनएलएल लाइनों ने एन्थ्रेक्नोज (लानर 1 या एनमैन जीनोटाइप के लिए तुलनीय या उससे अधिक) के प्रतिरोध का उच्च स्तर दिखाया, जैसे कि बोरगिन (दोनों मापदंडों के लिए पी मान <0.0001), बोजर (मूल्यांकन के लिए पी मान <0.0001 और पौधे के वजन के लिए 0.001) और जनसंख्या बी-549/79बी (मूल्यांकन के लिए पी मान <0.0001 और महत्वपूर्ण नहीं) वजन).मैं आपको एनएलएल के बारे में बताता हूं, मुझे लगता है कि यह "लानआर1" है या एनमन।基因型相当或更高）,例如Boregine（两个参数的P 值<0.0001）,Bojar（P 值<得分为0.0001,植物重量为0.0 01） और तस्वीरें B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重量不显着）。 यह दिलचस्प है कि कुछ एनएलएल सिस्टम जिनमें कोई "एंटीजेनिक" मार्कर नहीं होता है, वे उच्च क्षैतिज प्रतिरोध (Lanr1 या AnMan जीन या उच्चतर के बराबर) दिखाते हैं, जैसे बोरेगिन (दोनों पैरामीटर P <0.0001), बोजर (P मान <0.0001, पौधे का वजन 0.001) और स्ट्रेन B-549/79b (P मान <0.0001, वजन महत्वपूर्ण नहीं)। इसके अलावा, यह एनएलएल के लिए पर्याप्त नहीं है, लेकिन केक-लाइन के लिए एलेक्जेंड्रा नहीं है। й «резистентности», показали высокие уровни устойчивости к антракнозу (срав) यह अभी भी है, यह लैनआर 1 या एनमैन का एक टुकड़ा है, जो बोरेगिन (पी для обоих па) के रूप में जाना जाता है раметров <0,0001), बोजर (значение P <0,0001, масса растения 0,001) और и популяция B-549/79b (оценка P) -значение <0,0001, масса незначительна). दिलचस्प बात यह है कि कुछ एनएलएल लाइनों में किसी भी 'प्रतिरोध' मार्कर एलील की कमी है, जिसमें एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध का उच्च स्तर (लानर 1 या एनमैन जीनोटाइप के बराबर या उससे अधिक) दिखाया गया है, जैसे कि बोरगिन (दोनों मापदंडों के लिए पी मान <0.0001), बोजर (पी-मान <0.0001, पौधे का वजन 0.001) और जनसंख्या बी-549/79बी (पी-मान <0.0001, वजन महत्वपूर्ण नहीं)।यह घटना प्रतिरोध के एक नए आनुवंशिक स्रोत की संभावना का सुझाव देती है, जो मार्कर जीनोटाइप और रोग फेनोटाइप (पी मान ~ 0.42 से ~ 0.98 तक) के बीच सहसंबंध की कमी को समझाती है।इस प्रकार, कोलमोगोरोव-स्मिरनोव परीक्षण से पता चला कि एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध पर डेटा लगभग सामान्य रूप से स्कोर (पी-मान 0.25 और 0.11) और पौधे के द्रव्यमान (पी-मान 0.47 और 0.55) के लिए वितरित किया गया था, मेरा सुझाव है कि मैं अनुमान लगाता हूं कि लैनआर1 और एनमैन से अधिक एलील शामिल हैं।
एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध स्क्रीनिंग के परिणामों के आधार पर, ट्रांस्क्रिप्टोम विश्लेषण के लिए 4 लाइनें चुनी गईं: 83 ए: 476, बोरगिन, मैंडेलुप, और जनसंख्या 22660। आरएनए अनुक्रमण द्वारा टीकाकरण प्रयोगों में एंथ्रेक्स प्रतिरोध के लिए इन लाइनों का पुन: परीक्षण किया गया, बशर्ते कि वे पिछले परीक्षण के समान हों।स्कोर मान इस प्रकार थे: बोरगिन (1.71 ± 1.39), 83ए: 476 (2.09 ± 1.38), मैंडेलुप (3.82 ± 1.42) और जनसंख्या 22660 (6.11 ± 1.29)।
इलुमिना नोवासेक 6000 प्रोटोकॉल ने प्रति नमूना औसतन 40.5 Mread जोड़े (29.7 से 54.4 Mreads) (पूरक तालिका S3) प्राप्त किए।संदर्भ अनुक्रम में संरेखण स्कोर 75.5% से 88.6% तक था।जैविक प्रतिकृतियों के बीच प्रयोगात्मक वेरिएंट के बीच रीड काउंट डेटा का औसत सहसंबंध 0.812 से 0.997 (मतलब 0.959) तक था। विश्लेषण किए गए 35,170 जीनों में से 2917 में कोई अभिव्यक्ति नहीं मिली, और अन्य 4785 जीन नगण्य स्तर पर व्यक्त किए गए (आधार माध्य <5)। विश्लेषण किए गए 35,170 जीनों में से 2917 में कोई अभिव्यक्ति नहीं मिली, और अन्य 4785 जीन नगण्य स्तर पर व्यक्त किए गए (आधार माध्य <5)। Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальны е 4785 генов экспрессировались на незначительном уровне (базовое среднее <5). विश्लेषण किए गए 35,170 जीनों में से 2917 में कोई अभिव्यक्ति नहीं दिखी, और शेष 4785 जीन नगण्य स्तर पर व्यक्त किए गए (आधार माध्य <5)।35,170 से अधिक, 2917 से अधिक, 4785 से 4785 तक, 2018 से 2017 तक।值<5）。35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессию (базовое среднее значение <5). विश्लेषण किए गए 35,170 जीनों में से 2917 व्यक्त नहीं किए गए थे और शेष 4785 जीनों की अभिव्यक्ति नगण्य थी (आधार माध्य <5)।इस प्रकार, प्रयोग के दौरान व्यक्त जीनों की संख्या (आधार माध्य ≥ 5) 27,468 (78.1%) थी (पूरक तालिका एस4)।
पहली बार बिंदु से, सभी एनएलएल लाइनों ने ट्रांसक्रिप्टोम (तालिका 1) को पुन: प्रोग्राम करके सी. ल्यूपिनी (स्ट्रेन कोल-08) के टीकाकरण का जवाब दिया, हालांकि, लाइनों के बीच महत्वपूर्ण अंतर देखा गया।इस प्रकार, प्रतिरोध रेखा 83ए:476 (लानआर1 जीन को ले जाने वाली) ने पहले समय बिंदु (6 एचपीआई) पर महत्वपूर्ण ट्रांसक्रिपटोम रिप्रोग्रामिंग दिखाई, जिसमें इस समय बिंदु पर अन्य समय बिंदुओं की तुलना में पृथक अप और डाउन-जीन की संख्या में 31-69 गुना वृद्धि हुई।इसके अलावा, यह शिखर अल्पकालिक था, क्योंकि केवल कुछ जीनों की अभिव्यक्ति दूसरे समय बिंदु (12 एचपीआई) पर महत्वपूर्ण रूप से परिवर्तित रही।दिलचस्प बात यह है कि बोरेगिन, जिसने ग्राफ्ट परीक्षण में उच्च स्तर का प्रतिरोध भी दिखाया, प्रयोग के दौरान इतने बड़े पैमाने पर ट्रांसक्रिप्शनल रिप्रोग्रामिंग से नहीं गुजरा।हालाँकि, 12 एचपीआई पर बोरेगिन और 83ए:476 के लिए विभेदित रूप से व्यक्त जीन (डीईजी) की संख्या समान थी।मंडेलप और जनसंख्या 22660 दोनों ने अंतिम समय बिंदु (48 एल/सेकेंड) पर डीईजी शिखर दिखाया, जो रक्षा प्रतिक्रियाओं में सापेक्ष देरी का संकेत देता है।
क्योंकि 83ए:476 को अन्य सभी लाइनों की तुलना में 6 एचपीआई पर सी. ल्यूपिनी के जवाब में बड़े पैमाने पर ट्रांसक्रिपटोम रिप्रोग्रामिंग से गुजरना पड़ा, इस समय बिंदु पर देखे गए ~91% डीईजी वंश-विशिष्ट थे (छवि 1)।हालाँकि, अध्ययन लाइनों के बीच प्रारंभिक प्रतिक्रियाओं में कुछ ओवरलैप था, जैसे कि बोरगिन, मैंडेलुप और जनसंख्या 22660 में क्रमशः 68.5%, 50.9% और 52.6% डीईजी, समय के कुछ बिंदुओं में 83ए:476 में पाए गए लोगों के साथ ओवरलैप हो गए।हालाँकि, ये डीईजी वर्तमान में 83ए:476 का उपयोग करके पता लगाए गए सभी डीईजी का केवल एक छोटा सा अंश (0.97-1.70%) हैं।इसके अलावा, इस समय सभी लाइनों से 11 डीईजी सुसंगत थे (पूरक टेबल्स एस 4-एस 6), जिसमें पौधों की रक्षा प्रतिक्रियाओं के सामान्य घटक शामिल थे: लिपिड ट्रांसफर प्रोटीन (तंजिलजी_32225), एंडोग्लुकेन-1,3-β-ग्लूकोसाइड एंजाइम (तंजिलजी_23384), दो तनाव-प्रेरित प्रोटीन जैसे एसएएम22 (तंजिलजी_31528 और तंजिलजी_31531) ), बुनियादी लेटेक्स प्रोटीन (तंजिलजी_32352), और दो ग्लाइसीन-समृद्ध संरचनात्मक कोशिका दीवार प्रोटीन (तंजिलजी_19701 और तंजिलजी_19702)।83ए:476 और बोरेगिन के बीच 24 एचपीआई (कुल 16-38% डीईजी) पर और मैंडेलप और जनसंख्या 22660 के बीच 48 एचपीआई (कुल 14-20% डीईजी) पर ट्रांसक्रिप्टोम प्रतिक्रियाओं में अपेक्षाकृत उच्च ओवरलैप था।
