Mèsi paske ou te vizite Nature.com. Vèsyon navigatè w ap itilize a gen yon sipò CSS limite. Pou pi bon eksperyans lan, nou rekòmande pou w itilize yon navigatè ki ajou (oswa dezaktive Mòd Konpatibilite nan Internet Explorer). Antretan, pou asire sipò kontinyèl, nou pral rann sit la san estil ak JavaScript.
Lupin Angustifolius (NLL, Lupinus angustifolius L.) se yon plant legim ki itilize pou pwodiksyon manje ak amelyorasyon tè. Ekspansyon mondyal NLL kòm yon rekòt atire anpil chanpiyon patojèn, tankou antraknoz lupin, ki lakòz maladi antraknoz devastatè a. De alèl, Lanr1 ak AnMan, ki konfere yon rezistans ogmante, yo te itilize nan elvaj NLL, men mekanis molekilè fondamantal yo rete enkoni. Nan etid sa a, makè Lanr1 ak AnMan yo te itilize pou tès echantiyon NLL Ewopeyen yo. Tès vaksen an nan yon anviwònman kontwole te konfime efikasite tou de donatè rezistan yo. Pwofilaj ekspresyon jèn diferansyèl te fèt sou liy rezistan ak sansib reprezantatif. Rezistans antraknoz te asosye avèk surekspresyon tèm ontoloji jèn "GO:0006952 Defense Response", "GO:0055114 Redox Process", ak "GO:0015979 Photosenthesis". Anplis de sa, liy Lanr1(83A:476) la te montre yon reprogramasyon transkriptòm siyifikatif rapidman apre inokilasyon an, alòske lòt liy yo te montre yon reta nan repons sa a apeprè 42 èdtan. Repons defans yo asosye avèk jèn TIR-NBS, CC-NBS-LRR ak NBS-LRR yo, 10 pwoteyin ki enplike nan patogenez, pwoteyin transfè lipid, andoglucan-1,3-β-glukozidaz, pwoteyin miray selilè ki rich an glisin, ak jèn ki soti nan chemen reyaktif oksijèn nan. Repons bonè a 83A:476, ki gen ladan sipresyon atansyon jèn ki asosye avèk fotosentèz, te koresponn ak yon pwoteksyon siksè pandan faz kwasans vejetatif byoloji chanpiyon an, ki sijere ke yon efèktè deklanche iminite. Reyaksyon Mandeloop la ralanti, menm jan ak rezistans orizontal jeneral la.
Lupin ki gen fèy etwat la (NLL, Lupinus angustifolius L.) se yon sereyal ki gen anpil pwoteyin ki soti nan rejyon lwès Mediterane a1,2. Kounye a, yo kiltive l kòm yon rekòt manje pou bèt ak moun. Yo konsidere l tou kòm fimye vèt nan sistèm wotasyon rekòt yo akòz fiksasyon azòt pa bakteri senbyotik ki fikse azòt ak amelyorasyon jeneral estrikti tè a. NLL te sibi yon pwosesis rapid domestikasyon nan dènye syèk la epi li toujou anba gwo presyon elvaj3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Avèk kiltivasyon NLL la toupatou, siksesyon chanpiyon patojèn yo te devlope nouvo nich agrikòl epi li te lakòz nouvo maladi ki detwi rekòt yo. Sa ki te pi remakab pou kiltivatè ak elvaj lupin yo se te aparisyon antraknoz, ki te koze pa chanpiyon patojèn nan, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Sa ki te pi remakab pou kiltivatè ak elvaj lupin yo se te aparisyon antraknoz, ki te koze pa chanpiyon patojèn nan, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракнозав, патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Sa ki te pi remakab pou kiltivatè ak elvaj lupin yo se te aparisyon antraknoz ki te koze pa chanpiyon patojèn Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是现，它是现它是由眗腟真腏目的是炭疽病的出现Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 引起的。对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是现它是玟眗Colleto 眀豆目的是炭疽病的出现(Bondar)嵵Haired。1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракнозозакнозозонеров патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Sa ki pi frapan pou kiltivatè ak elvaj lupin yo se aparisyon antraknoz ki koze pa chanpiyon patojèn Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Premye rapò sou maladi a te soti Brezil ak Etazini, ak sentòm tipik ki te parèt an 1912 ak 1929 respektivman. Sepandan, apre anviwon 30 ane, yo te deziyen patojèn nan kòm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomòf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomòf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomòf nan Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld nan Mòfoloji Sible. & H. Schrenk,. ak H. Schrenk,.ak H. Schrenk. & H.施伦克，。 & H.施伦克，。ak H. Schlenk,.Fenotipaj preliminè maladi a ki te fèt nan mitan 20yèm syèk la te montre kèk rezistans nan plant NLL ak lupin jòn (L. luteus L.), men tout plant lupin blan (L. albus L.) yo te teste yo te trè sansib15,16. Etid yo montre ke devlopman antraknoz asosye avèk ogmantasyon presipitasyon (imidite lè a) ak tanperati (nan seri 12-28°C), sa ki mennen nan yon vyolasyon rezistans nan tanperati ki pi wo17, 18. Anfèt, tan ki nesesè pou konidi yo jèmen epi maladi a kòmanse te kat fwa pi kout a 24°C (4 èdtan) pase a 12°C (16 èdtan) nan kondisyon imidite ki wo19. Kidonk, rechofman planèt la ki kontinye a mennen nan pwopagasyon antraknoz. Sepandan, yo te obsève maladi a an Frans (1982) ak Ikrèn (1983) kòm yon anonse yon menas iminan, men aparamman endistri lupin nan te inyore l nan moman sa a20,21. Kèk ane apre, maladi devastatè sa a te gaye toupatou nan mond lan epi li te afekte tou gwo peyi ki pwodui lupin tankou Ostrali, Polòy ak Almay22,23,24. Apre yon epidemi antrasknòz nan mitan ane 1990 yo, yon tès depistaj apwofondi te pèmèt idantifye plizyè donatè rezistan nan echantiyon NLL19 yo. Rezistans NLL a antrasknòz kontwole pa de alèl dominan separe yo jwenn nan diferan sous jèmoplasm: Lanr1 nan kiltivatè Tanjil ak Wonga epi AnMan nan kiltivatè Mandalay 25, 26. Alèl sa yo konplete makè molekilè ki sipòte seleksyon jèmoplasm rezistan nan pwogram elvaj 25,26,27,28,29,30. Liy elvaj rezistan 83A:476 ki pote alèl Lanr1 la te kwaze ak liy sovaj sansib P27255 la pou jwenn yon popilasyon RIL ki separe pou rezistans antraknoz, sa ki te pèmèt pou asiyen locus Lanr1 la nan kwomozòm NLL-1131, 32, 33. Aliyman makè kat lyezon yo soti nan locus rezistans flanke yo rive nan antraknoz ak yon kad jenomik, NLL te revele kote tout twa alèl yo sou menm kwomozòm nan (NLL-11), men nan diferan pozisyon29,34,35. Sepandan, akòz ti kantite RIL yo ak gwo distans jenetik ki genyen ant makè yo ak alèl korespondan yo, pa gen okenn konklizyon serye ki ka tire sou jèn fondamantal yo. Nan lòt men an, itilizasyon jenetik envès nan lupin difisil akòz potansyèl rejenerasyon yo ki trè ba, sa ki fè manipilasyon jenetik la ankonbran37.
Devlopman jèmoplasm domestike ki pote alèl vle a nan eta omozigòt la, tankou 83A:476 (Lanr1) ak Mandelup (AnMan), louvri pòt pou etidye rezistans antraknòz fas a prezans konbinezon alèl opoze nan popilasyon sovaj yo. Posiblite mekanis molekilè yo. Konpare repons defans ki pwodui pa jenotip espesifik yo. Etid sa a evalye repons transkriptòm bonè NLL a vaksinasyon C. lupini. Premyèman, yo te tès depistaj yon panèl jèmoplasm NLL Ewopeyen ki gen 215 liy lè l sèvi avèk makè molekilè ki make alèl Lanr1 ak AnMan yo. Apre sa, yo te fè fenotipaj antraknòz sou 50 liy NLL, ki te deja chwazi pou makè molekilè, anba kondisyon kontwole. Baze sou eksperyans sa yo, yo te chwazi kat liy ki diferan nan rezistans antraknòz ak konpozisyon alelik Lanr1/AnMan pou pwofilaj ekspresyon jèn defans diferansyèl lè l sèvi avèk de apwòch konplemantè: sekans ARN wo-debi ak kantifikasyon PCR an tan reyèl.
