Qee cov ntsiab lus daws teeb meem LC yeej tsis dhau hnub, vim muaj teeb meem hauv LC xyaum, txawm tias cov cuab yeej siv tshuab tau zoo dua lub sijhawm.Muaj ntau txoj hauv kev uas teeb meem tuaj yeem tshwm sim hauv LC system thiab xaus rau hauv cov duab tsis zoo.Thaum muaj teeb meem ntsig txog cov duab siab tshwm sim, cov npe luv luv ntawm qhov ua tau rau cov txiaj ntsig no pab ua kom peb cov kev daws teeb meem yooj yim.
Nws tau lom zem sau qhov "LC Troubleshooting" kem thiab xav txog cov ncauj lus txhua lub hlis, vim qee lub ntsiab lus yeej tsis tawm ntawm style.Thaum nyob rau hauv kev tshawb fawb chromatography qee cov ncauj lus lossis cov tswv yim dhau los ua tsis tiav raws li lawv tau hloov los ntawm cov tswv yim tshiab thiab zoo dua, hauv kev daws teeb meem, txij li thawj qhov teeb meem kab lus tau tshwm sim nyob rau hauv phau ntawv xov xwm no (cov ntawv xov xwm tseem ceeb ntawm lub sijhawm) 1983(1).Ntawm ob peb xyoos dhau los, kuv tau tsom mus rau ntau qhov kev daws teeb meem LC ntawm cov qauv tam sim no cuam tshuam rau cov kua chromatography (LC) (piv txwv li, kev sib piv cov txheeb ze ntawm peb txoj kev nkag siab txog qhov cuam tshuam ntawm kev ceev ceev [2] Tshiab Advances) Peb txhais cov txiaj ntsig ntawm LC thiab yuav ua li cas daws teeb meem nrog cov cuab yeej niaj hnub no LC' txuas ntxiv mus. Lub Kaum Ob Hlis 2021, uas tau tsom mus rau qee yam ntawm "lub neej thiab kev tuag" cov ntsiab lus ntawm kev daws teeb meem LC - cov ntsiab lus uas zoo rau txhua qhov kev daws teeb meem yog qhov tseem ceeb, txawm tias lub hnub nyoog ntawm peb tab tom siv.Lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm cov koob no muaj feem cuam tshuam rau LCGC lub npe hu ua "LC Troubleshooting Guide" phab ntsa daim ntawv (4) rau cov teeb meem thib peb ntawm qhov chaw sim no. Cov yam ntxwv ncov.Zoo kawg, daim duab phab ntsa teev 44 qhov sib txawv ntawm qhov ua rau lub siab tsis zoo!Peb tsis tuaj yeem xav txog tag nrho cov teeb meem no kom ntxaws hauv ib tsab xov xwm, yog li hauv thawj ntu ntawm cov ncauj lus no, kuv yuav tsom mus rau qee qhov kuv pom ntau zaus.Kuv vam tias cov tub ntxhais hluas thiab cov laus LC cov neeg siv yuav pom qee cov lus qhia tseem ceeb thiab ceeb toom ntawm lub ntsiab lus tseem ceeb no.
Kuv pom kuv tus kheej tau teb cov lus nug txog kev daws teeb meem ntau ntxiv nrog "txhua yam ua tau." Cov lus teb no yuav zoo li yooj yim thaum xav txog cov kev soj ntsuam uas nyuaj rau kev txhais, tab sis kuv pom tias nws feem ntau tsim nyog.Nrog ntau qhov ua rau lub siab tsis zoo, nws yog ib qho tseem ceeb kom qhib siab thaum txiav txim siab seb qhov teeb meem yuav ua li cas, thiab muaj peev xwm ua kom muaj peev xwm ua kom muaj peev xwm ua ntej pib peb qhov kev daws teeb meem feem ntau, tsom rau cov ntsiab lus tseem ceeb tshaj plaws. tseem ceeb. ua tau.
Ib kauj ruam tseem ceeb hauv kev daws teeb meem - tab sis ib qho uas kuv xav tias tsis tshua muaj txiaj ntsig - yog lees paub tias muaj teeb meem uas yuav tsum tau daws. Pom tau tias muaj teeb meem feem ntau txhais tau tias lees paub tias qhov tshwm sim ntawm cov cuab yeej sib txawv ntawm peb qhov kev cia siab, uas yog zoo li txoj kev xav, kev paub txog kev paub, thiab kev paub (5).Qhov "peak shape" tsuas yog xa mus rau ntawm no (peakym). asymmetrical, du, fluffy, ua ntug, tailing, thiab lwm yam), tab sis kuj mus rau qhov dav.Peb qhov kev cia siab rau qhov tseeb peak zoo yog yooj yim.Theory (6) zoo txhawb cov phau ntawv kev cia siab tias, feem ntau, cov chromatographic peaks yuav tsum tau symmetrical thiab ua raws li cov duab ntawm Gaussian tis, raws li qhia nyob rau hauv daim duab 1, peb xav tias qhov teeb meem no yog dab tsi. Nyob rau hauv ib tsab xov xwm yav tom ntej.Lwm cov duab ncov hauv daim duab 1 qhia qee qhov kev ua tau zoo uas tuaj yeem pom - hauv lwm lo lus, qee txoj hauv kev tuaj yeem mus tsis ncaj ncees lawm.Ntawm qhov seem ntawm qhov kev faib no, peb yuav siv sijhawm los tham txog qee qhov piv txwv tshwj xeeb ntawm cov xwm txheej uas tuaj yeem ua rau cov qauv zoo li no.
