„Soha ne kételkedj abban, hogy egy kis csoport gondolkodó, elkötelezett polgár képes megváltoztatni a világot. Sőt, ez az egyetlen ilyen.”
A Cureus küldetése, hogy megváltoztassa az orvosi publikációk régóta fennálló modelljét, amelyben a kutatási anyagok benyújtása költséges, összetett és időigényes lehet.
Trombocitadús plazma/prp, szövetregeneráció, vérlemezke-aktiváció, glükóz proliferatív terápia, vérlemezkék, proliferatív terápia
A cikk idézete: Harrison TE, Bowler J, Reeves K és munkatársai (2022. május 17.) A glükóz hatása a vérlemezkeszámra és -térfogatra: következmények a regeneratív gyógyászatra. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
A vérlemezkében gazdag plazmát (PRP) és a hipertóniás glükózoldatokat gyakran alkalmazzák injekcióként a regeneratív gyógyászatban, néha együttesen. A hipertóniás glükóz vérlemezke-lízisre és -aktivációra gyakorolt ​​hatását korábban nem vizsgálták. Vizsgáltuk a megemelkedett glükózkoncentrációk hatását a vérlemezke- és eritrocitaszámra, valamint a sejtek térfogatára PRP-ben és teljes vérben (WB). A vérlemezkeszám gyors, részleges csökkenése következett be minden glükózkeverék PRP-vel vagy teljes vérrel való keverésekor, ami összhangban van a részleges lízissel. Az első perc után a vérlemezkeszám stabil maradt, ami a maradék vérlemezkék gyors alkalmazkodására utal extrém (>2000 mOsm) hipertóniához. Az első perc után a vérlemezkeszám stabil maradt, ami a maradék vérlemezkék gyors alkalmazkodására utal extrém (>2000 mOsm) hipertóniához. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструх аккомоданыстацитою тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Az első perc után a vérlemezkeszám stabil maradt, ami a maradék vérlemezkék gyors akkomodációját jelzi extrém (>2000 mOsm) hipertóniához.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацитромостостацитою к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Az első perc után a vérlemezkeszám stabil maradt, ami a maradék vérlemezkék gyors alkalmazkodását jelzi a szélsőséges (>2000 mOsm) hiperozmoláris állapothoz.A 25%-os és afeletti glükózkoncentráció a vérlemezke-térfogat (MPV) átlagos növekedését eredményezte, ami a vérlemezke-aktiváció korai szakaszára utal. További vizsgálatokra van szükség annak megállapítására, hogy vérlemezke-lízis vagy -aktiváció történik-e, és hogy a hipertóniás glükózinjekció önmagában vagy PRP-vel kombinálva további klinikai előnyökkel járhat-e.
Az 1950-es években George Hackett amerikai sebész felfedezte, hogy számos beteg ízületi és hátfájdalmát tartósan enyhítheti egy proliferatív oldat inakban és szalagokban történő injekciózásával. Nyulakon végzett kísérletei azt mutatták, hogy a kezelés, amelyet proliferatív terápiának nevezett, az inak megnagyobbodását és megerősödését okozta. Hisztológiai vizsgálatok megerősítették, hogy a folyamat során új kollagén termelődik [1].
Az első néhány évtizedben számos különböző elosztási megoldást kipróbáltak. Az 1990-es évekre a legtöbb szakember a magas glükózkoncentrációt tartotta a legbiztonságosabb és leghatékonyabb módszernek. A hatásmechanizmus azonban továbbra sem tisztázott.
Hackett munkásságát követően a 20. században kevés klinikai vizsgálatot végeztek. A 2000-es években azonban megújult az érdeklődés, és számos sikeres klinikai vizsgálatot végeztek a proliferatív terápiával kapcsolatban derékfájás [2], térdízületi osteoarthritis [3] és laterális epicondylitis [4] kezelésében.
A szövetek regenerációjához őssejtek részvétele szükséges. Ezért a magas glükózkoncentrációnak valahogyan elő kell idéznie az őssejtek migrációját, replikációját és differenciálódását. Feltételezzük, hogy a vérlemezkék hírvivőként működhetnek, és hogy a magas glükózkoncentráció citokinek és növekedési faktorok felszabadulását okozhatja a vérlemezkékben, ezáltal elősegítve a regeneratív folyamatokat, különösen az őssejtek migrációját a magas glükózkoncentrációjú területekre.
