Qee cov ntsiab lus daws teeb meem LC yeej tsis dhau hnub, vim muaj teeb meem hauv LC xyaum, txawm tias cov cuab yeej siv tshuab tau zoo dua lub sijhawm.Muaj ntau txoj hauv kev uas teeb meem tuaj yeem tshwm sim hauv LC system thiab xaus rau hauv cov duab tsis zoo.Thaum muaj teeb meem ntsig txog cov duab siab tshwm sim, cov npe luv luv ntawm qhov ua tau rau cov txiaj ntsig no pab ua kom peb cov kev daws teeb meem yooj yim.
Nws tau lom zem sau qhov "LC Troubleshooting" kem thiab xav txog cov ncauj lus txhua lub hlis, vim qee lub ntsiab lus yeej tsis tawm ntawm style.Thaum nyob rau hauv kev tshawb fawb chromatography qee cov ncauj lus lossis cov tswv yim ua tsis tiav vim lawv tau hloov pauv los ntawm cov tswv yim tshiab thiab zoo dua, hauv kev daws teeb meem, txij li thawj qhov teeb meem tau tshwm sim nyob rau hauv phau ntawv xov xwm 1 lub sijhawm (cov ntawv xov xwm 3) tseem muaj nyob hauv phau ntawv xov xwm 1 lub sijhawm (cov ntawv xov xwm 8) ) Ob peb xyoos dhau los, kuv tau tsom mus rau ntau qhov kev daws teeb meem LC ntawm cov qauv tam sim no cuam tshuam rau cov kua chromatography (LC) (piv txwv li, kev sib piv cov txheeb ze ntawm peb txoj kev nkag siab txog qhov cuam tshuam ntawm kev ceev ceev [2] Tshiab Advances) Peb txhais cov txiaj ntsig ntawm LC thiab yuav ua li cas daws teeb meem nrog cov cuab yeej LC niaj hnub no.In kuv lub hlis no lub Kaum Ob Hlis 2 (2 ntu txuas ntxiv), uas tau pib lub Kaum Ob Hlis 2. ntawm "lub neej thiab kev tuag" cov ntsiab lus ntawm LC teeb meem - cov ntsiab lus uas zoo rau txhua qhov teeb meem yog qhov tseem ceeb, tsis hais lub hnub nyoog ntawm lub cev peb tab tom siv.Lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm cov koob no yog qhov tseem ceeb rau LCGC lub npe hu ua "LC Troubleshooting Guide" phab ntsa daim ntawv (4) dai rau hauv ntau lub chaw soj nstuam.Rau qhov thib peb ntawm cov kab ntawv no, kuv xaiv cov yam ntxwv ntawm cov kab ntawv no. 44 lub peev xwm sib txawv ua rau lub siab tsis zoo!Peb tsis tuaj yeem xav txog tag nrho cov teeb meem no kom ntxaws hauv ib tsab xov xwm, yog li hauv thawj ntu ntawm cov ncauj lus no, kuv yuav tsom mus rau qee qhov uas kuv pom feem ntau.Kuv vam tias cov tub ntxhais hluas thiab cov laus LC cov neeg siv yuav pom qee cov lus qhia thiab kev ceeb toom ntawm lub ntsiab lus tseem ceeb no.
Kuv pom kuv tus kheej tau teb cov lus nug daws teeb meem nrog "txhua yam ua tau".Cov lus teb no yuav zoo li yooj yim thaum xav txog cov kev soj ntsuam uas nyuaj rau kev txhais, tab sis kuv pom nws feem ntau tsim nyog.Nrog ntau qhov ua rau lub siab tsis zoo, nws yog ib qho tseem ceeb kom qhib siab thaum txiav txim siab seb qhov teeb meem yuav ua li cas, thiab muaj peev xwm ua kom muaj peev xwm ua kom muaj peev xwm ua tau los pib peb cov kev daws teeb meem feem ntau, tsom rau cov ntsiab lus tseem ceeb tshaj plaws.