Qee lub sij hawm peaks tsis pom nyob rau hauv chromatogram qhov twg lawv yuav tsum tau eluted.Cov phab ntsa saum toj no qhia tau hais tias qhov tsis muaj lub ncov (piv txwv tias cov qauv tiag tiag muaj cov phiaj xwm tshuaj ntsuam xyuas ntawm qhov concentration uas yuav tsum ua kom lub ntsuas ntsuas kom txaus kom pom nws saum lub suab nrov) feem ntau muaj feem cuam tshuam rau qee qhov teeb meem ntsuas lossis tsis raug lub sijhawm mobile (yog tias pom txhua). peaks, feem ntau dhau "tsis muaj zog"). Cov npe luv luv ntawm cov teeb meem thiab cov kev daws teeb meem hauv pawg no tuaj yeem pom hauv Table I.
Raws li tau hais los saum toj no, cov lus nug ntawm qhov yuav tsum tau zam ntau npaum li cas ua ntej kev saib xyuas thiab sim kho nws yog ib lub ntsiab lus nyuaj uas kuv yuav tham hauv tsab xov xwm yav tom ntej.Kuv qhov kev paub yog qhov tseem ceeb ncov dav dav feem ntau nrog rau kev hloov pauv ntawm ncov zoo, thiab ncov tailing yog ntau dua li ua ntej ncov lossis splitting.Txawm li cas los xij, qhov nominally tshwm sim los ntawm kev sib txawv ntawm peaks. ob peb yam sib txawv:
Txhua yam ntawm cov teeb meem no tau tham txog kev nthuav dav hauv cov teeb meem yav dhau los ntawm Troubleshooting LC, thiab cov neeg nyeem txaus siab rau cov ncauj lus no tuaj yeem xa mus rau cov ntawv dhau los no kom paub txog cov hauv paus hauv paus thiab cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no. Paub meej ntxiv.
Peak tailing, ncov fronting, thiab splitting tag nrho yog tshwm sim los ntawm tshuaj lom neeg los yog lub cev phenomena, thiab daim ntawv teev cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no txawv dav, nyob ntawm seb peb puas muaj ib tug tshuaj los yog lub cev teeb meem.Feem ntau, los ntawm kev sib piv cov sib txawv peaks nyob rau hauv ib tug chromatogram, koj yuav nrhiav tau ib tug tseem ceeb qhia txog uas yog tus culprit.Yog hais tias ib tug zoo xws li cov chromogram feem ntau tsis zoo li peaks. lub cev.Yog tias tsuas yog ib lossis ob peb lub ncov raug cuam tshuam, tab sis tus so zoo zoo, qhov ua rau feem ntau yog tshuaj.
Cov tshuaj ua rau lub ncov tailing yog qhov nyuaj heev los tham luv luv ntawm no.Tus neeg nyeem txaus siab raug xa mus rau qhov teeb meem tsis ntev los no ntawm "LC Troubleshooting" rau kev sib tham ntau dua (10).Txawm li cas los xij, ib qho yooj yim los sim yog txo qhov loj ntawm cov tshuaj txhaj tshuaj thiab saib seb lub ncov zoo li cas. txhaj tshuaj me me, lossis cov kab mob chromatographic yuav tsum tau hloov kom cov duab ncov zoo tuaj yeem tau txais txawm tias muaj cov kab mob loj dua.
