A tápanyag-beszerzés és -elosztás integrálja a rovarok táplálékkeresését és az élettörténeti jellemzőket. A különböző életszakaszokban előforduló bizonyos tápanyagok hiányának kompenzálására a rovarok hozzájuthatnak ezekhez a tápanyagokhoz kiegészítő takarmányozással, például gerincesek váladékával táplálkozva egy tócsákként ismert folyamat során. Az Anopheles arabiani szúnyogok anyagcseréje szükséges-e, és ezért úgy tűnik, hogy ennek a vizsgálatnak a tápanyagcseréjére és újratermékére van-e szükség. An.Az arabiensis a tehénvizeleten a tápanyagszerzés céljából történő felkavarása javítja az élettörténeti jellemzőket.
Győződjön meg róla, hogy biztonságos.Az arabiiensist a friss, 24 órás, 72 órás és 168 órás tehénvizelet illata vonzotta, és a gazdakereső és a vérrel táplált (48 órás vérétel utáni) nőstényeket Y-csöves olfactométerben mérték, majd a vemhes nőstények biofiziológiai vizsgálatát kombinált kémiai vizsgálattal végezték. tehénvizelet mind a négy korosztályban. A bioaktív vegyületek szintetikus keverékeit Y-csöves és szabadföldi kísérletekben értékeltük. A tehénvizelet és fő nitrogéntartalmú vegyület karbamid, mint lehetséges kiegészítő táplálék a malária kórokozók számára történő vizsgálatához, a takarmányozási paramétereket és az élettörténeti jellemzőket mértük. A nőstény szúnyogok arányát, valamint a nőstény szúnyogok mennyiségét és vizeletét határoztuk meg. túlélés, lekötött repülés és szaporodás szempontjából értékelték.
Keresse a gazda vérét és táplálékát. Laboratóriumi és terepvizsgálatok során az arabokat a friss és kiöregedett tehénvizelet természetes és szintetikus illata vonzotta. A vemhes nőstények közömbösek voltak a tehén vizeletre adott válaszaival szemben az ívási helyeken. A gazdakereső és vérszívó nőstények aktívan felszívják a tehén vizeletét, és az összes fiziológiai és élettani állapotnak megfelelően repülés, túlélés vagy szaporodás.
Anopheles arabinis a tehénvizelet beszerzése és elosztása az élettörténeti jellemzők javítása érdekében. A tehénvizelet-kiegészítő etetés közvetlenül befolyásolja a vektorkapacitást a napi túlélés és a vektorsűrűség növelésével, valamint közvetetten a repülési aktivitás megváltoztatásával, ezért figyelembe kell venni a jövőbeli modellekben.
A tápanyagbeszerzés és -elosztás integrálja a rovarok táplálékszerzési és élettörténeti jellemzőit [1,2,3]. A rovarok képesek táplálékot kiválasztani és beszerezni, valamint kompenzációs táplálást végezni a táplálék elérhetősége és tápanyagszükséglete alapján [1, 3]. A tápanyagok eloszlása ​​az élettörténeti folyamattól függ, és a rovarok különböző életszakaszaiban eltérő táplálkozási minőségi és mennyiségi követelményekhez vezethet. ezeket a tápanyagokat kiegészítő takarmányozással, például iszapból, gerincesek különböző ürülékéből és váladékából, valamint dögön keresztül szerezheti be, ezt a folyamatot tócsákként ismerik [2]. Bár elsősorban számos lepke- és lepkefajt írnak le, az itató lyukak más rovarrendeknél is előfordulnak, és az ilyen típusú erőforrásokhoz való vonzódás és táplálkozás jelentős hatással lehet az egészségre és az életre. A malária szúnyog Anopheles gambiae sensu lato (sl) „alultáplált” felnőttként jelenik meg [8], így az öntözés fontos szerepet játszhat élettörténeti jellemzőiben, de ezt a viselkedést ez idáig figyelmen kívül hagyták .A felkavarás, mint a tápanyagbevitel növelésének eszköze ebben a fontos járműben figyelmet érdemel, mivel ennek jelentős epidemiológiai következményei lehetnek.
A kifejlett nőstény Anopheles szúnyogok nitrogénbevitele korlátozott a lárvaállapotból származó alacsony kalóriatartalékok és a vérliszt nem hatékony felhasználása miatt [9]. A nőstény Ann.gambiae sl ezt általában kiegészítő vérételek kiegészítésével kompenzálja [10, 11], ezáltal több embert fenyeget a megbetegedések és a szúnyogok megbetegedésének kockázata. használja a gerincesek ürülékének kiegészítő táplálását, hogy olyan nitrogéntartalmú vegyületeket szerezzen be, amelyek fokozzák az alkalmazkodást és a repülési manőverezést, amint azt más rovarok is bizonyítják [2].E tekintetben az Anon belüli egyik testvérfaj, az Anopheles arabinis, az Anopheles arabinis, a friss és kiöregedett tehénvizelete érdekessége érdekes [12],,13,An. s és ismert, hogy a szarvasmarhával társul, és abból táplálkozik.A tehénvizelet nitrogéntartalmú vegyületekben gazdag erőforrás, a karbamid a friss vizeletben lévő összes nitrogén 50-95%-át teszi ki [15, 16].A tehén vizeletének öregedésével a mikroorganizmusok felhasználják ezeket az erőforrásokat, hogy csökkentsék a nitrogéntartalmú vegyületek összetettségét. a szerves nitrogén mennyiségének csökkenése, az alkalofil mikroorganizmusok (melyek közül sok a szúnyogokra mérgező vegyületeket termelnek) szaporodnak [15], amelyek nőstények is lehetnek. Az Ann.arabiensis elsősorban a 24 órás vagy annál fiatalabb vizelethez vonzódik [13, 14].