Tès depistaj yon seri jèmoplasm NLL (N = 215) ak makè Lanr1 (Anseq3 ak Anseq4) ak AnMan (Anseq4) ak AnMan (AnManM1) te montre ke se yon sèl liy (95726, toupre Salamanca-b) ki anplifye alèl "rezistans" la pou tout makè yo, alòske "Prezans alèl 'sansib'" te jwenn pwopòsyon tout makè yo nan 158 (~73.5%) liy. Trèz liy te pwodui de alèl "rezistan" nan makè Lanr1 la, epi 8 liy te pwodui alèl "rezistan" nan makè Lanr1. Alèl "rezistans" nan makè AnMan an (Tablo Siplemantè S1). De liy te etewozigòt pou makè Anseq3 la ak yon etewozigòt pou makè AnManM1 la. 42 liy (19.5%) te pote faz opoze nan alèl Anseq3 ak Anseq4 yo, sa ki endike yon gwo frekans rekombinasyon ant de lokus sa yo. Fenotip antraknoz anba kondisyon kontwole (Tablo Siplemantè S2) te revele varyabilite nan rezistans jenotip teste yo, sa ki te reflete nan gravite antraknoz la. Diferans nan nòt mwayèn yo te varye ant 1.8 (modere rezistan) a 6.9 (sansib) epi diferans nan pwa plant yo te varye ant 0.62 (sansib) a 4.45 g (rezistan). Te gen yon korelasyon siyifikatif ant valè yo obsève nan de replikasyon eksperyans lan (0.51 pou nòt gravite maladi a, P = 0.00017 ak 0.61 pou pwa plant lan, P < 0.0001) ansanm ak ant de paramèt sa yo (− 0.59 ak - 0.77, P < 0.0001). Te gen yon korelasyon siyifikatif ant valè yo obsève nan de replikasyon eksperyans lan (0.51 pou nòt gravite maladi a, P = 0.00017 ak 0.61 pou pwa plant lan, P < 0.0001) ansanm ak ant de paramèt sa yo (- 0.59 ak - 0.77, P < 0.0001). Выявлена ​​​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностяция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностяция э0,стентер баллов тяжести болезни, P = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между между эвтамимтра (-0,59 è -0,77, Р <0,0001) 0,0001). Yo te jwenn yon korelasyon siyifikatif ant valè yo obsève nan de repetisyon eksperyans lan (0.51 pou nòt gravite maladi a, P = 0.00017 ak 0.61 pou pwa plant lan, P < 0.0001), ansanm ak ant de paramèt sa yo (-0.59 ak -0.77, P < 0.0001) 0.0001).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分1︺0.51为0. 0.00017，植物重量为0.61，P <0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，P < 0.0001)在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 诸 度 诸分为 0.51 ， p = 0.00017 ， 植物 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之（ （ 9.–5. 0.59 和– 0.59 和– 0.59 和- 0.77，P <0.0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух потццонками ( тяжести заболевания 0,51, P = 0,00017 и масса растения 0,61, P <0,0001), и между этими двуми двумя пара5ми -0,0001) 0,77, P <0,0001. Te gen yon korelasyon siyifikatif ant valè yo obsève an doub (nòt gravite maladi a 0.51, P = 0.00017 ak pwa plant lan 0.61, P < 0.0001) epi ant de paramèt sa yo (-0.59 ak -0.0001) 0.77, P < 0.0001. ).Sentòm tipik yo wè nan plant ki sansib yo enkli pli ak tòsyon tij la ki sanble ak yon estrikti "banza bèje", ki te swiv pa lezyon oval ak sporozoit zoranj/woz (Fig. Siplemantè 1). Aksyasyon Ostralyen ki pote jèn Lanr1 (83A:476 ak Tanjil) ak AnMan (Mandelup) yo modera rezistan, 0.0331 ak 0.0036). Gen kèk liy ki pote tou alèl Lanr1 ak/oswa AnMan "rezistan" ki montre sentòm maladi a.
Sa ki enteresan, kèk liy NLL ki pa gen okenn alèl makè "rezistan" te revele yon wo nivo rezistans antraknòz (konparab oswa pi wo pase pou jenotip Lanr1 oswa AnMan), tankou Boregine (valè P < 0.0001 pou tou de paramèt yo), Bojar (valè P < 0.0001 pou nòt ak 0.001 pou pwa plant) ak Popilasyon B-549/79b (valè P < 0.0001 pou nòt ak pa siyifikatif pou pwa). Sa ki enteresan, kèk liy NLL ki pa gen okenn alèl makè "rezistan" te revele yon wo nivo rezistans antraknòz (konparab oswa pi wo pase pou jenotip Lanr1 oswa AnMan), tankou Boregine (valè P < 0.0001 pou tou de paramèt yo), Bojar (valè P < 0.0001 pou nòt ak 0.001 pou pwa plant) ak Popilasyon B-549/79b (valè P < 0.0001 pou nòt ak pa siyifikatif pou pwa). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллокави золокави,солесно уровень устойчивости к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 илаи или более высокий) (значение P <0,0001 для обоих параметров), Bojar (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Sa ki enteresan, plizyè liy NLL ki pa gen okenn alèl makè 'rezistan' te montre yon wo nivo rezistans a antraknoz (konparab ak oswa pi wo pase pou jenotip Lanr1 oswa AnMan), tankou Boregine (valè P < 0.0001 pou tou de paramèt yo), Bojar (valè P < 0.0001 pou evalyasyon ak 0.001 pou pwa plant) ak popilasyon B-549/79b (valè P < 0.0001 pou evalyasyon ak 0.001 pou pwa).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭水平的炭水平的炭等位基因的NLL或AnMan 基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重显一量一量一 Li enteresan pou wè kèk sistèm NLL ki pa gen okenn makè "antijenik" montre yon gwo rezistans orizontal (ekivalan a jèn Lanr1 oswa AnMan oswa pi wo), tankou Boregine (tou de paramèt yo P < 0.0001), Bojar (valè P < 0.0001, pwa plant 0.001) ak souch B-549/79b (valè P < 0.0001, pwa pa siyifikatif). Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», споликава уровни устойчивости к антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие каник Pérégine (Сравнимые или выше) обоих параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,0001, масса растения 0,001) ak популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). Sa ki enteresan, kèk liy NLL ki pa gen okenn alèl makè 'rezistans' te montre nivo rezistans antraknòz ki wo (konparab ak oswa pi wo pase jenotip Lanr1 oswa AnMan), tankou Boregine (valè P pou tou de paramèt yo <0.0001), Bojar (valè P < 0.0001, pwa plant 0.001) ak popilasyon B-549/79b (valè P < 0.0001, pwa pa siyifikatif).Fenomèn sa a sijere posibilite pou yon nouvo sous rezistans jenetik, sa ki eksplike mank korelasyon ki obsève ant jenotip makè yo ak fenotip maladi yo (valè P soti nan ~0.42 rive nan ~0.98). Kidonk, tès Kolmogorov-Smirnov la te montre ke done sou rezistans antraknoz yo te apeprè nòmalman distribye pou nòt yo (valè P 0.25 ak 0.11) ak mas plant lan (valè P 0.47 ak 0.55), sa ki sijere ke mwen fè ipotèz ke plis alèl pase Lanr1 ak AnMan enplike.
Baze sou rezilta tès depistaj rezistans antraknòz la, yo te chwazi 4 liy pou analiz transkriptòm: 83A:476, Boregine, Mandelup, ak Popilasyon 22660. Yo te teste liy sa yo ankò pou rezistans antraks nan eksperyans inokilasyon pa sekans ARN, depi yo te menm jan ak nan tès anvan an. Valè nòt yo te jan sa a: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) ak popilasyon 22660 (6.11 ± 1.29).
Pwotokòl Illumina NovaSeq 6000 la te rive jwenn yon mwayèn 40.5 pè Mread pa echantiyon (29.7 a 54.4 Mread) (Tablo Siplemantè S3). Nòt aliyman nan sekans referans lan te varye ant 75.5% ak 88.6%. Korelasyon mwayèn done kontaj lekti ant varyant eksperimantal ant replikasyon byolojik yo te varye ant 0.812 ak 0.997 (mwayèn 0.959). Sou 35,170 jèn yo te analize yo, 2917 pa t revele okenn ekspresyon, epi 4785 lòt jèn yo te eksprime nan yon nivo neglijab (mwayèn debaz < 5). Sou 35,170 jèn yo te analize yo, 2917 pa t revele okenn ekspresyon, epi 4785 lòt jèn yo te eksprime nan yon nivo neglijab (mwayèn debaz < 5). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов проявляли экспрессии незначительном уровне (базовое среднее <5). Sou 35,170 jèn yo te analize yo, 2917 pa t montre okenn ekspresyon, epi 4785 jèn ki rete yo te eksprime nan yon nivo neglijab (mwayèn debaz <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（基本平均值<5）。35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 геннов имелись экспрессию (базовое среднее значение <5). Sou 35,170 jèn yo te analize yo, 2917 pa t eksprese epi 4785 jèn ki rete yo te gen yon ekspresyon neglijab (mwayèn debaz <5).Kidonk, kantite jèn yo konsidere kòm eksprime (mwayèn debaz ≥ 5) pandan eksperyans lan te 27,468 (78.1%) (Tablo Siplemantè S4).
