Mèsi paske w vizite Nature.com.Vèsyon navigatè w ap itilize a gen sipò CSS limite.Pou pi bon eksperyans, nou rekòmande pou w sèvi ak yon navigatè ki ajou (oswa enfim mòd konpatibilite nan Internet Explorer).Antretan, pou asire sipò kontinye, nou pral rann sit la san estil ak JavaScript.
Fètilite zwazo depann de kapasite yo pou yo estoke ase espèm solid pou yon peryòd tan pwolonje nan tubul depo espèm yo (SST).Mekanis egzak kote espèmatozoy yo antre, abite nan, epi kite SST a rete kontwovèsyal.Espèm nan poul sharkasi te montre yon gwo tandans nan aglutinasyon, fòme pake filaman mobil ki gen anpil selil.Akòz difikilte pou obsève mobilite ak konpòtman espèmatozoy nan yon tib tronp opak, nou te itilize yon aparèy mikrofluidik ki gen yon koup transvèsal mikwochanèl ki sanble ak espèmatozoa pou etidye aglutinasyon ak mobilite espèmatozoy yo.Etid sa a diskite sou fason pakèt espèm fòme, ki jan yo deplase, ak wòl posib yo nan pwolonje rezidans espèm nan SST la.Nou te envestige vitès espèm ak konpòtman reolojik lè yo te pwodwi koule likid nan yon kanal mikrofluidik pa presyon idrostatik (pousantaj koule = 33 µm / s).Espèmatozoa yo gen tandans naje kont aktyèl la (reoloji pozitif) ak vitès la nan pake a espèmatozoyid yo siyifikativman redwi konpare ak espèmatozoa sèl.Yo te obsève pake espèm yo deplase nan yon espiral ak ogmante nan longè ak epesè kòm plis sèl espèm yo rekrite. Yo te obsève pakèt espèm ki apwoche ak konfòme yo ak flan yo nan chanèl mikrofluid yo pou evite ke yo te baleye ak vitès koule likid > 33 µm / s. Yo te obsève pakèt espèm ki apwoche ak konfòme yo ak flan yo nan chanèl mikrofluid yo pou evite ke yo te baleye ak vitès koule likid > 33 µm / s. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенюкам стенкам стенкам стенкам чтобы избежать сметания со скоростью потока жидкости> 33 мкм / с. Yo te obsève pake espèm yo apwoche ak konfòme yo ak miray ranpa yo nan chanèl mikrofluidik yo pou evite ke yo te baleye nan pousantaj koule likid > 33 µm / s.观察到精子束接近并粘附在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速> 33流速> 33 怉µ迫33 µm/s 扫过。 Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стендокрам стенокрам замечено чтобы избежать сметания потоком жидкости со скоростью > 33 мкм/с. Yo te obsève pake espèm yo apwoche ak konfòme yo ak miray ranpa yo nan kanal mikrofluidik la pou evite ke yo te baleye pa koule likid nan > 33 µm / s.Mikwoskòp elèktron analiz ak transmisyon te revele ke pakèt espèm yo te sipòte pa abondan materyèl dans.Done yo jwenn yo demontre mobilite inik nan espèmatozoid poul Sharkazi, osi byen ke kapasite nan espèmatozoyid yo aglutine ak fòme pake mobil, ki kontribye nan yon pi bon konpreyansyon sou depo a alontèm nan espèmatozoy nan SMT.
Pou reyalize fètilizasyon nan moun ak nan pifò bèt, espèm ak ze dwe rive nan sit la nan fètilizasyon nan bon moman.Se poutèt sa, kwazman dwe fèt anvan oswa nan moman ovilasyon an.Nan lòt men an, kèk mamifè, tankou chen, osi byen ke espès ki pa mamifè, tankou ensèk, pwason, reptil, ak zwazo, estoke espèm nan ògàn repwodiktif yo pou yon peryòd tan pwolonje jiskaske ze yo pare pou fètilizasyon (fertilizasyon asynchrone 1 ).Zwazo yo kapab kenbe rantabilite nan espèmatozoy ki kapab fekonde ze pou 2-10 semèn2.
Sa a se yon karakteristik inik ki fè distenksyon zwazo ak lòt bèt, paske li bay yon gwo pwobabilite pou fètilizasyon apre yon sèl fekondasyon pandan plizyè semèn san kwazman ak ovilasyon similtane.Prensipal ògàn depo espèm nan, ki rele tubul depo espèm (SST), sitiye nan ranpa mukozal entèn yo nan junction uterovaginal la.Jouk jounen jodi a, mekanis espèm antre, abite ak sòti nan bank espèm yo pa fin konprann.Baze sou etid anvan yo, anpil ipotèz yo te mete devan, men pa youn nan yo te konfime.
Forman4 ipotèz ke espèmatozoyid yo kenbe rezidans yo nan kavite SST a atravè mouvman osilatif kontinyèl kont direksyon koule likid nan chanèl pwoteyin ki sitiye sou selil epitelyal SST (reoloji).ATP ap diminye akòz aktivite flagelè konstan ki nesesè pou kenbe espèm lan nan lumèn SST a ak mobilite evantyèlman diminye jiskaske espèm yo te pote soti nan bank espèm nan pa koule likid epi kòmanse yon nouvo vwayaj desann tib tronp ki monte a fekonde espèm la.Ze (Forman4).Modèl sa a nan depo espèm sipòte pa deteksyon an pa imunositochimi nan akwaporin 2, 3 ak 9 prezan nan selil epitelyal SST.Pou dat, etid sou reoloji espèm poul ak wòl li nan depo SST, seleksyon espèm nan vajen, ak konpetisyon espèm yo manke.Nan poul, espèm antre nan vajen an apre kwazman natirèl, men plis pase 80% nan espèmatozoyid yo soti nan vajen an yon ti tan apre kwazman.Sa a sijere ke vajen an se sit prensipal pou seleksyon espèm nan zwazo.Anplis de sa, yo te rapòte ke mwens pase 1% nan espèmatozoyid fètilize nan vajen an fini nan SSTs2.Nan enseminasyon atifisyèl ti poul nan vajen an, kantite espèmatozoy ki rive nan SST gen tandans ogmante 24 èdtan apre enseminasyon.Se konsa, lwen, mekanis nan seleksyon espèm pandan pwosesis sa a pa klè, ak mobilite espèm ka jwe yon wòl enpòtan nan absòpsyon espèm SST.Akòz mi yo epè ak opak nan tib tronp yo, li difisil dirèkteman kontwole mobilite espèm nan tib tronp zwazo.Se poutèt sa, nou manke konesans debaz sou fason espèmatozoa tranzisyon nan SST apre fètilizasyon.