A vérlemezke-aktiváció mindig megelőzi az intracelluláris kalciumszint növekedését [5]. Liu és munkatársai 2008-ban kimutatták, hogy a magas glükózszint növeli a plazmamembránban található átmeneti receptorpotenciál kanonikus 6-os típusú (TRPC6) csatornák aktivitását, ami kalciumionok beáramlásához vezet a vérlemezkékbe [6]. Egy másik tanulmány kimutatta, hogy a mikrotubulus marginális zónájának kalciumionoknak való kitettsége a marginális zóna relaxációját, tágulását és deformációját okozza, ami viszont alakváltozást okoz korong alakúról gömb alakúra, ami az átlagos vérlemezketérfogatot (MPV) eredményezi [7].
A jelen tanulmány hipotézise az, hogy a vérlemezkék magas glükózkoncentrációnak való kitettsége befolyásolja a mikrotubulus marginális zónáját és az intracelluláris környezetet, ami az MPV növekedéséhez vezet.
Miután a résztvevők elmagyarázták a vizsgálat részleteit, és még a minták átvétele előtt, minden résztvevő aláírt egy tájékoztatáson alapuló beleegyező nyilatkozatot. Ebben a vizsgálatban csak olyan PRP-mintákat használtak, amelyek hematokritja nagyobb volt, mint 2%, hogy az eritrocitaszámot és a vörösvértestek átlagos korpuszkuláris térfogatát (MCV) összehasonlításképpen figyelembe lehessen venni.
A vizsgálatot négy fázisban végezték, az első fázis PRP volt, a fennmaradó fázisok pedig teljes vér (1. táblázat). A korábban leírtak szerint [8], minden relatív centrifugális erőt (RCF, g-erő) a centrifugális fecskendőben lévő véroszlop középpontjából (Rmid, cm-ben) számítottak ki. Az MPV-t ​​a vérlemezke-szenzitizáció markerének, a vérlemezkeszámot pedig a potenciális vérlemezke-lízis indikátorának választottuk, amelyek mindkettő könnyen mérhető standard hematológiai analizátorokon.
Az első fázisban 47 önkéntes adott vérmintát – egy cső etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) és egy PRP teljes vérmintát (nátrium-citráttal (NaCl, 3%) antikoagulálva) (1. táblázat). A keverőt azonnal helyezték a csőbe. Az EDTA mintákon háromszor végeztek teljes vérképet (CBC), a NaCl mintákat háromszor elemezték CBC-elemzéshez, majd a PRP-t a fent leírt különféle módszerekkel állították elő [8]. Minden PRP mintát 900–1000 g-n végzett centrifugálással készítettek elő. Minden PRP mintát vortex keverőn kevertek 5–10 másodpercig, majd öt 0,5 ml-es aliquotot osszanak csövekbe.
A vérlemezke-expozíció emelkedett glükózkoncentrációkra gyakorolt ​​hatásának értékeléséhez egyenlő mennyiségű (0,5 ml) 0%-os, 5%-os, 12,5%-os, 25%-os és 50%-os vízben oldott glükózt kevertek össze vérlemezke-mintákkal, így 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% és 25%-os koncentrációjú glükózkeveréket kaptak, majd a csövek tartalmát 15 percig rázógépen keverték. Az egyes keverékek teljes térfogatát (TAC) 15 perc elteltével háromszor elemezték. Az egyes csövekre átlagolták a vérlemezkeszámot (PLT), a vörösvérsejtszámot, az MCV-t és az MPV-t, majd az összes PRP-mintára kiszámították az átlagos vérlemezkeszámot, a vörösvérsejtszámot, az MCV-t és az MPV-t.
Az adatgyűjtés első fázisának befejezése után a D50W hozzáadása után a PRP vérlemezkékben a vérlemezketérfogat jelentős növekedését tapasztaltuk. A PRP vérlemezkék nem feltétlenül képviselik a vérben lévő összes vérlemezkét, és a PRP táptalaj különbözik a WB táptalajtól. Ezért úgy döntöttünk, hogy egy második fázisú vizsgálatot végzünk a D50W teljes vérhez adagolásának hatásának vizsgálatára.