वेन आरेख संकीर्ण-लीव्ड ल्यूपिन (एनएलएल) लाइनों में विभेदित रूप से व्यक्त जीन (डीईजी) की संख्या को दर्शाता है, जो कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी (विएरज़ेनिस, पोलैंड, 1999 में ल्यूपिन क्षेत्रों से प्राप्त स्ट्रेन कोल -08) के साथ टीका लगाया गया है।विश्लेषण की गई एनएलएल लाइनें थीं: 83ए:476 (प्रतिरोधी, लैनआर1 एलील को लेकर), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवांशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मैंडेलप (मध्यम प्रतिरोधी, एनमैन एलील को ले जाने वाली) और जनसंख्या 22660 (अति संवेदनशील)।संक्षिप्त नाम एचपीआई टीकाकरण के बाद के घंटों के लिए है।ग्राफ़ को सरल बनाने के लिए शून्य मान हटा दिए गए हैं।
6 एचपीआई पर ओवरएक्सप्रेस्ड जीन के सेट का विहित आर जीन डोमेन (पूरक तालिका एस 7) की उपस्थिति के लिए विश्लेषण किया गया था।इस अध्ययन से केवल 83ए:476 पर एनबीएस-एलआरआर डोमेन के साथ क्लासिक रोग प्रतिरोधी जीन के ट्रांसक्रिप्टोम इंडक्शन का पता चला।इस सेट में एक TIR-NBS-LRR जीन (tanjilg_05042), पांच CC-NBS-LRR जीन (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, और tanjilg_16162), और चार NBS-LR, Tanjilg_16162, और चार NBS-LRRE (तंजिल) शामिल थे। g_16162) के साथ-साथ चार NBS-Lrr (tanjilg_16162) और चार NBS-LRR (TANJILG_16162)।इन सभी जीनों में विहित डोमेन संरक्षित अनुक्रमों में व्यवस्थित हैं।एनबीएस-एलआरआर डोमेन जीन के अलावा, कई आरएलएल किनेसेस को 6 एचपीआई में सक्रिय किया गया था, अर्थात् बोरगिन (तंजिलग_19877) में, दो मंडेलुप में (तंजिलग_07141 और तंजिलग_19877 और टैनजिलग_014 और टैनजिलग_1014 और जनसंख्या में)
सी. ल्यूपिनी (स्ट्रेन कोल-08) के साथ टीकाकरण के जवाब में महत्वपूर्ण रूप से परिवर्तित अभिव्यक्ति वाले जीन को जीन ओन्टोलॉजी (जीओ) संवर्धन विश्लेषण (पूरक तालिका एस 8) के अधीन किया गया था। सबसे अधिक बार प्रस्तुत किया जाने वाला जैविक प्रक्रिया शब्द "जीओ:0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" था जो उच्च महत्व (पी मान <0.001) (चित्र 2) के साथ 16 में से 6 (समय × रेखा) संयोजनों में दिखाई दिया। सबसे अधिक बार प्रस्तुत किया जाने वाला जैविक प्रक्रिया शब्द "जीओ:0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" था जो उच्च महत्व (पी मान <0.001) (चित्र 2) के साथ 16 में से 6 (समय × रेखा) संयोजनों में दिखाई दिया। अगला लेख GO: 0006952 पर जाएं, 6 से 16 तक पोस्ट करें (время × линия) ко अधिक पढ़ें सबसे अधिक बार प्रस्तुत किया जाने वाला जैविक प्रक्रिया शब्द 'GO:0006952 रक्षा प्रतिक्रिया' था, जो उच्च महत्व (P मान <0.001) (चित्र 2) के साथ 16 में से 6 (समय × वंश) संयोजनों में दिखाई दिया।最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间×线）组合中的6个中, 具有高显着性(P 值< 0.001）（图2）。 सबसे अधिक प्रतिनिधि जैविक प्रक्रिया शब्द "GO:0006952 रक्षा प्रतिक्रिया" है, जो 16 (时间×线) संयोजनों में से 6 में उच्च महत्व (पी मान <0.001) (图2) के साथ दिखाई देता है। अगला लेख "GO: 0006952 डिफेंस रिस्पांस" पर क्लिक करें, 6 से 16 दिनों तक पोस्ट करें (время × линия) с выс окой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). सबसे अधिक बार प्रस्तुत किया जाने वाला जैविक प्रक्रिया शब्द 'GO:0006952 डिफेंस रिस्पांस' था, जो 16 में से 6 संयोजनों (समय × रेखा) में उच्च महत्व (पी मान <0.001) (छवि 2) के साथ दिखाई दिया।इस शब्द को 83ए में दो समय बिंदुओं पर अधिक दर्शाया गया था: 476 और बोरेगिन (6 और 24 एचपीआई) और मंडेलप और जनसंख्या 22660 (क्रमशः 12 और 6 एचपीआई) में एक समय बिंदु पर।यह एक अपेक्षित परिणाम है, जो प्रतिरोधी रेखाओं की एंटीफंगल प्रतिक्रिया को उजागर करता है।इसके अलावा, 83ए:476 ने "जीओ:0055114 रेडॉक्स प्रक्रिया" शब्द द्वारा दर्शाए गए ऑक्सीडेटिव विस्फोट से संबंधित जीन को तेजी से प्रेरित करके सी. ल्यूपिनी को प्रतिक्रिया दी, जो एक विशिष्ट रक्षा प्रतिक्रिया का संकेत देता है, जबकि बोरेगिन ने 'जीओ' शब्द से संबंधित विशिष्ट रक्षा प्रतिक्रियाओं का खुलासा किया।:0006950 तनाव प्रतिक्रिया"।जनसंख्या 22660 ने द्वितीयक मेटाबोलाइट्स को शामिल करते हुए क्षैतिज प्रतिरोध प्रतिक्रिया को सक्रिय किया, "जीओ: 0016104 ट्राइटरपीन बायोसिंथेसिस की प्रक्रिया" और "जीओ: 0006722 ट्राइटरपीन चयापचय की प्रक्रिया" (दोनों शब्द जीन के एक ही सेट से संबंधित हैं) की अत्यधिक संख्या को उजागर करते हुए, जीओ शब्द संवर्धन विश्लेषण के परिणामों को ध्यान में रखते हुए, मंडेलप प्रतिक्रिया स्थिरता बोरगिन और जनसंख्या 22660 के बीच थी। इसके अलावा, प्रारंभिक प्रतिक्रिया 83 ए: 476 (6 एचपीआई) और विलंबित प्रतिक्रिया मैंडेलप और जनसंख्या 22660 में GO:0015979 शब्द 'प्रकाश संश्लेषण' और अन्य संबंधित जैविक प्रक्रियाएं शामिल हैं।
एंथ्रेक्स ल्यूपिन (1999 में पोलैंड के विर्जेनिस में ल्यूपिन क्षेत्रों से प्राप्त कर्नल-08 स्ट्रेन) के साथ संकीर्ण-लीव्ड ल्यूपिन (एनएलएल) की ट्रांसक्रिपटोम प्रतिक्रियाओं के दौरान विभेदित रूप से व्यक्त जीन के एनोटेशन में चयनित बायोप्रोसेस जीन ऑन्टोलॉजी शब्द बहुत अतिरंजित हैं।विश्लेषण की गई एनएलएल लाइनें थीं: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को ले जाने वाला), बोरेगिन (प्रतिरोधी, अज्ञात आनुवंशिक पृष्ठभूमि), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मक एएनमैन एलील को ले जाने वाला) और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।
क्योंकि इस अध्ययन का उद्देश्य उन जीनों की पहचान करना है जो एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध में योगदान करते हैं, जीओ "जीओ: 0006952 रक्षात्मक प्रतिक्रियाएं" और "जीओ: 0055114 रेडॉक्स प्रक्रियाओं" को निर्दिष्ट जीनों का कट-ऑफ के साथ विश्लेषण किया गया था क्योंकि बेसलाइन का मतलब कम से कम एक पंक्ति के साथ ≥ 30 है।× लॉग2 (गुना परिवर्तन) के सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मूल्यों के संयोजन में समय बिंदु।इन मानदंडों को पूरा करने वाले जीनों की संख्या GO:0006952 के लिए 65 और GO:0055114 के लिए 524 थी।
