Շնորհակալություն Nature.com կայք այցելելու համար: Դուք օգտագործում եք սահմանափակ CSS աջակցությամբ դիտարկիչի տարբերակ: Լավագույն փորձի համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել թարմացված դիտարկիչ (կամ անջատել համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում): Բացի այդ, շարունակական աջակցությունն ապահովելու համար մենք կայքը ցուցադրում ենք առանց ոճերի և JavaScript-ի:
Միաժամանակ ցուցադրում է երեք սլայդից բաղկացած կարուսել: Օգտագործեք «Նախորդ» և «Հաջորդ» կոճակները՝ միաժամանակ երեք սլայդով անցնելու համար, կամ օգտագործեք վերջում գտնվող սահող կոճակները՝ միաժամանակ երեք սլայդով անցնելու համար:
Ծակոտկեն սիլիկայի մասնիկները պատրաստվել են սոլ-գել մեթոդով՝ որոշ փոփոխություններով՝ լայն ծակոտիներով մասնիկներ ստանալու համար: Այս մասնիկները դերիվատացվել են N-ֆենիլմալեյմիդ-մեթիլվինիլ իզոցիանատով (PMI) և ստիրոլով՝ հակադարձ շղթայի փոխանցման-բեկորավորման (RAFT) պոլիմերացման միջոցով՝ N-ֆենիլմալեյմիդով ինտերկալացված պոլիամիդներ ստանալու համար: Ստիրոլ (PMP) ստացիոնար փուլ: Նեղ տրամագծի չժանգոտվող պողպատե սյուները (100 × 1.8 մմ ներքին տրամագիծ) փաթեթավորվել են շաղախի փաթեթավորմամբ: PMP սյան քրոմատոգրաֆիկ կատարողականը գնահատվել է՝ հինգ պեպտիդներից (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu ամինաթթվի էնկեֆալին) և մարդու շիճուկային ալբումինի տրիպտիկ հիդրոլիզատ (HAS) առանձնացնելու համար: Օպտիմալ էլյուցիայի պայմաններում պեպտիդների խառնուրդով թիթեղների տեսական թիվը հասել է 280,000 թիթեղի/քառ.մ.: Մշակված սյան բաժանման արդյունավետությունը համեմատելով առևտրային Ascentis Express RP-Amide սյան հետ, նկատվել է, որ PMP սյան բաժանման արդյունավետությունը բաժանման արդյունավետության և լուծաչափի առումով գերազանցում էր առևտրային սյան արդյունավետությանը։
Վերջին տարիներին կենսադեղագործական արդյունաբերությունը դարձել է ընդլայնվող համաշխարհային շուկա՝ շուկայի մասնաբաժնի զգալի աճով։ Կենսադեղագործական արդյունաբերության պայթյունային աճի հետ մեկտեղ1,2,3 մեծ անհրաժեշտություն կա պեպտիդների և սպիտակուցների վերլուծության։ Բացի թիրախային պեպտիդից, պեպտիդների սինթեզի ընթացքում առաջանում են տարբեր խառնուրդներ, ուստի պեպտիդի ցանկալի մաքրությունը ստանալու համար անհրաժեշտ է քրոմատոգրաֆիկ մաքրում։ Մարմնի հեղուկներում, հյուսվածքներում և բջիջներում սպիտակուցների վերլուծությունը և բնութագրումը չափազանց մարտահրավերային խնդիր է՝ մեկ նմուշում առկա պոտենցիալ հայտնաբերելի տեսակների մեծ թվի պատճառով։ Չնայած զանգվածային սպեկտրոմետրիան արդյունավետ գործիք է պեպտիդների և սպիտակուցների հաջորդականության որոշման համար, եթե նման նմուշները անմիջապես ներմուծվեն զանգվածային սպեկտրոմետրի մեջ, բաժանումը անբավարար կլինի։ Այս խնդիրը կարող է լուծվել՝ MS վերլուծությունից առաջ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա (LC) կատարելով, որը կնվազեցնի զանգվածային սպեկտրոմետր մտնող անալիտների քանակը տվյալ պահին4,5,6։ Բացի այդ, անալիտները կարող են կենտրոնանալ նեղ շրջանում հեղուկ փուլի բաժանման ընթացքում, դրանով իսկ կենտրոնացնելով այդ անալիտները և բարձրացնելով MS հայտնաբերման զգայունությունը։ Հեղուկ քրոմատոգրաֆիան (ՀՔ) վերջին տասնամյակում զգալիորեն զարգացել է և դարձել է պրոտեոմային վերլուծության լայնորեն կիրառվող մեթոդ7,8,9,10:
Հակադարձ փուլային հեղուկ քրոմատոգրաֆիան (RP-LC) լայնորեն կիրառվում է պեպտիդների խառնուրդները մաքրելու և առանձնացնելու համար՝ օկտադեցիլ-մոդիֆիկացված սիլիցիումի երկօքսիդը (ODS) որպես ստացիոնար փուլ օգտագործելով11,12,13: Սակայն, իրենց բարդ կառուցվածքի և ամֆոտերային բնույթի պատճառով14,15 RP ստացիոնար փուլերը չեն կարող ապահովել պեպտիդների և սպիտակուցների բավարար տարանջատում: Հետևաբար, պեպտիդների և սպիտակուցների վերլուծությունը բևեռային և ոչ բևեռային բեկորներով պահանջում է հատուկ նախագծված ստացիոնար փուլեր՝ այս անալիտները փոխազդելու և պահպանելու համար16: Խառը քրոմատոգրաֆիան, որն առաջարկում է բազմամոդալ փոխազդեցություններ, կարող է լինել RP-LC-ի այլընտրանք՝ պեպտիդները, սպիտակուցները և այլ բարդ խառնուրդները առանձնացնելու համար: Պատրաստվել են մի քանի խառը տիպի ստացիոնար փուլեր, և այդ ստացիոնար փուլերով լցված սյուներ են օգտագործվել պեպտիդներն ու սպիտակուցները առանձնացնելու համար17,18,19,20,21: Բևեռային և ոչ բևեռային խմբերի առկայության պատճառով, խառը ռեժիմի ստացիոնար փուլերը (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, բևեռային ինտերկալացիա/RPLC) հարմար են պեպտիդների և սպիտակուցների բաժանման համար22,23,24,25,26,27,28: , բևեռային ինտերկալացված ստացիոնար փուլերը կովալենտորեն կապված բևեռային խմբերով ցույց են տալիս լավ բաժանման հնարավորություններ և եզակի ընտրողականություն բևեռային և ոչ բևեռային անալիտների համար, քանի որ բաժանումը կախված է անալիտի և ստացիոնար փուլի միջև փոխազդեցությունից: Բազմամոդալ փոխազդեցություններ29,30,31,32: Վերջերս Չժանը և այլք30 ստացել են պոլիամինների բեհենիլ-վերջացված ստացիոնար փուլեր և հաջողությամբ բաժանել են ածխաջրածիններ, հակադեպրեսանտներ, ֆլավոնոիդներ, նուկլեոզիդներ, էստրոգեններ և որոշ այլ անալիտներ: Բևեռային ներդրված ստացիոնար նյութն ունի և՛ բևեռային, և՛ ոչ բևեռային խմբեր, ուստի այն կարող է օգտագործվել պեպտիդներն ու սպիտակուցները հիդրոֆոբ և հիդրոֆիլ մասերի բաժանելու համար: Բևեռային շարային սյուները (օրինակ՝ C18 շարային ամիդային սյուներ) հասանելի են Ascentis Express RP-Amide սյուներ առևտրային անվան տակ, սակայն այս սյուները օգտագործվել են միայն ամին 33-ի վերլուծության համար։
Այս ուսումնասիրության մեջ պատրաստվել և գնահատվել է բևեռային ներդրմամբ ստացիոնար փուլ (N-ֆենիլմալեյմիդ, ներդրմամբ պոլիստիրոլ)՝ պեպտիդների բաժանման և տրիպտիկ HSA-ի կտրման համար: Ստացիոնար փուլը պատրաստելու համար օգտագործվել է հետևյալ ռազմավարությունը: Ծակոտկեն սիլիցիումի մասնիկները պատրաստվել են մեր նախորդ հրապարակումներում նկարագրված ընթացակարգերի համաձայն՝ որոշ փոփոխություններով 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 պատրաստման սխեմաներում: Միզանյութի, պոլիէթիլենգլիկոլի (PEG), TMOS-ի և ջրային քացախաթթվի հարաբերակցությունները կարգավորվել են՝ մեծ ծակոտիների չափսերով սիլիցիումի մասնիկներ ստանալու համար: Երկրորդ, սինթեզվել է նոր ֆենիլմալեյմիդ-մեթիլվինիլիզոցիանատ լիգանդ, և դրա դերիվատացված սիլիցիումի մասնիկները օգտագործվել են բևեռային ներդրմամբ ստացիոնար փուլեր պատրաստելու համար: Ստացված ստացիոնար փուլը փաթեթավորվել է չժանգոտվող պողպատե սյան մեջ (ներքին տրամագիծը՝ 100 × 1.8 մմ)՝ համաձայն օպտիմալացված փաթեթավորման սխեմայի: Սյան փաթեթավորումը կատարվում է մեխանիկական թրթռման միջոցով՝ սյան ներսում միատարր շերտ ապահովելու համար: Փաթեթավորված սյունը գնահատվել է հինգ պեպտիդներից (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, լեյցին-էնկեֆալին պեպտիդ) և մարդու շիճուկային ալբումինի (HSA) տրիպսինային հիդրոլիզատներից բաղկացած պեպտիդների խառնուրդի բաժանման համար: Նկատվել է, որ պեպտիդային խառնուրդը և HSA տրիպսինային մարսող նյութը բաժանվել են լավ լուծաչափով և արդյունավետությամբ: PMP սյունակի բաժանման արդյունավետությունը համեմատվել է Ascentis Express RP-Amide սյունակի հետ: Նկատվել է, որ պեպտիդներն ու սպիտակուցները PMP սյունակի վրա ունեն լավ լուծաչափ և բարձր բաժանման արդյունավետություն, և PMP սյունակի բաժանման արդյունավետությունն ավելի բարձր է, քան Ascentis Express RP-Amide սյունակինը:
PEG (պոլիէթիլենգլիկոլ), միզանյութ, քացախաթթու, տրիմեթօքսիօրթոսիլիկատ (TMOS), տրիմեթիլքլորսիլան (TMCS), տրիպսին, մարդու շիճուկային ալբումին (HSA), ամոնիումի քլորիդ, միզանյութ, հեքսամեթիլմետակրիլլոյլսիլազան (HMDS), մեթակրիլոյլ քլորիդ (MC), ստիրոլ, 4-հիդրօքսի-TEMPO, բենզոիլ պերօքսիդ (BPO), ացետոնիտրիլ (ACN)՝ HPLC-ի համար, մեթանոլ, 2-պրոպանոլ և ացետոն: Sigma-Aldrich ընկերություն (Սենթ Լուիս, Միսսուրի, ԱՄՆ):
Միզանյութի (8 գ), պոլիէթիլենգլիկոլի (8 գ) և 8 մլ 0.01 Ն քացախաթթվի խառնուրդը խառնվել է 10 րոպե, որին ավելացվել է 24 մլ TMOS՝ ​​սառույցով սառեցման պայմաններում: Ռեակցիայի խառնուրդը տաքացվել է 40°C ջերմաստիճանում 6 ժամ, ապա 120°C ջերմաստիճանում՝ 8 ժամ՝ չժանգոտվող պողպատե ավտոկլավում: Ջուրը դեկանտացվել է, և մնացորդը չորացվել է 70°C ջերմաստիճանում 12 ժամ: Չորացրած փափուկ բլոկները հարթորեն մանրացվել են և կալցինացվել են ջեռոցում 550°C ջերմաստիճանում 12 ժամ: Պատրաստվել և բնութագրվել են երեք խմբաքանակ՝ մասնիկների չափերի, ծակոտիների չափերի և մակերեսի վերարտադրելիությունը ստուգելու համար:
Պոլիստիրոլային շղթաների բևեռային խումբ և ստացիոնար փուլ։ Պատրաստման ընթացակարգը նկարագրված է ստորև։
N-ֆենիլմալեյմիդը (200 մգ) և մեթիլ վինիլիզոցիանատը (100 մգ) լուծվել են անջուր տոլուոլում, ապա ռեակցիոն սրվակին ավելացվել է 0.1 մլ 2,2′-ազոիզոբուտիրոնիտրիլ (AIBN)՝ ֆենիլմալեյմիդի և մեթիլ վինիլիզոցիանատի (PMCP) համապոլիմեր ստանալու համար։ ) Խառնուրդը տաքացվել է 60°C ջերմաստիճանում 3 ժամ, ֆիլտրվել և չորացվել է ջեռոցում 40°C ջերմաստիճանում 3 ժամ։
Չորացրած սիլիցիումի մասնիկները (2 գ) ցրվել են չոր տոլուոլի (100 մլ) մեջ, խառնվել և ուլտրաձայնային մշակման ենթարկվել 10 րոպե 500 մլ կլոր հատակով սրվակում: PMCP-ն (10 մգ) լուծվել է տոլուոլի մեջ և կաթիլ-կաթիլ ավելացվել է ռեակցիայի սրվակին ավելացման ձագարի միջոցով: Խառնուրդը 8 ժամ թրմվել է 100°C ջերմաստիճանում, զտվել, լվացվել ացետոնով և չորացվել 60°C ջերմաստիճանում 3 ժամ: Այնուհետև, PMCP-ի հետ կապված սիլիցիումի մասնիկները (100 գ) լուծվել են տոլուոլի (200 մլ) մեջ, և դրան ավելացվել է 4-հիդրօքսի-TEMPO (2 մլ)՝ 100 մկլ դիբուտիլտին դիլաուրատի առկայությամբ՝ որպես կատալիզատոր: Խառնուրդը խառնվել է 50°C ջերմաստիճանում 8 ժամ, զտվել և չորացվել 50°C ջերմաստիճանում 3 ժամ:
Ստիրոլը (1 մլ), բենզոիլ պերօքսիդ BPO-ն (0.5 մլ) և TEMPO-PMCP-ին (1.5 գ) կցված սիլիցիումի մասնիկները ցրվել են տոլուոլի մեջ և լցվել ազոտով: Ստիրոլի պոլիմերացումը կատարվել է 100°C ջերմաստիճանում 12 ժամ: Արդյունքում ստացված արդյունքը լվացվել է մեթանոլով և չորացվել գիշերը 60°C ջերմաստիճանում: Ռեակցիայի ընդհանուր սխեման ներկայացված է նկար 1-ում:
Նմուշները գազազերծվել են 393 Կ ջերմաստիճանում 1 ժամ, մինչև ստացվել է 10–3 Տորից պակաս մնացորդային ճնշում: P/P0 = 0.99 հարաբերական ճնշման տակ ադսորբված N2-ի քանակը օգտագործվել է ընդհանուր ծակոտիների ծավալը որոշելու համար: Մաքուր և լիգանդին կապված սիլիկայի մասնիկների ձևաբանությունը ուսումնասիրվել է սկանավորող էլեկտրոնային մանրադիտակի միջոցով (Hitachi High Technologies, Տոկիո, Ճապոնիա): Չոր նմուշները (մաքուր սիլիկա և լիգանդին կապված սիլիկայի մասնիկներ) տեղադրվել են ալյումինե ձողերի վրա՝ օգտագործելով ածխածնային ժապավեն: Ոսկին նստեցվել է նմուշի վրա՝ օգտագործելով Q150T փոշիացման սարք, և նմուշի վրա նստեցվել է 5 նմ հաստությամբ Au շերտ: Սա բարելավում է ցածր լարման գործընթացի արդյունավետությունը և ապահովում է նուրբ սառը ցողում: Տարրական վերլուծությունը կատարվել է Thermo Electron (Waltham, MA, ԱՄՆ) Flash EA1112 տարրական կազմի վերլուծիչով: Մասնիկների չափի բաշխումը ստանալու համար օգտագործվել է Malvern մասնիկների չափի վերլուծիչ (Worcestershire, Մեծ Բրիտանիա) Mastersizer 2000: Չծածկված սիլիցիումի մասնիկները և լիգանդին կապված սիլիցիումի մասնիկները (յուրաքանչյուրը 5 մգ) ցրվել են 5 մլ իզոպրոպանոլի մեջ, ուլտրաձայնային մշակման ենթարկվել 10 րոպե, խառնվել 5 րոպե և տեղադրվել Mastersizer օպտիկական սեղանի վրա: Ջերմագրավիմետրիկ վերլուծությունն իրականացվել է րոպեում 5°C արագությամբ՝ 30-ից մինչև 800°C ջերմաստիճանային միջակայքում:
Ապակե մանրաթելով պատված նեղ տրամաչափի չժանգոտվող պողպատե սյուները՝ չափսերով (ID 100 × 1.8 մմ), փաթեթավորվել են շաղախի լցման մեթոդով՝ հետևելով 31 հղումում նշված նույն ընթացակարգին: Չժանգոտվող պողպատե սյունը (ապակե պատված, ID 100 × 1.8 մմ) և 1 մկմ ֆրիտ պարունակող ելքը միացվել են շաղախի փաթեթավորման մեքենային (Alltech Deerfield, IL, ԱՄՆ): Պատրաստել ստացիոնար փուլի սուսպենզիա՝ 150 մգ ստացիոնար փուլը 1.2 մլ մեթանոլի մեջ կախույթավորելով և այն լցնելով ռեզերվուարային սյան մեջ: Մեթանոլն օգտագործվել է որպես շաղախի լուծիչ և վերահսկիչ լուծիչ: Սյունը փաթեթավորել՝ կիրառելով 100 ՄՊ ճնշման հաջորդականություն 10 րոպե, 80 ՄՊ՝ 15 րոպե և 60 ՄՊ՝ 30 րոպե: Փաթեթավորման գործընթացում օգտագործվել են երկու գազային քրոմատոգրաֆիայի սյունակի վիբրատորներ (Alltech, Deerfield, IL, ԱՄՆ) մեխանիկական թրթռման համար՝ սյան միատարր փաթեթավորումն ապահովելու համար: Փակել շաղախի փաթեթավորիչը և դանդաղորեն թուլացնել ճնշումը՝ լարի վնասումը կանխելու համար: Սյունը անջատվեց շաղախի ծայրակալից, և մեկ այլ միացում ամրացվեց մուտքին և միացավ LC համակարգին՝ դրա աշխատանքը ստուգելու համար։
Հատուկ MLC-ն կառուցվել է LC պոմպի (10AD Shimadzu, Ճապոնիա), 50 նլ ներարկման օղակով նմուշառիչի (Valco (USA) C14 W.05), թաղանթային դեգազերի սարքի (Shimadzu DGU-14A) և UV-VIS մազանոթային պատուհանի միջոցով: Դետեկտորի սարք (UV-2075) և էմալապատ միկրոսյունակի միջոցով: Սյունակի լրացուցիչ ընդլայնման ազդեցությունը նվազագույնի հասցնելու համար օգտագործվում են շատ նեղ և կարճ միացնող խողովակներ: Սյունակը լցնելուց հետո 1/16″ վերականգնող միացման ելքի մոտ տեղադրվում է մազանոթ (50 մկմ id 365) և վերականգնող միացման մազանոթ (50 մկմ): Տվյալների հավաքագրումը և քրոմատոգրամի մշակումը կատարվում են Multichro 2000 ծրագրաշարի միջոցով: 254 նմ-ում վերլուծվող նյութերի UV կլանումը վերահսկվել է 0-ի դեպքում: Քրոմատոգրաֆիկ տվյալները վերլուծվել են OriginPro8-ի (Նորթհեմփթոն, Մասաչուսեթս) միջոցով:
Մարդու շիճուկային ալբումին, լիոֆիլիզացված փոշի, ≥ 96% (ագարոզային գել էլեկտրոֆորեզ) 3 մգ, խառնված տրիպսինի (1.5 մգ), 4.0 Մ միզանյութի (1 մլ) և 0.2 Մ ամոնիումի բիկարբոնատի (1 մլ) հետ։ Լուծույթը խառնվել է 10 րոպե և պահվել է ջրային բաղնիքում 37°C ջերմաստիճանում 6 ժամ, այնուհետև մարվել է 1 մլ 0.1% TFA-ով։ Լուծույթը զտել և պահել 4°C-ից ցածր ջերմաստիճանում։