Kuj tseem muaj ntau qhov laj thawj ntawm lub cev rau lub ncov tailing.Cov neeg nyeem txaus siab rau cov ncauj lus kom ntxaws txog qhov muaj peev xwm raug xa mus rau lwm qhov teeb meem tsis ntev los no ntawm "LC Troubleshooting" (11).Ib qho ntawm ntau lub cev ua rau lub ncov tailing yog kev sib txuas tsis zoo ntawm qhov chaw nruab nrab ntawm lub injector thiab detector (12).Ib qho piv txwv loj yog pom nyob rau hauv daim duab 1d ua rau peb lub lis piam dhau los no, peb tau txais cov txheej txheem tshiab. valve uas peb tsis tau siv ua ntej, thiab nruab ib lub ntim me me txhaj lub voj nrog lub ferrule uas tau raug molded rau hauv stainless hlau capillary.Tom qab qee qhov kev sim daws teeb meem, peb pom tau hais tias qhov chaw nres nkoj qhov tob hauv qhov kev txhaj tshuaj valve stator yog qhov tob dua li qhov peb tau siv, ua rau lub ntim loj tuag nyob hauv qab ntawm qhov chaw nres nkoj.Qhov teeb meem no yooj yim daws tau los ntawm kev hloov lub voj voog rau lwm txoj haujlwm, peb tuaj yeem tshem tawm qhov kev txhaj tshuaj molding. tuag ntim rau hauv qab ntawm qhov chaw nres nkoj.
Peak pem hauv ntej zoo li cov uas pom hauv daim duab 1e kuj tuaj yeem tshwm sim los ntawm cov teeb meem ntawm lub cev lossis tshuaj lom neeg.Ib qho ua rau lub cev ua rau ntawm ntug yog tias lub txaj particle ntawm kem tsis zoo packed, los yog hais tias cov particles tau reorganized nyob rau lub sij hawm.Raws li lub ncov tailing tshwm sim los ntawm lub cev phenomenon, txoj kev zoo tshaj los kho qhov no yog los hloov lub kem thiab ua mus ntxiv, feem ntau hu ua particles. "non-linear" retention condition.Raws li qhov zoo tshaj plaws (linear) tej yam kev mob, tus nqi ntawm cov analytes khaws cia los ntawm cov theem nyob ruaj khov (li no, qhov khaws cia qhov tseem ceeb) yog linearly ntsig txog cov concentration ntawm cov analyte nyob rau hauv kab. Tsis tsuas yog ua siab dua tab sis kuj dav dua li ntau qhov kev txhaj tshuaj.Ntxiv, cov duab nonlinear txiav txim siab cov duab ntawm chromatographic peaks, uas ua rau kev coj los yog trailing edges.Raws li cov khoom loj tshaj uas ua rau ncov tailing (10), ncov ua los ntawm nonlinear tuav kuj tuaj yeem kuaj xyuas los ntawm kev txo cov kev txhaj tshuaj analyte zoo dua, yog tias cov txheej txheem peak yuav tsum zoo dua. ntug, lossis chromatographic tej yam kev mob yuav tsum tau hloov kom txo tau tus cwj pwm no.
Qee lub sij hawm peb pom qhov zoo li "split" ncov, raws li qhia hauv daim duab 1f. Thawj kauj ruam hauv kev daws qhov teeb meem no yog los txiav txim siab seb lub ncov zoo li cas yog vim muaj kev sib koom ua ke (piv txwv li, muaj ob qhov sib txawv tab sis zoo sib xws). suav), thiab qhov pom meej "split" peaks muaj feem xyuam rau lub cev Kev Ua tau zoo tsis muaj dab tsi ua nrog rau sab nws tus kheej. Feem ntau, qhov tseem ceeb tshaj plaws ntawm qhov kev txiav txim siab no yog tias txhua qhov peaks hauv chromatogram nthuav tawm cov duab sib cais, lossis tsuas yog ib lossis ob. Yog tias tag nrho cov peaks raug cais, nws yog qhov teeb meem ntawm lub cev, feem ntau yuav muaj feem cuam tshuam rau sab nws tus kheej.
Split peaks ntsig txog lub cev lub cev ntawm cov kab ke nws tus kheej feem ntau yog vim qee qhov thaiv qhov nkag los yog qhov hluav taws xob frits, los yog reorganization ntawm hais nyob rau hauv kem, tso cai rau lub mobile theem ntws sai tshaj lub mobile theem nyob rau hauv tej qhov chaw ntawm lub kem channel tsim .nyob rau hauv lwm lub cheeb tsam (11).Tshiab clogged frit tej zaum yuav cleared los ntawm reversing lub ntws los ntawm lub kem. Txawm li cas los xij, hauv kuv qhov kev paub dhau los, qhov no feem ntau yog lub sijhawm luv luv es tsis yog qhov kev daws teeb meem ntev.Qhov no feem ntau tuag nrog cov kab niaj hnub yog tias cov khoom sib txuas ua ke hauv kem.Thaum lub sijhawm no, nws yog qhov zoo tshaj los hloov lub kem thiab txuas ntxiv mus.