Reyoloji dènyèman te rekonèt kòm yon faktè enpòtan kontwole transpò espèm nan jenital mamifè yo.Baze sou kapasite espèmatozoyid mobil yo pou imigre kontrekouran, Zaferani et al8 te itilize yon sistèm mikwofluidik corra pou izole espèmatozoa mobil yo nan echantiyon espèm oswa dechaj yo.Kalite klasman espèm sa a esansyèl pou tretman sterilite medikal ak rechèch klinik, epi li pi pito pase metòd tradisyonèl ki gen tan ak travay entansif epi ki ka konpwomèt mòfoloji espèm ak entegrite estriktirèl.Sepandan, jiska dat, pa gen okenn etid yo te fèt sou efè a nan sekresyon nan ògàn yo jenital nan poul sou mobilite espèm.
Kèlkeswa mekanis ki kenbe espèm ki estoke nan SST a, anpil envestigatè te obsève ke espèmatozoyid rezidan yo aglutine tèt-a-tèt nan SST poul 9, 10, zòtolan 2, ak kodenn 11 pou fòme pakèt espèm aglutine.Otè yo sijere ke gen yon lyen ant aglutinasyon sa a ak depo alontèm nan espèmatozoyid nan SST la.
Tingari ak Lake12 rapòte yon gwo asosyasyon ant espèmatozoyid nan glann espèm-resevwa poul la epi yo te kesyone si espèmatozoyid avyè aglutine menm jan ak espèmatozoyid mamifè.Yo kwè ke koneksyon yo byen fon ant espèm nan vas deferens yo ka akòz estrès la ki te koze pa prezans nan yon gwo kantite espèm nan yon ti espas.
Lè w ap evalye konpòtman espèmatozoyid yo sou glisad vè fre pandye, yo ka wè siy pasajè aglutinasyon, espesyalman nan kwen ti gout espèm oswa dechaj yo.Sepandan, aglutinasyon te souvan detounen pa aksyon an wotasyon ki asosye ak mouvman kontinyèl, ki eksplike nati a pasajè nan fenomèn sa a.Chèchè yo te remake tou ke lè yo te ajoute dilyan nan espèm oswa dechaj la, granul selil ki long "tankou fil" parèt.
Premye tantativ pou imite yon espèmatozoyid yo te fè lè yo retire yon fil mens nan yon gout ki pandye, ki te lakòz yon vesik espèm ki long ki soti nan gout espèm nan.Espèmatozoa yo imedyatman aliyen nan yon mòd paralèl nan vesik la, men inite a tout antye te byen vit disparèt akòz limit 3D la.Se poutèt sa, pou etidye aglutinasyon espèmatozoyid, li nesesè yo obsève mobilite ak konpòtman espèmatozoyid dirèkteman nan tubul izole depo espèm, ki difisil pou reyalize.Se poutèt sa, li nesesè yo devlope yon enstriman ki imite espèmatozoyid pou sipòte etid sou mobilite espèm ak konpòtman aglutinasyon.Brillard et al13 rapòte ke longè mwayèn nan depo espèm nan ti poul granmoun se 400-600 µm, men kèk SST yo ka osi lontan ke 2000 µm.Mero ak Ogasawara14 divize glann seminifè yo an elaji ak ki pa elaji tib depo espèm, tou de nan yo te menm nan longè (~500 µm) ak lajè kou (~38 µm), men dyamèt lumèn an mwayèn nan tubul yo te 56.6 ak 56.6 µm.., respektivman 11.2 μm, respektivman.Nan etid aktyèl la, nou te itilize yon aparèy mikrofluidik ak yon gwosè chanèl 200 µm × 20 µm (W × H), ki gen koup transvèsal se yon ti jan pre sa yo ki anplifye SST la.Anplis de sa, nou te egzamine mobilite espèm ak konpòtman aglutinasyon nan likid k ap koule tankou dlo, ki konsistan avèk ipotèz Foreman a ke likid ki pwodui nan selil epitelyal SST kenbe espèm nan lumèn nan yon direksyon kont-kouran (reolojik).
Objektif etid sa a se te simonte pwoblèm yo nan obsève mobilite espèmatozoyid nan tib la tronp epi evite difikilte pou etidye reoloji ak konpòtman espèmatozoy nan yon anviwònman dinamik.Yo te itilize yon aparèy mikrofluidik ki kreye presyon idrostatik pou simulation mobilite espèm nan pati jenital yon poul.
Lè yo te chaje yon gout echantiyon espèm dilye (1:40) nan aparèy mikwochanèl la, yo ka idantifye de kalite mobilite espèm (espèm izole ak espèm mare).Anplis de sa, espèmatozoa yo te gen tandans naje kont kouran an (reoloji pozitif; videyo 1, 2). Malgre ke pakèt espèm yo te gen pi ba vitès pase sa yo ki nan lonesome espèm (p <0.001), yo ogmante pousantaj nan espèm ki montre reotaxis pozitif (p <0.001; Tablo 2). Malgre ke pakèt espèm yo te gen pi ba vitès pase sa yo ki nan lonesome espèm (p <0.001), yo ogmante pousantaj nan espèm ki montre reotaxis pozitif (p <0.001; Tablo 2). Хотя пучки сперматозоидов имели более низкую скорость, чем у одиночных сперматозоидов имели более низкую скорость, чем у одиночных сперматозох сперматозо1 (Хотя пучки) ли процент сперматозоидов, демонстрирующих положительный реотаксис (p < 0,001; таблица 2). Malgre ke pakèt espèmatozoyid yo te gen yon vitès pi ba pase sa yo ki nan espèmatozoyid sèl (p <0.001), yo ogmante pousantaj nan espèmatozoyid ki montre reotaxis pozitif (p <0.001; Tablo 2).尽管精子束的速度低于孤独精子的速度（p < 0.001），但它们增加了显示浾显示阁显示阁显的速度（p < 0.001），分比（p <0.001；表2）。尽管 精子束 的 速度 低于 孤独 的 速度 （p <0.001） ， 但 增加 了 显瀏 昳怏 昳怏 昳怏 昀分比 （p <0.001 ； 2。。。。。。））））） Хотя скорость пучков сперматозоидов была ниже, чем у одиночных сперматозоидов (p < 0,001 вола ниже), нт сперматозоидов с положительной реологией (p < 0,001; таблица 2). Malgre ke vitès pakèt espèm yo te pi ba pase espèmatozoa sèl (p <0.001), yo ogmante pousantaj espèmatozoyid ak reoloji pozitif (p <0.001; Tablo 2).Reoloji pozitif pou yon sèl espèmatozoy ak touf yo estime a apeprè 53% ak 85%, respektivman.