Ebben a vizsgálatban a gazdaszervezetet és a vérrel táplált Ans-t keresték. Az első gonadotropin ciklus során az arabiensist nitrogéntartalmú vegyületek, köztük a karbamid vizeletkeveréssel történő felszívódását vizsgálták. Ezt követően kísérletsorozatot végeztek annak felmérésére, hogy a nőstény szúnyogok hogyan allokálják ezt a potenciális tápanyagforrást a jobb túlélés, valamint a vizelet további túlélése és szaporodása érdekében. Annak megállapítására, hogy ezek megbízható támpontokat adtak-e a gazdaszervezet és a vérrel táplált An számára. E potenciális táplálkozási erőforrás keresése során az arabiensis kémiai összefüggéseket fedezett fel a megfigyelt eltérő vonzerő mögött. A 24 órán át érlelt bogyóvizeletben azonosított illékony szerves vegyületek (VOC) szintetikus szagkeverékeit terepi körülmények között továbbértékelték, kiterjesztve a vizeletre gyakorolt ​​eltérő laboratóriumi hatást.Szúnyogcsalogató. A kapott eredmények megerősítik, hogy An.Az arabiensis a gerincesek vizeletében található nitrogéntartalmú vegyületeket szerzi be és terjeszti el, hogy befolyásolja az élettörténeti jellemzőket. Ezeket az eredményeket a lehetséges epidemiológiai következmények és a vektorok felügyeletére és ellenőrzésére való felhasználásuk összefüggésében tárgyaljuk.
Az Anopheles arabicanst (Dongola törzs) 25 ± 2 °C-on, 65 ± 5% relatív páratartalom mellett és 12:12 órás fény-sötét ciklusban tartottuk. A lárvákat desztillált vízzel töltött műanyag tálcákon (20 cm × 18 cm × 7 cm) tenyésztették fel, és ml-es Metramin Werke, Tetramin Werke P-ben gyűjtöttük össze. s (Nolato Hertila, Åstorp, SE), majd áthelyezték Bugdorm ketrecekbe (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Tajvan), hogy lehetővé tegyék a felnőttek megjelenését. A felnőttek ad libitum 10%-os szacharózoldatot kaptak, amíg a kikelés után 4 napig közvetlenül felkínálták a diétát, majd a kísérletet megcsillagították, vagy a kísérletet megelőző éjszakán át csillagozták (dpe). a kísérlet előtt, az alábbiakban leírtak szerint. A repülési csöves kísérletekhez használt nőstényeket csak 4-6 órán keresztül éheztették vízzel ad libitum.A vérszívó szúnyogok előkészítéséhez a következő biológiai vizsgálatokhoz, 4 dpe nőstényeket defibrotikus birkavérrel (Håtunalab, Bro, SE) láttunk el egy membránetető rendszer segítségével (a Hemotek Acc Discovery Workshops, UK coatringtonges, majd áthelyezték a nőstényeket a táplálékba). közvetlenül, az alábbiakban leírtak szerint, vagy 10% ad libitum szacharózt 3 napig az alább leírt kísérletek előtt. Az utóbbi nőstényeket repülési csöves biológiai vizsgálatokhoz használták, és átvitték a laboratóriumba, majd a kísérlet előtt 4-6 órával ad libitum desztillált vízzel.
Takarmányozási teszteket alkalmaztak a vizelet és a karbamid fogyasztásának mennyiségi meghatározására felnőtt an.arab nőstényeknél. A gazdát kereső és vérrel táplált nőstények 1% hígított friss és idős tehénvizeletet, különböző koncentrációjú karbamidot és két kontrollt (10% szacharózt és vizet) tartalmaztak 48 órán keresztül. Ezen túlmenően, 48 órán át tartóztatták a gazdát kereső és vérrel táplált nőstényeket. 7-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) hozzáadtuk az étrendhez, és 4 × 4-es mátrixban 250 µl-es mikrocentrifuga csövekben (Axygen Scientific, Union City, CA, USA; 1A ábra) Töltsük a széléig (~300 µl). 6 cm magas; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A ábra) teljes sötétségben, 25 ± 2 cm °C-on és 65 ± 5% relatív páratartalom mellett. Ezeket a kísérleteket 5-10 alkalommal megismételtük. Diéta után a szúnyogokat -20 °C-ra helyeztük a további elemzésig.
Keresse a gazdaszervezet és a vérszívó nőstény Anopheles arabianus által felszívott szarvasmarha-vizeletet és karbamidot. Az (A) takarmányozási kísérletben a nőstény szúnyogokat friss és idős tehénvizeletből, különböző koncentrációjú karbamidból, szacharózból (10%) és desztillált vízből (H2O) tartalmazó táplálékkal látták el. Gazdatestvérteszttel (B) egyéb vérvétellel (B) több vérkeringés .Megjegyezzük, hogy a gazdakereső nőstények 72 órás tehénvizeletet abszorbeáltak kevesebb, mint 168 órás tehénvizelet (B).A vizelet átlagos összes nitrogéntartalma (± standard deviáció) a betétben van feltüntetve.Gazdakereső (D, F) és E, G vérszívó (E, G) nőstények szignifikánsan eltérő dózisú (különböző dózisú, eltérő térfogatú) mennyiségben vesznek fel karbamidot. egymástól (egyirányú ANOVA Tukey post hoc analízisével; p < 0,05). A hibasávok az átlag standard hibáját jelentik (BE). Az egyenes szaggatott vonal a log-lineáris regressziós egyenest jelöli (F, G)
A felszívódott táplálék felszabadítása érdekében a szúnyogokat egyenként 1,5 ml-es mikrocentrifuga csövekbe helyezték, amelyek 230 µl desztillált vizet tartalmaztak, és a szövetet eldobható mozsártörővel és akkus motorral (VWR International, Lund, SE) feldaraboltuk, majd 10 percig centrifugáltuk 10 krpm-en. Aldrich) és az abszorbanciát (λ620) spektrofotométer alapú mikrolemez-leolvasóval (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm nm-rel határoztuk meg. Alternatív megoldásként a szúnyogokat 1 ml desztillált vízben őröltük, amelyből 900 µl-t egy küvettába vittünk át spektrofotométeres analízishez (UV0,0,0,0 λ 0,0m2; Kista (SE).
A térfogatadatokat egyutas varianciaanalízissel (ANOVA) elemeztük, majd Tukey post hoc páronkénti összehasonlításával (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). A lineáris regressziós elemzések koncentrációfüggő karbamidbevitelt írnak le, és a vemhes-mosószer-keresési válaszokat hasonlították össze a primer-s. .0 Mac-hez, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Körülbelül 20 µl vizeletmintát minden korcsoportból Chromosorb® W/AW-re (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) kötöttünk, és ónkapszulákba (8 mm × 5 mm) kapszuláztuk. , US) a friss és érlelt vizelet nitrogéntartalmának meghatározására a gyártó protokollja szerint. Az összes nitrogént (g N l-1) a standardként használt ismert karbamidkoncentrációk alapján határoztuk meg.