Depi premye pwen tan an, tout liy NLL yo te reponn a inokilasyon C. lupini (souch Col-08) la lè yo te repwograme transkriptòm nan (Tablo 1), sepandan, yo te obsève diferans enpòtan ant liy yo. Kidonk, liy rezistans 83A:476 la (ki pote jèn Lanr1 la) te montre yon repwogramasyon transkriptòm siyifikatif nan premye pwen tan an (6 hpi) ak yon ogmantasyon 31-69 fwa nan kantite jèn monte ak desann izole yo konpare ak lòt pwen tan nan pwen tan sa a. Anplis de sa, pik sa a te dire yon ti tan, paske ekspresyon sèlman kèk jèn te rete siyifikativman chanje nan dezyèm pwen tan an (12 hpi). Sa ki enteresan, Boregine, ki te montre tou yon wo nivo rezistans nan tès grèf la, pa t sibi yon repwogramasyon transkripsyon masif konsa pandan eksperyans lan. Sepandan, kantite jèn ki te eksprime diferansyèlman (DEG) te menm pou Boregine ak 83A:476 nan 12 HPI. Tou de Mandelup ak popilasyon 22660 la te montre pik DEG nan dènye moman an (48 l/s), sa ki endike yon reta relatif nan repons defans yo.
Piske 83A:476 te sibi yon reprogramasyon transkriptòm masiv an repons a C. lupini nan 6 HPI konpare ak tout lòt liy yo, ~91% nan DEG yo obsève nan moman sa a te espesifik pou liy (Fig. 1). Sepandan, te gen kèk sipèpoze nan repons bonè ant liy etid yo, paske 68.5%, 50.9%, ak 52.6% DEG nan Boregine, Mandelup, ak popilasyon 22660, respektivman, te sipèpoze ak sa yo te jwenn nan 83A:476 nan sèten pwen nan tan. Sepandan, DEG sa yo te reprezante sèlman yon ti fraksyon (0.97–1.70%) nan tout DEG yo detekte kounye a lè l sèvi avèk 83A:476. Anplis de sa, 11 DEG ki soti nan tout liy yo te koeran nan moman sa a (Tablo Siplemantè S4-S6), ki gen ladan konpozan komen nan repons defans plant yo: pwoteyin transfè lipid (TanjilG_32225), anzim andoglucan-1,3-β-glukozid (TanjilG_23384), de pwoteyin ki ka pwovoke pa estrès tankou SAM22 (TanjilG_31528 ak TanjilG_31531), pwoteyin lateks debaz (TanjilG_32352), ak de pwoteyin miray selilè estriktirèl ki rich an glisin (TanjilG_19701 ak TanjilG_19702). Te gen tou yon sipèpoze relativman wo nan repons transkriptòm ant 83A:476 ak Boregine nan 24 HPI (total 16-38% DEG) ak ant Mandelup ak Popilasyon 22660 nan 48 HPI (total 14-20% DEG).
Dyagram Venn ki montre kantite jèn ki eksprime diferansyèlman (DEG) nan liy lupin ki gen fèy etwat (NLL) ki te inokile ak Colletotrichum lupini (souch Col-08 ki te jwenn nan jaden lupin nan Wierzhenice, Polòy, 1999). Liy NLL yo te analize: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl Lanr1 la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl AnMan la) ak popilasyon 22660 (trè sansib). Abrevyasyon hpi a vle di èdtan apre vaksinasyon. Valè zewo yo te retire pou senplifye graf la.
Yo te analize gwoup jèn ki te twò eksprime yo nan 6 hpi pou prezans domèn jèn R kanonik yo (Tablo Siplemantè S7). Etid sa a te revele endiksyon transkriptòm jèn rezistans maladi klasik yo ak domèn NBS-LRR sèlman nan 83A:476. Gwoup sa a te konpoze de yon jèn TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), senk jèn CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, ak tanjilg_16162), ak kat NBS-LR, Tanjilg_16162), ak kat NBS-LRRE (tanjilg_16162) ansanm ak kat NBS-Lrr (tanjilg_16162) ak kat NBS-LRR (TANJILG_16162). Tout jèn sa yo gen domèn kanonik ki ranje nan sekans konsève. Anplis jèn domèn NBS-LRR yo, plizyè kinaz RLL te aktive nan 6 hpi, sètadi youn nan Boregine (TanjilG_19877), de nan Mandelup (TanjilG_07141 ak TanjilG_19877) ak nan popilasyon 22660 (TanjilG_09014 ak TanjilG_10361) ak de nan 83A 27:476.
Jèn ki te gen ekspresyon ki te chanje anpil an repons a inokilasyon ak C. lupini (souch Col-08) te sibi analiz anrichisman Gene Ontology (GO) (Tablo Siplemantè S8). Tèm pwosesis byolojik ki te pi souvan twò reprezante a se te "GO:0006952 defense response" ki te parèt nan 6 sou 16 konbinezon (tan × liy) ak yon siyifikasyon wo (valè P < 0.001) (Fig. 2). Tèm pwosesis byolojik ki te pi souvan twò reprezante a se te "GO:0006952 defense response" ki te parèt nan 6 sou 16 konbinezon (tan × liy) ak yon siyifikasyon wo (valè P < 0.001) (Fig. 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952», 0006952 который появлялся в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P) (значение P) (0,истью). Tèm pwosesis byolojik ki te pi souvan twò reprezante a se te 'GO:0006952 defense response', ki te parèt nan 6 sou 16 konbinezon (tan × liyaj) ak yon siyifikasyon wo (valè P < 0.001) (Fig. 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16个（时间×线）组合中的6 个中，具有高显着性（P 值<0.001）（图2）。 Tèm pwosesis byolojik ki pi reprezantatif la se "GO:0006952 defense response", ki parèt nan 6 sou 16 konbinezon (时间×线) yo, avèk yon siyifikasyon wo (valè P < 0.001) (图2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 00069552», Defense Repons, появлялся в 6 из 16 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис.). Tèm pwosesis byolojik ki te pi souvan twò reprezante a se te 'GO:0006952 Defense Response', ki te parèt nan 6 sou 16 konbinezon (tan × liy) avèk yon siyifikasyon wo (valè P < 0.001) (Fig. 2).Tèm sa a te twò reprezante nan de pwen nan 83A: 476 ak Boregine (6 ak 24 hpi) epi nan yon pwen nan Mandelup ak Popilasyon 22660 (12 ak 6 hpi, respektivman). Sa a se yon rezilta espere, ki mete aksan sou repons antifonjik liy rezistan yo. Anplis de sa, 83A:476 te reponn a C. lupini lè li te rapidman pwovoke jèn ki gen rapò ak eksplozyon oksidatif ki reprezante pa tèm "GO:0055114 redoks process", ki endike yon repons defans espesifik, pandan ke Boregine te revele repons defans espesifik, ki gen rapò ak tèm 'GO'. :0006950 Repons estrès”. Popilasyon 22660 la te aktive repons rezistans orizontal la ki enplike metabolit segondè yo, sa ki mete aksan sou kantite twòp tèm "GO:0016104 Pwosesis byosentèz triterpèn" ak "GO:0006722 Pwosesis metabolis triterpèn" (tou de tèm yo fè pati menm seri jèn yo), lè nou pran an kont rezilta analiz anrichisman tèm GO a, estabilite reyaksyon Mandelup la te ant Boregine ak Popilasyon 22660. Anplis de sa, reyaksyon bonè 83A:476 (6 hpi) ak reyaksyon reta Mandelup ak Popilasyon 22660 la gen ladan tèm GO:0015979 'fotosentèz' ak lòt pwosesis byolojik ki gen rapò.
Tèm ontoloji jèn byopwosesis yo chwazi nan anotasyon jèn ki eksprime diferansyèlman pandan repons transkriptòm lupin fèy etwat (NLL) ki te inokile ak lupin antraks (souch Col-08 ki te jwenn nan jaden lupin nan Wierzhenice, Polòy, an 1999) yo egzajere anpil. Liy NLL yo analize yo se: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl omozigòt Lanr1 la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl omozigòt AnMan la) ak popilasyon 22660 (sansib).