Ib kauj ruam tseem ceeb hauv kev daws teeb meem - tab sis ib qho uas kuv xav tias tsis txaus - yog lees paub tias muaj qhov teeb meem uas yuav tsum tau daws.Rau pom tias muaj teeb meem feem ntau txhais tau tias pom tias qhov tshwm sim ntawm cov cuab yeej sib txawv ntawm peb qhov kev cia siab, uas yog cov duab los ntawm txoj kev xav, kev paub txog kev paub, thiab kev paub (5).Qhov "peak shape" lub peakym tsuas yog xa mus rau qhov tseeb ntawm no (peakym). ffy, ua ntug, tailing, thiab lwm yam), tab sis kuj mus rau qhov dav.Peb qhov kev cia siab rau qhov tseeb ncov zoo yog qhov yooj yim.Theory (6) zoo txhawb cov phau ntawv kev cia siab tias, feem ntau, cov chromatographic peaks yuav tsum sib npaug thiab ua raws li cov duab ntawm Gaussian faib, raws li qhia hauv daim duab 1a.Qhov peb xav tau los ntawm cov lus peak ntau dua yav tom ntej. igure 1 qhia qee qhov ntawm lwm qhov uas tuaj yeem pom tau - hauv lwm lo lus, qee txoj hauv kev tuaj yeem mus tsis ncaj ncees lawm.Nyob rau hauv seem ntawm no, peb yuav siv sijhawm los tham txog qee qhov piv txwv tshwj xeeb ntawm cov xwm txheej uas tuaj yeem ua rau cov qauv zoo li no.
Qee lub sij hawm peaks tsis pom nyob rau hauv chromatogram qhov twg lawv yuav tsum tau eluted.Cov phab ntsa saum toj no qhia tau hais tias qhov tsis muaj lub ncov (piv txwv tias cov qauv tiag tiag muaj cov phiaj xwm tshuaj ntsuam xyuas ntawm qhov concentration uas yuav tsum ua kom lub ntsuas ntsuas kom txaus kom pom nws saum lub suab nrov) feem ntau muaj feem cuam tshuam rau qee qhov teeb meem ntsuas lossis tsis raug lub sijhawm mobile (yog tias pom txhua).peaks, feem ntau dhau "tsis muaj zog"). Cov npe luv luv ntawm cov teeb meem thiab cov kev daws teeb meem hauv pawg no tuaj yeem pom hauv Table I.
Raws li tau hais los saum toj no, cov lus nug ntawm yuav tsum tau zam ntau npaum li cas lub ncov dav yuav tsum zam ua ntej them nyiaj thiab sim kho nws yog lub ntsiab lus nyuaj uas kuv yuav tham hauv tsab xov xwm yav tom ntej.Kuv qhov kev paub yog qhov tseem ceeb ncov dav dav feem ntau nrog rau kev hloov pauv loj hauv cov duab ncov, thiab ncov tailing yog ntau dua li ua ntej ncov lossis splitting.Txawm li cas los xij, qhov sib txawv ntawm qhov nominally los ntawm kev sib txawv ntawm qhov sib txawv.
Txhua yam ntawm cov teeb meem no tau tham txog kev nthuav dav hauv cov teeb meem yav dhau los ntawm Troubleshooting LC, thiab cov neeg nyeem txaus siab rau cov ncauj lus no tuaj yeem xa mus rau cov ntawv dhau los no kom paub txog cov hauv paus hauv paus thiab cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no.Paub meej ntxiv.
Peak tailing, ncov fronting, thiab splitting tag nrho yog tshwm sim los ntawm tshuaj lom neeg los yog lub cev phenomena, thiab daim ntawv teev cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no txawv dav, nyob ntawm seb peb puas muaj tshuaj los yog lub cev muaj teeb meem.Feem ntau, los ntawm kev sib piv cov sib txawv peaks nyob rau hauv ib tug chromatogram, koj yuav nrhiav tau ib qho tseem ceeb qhia txog uas yog tus culprit.Yog hais tias ib tug chromium feem ntau yuav tsis zoo ib yam li cov peaks. los yog ob peb lub ncov raug cuam tshuam, tab sis tus so zoo, qhov ua rau yog feem ntau yuav tshuaj.
Cov tshuaj ua rau lub ncov tailing yog qhov nyuaj heev los tham luv luv ntawm no.Tus neeg nyeem txaus siab raug xa mus rau qhov teeb meem tsis ntev los no ntawm "LC Troubleshooting" rau kev sib tham tob ntxiv (10).Txawm li cas los xij, ib qho yooj yim los sim yog txo qhov loj ntawm cov tshuaj txhaj tshuaj thiab saib seb lub ncov zoo li cas. yte masses, los yog cov xwm txheej chromatographic yuav tsum tau hloov kom cov duab ncov zoo tuaj yeem tau txais txawm tias cov khoom loj dua txhaj.