A diéta gazdakereső és vérszívó nőstények túlélésére gyakorolt ​​hatásának felmérésére a szúnyogokat egyenként nagy Petri-csészékbe helyezték (12 cm átmérőjű és 6 cm magas; Semadeni), amelyek fedelén hálóval borított lyukkal (3 cm átmérőjű) helyezték el a szellőztetés és táplálékellátás érdekében. , 10% szacharóz és víz. Minden diétát pipettával pipettáztunk egy fogászati ​​tamponra (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), amelyet egy 5 ml-es fecskendőbe (Thermo Fisher Scientific, Göteborg, SE) helyeztünk, a dugattyút eltávolítjuk, és egy Petri-csésze tetejére helyezzük (1. ábra). egy nap, míg az elhullott szúnyogokat eldobták az utolsó szúnyog elpusztulásáig (n = 40 kezelésenként).A különböző diétákkal táplált szúnyogok túlélését statisztikailag elemezték Kaplan-Meyer túlélési görbékkel és log-rank tesztekkel, hogy összehasonlítsák a diéták közötti túlélési megoszlást (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Egyedi szúnyogrepülő malom Attisano és munkatársai alapján.[17], 5 mm vastag átlátszó akril panelekből (10 cm széles x 10 cm hosszú x 10 cm magas) elülső és hátsó panelek nélkül (3. ábra: felül). Függőleges csőből álló forgócsap, gázkromatográfiás oszlopból (0,25 mm-es ragasztóhosszúságú) függesztve. neodímium mágnesek 9 cm-re egymástól.Egy azonos anyagból (6,5 cm L) készült vízszintes cső kettévágta a függőleges csövet, így egy lekötött kart és egy kart alkotott, amely egy kis darab alumíniumfóliát hordozott fénymegszakító jelként.
A 24 órán át éheztetett nőstényeket a visszatartás előtt 30 percig a fenti diétával adták. A teljesen táplált nőstény szúnyogokat ezután egyenként 2-3 percig jégen érzéstelenítettük, majd méhviasszal rovartűkre rögzítettük (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), majd vízszintes repülési adatokkal rögzítették a malomcsöveket a karokhoz. logger, majd a PC-Lab 2000™ szoftverrel (v4.01; Velleman, Gavere, BE) tároljuk és jelenítjük meg. A gépet klímaszabályozott helyiségben helyezték el (12 óra:12 óra, világos: sötét, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% relatív páratartalom).
A repülési aktivitás mintázatának megjelenítéséhez a teljes repült távolságot (m) és az egymást követő repülési tevékenységek teljes számát 24 órás periódusonként óránként számítottuk ki. Ezenkívül az egyes nők által megtett átlagos távolságokat összehasonlították a kezelések között, és egyirányú ANOVA-val és Tukey post hoc elemzésével (JMP Pro, v14.0.0) elemezték. szövetségese, a körök átlagos számát 10 perces lépésekben számítják ki.
Az étrendnek az An. arabiensis szaporodási teljesítményére gyakorolt ​​hatásának felmérésére hat nőstényt (4 dpe) közvetlenül a Bugdorm ketrecekbe (30 cm × 30 cm × 30 cm) helyeztek át vérvétel után, majd 48 órán át a kísérleti táplálékkal látták el a fent leírtak szerint. A táplálékokat eltávolítottuk, és az ívópoharakat (30 ml; Nolato 20 ml-es cserepes vízzel minden 8. órában minden harmadik napon feltöltöttük) 24 óra. Ismételje meg az egyes táplálkozási rendeket 20-50-szer. A tojásokat minden kísérleti ketrecben megszámoltuk és feljegyeztük. Tojások részmintáit használtuk fel az egyes tojások átlagos méretének és hosszának (n ≥ 200 diétánként) meghatározására Dialux-20 mikroszkóp (DM1000; Ernst, FC Leitzlar, FCzlar, DEzzt Wetlar) segítségével. 0 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). A fennmaradó tojásokat klímaszabályozott helyiségben, normál tenyésztési körülmények között tartottuk 24 órán keresztül, és a közelmúltban kelt első lárvák almintáját mértük (n ≥ 200 diétánként), a fent leírtak szerint. A tojások számát, valamint a tojások és lárvák méretét hasonlítottuk össze egy Pro-J, és Tuho-way-analízissel, Tuho-J és VA kezeléssel. 4.0.0, SAS Institute Inc.).
A friss (mintavétel után 1 órával), 24 óra, 72 óra és 168 óra elteltével elöregedett vizeletből származó fejtér illékony anyagokat a Zebu szarvasmarhákból, Arsi fajokból gyűjtöttünk. A kényelem kedvéért a vizeletmintákat kora reggel gyűjtöttük, miközben a tehenek még az istállóban voltak. A vizeletmintákat minden egyes zsákból 10 ml-ről gyűjtöttük át, majd 10 ml-es 10 am-ideig. s (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 l-es poliamidban fedővel Vinil-klorid műanyag hordókban. Minden egyes szarvasmarha-vizeletmintából vagy közvetlenül (frissen) vagy 24 órás, 72 órás és 168 órás, szobahőmérsékleten történő érlelés után gyűjtöttük össze a fejtérben lévő illékony anyagokat.
A fejtérben lévő illékony anyagok összegyűjtésére zárt hurkú rendszert használtunk, hogy egy aktív szénnel szűrt gázáramot (100 ml/min-1) egy poliamid zacskón keresztül 2,5 órán keresztül keringessünk az adszorpciós oszlopba membrános vákuumszivattyú (KNF Neuberger, Freiburg, DE) segítségével. 5 cm x 3 mm átmérőjű) 35 mg Porapak Q-t (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, USA) tartalmazott az üveggyapot dugók között. Használat előtt az oszlopot 1 ml újradesztillált n-hexánnal (Merck, Darmstadt, DE) és 1 ml adszt.b0%-os pentánnal öblítettük át. 400 μl pentánnal eluáltuk. A Headspace gyűjteményeket összegyűjtöttük, majd -20°C-on tároltuk a további elemzésig.