Li te obsève ke espèmatozoid yo nan poul sharkasi imedyatman apre ejakulasyon fòme pakèt lineyè, ki fòme ak plizyè douzèn moun.Touf sa yo ogmante nan longè ak epesè sou tan epi yo ka rete an vitro pandan plizyè èdtan anvan yo disparèt (videyo 3).Pakèt filaman sa yo gen fòm tankou espèmatozoy echidna ki fòme nan fen epididim la.Yo te jwenn espèm espèm poul Sharkashi yo gen yon gwo tandans pou aglutine epi fòme yon pake retikul nan mwens pase yon minit apre koleksyon.Travès sa yo dinamik epi yo kapab kole nan nenpòt mi ki tou pre oswa objè estatik.Malgre ke pakèt espèm diminye vitès selil espèm yo, li klè ke macroscopically yo ogmante linearité yo.Longè pakèt yo varye selon kantite espèm yo kolekte nan pakèt yo.De pati nan pake a te izole: pati inisyal la, ki gen ladan tèt la gratis nan espèm nan aglutine, ak pati nan tèminal, ki gen ladan ke a ak tout fen distal nan espèm nan.Lè l sèvi avèk yon kamera gwo vitès (950 fps), yo te obsève tèt gratis nan espèmatozoy agglutinated nan pati inisyal la nan pake a, ki responsab pou mouvman an nan pake a akòz mouvman osilatif yo, trennen sa yo ki rete nan pake a ak yon mouvman helical (Videyo 4).Sepandan, nan touf long, li te obsève ke kèk tèt espèm gratis respekte kò a ak pòsyon nan tèminal nan touf la aji kòm vanes pou ede pouse touf la.
Pandan ke yo nan yon koule dousman nan likid, pake espèm yo deplase paralèl youn ak lòt, sepandan, yo kòmanse sipèpoze ak bwa nan tout bagay ki toujou, se konsa yo pa dwe lave lwen pa koule aktyèl la kòm vitès la koule ogmante.Pakèt yo fòme lè yon ti ponyen selil espèm apwoche youn ak lòt, yo kòmanse deplase nan senkroni epi vlope youn ak lòt, epi answit kole ak yon sibstans kolan.Figi 1 ak 2 montre kouman espèm yo apwoche youn ak lòt, fòme yon junction kòm ke yo vlope youn ak lòt.
Chèchè yo te aplike presyon idrostatik pou kreye koule likid nan yon microchannel pou etidye reoloji espèm.Yo te itilize yon mikwochanèl ki gen yon gwosè 200 µm × 20 µm (W × H) ak yon longè 3.6 µm.Sèvi ak mikwochanèl ant resipyan yo ak sereng ki mete nan pwent yo.Yo te itilize koloran manje pou fè chanèl yo pi vizib.
Mare câbles entèkonekte ak Pwodwi pou Telefòn nan miray la.Yo te pran videyo a ak yon mikwoskòp kontras faz.Avèk chak imaj, yo prezante mikwoskopi kontras faz ak imaj kat.(A) Koneksyon ki genyen ant de kouran yo reziste koule akòz mouvman helical (flèch wouj).(B) Koneksyon ki genyen ant pake tib la ak miray kanal la (flèch wouj), an menm tan yo konekte ak de lòt pake (flèch jòn).(C) Pakèt espèm nan chanèl mikrofluidik la kòmanse konekte youn ak lòt (flèch wouj), fòme yon may nan pake espèm.(D) Fòmasyon yon rezo pakèt espèm.
Lè yo te chaje yon gout espèm dilye nan aparèy mikrofluidik la epi yo te kreye yon koule, yo te obsève gwo bout bwa espèm lan ap deplase kont direksyon koule a.Pakèt yo byen anfòm sou mi mikwochanèl yo, ak tèt yo gratis nan pati inisyal la nan pake yo byen anfòm kont yo (videyo 5).Yo menm tou yo kole ak nenpòt patikil estasyonè nan chemen yo, tankou debri, pou reziste ke yo te baleye pa kouran an.Apre yon sèten tan, touf sa yo vin tounen filaman long ki bloke lòt espèmatozoy sèl ak touf ki pi kout (Videyo 6).Kòm koule nan kòmanse ralanti, liy long nan espèm kòmanse fòme yon rezo liy espèm (Videyo 7; Figi 2).
Nan gwo vitès koule (V > 33 µm/s), mouvman espiral yo nan fil yo ogmante kòm yon tantativ pou trape anpil pakèt espèm endividyèl ki fòme pi byen reziste fòs la drifting nan koule a. Nan gwo vitès koule (V > 33 µm/s), mouvman espiral yo nan fil yo ogmante kòm yon tantativ pou trape anpil pakèt espèm endividyèl ki fòme pi byen reziste fòs la drifting nan koule a. При высокой скорости потока (V > 33 мкм/с) спиралевидные движения нитей усиливаются, постонь мкопы ножество отдельных сперматозоидов, образующих пучки, которые лучше противостоидов, образующих пучки, которые лучше противостоят дротивостоят дротивостоят дротивостоят дрелих. Nan gwo vitès koule (V > 33 µm/s), mouvman hélicoïdal brin yo ogmante pandan y ap eseye trape anpil espèmatozoid endividyèl ki fòme pakèt ki pi byen reziste fòs koule nan drifting.在高流速(V > 33 µm/s) 时，螺纹的螺旋运动增加，以试图捕捉许多形成捉许多形成束纹的螺旋运动增加，以试图捕捉许多形成束纹的螺束的廌成束的廌地抵抗流动的漂移力。在 高 流速 (v> 33 µm/s) 时 ， 的 螺旋 运动 增加 ， 以 试图 许多 形 成 束 形 成 束 厪 玪 ， 增加更 地 抵抗 的 漂移力。。。。。。。。。。 При высоких скоростях потока (V > 33 мкм/с) спиральное движение нитей увеличивается в потьньное движение нитей потока отдельных сперматозоидов, образующих пучки, чтобы лучше сопротивляться силам дрейтоки. Nan gwo vitès koule (V > 33 µm/s), mouvman hélicoïdal filaman yo ogmante nan yon tantativ pou kaptire anpil espèmatozoid endividyèl ki fòme pakèt pou pi byen reziste fòs flote koule a.Yo menm tou yo te eseye tache microchannels sou flan yo.