Paske etid sa a te gen pou objaktif pou idantifye jèn ki kontribye nan rezistans antraknoz, jèn ki te asiyen nan tèm GO "GO: 0006952 Defensive responses" ak "GO: 0055114 Redox processes" yo te analize ak limit paske mwayèn debaz ≥ 30 ak omwen yon liy × pwen nan tan lè yo konbine valè estatistikman siyifikatif nan log2 (chanjman pliye). Kantite jèn ki te satisfè kritè sa yo te 65 pou GO:0006952 ak 524 pou GO:0055114.
83A:476 te revele de pik DEG ki make ak tèm GO:0006952 la, premye a nan 6 jèn pa pous (64 jèn, regilasyon anlè ak anba) epi dezyèm lan nan 24 jèn pa pous (15 jèn, regilasyon anlè sèlman). Boregine te montre tou ke GO:0006952 te rive nan pik li nan menm moman an, men ak mwens DEG (11 ak 8) ak aktivasyon preferansyèl. Mandeloop te montre de pik GO:0006952 a 12 ak 48 HPI, tou de pote 12 jèn (premye a ak jèn aktivasyon, epi dezyèm lan ak jèn sipresyon sèlman), pandan ke popilasyon 22660 la nan 6 HPI (13 jèn) te gen yon pi gwo predominans nan regilasyon pik ogmantasyon an. Li ta dwe note ke 96.4% nan DEG GO:0006952 nan pik sa yo te gen menm kalite repons lan (anlè oswa anba), sa ki endike yon sipèpoze siyifikatif nan repons defans yo malgre diferans nan kantite jèn ki enplike yo. Pi gwo gwoup sekans ki gen rapò ak tèm GO:0006952 la kode Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like) la, ki fè pati klas pwoteyin 10 ki asosye ak patogenez (PR-10) ak pwoteyin prensipal latex la. pwoteyin ki sanble (MLP-like) (Fig. 3). De gwoup yo te diferan nan nati ekspresyon an ak direksyon repons lan. Jèn ki kode pwoteyin ki sanble ak SAM22 yo te montre yon endiksyon konsistan ak siyifikatif nan pwen tan bonè (6 oswa 12 hpi) epi yo te jeneralman pa reponn nan fen eksperyans lan (48 hpi), pandan ke pwoteyin ki sanble ak MLP yo te montre kowòdinasyon nan 6 hpi. hpi. 83A:476 ak Mandelup nan 48 hp/in, prèske tout lòt pwen done yo pa t reponn. Anplis de sa, diferans nan pwofil ekspresyon jèn pwoteyin ki sanble ak SAM22 yo te swiv varyabilite obsève nan rezistans antraknoz, paske liy ki pi rezistan yo te gen plis pwen tan ki te siyifikativman pwovoke jèn sa yo pase jèn ki pi sansib. Yon lòt jèn PR-10 ki sanble ak LlR18A/B te montre yon modèl ekspresyon trè menm jan ak jèn pwoteyin ki sanble ak SAM22 la.
Yo te idantifye prensipal konpozan tèm pwosesis byolojik "GO:0006952 Defense Response" ak modèl ekspresyon jèn kandida alèl Lanr1 ak AnMan yo. Echèl Log2 a reprezante valè log2 (chanjman pliye) ant plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, jwenn nan jaden lupin, Wizhenica, Polòy, 1999) ak plant kontwòl (inokile avèk fo inokulasyon) nan menm moman an. Yo te analize liy lupin fèy etwat sa yo: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl Lanr1 omozigòt la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl AnMan omozigòt la), ak Popilasyon 22660 (sansib).
Anplis de sa, yo te evalye pwofil ekspresyon jèn kandida RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) ak AnMan (TanjilG_12861) yo (Fig. 3). Jèn TanjilG_05042 la te montre yon repons siyifikatif (aktivasyon) nan 83A:476 sèlman nan premye pwen tan an (6 hpi), alòske TanjilG_12861 te siyifikatif nan Mandeloop sèlman nan de pwen tan: 6 hpi (regilasyon desann) ak 24 hpi (6 hpi). Avèk.). reglabl) ).
Jèn ki te pi twò eksprime nan tèm GO:0055114 "pwosesis redoks" la se te jèn ki kode pwoteyin sitokrom P450 ak peroksidaz (Fig. 4). Pou echantiyon ki izole nan 83A:476 a 6 HPI, valè maksimòm oswa minimòm log2 (chanjman pliye) (pou 86.6% nan jèn yo) te jeneralman obsève ant plant inokile ak plant kontwòl yo, sa ki mete aksan sou gwo repons jenotip sa a nan sèks inokile a. 83A:476 te montre GO:0055114 DEG ki pi siyifikatif la nan 6 hpi (503 jèn), pandan rès liy yo nan 48 hpi (Boregine, 31 jèn; Mandelup, 85 jèn; ak Popilasyon 22660, 78 jèn)). Nan pifò jèn nan fanmi GO:0055114 la, de kalite repons a vaksinasyon (aktivasyon ak inibisyon) te obsève. Sa ki enteresan, jiska 97.6% nan DEG yo idantifye pou tèm GO: 0055114 nan Mandelupe a 48 hp. Obsèvasyon sa yo sijere ke, malgre echèl ki pi piti anpil la (sa vle di, kantite jèn redoks ki te sibi mitasyon, 85 kont 503), modèl repons transkriptòm reta mandeloup a antraknoz la sanble ak repons bonè 83A:476 la. Nan Boregine ak Popilasyon 22660, konvèjans sa a pi ba a 51.6% ak 75.6%, respektivman.
Yo te revele modèl ekspresyon prensipal konpozan tèm pwosesis byolojik "GO:0055114 Redox process" la. Echèl Log2 a reprezante valè log2 (chanjman pliye) ant plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, jwenn nan jaden lupin, Wizhenica, Polòy, 1999) ak plant kontwòl (inokile avèk fo inokulasyon) nan menm moman an. Yo te analize liy lupin fèy etwat sa yo: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl omozigòt Lanr1), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl omozigòt AnMan), ak Popilasyon 22660 (sansib).
Repons transkriptomik 83A:476 yo pou inokilasyon ak C. lupini (souch Col-08) te gen ladan tou silansman kowòdone jèn ki atribiye a tèm GO:0015979 "fotosentèz" ak lòt pwosesis byolojik ki gen rapò (FIG. 5). Seri DEG GO:0015979 sa a te genyen 105 jèn ki te siyifikativman reprime nan 6 hpi nan 83A:476. Nan sou-gwoup sa a, 37 jèn te tou desreglemante nan Mandelup nan 48 HPI ak 35 nan menm pwen tan an nan popilasyon 22660 la, ki gen ladan 19 DEG komen nan tou de jenotip yo. Pa gen okenn DEG ki gen rapò ak tèm GO: 0015979 ki te siyifikativman aktive nan okenn konbinezon (liy x tan).
Yo te revele modèl ekspresyon prensipal konpozan tèm pwosesis byolojik "GO:0015979 Fotosentèz" la. Echèl Log2 a reprezante valè log2 (chanjman pliye) ant plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, jwenn nan jaden lupin, Wizhenica, Polòy, 1999) ak plant kontwòl (inokile avèk fo inokulasyon) nan menm moman an. Yo te analize liy lupin fèy etwat sa yo: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl omozigòt Lanr1 la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl omozigòt AnMan la), ak Popilasyon 22660 (sansib).
Baze sou rezilta analiz ekspresyon diferansyèl la epi prezimableman enplike nan repons defans kont chanpiyon patojèn yo, yo te chwazi seri sèt jèn sa a pou kantifikasyon pwofil ekspresyon pa PCR an tan reyèl (Tablo Siplemantè S9).