Gazdakereső és vérevő An.Headspace illékony kivonatokat friss, 24 órás, 72 órás és 168 órás korú vizeletből gyűjtött viselkedési válaszok Arabidopsis szúnyogok illékony kivonataira elemezték egyenes üvegcsöves olfactométer segítségével [18]. A kísérleteket végeztük. 19].Egy üvegcső olfactometer (80 cm × 9,5 cm id) volt megvilágítva 3 ± 1 lx vörös fénnyel felülről.Szénnel szűrt és párásított levegőáram (25 ± 2 °C, 65 ± 2% egyenletes relatív páratartalom) a bioassay-t 30 cm-es szűrőn és 1-es áramlási sebességgel acél nélküli szitán bocsátották át. tollazat szerkezete.Fogászati ​​tampon adagoló (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), az olfaktométer szél felőli végén lévő 5 cm-es tekercsre felfüggesztve, 5 percenkénti stimulátorcserével. Az elemzéshez minden fejtérkivonatból 10 μl-t, 1:10 arányban hígítva használtunk kontrollingerként.egyenlő mennyiségű vért. 2-3 órával a kísérlet megkezdése előtt a kiengedő ketrecbe helyeztük. A kibocsátó ketrec az olfactométer hátszél oldalára került, és a szúnyogokat 1 percig hagytuk akklimatizálódni, majd a ketrec pillangószelepét kinyitottuk, hogy kiszabaduljanak. A kezeléshez vagy a védekezéshez való vonzerőt aszerint elemeztük, hogy a kivonat 5 percen belül a kivonat mennyisége a szúnyogokkal érintkezett. legalább 30-szor elfogyasztottuk, és egy nap hatásainak elkerülése érdekében minden kísérleti napon ugyanannyi kezelést és kontrollt teszteltünk. Válaszok keresése a gazdaszervezettől és a vérrel táplált Ans.Arab versus headspace sorozatokat nominális logisztikus regresszióval, majd páronkénti összehasonlítással elemeztük a páratlan arányok tekintetében (JMP Pro, SAS Institute Inc., v14.0.0,).
An ívási reakciója. A friss és idős tehénvizeletből származó fejtérkivonatokat Bugdorm ketrecekben (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science) elemezték. Műanyag csészéket (30 ml; Nolato Hertila) töltöttek meg 20 ml desztillált vízzel, biztosítva az ívási szubsztrátumot, és a csésze ellentétes sarkaiba helyezték. μl mindegyik fejtérkivonatból 1:10-es hígításban. Egyenlő mennyiségű pentánt használtunk a kontrollcsésze beállításához. A kezelő- és kontrollcsészéket az egyes kísérletek között felcseréltük a helyzethatások ellenőrzésére.Tíz vérrel táplált nőstényt kísérleti ketrecekbe engedtünk ZT 9-11-nél, és 24 órával később megszámoltuk a csészékben lévő tojásokat (a kezelés indexe: a kezelési kehely számának képlete: kontrollpohárba rakott tojások)/(az összes lerakott tojások száma).Minden kezelést 8-szor megismételtünk.
A nőstény An. arabiensis gázkromatográfiás és elektronantenna mintázat-detektáló (GC-EAD) analízisét a korábban leírtak szerint végeztük [20]. Röviden összefoglalva, a friss headspace illékony kivonatokat Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) segítségével választottuk el HP-5 oszloppal (30 m. noológiák).és öregedő vizelet.A mozgófázisként hidrogént használtunk 45 cm s-1 átlagos lineáris áramlási sebességgel.Minden mintát (2 μl) 30 másodpercig injektáltunk splitless módban, 225 °C bemeneti hőmérséklettel.A GC sütő hőmérsékletét 35 °C-ról (3 perces tartás) 30 perc tartásra (10 perc tartás) 310 eft-re programoztuk. fluent splitter, 4 psi nitrogént adtunk hozzá, és 1:1 arányban elosztottuk egy Gerstel 3D/2 alacsony holttérfogatú keresztben (Gerstel, Mülheim, DE) a lángionizációs detektor és az EAD között. Az EAD GC kifolyó kapillárisát Gerstel ODP-2 átvezető kemencén vezettük át, cm, ahol a hőmérséklet egy G °1 C-os csőbe, ahol a hőmérséklet plusz 5 mm volt az üvegbe. szénszűrős, párásított levegő (1,5 l min−1). Az antennát a cső kimenetétől 0,5 cm-re helyeztük el. Minden egyes szúnyog egy ismétlődést jelentett, a gazdakereső szúnyogok esetében pedig legalább három ismétlést végeztünk minden korú vizeletmintán.
Bioaktív vegyületek azonosítása friss és idős szarvasmarha-vizelet fejtér-gyűjteményében kombinált GC és tömegspektrométer (GC-MS; 6890 GC és 5975 MS; Agilent Technologies) segítségével, antennaválaszok kiváltására GC-EAD analízisben, elektronütközéses ionizációs üzemmódban üzemelve, 70 C-5V-n, a HP-szilícium eV-n. (60 m × 0,25 mm belső átmérő, 0,25 μm filmvastagság) mozgófázisként héliumot használva 35 cm s-1 átlagos lineáris áramlási sebességgel. 2 μl-es mintát fecskendeztünk be ugyanazokkal a befecskendező beállításokkal és sütő hőmérséklettel, mint a GC-EAD analízisnél. A vegyületek azonosítása az N-könyvtár és az egyéni Kovátralent1 alapján történt (az egyedi könyvtár retenciós idejével és4IST) ).Az azonosított vegyületeket hiteles standardok injektálásával igazoltuk (1. további fájl: S2 táblázat). A mennyiségi meghatározásához heptil-acetátot (10 ng, 99,8%-os kémiai tisztaság, Aldrich) fecskendeztünk be külső standardként.