Pakèt espèm yo te idantifye kòm grap nan tèt espèm ak boukle ke lè l sèvi avèk mikwoskòp limyè (LM).Pakèt espèm ak divès kalite total yo te idantifye tou kòm tèt trese ak total flagellar, miltip ke espèm fusion, tèt espèm tache ak yon ke, ak tèt espèm ak nwayo koube kòm miltip nwayo fusion.mikwoskopi elektwonik transmisyon (TEM).Mikwoskòp elèktron (SEM) te montre ke pakèt espèm yo te anvlope total de tèt espèm ak total espèm yo te montre yon rezo tache nan ke vlope.
Mòfoloji a ak ultrastructure nan espèmatozoyid, fòmasyon nan pakèt espèmatozoyid yo te etidye lè l sèvi avèk mikwoskòp limyè (mwatye seksyon), mikwoskospi elektwonik optik (SEM) ak mikwoskospi elektwonik transmisyon (TEM), smears espèm yo te tache ak acridine zoranj ak egzamine lè l sèvi avèk mikwoskòp epifluorescence.
Espèm fwoti tach ak zoranj akridin (Fig. 3B) te montre ke tèt yo espèm yo te kole ansanm ak kouvri ak materyèl sekretè, ki te mennen nan fòmasyon nan gwo touf (Fig. 3D).Pakèt espèm yo konsiste de total espèm ak yon rezo ke tache (figi 4A-C).Pakèt espèm yo konpoze de ke anpil espèmatozoy ki kole ansanm (figi 4D).Sekrè (figi 4E,F) kouvri tèt pakèt espèmatozoy yo.
Fòmasyon pake a espèmatozoyid Lè l sèvi avèk mikwoskospi kontras faz ak fwoti espèm tache ak akridin zoranj, te montre ke tèt yo nan espèmatozoyid kole ansanm.(A) Fòmasyon touf espèm bonè kòmanse ak yon espèm (sèk blan) ak twa espèm (sèk jòn), ak espiral la kòmanse nan ke a epi fini nan tèt la.(B) Fotomikwograf yon froti espèm ki tache ak zoranj akridin ki montre tèt espèm ki aderan (flèch).Egzeyat la kouvri tèt la (yo).Agrandisman × 1000. (C) Devlopman yon gwo gwo bout bwa transpòte pa koule nan yon chanèl mikrofluidik (itilize yon kamera gwo vitès nan 950 fps).(D) Mikrograf yon froti espèm ki tache ak zoranj akridin ki montre gwo touf (flèch).Agrandisman: ×200.
Mikrograf elektwon nan yon gwo bout bwa espèm ak yon fwoti espèm ki tache ak zoranj akridin.(A, B, D, E) se mikwograf elektwonik koulè dijital nan espèmatozoyid, ak C ak F se mikwografi espèm akridin tache zoranj ki montre atachman nan plizyè espèmatozoy ki vlope rezo caudal la.(AC) Espèm total yo montre kòm yon rezo ki tache (flèch).(D) Adhesion nan plizyè espèmatozoyid (ak sibstans adezif, deskripsyon woz, flèch) vlope alantou ke a.(E ak F) Espèm tèt total (endikasyon) kouvri ak materyèl adezif (endikasyon).Espèmatozoa yo te fòme pakèt ak plizyè estrikti ki sanble ak toubiyon (F).(C) ×400 ak (F) ×200 agrandisman.
Sèvi ak mikwoskopi elektwonik transmisyon, nou te jwenn ke pakèt espèm te tache ke (Fig. 6A, C), tèt tache ak ke (Fig. 6B), oswa tèt tache ak ke (Fig. 6D).Tèt yo nan espèmatozoyid yo nan pake a yo koube, prezante nan seksyon de rejyon nikleyè (Fig. 6D).Nan pake a ensizyon, espèmatozoyid yo te gen yon tèt trese ak de rejyon nikleyè ak plizyè rejyon flagellar (figi 5A).
Mikrograf elektwonik koulè dijital ki montre ke yo konekte nan pake espèm la ak materyèl aglutinan ki konekte tèt espèm yo.(A) Tache ke yon gwo kantite espèmatozoyid.Remake kijan ke a parèt nan pwojeksyon pòtrè (flèch) ak jaden flè (flèch).(B) Tèt (flèch) espèm nan konekte ak ke (flèch).(C) Plizyè ke espèm (flèch) yo tache.(D) Materyèl aglutinasyon (AS, ble) konekte kat tèt espèm (koulè wouj violèt).
Yo te itilize mikwoskospi elektwonik pou detekte tèt espèm nan pake espèm ki kouvri ak sekresyon oswa manbràn (Figi 6B), ki endike ke pake espèm yo te ancrage pa materyèl ekstraselilè.Materyèl agglutinated la te konsantre nan tèt espèm (fosilize yo tankou tèt asanble; Fig. 5B) ak elaji distal, bay yon aparans jòn briyan anba mikwoskòp fluoresans lè tache ak zoranj akridin (Fig. 6C).Sibstans sa a vizib klèman anba yon mikwoskòp optik epi li konsidere kòm yon lyan.Seksyon semi-mens (figi 5C) ak frotis espèm tache ak zoranj akridin te montre pakèt espèm ki gen tèt chaje pete ak ke boukle (figi 5D).
Plizyè fotomikrograf ki montre totalman tèt espèm ak ke ki plwaye lè l sèvi avèk divès metòd.(A) Mikrograf elèktron transmisyon koulè dijital transvèsal yon pake espèm ki montre yon tèt espèm ki anwoule ak yon nwayo de pati (ble) ak plizyè pati flagelè (vèt).(B) Mikrograf elektwon digital scanning koulè ki montre yon gwoup tèt espèm ki sanble ak fosilize yo (flèch) ki sanble kouvri.(C) Seksyon semi-mens ki montre tèt espèm total (flèch) ak ke anroule (flèch).(D) Mikrograf yon fwoti espèm ki tache ak akridin zoranj ki montre total de tèt espèm (flèch) ak ke aderan anroule (flèch).Remake byen ke yon sibstans kolan (S) kouvri tèt la nan espèmatozoyid la.(D) × 1000 agrandisman.
Lè l sèvi avèk mikwoskospi elektwonik transmisyon (figi 7A), li te tou te note ke tèt yo espèm yo te trese ak nwayo yo te gen yon fòm espiral, jan sa konfime pa smears espèm tache ak zoranj akridin ak egzamine lè l sèvi avèk mikwoskòp fluoresans (figi 7B).