83ए:476 ने जीओ:0006952 शब्द के साथ एनोटेटेड दो डीईजी शिखरों का खुलासा किया, पहला 6 जीन प्रति इंच (64 जीन, ऊपर और नीचे विनियमन) पर और दूसरा 24 जीन प्रति इंच (15 जीन, केवल ऊपर विनियमन) पर।बोरेगिन ने यह भी दिखाया कि GO:0006952 एक ही समय बिंदु पर चरम पर था, लेकिन कम DEG (11 और 8) और अधिमान्य सक्रियण के साथ।मैंडेलूप ने 12 और 48 एचपीआई पर जीओ:0006952 के दो शिखर दिखाए, दोनों में 12 जीन थे (पहला सक्रिय जीन के साथ, और दूसरा केवल दमनकारी जीन के साथ), जबकि 6 एचपीआई (13 जीन) पर 22660 जनसंख्या में वृद्धि शिखर की अधिक प्रबलता थी।विनियमन.यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इन चोटियों में 96.4% GO:0006952 DEG में एक ही प्रकार की प्रतिक्रिया (ऊपर या नीचे) थी, जो शामिल जीनों की संख्या में अंतर के बावजूद रक्षा प्रतिक्रियाओं में एक महत्वपूर्ण ओवरलैप का संकेत देती है।GO:0006952 शब्द से संबंधित अनुक्रमों का सबसे बड़ा समूह भुखमरी तनाव-संबद्ध संदेश प्रोटीन 22 (SAM22-जैसे) को एन्कोड करता है, जो वर्ग 10 रोगजनन-संबद्ध प्रोटीन (PR-10) प्रोटीन क्लैड और कोर प्रोटीन लेटेक्स से संबंधित है।समान (एमएलपी-जैसा) प्रोटीन) प्रोटीन (चित्र 3)।दोनों समूह अभिव्यक्ति की प्रकृति और प्रतिक्रिया की दिशा में भिन्न थे।एसएएम22-जैसे प्रोटीन को एन्कोड करने वाले जीन ने शुरुआती समय बिंदुओं (6 या 12 एचपीआई) पर लगातार और महत्वपूर्ण प्रेरण दिखाया और प्रयोग के अंत (48 एचपीआई) पर आम तौर पर अनुत्तरदायी थे, जबकि एमएलपी-जैसे प्रोटीन ने 6 एचपीआई पर समन्वय दिखाया।एचपीआई.83ए:476 और मैंडेलअप 48 एचपी/इंच पर, लगभग सभी अन्य डेटा बिंदु अनुत्तरदायी थे।इसके अलावा, एसएएम22-जैसे प्रोटीन जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल में अंतर के बाद एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध में परिवर्तनशीलता देखी गई, क्योंकि अधिक प्रतिरोधी रेखाओं में अधिक संवेदनशील जीन की तुलना में इन जीनों को प्रेरित करने के लिए अधिक समय बिंदु थे।एक अन्य LlR18A/B-जैसे PR-10 जीन ने SAM22-जैसे प्रोटीन जीन के समान अभिव्यक्ति पैटर्न दिखाया।
जैविक प्रक्रिया शब्द "GO:0006952 डिफेंस रिस्पांस" के मुख्य घटक और Lanr1 और AnMan एलील्स के उम्मीदवार जीन के अभिव्यक्ति पैटर्न की पहचान की गई।लॉग2 स्केल एक ही समय बिंदु पर टीका लगाए गए (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्यूपिन क्षेत्रों, विज़ेनिका, पोलैंड, 1999 से प्राप्त) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधों के बीच लॉग 2 मान (गुना परिवर्तन) का प्रतिनिधित्व करता है।निम्नलिखित नैरोलीफ ल्यूपिन लाइनों का विश्लेषण किया गया: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को ले जाने वाला), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मक एनमैन एलील को ले जाने वाला), और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।
इसके अलावा, RNA-seq उम्मीदवार जीन Lanr1 (TanjilG_05042) और AnMan (TanjilG_12861) की अभिव्यक्ति प्रोफाइल का मूल्यांकन किया गया (चित्र 3)।TanjilG_05042 जीन ने केवल पहले समय बिंदु (6 hpi) पर 83A:476 पर एक महत्वपूर्ण प्रतिक्रिया (सक्रियण) दिखाई, जबकि TanjilG_12861 मंडेलूप में केवल दो समय बिंदुओं पर महत्वपूर्ण था: 6 hpi (डाउन रेगुलेशन) और 24 hpi (6 hpi)।साथ।)।समायोज्य)).
GO:0055114 "रेडॉक्स प्रक्रिया" शब्द में सबसे अधिक अभिव्यक्त जीन साइटोक्रोम P450 प्रोटीन और पेरोक्सीडेज को एन्कोडिंग करने वाले जीन थे (चित्र 4)।6 एचपीआई पर 83ए:476 से अलग किए गए नमूनों के लिए, अधिकतम या न्यूनतम लॉग2 (गुना परिवर्तन) मान (86.6% जीन के लिए) आम तौर पर टीकाकरण और नियंत्रण पौधों के बीच देखे गए, जो टीकाकरण सेक्स के लिए इस जीनोटाइप की उच्च प्रतिक्रिया को उजागर करते हैं।83ए:476 ने सबसे महत्वपूर्ण जीओ दिखाया: 0055114 डीईजी 6 एचपीआई (503 जीन) पर, जबकि बाकी लाइनें 48 एचपीआई (बोरेगिन, 31 जीन; मैंडेलुप, 85 जीन; और जनसंख्या 22660, 78 जीन) पर)।GO:0055114 परिवार के अधिकांश जीनों में, टीकाकरण (सक्रियण और निषेध) के प्रति दो प्रकार की प्रतिक्रियाएँ देखी गईं।दिलचस्प बात यह है कि 48 एचपी पर मैंडेलूप में जीओ: 0055114 शब्द के लिए 97.6% डीईजी की पहचान की गई है। इन टिप्पणियों से पता चलता है कि, काफी छोटे पैमाने (यानी, उत्परिवर्तित रेडॉक्स जीन की संख्या, 85 बनाम 503) के बावजूद, एन्थ्रेक्नोज के लिए मैंडेलूप की विलंबित ट्रांसक्रिप्टोम प्रतिक्रियाओं का पैटर्न 83ए:476 की प्रारंभिक प्रतिक्रिया के समान है।बोरगिन और जनसंख्या 22660 में, यह अभिसरण क्रमशः 51.6% और 75.6% कम है।
जैविक प्रक्रिया शब्द "GO:0055114 Redox प्रक्रिया" के मुख्य घटकों की अभिव्यक्ति के पैटर्न सामने आए।लॉग2 स्केल एक ही समय बिंदु पर टीका लगाए गए (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्यूपिन क्षेत्रों, विज़ेनिका, पोलैंड, 1999 से प्राप्त) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधों के बीच लॉग 2 मान (गुना परिवर्तन) का प्रतिनिधित्व करता है।निम्नलिखित नैरोलीफ ल्यूपिन लाइनों का विश्लेषण किया गया: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को ले जाने वाला), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मक एनमैन एलील को ले जाने वाला), और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।
83ए:476 सी. ल्यूपिनी (स्ट्रेन कोल-08) के साथ टीकाकरण के लिए ट्रांसक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाओं में जीओ:0015979 "प्रकाश संश्लेषण" शब्द और अन्य संबंधित जैविक प्रक्रियाओं (चित्रा 5) के लिए जिम्मेदार जीन की समन्वित मौन शामिल है।इस GO:0015979 DEG सेट में 105 जीन शामिल थे जिन्हें 83A:476 पर 6 hpi पर काफी हद तक दबा दिया गया था।इस उपसमुच्चय में, मंडेलप में 48 एचपीआई पर 37 जीनों को और 22660 आबादी में एक ही समय बिंदु पर 35 को डाउनरेगुलेट किया गया था, जिसमें दोनों जीनोटाइप के लिए सामान्य 19 डीईजी भी शामिल थे।शब्द GO: 0015979 से संबंधित कोई भी DEG किसी भी संयोजन (लाइन x समय) में महत्वपूर्ण रूप से सक्रिय नहीं किया गया था।
जैविक प्रक्रिया शब्द "GO:0015979 प्रकाश संश्लेषण" के मुख्य घटकों की अभिव्यक्ति के पैटर्न सामने आए।लॉग2 स्केल एक ही समय बिंदु पर टीका लगाए गए (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, ल्यूपिन क्षेत्रों, विज़ेनिका, पोलैंड, 1999 से प्राप्त) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधों के बीच लॉग 2 मान (गुना परिवर्तन) का प्रतिनिधित्व करता है।निम्नलिखित नैरोलीफ ल्यूपिन लाइनों का विश्लेषण किया गया: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को ले जाने वाला), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मक एनमैन एलील को ले जाने वाला), और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।
विभेदक अभिव्यक्ति विश्लेषण के परिणामों के आधार पर और संभवतः रोगजनक कवक के खिलाफ रक्षा प्रतिक्रियाओं में शामिल, सात जीनों के इस सेट को वास्तविक समय पीसीआर (पूरक तालिका एस 9) द्वारा अभिव्यक्ति प्रोफाइल की मात्रा निर्धारित करने के लिए चुना गया था।