A friss és elöregedett vizeletben azonosított bioaktív vegyületeket tartalmazó szintetikus szagkeverék hatékonyságának értékelése a gazdakereső és vérszívó Ans.arabiensis vonzására, ugyanazzal a szaglásmérővel és protokollal, mint a fenti. A szintetikus keverékek utánozták a vegyületek összetételét és arányait kevert fejtérben, 24-24 órás, 24-7 órás friss illékony kivonatban. 68 órás öregedési vizelet (5D-G. ábra; 1. további fájl: S2 táblázat). Az elemzéshez használjon 10 μl 1:100 arányú, teljesen szintetikus keveréket, amelynek teljes felszabadulási sebessége körülbelül 140-2400 ng h-1, az elvégzett keverék vonzerejének értékeléséhez, amely a gazdatest és a vér szubsztranciáját fejezi ki. A teljes keverék egyes vegyületeinek iv keverékeit eltávolítjuk. Válaszok keresése a gazdaszervezettől és a vérrel táplált Ans-tól. Az arab kontra szintetikus és szubtraktív keverékeket nominális logisztikus regresszióval, majd páronkénti összehasonlítással elemeztük a páratlan arányok tekintetében (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Annak felmérésére, hogy a tehénvizelet szolgálhat-e a maláriás szúnyogok élőhelyeként, a fent leírt módon összegyűjtött friss és idős tehénvizeletet és vizet hálós 3 literes vödrökbe (100 ml) helyeztük, és csalicsapdákba helyeztük.(BG-HDT verzió; BioGents, Regensburg, DE).Tíz csapda egymástól 50 m-re a legelőn, 400 m-re a faluközösségtől (Silay, Etiópia, 5°53´24´´E, 37°29´24´´E) és nincs szarvasmarha, állandó tenyésztési helyen és falvakban. Öt csapdát szimuláltak, míg E csapdát nem kezelték. Összesen öt éjszakán át éjszakánként forgatják. A különböző korú vizelettel csalizott csapdákban elfogott szúnyogok számát logisztikus regresszióval hasonlítottuk össze béta-binomiális eloszlással (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Egy malária endémiás faluban, Maki város közelében, Oromia régióban, Etiópiában (8° 11′ 08″ é. 38° 81′ 70″ K; 6A ábra). A vizsgálatot augusztus közepe és szeptember közepe között végezték, mielőtt az éves beltéri maradék csapadékos permetezést, valamint egy 5 m2-es szakaszon elhelyezkedő házat. A vizsgálathoz a falu külterületét választották ki (6A. ábra). A házak kiválasztásánál a kritériumok a következők voltak: a házban tilos állatokat bevinni, tilos benti főzés (tűzifa vagy faszén húzása) (legalábbis a próbaidőszak alatt), valamint olyan házak, amelyekben legfeljebb két lakos található, és rovarölő szerben alszanak.a kezelt szúnyogháló alatt.Az etikai engedélyt az Addis Abebai Egyetem Természettudományi Karának (CNS-IRB) Intézeti Kutatási Etikai Felülvizsgáló Testülete (IRB/022/2016) adta ki az Orvosok Világszövetsége Helsinki Nyilatkozatában meghatározott irányelveknek megfelelően.Minden háztartásfő hozzájárulását a teljes körzeti adminisztráció munkatársainak közreműködésével szerezték meg. .A kísérleti terv 2 × 2 latin négyzetes elrendezést követett, amelyben szintetikus keverékeket és kontrollokat rendeltek a párosított házakhoz az első éjszaka, és a következő kísérleti éjszakán felcserélték a házak között. Ezt a folyamatot tízszer megismételték. Ezenkívül a kiválasztott házak szúnyogaktivitásának becsléséhez a CDC csapdákat úgy állítottuk be, hogy öt egymást követő napon futjanak a mező elején, középső éjszakáján és végén.
Hat bioaktív vegyületet tartalmazó szintetikus keveréket feloldottunk heptánban (97,0%-os oldószer GC minőségű, Sigma Aldrich), és 140 ng óra/1 sebességgel szabadítottuk fel pamutkanóca-adagoló segítségével [20]. A kanócaadagoló lehetővé tette az összes vegyület állandó arányban történő felszabadulását a 12 órás kísérlet során. A kontrollt a következő lépésben a belépés előtti szuszpendálási pontként alkalmaztuk, és a vitalt használtuk az adagolási pontként. (CDC) fénycsapda (John W. Hock Company, Gainesville, FL, USA; 6A ábra). A csapdákat 0,8-1 m-re a föld felett, az ágy lábához akasztották, és egy önkéntes kezeletlen szúnyogháló alatt aludt, és 18:00 és 06:30 között működtették. 1]-t ezután polimeráz láncreakciós (PCR) analízissel szűrtük, hogy azonosítsuk a morfológiailag A. gambiae sl.-ként azonosított fajt. A komplexum tagjai [23]. A terepi vizsgálatban a párosított házak csapdázását elemezték nominális logisztikai illeszkedési modell segítségével, ahol a vonzás volt a függő változó, és a kezelés (szintetikus keverék hatás ®1 vs. J.0.0 kontroll) volt.0. SAS Institute Inc.).Itt közöljük a valószínűségi arány tesztjének χ2 és p-értékeit.
Értékelje, hogy biztonságos-e. Az arabiensis képes volt vizeletet, fő nitrogénforrását, a karbamidot közvetlen etetéssel nyerni a beadást követő 48 órán belül a (dpe) gazdakereső és a vérrel táplált nőstény táplálkozási kísérletek után 4 napon keresztül (1A ábra). Mind a gazdakereső, mind a vérszívó nőstények, mint bármely más diéta, szignifikánsan több vizet szívtak fel (5,0 vagy2)5,0. p < 0,0001 és F(5,299) = 56,00, p < 0,0001; 1B, C. ábra. Ezenkívül a gazdakereső nőstények kevesebbet ettek vizeletből 72 óra elteltével, mint a 168 óra elteltével (1B ábra). mM az összes többi koncentrációhoz és a vízhez képest, bár nem különböztethető meg a 10%-os szacharóztól (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; 1D ábra). Ez ellentétben állt a vérrel táplált nőstények reakciójával, akik jellemzően szignifikánsan több karbamid tartalmú táplálékot szívtak fel, mint vizet, bár 10% szignifikánsan kevesebb szacharózt (5,5% (5%),10,5. p < 0,0001; 1. ábra).1E).Továbbá a két fiziológiás állapot összehasonlításakor a phlebotomizált nőstények a legalacsonyabb koncentrációban több karbamidot szívtak fel, mint a gazdakereső nőstények, és ezek a nőstények is hasonló mennyiségű karbamidot szívtak fel magasabb koncentrációban (F(1,953)= p < 7010,8.0).1F., G. ábra). Míg a karbamidtartalmú étrendből való bevitel optimálisnak tűnt (1D, E ábra), a nőstények mindkét fiziológiás állapotban képesek voltak log-lineáris módon módosítani a felszívódott karbamid mennyiségét a karbamidkoncentráció teljes tartományában (1F, G ábra).Hasonlóan úgy tűnik, hogy a szúnyogok a felszívódott vizelet mennyiségének szabályozásával szabályozzák nitrogénfelvételüket, mivel a vizeletben lévő nitrogén mennyisége tükröződik az abszorbeált mennyiségben (1B, C és B ábra).