A második körhöz 30 fős mintanagyságot választottunk az első sorozat eredményei alapján, a Elemzés részben leírtak szerint. Ebben a sorozatban 20 önkéntes adott vérmintát (1. táblázat). Teljes vért (1,8 ml) vettünk egy 3 ml-es fecskendőbe, és 0,2 ml 40%-os NaCl-dal antikoaguláltuk. A teljes vért tartalmazó fecskendő tartalmát öt másodpercig vortex keverővel kevertük, és a CBC-t háromszor elemeztük. Az elemzés után az antikoagulált vért 2 ml 50%-os glükózhoz adtuk egy 5 ml-es fecskendőben (a végső glükózkoncentráció körülbelül 25% volt (D25)), és 30 percre rázócsőbe helyeztük. 30 perc elteltével a WB fecskendőkben lévő D25/CBC-t háromszor elemeztük. Átlagoltuk a vérlemezkeszámot, a vörösvérsejtszámot, az MCV-t és az MPV-t ​​fecskendőnként, és kiszámítottuk az átlagos PLT-t, RBC-számot, MCV-t és MPV-t ​​minden mintára a glükóz hozzáadása előtt és után.
Mivel a proliferatív glükózterápia során a teljes vérben lévő vérlemezkék gyakran ki vannak téve hipertóniás glükóznak a minimálisan invazív injekció miatt, és nem gyakori, hogy a PRP-t hipertóniás glükózzal kombinálják közvetlenül az injekció előtt, úgy döntöttünk, hogy az 1. szakasz harmadik és negyedik lépésében a hipertóniás glükózt WB-vel kombinálva vizsgáljuk. Minden szakaszban 20 önkéntes 7-8 ml ACD-A-t (trinátrium-citrátot (22,0 g/l), citromsavat (8,0 g/l) és glükózt (24,5 g/l) tartalmazó sav, dextróz-citrát oldat) adott véralvadásgátlóként (1. táblázat). Csak a 12,5%-nál nagyobb glükóztartalmú keverékeket használtuk az MPV növekedésével járó küszöbérték meghatározásához. A harmadik szakaszban 1 ml vért helyeztünk egy kémcsőbe. Ezután keverje a vért vortexkeverővel 10 másodpercig úgy, hogy 1 ml 30%-os, 40%-os vagy 50%-os glükózt ad a csőhöz, hogy a végső glükózkoncentráció 15%, 20% és 25% legyen. A glükóz tartalmú vérmintákat a keverés után azonnal elemezték a CBC-re, majd 30 percen keresztül kétpercenként megismételték.
A kezdeti keverés során az 1:1 arányú hipertóniás glükóz és a WB vagy PRP hozzáadása a vérlemezkéket több másodpercig 25% feletti koncentrációnak teszi ki. A negyedik lépésben, a hipertóniás glükóz minimális kezdeti csúcskoncentrációkkal történő hatásának értékeléséhez és a glükóz hatásának felső határának teszteléséhez csak kis mennyiségű vért adtunk a D25W-hez vagy a D50W-hez. Helyeztünk 1 ml D25W-t vagy D50W-t egy csőbe, és adtunk hozzá 0,2 ml WB-t, miközben a mintát 10 másodpercig vortexeltük. Ezekben az esetekben a vért a végső koncentrációnál körülbelül 20%-kal magasabb koncentrációban kezeltük a glükózzal, szemben a 3. fázisban alkalmazott 50%-kal magasabb koncentrációval, ami 20,8% és 41,6% végső glükózkoncentrációt eredményezett. A kevert mintákat ugyanabban az időintervallumban elemeztük, mint a 3. lépésben.
Minden glükózhígítási sorozat első lépésében 30 mintát vettünk, mivel ez volt a megfelelő mintaelemszám a pilotvizsgálathoz [9]. Minden fázis (beleértve az első fázist is) végén értékeljük a mintaelemszám megfelelőségét azzal a képlettel, amelyet a folytonos kimeneti változó átlagának becsléséhez szükséges mintaelemszám meghatározására használtunk egy populációban. Képlet: n = Z2 x SD2 /E2. Ebben az egyenletben Z a Z-pontszám, SD a szórás, E pedig a kívánt hiba [10]. Az alfa értéke 0,05, ami 1,96-os Z-értéknek felel meg, és 5-ös hibát várunk (százalékban). Ezért n = (1,962 x SD2)/52-re oldjuk meg. Az eredmények azt mutatták, hogy az egyes szakaszokhoz szükséges mintaelemszám kisebb volt, mint a ténylegesen begyűjtött mintaszám.