नियंत्रण (नकल) पौधों (पूरक तालिकाएँ S10, S11) की तुलना में सभी अध्ययनित रेखाओं और समय बिंदुओं में अनुमानित प्रोटीन जीन TanjilG_10657 को महत्वपूर्ण रूप से प्रेरित किया गया था।इसके अलावा, TanjilG_10657 की अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल ने सभी पंक्तियों के लिए प्रयोग के दौरान बढ़ती प्रवृत्ति दिखाई।जनसंख्या 22660 ने 114-गुना सक्रियण के साथ टीकाकरण के लिए तंजिलजी_10657 की उच्चतम संवेदनशीलता और 24 एचपीआई (छवि 6 ए) पर उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर (4.4 ± 0.4) दिखाया।PR10 LlR18A प्रोटीन जीन TanjilG_27015 ने भी अधिकांश डेटा बिंदुओं पर सांख्यिकीय महत्व के साथ सभी लाइनों और समय बिंदुओं पर सक्रियता दिखाई (चित्र 6 बी)।TanjilG_10657 के समान, TanjilG_27015 का उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर 24 HPI (19.5 ± 2.4) पर 22660 टीकाकरण आबादी में देखा गया था।बोरेगिन 6 एचपीआई (छवि 6 सी) को छोड़कर एसिड एंडोचिटिनेज जीन तंजिलजी_04706 को सभी लाइनों और सभी समय बिंदुओं पर महत्वपूर्ण रूप से अपग्रेड किया गया था।इसे पहली बार बिंदु (6 एचपीआई) पर 83ए:476 (10.5 गुना) पर दृढ़ता से प्रेरित किया गया था और अन्य लाइनों में मामूली वृद्धि (6.6-7.5 गुना) की गई थी।प्रयोग के दौरान, तंजिलजी_04706 की अभिव्यक्ति 83ए:476 और बोरेगिन में समान स्तर पर रही, जबकि मंडेलप और जनसंख्या 22660 में यह काफी बढ़ गई, अपेक्षाकृत उच्च मूल्यों (क्रमशः 5.9 ± 1.5 और 6.2 ± 1.5) तक पहुंच गई।एंडोग्लुकेन-1,3-β-ग्लूकोसिडेज़-जैसे जीन तंजिलजी_23384 ने जनसंख्या 22660 (चित्र 6डी) को छोड़कर सभी लाइनों में पहले दो समय बिंदुओं (6 और 12 एचपीआई) पर उच्च सक्रियता दिखाई।TanjilG_23384 का उच्चतम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर मांडेलुप (2.7 ± 0.3) और 83A:476 (1.5 ± 0.1) में दूसरे समय बिंदु (12 एचपीआई) पर देखा गया।24 एचपीआई पर, सभी अध्ययनित लाइनों में तंजिलजी_23384 की अभिव्यक्ति अपेक्षाकृत कम थी (0.04 ± 0.009 से 0.44 ± 0.12 तक)।
मात्रात्मक पीसीआर द्वारा चयनित जीन (एजी) की अभिव्यक्ति प्रोफाइल का पता चला।संख्या 6, 12 और 24 टीकाकरण के बाद के घंटों को दर्शाती हैं।LanDExH7 और LanTUB6 जीन का उपयोग सामान्यीकरण के लिए किया गया था और LanTUB6 का उपयोग अंतर-श्रृंखला अंशांकन के लिए किया गया था।त्रुटि पट्टियाँ तीन जैविक प्रतिकृति के आधार पर मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती हैं, जिनमें से प्रत्येक तीन तकनीकी प्रतिकृति का औसत है। इनोक्यूलेटेड (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 में विएरज़ेनिका, पोलैंड में ल्यूपिन क्षेत्र से प्राप्त) और नियंत्रण (मॉक-इनोकेटेड) पौधों के बीच अभिव्यक्ति के स्तर में अंतर का सांख्यिकीय महत्व डेटा बिंदुओं (*पी मान <0.05, **पी मान ≤ 0.01, ***पी मान ≤ 0.001) के ऊपर चिह्नित किया गया है। इनोक्यूलेटेड (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 में विएरज़ेनिका, पोलैंड में ल्यूपिन क्षेत्र से प्राप्त) और नियंत्रण (मॉक-इनोकेटेड) पौधों के बीच अभिव्यक्ति के स्तर में अंतर का सांख्यिकीय महत्व डेटा बिंदुओं (*पी मान <0.05, **पी मान ≤ 0.01, ***पी मान ≤ 0.001) के ऊपर चिह्नित किया गया है। Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между иноку лированными (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, штамм Col-08, получен в 1999 г. с поля люпина в Верженице, Пол ьша) और контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точкам और данных (*значение P <0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). इनोक्यूलेटेड (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 में विर्जेनिस, पोलैंड में एक ल्यूपिन क्षेत्र से प्राप्त) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधों के बीच अभिव्यक्ति के स्तर में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर डेटा बिंदुओं (*पी मान <0.05, **पी-वैल्यू ≤ 0.01, ***पी-वैल्यू ≤ 0.001) के ऊपर नोट किया गया है।अधिक पढ़ें水平差异的统计学显着性标记在数据点上方(*P值< 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001)。अधिक पढ़ें平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001)。 Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокули рованными (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, штамм Col-08, полученный с полей люпина в Верженице, Польша, в 1999 वर्ष) और контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над то чками данных (* значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). इनोक्यूलेटेड (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 में पोलैंड के वेर्जेनिस में ल्यूपिन क्षेत्रों से प्राप्त) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधों के बीच अभिव्यक्ति के स्तर में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर डेटा बिंदुओं (*पी मान <0.05, **पी-वैल्यू ≤ 0.01, ***पी-वैल्यू ≤ 0.001) के ऊपर नोट किया गया है।विश्लेषण की गई एनएलएल लाइनें थीं: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को लेकर), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मजी एनमैन एलील को ले जाने वाली), बोरेगिन (प्रतिरोधी, अज्ञात आनुवंशिक पृष्ठभूमि) और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।
Lanr1 लोकस पर उम्मीदवार जीन TanjilG_05042 ने RNA-seq अध्ययन (चित्र 6e) से प्राप्त प्रोफाइल से एक स्पष्ट रूप से भिन्न अभिव्यक्ति पैटर्न दिखाया।इस जीन की महत्वपूर्ण सक्रियता मैंडेलुप और 22660 जनसंख्या (क्रमशः 39.7 और 11.7 गुना तक) में देखी गई, जिसके परिणामस्वरूप अपेक्षाकृत उच्च अभिव्यक्ति स्तर (क्रमशः 1.4 ± 0.14 और 7.2 ± 1.3 तक) प्राप्त हुए।83ए:476 ने तंजिलजी_05042 जीन (3.8-गुना तक) के कुछ अपग्रेडेशन का भी खुलासा किया, हालांकि, प्राप्त सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर (0.044 ± 0.002) मंडेलप और 22660 आबादी में देखी गई तुलना में 30 गुना से अधिक कम था।क्यूपीसीआर द्वारा विश्लेषण किए जाने पर मॉक-वैक्सीनेटेड (नियंत्रण) वेरिएंट में जीनोटाइप के बीच अभिव्यक्ति के स्तर में महत्वपूर्ण अंतर दिखाई दिया, जो आबादी 22660 और 83ए:476 के बीच 58 गुना अंतर तक पहुंच गया, साथ ही आबादी 22660 और 22660 के बीच भी। बोरेगिन और मंडलुप के बीच दो गुना अंतर हासिल किया गया।
AnMan लोकस पर उम्मीदवार जीन, TanjilG_12861, 83A:476 और Mandelup में टीकाकरण के जवाब में सक्रिय किया गया था, 22660 आबादी में तटस्थ था, और Boregine (छवि 6f) में डाउनरेगुलेट किया गया था।TanjilG_12861 जीन की सापेक्ष अभिव्यक्ति टीकाकरण 83A: 476 (0.14±0.01) में सबसे अधिक थी।17.4 kDa वर्ग I हीट शॉक प्रोटीन जीन TanjilG_05080 HSP17.4 ने सभी अध्ययन किए गए उपभेदों और समय बिंदुओं (चित्र 6g) में कम सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर दिखाया।22660 आबादी में 24 एचपीआई पर उच्चतम मूल्य देखा गया (0.14 ± 0.02, टीकाकरण की प्रतिक्रिया में आठ गुना वृद्धि)।
जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल (चित्र 7) की तुलना से TanjilG_10657 और चार अन्य जीनों के बीच एक उच्च सहसंबंध का पता चला: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), और TanjilG_04706 (r = 0.79)।ऐसे परिणाम रक्षा प्रतिक्रियाओं के दौरान इन जीनों के सह-विनियमन का संकेत दे सकते हैं।TanjilG_12861 और TanjilG_23384 जीन ने अन्य जीनों की तुलना में कम पियर्सन सहसंबंध गुणांक मान (क्रमशः 0.08 से 0.43 और -0.19 से 0.28 तक) के साथ अलग-अलग अभिव्यक्ति प्रोफाइल दिखाए।