Jèn pwoteyin swadizan TanjilG_10657 la te pwovoke yon fason siyifikatif nan tout liy ak pwen tan etidye yo konpare ak plant kontwòl (imitasyon) yo (Tablo Siplemantè S10, S11). Anplis de sa, pwofil ekspresyon TanjilG_10657 la te montre yon tandans k ap ogmante pandan tout eksperyans lan pou tout liy yo. Popilasyon 22660 la te montre pi gwo sansiblite TanjilG_10657 la pou inokilasyon ak yon aktivasyon 114 fwa plis ak pi gwo nivo ekspresyon relatif (4.4 ± 0.4) a 24 HPI (Fig. 6a). Jèn pwoteyin PR10 LlR18A TanjilG_27015 la te montre tou aktivasyon atravè tout liy ak pwen tan, ak siyifikasyon estatistik nan pifò pwen done yo (Fig. 6b). Menm jan ak TanjilG_10657, yo te obsève pi gwo nivo ekspresyon relatif TanjilG_27015 la nan popilasyon 22660 ki te inokile a 24 HPI (19.5 ± 2.4). Jèn andochitinaz asid TanjilG_04706 la te ogmante anpil nan tout liy yo ak nan tout pwen tan eksepte pou Boregine 6 hpi (Fig. 6c). Li te pwovoke fòtman nan premye pwen tan an (6 HPI) nan 83A:476 (pa 10.5 fwa) epi li te ogmante modere nan lòt liy yo (pa 6.6-7.5 fwa). Pandan eksperyans lan, ekspresyon TanjilG_04706 la te rete nan nivo menm jan an nan 83A:476 ak Boregine, alòske nan Mandelup ak Popilasyon 22660 li te ogmante anpil, rive nan valè relativman wo (5.9 ± 1.5 ak 6.2 ± 1.5, respektivman). Jèn ki sanble ak andoglucan-1,3-β-glukozidaz TanjilG_23384 la te montre yon aktivasyon wo nan de premye pwen tan yo (6 ak 12 hpi) nan tout liy eksepte popilasyon 22660 (Fig. 6d). Yo te obsève pi gwo nivo ekspresyon relatif TanjilG_23384 yo nan dezyèm pwen tan an (12 hpi) nan Mandelup (2.7 ± 0.3) ak 83A:476 (1.5 ± 0.1). Nan 24 HPI, ekspresyon TanjilG_23384 te relativman ba nan tout liy etidye yo (soti nan 0.04 ± 0.009 rive nan 0.44 ± 0.12).
Pwofil ekspresyon jèn yo chwazi (ag) revele pa PCR kantitatif. Nimewo 6, 12 ak 24 yo reprezante èdtan apre vaksinasyon an. Jèn LanDExH7 ak LanTUB6 yo te itilize pou normalizasyon epi LanTUB6 te itilize pou kalibrasyon entè-seri yo. Ba erè yo reprezante devyasyon estanda a ki baze sou twa replikasyon byolojik, chak nan yo se mwayèn twa replikasyon teknik. Siyifikasyon estatistik diferans ki genyen nan nivo ekspresyon ant plant ki te inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, yo te jwenn an 1999 nan jaden lupin nan Wierzenica, Polòy) ak plant kontwòl yo (yo te inokile yo avèk fo sibstans) make anlè pwen done yo (*valè P < 0.05, **valè P ≤ 0.01, ***valè P ≤ 0.001). Siyifikasyon estatistik diferans ki genyen nan nivo ekspresyon ant plant ki te inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, yo te jwenn an 1999 nan jaden lupin nan Wierzenica, Polòy) ak plant kontwòl yo (yo te inokile yo avèk fo sibstans) make anlè pwen done yo (*valè P < 0.05, **valè P ≤ 0.01, ***valè P ≤ 0.001). Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, м Статистическая) получен в 1999 г. с поля люпина в Верженице, Польша) и контрольными (ложно инокулимиров) отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001). Diferans estatistikman siyifikatif nan nivo ekspresyon ant plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, jwenn an 1999 nan yon jaden lupin nan Wierzhenice, Polòy) ak plant kontwòl yo (inokile avèk fo sibstans) yo note anlè pwen done yo (*valè P < 0.05, **valè P ≤ 0.01, ***valè P ≤ 0.001).接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在敹之间表达水平差异的统计学显着性标记在数渍木数渍木敹（渍在敹0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001)。接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 秉 波兰水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001)。001)。 Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, ш08там полученный с полей люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) и контрольными (ложно ино инованлирольными) отмечены над точками данных (* значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001). Diferans estatistikman siyifikatif nan nivo ekspresyon ant plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, yo te jwenn nan jaden lupin nan Verzhenice, Polòy, an 1999) ak plant kontwòl yo (inokile avèk fo sibstans) yo note anlè pwen done yo (*valè P < 0.05, **valè P ≤ 0.01, ***valè P ≤ 0.001).Liy NLL yo te analize: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl omozigòt Lanr1 la), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl omozigòt AnMan la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni) ak popilasyon 22660 (sansib).
Jèn kandida TanjilG_05042 la nan locus Lanr1 la te montre yon modèl ekspresyon ki diferan anpil de pwofil yo te jwenn nan etid RNA-seq yo (Fig. 6e). Yo te obsève yon aktivasyon siyifikatif jèn sa a nan Mandelup ak popilasyon 22660 la (jiska 39.7 ak 11.7 fwa, respektivman), sa ki te lakòz nivo ekspresyon relativman wo (jiska 1.4 ± 0.14 ak 7.2 ± 1.3, respektivman). 83A:476 te revele tou kèk ogmantasyon nan jèn TanjilG_05042 la (jiska 3.8 fwa), sepandan, nivo ekspresyon relatif yo te reyalize (0.044 ± 0.002) te plis pase 30 fwa pi ba pase sa yo te obsève nan Mandelup ak popilasyon 22660 la. Analize pa qPCR te montre diferans siyifikatif nan nivo ekspresyon ant jenotip nan varyant ki te pran vaksen kontwol (kontwòl), rive nan yon diferans 58 fwa ant popilasyon 22660 ak 83A:476, osi byen ke ant popilasyon 22660 ak 22660. Yo te reyalize yon diferans doub ant Boregine ak Mandalup.
Jèn kandida a nan locus AnMan an, TanjilG_12861, te aktive an repons a vaksinasyon nan 83A:476 ak Mandelup, li te net nan popilasyon 22660 la, epi li te desann nan Boregine (Fig. 6f). Ekspresyon relatif jèn TanjilG_12861 la te pi wo a nan 83A:476 ki te inokile a (0.14±0.01). Jèn pwoteyin chòk chalè klas I 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 la te montre nivo ekspresyon relatif ki pi ba nan tout souch ak pwen tan etidye yo (Fig. 6g). Valè ki pi wo a te obsève a 24 HPI nan popilasyon 22660 la (0.14 ± 0.02, yon ogmantasyon uit fwa an repons a vaksinasyon).
Konparezon pwofil ekspresyon jèn yo (Fig. 7) te revele yon gwo korelasyon ant TanjilG_10657 ak kat lòt jèn: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), ak TanjilG_04706 (r = 0.79). Rezilta sa yo ka endike ko-regilasyon jèn sa yo pandan repons defans yo. Jèn TanjilG_12861 ak TanjilG_23384 yo te montre diferan pwofil ekspresyon ak valè koyefisyan korelasyon Pearson ki pi ba (soti nan 0.08 a 0.43 ak -0.19 a 0.28, respektivman) konpare ak lòt jèn yo.
Yo te detekte korelasyon ant pwofil ekspresyon jèn yo lè l sèvi avèk PCR kantitatif. Yo te analize liy lupin fèy etwat sa yo: 83A:476 (rezistan, ki pote alèl Lanr1 omozigòt la), Mandelup (modere rezistan, ki pote alèl AnMan omozigòt la), Boregine (rezistan, background jenetik enkoni), ak Popilasyon 22660 (sansib). Yo te kalkile twa pwen tan (6, 12 ak 24 èdtan apre inokilasyon an), ki gen ladan plant inokile yo (Colletotrichum lupini, souch Col-08, yo te jwenn nan jaden lupin nan Wierzhenice, Polòy, an 1999) ak plant kontwòl (inokile avèk fo). Echèl la montre valè koyefisyan korelasyon Pearson an.