Az 1., 3. és 4. időszakokban, egynél több glükózkoncentráció alkalmazásával, a különböző glükózkoncentrációk hatását a 0. időpont és az egyes további időpontok (1. fázis 15 percnél, 3. fázis 15 percnél, és négy 15 másodpercnél, majd kétpercenként) közötti frakcionális változás összehasonlításával elemeztük. Az egyes időszakok változási sebességeit Mann-Whitney U-teszttel hasonlítottuk össze, mivel az adatok nem követtek normális eloszlást, ahogyan azt a Shapiro-Wilk normalitáspróba meghatározta. Mivel az első, harmadik és negyedik lépésben több csoport (öt) 1:1 elemzését végeztük el (összesen öt), Bonferroni-korrekciót végeztünk a kívánt alfa érték ≤0,01, de nem ≤0,05 értékre állításához.
A vérlemezkeszám csökkenése a hipertóniás dextróz minden koncentrációjánál, az MPV növekedése a PRP vérlemezkékben >12,5%-os dextrózkoncentrációnál: A PRP vérlemezkeszáma az alap vérkoncentrációhoz képest egy-ötszörösére emelkedett, a módszertől függően (nem ábrázolva). A vérlemezkeszám csökkenése a hipertóniás dextróz minden koncentrációjánál, az MPV növekedése a PRP vérlemezkékben >12,5%-os dextrózkoncentrációnál: A PRP vérlemezkeszáma az alap vérkoncentrációhoz képest egy-ötszörösére emelkedett, a módszertől függően (nem ábrázolva). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV вхпцитов концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исхольной кровью, в зависимости от метода (не показано). Csökkent vérlemezkeszám minden hipertóniás dextróz koncentrációnál és megnövekedett MPV a PRP vérlemezkékben >12,5% ​​dextróz koncentrációnál: A PRP vérlemezkeszám 1-5-szörösére nőtt a kiindulási teljes vérhez képest, a módszertől függően (nem látható). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，䰏MP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5倍，因方法而异（未描述）. 12,5%-nál magasabb glükózkoncentráció esetén a magas glükózkoncentráció csökkenti a vérképet, a PRP vér MPV-értéke megnő: a 与基线全血-hoz képest a PRP vérképe a koncentráció 1-5-szörösére nő (nem ismertetett). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество количество тромбо, в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравенцихо сравнесы концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). 12,5%-nál nagyobb glükózkoncentráció esetén minden hipertóniás glükózkoncentráció csökkentette a vérlemezkeszámot és növelte az MPV-t ​​a PRP vérlemezkékben: a PRP vérlemezkeszám 1-5-szörösére nőtt a kiindulási teljes vérkoncentrációhoz képest, a módszertől függően (a leírtak szerint).Az 1. ábra azt mutatja, hogy a vérlemezkék száma közel 75%-kal csökkent vízben való hígítás után, és 20-30%-kal 15 perces hígítás után különböző glükózkoncentrációkkal a kiindulási PRP-hez és a térfogatra korrigált 1:1 arányú hígításhoz képest (1- k1 térfogatkorrekcióval). k -1 tenyésztés).1 tenyésztés).
Az egyes hígításokban lévő sejtek számát a hígítás előtti eredeti szám töredékeként fejezzük ki.
Az MPV minimálisan csökkent a PRP előállítása során, a hígítási koncentrációk további 12,5%-ra történő változtatása nélkül vízben vagy glükózban (beleértve a 25%-os PRP glükózkeverékeket is), és több mint 20%-kal nőtt az 50%-os glükózoldatban történő hígítás után (2. ábra). Ezzel szemben az eritrociták nem mutattak szignifikáns térfogatváltozást a H2O-n kívüli hígításban.
Az egyes hígításokban lévő sejtek átlagos térfogatát a hígítás előtti eredeti térfogat százalékában fejezzük ki.