मात्रात्मक पीसीआर का उपयोग करके जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल के बीच सहसंबंध का पता लगाया गया।निम्नलिखित नैरोलीफ ल्यूपिन लाइनों का विश्लेषण किया गया: 83ए:476 (प्रतिरोधी, समयुग्मक लैनआर1 एलील को ले जाने वाला), मैंडेलुप (मध्यम प्रतिरोधी, समयुग्मक एनमैन एलील को ले जाने वाला), बोरेगिन (प्रतिरोधी, आनुवंशिक पृष्ठभूमि अज्ञात), और जनसंख्या 22660 (अतिसंवेदनशील)।तीन समय बिंदुओं की गणना की गई (टीका लगाने के 6, 12 और 24 घंटे बाद), जिसमें टीका लगाया गया (कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी, स्ट्रेन कोल-08, 1999 में पोलैंड के विर्जेनिस में ल्यूपिन क्षेत्रों से प्राप्त किया गया) और नियंत्रण (शैम-इनोक्युलेटेड) पौधे शामिल थे।पैमाना पियर्सन सहसंबंध गुणांक का मान दर्शाता है।
6 हॉर्सपावर प्रति इंच पर प्राप्त आंकड़ों के आधार पर, प्रारंभिक रक्षा प्रतिक्रियाओं (पूरक तालिका S12) पर ध्यान केंद्रित करने के लिए टीकाकरण और नियंत्रण संयंत्रों की तुलना करके पहचाने गए 9981 DEG पर WGCNA का प्रदर्शन किया गया था।जीनोटाइप और प्रयोगात्मक वेरिएंट के बीच सहसंबद्ध (सकारात्मक या नकारात्मक) अभिव्यक्ति प्रोफाइल के साथ बाईस जीन मॉड्यूल (क्लस्टर) पाए गए। औसतन, जीन अभिव्यक्ति का स्तर 83ए:476 > मैंडेलुप > बोरेगिन > जनसंख्या 22660 के क्रम में घट रहा था (दोनों प्रकारों में, हालांकि, नियंत्रण संयंत्रों में यह प्रवृत्ति अधिक मजबूत थी)। औसतन, जीन अभिव्यक्ति का स्तर 83ए:476 > मैंडेलुप > बोरेगिन > जनसंख्या 22660 के क्रम में घट रहा था (दोनों प्रकारों में, हालांकि, नियंत्रण संयंत्रों में यह प्रवृत्ति अधिक मजबूत थी)। В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > मांडेलप > बोरगिन > जनसंख्या 22660 ( в обоих вариантах, однако, यह тенденция была сильнее у контрольных растен ий). औसतन, जीन अभिव्यक्ति का स्तर 83ए:476 > मैंडेलुप > बोरेगिन > जनसंख्या 22660 के क्रम में कम हुआ (दोनों प्रकारों में, हालांकि, नियंत्रण संयंत्रों में यह प्रवृत्ति अधिक मजबूत थी)।जनसंख्या 22660在对照植物中更强）。平均 而 言 , 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> बोरगिन> जनसंख्या 22660 的 顺序 下降 （， 在 种 中 , 这 种 在और अधिक पढ़ें среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > मांडेलप > बोरगिन > जनसंख्या 22660 (одна यह एक साधारण बैंक है जो एक साधारण बैंक है)। औसतन, श्रृंखला 83ए:476 > मैंडेलुप > बोरेगिन > जनसंख्या 22660 में जीन अभिव्यक्ति का स्तर कम हो गया (हालांकि, दोनों प्रकारों में, नियंत्रण संयंत्रों में यह प्रवृत्ति अधिक मजबूत थी)।टीकाकरण के परिणामस्वरूप जीन अभिव्यक्ति का विनियमन हुआ, विशेष रूप से मॉड्यूल 18, 19, 14, 6 और 1 (प्रभाव के अवरोही क्रम में), नकारात्मक विनियमन (जैसे मॉड्यूल 9 और 20) या तटस्थ प्रभाव (जैसे मॉड्यूल 11, 22, 8 और 13) के साथ।जीओ शब्द संवर्धन विश्लेषण (पूरक तालिका एस13) ने अधिकतम सक्रियण के साथ टीका मॉड्यूल (18) के लिए "जीओ: 0006952 सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाएं" का खुलासा किया, जिसमें क्यूपीसीआर (तंजिलजी_04706, तंजिलजी_23384, तंजिलजी_10657 और तंजिलजी_27015) द्वारा विश्लेषण किए गए जीन शामिल हैं, साथ ही कई टीकाकृत अधिकांश दबे हुए प्रकाश संश्लेषण मॉड्यूल (9)।मॉड्यूल 18 सांद्रक (चित्र 8) की पहचान PR-10-जैसे LlR18B प्रोटीन को एन्कोडिंग करने वाले TanjilG_26536 जीन के रूप में की गई थी, और मॉड्यूल 9 सांद्रक की पहचान फोटोसिस्टम II PsbQ प्रोटीन को एन्कोडिंग करने वाले TanjilG_28955 जीन के रूप में की गई थी।एक उम्मीदवार एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन Lanr1, TanjilG_05042, मॉड्यूल 22 (छवि 9) में पाया गया था और यह TanjilG_01212 हब को ले जाने वाले "GO: 0044260 सेलुलर मैक्रोमोलेक्यूलर चयापचय प्रक्रियाओं" और "GO: 0006355 ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन, डीएनए टेम्प्लेटिंग" शब्दों से जुड़ा है।जीन ऊष्मा तनाव प्रतिलेखन कारक A-4a (HSFA4a) को एनकोड करता है।
अत्यधिक प्रस्तुत जैविक प्रक्रिया शर्तों "जीओ: 0006952 रक्षा प्रतिक्रियाएं" के साथ मॉड्यूल के जीन सह-अभिव्यक्ति का भारित नेटवर्क विश्लेषण।क्यूपीसीआर (तंजिलजी_04706, तंजिलजी_23384, तंजिलजी_10657 और तंजिलजी_27015) द्वारा विश्लेषण किए गए चार जीनों को उजागर करने के लिए बंधाव को सरल बनाया गया था।
अत्यधिक प्रस्तुत जैविक प्रक्रिया शब्द "GO: 0006355: ट्रांसक्रिप्शनल रेगुलेशन, डीएनए टेम्प्लेटिंग" और एक उम्मीदवार एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन Lanr1 TanjilG_05042 के साथ एक मॉड्यूल के जीन सह-अभिव्यक्ति का भारित नेटवर्क विश्लेषण।TanjilG_05042 जीन और केंद्रीय TanjilG_01212 जीन को अलग करने के लिए बंधन को सरल बनाया गया था।
ऑस्ट्रेलिया में एकत्र की गई एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध स्क्रीनिंग से पता चला कि जल्दी जारी की गई अधिकांश किस्में अतिसंवेदनशील थीं;कल्या, कोरोमुप और मंडेलप को मध्यम प्रतिरोधी बताया गया है, जबकि वोंगा, तंजिल और 83ए:476 को अत्यधिक प्रतिरोधी26,27,31 बताया गया है।एक ही प्रतिरोध एलील था, जिसे Lanr1 नामित किया गया था, और कोरोमुप और मैंडेलुप के पास एक अलग एलील था, जिसे AnMan10, 26, 39 नामित किया गया था, जबकि काल्या एक अलग एलील से गुजरा।, लैनआर2.जर्मनी में एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध के लिए स्क्रीनिंग के परिणामस्वरूप Lanr1, नामित LanrBo36 के अलावा एक उम्मीदवार एलील के साथ एक प्रतिरोधी लाइन Bo7212 की पहचान हुई।
हमारे अध्ययन से पता चला कि परीक्षण किए गए जर्मप्लाज्म में Lanr1 एलील की बहुत कम आवृत्ति (लगभग 6%) है।यह अवलोकन Anseq3 और Anseq4 मार्करों का उपयोग करके पूर्वी यूरोपीय जर्मप्लाज्म की स्क्रीनिंग के परिणामों के अनुरूप है, जिससे पता चला है कि Lanr1 एलील केवल दो बेलारूसी लाइनों में मौजूद है।इससे पता चलता है कि ऑस्ट्रेलिया के विपरीत, Lanr1 एलील का अभी तक स्थानीय प्रजनन कार्यक्रमों द्वारा व्यापक रूप से उपयोग नहीं किया गया है, जहां यह मार्कर-सहायता प्रजनन के लिए प्रमुख एलील्स में से एक है।यह ऑस्ट्रेलियाई रिपोर्ट की तुलना में यूरोपीय क्षेत्र की स्थितियों में Lanr1 एलील द्वारा प्रदान किए गए प्रतिरोध के निम्न स्तर के कारण हो सकता है।इसके अलावा, ऑस्ट्रेलिया में उच्च वर्षा वाले क्षेत्रों में एन्थ्रेक्नोज के अध्ययन से पता चला है कि लैनआर 1 एलील द्वारा मध्यस्थता वाली प्रतिरोध प्रतिक्रियाएं मौसम की स्थिति में प्रभावी नहीं हो सकती हैं जो रोगज़नक़ 19,42 के विकास और तेजी से विकास का पक्ष लेती हैं।वास्तव में, वर्तमान अध्ययन में, लैनआर1 एलील वाले जीनोटाइप में एन्थ्रेक्नोज के कुछ लक्षण भी देखे गए, जिससे पता चलता है कि सी. ल्यूपिनी के विकास के लिए इष्टतम परिस्थितियों में प्रतिरोध गायब हो सकता है।इसके अलावा, Anseq3 और Anseq4 मार्करों की उपस्थिति की झूठी सकारात्मक व्याख्याएं, जो Lanr1 लोकस से लगभग 1 cM हैं, 28,30,43 संभव हैं।
