Gen kèk sijè depanaj LC yo pa janm demode, paske gen pwoblèm nan pratik LC, menm lè teknoloji enstriman amelyore sou tan.Gen plizyè fason nan ki pwoblèm ka leve nan yon sistèm LC epi fini nan fòm pik pòv. Lè pwoblèm ki gen rapò ak fòm pik leve, yon lis kout nan kòz posib pou rezilta sa yo ede senplifye eksperyans depanaj nou an.
Li te amizan ekri kolòn “LC Troubleshooting” sa a epi reflechi sou sijè chak mwa, paske gen kèk sijè ki pa janm demode. Pandan ke nan domèn rechèch kwomatografi, sèten sijè oswa lide vin demode paske yo ranplase yo pa nouvo ak pi bon lide, nan domèn depanaj, depi premye atik depanaj la te parèt nan jounal sa a (kèk ane ki sot pase yo nan jounal LC) nan epòk sa yo toujou enpòtan (18). Mwen te konsantre plizyè LC Depanaj seksyon sou tandans kontanporen ki afekte likid chromatografi (LC) (pa egzanp, konparezon relatif la nan konpreyansyon nou genyen sou efè presyon sou retansyon [2] Nouvo Avans) Entèpretasyon rezilta LC nou yo ak fason pou rezoud pwoblèm ak enstriman LC modèn yo. depanaj — eleman ki bon pou nenpòt depanaj yo esansyèl, kèlkeswa laj sistèm n ap itilize a. Sijè debaz seri sa a trè enpòtan nan tablo miray pi popilè LCGC a “LC Troubleshooting Guide” (4) ki pandye nan anpil laboratwa. Pou twazyèm pati seri sa a, mwen te chwazi konsantre sou pwoblèm ki gen rapò ak fòm pik oswa karakteristik pik yo. tout pwoblèm sa yo an detay nan yon sèl atik, kidonk nan premye tranch sa a sou sijè a, mwen pral konsantre sou kèk nan sa yo mwen wè pi souvan. Mwen espere ke jèn ak granmoun itilizatè LC yo pral jwenn kèk konsèy itil ak rapèl sou sijè sa a enpòtan.
Mwen jwenn tèt mwen de pli zan pli reponn kesyon depanaj ak "nenpòt bagay ki posib". Repons sa a ka sanble fasil lè w ap konsidere obsèvasyon ki difisil pou entèprete, men mwen jwenn li souvan apwopriye. Avèk anpil kòz posib pou fòm pik pòv, li enpòtan pou kenbe yon lespri ouvè lè w ap konsidere ki pwoblèm nan ta ka, epi pou kapab bay priyorite kòz potansyèl yo pou kòmanse konsantre sou efò ki pi enpòtan yo.
Yon etap kle nan nenpòt ki fè egzèsis depanaj - men youn ke mwen panse ke yo underrated - se rekonèt ke gen yon pwoblèm ki bezwen rezoud. Rekonèt ke gen yon pwoblèm souvan vle di rekonèt ke sa k ap pase nan zouti a diferan de atant nou yo, ki gen fòm pa teyori, konesans anpirik, ak eksperyans (5). , an gonfle, dirijan kwen, tailing, elatriye), men tou, nan lajè a.Atant nou yo pou fòm pik aktyèl yo senp.Teyori (6) byen sipòte atant nan liv ke, nan pifò ka, pik yo kwomatografi yo ta dwe simetrik ak konfòme yo ak fòm nan yon distribisyon Gaussian, jan yo montre nan Figi 1a. nan Figi 1 montre kèk nan lòt posiblite yo ka obsève-sa vle di, kèk nan fason bagay yo ta ka ale mal.Nan rès la nan tranch sa a, nou pral pase tan diskite sou kèk egzanp espesifik nan sitiyasyon ki ka mennen nan kalite fòm sa yo.
Pafwa pik yo pa obsève ditou nan kwomatogram kote yo espere yo dwe eliye. Tablo miray ki anwo a endike ke absans yon pik (si nou sipoze echantiyon an gen aktyèlman analit sib la nan yon konsantrasyon ki ta dwe fè repons detektè a ase pou wè li pi wo a bri a) anjeneral ki gen rapò ak kèk pwoblèm enstriman oswa kondisyon faz mobil kòrèk (si yo obsève nan tout).pik, anjeneral twò "fèb").Ou ka jwenn yon lis kout pwoblèm potansyèl ak solisyon nan kategori sa a nan Tablo I.