Kuj tseem muaj ntau qhov laj thawj ntawm lub cev rau lub ncov tailing.Cov neeg nyeem txaus siab rau cov ncauj lus kom ntxaws txog qhov muaj peev xwm raug xa mus rau lwm qhov teeb meem tsis ntev los no ntawm "LC Troubleshooting" (11).Ib qho ntawm ntau lub cev ua rau lub ncov tailing yog kev sib txuas tsis zoo ntawm qhov chaw nruab nrab ntawm lub injector thiab detector (12).Ib qho piv txwv loj yog pom nyob rau hauv daim duab 1d qhov system peb tau txais nyob rau hauv ib lub lis piam dhau los no, peb tsis tau txais cov txheej txheem tshiab. siv ua ntej, thiab nruab ib lub voj me me ntim nrog lub ferrule uas tau raug molded rau hauv stainless hlau capillary.Tom qab qee qhov kev sim daws teeb meem pib, peb pom tau hais tias qhov chaw nres nkoj qhov tob hauv qhov kev txhaj tshuaj valve stator yog qhov tob dua li peb tau siv los, uas ua rau lub ntim loj tuag nyob hauv qab ntawm qhov chaw nres nkoj.Qhov teeb meem no yooj yim daws tau los ntawm kev hloov lub voj txhaj tshuaj nrog rau qhov chaw nres nkoj ntawm qhov chaw nres nkoj tuag.
Peak pem hauv ntej zoo li cov uas pom hauv daim duab 1e kuj tuaj yeem tshwm sim los ntawm cov teeb meem ntawm lub cev lossis tshuaj lom neeg.Ib qho kev ua rau lub cev ua rau ntawm ntug yog tias lub txaj particle ntawm kem tsis zoo packed, los yog hais tias cov particles tau reorganized dua lub sij hawm.Raws li nrog ncov tailing tshwm sim los ntawm lub cev phenomenon, txoj kev zoo tshaj plaws los kho qhov no yog los hloov lub kem thiab txuas ntxiv mus. Nyob rau hauv qhov zoo tagnrho (linear) tej yam kev mob, tus nqi ntawm cov analyte khaws cia los ntawm lub sij hawm nyob ruaj ruaj (li no, qhov retention factor) yog linearly ntsig txog cov concentration ntawm cov analyte nyob rau hauv kem.Chromatographically, qhov no txhais tau hais tias raws li qhov loj ntawm analyte txhaj rau hauv kem nce, lub ncov yuav siab dua, tab sis tsis wider.Qhov kev sib raug zoo tsis yog qhov siab xwb, tab sis qhov kev sib raug zoo no tsuas yog tawg. Ntxiv rau, cov duab nonlinear txiav txim siab cov duab ntawm chromatographic peaks, uas ua rau cov thawj coj los yog trailing edges.Raws li cov khoom loj tshaj uas ua rau lub ncov tailing (10), ncov ua los ntawm nonlinear tuav kuj tuaj yeem kuaj tau los ntawm kev txo qhov txhaj tshuaj analyte mass.Yog tias ncov cov duab txhim kho, cov txheej txheem yuav tsum tsis txhob hloov pauv qhov zoo tshaj qhov kev txhaj tshuaj. ize tus cwj pwm no.
Qee lub sij hawm peb saib qhov zoo li "split" ncov, raws li qhia hauv daim duab 1f. Thawj kauj ruam ntawm kev daws qhov teeb meem no yog los txiav txim siab seb lub ncov zoo li cas yog vim muaj kev sib koom ua ke (piv txwv li, muaj ob qhov sib txawv tab sis zoo sib xws). arent "split" peaks muaj feem xyuam rau lub cev Kev Ua tau zoo tsis muaj dab tsi ua rau sab nws tus kheej. Feem ntau, qhov tseem ceeb tshaj plaws ntawm qhov kev txiav txim siab yog seb tag nrho cov peaks hauv chromatogram nthuav tawm cov duab sib cais, lossis tsuas yog ib lossis ob.Yog tias tag nrho cov peaks raug cais, nws yog qhov teeb meem ntawm lub cev, feem ntau yuav muaj feem cuam tshuam rau sab nws tus kheej.
Split peaks ntsig txog lub cev lub cev ntawm cov kab ke nws tus kheej feem ntau yog vim qee qhov thaiv qhov nkag los yog qhov hluav taws xob frits, los yog reorganization ntawm hais nyob rau hauv kem, tso cai rau lub mobile theem ntws sai tshaj lub mobile theem nyob rau hauv tej qhov chaw ntawm lub kem channel tsim .nyob rau hauv lwm lub cheeb tsam (11).Tshiab clogged frit tej zaum yuav cleared los ntawm reversing lub ntws los ntawm lub kem.Txawm li cas los xij, hauv kuv qhov kev paub dhau los, qhov no feem ntau yog lub sijhawm luv luv es tsis yog qhov kev daws teeb meem ntev.Qhov no feem ntau tuag nrog cov kab niaj hnub yog tias cov khoom sib txuas ua ke hauv kem.Thaum lub sijhawm no, nws yog qhov zoo tshaj los hloov lub kem thiab txuas ntxiv mus.