हमारे अध्ययन से पता चला है कि 83ए:476, जिसमें लैनआर1 एलील है, ने पहले विश्लेषण किए गए समय बिंदु (6 एचपीआई) पर बड़े पैमाने पर ट्रांसक्रिप्टोम रिप्रोग्रामिंग के साथ सी. ल्यूपिनी इनोक्यूलेशन का जवाब दिया, जबकि मंडेलप में, एनमैन एलील ले जाने पर, ट्रांसक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाएं बहुत बाद में देखी गईं।(24 से 48 एचपी तक)।रक्षा प्रतिक्रियाओं में ये अस्थायी भिन्नताएं रोग के लक्षणों में अंतर से जुड़ी हैं, जो प्रतिरोध की सफल प्रतिक्रिया के लिए प्रारंभिक रोगज़नक़ पहचान के महत्व पर प्रकाश डालती हैं।पौधे के ऊतकों को संक्रमित करने के लिए, एंथ्रेक्स बीजाणुओं को मेजबान सतह पर कई विकासात्मक चरणों से गुजरना पड़ता है, जिसमें अंकुरण, कोशिका विभाजन और एप्रेसोरियम का निर्माण शामिल है।उपांग एक संक्रामक संरचना है जो मेजबान की सतह से जुड़ती है और मेजबान ऊतकों में प्रवेश की सुविधा प्रदान करती है।इस प्रकार, मटर के अर्क में सी. ग्लियोस्पोरियोइड्स के बीजाणुओं ने 75-90 मिनट के ऊष्मायन के बाद नाभिक का पहला विभाजन दिखाया, 90-120 मिनट के बाद एक रोगाणु ट्यूब का गठन, और 4 घंटे 45 के बाद दमन दिखाया।मैंगो सी. ग्लियोस्पोरियोइड्स में 3 घंटे के ऊष्मायन के बाद 40% से अधिक शंकुधारी अंकुरण और 4 घंटे के बाद लगभग 20% एप्रेसर्स का गठन देखा गया।सी. ग्लियोस्पोरियोइड्स के विषाणु से जुड़े CAP20 जीन ने 4 घंटे 46 मिनट के बाद CAP20 प्रोटीन की उच्च सांद्रता के साथ एवोकैडो सतह मोम में 3.5 घंटे ऊष्मायन के बाद एपिफाइट-गठन कोनिडिया में ट्रांसक्रिप्शनल गतिविधि दिखाई।इसी तरह, सी. ट्राइफोली में मेलेनिन बायोसिंथेसिस जीन की गतिविधि 2 घंटे के ऊष्मायन के दौरान प्रेरित हुई और 1 घंटे के बाद एप्रेसोरियम का निर्माण हुआ।पत्ती के ऊतकों के अध्ययन से पता चला है कि सी. एक्यूटेटम से संक्रमित स्ट्रॉबेरी का पहला दमन 8 एचपीआई पर होता है, जबकि सी. कोकोड्स से संक्रमित टमाटरों का पहला दमन 4 एचपीआई48,49 पर होता है।कोलेटोट्राइकम एसपीपी के समय पैमाने के साथ काफी हद तक सुसंगत है।संक्रामक प्रक्रिया.83ए:476 के लिए तीव्र रक्षा प्रतिक्रियाएँ इस पंक्ति में पौधों के प्रतिरोध और प्रभावकार-ट्रिगर प्रतिरक्षा (ईटीआई) जीन की भागीदारी का सुझाव देती हैं, जबकि मैंडेलप की विलंबित प्रतिक्रियाएँ सूक्ष्म-संबद्ध आणविक पैटर्न-ट्रिगर प्रतिरक्षा (एमटीआई) परिकल्पना 50 का समर्थन करती हैं। 83ए: 476 और मैंडेलअप की प्रारंभिक प्रतिक्रियाएँ।विलंबित प्रतिक्रिया में ऊपर या नीचे विनियमित जीन के बीच आंशिक ओवरलैप भी इस अवधारणा का समर्थन करता है, क्योंकि ईटीआई को अक्सर एक त्वरित और उन्नत एमटीआई प्रतिक्रिया माना जाता है जो संक्रमण के स्थल पर क्रमादेशित कोशिका मृत्यु में परिणत होता है, जिसे एनाफिलेक्टिक शॉक 51,52 के रूप में जाना जाता है।
जीन ओन्टोलॉजी जीओ:0006952 "डिफेंस रिस्पांस" शब्द के अधिक प्रतिनिधित्व के लिए जिम्मेदार अधिकांश जीन तनाव-प्रेरित उपवास संदेश 22 प्रोटीन (एसएएम22 के समान) और सात प्रमुख लेटेक्स प्रोटीन-लाइक्स (एमएलपी) के 11 होमोलॉग हैं।-जैसे प्रोटीन 31, 34, 43 और 423 में अनुक्रम समानता दिखाई गई।SAM22 जैसे जीनों ने महत्वपूर्ण सक्रियता दिखाई जो लंबे समय तक चली, जिससे एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध के बढ़े हुए स्तर (83A:476 और बोरेगिन) दिखे।हालाँकि, एमएलपी-जैसे जीन को केवल उम्मीदवार प्रतिरोध एलील (83ए:476/लानआर1 6 एचपीआई पर और मैंडेलुप/एनमैन 24 एचपीआई पर) ले जाने वाली लाइनों में डाउनरेगुलेट किया गया था।यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सभी पहचाने गए एसएएम22-जैसे होमोलॉग लगभग 105 केबी तक फैले जीन क्लस्टर से उत्पन्न होते हैं, जबकि एमएलपी-जैसे जीन जीनोम के अलग-अलग क्षेत्रों से उत्पन्न होते हैं।ऐसे एसएएम22 जैसे जीनों का समन्वित सक्रियण डायपोर्थेटोक्सिका टीकाकरण के लिए एनएलएल प्रतिरोध के हमारे पिछले अध्ययन में भी पाया गया था, जिससे पता चलता है कि वे रक्षा प्रतिक्रिया के क्षैतिज घटकों में शामिल हैं।इस निष्कर्ष को सैलिसिलिक एसिड, फंगल इंड्यूसर या हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ चोट या उपचार के लिए एसएएम22 जैसे जीन की सकारात्मक प्रतिक्रिया की रिपोर्ट से भी समर्थन मिलता है।
एमएलपी जैसे जीन को कई पौधों की प्रजातियों में बैक्टीरिया, वायरल और रोगजनक फंगल संक्रमण सहित विभिन्न अजैविक और जैविक तनावों पर प्रतिक्रिया करते हुए दिखाया गया है।पौधों और रोगज़नक़ों के बीच कुछ अंतःक्रियाओं की प्रतिक्रिया की दिशाएँ दृढ़ता से बढ़ने (यानी, वर्टिसिलियम डाहलिया के साथ कपास के संक्रमण के दौरान) से लेकर काफी कम होने तक (यानी, अल्टरनेरिया एसपीपी के साथ सेब के पेड़ के संक्रमण के बाद) 56,57 तक होती हैं।एफ. नाइजर संक्रमण से एवोकैडो की रक्षा के दौरान और सेब के पेड़ बोट्रीओस्फेरिया बेरेंजेरियाना एफ के संक्रमण के दौरान एमएलपी-जैसे 423 जीन का महत्वपूर्ण डाउनरेगुलेशन देखा गया है।सी.एन.पिरिकोला और अल्टरनेरिया अल्टरनेटा सेब के पैथोटाइप58,59 हैं।इसके अलावा, ऐप्पल कैली एमएलपी-जैसे 423 जीन को अधिक व्यक्त करने से प्रतिरोध से जुड़े जीन की अभिव्यक्ति कम थी और फंगल संक्रमण59 के प्रति अधिक संवेदनशील थे।फ्यूसेरियम ऑक्सीस्पोरम एफ के बाद, प्रतिरोधी सामान्य बीन जर्मप्लाज्म में एमएलपी-जैसे 423 जीन को भी दबा दिया गया था।सी.एन.बीन संक्रमण 60.
हमारे RNA-seq अध्ययन में पहचाने गए PR-10 परिवार के अन्य सदस्य अपग्रेडेशन के जवाब में LlR18A और LlR18B जीन थे, साथ ही लिपिड ट्रांसफर प्रोटीन DIR1 के लिए अपग्रेडेड (1 जीन) या डाउनरेगुलेटेड (3 जीन) जीन थे।.इसके अलावा, WGCNA इस मॉड्यूल में एक केंद्र के रूप में LlR18B जीन पर प्रकाश डालता है, जो टीकाकरण के लिए अतिसंवेदनशील है और कई सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया जीन रखता है।LlR18A और LlR18B जीन रोगजनक बैक्टीरिया के जवाब में पीली ल्यूपिन पत्तियों में प्रेरित थे, साथ ही डी. टॉक्सिका टीकाकरण के बाद एनएलएल तनों में भी, जबकि इन जीनों का चावल समरूप, RSOsPR10, तेजी से एक फंगल संक्रमण से प्रेरित था जो संभवतः जैस्मोनिक एसिड सिग्नलिंग पाथवे 53,61, 62 में शामिल था। DIR1 जीन गैर-विशिष्ट लिपिड परिवहन प्रोटीन को एनकोड करता है जो प्रणालीगत अधिग्रहीत प्रतिरोध की शुरुआत के लिए आवश्यक हैं। (एसएआर)।सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाओं के विकास के साथ, DIR1 प्रोटीन को संक्रमण के फोकस से फ्लोएम के माध्यम से दूर के अंगों में SAR को प्रेरित करने के लिए ले जाया जाता है।दिलचस्प बात यह है कि TanjilG_02313 DIR1 जीन को पहली बार लाइन 84A:476 और जनसंख्या 22660 में महत्वपूर्ण रूप से प्रेरित किया गया था, लेकिन एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध केवल लाइन 84A:476 में सफलतापूर्वक विकसित हुआ।यह एनएलएल में डीआईआर1 जीन के कुछ उपक्रियाकरण का संकेत दे सकता है, क्योंकि शेष तीन होमोलॉग्स ने केवल 6 एचपीआई पर 83ए:476 लाइन में टीकाकरण का जवाब दिया, और यह प्रतिक्रिया नीचे की ओर निर्देशित थी।
हमारे अध्ययन में, "GO:0055114 Redox प्रक्रिया" नामक जैविक प्रक्रिया से संबंधित सबसे आम घटक साइटोक्रोम P450 प्रोटीन, पेरोक्सीडेज, लिनोलिक एसिड 9S-/13S-लिपोक्सीजिनेज, और 1-एमिनोसाइक्लोप्रोपेन-1-कार्बोक्जिलिक एसिड ऑक्सीडेज थे।इसके अलावा, हमारा WGCNA HSFA4a होमोलॉग को Lanr1 प्रतिरोध जीन उम्मीदवार TanjilG_05042 जैसे हब ले जाने वाले मॉड्यूल के रूप में परिभाषित करता है।HSFA4a पौधों में परमाणु प्रतिलेखन के रेडॉक्स-निर्भर विनियमन का एक घटक है।