Hasonló, de kevésbé kifejezett vérlemezkeszám-csökkenést és CVR-növekedést figyeltek meg 50%-os glükóznak kitett BC-ben (25% glükózt tartalmazó formuláció). A 2. táblázat összehasonlítja a sejtek számát és térfogatát 50%-os dextrózzal hígított teljes vérben az 50%-os dextrózzal hígított 1. fázisú PRP adatokkal. A vörösvérsejtszám és az RBC MCV változásai nem voltak szembetűnőek, és nem álltak figyelmünk középpontjában.
SD = szórás, MD = csoportok közötti átlagos különbség, SE = az átlagkülönbség szórása, RBC = eritrociták, PLT = vérlemezkék, PRP = vérlemezkében gazdag plazma, WB = teljes vér
A D50W hozzáadása után a hígítással korrigált vérlemezke-veszteség százalékos értéke 7,7% volt (310±73 vs. 286±96), szemben a D50W-ben lévő PRP hígítás esetén mért 17,8%-kal (664±348 vs. 544±277). Az MPV WB 16,8%-kal nőtt (10,1 ± 0,5-ről 11,8 ± 0,6-ra), míg az MPV PRP 26%-kal nőtt (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Bár a vérlemezkeszám-csökkenés és az MPV-növekedés átlagos különbségei szignifikánsan nagyobbak voltak PRP esetén, a vérlemezkeszám-csökkenés változásai a WB-n belül közel szignifikánsak voltak (310 ± 73 - 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), és az MPV növekedése is szignifikáns volt (10,1 ± 0,5 - 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Bár a vérlemezkeszám-csökkenés és az MPV-növekedés átlagos különbségei szignifikánsan nagyobbak voltak PRP esetén, a vérlemezkeszám-csökkenés változásai a WB-n belül közel szignifikánsak voltak (310 ± 73 - 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), és az MPV növekedése is szignifikáns volt (10,1 ± 0,5 - 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Bár a vérlemezkeszám csökkenésében és a CVR-növekedésben mutatkozó átlagos különbségek szignifikánsan nagyobbak voltak PRP esetén, a vérlemezkeszám csökkenésében bekövetkezett változások a WB-n belül szinte szignifikánsak voltak (310 ± 73-ról 286 ± 96-ra (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). az MPV növekedése szignifikáns volt (10,1 ± 0,5-ről 11,8 ± 0,6-ra (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MP的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 尡 膅 冏减少 的 几乎 是 显着 的 （（(310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增劊± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.A vérlemezkeszám csökkenésében bekövetkezett változás a fehérvérsejtszámon belül közel szignifikáns volt (310 ± 73-ról 286 ± 96-ra (-7,7%); p = 0,06), bár a PRP-csoportban szignifikánsan nagyobb átlagos különbségek voltak a vérlemezkeszám csökkenése és az MPV növekedése tekintetében, és az MPV növekedése is szignifikáns volt.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (10,1 ± 0,5-től 11,8 ± 0,6-ig (+16,8) p < 0,001).
20%-os glükóz végkoncentrációra volt szükség az MPV szignifikáns változásához, de az MPV változása kifejezettebb volt a 25%-os végkoncentrációnál. A vérlemezke-veszteség a kezdeti csökkenés után stabilizálódott. Megfigyeltünk egy kezdeti meredek CVR-csökkenést, azonban a CVR gyorsan helyreállt a 25%-os végső glükózkoncentrációnál, ami szignifikánsan magasabb volt, mint a 20%-os és 15%-os végső glükózkoncentrációnál megfigyelt CVR-szintek (3. ábra és a 3. táblázat bal oldala; árnyékolt mezők). A p-értékek ≤ alfa, 0,01-es Bonferroni-korrekcióval. A PLT-k számában is kezdeti meredek csökkenés volt megfigyelhető a 0-15 másodperces kezdeti fázisban, majd stabil maradt (15 másodperctől 30 percig; a 4. táblázat bal oldala).
Különböző koncentrációjú glükóz teljes vérhez történő hozzáadása az MPV kezdeti gyors csökkenését eredményezte, majd a koncentrációtól függő, több mint 20%-os helyreállást eredményezett. A jelmagyarázat a hígítás utáni glükózkoncentrációt mutatja. A D15, D20 és D25 vizsgálatokat 1:1 arányú hígításban végeztük. A D21 és D41 vizsgálatokat 1:5 arányú hígításban végeztük.