A vizelet és a karbamid gazdakereső és vérszívó szúnyog túlélésre gyakorolt ​​hatásának felmérésére a nőstényeket mind a négy életkorban (friss, 24 óra, 72 óra és 168 órával a lerakódás után) etettük, és számos karbamid-koncentrációt, valamint desztillált vizet és 10 %-os szacharózt mutattak ki (ez az étrend szignifikáns hatását mutatta ki). túlélés gazdát kereső nőstényekben (vizelet: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; karbamid: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; 2B, C ábra) és vérrel táplált nőstényekben (vizelet: 9f χ2 = 0,0, 0,0 . karbamid: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; 2D,E ábra).Minden kísérletben a vizeletből, karbamidból és vízzel táplált nőstények túlélési aránya szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a szacharózos diétával etetett nőstények (2B-E. ábra). d 72 órás állott vizelet (p = 0,016), amely a legalacsonyabb túlélési valószínűséggel (2B. ábra). Ezenkívül a 135 mM karbamiddal táplált gazdakereső nőstények tovább éltek, mint a vizes kontrollok (p < 0,04) (2B ábra).2C).A vízzel összehasonlítva a friss vizelettel és 24 órás vizelettel etetett nők tovább éltek túl (p = 0,001 és p = 0,012; 2D ábra), míg a 72 órás vizelettel táplált nők tovább éltek, mint azok, akiket rövid friss vizelettel és 24 órás korú nőkkel ettek (p <1 p 0,3 ábra, 0,1 p = 0.1. ábra). 2D). 135 mM karbamiddal táplálva a vérrel táplált nőstények tovább élték túl a karbamid és a víz összes többi koncentrációját (p < 0,013; 2E. ábra).
A tehénvizeletből és karbamidból táplálkozó gazda- és vérszívó nőstény Anopheles arabinis túlélése. A bioassay-ben (A) a nőstény szúnyogok táplálékot kaptak friss és idős tehénvizeletből, különböző koncentrációjú karbamidból, szacharózból (10%) és desztillált vízből (H2O). 2 óra, amíg a vizelettel (B, D) és karbamiddal (C, E), valamint a kontrollok, szacharózzal és vízzel táplált összes nőstény elpusztul.
A repülési malom tesztben 24 órás periódus alatt meghatározott teljes távolság és körök száma különbözött a gazdakereső és a vérszívó szúnyogok között, amelyek összességében kisebb repülési aktivitást mutattak (3. ábra). A friss és idős vizeletet vagy szacharózt és vizet biztosító gazdakereső szúnyogok eltérő repülési mintázatot mutattak (3. ábra), míg a nőstények frissen táplálkoztak, 2 és 4 nőstények voltak aktívak. 168 órás életkor A vizelettel táplálkozó szúnyogok eltérő repülési mintázatot mutattak, és elsősorban nappaliak voltak. A szacharózt vagy 72 órás vizeletet adó nőstény szúnyogok a 24 órás periódus alatt, míg a vizet adó nőstények a középső időszakban voltak aktívabbak. A 72 órás korú vizelet aktivitása 24 óra alatt folyamatosan csökkent (3. ábra).
Tehén vizeletből és karbamidból táplálkozó vadászkereső vérszívó nőstény Anopheles arabinis repülési teljesítménye. A repülési malom tesztben nőstény szúnyogokat friss és kiöregedett tehénvizeletből, különböző koncentrációjú karbamidból, szacharózból (10%) és desztillált vízből (H2O) kötöttek vízszintes (vér-forgó) gazdákhoz (jobbra forgó) ) nőstények esetében a teljes távolságot és az óránkénti repülések számát az egyes diétákhoz egy 24 órás időszak alatt rögzítették (sötét: szürke; világos: fehér).Az átlagos távolság és a rohamok átlagos száma a cirkadián aktivitási grafikontól jobbra látható. A hibasávok az átlag standard hibáját jelzik. Statisztikai elemzés lásd a szöveget
Általánosságban elmondható, hogy a gazdakereső nőstények teljes repülési aktivitása hasonló mintát követett, mint a repülési távolság 24 órás periódusa során. Az átlagos repülési távolságot szignifikánsan befolyásolta az elfogyasztott táplálék (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), a gazdakereső nőstények pedig 72 órányi vizeletet nyeltek el, összehasonlítva az összes többi szignifikánsan hosszabb diétával. az ed szúnyogok tovább repültek, mint a frissen (p = 0,022) és a 24 órás vizeletben (p = 0,022) táplált szúnyogok. A vizelet-diéta által leírt repülési aktivitási mintázattal ellentétben a karbamiddal táplált gazdakereső nőstények tartós repülési aktivitást mutattak a 24 órás periódus második felében (a második szakaszban a sötét mintázat 3 felében). a karbamiddal táplált nőstények szignifikánsan megnövelték az átlagos repülési távolságot az elnyelt koncentrációtól függően (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). A gazdát kereső nőstények, akiket bármilyen koncentrációjú karbamiddal etettek, tovább repültek, mint a vízzel vagy szacharózzal táplált nőstények (p < 0,03).
A vérszívó szúnyogok összesített repülési aktivitása stabil volt és 24 órán át fennmaradt az összes diéta mellett, a vizelet aktivitása megnövekedett a sötét időszak második felében a vízzel táplált nőstényeknél, valamint a frissen táplált és 24 órás nőstényeknél (3. kép). Míg a vizelet-étrend jelentősen befolyásolta a vérrel táplált nőstények átlagos repülési távolságát (F(3).0,0,0,413), a diéta nem (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .egyéb vizelettel és kontroll étrenddel (friss, p = 0,0091; 72 óra, p = 0,0022; 168 óra, p = 0,001; szacharóz, p = 0,0017, 6 = 0,0017, 6 = 0,0017).
A vizelet és a karbamid etetés szaporodási paraméterekre gyakorolt ​​hatását tojásrakási biológiai tesztekkel (4A. ábra) értékelték, és az egyes nőstények által lerakott peték száma, a tojás mérete és az újonnan kikelt első lárvák száma alapján. A lerakott peték száma.Vizelettel táplált arab nőstények étrendenként változtak (F(5,42.402) = F,42.308) ).A 24 órás vizelettel, vérliszttel táplált nőstények szignifikánsan több tojást raktak le, mint a más vizeletételekkel táplált nőstények, és hasonlóak voltak a szacharózzal etetett nőstényekéhez (4B. ábra). Hasonlóképpen a vizelettel táplált nőstények által lerakott tojások mérete diétánként változott (F(5, 209) = 12,85, .20ed-40ed-40. szignifikánsan nagyobb tojásokat tojtak, mint a vízzel táplált nőstények, míg a 168 óra vizelettel táplált nőstények petéi szignifikánsan kisebbek voltak (4C. ábra). Ezen túlmenően a vizelet étrend jelentősen befolyásolta a lárva méretét (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), és szignifikánsan nagyobb lárvák keltek ki a 2-24 tojásból. mint a peték lárváiból lerakott petékből.Vízzel táplált és 168 órás vizelettel táplált nőstények (4D. ábra).