(A) Mikrograf elèktron transmisyon koulè dijital ak (B) Fwoti espèm akridin tache zoranj ki montre tèt bobin ak atachman tèt espèm ak ke (flèch).(B) × 1000 agrandisman.
Yon konklizyon enteresan se ke espèm Sharkazi a rasanble pou fòme pake mobil filaman.Pwopriyete yo nan pake sa yo pèmèt nou konprann wòl posib yo nan absòpsyon ak depo nan espèmatozoyid nan SST la.
Apre kwazman, espèm nan antre nan vajen an epi sibi yon pwosesis seleksyon entans, sa ki lakòz sèlman yon kantite limite nan espèm k ap antre nan SST15,16.Pou dat, mekanis yo pa ki espèm antre ak sòti SST a pa klè.Nan bèt volay, espèmatozoa yo estoke nan SST pou yon peryòd pwolonje 2 a 10 semèn, tou depann de espès yo6.Konfli rete sou kondisyon espèm nan pandan depo nan SST la.Èske yo an mouvman oswa nan repo?Nan lòt mo, ki jan selil espèm yo kenbe pozisyon yo nan SST a pou lontan?
Forman4 sijere ke rezidans SST ak ekspilsyon ta ka eksplike an tèm de mobilite espèm.Otè yo ipotèz ke espèm kenbe pozisyon yo nan naje kont koule nan likid ki te kreye pa epithelium SST la e ke espèm yo ekspilse nan SST a lè vitès yo tonbe pi ba pase pwen kote yo kòmanse deplase bak akòz mank enèji.Zaniboni5 konfime prezans akwaporin 2, 3, ak 9 nan pòsyon apical selil epitelyal SST yo, ki ka sipòte endirèkteman modèl depo espèm Foreman a.Nan etid aktyèl la, nou te jwenn ke prèske mwatye nan espèmatozoyid Sharkashi a montre reoloji pozitif nan likid la ap koule tankou dlo, e ke pakèt espèm agglutinated ogmante kantite espèmatozoyid ki montre reoloji pozitif, byenke aglutinasyon ralanti yo.Ki jan selil espèm yo vwayaje moute nan tib tronp zwazo a nan sit fètilizasyon an pa fin konprann.Nan mamifè, likid folikulèr chemoattracts spermatozoa.Sepandan, yo kwè kemoattractants dirije espèmatozoyid yo apwoche distans ki long7.Se poutèt sa, lòt mekanis yo responsab pou transpò espèm.Kapasite espèm yo oryante ak koule kont likid la tib tronp ki lage apre kwazman yo te rapòte yo se yon faktè enpòtan nan vize espèm nan sourit.Parker 17 sigjere ke espèmatozoa travèse oviduk yo lè yo naje kont kouran silyè nan zwazo ak reptil yo.Malgre ke li pa te demontre eksperimantal nan zwazo, Adolphi18 te premye moun ki jwenn ke espèm avyè bay rezilta pozitif lè yo kreye yon kouch mens likid ant yon kouvèti ak glise ak yon bann papye filtre.Reoloji.Hino ak Yanagimachi [19] te mete yon konplèks sourit ovè-tib-matris nan yon bag perfusion epi yo te enjekte 1 µl lank nan istm la pou wè koule likid nan tib tronp yo.Yo te remake yon mouvman trè aktif nan kontraksyon ak detant nan tib tronp lan, kote tout boul lank yo te piti piti deplase nan direksyon anpoul tib tronp lan.Otè yo mete aksan sou enpòtans ki genyen nan koule likid tubal soti nan pi ba a nan tib tronp anwo yo pou soulèvman espèm ak fètilizasyon.Brillard20 rapòte ke nan poul ak kodenn, espèmatozoa imigre pa mouvman aktif soti nan antre nan vajen, kote yo estoke, nan junction utero-vajen an, kote yo estoke.Sepandan, mouvman sa a pa obligatwa ant junction uterovaginal la ak enfundibulum paske espèmatozoa yo transpòte pa deplasman pasif.Konnen rekòmandasyon anvan sa yo ak rezilta yo te jwenn nan etid aktyèl la, li ka sipoze ke kapasite nan espèmatozoyid yo deplase en (reoloji) se youn nan pwopriyete yo sou ki pwosesis seleksyon an baze.Sa a detèminen pasaj espèmatozoa yo nan vajen an ak antre yo nan CCT pou depo.Kòm Forman4 sijere, sa ka tou fasilite pwosesis espèm antre nan SST a ak abita li yo pou yon peryòd de tan ak Lè sa a, sòti lè vitès yo kòmanse ralanti.
Nan lòt men an, Matsuzaki ak Sasanami 21 sijere ke espèmatozoy avyè sibi chanjman mobilite soti nan dòmi nan mobilite nan aparèy repwodiktif gason ak fi.Yo te pwopoze anpèchman nan mobilite espèm rezidan nan SST a pou eksplike tan an depo lontan nan espèm ak Lè sa a, rajenisman apre yo fin kite SST la.Anba kondisyon ipoksik, Matsuzaki et al.1 rapòte gwo pwodiksyon ak laktat nan SST a, ki ka mennen nan anpèchman mobilite espèm rezidan yo.Nan ka sa a, enpòtans rheology espèm yo reflete nan seleksyon an ak absòpsyon nan espèmatozoyid, epi yo pa nan depo yo.
Modèl aglutinasyon espèm yo konsidere kòm yon eksplikasyon plauzib pou peryòd depo long espèm nan SST a, kòm sa a se yon modèl komen nan retansyon espèm nan bèt volay2,22,23.Bakst et al.2 te obsève ke pifò espèmatozoyid yo respekte youn ak lòt, fòme total faskilè, ak yon sèl espèmatozoyid yo te raman jwenn nan CCM zòtolan.Nan lòt men an, Wen et al.24 obsève plis espèmatozoy yo gaye ak mwens touf espèmatozoy nan lumèn SST a nan poul.Dapre obsèvasyon sa yo, li ka sipoze ke tandans pou aglutinasyon espèm diferan ant zwazo ak ant espèmatozoy nan menm ejakulasyon an.Anplis de sa, Van Krey et al.9 sigjere ke dissociation o aza nan espèmatozoyid agglutinated ki responsab pou pénétration gradyèl nan espèmatozoyid nan lumèn nan tib tronp lan.Dapre ipotèz sa a, espèmatozoa ki gen pi ba kapasite aglutinasyon yo ta dwe ekspilse nan SST an premye.Nan kontèks sa a, kapasite espèmatozoyid yo pou aglutine ka yon faktè ki enfliyanse rezilta konpetisyon espèm nan zwazo sal.Anplis de sa, pi lontan espèm agglutine a dissociate, se fètilite a pi long konsève.