Baze sou done yo te jwenn a 6 puisans cheval pa pous, yo te fè WGCNA sou 9981 DEG idantifye lè yo te konpare plant inokile yo ak plant kontwòl yo pou konsantre sou repons defans bonè yo (Tablo Siplemantè S12). Yo te jwenn vennde modil jèn (gwoupman) ak pwofil ekspresyon korele (pozitif oswa negatif) ant jenotip ak varyant eksperimantal yo. An mwayèn, nivo ekspresyon jèn yo t ap desann nan lòd 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 (sepandan, nan tou de varyant yo, tandans sa a te pi fò nan plant kontwòl yo). An mwayèn, nivo ekspresyon jèn yo t ap desann nan lòd 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 (sepandan, nan tou de varyant yo, tandans sa a te pi fò nan plant kontwòl yo). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 эта тенденция была сильнее у контрольных растений). An mwayèn, nivo ekspresyon jèn yo te diminye nan lòd 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 (sepandan, nan tou de varyant yo, tandans sa a te pi fò nan plant kontwòl yo).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> popilasyon 22660 的 顺序 下降 （， ， 在 翭 在在 在 植物 中 更）。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 тенденция была сильнее у контрольных растений). An mwayèn, nivo ekspresyon jèn yo te diminye nan seri 83A:476 > Mandelup > Boregine > Popilasyon 22660 (sepandan, nan tou de varyant yo, tandans sa a te pi fò nan plant kontwòl yo).Vaksinasyon an te lakòz yon ogmantasyon nan ekspresyon jèn, espesyalman nan modil 18, 19, 14, 6 ak 1 (nan lòd efè k ap desann), regilasyon negatif (pa egzanp modil 9 ak 20) ​​oswa ak efè net (pa egzanp modil 11, 22, 8 ak 13). Analiz anrichisman tèm GO (Tablo Siplemantè S13) te revele "GO: 0006952 Repons Pwoteksyon" pou modil ki te inokile a (18) ak aktivasyon maksimòm, ki gen ladan jèn ki te analize pa qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ak TanjilG_27015), ansanm ak anpil modil fotosentèz ki te pi siprime (9). Yo te idantifye konsantratè modil 18 la (Fig. 8) kòm jèn TanjilG_26536 ki kode pwoteyin LlR18B ki sanble ak PR-10 la, epi yo te idantifye konsantratè modil 9 la kòm jèn TanjilG_28955 ki kode pwoteyin fotosistèm II PsbQ la. Yo te jwenn yon jèn rezistans antraknoz kandida Lanr1, TanjilG_05042, nan modil 22 a (Fig. 9) epi li asosye avèk tèm "GO:0044260 Pwosesis metabolik makromolekilè selilè" ak "GO:0006355 Règleman transkripsyon, modèl ADN" ki pote sant TanjilG_01212 la. Jèn nan kode faktè transkripsyon estrès chalè A-4a (HSFA4a).
Analiz rezo pondere ko-ekspresyon jèn modil ki gen tèm pwosesis byolojik ki twò reprezante "GO: 0006952 Repons defans". Yo te senplifye ligasyon an pou mete aksan sou kat jèn yo te analize pa qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 ak TanjilG_27015).
Analiz rezo pondere sou ko-ekspresyon jèn yon modil ki gen yon tèm pwosesis byolojik ki twò reprezante "GO: 0006355: Règleman transkripsyon, modèl ADN" epi ki pote yon jèn rezistans antraknoz kandida Lanr1 TanjilG_05042. Ligasyon an te senplifye pou izole jèn TanjilG_05042 la ak jèn santral TanjilG_01212 la.
Tès depistaj rezistans antraknoz ki te kolekte nan Ostrali te montre ke pifò nan kiltivatè yo te lage byen bonè yo te sansib; Kalya, Coromup ak Mandelup yo te dekri kòm modera rezistan, alòske Wonga, Tanjil ak 83A:476 yo te dekri kòm trè rezistan26,27,31. te gen menm alèl rezistans lan, yo te deziyen Lanr1, epi Coromup ak Mandelup te gen yon alèl diferan, yo te deziyen AnMan10, 26, 39, alòske Kalya te pase yon alèl diferan. , Lanr2. Tès depistaj pou rezistans antraknoz nan Almay te lakòz idantifikasyon yon liy rezistan Bo7212 ak yon alèl kandida apa de Lanr1, yo te deziyen LanrBo36.
Etid nou an te revele yon frekans trè ba (anviwon 6%) nan alèl Lanr1 nan jèmoplasm ki te teste a. Obsèvasyon sa a konsistan avèk rezilta tès depistaj jèmoplasm Ewòp de Lès la lè l sèvi avèk makè Anseq3 ak Anseq4 yo, ki te montre ke alèl Lanr1 la prezan nan sèlman de liy Belarisyen. Sa sijere ke alèl Lanr1 la poko lajman itilize pa pwogram elvaj lokal yo, kontrèman ak Ostrali, kote li se youn nan alèl kle yo pou elvaj asisté pa makè. Sa ka akòz pi ba nivo rezistans ke alèl Lanr1 la bay nan kondisyon jaden Ewopeyen yo konpare ak rapò Ostralyen an. Anplis de sa, etid sou antraknoz nan zòn ki gen anpil lapli nan Ostrali yo te montre ke repons rezistans ki medyatè pa alèl Lanr1 la ka pa efikas nan kondisyon metewolojik ki favorize kwasans ak devlopman rapid patojèn nan19,42. Anfèt, nan etid sa a, kèk sentòm antraknoz yo te obsève tou nan jenotip ki pote alèl Lanr1 la, sa ki sijere ke rezistans ka disparèt anba kondisyon optimal pou devlopman C. lupini. Anplis de sa, entèpretasyon fo pozitif sou prezans makè Anseq3 ak Anseq4 yo, ki apeprè 1 cM soti nan locus Lanr1 la, posib 28,30,43.
Etid nou an te montre ke 83A:476, ki pote alèl Lanr1 la, te reponn a inokilasyon C. lupini avèk yon reprogramasyon transkriptòm sou gwo echèl nan premye pwen tan analize a (6 hpi), alòske nan Mandelup, ki pote alèl AnMan nan, repons transkriptomik yo te obsève pi ta (soti nan 24 a 48 hp). Varyasyon tanporèl sa yo nan repons defans yo asosye avèk diferans nan sentòm maladi yo, sa ki mete aksan sou enpòtans rekonesans patojèn bonè pou yon repons siksè a rezistans. Pou enfekte tisi plant yo, espò antraks yo dwe pase nan plizyè etap devlopman sou sifas lame a, tankou jèminasyon, divizyon selilè, ak fòmasyon yon apresòryòm. Yon apendis se yon estrikti enfeksyon ki tache ak sifas lame a epi ki fasilite pénétration nan tisi lame a. Kidonk, espò C. gloeosporioides nan ekstrè pwa te montre premye divizyon nwayo a apre 75-90 minit enkubasyon, fòmasyon yon tib jèm apre 90-120 minit, ak sipresyon apre 4 èdtan 45. Mango C. gloeosporioides te montre plis pase 40% jèminasyon konidi apre 3 èdtan enkubasyon ak anviwon 20% fòmasyon apresè apre 4 èdtan. Jèn CAP20 ki asosye ak virulans C. gloeosporioides la te montre aktivite transkripsyonèl nan konidi ki fòme epifit apre 3.5 èdtan enkubasyon nan sir sifas zaboka ak gwo konsantrasyon pwoteyin CAP20 apre 4 èdtan 46 minit. Menm jan an tou, aktivite jèn byosentèz melanin nan C. trifolii te pwovoke pandan yon enkubasyon 2 èdtan ki te swiv pa fòmasyon yon apresòryòm apre 1 èdtan. Etid sou tisi fèy yo te montre ke frèz ki inokule ak C. acutatum gen premye sipresyon nan 8 hpi, alòske tomat ki inokule ak C. coccodes gen premye sipresyon nan 4 hpi48,49. lajman konsistan avèk echèl tan pwosesis enfeksyon Colletotrichum spp. Repons defans rapid a 83A:476 sijere patisipasyon rezistans plant ak jèn iminite deklanche pa efèktè (ETI) nan liy sa a, alòske repons reta Mandelup yo sipòte ipotèz iminite deklanche pa modèl molekilè mikwo-asosye (MTI) 50. Repons bonè a 83A: 476 ak Mandelup. Sipèpoze pasyèl ant jèn ki reglemante anlè oswa anba nan repons reta a sipòte konsèp sa a tou, paske ETI souvan konsidere kòm yon repons MTI akselere ak amelyore ki abouti nan lanmò selil pwograme nan sit enfeksyon an, ke yo rekonèt kòm chòk anafilaktik 51,52.
Pifò nan jèn yo atribiye a tèm Gene Ontology GO:0006952 "Repons Defans" ki twò reprezante a se 11 omolog pwoteyin mesaj jèn pwovoke pa estrès 22 la (menm jan ak SAM22) ak sèt prensipal pwoteyin ki sanble ak pwoteyin lateks (MLP) yo. Pwoteyin ki sanble ak 31, 34, 43 ak 423 yo te montre resanblans sekans. Jèn ki sanble ak SAM22 yo te montre yon aktivasyon siyifikatif ki te dire pi lontan, ki montre yon ogmantasyon nan nivo rezistans antraknoz (83A:476 ak Boregine). Sepandan, jèn ki sanble ak MLP yo te sèlman diminye nan liy ki pote alèl rezistans kandida a (83A:476/Lanr1 a 6 hpi ak Mandelup/AnMan a 24 hpi). Li ta dwe note ke tout omolog ki sanble ak SAM22 yo idantifye yo soti nan yon gwoup jèn ki kouvri apeprè 105 kb, alòske jèn ki sanble ak MLP yo soti nan rejyon separe nan jenòm lan. Yo te jwenn tou aktivasyon kowòdone jèn ki sanble ak SAM22 sa yo nan etid anvan nou an sou rezistans NLL a inokilasyon Diaporthetoxica, sa ki sijere ke yo enplike nan konpozan orizontal repons defans lan. Konklizyon sa a sipòte tou pa rapò sou yon repons pozitif jèn ki sanble ak SAM22 a blesi oswa tretman ak asid salisilik, endiktè chanpiyon, oswa oksijene idwojèn.