A tehénvizeletből és karbamidból táplálkozó nőstény Anopheles arabinis szaporodási teljesítménye. A vérrel táplált nőstény szúnyogokat friss és idős tehénvizeletből, különböző koncentrációjú karbamidból, szacharózból (10%) és desztillált vízből (H2O) tartalmazó étrenddel etettük 48 órán keresztül, mielőtt a biológiai vizsgálatba (AB méretű tojás) (Egg-4 óra) kerültek (Egg-4 óra). , F) és a lárvák méretét (D, G) szignifikánsan befolyásolta a táplálék (tehén vizelet: BD; karbamid: EG). A különböző betűnevekkel mért paraméterek átlagai szignifikánsan különböztek egymástól (egyutas ANOVA Tukey post hoc analízisével; p < 0,05). A hibasávok az átlag standard hibáját jelentik.
A karbamid, mint a vizelet fő nitrogéntartalmú komponense, vérrel táplált nőstények táplálékaként minden vizsgálatban szignifikánsan befolyásolta a szaporodási paramétereket. A karbamiddal táplált nőstények által lerakott tojások száma vérétel után, a karbamidkoncentrációtól függően (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0000,0001 m3 µ1 urea nőstény urea) M több tojást rakott (4E. ábra). A 134 µM vagy annál nagyobb karbamidkoncentrációval táplált nőstények nagyobb tojásokat tojnak, mint a vízzel táplált nőstények (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; 4F. ábra), és a lárvaméretet, bár hasonló karbamidkoncentráció befolyásolja őket (F(1,0,9), anyákban <3,0.0) 001) változékonyabb volt (4G. ábra).
Általános vonzereje a gazdakereső szarvasmarha-vizelet fejtér illékony kivonatai számára. Az üvegcső olfactométerben mért arabiiensist (5A. ábra) szignifikánsan befolyásolta a vizelet életkora (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; 5B ábra). minden egyéb kezelés (72 óra: p = 0,0060, 168 óra: p = 0,012, pentán: p = 0,00070), Kivéve a friss vizelet szagát (p = 0,13; 5B. ábra). Bár a vérszívó szúnyogok általános vonzása nem volt szignifikánsan különbözik a vizelet szagától (χ = 8 = 8, χ = 8 = 8, χ = 8 = 8). 067; 5C. ábra), ezek a nőstények szignifikánsan vonzóbbnak bizonyultak a headspace illékony kivonatai számára, mint a 72 órás idős vizelet a kontrollokhoz képest (p = 0,0066; 5C ábra).
Viselkedési reakciók a természetes és szintetikus tehénvizelet szagára a gazdaszervezet és a vérrel táplált Anopheles arabianus keresésében. Az üvegcső olfactométer vázlata (A). A friss és idős tehénvizeletből származó fejtér illékony kivonatainak vonzása a gazdaszervezethez (B) és a vérszívó (C) kivonat a gazdaszervezethez (B) és a friss szúnyogokból izolált reakció. Az óra (E), a 72 órás (F) és a 168 órás (G) idős tehénvizelet látható. Az elektronantenna-detektálás (EAD) nyomai a gázkromatográfról eluált fejtérben lévő bioaktív vegyületek hatására bekövetkező feszültségváltozásokat mutatják, amelyeket lángionizációs detektor (FID) detektál. A skála oszlop a retenciós idő és a kibocsátási sebesség (µV) tulajdonságait reprezentálja. A biológiailag aktív vegyületek g h-1) értéke látható.Egyetlen csillag (*) konzisztens alacsony amplitúdójú választ jelöl.Kettős csillagok (**) reprodukálhatatlan reakciókat jeleznek.A gazdaszervezet (H) és a vérszívó (I) keresése. egyéb (egyirányú ANOVA Tukey post hoc elemzésével;p < 0,05). A hibasávok a skála standard hibáját jelzik
Nőstény Ann.arabiensis, 72 órával és 120 órával a vérliszt után, az ívás során, nem mutattak előnyt a friss és idős tehénvizeletből származó illékony kivonatok számára a pentán kontrollokhoz képest (χ2 = 3,07, p> 0,05; További fájl 1: S1 ábra).
A nőstény Ann.arabiensis esetében a GC-EAD és a GC-MS elemzések nyolc, hat, három és három bioaktív vegyületet azonosítottak (5D-G. ábra). Bár az elektrofiziológiai reakciókat kiváltó vegyületek számában különbségeket figyeltek meg, ezeknek a vegyületeknek a többsége minden egyes fejtérben jelen volt a friss és idős vizeletből gyűjtött illóanyag-kivonatban. Ezért a fenti extraktumokból csak azok a vegyületek származnak, amelyek a fenti kivonatból származnak. tartsa bekerült a további elemzésekbe.
A bioaktív vegyületek teljes illékony felszabadulási sebessége a headspace gyűjteményben a friss vizeletben mért 29 µg h-1-ről 242 µg h-1-re nőtt a 168 órás idős vizeletben, elsősorban a p-krezol és az m-formaldehid hatására A fenol, valamint a fenol mennyisége nő. vizelet életkora, amely összefüggést mutatott a jelintenzitás (bőség) megfigyelt csökkenésével a kromatogramon (5D. ábra)-G bal oldali panel) és az ezekre a vegyületekre adott fiziológiai válaszokkal (5D-G ábra jobb oldali panel).
Összességében elmondható, hogy a szintetikus keverék hasonló természetes arányú bioaktív vegyületeket tartalmaz a friss és érlelt vizelet fejtereinek illékony kivonataiban (5D–G. ábra), és a jelek szerint nem váltott ki jelentős vonzerőt a gazdakeresés során (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; 5H ábra) 4, p = 0,30; 5I. ábra). A kezelések utólagos páronkénti összehasonlítása azonban azt mutatta, hogy a gazdakereső szúnyogok szignifikánsan vonzóak voltak a 24 órás idős vizelet szintetikus keverékéhez képest a pentán kontrollokhoz képest (p = 0,0086; 5H ábra).
A 24 órás korú vizelet szintetikus keverékeiben az egyes komponensek szerepének felmérésére hat kivonó keveréket értékeltek a teljes keverékekkel szemben az Y-cső vizsgálatban, amelyben az egyes vegyületeket eltávolították. Gazdakereső szúnyogok esetében az egyes vegyületek kivonása a teljes keverékből szignifikáns hatással volt a viselkedési válaszokra (χ2 = 19,10 = 19,63 ábra). 2A), az összes kivonó keverék vonzóbb volt, mint a Kisebb, mint a teljesen kevert. Ezzel szemben az egyes vegyületek teljesen szintetikus keverékből való eltávolítása nem befolyásolta a vérszívó szúnyogok viselkedési reakcióit (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), kivéve a decanal, amely alacsonyabb keveréket eredményezett, mint az S.0;2 ábra.
Egy malária endémiás etiópiai faluban tíz éjszakán keresztül értékelték a 24 órás tehénvizelet szintetikus keverékének hatásosságát a szúnyogcsábításban szántóföldi körülmények között (6A. ábra). Összesen 4861 szúnyogot fogtak be és azonosítottak, amelyek 45,7%-a Anthropus.g,sambiesslèslèslèslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèsslèss1861 szúnyogot összesen 4861 szúnyogot fogtak be és azonosítottak. 35,4%-a volt Culex spp. (1. további fájl: S1 táblázat). Az Anopheles arabinis az egyetlen PCR-analízissel azonosított An.Gambian fajkomplexum tagja. Átlagosan 320 szúnyogot fogtak be éjszakánként, ezalatt az idő alatt a szintetikus keverék csalikkal ellátott csapdák több szúnyogot fogtak ki, mint a páros csapdák keverék nélkül, 0,0.0,0. 01) .Nem csalival ellátott csapdákat helyeztek ki mind az öt kontrolléjszakán a kísérlet elején, közepén és végén. Hasonló számú szúnyogot fogtak be minden csapdapárban, ami azt jelzi, hogy nincs torzítás a házak között (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p> 0,0 csapdák száma a vizsgálati időszakban, és a szúnyogok száma 0,0. a szintetikus keveréket tartalmazó csapdákban szignifikánsan megnőtt: gazdakeresés (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), friss véretetés (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) és terhesség (χ2(0, 228) , p = 60.01. további fájl: S1 táblázat). Ez a befogott szúnyogok teljes számában is megmutatkozik: gazdakereső > vérszívó > vemhes > félterhes > hím.
Egy 24 órás szintetikus tehénvizelet-szagkeverék hatékonyságának helyszíni értékelése. A terepi kísérleteket Dél-Közép-Etiópiában (térkép) végezték Maki város közelében (beszúrva), a Centers for Disease Control (CDC) fénycsapdájával (jobbra) párosított házakban, egy CD-sodort képpel vonzzák a négyzet alakú képpel (a-sbaynitthe) a nőstényt. opheles arabesques (B), de nem Anopheles farroes (C), más módon fiziológiás állapotfüggő hatás. Ezen túlmenően ezek a csapdák jelentősen megnövelték a gazda Culex szúnyogok számát.(D) A kontrollhoz képest. A bal oldali oszlopok az illatosító párokban fogott szúnyogok átlagos szelekciós indexét jelzik. az átlagos szelekciós indexet képviselik a kontrollcsapda párokban (nyitott; N = 5).).A csillagok statisztikai szignifikancia szinteket jelölnek (*p = 0,01 és ***p < 0,0001)
A három fajt eltérően fogták be szintetikus keverékeket tartalmazó csapdákba. Gazdát keresünk (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), vért táplálunk (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) és vemhességet (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) sis csapdába esett a szintetikus keveréket kibocsátó csapdában (6B. ábra), míg az An mennyisége nem különbözött.Különböző fiziológiás állapotú Pharoensist találtak (6C. ábra). A Culex esetében csak a szintetikus keverékkel csalizott csapdákban tapasztaltak szignifikáns növekedést a gazdát kereső szúnyogok számában (6B) 6D. ábra), összehasonlítva a kontrollcsapdákkal.
Az etiópiai tenyészhelyek és vidéki közösségek között a potenciális gazdákon kívül elhelyezett csalicsapdákat használták annak felmérésére, hogy a maláriás szúnyogok használják-e a tehénvizelet szagát a gazdaszervezet élőhelyére utaló jelként. Gazdajelek, hő hiányában, valamint a tehénvizelet szagának jelenlétével vagy anélkül, nem rögzítettek szúnyogokat (további ábra a cowH1:owe és a cowH magas hőmérsékletéről). A nőstény maláriás szúnyogokat vonzotta és elfogta, bár kis számban, függetlenül a vizelet életkorától (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; 1. további fájl: S3 ábra). Ezzel szemben a vízkontrollok nem rögzítették a maláriás szúnyogokat magas hőmérsékleten (1. további fájl: S3 ábra).
A maláriás szúnyogok nitrogéntartalmú vegyületeket szereznek be és osztanak szét a tehénvizeletből (pl. tócsákból) történő kompenzációs táplálás révén, hogy más rovarokhoz hasonlóan javítsák az élettörténeti jellemzőket [2, 4, 24, 25, 26]. A tehénvizelet könnyen elérhető megújuló forrás a vidéki növényzet számára, amely szorosan kötődik a maláriához és a kórokozó-átvivőkhöz. s és ívási helyeket.A nőstény szúnyogok szaglásuk alapján találják meg ezt az erőforrást, és képesek szabályozni a vizeletben lévő nitrogénvegyületek felvételét, beleértve a karbamidot, a vizelet fő nitrogéntartalmú komponensét [15, 16]. A nőstény szúnyog fiziológiás állapotától függően a tápanyagok fokozzák a vizeletben lévő repülést és a túlélést. vérrel táplált egyedek túlélési és szaporodási jellemzői az első gonadotrop ciklusban. Ezért a vizelet keverése fontos táplálkozási szerepet játszik az alultáplált felnőttekhez hasonlóan zárt malária vektorok számára [8], mivel lehetővé teszi a nőstény szúnyogok számára, hogy fontos nitrogéntartalmú vegyületeket szerezzenek be azáltal, hogy részt vesznek az alacsony kockázatú szaporodási tevékenységben, a várható élettartam növekedésben, az összes táplálkozásban. amelyek a vektorkapacitást befolyásolják.Továbbá ez a viselkedés a jövőbeli vektorkezelési programok célpontja lehet.