Malgre ke yo te obsève rasanbleman espèmatozoa ak agrégasyon an pakèt nan plizyè etid2,22,24, yo pa te dekri an detay akòz konpleksite obsèvasyon sinematik yo nan SST la.Yo te fè plizyè tantativ pou etidye aglutinasyon espèm nan vitro.Agrégation vaste men pasajè yo te obsève lè yo te retire fil mens la nan gout grenn ki pandye a.Sa a mennen nan lefèt ke yon ti wonn long soti nan gout la, imite glann nan seminal.Akòz limit 3D ak tan kout siye degoute, tout blòk la byen vit tonbe nan Delambre9.Nan etid aktyèl la, lè l sèvi avèk poul Sharkashi ak chip microfluidic, nou te kapab dekri ki jan touf sa yo fòme ak ki jan yo deplase.Pakèt espèm yo te fòme imedyatman apre koleksyon espèm oswa dechaj epi yo te jwenn deplase nan yon espiral, ki montre reoloji pozitif lè yo prezan nan koule a.Anplis de sa, lè yo wè makwoskopik, yo te obsève pakèt espèm yo ogmante linearite nan mobilite konpare ak espèmatozoy izole.Sa a sijere ke aglutinasyon espèm ka rive anvan pénétration SST e ke pwodiksyon espèm pa limite a yon ti zòn akòz estrès jan deja sijere (Tingari ak Lake12).Pandan fòmasyon touf, espèmatozoid yo naje nan senkronik jiskaske yo fòme yon junction, Lè sa a, ke yo vlope youn ak lòt epi tèt la nan espèmatozoyid la rete gratis, men ke a ak pati distal nan espèmatozoid la kole ansanm ak yon sibstans kolan.Se poutèt sa, tèt la gratis nan ligaman an ki responsab pou mouvman an, trennen rès la nan ligaman an.Mikwoskòp elèktron analiz nan pake espèm yo te montre tèt espèm tache ki kouvri ak yon anpil nan materyèl kolan, sijere ke tèt espèm yo te tache nan pake repoze, ki te ka rive apre yo te rive nan sit la depo (SST).
Lè yon frotis espèm tache ak akridin zoranj, materyèl adezif ekstraselilè alantou selil espèm yo ka wè anba yon mikwoskòp fliyoresan.Sibstans sa a pèmèt pake espèm yo konfòme yo ak rete kole sou nenpòt sifas ki antoure oswa patikil pou yo pa flote ak koule ki antoure a.Kidonk, obsèvasyon nou yo montre wòl adezyon espèmatozoyid yo nan fòm pakèt mobil yo.Kapasite yo pou naje kont kouran an epi kole ak sifas ki tou pre pèmèt espèm yo rete pi lontan nan SST la.
Rothschild25 te itilize yon kamera hemocytometry pou etidye distribisyon k ap flote nan espèm oswa dechaj bovin nan yon gout sispansyon, pran fotomikwograf atravè yon kamera ak aks optik vètikal ak orizontal nan mikwoskòp la.Rezilta yo te montre ke spermatozoa yo te atire nan sifas la nan chanm lan.Otè yo sijere ke ka gen entèraksyon idrodinamik ant espèm nan ak sifas la.Lè w pran sa a an kont, ansanm ak kapasite espèm espèm Sharkashi poul fòme touf kolan, li ka ogmante chans pou espèm oswa dechaj pral konfòme yo ak mi SST a epi yo dwe estoke pou peryòd tan ki long.
Bccetti ak Afzeliu26 rapòte ke glikokalis espèm yo mande pou rekonesans gamèt ak aglutinasyon.Forman10 te obsève ke idroliz nan lyezon α-glikozidik nan kouch glikoprotein-glikolipid nan trete espèm espèm avyè ak neuraminidase te lakòz fètilite redwi san yo pa afekte mobilite espèm.Otè yo sijere ke efè a nan neuraminidase sou glikokalis la afekte sequestration espèm nan junction utero-vajen an, kidonk diminye fètilite.Obsèvasyon yo pa ka inyore posibilite ke tretman neuraminidase ka diminye rekonesans espèm ak oosit.Forman ak Engel10 te jwenn ke fètilite te redwi lè poul yo te ensemine nan vajen ak espèm oswa dechaj trete ak neuraminidase.Sepandan, IVF ak espèm trete neuraminidaz pa te afekte fètilite konpare ak poul kontwole.Otè yo te konkli ke chanjman ki fèt nan kouch glikoprotein-glikolipid alantou manbràn espèm la redwi kapasite espèm yo fekonde lè yo afekte sekstrasyon espèm nan junction utero-vajen an, ki an vire ogmante pèt espèm akòz vitès junction utero-vajen an, men li pa afekte rekonesans espèm ak ze.
Nan kodenn Bakst ak Bauchan 11 te jwenn ti vesik ak fragman manbràn nan lumèn SST a epi yo te obsève ke kèk nan granules sa yo te fusion ak manbràn espèm la.Otè yo sijere ke relasyon sa yo ka kontribye nan depo alontèm nan espèmatozoyid nan SST.Sepandan, chèchè yo pa t presize sous patikil sa yo, kit yo sekrete pa selil epitelyal CCT, ki pwodui ak sekrete pa sistèm repwodiktif gason an, oswa ki pwodui pa espèm nan tèt li.Epitou, patikil sa yo responsab pou aglutinasyon.Grützner et al27 rapòte ke epididimal selil epitelyal pwodui ak sekrete yon pwoteyin espesifik ki nesesè pou fòmasyon nan yon sèl-pore seminal aparèy.Otè yo rapòte tou ke dispèsyon pakèt sa yo depann de entèraksyon pwoteyin epididimal yo.Nixon et al28 te jwenn ke adnexa a sekrete yon pwoteyin, osteonektin asid ki rich ak sistein;SPARC patisipe nan fòmasyon touf espèm nan echidnas kout bèk ak ornitorrink.Se gaye nan travès sa yo ki asosye ak pèt la nan pwoteyin sa a.