Yo montre jèn ki sanble ak MLP yo reyaji a divès estrès abyotik ak byotik, tankou enfeksyon bakteri, viral ak patojèn ki koze pa chanpiyon nan anpil espès plant55. Direksyon repons yo a sèten entèraksyon ant plant yo ak patojèn yo te varye ant yon ogmantasyon fò (sa vle di, pandan enfeksyon koton ak Verticillium dahliae) rive nan yon diminisyon siyifikatif (sa vle di, apre enfeksyon pye pòm ak Alternaria spp.)56,57. Yo obsève yon diminisyon siyifikatif nan jèn 423 ki sanble ak MLP a pandan defans zaboka kont enfeksyon F. niger ak pandan enfeksyon pye pòm Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola ak Alternaria alternata se patotip pòm58,59. Anplis de sa, kal pòm ki twò eksprime jèn 423 ki sanble ak MLP a te gen yon ekspresyon pi ba nan jèn ki asosye ak rezistans epi yo te pi sansib a enfeksyon chanpiyon59. Apre Fusarium oxysporum f, jèn 423 ki sanble ak MLP a te siprime tou nan jèmplasm pwa komen rezistan. cn. Enfeksyon pwa 60.
Lòt manm fanmi PR-10 yo idantifye nan etid RNA-seq nou an se te jèn LlR18A ak LlR18B yo an repons a ogmantasyon, ansanm ak jèn ogmantasyon (1 jèn) oswa diminisyon (3 jèn) pou pwoteyin transfè lipid DIR1 la. Anplis de sa, WGCNA mete aksan sou jèn LlR18B a kòm yon sant nan modil sa a, ki trè sansib a vaksinasyon epi ki pote plizyè jèn repons pwoteksyon. Jèn LlR18A ak LlR18B yo te pwovoke nan fèy lupin jòn an repons a bakteri patojèn, ansanm ak nan tij NLL apre inokilasyon D. toxica, pandan ke omolog diri jèn sa yo, RSOsPR10, te rapidman pwovoke pa yon enfeksyon chanpiyon ki prezimableman enplike nan chemen siyalizasyon asid jasmonik la53,61, 62. Jèn DIR1 la kode pwoteyin transpò lipid nonspesifik ki nesesè pou aparisyon rezistans sistemik akeri (SAR). Avèk devlopman reyaksyon pwoteksyon yo, pwoteyin DIR1 la transpòte soti nan sant enfeksyon an nan floèm nan pou pwovoke SAR nan ògàn ki lwen yo. Sa ki enteresan, jèn TanjilG_02313 DIR1 la te siyifikativman pwovoke nan premye moman an nan liy 84A:476 ak Popilasyon 22660, men rezistans antraknoz la te devlope avèk siksè sèlman nan liy 84A:476. Sa ka endike yon sou-fonksyonalizasyon jèn DIR1 la nan NLL, piske twa omolog ki rete yo te reponn a inokilasyon sèlman nan liy 83A:476 la a 6 hpi, epi repons sa a te dirije anba.
Nan etid nou an, konpozan ki pi komen ki koresponn ak pwosesis byolojik yo rele "GO:0055114 Pwosesis Redoks" la se te pwoteyin sitokwòm P450, peroksidaz, asid linoleik 9S-/13S-lipoksijenaz, ak asid oksidaz 1-aminosiklopropan-1-karboksilik. Anplis de sa, WGCNA nou an defini omolog HSFA4a a kòm yon sant ki pote modil tankou kandida jèn rezistans Lanr1 TanjilG_05042 la. HSFA4a se yon konpozan nan règleman transkripsyon nikleyè ki depann de redoks nan plant yo.
Pwoteyin sitokrom P450 yo se oksidorediktaz ki katalize reyaksyon idroksilasyon NADPH ak/oswa O2-depandan nan metabolis primè ak segondè, ki gen ladan metabolis ksenobyotik yo, ansanm ak òmòn, asid gra, sterol, konpozan miray selilè, byopolimè, ak byosentèz konpoze pwoteksyon 69. Nan yon etid nou an, varyabilite nan fonksyon sitokrom P450 plant yo te redwi soti nan -10.6 log2 (chanjman pliye) a 5.7 akòz yon gwo kantite omolog modifye (37) ak diferans nan modèl repons ant jèn espesifik, ki reflete yon revizyon anlè. . Sèvi ak sèlman done RNA-seq pou klarifye fonksyon byolojik swadizan jèn NLL yo nan yon superfanmi pwoteyin konsa ki gwo ta trè espekilatif. Sepandan, li enpòtan pou note ke kèk jèn sitokrom P450 yo asosye avèk ogmantasyon rezistans a fongis oswa bakteri patojèn, ki gen ladan yon kontribisyon nan reyaksyon alèjik 69,70,71.
Peroksidaz Klas III yo se anzim plant miltifonksyonèl ki enplike nan yon pakèt pwosesis metabolik pandan kwasans ak devlopman plant yo, osi byen ke an repons a estrès anviwònman tankou salinite, sechrès, gwo entansite limyè, ak atak patojèn72. Peroksidaz yo enplike nan entèraksyon plizyè espès plant ak Anthracis, tankou Stylosanthes humilis ak C. gloeosporioides, Lens culinaris ak C. truncatum, Phaseolus vulgaris ak C. lindemuthianum, Cucumis sativus ak C. lagenarium73,74,75,76. Repons lan trè rapid, pafwa menm a 4 HPI, anvan chanpiyon an penetre tisi plant lan73. Jèn peroksidaz la te reponn tou a inokilasyon D. toxica NLL. Anplis fonksyon tipik yo pou kontwole eklatman oksidatif oswa elimine estrès oksidatif, peroksidaz yo ka entèfere ak kwasans patojèn yo lè yo kreye baryè fizik ki baze sou ranfòsman miray selilè pandan lignifikasyon, souinite oswa kwa-lyezon konpoze espesifik. Fonksyon sa a ka atribiye in silico a jèn TanjilG_03329 ki kode yon swadizan peroksidaz anyon ki fòme lignin ki te siyifikativman ogmante nan etid nou an nan liy rezistan 83A:476 la nan 6 HPI, men pa nan lòt souch ak pwen tan ki pa t reyaji.
9S-/13S-lipoksijenaz asid linoleik la se premye etap nan chemen oksidatif byosentèz lipid la78. Pwodwi chemen sa a gen plizyè fonksyon nan defans plant yo, tankou ranfòsman miray selilè atravè fòmasyon depo kaloz ak pektin, ak regilasyon estrès oksidatif atravè pwodiksyon espès oksijèn reyaktif79,80,81,82,83. Nan etid sa a, ekspresyon asid linoleik 9S-/13S-lipoksijenaz la te chanje nan tout souch yo, men nan popilasyon sansib 22660 la, ogmantasyon an te domine nan diferan moman, alòske nan souch ki pote Lanr1 rezistan ak alèl AnMan an, li mete aksan sou divèsifikasyon kouch oksilipin nan reyaksyon antraks pwoteksyon ant jenotip sa yo.
Omolog 1-aminosiklopropan-1-karboksilat oksidaz (ACO) a te siyifikativman ogmante (9 jèn) oswa diminye (2 jèn) lè yo te inokile l ak lupin. Ak de eksepsyon, tout repons sa yo te fèt nan 6 hp. nan 83A:476. Reyaksyon anzimatik ki medyatè pa pwoteyin ACO yo se etap ki limite vitès nan pwodiksyon etilèn e pakonsekan li trè reglemante84. Etilèn se yon òmòn plant ki jwe plizyè wòl nan reglemante devlopman plant ak repons a kondisyon estrès abyotik ak byotik. Endiksyon transkripsyon ACO ak aktivasyon chemen siyal etilèn nan enplike nan ogmante rezistans diri a chanpiyon emibyotwofik oryzae oryzae a lè yo reglemante pwodiksyon espès oksijèn reyaktif ak fitoaleksin. Yon pwosesis enfeksyon fèy ki sanble anpil yo jwenn ant M. oryzae ak C. lupini88,89, nan kontèks yon ogmantasyon siyifikatif nan omolog ACO nan liy 83A:476 ki rapòte nan etid sa a, chanje posibilite pou konfere rezistans a NLL antraknoz etilèn, yon etap santral siyalizasyon nan chemen molekilè yo.