A 4. táblázat a vérlemezkeszám változását mutatja hipertóniás glükózzal hígítva. Dózisfüggő összefüggést figyeltünk meg a PLT-számok azonnali csökkenése között az 1:1 hígítás és az 1:5 hígítás esetén. Az 1:1 hígításokat egyetlen csoportként összehasonlítva az 1:5 hígításokkal, az 1:1 csoportban a vérlemezkeszám azonnali csökkenése kisebb volt, mint az 1:5 csoportban, 66±48 000 (23%) vs. 99±69 000 (37%). , p = 0,014) az 1:5 csoportban. Az első mérési ponton bekövetkezett kezdeti csökkenés után a vérlemezkeszám a glükóz százalékában stabilizálódott (4. ábra).
Amikor teljes vért adunk glükózhoz 1:1 arányban, a vérlemezkeszám körülbelül 25%-kal csökken. Amikor azonban 1:5 arányban teljes vért adtunk hozzá, a csökkenés sokkal nagyobb volt – körülbelül 50%.
A 41%-os glükóz gyorsabban és drámaibb mértékben növelte az MPV-t, mint a 25% vagy a 21%. Az MPV-eredményeket a 3. ábra mutatja. Minden más hígításnál nem figyeltek meg azonnali kezdeti MPV-csökkenést az 50%-os glükóz hozzáadása után. 25%-os glükóz használatakor (glükózkoncentráció 20,8% a végső hígításban) az MPV változása összehasonlítható volt a 20%-os glükóz 1:1 hígításban bekövetkezett változásával (3. ábra). Bár az MPV változásai kezdetben nagyobbak voltak a 41%-os kevert koncentrációnál, mint a 25%-nál, az MPV különbsége 41% és 25% között 16 perc elteltével már nem volt szignifikáns (3. táblázat, jobbra). Az is érdekes, hogy a 25%-os glükóz hatékonyabban növelte az MPV-t, mint a 20,8%.
Ez az in vitro vizsgálat részben megerősítette hipotézisünket. A vizsgálat kimutatta, hogy dextróz adagolása esetén részleges vérlemezke-lízist okozhat, a vérlemezkék gyorsan alkalmazkodhatnak extrém hipertóniához, és a MPV jelentősen megnőhet 25%-nál nagyobb hipertóniás dextrózkoncentráció esetén. A vizsgálat kimutatta, hogy dextróz adagolása esetén részleges vérlemezke-lízist okozhat, a vérlemezkék gyorsan alkalmazkodhatnak extrém hipertóniához, és a MPV jelentősen megnőhet 25%-nál nagyobb hipertóniás dextrózkoncentráció esetén. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Potenciális részleges vérlemezke-lízist mutatott dextróz jelenlétében, gyors vérlemezke-akkomodációt extrém hipertóniáig, és az MPV jelentős növekedését a 25%-nál nagyobb hipertóniás dextrózszint esetén.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 忼 速 适庯 极 速 适庯 极响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацициц адаптацию экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Glükózkeverékek potenciális részleges vérlemezke-lízist, gyors vérlemezke-adaptációt mutat extrém hipertóniához, és az MPV jelentős növekedését mutatja >25%-os hipertóniás glükóz esetén.A kezdeti növekedés 41,6%-os glükózexpozíciónál volt maximális, de az MPV növekedése körülbelül 20 perccel az expozíció után megközelítette a 25%-os glükózexpozíciót.
A vérlemezkék koncentrációját a glükóz befolyásolja. Azt tapasztaltuk, hogy a PLT mennyisége a glükóz minden hígításánál csökkent. A vérlemezkék számának hirtelen csökkenése a PRP sorozat H2O (0%) hígításaiban ozmotikus lízissel hozható összefüggésbe. Alternatív megoldásként ez a vérlemezke-aggregáció okozta műtermék is lehet, de ez ellentétben áll azzal, hogy ennél a hígításnál nem tapasztalható MPV-változás. Ez a megállapítás azt jelenti, hogy egyes vérlemezkék nagyon érzékenyek a hipoozmolaritásra.
A glükóz összes 1:1 arányú hígításában a PLT mennyisége 20-30%-kal csökkent, még D5W esetén is (hipotóniás 252 mOsm-on), ami a glükóz specifikus nem ozmotikus hatására utalhat, mivel mind a PLT, mind az MPV változatlan maradt a glükóz koncentrációjának háromszoros növekedése esetén D5W-ről D25W-re. Valójában a PLT-koncentrációk az ozmolaritás növekedésével kismértékben emelkedtek.