साइटोक्रोम पी450 प्रोटीन ऑक्सीडोरडक्टेस हैं जो प्राथमिक और माध्यमिक चयापचय में एनएडीपीएच और/या ओ2-निर्भर हाइड्रॉक्सिलेशन प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करते हैं, जिसमें ज़ेनोबायोटिक्स के चयापचय के साथ-साथ हार्मोन, फैटी एसिड, स्टेरोल्स, सेल दीवार घटक, बायोपॉलिमर और सुरक्षात्मक यौगिकों 69 का जैवसंश्लेषण शामिल है। हमारे एक अध्ययन में, प्लांट साइटोक्रोम पी450 फ़ंक्शन में परिवर्तनशीलता -10.6 लॉग2 (गुना परिवर्तन) से घटाकर 5 कर दी गई थी। 7 बड़ी संख्या में परिवर्तित समजातों (37) और विशिष्ट जीनों के बीच प्रतिक्रिया पैटर्न में अंतर के कारण, जो ऊपर की ओर संशोधन को दर्शाता है।.इतने बड़े प्रोटीन सुपरफैमिली में एनएलएल जीन के कथित जैविक कार्य को स्पष्ट करने के लिए केवल आरएनए-सीक्यू डेटा का उपयोग करना अत्यधिक अटकलबाजी होगी।हालाँकि, यह ध्यान देने योग्य है कि कुछ साइटोक्रोम P450 जीन रोगजनक कवक या बैक्टीरिया के प्रति बढ़ते प्रतिरोध से जुड़े हैं, जिसमें एलर्जी प्रतिक्रियाओं में योगदान भी शामिल है69,70,71।
क्लास III पेरोक्सीडेस बहुक्रियाशील पादप एंजाइम हैं जो पौधों की वृद्धि और विकास के दौरान चयापचय प्रक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला में शामिल होते हैं, साथ ही साथ लवणता, सूखा, उच्च प्रकाश तीव्रता और रोगज़नक़ हमले72 जैसे पर्यावरणीय तनावों की प्रतिक्रिया में भी शामिल होते हैं।पेरोक्सीडेस एंथ्रेसीस के साथ कई पौधों की प्रजातियों की बातचीत में शामिल हैं, जिनमें स्टाइलोसैंथेस ह्यूमिलिस और सी. ग्लियोस्पोरियोइड्स, लेंस कुलिनारिस और सी. ट्रंकैटम, फेजोलस वल्गेरिस और सी. लिंडेमुथियानम, कुकुमिस सैटिवस और सी. लैजेनेरियम73,74,75,76 शामिल हैं।प्रतिक्रिया बहुत तेज होती है, कभी-कभी 4 एचपीआई पर भी, कवक के पौधे के ऊतकों में प्रवेश करने से पहले73।पेरोक्सीडेज जीन ने डी. टॉक्सिका एनएलएल टीकाकरण पर भी प्रतिक्रिया दी।ऑक्सीडेटिव विस्फोट को विनियमित करने या ऑक्सीडेटिव तनाव को खत्म करने के अपने विशिष्ट कार्यों के अलावा, पेरोक्सीडेस लिग्निफिकेशन, सबयूनिट या विशिष्ट यौगिकों के क्रॉस-लिंकिंग के दौरान सेल दीवार सुदृढीकरण के आधार पर भौतिक बाधाएं बनाकर रोगज़नक़ विकास में हस्तक्षेप कर सकते हैं।इस फ़ंक्शन को सिलिको में तंजिलजी_03329 जीन एन्कोडिंग के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है जो एक कल्पित लिग्निन बनाने वाले आयन पेरोक्सीडेज को एन्कोडिंग करता है जिसे हमारे अध्ययन में 6 एचपीआई पर 83ए:476 प्रतिरोधी लाइन में काफी हद तक अपग्रेड किया गया था, लेकिन अन्य उपभेदों और समय बिंदुओं में नहीं जिन्होंने प्रतिक्रिया नहीं दी।
लिनोलिक एसिड का 9S-/13S-लिपोक्सीजिनेज लिपिड बायोसिंथेसिस78 के ऑक्सीडेटिव मार्ग में पहला कदम है।इस मार्ग के उत्पाद पौधों की रक्षा में कई कार्य करते हैं, जिसमें कैलोज़ और पेक्टिन जमा के गठन के माध्यम से कोशिका दीवार को मजबूत करना और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों79,80,81,82,83 के उत्पादन के माध्यम से ऑक्सीडेटिव तनाव का विनियमन शामिल है।वर्तमान अध्ययन में, सभी उपभेदों में लिनोलिक एसिड 9एस-/13एस-लाइपोक्सीजिनेज की अभिव्यक्ति बदल दी गई थी, लेकिन अतिसंवेदनशील आबादी 22660 में, अलग-अलग समय बिंदुओं पर अपग्रेडेशन हुआ, जबकि प्रतिरोधी लैनआर1 और एनमैन एलील वाले उपभेदों में, यह इन जीनोटाइप के बीच सुरक्षात्मक एंथ्रेक्स प्रतिक्रियाओं में ऑक्सीलिपिन परत के विविधीकरण पर जोर देता है।
ल्यूपिन के साथ टीका लगाए जाने पर 1-एमिनोसाइक्लोप्रोपेन-1-कार्बोक्सिलेट ऑक्सीडेज (एसीओ) होमोलॉग को काफी हद तक अपग्रेड किया गया (9 जीन) या डाउनरेगुलेट किया गया (2 जीन)।दो अपवादों को छोड़कर, ये सभी प्रतिक्रियाएँ 6 एचपी पर हुईं।83ए:476 पर।एसीओ प्रोटीन द्वारा मध्यस्थता वाली एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया एथिलीन उत्पादन में दर-सीमित कदम है और इसलिए इसे अत्यधिक विनियमित84 किया जाता है।एथिलीन एक पादप हार्मोन है जो पौधों के विकास और अजैविक और जैविक तनाव स्थितियों की प्रतिक्रिया को विनियमित करने में विभिन्न प्रकार की भूमिका निभाता है।एसीओ प्रतिलेखन का प्रेरण और एथिलीन सिग्नलिंग मार्ग का सक्रियण प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों और फाइटोएलेक्सिन के उत्पादन को विनियमित करके हेमिबियोट्रोफिक कवक ओरिजा ओरिजा के लिए चावल के प्रतिरोध को बढ़ाने में शामिल है।इस अध्ययन में रिपोर्ट की गई 83ए:476 लाइन में एसीओ होमोलॉग्स के एक महत्वपूर्ण अपग्रेडेशन की पृष्ठभूमि के खिलाफ, एम. ओरिजे और सी. ल्यूपिनी88,89 के बीच पाई गई एक बहुत ही समान पत्ती संक्रमण प्रक्रिया, एनएलएल एन्थ्रेक्नोज एथिलीन को आणविक मार्गों में एक संकेत केंद्रीय कदम के रूप में प्रतिरोध प्रदान करने की संभावना को बदल देती है।
वर्तमान अध्ययन में, प्रकाश संश्लेषण से जुड़े कई जीनों का बड़े पैमाने पर दमन 83ए:476 में 6 एचपीआई और मैंडेलूप में 48 एचपीआई और 22660 आबादी में देखा गया।इन परिवर्तनों की सीमा और प्रगति स्तर के समानुपाती होती है।इस प्रयोग में एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध देखा गया।हाल ही में, रोगजनक बैक्टीरिया और कवक सहित पौधे-रोगज़नक़ इंटरैक्शन के कई मॉडलों में प्रकाश संश्लेषण-संबंधित प्रतिलेखों के मजबूत और प्रारंभिक दमन की सूचना मिली है।जल्दबाजी (कुछ इंटरैक्शन में 2 एचपीआई से) और संक्रमण के जवाब में प्रकाश संश्लेषण से जुड़े जीन का वैश्विक दमन, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की तैनाती और एलर्जी प्रतिक्रियाओं 90,94 में मध्यस्थता करने के लिए सैलिसिलिक एसिड मार्ग के साथ उनकी बातचीत के आधार पर पौधों की प्रतिरक्षा को ट्रिगर कर सकता है।
निष्कर्ष में, सबसे प्रतिरोधी वंश (83ए:476) के लिए प्रस्तावित रक्षा प्रतिक्रिया तंत्र में आर जीन (संभवतः टीआईआर-एनबीएस-एलआरआर तंजिलजी_05042) द्वारा तेजी से रोगज़नक़ की पहचान और एलर्जी प्रतिक्रिया-मध्यस्थ सैलिसिलिक एसिड और एथिलीन सिग्नलिंग शामिल है, जिसके बाद लंबी दूरी की एसएआर की स्थापना होती है।क्रिया DIR-1 प्रोटीन द्वारा समर्थित है।यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सी. ल्यूपिनी संक्रमण के लिए बायोट्रॉफिक अवधि बहुत कम (लगभग 2 दिन) है, इसके बाद नेक्रोटिक वृद्धि95 होती है।इन चरणों के बीच संक्रमण परिगलन और एथिलीन-प्रेरक प्रोटीन की अभिव्यक्ति से जुड़ा हो सकता है जो मेजबान पौधों में अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं के लिए ट्रिगर के रूप में कार्य करता है।इसलिए, बायोट्रॉफिक चरण में सी. ल्यूपिनी को सफलतापूर्वक पकड़ने के लिए समय सीमा बहुत संकीर्ण है।83ए:476 में 6 एचपीआई पर देखी गई रेडॉक्स और प्रकाश संश्लेषण से जुड़े जीन की रिप्रोग्रामिंग फंगल हाइपहे की प्रगति के अनुरूप है और बायोट्रॉफिक चरण में एक सफल सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया के विकास की शुरुआत करती है।नेक्रोटिक विकास पर स्विच करने से पहले फंगस को पकड़ने के लिए मैंडेलप और 22660 आबादी की ट्रांसक्रिप्टोमिक प्रतिक्रियाओं में बहुत देरी हो सकती है, हालांकि, मैंडेलअप 22660 आबादी की तुलना में अधिक प्रभावी हो सकता है क्योंकि पीआर -10 प्रोटीन का अपेक्षाकृत तेज़ विनियमन क्षैतिज प्रतिरोध को बढ़ावा देता है।
ईटीआई, कैनोनिकल आर जीन द्वारा संचालित, एन्थ्रेक्नोज के लिए बीन प्रतिरोध के लिए एक सामान्य तंत्र प्रतीत होता है।इस प्रकार, मॉडल लेग्यूम मेडिकैगो ट्रंकैटुला में, एन्थ्रेक्नोज का प्रतिरोध आरसीटी1 जीन द्वारा प्रदान किया जाता है, जो टीआईआर-एनबीएस-एलआरआर97 प्लांट आर जीन वर्ग का सदस्य है।अतिसंवेदनशील पौधों में स्थानांतरित होने पर यह जीन अल्फाल्फा में व्यापक स्पेक्ट्रम एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध भी प्रदान करता है।सामान्य बीन (पी. वल्गारिस) में, आज तक दो दर्जन से अधिक एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन की पहचान की गई है।इनमें से कुछ जीन उन क्षेत्रों में पाए जाते हैं जिनमें किसी भी विहित आर जीन की कमी होती है, हालांकि कई अन्य टीआईआर-एनबीएस-एलआरआर99 सहित एनबीएस-एलआरआर जीन क्लस्टर ले जाने वाले गुणसूत्रों के किनारों पर स्थित होते हैं।जीनोम-वाइड एसएसआर अध्ययन ने आम बीन में एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध के साथ एनबीएस-एलआरआर जीन के जुड़ाव की भी पुष्टि की।सफेद ल्यूपिन 101 में प्रमुख एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध स्थान वाले जीनोमिक क्षेत्र में कैनोनिकल आर जीन भी पाया गया था।
हमारे काम से पता चलता है कि एक तत्काल प्रतिरोध प्रतिक्रिया, जो पौधे के संक्रमण के प्रारंभिक चरण में सक्रिय होती है (अधिमानतः 12 एचपीआई से बाद में नहीं), रोगजनक कवक कोलेलोट्रिचम ल्यूपिनी के कारण होने वाले एन्थ्रेक्नोज से संकीर्ण-लीक्ड ल्यूपिन को प्रभावी ढंग से बचाती है।उच्च थ्रूपुट अनुक्रमण का उपयोग करते हुए, हमने लैनआर 1 और एनमैन प्रतिरोध जीन द्वारा मध्यस्थता वाले एनएलएल पौधों में एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन की विभेदक अभिव्यक्ति प्रोफाइल का प्रदर्शन किया।सफल बचाव में रोगज़नक़ के साथ पौधे के पहले संपर्क के कुछ घंटों के भीतर रेडॉक्स, प्रकाश संश्लेषण और रोगजनन में शामिल प्रोटीन के लिए जीन को सावधानीपूर्वक डिजाइन करना शामिल है।समान सुरक्षात्मक प्रतिक्रियाएँ, लेकिन समय पर देरी से, पौधों को बीमारियों से बचाने में बहुत कम प्रभावी होती हैं।Lanr1 जीन द्वारा मध्यस्थता वाला एंथ्रेक्स प्रतिरोध R जीन (प्रभावक-ट्रिगर प्रतिरक्षा) की विशिष्ट तीव्र प्रतिक्रिया जैसा दिखता है, जबकि AnMan जीन सबसे अधिक संभावना एक क्षैतिज प्रतिक्रिया (सूक्ष्मजीव-संबंधित आणविक पैटर्न द्वारा ट्रिगर प्रतिरक्षा) प्रदान करता है, जो मध्यम स्तर की स्थिरता प्रदान करता है।
एन्थ्रेक्नोज मार्करों की स्क्रीनिंग के लिए उपयोग की जाने वाली 215 एनएलएल लाइनों में 74 किस्में, क्रॉसिंग या प्रजनन द्वारा प्राप्त 60 लाइनें, 5 उत्परिवर्ती और 76 जंगली या मूल जर्मप्लाज्म शामिल थे।लाइनें 17 देशों से आईं, मुख्य रूप से पोलैंड (58), स्पेन (47), जर्मनी (27), ऑस्ट्रेलिया (26), रूस (19), बेलारूस (7), इटली (5) और अन्य लाइनें।10 देशों से.सेट में संदर्भ प्रतिरोधी लाइनें भी शामिल हैं: 83ए:476, तंजील, वोंगा जिसमें लैनआर1 एलील है, और मैंडेलअप में अनमैन एलील है।लाइनें पॉज़्नान प्लांट ब्रीडिंग लिमिटेड, वियाट्रोवो, पोलैंड (पूरक तालिका एस 1) द्वारा बनाए गए यूरोपीय ल्यूपिन जेनेटिक रिसोर्स डेटाबेस से प्राप्त की गई थीं।
पौधों को नियंत्रित परिस्थितियों (फोटोअवधि 16 घंटे, दिन के दौरान तापमान 25 डिग्री सेल्सियस और रात में 18 डिग्री सेल्सियस) के तहत उगाया गया था।दो जैविक प्रतिकृतियों का विश्लेषण किया गया।प्रोटोकॉल के अनुसार डीनेसी प्लांट मिनी किट (क्यूजेन, हिल्डेन, जर्मनी) का उपयोग करके तीन सप्ताह पुरानी पत्तियों से डीएनए को अलग किया गया।पृथक डीएनए की गुणवत्ता और एकाग्रता का मूल्यांकन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक तरीकों (नैनोड्रॉप 2000; थर्मो फिशर साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए) द्वारा किया गया था।एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध जीन AnMan (cv. मंडेलप से व्युत्पन्न) को चिह्नित करने वाले AnManM1 मार्कर और जीन Lanr1 (cv. Tanjil से व्युत्पन्न) को फ़्लैंक करने वाले मार्कर Anseq3 और Anseq4 का 11,26,28 विश्लेषण किया गया।प्रतिरोधी एलील के लिए होमोज़ीगोट्स को "1", अतिसंवेदनशील - "0" और हेटेरोज़ीगोट्स - 0.5 के रूप में स्कोर किया गया था।
मार्कर AnManM1, AnSeq3 और AnSeq4 के लिए स्क्रीनिंग के परिणामों और अंतिम अनुवर्ती प्रयोगों के लिए बीजों की उपलब्धता के आधार पर, एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध फेनोटाइपिंग के लिए 50 एनएलएल लाइनों का चयन किया गया था।विश्लेषण कंप्यूटर नियंत्रित ग्रीनहाउस में 14 घंटे की फोटो अवधि के साथ दिन के दौरान 22 डिग्री सेल्सियस और रात में 19 डिग्री सेल्सियस के तापमान रेंज के साथ दो प्रतियों में किया गया था।बीज का आवरण बहुत सख्त होने के कारण बीज की सुप्तावस्था को रोकने और एक समान अंकुरण सुनिश्चित करने के लिए बुआई से पहले बीजों को खरोंचा जाता है (भ्रूण के विपरीत तरफ के बीज के आवरण को एक तेज ब्लेड से काट दिया जाता है)।पौधों को बाँझ मिट्टी (TS-1 REC 085 मीडियम बेसिक, क्लासमैन-डीलमैन पोलस्का, वारसॉ, पोलैंड) के साथ गमलों (11 × 11 × 21 सेमी) में उगाया गया था।कोलेटोट्राइकम ल्यूपिनी कोल-08 स्ट्रेन के साथ टीकाकरण किया गया था, जिसे 1999 में ग्रेटर पोलैंड (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ) के वेरजेनित्सा के एक खेत में उगाए गए संकीर्ण-लीक ल्यूपिन पौधों के तनों से उगाया गया था।एक क्षेत्र प्राप्त करें.स्पोरुलेशन को प्रेरित करने के लिए आइसोलेट्स को एसएनए माध्यम में 20 डिग्री सेल्सियस पर 21 दिनों तक काली रोशनी में संवर्धित किया गया।बुआई के चार सप्ताह बाद, जब पौधे 4-6 पत्तियों की अवस्था में पहुंच गए, तो 0.5 x 106 कोनिडिया प्रति मिलीलीटर की सांद्रता पर कोनिडिया के निलंबन का छिड़काव करके टीकाकरण किया गया।टीकाकरण के बाद, कोनिडिया के अंकुरण और संक्रमण प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने के लिए पौधों को लगभग 98% की आर्द्रता और 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 24 घंटे तक अंधेरे में रखा गया था।फिर पौधों को 14 घंटे की फोटो अवधि के तहत 22 डिग्री सेल्सियस दिन/19 डिग्री सेल्सियस रात और 70% आर्द्रता पर उगाया गया।रोग का स्कोर टीकाकरण के 22 दिन बाद बनाया गया था और तनों और पत्तियों पर नेक्रोटिक घावों की उपस्थिति या अनुपस्थिति के आधार पर 0 (प्रतिरक्षा) से 9 (अति संवेदनशील) तक था।इसके अलावा स्कोरिंग के बाद पौधों का वजन भी मापा गया।मार्कर जीनोटाइप और रोग फेनोटाइप के बीच संबंधों की गणना बिंदु दो-अनुक्रम सहसंबंध (एन्थ्रेक्नोज प्रतिरोध फेनोटाइप के विश्लेषण के लिए लाइनों के सेट में विषमयुग्मजी मार्करों की अनुपस्थिति) के रूप में की गई थी।