Kòm mansyone pi wo a, kesyon an sou konbyen pik elaji yo ta dwe tolere anvan yo peye atansyon epi eseye ranje li se yon sijè konplèks ke mwen pral diskite nan yon atik nan lavni.
Chak nan pwoblèm sa yo te diskite an detay nan pwoblèm anvan yo nan Depanaj LC, ak lektè ki enterese nan sijè sa yo ka refere a atik anvan sa yo pou enfòmasyon sou kòz rasin yo ak solisyon potansyèl pou pwoblèm sa yo.Plis detay.
Peak tailing, pik fronting, ak fann tout ka koze pa fenomèn chimik oswa fizik, ak lis solisyon potansyèl yo nan pwoblèm sa yo varye anpil, tou depann de si nou ap fè fas ak yon pwoblèm chimik oswa fizik. Souvan, lè w konpare pik yo diferan nan yon chromatogram, ou ka jwenn endikasyon enpòtan sou ki se koupab la. se sèlman youn oswa kèk pik ki afekte, men rès la gade byen, kòz la gen plis chans chimik.
Kòz chimik yo nan pik tailing yo twò konplèks yo diskite yon ti tan isit la. Lektè ki enterese refere yo bay pwoblèm ki sot pase a nan "LC Troubleshooting" pou yon diskisyon plis pwofondè (10).Sepandan, yon bagay fasil eseye se diminye mas la nan analit la sou fòm piki a ak wè si fòm nan pik amelyore. ti mas analit yo, oswa kondisyon kwomatografik yo dwe chanje pou bon fòm pik yo ka jwenn menm ak pi gwo mas yo enjekte.
Genyen tou anpil rezon fizik potansyèl pou pik tailing.Lektè ki enterese nan yon diskisyon detaye sou posiblite yo refere yo bay yon lòt pwoblèm ki sot pase nan "LC Troubleshooting" (11). Youn nan kòz fizik ki pi komen nan pik tailing se yon koneksyon pòv nan yon pwen ant enjektè a ak detektè (12). pa te itilize anvan, epi enstale yon ti bouk piki volim ak yon férule ki te modle sou yon kapilè asye pur.Apre kèk premye eksperyans depanaj, nou reyalize ke pwofondè pò a nan stator valv la piki te pi fon anpil pase nou te itilize, sa ki lakòz yon gwo volim mouri nan pati anba a nan pò a. volim nan mouri nan pati anba a nan pò a.
Fwon pik tankou sa yo montre nan Figi 1e kapab lakòz tou pa pwoblèm fizik oswa chimik. Yon kòz fizik komen nan kwen prensipal la se ke kabann nan patikil nan kolòn nan pa byen chaje, oswa ke patikil yo te reòganize sou tan. Menm jan ak pik tailing ki te koze pa fenomèn fizik sa a, pi bon fason yo ranje sa a se ranplase kolòn nan epi kontinye souvan, rele "ki soti nan orijin ki mennen ale nan pwodui chimik ki mennen ale. lineyè” kondisyon retansyon.Anba kondisyon ideyal (lineyè), kantite analit ki kenbe pa faz estasyonè a (kidonk, faktè retansyon an) se lineyè ki gen rapò ak konsantrasyon analit la nan kolòn nan. Chromatografikman, sa vle di ke kòm mas la nan analit enjekte nan kolòn nan ogmante, pik la vin pi wo, men se pa pi laj. r kòm plis mas yo enjekte.Anplis de sa, fòm ki pa lineyè detèmine fòm nan pik kwomatografik, sa ki lakòz bor dirijan oswa fin. Menm jan ak surcharge mas ki lakòz pik tailing (10), pik dirijan ki te koze pa retansyon ki pa lineyè kapab dyagnostike tou lè w diminye mas analit enjekte a. dwe chanje pou minimize konpòtman sa a.
Pafwa nou obsève sa ki parèt yon pik "divize", jan yo montre nan Figi 1f. Premye etap la nan rezoud pwoblèm sa a se detèmine si fòm nan pik se akòz ko-elisyon pasyèl (sa vle di, prezans nan de konpoze distenk men byen elisyon). t” pik yo gen rapò ak fizik Pèfòmans pa gen anyen fè ak kolòn nan tèt li.Souvan, siy ki pi enpòtan nan desizyon sa a se si tout pik nan ekspozisyon kromatogram nan fann fòm, oswa jis youn oswa de.Si se jis youn oswa de, li se pwobableman yon pwoblèm ko-elisyon;si tout pik yo divize, li se pwobableman yon pwoblèm fizik, gen plis chans ki gen rapò ak kolòn nan tèt li.
Split pik ki gen rapò ak pwopriyete fizik kolòn nan tèt li yo anjeneral akòz pasyèlman bloke inlet oswa frit priz, oswa reòganizasyon patikil nan kolòn nan, sa ki pèmèt faz mobil lan koule pi vit pase faz mobil la nan sèten zòn nan fòmasyon an kanal kolòn .nan lòt rejyon yo (11).Frit ki pasyèlman bouche ka pafwa dwe otorize pa ranvèse koule nan kolòn nan;sepandan, nan eksperyans mwen, sa a se nòmalman yon kout tèm olye ke yon solisyon alontèm. Sa a souvan fatal ak kolòn modèn si patikil yo rekonbine nan kolòn nan. Nan pwen sa a, li pi bon ranplase kolòn nan epi kontinye.
Pik nan Figi 1g, tou ki soti nan yon egzanp resan nan laboratwa pwòp mwen an, anjeneral endike ke siyal la se tèlman wo ke li te rive nan fen a wo nan ranje repons lan.Pou detektè absòbe optik (UV-vis nan ka sa a), lè konsantrasyon nan analit se trè wo, analit la absòbe pi fò nan limyè a pase nan selil la koule detektè, kite anpil ti limyè nan kondisyon sa yo dwe detekte sous elektrik yo enfliyanse divès kalite sous elektrik yo detekte. nan bri, tankou limyè pèdi ak "kouran fè nwa", fè siyal la trè "flou" nan aparans ak endepandan de konsantrasyon analit.Lè sa rive, pwoblèm nan souvan ka fasil rezoud pa diminye volim nan piki nan analit la-diminye volim nan piki, dilye echantiyon an, oswa toude.
Nan lekòl kwomatografi, nou itilize siyal detektè a (sa vle di, aks y nan kwomatogram nan) kòm yon endikatè nan konsantrasyon nan analit nan echantiyon an. Se konsa, li sanble enpè yo wè yon kromatogram ak yon siyal anba zewo, kòm entèpretasyon an senp se ke sa a endike yon konsantrasyon analiz negatif - ki nan kou se pa fizikman posib.
Nan ka sa a, yon pik negatif tou senpleman vle di ke molekil yo soti nan kolòn nan absòbe mwens limyè pase faz mobil nan tèt li imedyatman anvan ak apre pik la. pik yo prepare yon koub kalibrasyon ak jwenn enfòmasyon quantitative egzat, kidonk pa gen okenn rezon fondamantal pou evite yo per se (metòd sa a pafwa refere yo kòm "deteksyon UV endirèk") (13).Sepandan, si nou reyèlman vle evite pik negatif tout ansanm, nan ka a nan deteksyon absòbe, solisyon ki pi bon se sèvi ak yon deteksyon diferan longèdonn deteksyon an pou yo absòbe faz la pi piti pase mobil faz la absòbe faz mobil lan. pase analit.
Pik negatif yo ka parèt tou lè w ap itilize deteksyon refraktif endèks (RI) lè endèks refraktif eleman lòt pase analit nan echantiyon an, tankou matris sòlvan an, diferan de endèks refraktif faz mobil lan. faz mobil lan.
Nan twa pati sou sijè debaz nan depanaj LC, mwen te diskite sitiyasyon kote fòm nan pik obsève diferan de fòm nan pik espere oswa nòmal. Depanaj efikas nan pwoblèm sa yo kòmanse ak konesans nan fòm pik espere (ki baze sou teyori oswa eksperyans anvan ak metòd ki egziste deja), kidonk devyasyon soti nan atant sa yo se evidan. rezon ki fè mwen wè pi souvan yo.Konnen detay sa yo bay yon bon kote pou kòmanse depanaj, men li pa pran tout posiblite yo.Lektè ki enterese nan yon lis pi apwofondi nan kòz ak solisyon yo ka refere a LCGC "LC Troubleshooting Guide" tablo miray la.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" tablo miray.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ak Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.