Nan etid aktyèl la, analiz ultrastructural lè l sèvi avèk mikwoskòp elèktron te montre ke espèmatozoyid yo respekte yon gwo kantite materyèl dans.Sibstans sa yo yo panse yo dwe responsab pou aglutinasyon ki kondanse ant ak alantou tèt yo aderan, men nan pi ba konsantrasyon nan rejyon an ke.Nou sipoze ke sibstans aglutinan sa a elimine nan sistèm repwodiktif gason an (epididim oswa vas deferens) ansanm ak espèm oswa dechaj, paske nou souvan obsève espèm oswa dechaj separe ak plasma lenfatik ak seminal pandan ejakulasyon.Yo te rapòte ke kòm espèmatozoid avyè yo pase nan epididim yo ak vas deferens yo, yo sibi chanjman ki gen rapò ak spirasyon ki sipòte kapasite yo nan mare pwoteyin ak jwenn glikoprotein plasma lem ki asosye.Pèsistans pwoteyin sa yo sou manbràn espèm rezidan nan SST a sijere ke pwoteyin sa yo ka enfliyanse akizisyon estabilite manbràn espèm 30 epi detèmine fètilite yo 31 .Ahammad et al32 rapòte ke espèmatozoyid yo te jwenn nan divès pati nan sistèm repwodiktif gason an (soti nan tèstikul yo rive nan vas deferens distal yo) te montre yon ogmantasyon pwogresif nan viabilite nan kondisyon depo likid, kèlkeswa tanperati depo, ak viabilite nan poul ogmante tou nan tib yo tronp apre fenomèn atifisyèl.
Touf espèm poul Sharkashi gen diferan karakteristik ak fonksyon pase lòt espès tankou echidnas, ornitorin, sourit bwa, rat sèf, ak kochon Gine.Nan poul sharkasi, fòmasyon nan pake espèmatozoyid redwi vitès naje yo konpare ak espèmatozoa sèl.Sepandan, pakèt sa yo te ogmante pousantaj espèmatozoa reolojikman pozitif ak ogmante kapasite espèmatozoa yo estabilize tèt yo nan yon anviwònman dinamik.Kidonk, rezilta nou yo konfime sijesyon anvan an ke aglutinasyon espèm nan SST asosye ak depo espèm alontèm.Nou menm tou nou ipotèz ke tandans nan espèm yo fòme touf ka kontwole pousantaj la nan pèt espèm nan SST, ki ka chanje rezilta a nan konpetisyon espèm.Dapre sipozisyon sa a, espèmatozoa ki gen kapasite aglutinasyon ki ba lage SST an premye, pandan y ap espèmatozoa ki gen gwo kapasite aglutinasyon pwodui pi fò nan pitit pitit yo.Fòmasyon nan pake espèm yon sèl-por se benefisye epi li afekte rapò paran-pitit la, men li sèvi ak yon mekanis diferan.Nan echidnas ak ornitorrink, espèmatozoa yo ranje paralèl youn ak lòt pou ogmante vitès la devan gwo bout bwa a.Pakèt echidnas deplase apeprè twa fwa pi vit pase yon sèl espèmatozoy.Yo kwè ke fòmasyon nan touf espèm sa yo nan echidnas se yon adaptasyon evolisyonè pou kenbe dominasyon, depi fi yo pwomèt epi anjeneral marye ak plizyè gason.Se poutèt sa, espèmatozoyid ki soti nan diferan ejakulasyon konpetisyon feròs pou fètilizasyon ze a.
Agglutinated espèmatozoyis nan poul sharkasi yo fasil pou vizyalize lè l sèvi avèk mikwoskospi kontras faz, ki konsidere kòm avantaje paske li pèmèt etid fasil nan konpòtman an nan espèmatozoyid nan vitro.Mekanis nan ki fòmasyon touf espèm ankouraje repwodiksyon nan poul sharkasi tou diferan de sa yo wè nan kèk mamifè plasenta ki reprezante konpòtman espèm koperativ tankou sourit bwa, kote kèk espèmatozoyid rive nan ze yo, ede lòt moun ki gen rapò rive ak domaje ze yo.pou pwouve tèt ou.konpòtman altryèl.Fòmasyon pwòp tèt ou 34. Yo te jwenn yon lòt egzanp konpòtman koperativ nan espèmatozoyid nan sourit sèf, kote espèmatozoyid yo te kapab idantifye ak konbine avèk espèmatozoyid ki gen plis relasyon jenetik yo epi fòme gwoup koperativ pou ogmante vitès yo konpare ak espèmatozoy ki pa gen rapò35.
Rezilta yo jwenn nan etid sa a pa kontredi teyori Foman nan depo alontèm nan espèmatozoyid nan SWS.Chèchè yo rapòte ke selil espèm yo kontinye deplase nan koule nan selil epitelyal ki kouvri SST a pou yon peryòd tan pwolonje, epi apre yon sèten peryòd tan, magazen enèji nan selil espèm yo apovri, sa ki lakòz yon diminisyon nan vitès, ki pèmèt ekspilsyon an nan ti sibstans ki sou pwa molekilè.enèji nan espèmatozoy ak koule nan likid ki soti nan lumèn SST la Kavite nan tib tronp lan.Nan etid aktyèl la, nou te obsève ke mwatye nan espèm nan sèl te montre kapasite nan naje kont likid ap koule tankou dlo, ak adezyon yo nan pake a ogmante kapasite yo nan montre reoloji pozitif.Anplis de sa, done nou yo ki konsistan avèk sa yo ki nan Matsuzaki et al.1 ki rapòte ke ogmante sekresyon laktat nan SST ka anpeche mobilite espèm rezidan yo.Sepandan, rezilta nou yo dekri fòmasyon ligaman mobil espèm ak konpòtman reolojik yo nan prezans yon anviwònman dinamik nan yon mikwochanèl nan yon tantativ pou elicide konpòtman yo nan SST.Rechèch nan lavni ka konsantre sou detèmine konpozisyon chimik ak orijin ajan aglutinan an, ki pral san dout ede chèchè yo devlope nouvo fason pou estoke espèm espèm oswa dechaj likid ak ogmante dire fètilite a.
Yo te chwazi kenz sharkasi gason ki gen 30 semèn (omozigot dominan; Na Na) kòm donatè espèm nan etid la.Zwazo yo te elve nan Farm Poultry Research nan Fakilte Agrikilti, Ashit University, Ashit Governorate, peyi Lejip.Zwazo yo te loje nan kaj endividyèl (30 x 40 x 40 cm), sibi yon pwogram limyè (16 èdtan nan limyè ak 8 èdtan nan fènwa) epi yo te manje yon rejim alimantè ki gen 160 g nan pwoteyin brit, 2800 kcal nan enèji metabolizable, 35 g nan kalsyòm chak.5 gram fosfò disponib pou chak kilogram nan rejim alimantè.