A PLT csökkenése 1:1 és 1:5 hígítások között azt jelenti, hogy az oldódási hatás a kezdeti és a végső glükózkoncentrációtól függ. Ha csak a kezdeti koncentrációtól függene, akkor az ember azt várná, hogy különbség lesz a PLT csökkenése terén az 1:1 koncentrációk között. De mi nem. Ha a lízishatás csak a végső glükózkoncentrációtól függ, akkor nem várunk nagy különbséget a 20%-os 1:1 hígítás és a 20,8%-os 1:5 hígítás között. És mégis megcsináltuk.
Ha a vérlemezke-lízis miatt vérlemezkeveszteség következik be, részleges lizátum képződik, amely után citokinek és növekedési faktorok szabadulnak fel az extracelluláris környezetbe. Számos tanulmány kimutatta, hogy a vérlemezke-lizátum majdnem olyan hatékony, mint a PRP, proliferációs oldatként [11]. Magáról a PRP-ről kimutatták, hogy hatékony megoldás a proliferáció kezelésére [12-14].
Az inaktív vérlemezkék korong formájában keringenek, amelyet számos belső szerkezet erősít meg. Aktiválás során gömbölyűbb vagy amőba alakúvá válnak, ami térfogatnövekedést eredményez. A térfogatnövekedéshez a felület növekedése szükséges, ami a nyitott tubulusrendszer (OCS) extrudálásának és az exocita granulátumok membránhoz való hozzáadásának az eredménye. Még meg kell állapítani, hogy a hipertóniás glükóz által kiváltott MPV-növekedés ezen mechanizmusok egyikét vagy mindkettőt magában foglalja-e, de ha az utóbbi, akkor az MPV-növekedés degranulációra utalna.
Ez a tanulmány kimutatta, hogy a PRP-n vagy a teljes vérlemezkéken lévő magas glükózkoncentrációnak való kitettség 15 percen belül az MPV növekedését eredményezte, a glükózkoncentráció 25%, illetve 41,6%-os volt.
A vérlemezkék MPV-jének növekedése a környező mikrotubulus-gubancok kalciumbeáramlásra adott válaszként történő tágulásának tudható be. Liu és munkatársai kimutatták, hogy a glükóz közvetíti a kalciumbeáramlást a vérlemezkék TRPC6 csatornáján keresztül [6]. Hipotézisünk az, hogy a glükóz a mikrotubulus-gubancok relaxációját idézi elő, ami az MPV növekedéséhez és a vérlemezkék szenzibilizálódásához és/vagy aktiválódásához vezet. Eredményeink alapján azonban ez csak a történet egyik része. Tesztjeinkben a D25W alatti koncentrációk egyike sem eredményezte az MPV növekedését. Tekintettel arra, hogy nem teszteltük a 12,5% és 25% közötti glükózkoncentrációnak való kitettséget, az 1. fázisú eredményeink arra utalnak, hogy ebben a glükózkoncentráció-tartományban lehet egy küszöbérték, amely az MPV növekedéséhez vezet. A 3. és 4. szakaszban végzett további vizsgálatok azt mutatták, hogy a 20-25% glükóz tűnik ennek a küszöbértéknek, de az továbbra sem világos, hogy miért.
Centrifugálás után a MPV ~9%-os csökkenését is megfigyeltük. Nem világos, hogy az MPV ezen csökkenése a centrifuga RBC-rétegében megrekedt nagyobb és sűrűbb vérlemezkéknek köszönhető-e. Ez a megfigyelés fontos lehet a klinikusok számára, mivel arra utalhat, hogy a PRP-vérlemezkék a WB-vérlemezkék kisebb és kevésbé sűrű részhalmazát alkotják.
Egy korábbi tanulmányunkban kimutattuk, hogy a PRP manuális módszerekkel történő előállítása olcsó [8]. Ha a glükóz szenzibilizálja a szöveti vérlemezkéket vagy a PRP-t, így azok érzékenyebbek az aktiválásra, vagy ha a PRP részleges lizátum tulajdonságokkal rendelkezik, ez fokozhatja a regenerációt és csökkentheti a terápia szükségességét. Ezért a PRP és a magas koncentrációjú glükóz kombinációja költséghatékonyabb lehet, mint a PRP vagy a glükóz önmagában.