Nan etid sa a, yo te obsève yon sipresyon sou gwo echèl anpil jèn ki asosye avèk fotosentèz a 6 hpi nan 83A:476 ak a 48 hpi nan Mandeloop ak popilasyon 22660 la. Limit ak pwogresyon chanjman sa yo pwopòsyonèl ak nivo a. Yo te obsève rezistans antraknoz nan eksperyans sa a. Dènyèman, yo te rapòte yon represyon fò ak bonè nan transkripsyon ki gen rapò ak fotosentèz nan plizyè modèl entèraksyon plant-patojèn, tankou bakteri ak fongis patojèn. Akselerasyon (ki soti nan 2 HPI nan kèk entèraksyon) ak sipresyon global jèn ki asosye avèk fotosentèz an repons a enfeksyon ka deklanche iminite plant ki baze sou deplwaman espès oksijèn reyaktif ak entèraksyon yo ak chemen asid salisilik la pou medyat reyaksyon alèjik 90,94.
An konklizyon, mekanis repons defans yo pwopoze pou liy ki pi rezistan an (83A:476) gen ladan yo rekonesans rapid patojèn pa jèn R la (petèt TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) ak siyalizasyon asid salisilik ak etilèn ki medyatè pa repons alèjik, ki te swiv pa etablisman yon aksyon SAR alontèm. Aksyon an sipòte pa pwoteyin DIR-1 la. Li ta dwe note ke peryòd byotwofik pou enfeksyon C. lupini a trè kout (apeprè 2 jou), ki te swiv pa kwasans nekrotik95. Tranzisyon ant etap sa yo ka asosye avèk nekwoz ak ekspresyon pwoteyin endiktibl etilèn ki aji kòm deklanchè pou reyaksyon ipèrsansibilite nan plant lame yo. Se poutèt sa, fenèt tan pou kaptire C. lupini avèk siksè nan etap byotwofik la trè etwat. Repwogramasyon jèn ki asosye avèk redoks ak fotosentèz obsève nan 83A:476 a 6 hpi konsistan avèk pwogresyon if chanpiyon yo epi li anonse devlopman yon repons pwoteksyon siksè nan etap byotwofik la. Repons transkriptomik Mandelup ak popilasyon 22660 la ka twò reta pou kaptire chanpiyon an anvan yo chanje pou grandi an kwasans nekrotik, sepandan, Mandelup ka pi efikas pase popilasyon 22660 la paske règleman relativman rapid pwoteyin PR-10 la ankouraje rezistans orizontal.
ETI, ki kondwi pa jèn kanonik R la, sanble se yon mekanis komen pou rezistans pwa a antraknoz. Kidonk, nan legim modèl Medicago truncatula a, rezistans a antraknoz la konfere pa jèn RCT1 la, yon manm nan klas jèn R plant TIR-NBS-LRR97 la. Jèn sa a konfere tou rezistans antraknoz laj nan Luzèn lè yo transfere li nan plant ki sansib. Nan pwa komen an (P. vulgaris), yo idantifye plis pase de douzèn jèn rezistans antraknoz jiska prezan. Gen kèk nan jèn sa yo ki jwenn nan rejyon ki pa gen okenn jèn kanonik R, sepandan anpil lòt yo sitiye nan kwen kwomozòm ki pote gwoup jèn NBS-LRR la, tankou TIR-NBS-LRRs99. Etid SSR sou tout jenòm lan te konfime tou asosyasyon jèn NBS-LRR la ak rezistans antraknoz nan pwa komen an. Yo te jwenn jèn kanonik R la tou nan rejyon jenomik ki pote prensipal lokis rezistans antraknoz la nan lupin blan 101.
Travay nou an montre ke yon reyaksyon rezistans imedya, aktive nan yon etap bonè enfeksyon plant lan (de preferans pa pita pase 12 hpi), pwoteje lupin ki gen fèy etwat kont antraknòz ki koze pa chanpiyon patojèn Collelotrichum lupini a efektivman. Lè nou itilize sekansaj wo débit, nou demontre pwofil ekspresyon diferansyèl jèn rezistans antraknòz nan plant NLL ki medyatè pa jèn rezistans Lanr1 ak AnMan yo. Defans ki reyisi enplike konsepsyon ak anpil atansyon jèn yo pou pwoteyin ki enplike nan redoks, fotosentèz, ak patogenez nan kèk èdtan apre premye kontak plant lan ak yon patojèn. Reyaksyon pwoteksyon menm jan an, men retade nan tan, yo pi mwens efikas nan pwoteje plant yo kont maladi. Rezistans antraks medyatè pa jèn Lanr1 la sanble ak repons rapid tipik jèn R la (iminite deklanche pa efèktè), alòske jèn AnMan an gen plis chans bay yon repons orizontal (iminite deklanche pa yon modèl molekilè ki asosye ak mikwòb), bay yon nivo dirabilite modere.
215 liy NLL yo te itilize pou tcheke makè antraknoz yo te konpoze de 74 kiltivatè, 60 liy yo te jwenn pa kwaze oswa elvaj, 5 mutan, ak 76 jèmoplasm sovaj oswa orijinal. Liy yo te soti nan 17 peyi, sitou nan Polòy (58), Espay (47), Almay (27), Ostrali (26), Larisi (19), Byelorisi (7), Itali (5) ak lòt liy ki soti nan 10 peyi. Ansanm lan gen ladan l tou liy rezistan referans: 83A:476, Tanjil, Wonga ki pote alèl Lanr1 la, ak Mandelup ki pote alèl AnMan la. Liy yo te jwenn nan Baz Done Resous Jenetik Lupin Ewopeyen an ke Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Polòy kenbe (Tablo Siplemantè S1).
Plant yo te kiltive nan kondisyon kontwole (fotoperyòd 16 èdtan, tanperati 25°C pandan lajounen ak 18°C ​​lannwit). Yo te analize de replikasyon byolojik. Yo te izole ADN nan fèy ki gen twa semèn lè l sèvi avèk DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Almay) dapre pwotokòl la. Yo te evalye kalite ak konsantrasyon ADN izole a pa metòd espektrofotometrik (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Etazini). Yo te analize makè AnManM1 ki make jèn rezistans antraknoz AnMan (ki sòti nan cv. Mandelup) ak makè Anseq3 ak Anseq4 ki flanke jèn Lanr1 (ki sòti nan cv. Tanjil) 11,26,28. Yo te bay omozigòt pou alèl rezistan an "1", sansib - "0", ak etewozigòt - 0.5.
Baze sou rezilta tès depistaj pou makè AnManM1, AnSeq3 ak AnSeq4 yo ak disponiblite grenn pou eksperyans swivi final yo, yo te chwazi 50 liy NLL pou fenotipaj rezistans antraknoz. Yo te fè analiz la an doub nan yon sèr kontwole pa òdinatè ak yon fotoperyòd 14 èdtan ak yon seri tanperati 22°C pandan lajounen an ak 19°C lannwit. Yo grate grenn yo (koupe kouch grenn nan sou lòt bò anbriyon an ak yon lam byen file) anvan yo simen pou anpeche grenn yo dòmi akòz kouch grenn nan ki twò di epi pou asire jèminasyon inifòm. Plant yo te grandi nan po (11 × 11 × 21 cm) ak tè esteril (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Polòy). Yo te fè inokilasyon an ak souch Colletotrichum lupini Col-08 la, ki te grandi an 1999 nan tij plant lupin ki gen fèy etwat ki te grandi nan yon jaden nan Verzhenitsa, Gran Polòy (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E). Jwenn yon zòn. Yo te kiltive izolat yo nan mwayen SNA a 20° C anba limyè nwa pandan 21 jou pou pwovoke sporilasyon. Kat semèn apre simen, lè plant yo te rive nan etap 4-6 fèy, yo te fè inokilasyon an lè yo te flite ak yon sispansyon konidi nan yon konsantrasyon 0.5 x 106 konidi pa ml. Apre inokilasyon an, yo te kenbe plant yo nan fènwa pandan 24 èdtan nan yon imidite anviwon 98% ak yon tanperati 25°C pou fasilite jèminasyon konidi yo ak pwosesis enfeksyon an. Apre sa, yo te kiltive plant yo anba yon fotoperyòd 14 èdtan nan 22°C lajounen/19°C lannwit ak 70% imidite. Yo te fè nòt maladi a 22 jou apre inokilasyon an epi li te varye ant 0 (iminitè) ak 9 (trè sansib) selon prezans oswa absans lezyon nekrotik sou tij ak fèy yo. Anplis de sa, apre yo te fin fè nòt la, yo te mezire pwa plant yo. Yo te kalkile relasyon ki genyen ant jenotip makè yo ak fenotip maladi a kòm korelasyon pwen de sekans (absans makè etewozigòt nan seri liy yo pou analiz fenotip rezistans antraknoz la).