Lub ncov nyob rau hauv daim duab 1g, kuj los ntawm ib tug tsis ntev los no piv txwv nyob rau hauv kuv tus kheej lab, feem ntau qhia tau hais tias lub teeb liab siab heev uas nws tau mus txog qhov kawg ntawm cov lus teb ntau yam.Rau qhov muag absorbance detectors (UV-vis nyob rau hauv cov ntaub ntawv no), thaum lub analyte concentration siab heev, lub analyte absorbs feem ntau ntawm lub teeb dhau los ntawm lub detector txaus cell, tawm hauv lub teeb me ntsis ntawm cov teeb liab los ntawm cov teeb meem no, tsis muaj kev cuam tshuam cov teeb liab. xws li lub teeb stray thiab "tam sim no tsaus", ua rau lub teeb liab heev "fuzzy" nyob rau hauv tsos thiab ywj siab ntawm kev tsom xam.Thaum qhov no tshwm sim, qhov teeb meem feem ntau tuaj yeem daws tau yooj yim los ntawm kev txo qhov ntim ntawm cov tshuaj ntsuam xyuas-txo cov ntim ntim, diluting tus qauv, lossis ob qho tib si.
Nyob rau hauv lub tsev kawm ntawv chromatography, peb siv lub teeb liab ntes (xws li, y-axis hauv chromatogram) ua qhov taw qhia ntawm cov tshuaj ntsuam xyuas hauv cov qauv.Yog li nws zoo li khib pom chromatogram nrog lub teeb liab hauv qab xoom, vim qhov yooj yim txhais tau tias qhov no qhia tias qhov ntsuas tsis zoo - uas yog qhov tsis zoo ntawm lub cev.
Nyob rau hauv cov ntaub ntawv no, lub ncov tsis zoo tsuas yog txhais tau hais tias cov molecules eluting los ntawm kem nqus lub teeb tsawg tshaj li lub xov tooj ntawm tes nws tus kheej tam sim ntawd ua ntej thiab tom qab lub ncov.Qhov no tuaj yeem tshwm sim, piv txwv li, thaum siv cov kev tshawb pom tsis tshua muaj wavelengths (<230 nm) thiab cov theem mobile additives uas nqus feem ntau ntawm lub teeb ntawm cov wavelengths.Cov additives no tuaj yeem ua tau xws li cov khoom siv hluav taws xob los yog cov khoom hnyav. ne tuaj yeem siv qhov tsis zoo peaks los npaj qhov kev ntsuas qhov nkhaus thiab tau txais cov ntaub ntawv muaj tseeb, yog li tsis muaj laj thawj tseem ceeb kom zam lawv ib qho (cov qauv no qee zaum hu ua "indirect UV detection") (13). Txawm li cas los xij, yog tias peb xav kom zam qhov tsis zoo peaks tag nrho, nyob rau hauv cov ntaub ntawv ntawm absorbance nrhiav kom tau, qhov zoo tshaj plaws kev daws teeb meem yog siv lub zog sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv. ntawm cov theem mobile kom lawv nqus lub teeb tsawg dua li cov analytes.
Cov peaks tsis zoo kuj tuaj yeem tshwm sim thaum siv qhov ntsuas qhov ntsuas qhov ntsuas (RI) tshawb pom thaum qhov ntsuas qhov ntsuas tsis zoo ntawm cov khoom siv uas tsis yog cov tshuaj ntsuam xyuas hauv cov qauv, xws li cov kuab tshuaj matrix, txawv ntawm qhov ntsuas qhov ntsuas ntawm lub xov tooj ntawm tes.Qhov no kuj tshwm sim nrog UV-vis detection, tab sis cov nyhuv no zoo li yuav attenuated txheeb ze rau RI nrhiav kom pom ntau dua. ntawm theem mobile.
Nyob rau hauv ib feem peb ntawm lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm kev daws teeb meem LC, kuv tau tham txog cov xwm txheej uas pom cov duab ncov txawv ntawm qhov xav tau lossis ib txwm ncov zoo li qub.Kev daws teeb meem zoo ntawm cov teeb meem no pib nrog kev paub txog kev xav ncov cov duab (raws li kev xav lossis kev paub dhau los nrog cov txheej txheem uas twb muaj lawm), yog li kev sib txawv ntawm cov kev cia siab no yog qhov pom tseeb.Peak cov teeb meem muaj ntau qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv, thiab lwm yam). Yog vim li cas kuv pom ntau zaus.Kev paub txog cov ntsiab lus no muab qhov chaw zoo los pib daws teeb meem, tab sis tsis ntes txhua qhov muaj peev xwm.Readers xav paub ntau ntxiv txog cov laj thawj thiab cov kev daws teeb meem tuaj yeem xa mus rau LCGC "LC Troubleshooting Guide" phab ntsa.
(4) LCGC “LC Troubleshooting Guide” wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF and Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.