Lub ncov nyob rau hauv daim duab 1g, kuj los ntawm ib tug tsis ntev los no piv txwv nyob rau hauv kuv tus kheej lab, feem ntau qhia tau hais tias lub teeb liab yog li ntawd nws tau mus txog lub siab kawg ntawm cov lus teb ntau yam.Rau qhov muag pom absorbance detectors (UV-vis nyob rau hauv cov ntaub ntawv no), thaum lub analyte concentration yog siab heev, lub analyte absorbs feem ntau ntawm lub teeb dhau los ntawm lub detector ntws ntawm tes, tawm hauv lub teeb me ntsis ntawm cov teeb liab los ntawm cov teeb meem no, tsis pom cov teeb liab ntau yam. qhov chaw ntawm lub suab nrov, xws li lub teeb tsis pom kev thiab "tam sim no tsaus", ua rau lub teeb liab "fuzzy" nyob rau hauv tsos thiab ywj siab ntawm kev tsom xam. Thaum qhov no tshwm sim, qhov teeb meem feem ntau tuaj yeem daws tau yooj yim los ntawm kev txo qhov ntim ntawm cov tshuaj ntsuam xyuas-txo cov ntim ntim, diluting tus qauv, lossis ob qho tib si.
Nyob rau hauv lub tsev kawm ntawv chromatography, peb siv lub teeb liab ntes (xws li, y-axis hauv chromatogram) ua qhov taw qhia ntawm cov tshuaj ntsuam xyuas hauv cov qauv.Yog li nws zoo li khib pom chromatogram nrog lub teeb liab hauv qab xoom, vim qhov yooj yim txhais tau tias qhov no qhia tias qhov ntsuas tsis zoo - uas yog qhov tsis zoo ntawm lub cev.
Nyob rau hauv cov ntaub ntawv no, lub ncov tsis zoo tsuas yog txhais tau hais tias cov molecules eluting los ntawm kem nqus lub teeb tsawg tshaj li lub xov tooj ntawm tes nws tus kheej tam sim ntawd ua ntej thiab tom qab lub ncov.Qhov no tuaj yeem tshwm sim, piv txwv li, thaum siv cov kev tshawb nrhiav tsis tshua muaj wavelengths (<230 nm) thiab cov theem mobile additives uas nqus feem ntau ntawm lub teeb ntawm cov wavelengths.Cov additives tuaj yeem ua tau xws li cov khoom siv hluav taws xob zoo li qub los yog cov khoom siv hluav taws xob. los yog formate.One tuaj yeem siv qhov tsis zoo peaks los npaj lub calibration nkhaus thiab tau txais cov ntaub ntawv muaj tseeb, yog li tsis muaj laj thawj tseem ceeb kom zam tau lawv ib qho (cov txheej txheem no qee zaum hu ua "indirect UV detection") (13).Txawm li cas los xij, yog tias peb xav kom zam qhov tsis zoo peaks tag nrho, nyob rau hauv cov ntaub ntawv ntawm absorbance yoj nrhiav kom tau ib qho kev sib txawv, qhov zoo tshaj plaws absorbance yoj yoj. ntau tshaj li theem mobile, los yog hloov cov muaj pes tsawg leeg ntawm lub mobile theem kom lawv nqus tau tsawg dua lub teeb analytes.
Cov peaks tsis zoo kuj tuaj yeem tshwm sim thaum siv qhov ntsuas qhov ntsuas qhov ntsuas (RI) tshawb pom thaum qhov ntsuas qhov ntsuas tsis zoo ntawm cov khoom sib txawv tsis yog cov tshuaj ntsuam xyuas hauv cov qauv, xws li cov kuab tshuaj matrix, txawv ntawm qhov ntsuas qhov ntsuas ntawm lub xov tooj ntawm tes.Qhov no kuj tshwm sim nrog UV-vis detection, tab sis cov nyhuv no zoo li yuav attenuated txheeb ze rau RI kuaj pom. matrix rau ntawm lub mobile theem.
Nyob rau hauv ib feem peb ntawm lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm kev daws teeb meem LC, kuv tau tham txog cov xwm txheej uas pom cov duab ncov txawv ntawm qhov xav tau lossis ib txwm ncov zoo li qub.Kev daws teeb meem zoo ntawm cov teeb meem no pib nrog kev paub txog kev xav ncov cov duab (raws li kev xav lossis kev paub dhau los nrog cov txheej txheem uas twb muaj lawm), yog li kev sib txawv ntawm cov kev cia siab no yog pom tseeb.Peak teeb meem muaj ntau qhov sib txawv ntawm qhov laj thawj, thiab lwm yam). nthuav dav qee qhov laj thawj uas kuv pom ntau zaus.Kev paub txog cov ntsiab lus no muab qhov chaw zoo los pib daws teeb meem, tab sis tsis ntes txhua qhov muaj peev xwm.Readers xav paub ntau ntxiv txog cov laj thawj thiab cov kev daws teeb meem tuaj yeem xa mus rau LCGC "LC Troubleshooting Guide" phab ntsa.
(4) LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF and Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.