Tanulmányunknak számos hiányossága van. Először is, több különböző módszerrel kapott PRP-t használunk. Ez ellentmondásos eredményekhez vezethet. Másodszor, egyik mintán sem tudtuk biokémiai elemzést végezni annak pontosabb meghatározására, hogy történt-e vérlemezke-aktiváció. Szeretnénk mérni a P-szelektint, a vérlemezke-faktor 4-et, a monocita vérlemezke-aggregátumokat vagy a vérlemezke-aktiváció más markereit, hogy jobban megértsük az alfa-granulumok degranulációjának mértékét vagy jelenlétét, de ez túlmutat a jelen tanulmány keretein. Harmadszor, elektronmikroszkóppal vagy más módszerekkel nem tudtuk megerősíteni, hogy a glükóznak kitett vérlemezkékben az MPV növekedése a mikrotubulus-gubancokra gyakorolt ​​hatásnak köszönhető.
A WB vagy PRP 25%-os glükózzal alkotott keverékei növelték az MPV-t, ami a vérlemezke-aktiváció kezdetét jelzi, bár ez a vizsgálat nem bizonyította az aggregáció vagy a degranuláció progresszióját. A hipertóniás glükózkeverék vérlemezke-veszteséget eredményezett, ami valószínűleg lítikus hatást jelent. A vérlemezkék részleges aktivációja vagy lízise szövetregenerációt okozhat a vérlemezke-injekció után. Nem világos, hogy ezek a változások milyen klinikai következményekkel járhatnak. További vizsgálatok kimutatták az aktiváció vagy a lízis pontosabb mérését, és értékelték a hipertóniás glükózkeverékek WB-vel vagy PRP-vel alkotott különböző klinikai hatásait.
A glükóz proliferatív terápia egy egyszerű és olcsó regeneratív terápia, amely gyorsan terjed és támogatja a klinikai kutatásokat. Ez a tanulmány egy olyan fiziológiai mechanizmust javasol, amely – ha megerősítést nyer – segíthet megérteni a proliferatív terápia regeneratív mechanizmusának egy részét.
Biomedicinális és egészségügyi informatika a Missouri Egyetem Kansas City Orvostudományi Karán, Kansas City, USA
Emberi alanyok: A vizsgálatban részt vevő összes résztvevő beleegyezését adta vagy nem adta. A Nemzetközi Sejtgyógyászati ​​Társaság kiadta az ICMS-2017-003 jóváhagyást. A következő protokollt a Nemzetközi Sejtgyógyászati ​​Társaság Intézményi Felülvizsgálati Testülete jóváhagyta további felhasználásra: Cím: A vérlemezkében gazdag plazma gyógyszerhozamának kiszámítása a kiindulási CBC vérlemezkeszám alapján. Állatkísérleti alanyok: Minden szerző megerősítette, hogy nem vettek részt állatok vagy szövetek ebben a vizsgálatban. Összeférhetetlenség: Az ICMJE Egységes Nyilatkozati Űrlapjának megfelelően minden szerző a következőket nyilatkozza: Fizetési/szolgáltatási információk: Minden szerző kijelenti, hogy a benyújtott munkához semmilyen szervezettől nem kapott pénzügyi támogatást. Pénzügyi kapcsolatok: Minden szerző kijelenti, hogy jelenleg és az elmúlt három évben sem áll pénzügyi kapcsolatban olyan szervezettel, amely érdeklődhet a benyújtott munka iránt. Egyéb kapcsolatok: Minden szerző kijelenti, hogy nincsenek más kapcsolataik vagy tevékenységeik, amelyek befolyásolhatják a benyújtott munkát.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K és munkatársai (2022. május 17.) A glükóz hatása a vérlemezkeszámra és -térfogatra: következmények a regeneratív gyógyászatra nézve. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk, amely a Creative Commons Nevezd meg! CC-BY 4.0 licenc feltételei szerint kerül terjesztésre. Korlátlan felhasználás, terjesztés és sokszorosítás bármilyen médiumban megengedett, feltéve, hogy az eredeti szerző és forrás feltüntetésre kerül.