Dapre done 36, ​​37, yo te kolekte espèm nan men gason pa masaj nan vant.Yo te kolekte yon total de 45 echantiyon espèm nan men 15 gason sou 3 jou.Semen (n = 15 / jou) te imedyatman dilye 1:1 (v:v) ak Belsville Poultry Semen Diluent, ki gen potasyòm difosfat (1.27 g), monosodyòm glutamate monoidrat (0.867 g), fruktoz (0.5 d) sodyòm anidrid.acetate (0.43 g), tris (hydroxymethyl) aminomethane (0.195 g), potasyòm sitrat monoidrat (0.064 g), potasyòm monofosfat (0.065 g), klori mayezyòm (0.034 g) ak H2O (100 ml), pH = 7, 5, osmolarite osmolarite / m3338m3.Echantiyon espèm oswa dechaj dilye yo te premye egzamine anba yon mikwoskòp limyè pou asire bon kalite espèm oswa dechaj (imidite) epi answit estoke nan yon beny dlo nan 37 ° C jiskaske yo itilize nan yon demi èdtan apre koleksyon.
Yo dekri sinematik ak reoloji espèmatozoy yo lè l sèvi avèk yon sistèm aparèy mikrofluidik.Echantiyon espèm oswa dechaj yo te dilye plis nan 1:40 nan Beltsville Avian Semen Diluent, chaje nan yon aparèy mikrofluidik (gade anba a), ak paramèt sinetik yo te detèmine lè l sèvi avèk yon sistèm analiz enfòmatik (CASA) deja devlope pou karakterizasyon mikrofluidik.sou mobilite nan espèmatozoyid nan medya likid (Depatman Jeni Mekanik, Fakilte Jeni, Inivèsite Assiut, peyi Lejip).Ou ka telechaje Plugin la nan: http://www.assiutmicrofluidics.com/research/casa39.Vitès koub (VCL, μm / s), vitès lineyè (VSL, μm / s) ak vitès trajectoire mwayèn (VAP, μm / s) yo te mezire.Videyo espèmatozoyid yo te pran lè l sèvi avèk yon mikwoskòp kontras faz Optika XDS-3 (ak objektif 40x) konekte ak yon kamera Tucson ISH1000 nan 30 fps pou 3 s.Sèvi ak lojisyèl CASA pou etidye omwen twa zòn ak 500 trajectoire espèm pou chak echantiyon.Yo te trete videyo ki anrejistre a lè l sèvi avèk yon CASA endijèn.Definisyon motilite nan CASA plug-in a baze sou vitès naje espèm yo konpare ak to koule a, epi li pa gen ladan lòt paramèt tankou mouvman kòt a kòt, kòm sa a yo te jwenn yo dwe plis serye nan koule likid.Mouvman reolojik yo dekri kòm mouvman selil espèm yo kont direksyon koule likid.Espèmatozoa ki gen pwopriyete reolojik yo te divize pa kantite espèmatozoa mobil;espèmatozoa ki te an repo ak espèmatozoy ki deplase konvèktiv yo te eskli nan konte a.
Tout pwodwi chimik yo te itilize yo te jwenn nan Elgomhoria Pharmaceuticals (Cairo, peyi Lejip) sof si otreman te note.Aparèy la te fabrike jan sa dekri pa El-sherry et al.40 ak kèk modifikasyon.Materyèl yo itilize pou fabrike microchannels yo enkli plak an vè (Howard Glass, Worcester, MA), SU-8-25 rezistans negatif (MicroChem, Newton, CA), alkòl dyacetone (Sigma Aldrich, Steinheim, Almay), ak polyacetone.-184, Dow Corning, Midland, Michigan).Mikrochanèl yo fabrike lè l sèvi avèk litografi mou.Premyèman, yo te enprime yon mask pwoteksyon klè ak konsepsyon mikwochanèl vle sou yon enprimant rezolisyon segondè (Prismatic, Cairo, peyi Lejip ak Pacific Arts and Design, Markham, ON).Mèt yo te fè lè l sèvi avèk plak an vè kòm substra.Plak yo te netwaye nan asetòn, izopropanol ak dlo deyonize epi yo te kouvri ak yon kouch 20 µm nan SU8-25 pa vire kouch (3000 rpm, 1 min).Lè sa a, kouch SU-8 yo te cheche dousman (65 ° C, 2 min ak 95 ° C, 10 min) epi yo te ekspoze a radyasyon UV pou 50 s.Post-ekspozisyon kwit nan 65 ° C ak 95 ° C pou 1 min ak 4 min pou retiye kouch SU-8 ekspoze, ki te swiv pa devlopman nan alkòl dyacetòn pou 6.5 min.Difisil kwit gofr yo (200 ° C pou 15 min) pou solidifye kouch SU-8 la.
PDMS te prepare pa melanje monomè a ak rèd nan yon rapò pwa nan 10: 1, Lè sa a, degaze nan yon desiccator vakyòm epi vide sou ankadreman prensipal SU-8.PDMS a te geri nan yon fou (120 ° C, 30 min), Lè sa a, chanèl yo te koupe soti, separe de mèt la, ak detache pou pèmèt tib yo dwe tache nan inlet la ak priz microchannel la.Finalman, microchannels PDMS yo te atache nèt ale nan glisad mikwoskòp lè l sèvi avèk yon processeur corona pòtab (Electro-Technic Products, Chicago, IL) jan sa dekri yon lòt kote.Mikwochanèl yo itilize nan etid sa a mezire 200 µm × 20 µm (W × H) epi li se 3.6 cm nan longè.
Koule likid ki te pwovoke pa presyon idrostatik andedan microchannel la reyalize pa kenbe nivo likid la nan rezèvwa inlet la pi wo pase diferans nan wotè Δh39 nan rezèvwa priz la (figi 1).
kote f se koyefisyan friksyon, defini kòm f = C/Re pou koule laminè nan yon kanal rektangilè, kote C se yon konstan ki depann de rapò aspè nan kanal la, L se longè mikwo-channel la, Vav se vitès an mwayèn andedan mikwo-channel la, Dh se dyamèt idwolik kanal la, g - akselerasyon gravite.Sèvi ak ekwasyon sa a, vitès mwayèn kanal la ka kalkile lè l sèvi avèk ekwasyon sa a: