A Javascript jelenleg le van tiltva az Ön böngészőjében. A webhely egyes funkciói nem működnek, ha a JavaScript le van tiltva.
Regisztráljon konkrét adataival és az érdeklődésre számot tartó gyógyszerrel, és mi az Ön által megadott információkat összepárosítjuk kiterjedt adatbázisunk cikkeivel, és azonnal elküldjük Önnek egy PDF-másolatát e-mailben.
Szereplők: Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 6, 7, Catellalin Egyetem és Catellalini Medicina és Livia21 Tanszék, Livia21 , 95123, Olaszország;2 Kísérleti Onkológiai és Hematológiai Központ, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Olaszország;3 Orvosi Onkológia, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Olaszország;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Olaszország;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Olaszország;6 Catania Egyetem Orvosbiológiai és Biotechnológiai Tudományok Tanszéke, Orvosi Genetika, Catania, Olaszország, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Olaszország Kommunikáció: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-mail [email protected];[email protected] Cél: Csíravonal-mutációk a BRCA1-ben és BRCA2-ben, valamint megállapított emlőrák (BC), petefészekrák (OC) és egyéb, a rák élethosszig tartó kockázatával kapcsolatos. A BRCA-gén tesztelése kulcsfontosságú az egyéni kockázat felmérésében, valamint a megelőzési módszerek megtalálásában egészséges hordozóknál és a rákos betegek kezelésének testreszabásában. szicíliai családokban a patogén variánsok hiányoznak, a kifejezetten kelet-szicíliai populációkat célzó tanulmányok hiányoznak. Vizsgálatunk célja az volt, hogy megvizsgáljuk a BRCA patogén csíravonal elváltozások előfordulását és eloszlását Kelet-Szicíliából származó BC-betegek csoportjában, és felmérjük ezek összefüggését a specifikus BC-jellemzőkkel, következő generációs szekvenálás segítségével (Overline proliferation szekvenálás). %) volt BRCA patogén variáns, 17 (49%) BRCA1 és 18 (51%) BRCA2. A BRCA1 elváltozások gyakoriak a tripla negatív BC betegekben, míg a BRCA2 mutációk gyakrabban fordulnak elő a luminalis BC betegekben. A nem hordozókkal összehasonlítva a BRCA1 mutációindexű alanyok szignifikánsan magasabb BRCA1 variánsokkal rendelkeztek. nemzeti státuszát a kelet-szicíliai BC-betegeknél, és megerősítik az NGS-elemzés szerepét az örökletes BC-ben szenvedő betegek azonosításában. Összességében ezek az adatok összhangban vannak a BRCA-szűrést alátámasztó korábbi bizonyítékokkal a rák megfelelő megelőzésére és kezelésére mutációhordozókban.
Az emlőrák (BC) a leggyakoribb rosszindulatú daganat világszerte, és a nőknél a leghalálosabb rák.1 A BC prognózisát és klinikai viselkedését meghatározó biológiai jellemzőket alaposan tanulmányozták és részben tisztázták az idők során. Valójában jelenleg számos helyettesítő markert használnak a BC különböző molekuláris altípusokba való besorolására. Ezek az ösztrogén (ER) és/vagy az ösztrogén (ER) és/vagy az ösztrogén (ER) és/vagy a proliferációs index receptor2, a humán progeszteron növekedési faktor (P) -67 és tumor fokozat (G).2 Ezen változók kombinációja a következő BC-kategóriákat azonosította: 1) A BC-k 75%-át ER- és/vagy PgR-expressziót mutató luminális daganatok tették ki. Ezeket a daganatokat tovább osztották Luminal A-ra, amikor a Ki-67 20% alatt volt és HER2 negatív, valamint a Luminal B, ha a Ki-2 és a feletti 0% volt, ha a Ki-6 vagy afölötti. proliferációs index;2) HER2+ daganatok, amelyek ER és PgR negatívak, de HER2 amplifikációt mutatnak. Ez a csoport az összes emlődaganat 10%-át teszi ki;3) A hármas negatív mellrák (TNBC), amely nem mutat ER és PgR expressziót és HER2 amplifikációt, az emlőrákok körülbelül 15%-át teszi ki.2-4
Ezen BC altípusok közül a tumor fokozata és a proliferációs index olyan keresztmetszeti biomarkereket jelent, amelyek közvetlenül és függetlenül kapcsolódnak a tumor agresszivitásához és prognózisához.5,6
A fent említett biológiai jellemzők mellett az elmúlt néhány évben egyre fontosabbá vált a BC kialakulásához vezető öröklött genetikai elváltozások szerepe.7 10 emlődaganatból körülbelül 1 öröklődik meghatározott gének csíravonal-elváltozásai miatt.8 Két nagy epidemiológiai vizsgálat, amelyben több mint 180 000 nő vett részt A CHK2, PALB2, RAD51C és RAD51D) elsősorban az örökletes BC-ért felelősek. Ezen gének közül a BRCA1 és a BRCA2 (a továbbiakban: BRCA1/2) mutatta a legerősebb korrelációt az emlődaganatok kialakulásával. hasnyálmirigy-, kolorektális és melanoma.13 és 80 éves kor között a BC kumulatív incidenciája 72% a BRCA1 patogén variánsban (PV) szenvedő nőknél és 69% a BRCA2 PV-ben szenvedő nőknél.14
Nevezetesen, egy nemrégiben megjelent publikáció azt sugallja, hogy a BC kockázata a PV típusától függ. Valójában a patogén csonkoló variánsokhoz képest a kirívó missense variánsok, különösen a BRCA1 génben, a BC kockázatának csökkenésével járnak, különösen idősebb nőknél.15
A BRCA1 vagy BRCA2 PV jelenléte eltérő biológiai és klinikopatológiai jellemzőkkel járt.16,17 A BRCA1-hez társuló BC-k általában klinikailag agresszívek, rosszul differenciálódnak és erősen proliferatívak. Ezek a daganatok általában háromszor negatívak és korai életkorban kezdődnek. Ezek a daganatok gyakrabban fordulnak elő a B lumenben, és általában idősebb felnőtteknél fordulnak elő.16-18 A BRCA1 és BRCA2 mutációi megnövelik az érzékenységet a specifikus kezelésekre, beleértve a platina sókat és a célzott gyógyszereket, például a poli(ADP-ribóz) polimeráz inhibitorokat (PARPi).19,20
Az elmúlt néhány évben a következő generációs szekvenálás (NGS) alkalmazása a klinikai gyakorlatban egyre több BC-beteg számára tette lehetővé a rákérzékenységi szindrómák, köztük a BRCA1/2.21 molekuláris vizsgálatát. Ezzel egyidejűleg a családi anamnézisre, demográfiai és klinikopatológiai jellemzőkre vonatkozó pontos kritériumokon alapuló meghatározások megérik az egyének jobb azonosítását. egyes populációkban végzett BRCA1/2-szűréssel összegyűjtve, kiemelve a földrajzi régiók közötti különbségeket.24–27 Bár vannak jelentések a BC kohorszról Nyugat-Szicíliában, kevesebb adat áll rendelkezésre a BRCA1/2 szűrésről a kelet-szicíliai populációban.28,29
Itt ismertetjük a kelet-szicíliai BC-betegek csíravonal BRCA1/2 szűrésének eredményeit, tovább korrelálva a BRCA1 vagy BRCA2 mutációk jelenlétét e daganatok fő klinikopatológiai jellemzőivel.
Retrospektív vizsgálatot végeztek a Policlinico Kórház Kísérleti Onkológiai és Hematológiai Központjában. Rodolico – San Marco in Catania. 2017 januárjától 2021 márciusáig összesen 455 emlő- és petefészekrákos, melanómás, hasnyálmirigy- vagy prosztatarákos beteget irányítottunk át a mi molecularis BR géndiagnosztikai CA/2 vizsgálatban. Helsinki nyilatkozatát, és minden résztvevő írásos beleegyezését adta a molekuláris elemzés előtt.
A BC szövettani és biológiai jellemzőit (ER, PgR, HER2 státusz, Ki-67 és fokozat) core biopsziás vagy műtéti mintákon értékelték, csak az agresszív tumorkomponensek figyelembevételével. Ezen jellemzők alapján a BC-ket a következőképpen osztályozták: luminális A (ER+ és/vagy PgR+, HER2-, B-, B-+ ER,/HER20%), Ki-6,7/7. Ki-67≥20%), luminális B-HER2+ (ER és/vagy PgR+, HER2+), HER2+ (ER és PgR-, HER2+) vagy tripla negatív (ER és PgR-, HER2-).
A BRCA1 és BRCA2 mutációs státuszának felmérése előtt egy onkológusból, genetikusból és pszichológusból álló multidiszciplináris csapat minden egyes betegnél daganatgenetikai konzultációt folytatott a BRCA1 és/vagy BRCA1 jelenlétének meghatározására.vagy a BRCA2 génben a PV magas kockázatával rendelkező egyének.A betegszelekciót az Olasz Orvosi Onkológiai Társaság (AIOM) irányelvei és a helyi szicíliai ajánlások alapján végeztük.30,31 Ezek a kritériumok a következők: (i) a fogékonysági génekben ismert patogén variánsok családtörténete (pl. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) BC-vel rendelkező hímek;(iii) BC-vel és OC-vel rendelkezők;(iv) nők BC <36 év, TNBC <60 év vagy bilaterális BC <50 év;(v) személyes kórtörténet Kr.e. <50 év, és legalább egy elsőfokú rokonság: a) Kr.e. < 50 év;b) nem mucinos és nem borderline OC bármilyen életkorban;c) kétoldalú BC;(d) férfi BC;(e) hasnyálmirigyrák;(f) prosztatarák;(vi) két vagy több BC 50 év feletti személyes anamnézis és BC, OC vagy hasnyálmirigyrák családi anamnézise olyan rokonok esetében, akik egymás elsőfokú rokonai (beleértve azokat a rokonokat is, akikkel a nő első fokú rokonai);(vii) Szervezett megbetegedés és legalább egy elsőfokú rokon személyes története: (a) Kr.e. <50 év;(b) NOC;c) kétoldalú BC;(d) férfi BC;vii. nőstény magas fokú savós OC-vel.
Minden betegtől 20 ml-es perifériás vérmintát vettünk, és EDTA-csövekbe gyűjtöttük (BD Biosciences). A genomiális DNS-t 0,7 ml-es teljes vérmintákból izoláltuk a QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Olaszország) segítségével, a gyártó utasításai szerint, és átengedtük egy Qubitlumo®, SWalométer, The0ificent®, Fishometer, The0ificurmoor3. Végezze el a számszerűsítést.A céldúsítást és a könyvtár-előkészítést az Oncomine™ BRCA Research Assay Chef végzi, készen arra, hogy az Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 készletbe töltsék be az automatizált könyvtár-előkészítéshez a gyártó utasításai szerint. A készlet két multiplex PCR primerkészletből áll, amelyek felhasználhatók az összes BRCA1 (NM_0.007) gén tanulmányozására (NM_0.007) s. Röviden, minden hígított DNS-mintából (10 ng) 15 µl-t adtunk vonalkódos lemezekre a könyvtár előkészítése céljából, és az összes reagenst és fogyóeszközt az Ion Chef™ műszerbe töltöttük. Ezután az automatizált könyvtár-előkészítést és a vonalkódos mintakönyvtár összevonását az Ion Chef™ készüléken végeztük. Waltham, MA, USA) a gyártó utasításai szerint. Végül a könyvtárakat ekvimoláris arányban egyesítjük Ion Chef™ könyvtári mintacsövekben (vonalkódos csövek), és az Ion Chef™ készülékre töltjük. A szekvenálást Ion Torrent S5 (Thermo Scientific) eszközzel (Thermo FisherDaponific (Thermo FisherDaponific5) Thermo Fisher Scientific1) végeztük. Amplicon Suite (SmartSeq srl) és Ion Reporter szoftver.
Minden variáns nómenklatúra követte a Human Genome Variation Consortium aktuális irányelveit, amelyek online elérhetők (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). A BRCA1/2 variánsok klinikai jelentőségét az International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline, https://www.evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant UP) és https://consortiuming.org. , BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD és UMD. Az osztályozás öt különálló kockázati kategóriát foglal magában: jóindulatú (I. kategória), valószínű jóindulatú (II. kategória), bizonytalan jelentőségű változat (VUS, III. kategória), valószínű patogén (IV. kategória) és patogén (a 3. kategória mutációinak és az V. kategóriájú adatbázis-módosítások változásainak elemzésére szolgáló eszköz). .32
Az egyes VUS-ok potenciális klinikai jelentőségének meghatározásához a következő számítási fehérje-előrejelzési algoritmusokat használtuk: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2://) és AVGDh.aghci/Agdh.agnci/. d_input.php).Az 1. és 2. osztályba sorolt ​​változatokat vad típusúnak tekintettük.
A Sanger szekvenálás megerősítette az egyes patogén variánsok jelenlétét. Röviden összefoglalva, egy pár specifikus primert terveztünk minden egyes kimutatott variánshoz a BRCA1 és BRCA2 gén referenciaszekvenciáinak felhasználásával (NG_005905.2, NM_007294.3 és NG_012772.3, NM_012772.3, NM_00005 szekvencia, majd a Sanger szekvenciáját követte. .
A BRCA1/2 génre negatívnak bizonyult betegeket multiplex ligálástól függő próbaamplifikációval (MLPA) teszteltük a gyártó utasításai szerint a nagy genomiális átrendeződések (LGR) jelenlétének felmérése érdekében.Röviden, a DNS-mintákat denaturálják, és legfeljebb 60 BRCA1 és BRCA2 génspecifikus terméket használnak a DNS-szekvencia hosszának meghatározásához. A PCR-amplikonok egyedi készletéből álló fajokat ezután kapilláris elektroforézissel és Cofalyser.Net szoftverrel elemeztük a megfelelő tétel-specifikus Cofalyser táblázatokkal (www.mrcholland.com) együtt.
A kiválasztott klinikopatológiai változókat (szövettani fokozat és Ki-67%-os proliferációs index) a BRCA1/2 PV jelenlétével hozták összefüggésbe, a Prism szoftver v. 8.4-es verziójával, Fisher-féle egzakt teszttel számították ki, feltételezve, hogy a p-érték <0,05 szignifikáns.
2017 januárja és 2021 márciusa között 455 beteget szűrtek ki a csíravonal BRCA1/2 mutációira. Mutációs vizsgálatot végeztek a Policlinico Kórház Kísérleti Onkológiai és Hematológiai Központjában. A szicíliai iránymutatás szerint (http://www.gurs.regione.1ndiceperm,2enerm,2enerm.2enerm. o 2020), a Rodolico of Catania – San Marco” összességében 389 beteg volt mellrák, 37 petefészekrák, 16 hasnyálmirigyrák, 8 prosztatarák és 5 melanoma.A betegek ráktípus és elemzési eredmények szerinti megoszlását az 1. ábra mutatja.
Az 1. ábra a vizsgálat áttekintését bemutató folyamatábrát mutatja. Az emlő-, melanómás, hasnyálmirigy-, prosztata- vagy petefészekdaganatban szenvedő betegeket a BRCA1 és BRCA2 gének mutációira tesztelték.
Rövidítések: PVs, patogén variáns;VUS, bizonytalan jelentőségű változat;WT, vad típusú BRCA1/2 szekvencia.
Vizsgálatainkat szelektíven az emlőrák kohorszokra összpontosítottuk. A betegek átlagéletkora 49 év volt (23-89 év), és túlnyomórészt nők voltak (n=376, vagyis 97%).
Ezen alanyok közül 64-nek (17%) volt BRCA1/2 mutációja, és mindegyik nő volt. Harmincötön (9%) szenvedett PV-t és 29-en (7,5%) VUS-t. A 35 patogén variáns közül tizenhét (48,6%) fordult elő BRCA1-ben, 18 (51,4%) pedig BRCA2-ben, míg 18 (51,4%) BRCA2-ben, míg 18-ban (51,4%) BRCA2-ben, míg 18-ban (8%) VBRUS-ban (8%). BRCA2 (1. és 2. ábra). Az LGR nem volt jelen az MLPA elemzésben.
2. ábra: BRCA1 és BRCA2 mutációk elemzése 389 emlőrákos betegben.(A) A patogén variánsok (PV) (piros), a bizonytalan jelentőségű változatok (VUS) (narancssárga) és a WT (kék) megoszlása ​​389 emlőrákos betegben;(B) 389 emlőrákos beteg 35 (9%) BRCA1/2 patogén variánsa (PV) volt. Közülük 17 (48,6%) volt BRCA1 PV-hordozó (sötétvörös) és 18 (51,4%) BRCA2-hordozó (világosvörös);(C) A 389 alany közül 29 (7,5%) VUS-t, 5 (17,2%) BRCA1 gént (sötétnarancs) és 24 (82,8%) BRCA2 gént (világos narancssárga) hordozott.
Rövidítések: PVs, patogén variáns;VUS, bizonytalan jelentőségű változat;WT, vad típusú BRCA1/2 szekvencia.
Ezt követően a BC molekuláris altípusainak prevalenciáját vizsgáltuk a BRCA1/2 PV-ben szenvedő betegeknél. Az eloszlás 2 (5,7%) luminális A-t, 15 (42,9%) luminális B-t, 3 (8,6%) luminális B-HER2+-t, 2 (5,7%) HER2+-os beteget és 13 (5,7%) HER2+-os beteget és 13 (5,7%) (5,7%) TNBC27,1%-os BR9.1,5m-on NBC. luminalis B BC, 2 (11,8%) HER2+ betegség és 10 (58,8%) TNBC. A BRCA1 mutációt nem tartalmazó daganatok vagy luminális A vagy luminális B-HER2+ voltak (3. ábra). A BRCA2-pozitív alcsoportban 10 (55,6%) B-tumor 10 (55,6%) volt . 6,7%) TNBC és 2 (11,1%) luminális A volt (3. ábra). Ebben a csoportban nem volt jelen HER2+ daganat. Így a BRCA1 mutációk a TNBC betegekben, míg a BRCA2 elváltozások a lumen B egyénekben.
3. ábra Az emlőrák altípusainak prevalenciája a BRCA1 és BRCA2 patogén variánsaiban szenvedő betegeknél. A BRCA1- (sötétvörös) és BRCA2- (világosvörös) PV-k megoszlását bemutató hisztogramok az emlőrákos betegek molekuláris altípusai között. Az egyes mezőkben közölt számok a BRCA1-es és BRCA2-es PV-altípusokban szenvedő betegek százalékos arányát jelzik.
Rövidítések: PVs, patogén variáns;HER2+, humán epidermális növekedési faktor receptor 2 pozitív;TNBC, hármas negatív emlőrák.
Ezt követően felmértük a BRCA1 és BRCA2 PV-k típusát és gén lokalizációját. A BRCA1 PV-ben 7 egynukleotidos variánst (SNV), 6 deléciót, 3 duplikációt és 1 inszerciót figyeltünk meg. Csak egy mutáció (c.5522delG) jelent új felfedezést.A leggyakrabban észlelt cTA503 alany a BRCA1501-ben. Ez a változás magában foglalja öt nukleotid (CTAAT) delécióját a BRCA1 15-ös exonjában, ami a leucin aminosav tirozinnal való helyettesítését eredményezi az 1679-es kodonnál, és a transzlációs kereteltolódás miatt egy előre jelzett alternatív stopkodonnal idő előtti fehérjecsonkításhoz vezet. A PV összes többi esete nem észlelhető. régió (c.4357+1G>T) (1. táblázat).
A BRCA2 PV-vel kapcsolatban 6 deléciót, 6 SNV-t és 2 duplikációt figyeltünk meg. A talált változások egyike sem új. Populációnkban három mutáció ismétlődött, a c.428dup és a c.8487+1G>A 3 alanynál volt megfigyelhető, ezt követte a c.5851_5854del2854del2 ismételt AGTT-eset. A c.8487+1G>A mutáció a BRCA2 intron 19 intron régiójában fordul elő (± 1,2), és befolyásolja a splicing konszenzus szekvenciát, ami megváltozott splicing-ot eredményez, ami abnormális fehérjét eredményez. a BRCA2 gén 10. kódoló exonjában az 5851-5854. nukleotid pozíciókból származó 4 nukleotidos deléció miatt, és transzlációs kereteltolódást eredményez egy megjósolt alternatív stopkodonnal (p.S1951WfsTer). Nevezetesen, amint azt korábban közöltük, a c.631A>0 betegben a c.631A>0>T mutációkat először mutatták ki. Az ion a BRCA2 7-es exonjában az adenozin (A) helyettesítését jelenti egy guanint (G) tartalmazó nukleotiddal, ami a valin izoleucinná történő átalakulását eredményezi a 211-es kodonnál. Az izoleucin Az aminosav nagyon hasonló tulajdonságokkal rendelkező aminosav. Ez a változás a normál mRNS splicinget érinti. A második variáns egy extronikus A1 gén szubsztitúcióját eredményezi BRCA2.A c.7008-2A>T változás több, különböző hosszúságú átiratot generálhat. Ezenkívül a BRCA2 PV-k csoportjában 18 változásból 4 (22,2%) intronikus volt.
Ezt követően feltérképeztük a BRCA1/2 káros mutációkat funkcionális doménekben és fehérjekötő régiókban (4. ábra). A BRCA1 génben a PV-k 50%-a a mellrák cluster régióban (BCCR), míg a mutációk 22%-a a petefészekrák cluster régióban (OCCR) helyezkedett el (a BRCA1 génben a PV 7 %-a, a 4. ábra 4A. és a mutációk 42,8%-a az OCCR-ben helyezkedett el (4B. ábra). Ezt követően felmértük a PV elhelyezkedését a BRCA1 és BRCA2 fehérjedoménen belül. A BRCA1 fehérje esetében három PV-t találtunk a hurok és tekercs doménben, és két mutációt a BRCT doménben, míg a PV mapped doménjében, míg a 4. ábra a BRRC2 doménben (4. ábra a BRRC2 doménben). intronikus és 3 exonikus változást detektáltunk az oligo/oligoszacharid-kötő (OB) és a torony (T) doménben (4B. ábra).
4. ábra A BRCA1 és BRCA2 fehérjék sematikus ábrázolása és a patogén variánsok lokalizációja. Ez az ábra a BRCA1 (A) és BRCA2 (B) patogén variánsok eloszlását mutatja emlőrákos betegekben. Az exonikus mutációkat kék, míg az intron variánsokat narancssárgával jelöljük. Az oszlop magassága az esetek számát jelzi. tartalmaz egy hurokdomént (RING) és egy nukleáris lokalizációs szekvenciát (NLS), egy tekercses domént, egy SQ/TQ cluster domént (SCD) és egy BRCA1 C-terminális domént (BRCT).(B) A BRCA2 fehérje nyolc BRC ismétlődést tartalmaz, egy DNS-kötő domént egy helikális doménnel (Helical), három oligonukleotid domént (anobbinding to LS, anobbinding tofold) a C oldalon.A Breast Cancer Cluster Region (BCCR) és Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) nevű területek alul láthatók.*A stopkodonokat meghatározó mutációkat jelöli.
Ezután megvizsgáltuk a BC klinikopatológiai jellemzőit, amelyek korrelálhatnak a BRCA1/2 PV jelenlétével. Teljes klinikai feljegyzések álltak rendelkezésre 181 BRCA1/2-negatív betegről (nem hordozók) és minden hordozóról (n = 35). Korreláció volt a tumor proliferációs rátája és fokozata között.
A Ki-67 megoszlását kohorszunk mediánja alapján számítottuk ki (25%, tartomány <10-90%). A Ki-67 < 25%-os alanyokat „alacsony Ki-67”-nek, míg a 25% feletti értékkel rendelkező személyeket „magas Ki-67-nek” tekintettük. (5A. ábra).
5. ábra A Ki-67 összefüggése a fokozatok eloszlásával BRCA1 és BRCA2 PV-vel rendelkező és nem emlőrákos nőknél.(A) Boxplot, amely a Ki-67 medián értékeit mutatja 181 nem hordozó BC-betegben a BRCA1-es (18) vagy BRCA2-es (17) PV-betegekkel szemben. A BC-értékek statisztikailag szignifikánsnak tekinthetők a 0,5 B-ig terjedő rákos betegeknél. a BRCA1 és BRCA2 mutációs státusz szerint (WT alanyok, BRCA1 és BRCA2 PV-k hordozói).
Hasonlóképpen megvizsgáltuk, hogy a tumor fokú korrelációt mutat-e a BRCA1/2 PV jelenlétével. Mivel populációnkban hiányzott a G1 BC, ezért a betegeket két csoportra osztottuk (G2 vagy G3). A Ki-67 eredményekkel összhangban az elemzés statisztikailag szignifikáns összefüggést mutatott ki a tumor fokozata és a BRCA1 mutáció között, nagyobb arányban a G3-as tumorok aránya (BRCA1 carriers0 to BRCA1 carriers0) 5B).
A DNS szekvenálási technológia fejlődése példátlan előrelépést tett lehetővé a BRCA1/2 genetikai tesztelésében, ami döntő hatással van azokra a betegekre, akiknek a családjában előfordult rák. A mai napig körülbelül 20 000 BRCA1/2 variánst azonosítottak és osztályoztak az American Society of Medical Genetics 35 és az ENIGMA rendszer szerint. ographic regions.37 Olaszországon belül a BRCA1/2 PV-k aránya 8% és 37% között mozgott, ami nagy országon belüli variabilitást mutat.38,39 Szicília közel 5 millió lakosával Olaszország ötödik legnagyobb régiója a lakosok számát tekintve. Bár léteznek adatok a BRCA1/2 elterjedéséről a keleti szigeten, a keleti szigeten nincs kiterjedt bizonyíték.
Tanulmányunk az egyik első jelentés a BRCA1/2 PV incidenciájáról kelet-szicíliai BC betegekben.28 Elemzésünket a BC-re összpontosítottuk, mivel kohorszunkban ez messze a leggyakoribb betegség.
A 389 BC beteg vizsgálatakor 9%-uk hordozott BRCA1/2 PV-t, egyenletesen elosztva a BRCA1 és BRCA2 között. Ezek az eredmények összhangban vannak az olasz populációban korábban közölt eredményekkel.28 Érdekes módon kohorszunk 3%-a (13/389) férfi volt. Ez az arány magasabb a vártnál a férfi mellrák kockázata alapján (az összes CA-populáció 140%-a a mutáción alapuló emlőrák alapján). Azonban ezeknek a férfiaknak egyikében sem alakult ki BRCA1/2 PV, így további molekuláris analízisre jelölték őket, hogy kizárják többek között a kevésbé gyakori mutációk, mint például a PALB2, RAD51C és D jelenlétét. Az alanyok 7%-ánál bizonytalan jelentőségű variánsokat találtak, amelyekben a BRCA2 VUS nyilvánvaló volt. Még ez az eredmény is konzisztens2241.
Amikor elemeztük a BC molekuláris altípusainak megoszlását BRCA1/2 mutáns nőkben, megerősítettük az ismert összefüggéseket a TNBC és a BRCA1 PV (58,8%), valamint a luminalis B BC és a BRCA2 PV (55,6%) között.16,43 A luminalis A és HER2+ daganatok BRCA1 és BRCA1-ben és a HER2+ daganatokban konzisztensek a létező irodalmi adatokkal3, BRCA244.
Ezután a BRCA1/2 PV típusára és elhelyezkedésére összpontosítunk.Kohorszunkban a leggyakoribb BRCA1 PV kb.5035_5039delCTAAT volt.Bár Incorvaia et al.nem írták le ezt a változatot szicíliai kohorszukban, más szerzők BRCA1 PV csíravonalként számoltak be róla.34 Számos BRCA1 PV-t találtak a mi kohorszunkban – pl. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA és c.5266dupC –, melyeket a c. .5266dupC) általában megtalálható kelet- és közép-európai (Lengyelország, Cseh), szlovén, osztrák, magyar, fehérorosz és német askenázi zsidóknál, 44,45, és az Egyesült Államokban és Argentínában a közelmúltban „visszatérő csíravonal-variánsként” határozták meg BC és OC-ban szenvedő olasz betegeknél korábban. A 34c. ina.Érdekes módon még Incorvaia et al.A c.3253dupA variánst találták néhány cataniai családban.28 A legreprezentatívabb BRCA2 PV-k a c.428dup, c.5851_5854delAGTT és a c.8487+1G>A intronikus variáns, amelyekről részletesebben 28 egy palermói betegnél számoltak be, c.4258dup1AG c.4258dup1AG-ben. Nyugat-Szicília, főként Trapani és Palermo régiókban, míg a kb.5851_5854delAGTT PV-t Szicília északnyugati részén figyelték meg a háztartásokban. A 8487+1G>A változat gyakoribb volt a messinai, palermói és caltanissettai alanyokban.28 Rebbeck et al.Korábban leírták a c.5851_5854delAGTT elváltozást Kolumbiában.37 Egy másik BRCA2 PV-t, c.631+1G>A-t találtak szicíliai BC és OC betegekben (Agrigento, Siracusa és Ragusa).28 Figyelemre méltó, hogy két BRCAG22 variáns együttélését figyeltük meg a 6-70 c. ugyanaz a beteg, akiről feltételeztük, hogy cisz módban szegregált, amint arról korábban is beszámoltunk.34,46 Ezeket a BRCA2 uble mutációkat valóban gyakran megfigyelték az olasz régióban, és azt találták, hogy idő előtti stopkodonokat vezetnek be, befolyásolva a hírvivő RNS splicingot, és a BRCA2 fehérje meghibásodását okozzák.47,48
Feltérképeztük a BRCA1 és BRCA2 PV-ket a fehérjedomének és gének feltételezett OCCR és BCCR régióiban is. Ezeket a régiókat Rebbeck et al.a petefészek- és az emlőrák kialakulásának kockázati területeként.49 A csíravonal-variánsok elhelyezkedése és a mell- vagy petefészekrák kockázata közötti összefüggésre vonatkozó bizonyítékok azonban továbbra is ellentmondásosak.28,50-52 Populációnkban a BRCA1 PV-k túlnyomórészt a BCCR régióban helyezkedtek el, míg a BRCA2 PV-k túlnyomórészt a BCCR régióban helyezkedtek el, míg a BRCA2 PV-k túlnyomórészt nem találtak összefüggést az OCCR régióban. BCCR régiók és BC jellemzők. Ennek oka lehet a BRCA1/2 mutációval rendelkező betegek korlátozott száma. A fehérjedomén szempontjából a BRCA1 PV-k a teljes fehérje mentén eloszlanak, és a BRCA2 elváltozások elsősorban a BRC ismétlődő doménjében találhatók.
Végül a BC klinikopatológiai jellemzőit korreláltuk a BRCA1/2 PV-vel. A bevont betegek korlátozott száma miatt csak a Ki-67 és a tumor fokozata között találtunk szignifikáns korrelációt. Bár a Ki-67 értékelése és értelmezése továbbra is némileg ellentmondásos, bizonyos, hogy a magas proliferációs ráta összefüggésbe hozható a betegség „túlélési határának” és a „kiújulásának” csökkenésének kockázatával. A -67 értéke 20%. Ez a küszöb azonban nem vonatkozik a BRCA1/2 mutációban szenvedő betegpopulációnkra, amelynek Ki-67 medián értéke 25%. Ez a magas Ki-67 arányban tapasztalható tendencia a luminális B és TNBC kohorszaink prevalenciájával magyarázható, amelyek közül kevés luminális A daganat jobbnak tűnik (egyes Ki-5 százalékos 3%-os kivágásra utalhat). a betegeket a prognózisuk szerint.53,54 Elemzésünk eredményei alapján szignifikáns korreláció nem meglepő.A magas Ki-67 és a fokozatok, valamint a BRCA1 PV jelenléte között fordul elő.Valójában a BRCA1-hez kapcsolódó daganatok jellemzőek a TNBC-re, és agresszívebb jellemzőket mutatnak.16,17
Összefoglalva, ez a tanulmány jelentést ad a BRCA1/2 mutációs státuszáról egy kelet-szicíliai BC kohorszban. Összességében megállapításaink összhangban vannak a már meglévő bizonyítékokkal, mind a mutáció prevalenciája, mind a BC klinikopatológiai jellemzői tekintetében. További vizsgálatok a BRCA1/2-mutáns BC betegek nagyobb populációiban, például kevésbé gyakori, hogy több mutációt vizsgálnak, és több gént használnak. mint a BRCA1/2. Ez lehetővé teszi a genetikai mutációk miatt megnövekedett rákkockázatú alanyok azonosítását és megfelelő kezelését.
Megerősítettük, hogy a betegek tájékoztatáson alapuló beleegyezését írták alá tumormintáik anonim kutatási célú kiadásához.Minden beteg írásos beleegyezését írta alá a Helsinki Nyilatkozat szerint.Az AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco” szabályzata értelmében ez a vizsgálat mentesült az etikai felülvizsgálat alól, mert a BRCA1/2 elemzést. A betegek írásos beleegyezését is a klinikai gyakorlat felhasználásához végezték.
Köszönjük Prof. Paolo Vignerinek a mellrákos betegek ellátásában nyújtott segítségét az Etikai Bizottság kérésének megfelelően.
Federica Martorana az Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer honoráriumáról számol be. A többi szerző kijelenti, hogy ebben a munkában nem áll fenn összeférhetetlenség.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL et al.Global Cancer Statistics 2020: A GLOBOCAN a világ 185 országában 36 rákbetegség előfordulási gyakoriságát és halálozási arányát becsüli meg.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10/ca60ac.321.