Պեպտիդների խառնուրդի և տրիպսինային մարսողության HSA-ի առանձնացումը PMP սյունակում գնահատվել է առանձին: Ստուգեք PMP սյունակով առանձնացված պեպտիդների և HSA-ի խառնուրդի տրիպսինային հիդրոլիզը և համեմատեք արդյունքները Ascentis Express RP-Amide սյունակի հետ: Տեսական թիթեղների քանակը հաշվարկվում է հետևյալ հավասարման միջոցով՝
Մաքուր սիլիկայի մասնիկների և լիգանդին կապված սիլիկայի մասնիկների ՍԷՄ պատկերները ներկայացված են նկար 2-ում: Մաքուր սիլիկայի մասնիկների (A, B) ՍԷՄ պատկերները ցույց են տալիս գնդաձև ձև, որում մասնիկները երկարավուն են կամ ունեն անկանոն համաչափություն՝ համեմատած մեր նախորդ ուսումնասիրությունների հետ: Լիգանդով (C, D) կապված սիլիկայի մասնիկների մակերեսը ավելի հարթ է, քան մաքուր սիլիկայի մասնիկներինը, ինչը կարող է պայմանավորված լինել սիլիկայի մասնիկների մակերեսը ծածկող պոլիստիրոլային շղթաներով:
Մաքուր սիլիկայի մասնիկների (A, B) և լիգանդին կապված սիլիկայի մասնիկների (C, D) սկանավորող էլեկտրոնային միկրոֆոտոներ։
Մաքուր սիլիկայի մասնիկների և լիգանդին կապված սիլիկայի մասնիկների մասնիկների չափերի բաշխումը ներկայացված է Նկար 2.3(A)-ում: Ծավալային մասնիկների չափերի բաշխման կորերը ցույց են տվել, որ սիլիկայի մասնիկների չափը մեծացել է քիմիական փոփոխությունից հետո (Նկար 3A): Ներկայիս և նախորդ ուսումնասիրություններից ստացված սիլիկայի մասնիկների չափերի բաշխման տվյալները համեմատվում են աղյուսակ 1(A)-ում: PMP-ի ծավալային մասնիկների չափը d(0.5) կազմել է 3.36 մկմ, համեմատած մեր նախորդ ուսումնասիրության մեջ (պոլիստիրոլային կապված սիլիկայի մասնիկներ)34 ad(0.5) 3.05 մկմ արժեքի հետ: Ռեակցիայի խառնուրդում PEG-ի, միզանյութի, TMOS-ի և քացախաթթվի հարաբերակցության փոփոխության պատճառով այս խմբաքանակի մասնիկների չափերի բաշխումն ավելի նեղ էր մեր նախորդ ուսումնասիրության համեմատ: PMP փուլի մասնիկների չափը մի փոքր ավելի մեծ է, քան մեր կողմից ավելի վաղ ուսումնասիրված պոլիստիրոլային կապված սիլիկայի մասնիկների փուլի չափը: Սա նշանակում է, որ սիլիկայի մասնիկների մակերեսային ֆունկցիոնալիզացիան ստիրոլով սիլիկայի մակերեսին նստեցրել է միայն պոլիստիրոլային շերտ (0.97 մկմ), մինչդեռ PMP փուլում շերտի հաստությունը կազմել է 1.38 մկմ:
Մաքուր սիլիկա մասնիկների և լիգանդին կապված սիլիկա մասնիկների մասնիկների չափի բաշխումը (A) և ծակոտիների չափի բաշխումը (B):
Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործված սիլիցիումի մասնիկների ծակոտիների չափը, ծակոտիների ծավալը և մակերեսի մակերեսը ներկայացված են աղյուսակ 1 (Բ)-ում: Մաքուր սիլիցիումի մասնիկների և լիգանդին կապված սիլիցիումի մասնիկների PSD պրոֆիլները ներկայացված են նկար 3 (Բ)-ում: Արդյունքները համեմատելի էին մեր նախորդ ուսումնասիրության հետ34: Մաքուր և լիգանդին կապված սիլիցիումի մասնիկների ծակոտիների չափերը համապատասխանաբար կազմել են 310 Å և 241 Å, ինչը ցույց է տալիս, որ քիմիական մոդիֆիկացիայից հետո ծակոտիների չափը նվազել է 69 Å-ով, ինչպես ցույց է տրված աղյուսակ 1 (Բ)-ում, իսկ տեղաշարժի կորը ներկայացված է նկար 1-ում: Այս ուսումնասիրության մեջ սիլիցիումի մասնիկների տեսակարար մակերեսը կազմում է 116 մ2/գ, որը համեմատելի է մեր նախորդ ուսումնասիրության հետ (124 մ2/գ): Ինչպես ցույց է տրված աղյուսակ 1 (Բ)-ում, քիմիական մոդիֆիկացիայից հետո սիլիցիումի մասնիկների մակերեսի մակերեսը (մ2/գ) նույնպես նվազել է 116 մ2/գ-ից մինչև 105 մ2/գ:
Ստացիոնար փուլի տարրական վերլուծության արդյունքները ներկայացված են աղյուսակ 2-ում: Ներկայիս ստացիոնար փուլի ածխածնի պարունակությունը կազմում է 6.35%, որը ցածր է մեր նախորդ ուսումնասիրությունից (պոլիստիրոլի հետ կապված սիլիցիումի մասնիկներ՝ համապատասխանաբար 7.93%35 և 10.21%): 42: Ներկայիս ստացիոնար փուլի ածխածնի պարունակությունը ստորև, քանի որ SP-ի պատրաստման մեջ ստիրոլից բացի օգտագործվել են նաև որոշ բևեռային լիգանդներ, ինչպիսիք են ֆենիլմալեյմիդի մեթիլ վինիլիզոցիանատը (PCMP) և 4-հիդրօքսի-TEMPO-ն: Ներկայիս ստացիոնար փուլում ազոտի կշռային տոկոսը կազմում է 2.21%՝ նախորդ ուսումնասիրություններում 0.1735 և 0.85%-ի համեմատ: 42 Սա նշանակում է, որ ներկայիս ստացիոնար փուլն ունի ազոտի բարձր կշռային տոկոս՝ ֆենիլմալեյմիդի պատճառով: Նմանապես, (4) և (5) արտադրանքները ունեն համապատասխանաբար 2.7% և 2.9% ածխածնի պարունակություն, մինչդեռ վերջնական արտադրանքը (6) ունի 6.35% ածխածնի պարունակություն, ինչպես ցույց է տրված աղյուսակ 2-ում: Քաշի կորուստը ստուգելու համար PMP-ի ստացիոնար փուլի վրա օգտագործվել է ջերմագրավիմետրիկ վերլուծություն (TGA), և TGA կորը ցույց է տրված նկար 4-ում: TGA կորը ցույց է տալիս 8.6% քաշի կորուստ, որը լավ համապատասխանում է ածխածնի պարունակությանը (6.35%), քանի որ լիգանդները պարունակում են ոչ միայն C, այլև N, O և H:
Ֆենիլմալեյմիդ-մեթիլվինիլիզոցիանատ լիգանդը ընտրվել է սիլիցիումի մասնիկների մակերեսը փոփոխելու համար՝ դրա բևեռային ֆենիլմալեյմիդի և վինիլիզոցիանատ խմբերի շնորհիվ: Վինիլային իզոցիանատ խմբերը կարող են հետագայում ռեակցիայի մեջ մտնել ստիրոլի հետ՝ կենդանի ռադիկալ պոլիմերացման միջոցով: Երկրորդ պատճառն այն է, որ ներմուծվի մի խումբ, որը չափավոր փոխազդեցություններ ունի անալիտի հետ և ուժեղ էլեկտրաստատիկ փոխազդեցություններ չունի անալիտի և ստացիոնար փուլի միջև, քանի որ ֆենիլմալեյմիդի մասը նորմալ pH-ի դեպքում գործնական լիցք չունի: Ստացիոնար փուլի բևեռականությունը կարող է կարգավորվել ստիրոլի օպտիմալ քանակով և ազատ ռադիկալ պոլիմերացման ռեակցիայի ժամանակով: Ռեակցիայի վերջին քայլը (ազատ ռադիկալ պոլիմերացում) կարևոր է, քանի որ այն փոխում է ստացիոնար փուլի բևեռականությունը: Այս ստացիոնար փուլերում ածխածնի պարունակությունը ստուգելու համար իրականացվել է տարրական վերլուծություն: Նկատվել է, որ ստիրոլի քանակի և ռեակցիայի ժամանակի ավելացումը մեծացնում է ստացիոնար փուլի ածխածնի պարունակությունը և հակառակը: Ստիրոլի տարբեր կոնցենտրացիաներով պատրաստված SP-ները ունեն տարբեր ածխածնային բեռներ: Նմանապես, այս ստացիոնար փուլերը տեղադրվել են չժանգոտվող պողպատե սյուների վրա և ստուգվել են դրանց քրոմատոգրաֆիկ բնութագրերը (ընտրողականություն, լուծաչափ, N արժեք և այլն): Այս փորձերի հիման վրա ընտրվել է PMP ստացիոնար փուլի պատրաստման համար օպտիմալացված կազմ՝ վերահսկվող բևեռականություն և անալիտի լավ պահպանում ապահովելու համար:
PMP սյունը նաև գնահատվել է պեպտիդների հինգ խառնուրդների (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, լեյցին-էնկեֆալին) վերլուծության համար՝ օգտագործելով շարժական փուլի հզորությունը։ 60/40 (v/v) ACN/ջուր (0.1% TFA) 80 մկլ/րոպե հոսքի արագությամբ։ Օպտիմալ էլյուցիայի պայմաններում (200,000 թիթեղ/մ²) սյան մեջ տեսական թիթեղների քանակը (N) (100 × 1.8 մմ) կազմում է 20,000 ± 100։ Երեք PMP սյուների համար N արժեքները ներկայացված են աղյուսակ 3-ում, իսկ քրոմատոգրամները՝ նկար 5Ա-ում։ Արագ վերլուծություն բարձր հոսքի արագությամբ (700 մկլ/րոպե) PMP սյան վրա, հինգ պեպտիդներ էլուացվեցին մեկ րոպեի ընթացքում, գերազանց N արժեքը՝ 13,500 ± 330 մեկ սյան համար (100 x 1.8 մմ տրամագծով), որը համարժեք է 135,000 թիթեղ/մ² (Նկ. 5Բ): Նույն չափի երեք սյուները (ներքին տրամագիծը՝ 100 x 1.8 մմ) լցվեցին PMP ստացիոնար փուլի երեք տարբեր խմբաքանակներով՝ վերարտադրելիությունը ստուգելու համար: Անալիզները գրանցվեցին յուրաքանչյուր սյան համար՝ յուրաքանչյուր սյան վրա նույն փորձարկման խառնուրդը առանձնացնելով՝ օգտագործելով օպտիմալ էլյուցիայի պայմաններ, տեսական թիթեղների N քանակը և պահպանման ժամանակը: PMP սյուների վերարտադրելիության տվյալները ներկայացված են աղյուսակ 4-ում: PMP սյան վերարտադրելիությունը լավ համընկնում էր շատ ցածր %RSD արժեքների հետ, ինչպես ցույց է տրված աղյուսակ 3-ում:
Պեպտիդային խառնուրդների բաժանումը PMP սյունակի (B) և Ascentis Express RP-Amid սյունակի (A) վրա, շարժուն փուլ՝ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP սյունակի չափսեր (100 x 1.8 մմ ներքին տրամագիծ), վերլուծություն։ Միացությունների էլյուցիայի կարգը՝ 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) և 5 (լեյցինաթթվի էնկեֆալին)։
Մարդու շիճուկային ալբումինի տրիպսինային հիդրոլիզատի բաժանման համար HPLC մեթոդով գնահատվել է PMP սյունը (ներքին տրամագիծը՝ 100 x 1.8 մմ): Նկար 6-ում ներկայացված քրոմատոգրամը ցույց է տալիս, որ նմուշները լավ են բաժանված՝ շատ լավ լուծաչափով: HSA լուծույթները վերլուծվել են՝ օգտագործելով 100 մկլ/րոպե հոսքի արագություն, 70/30 ացետոնիտրիլ/ջուր շարժուն փուլ և 0.1% TFA: HSA-ի բաժանումը բաժանվել է 17 գագաթների, ինչպես ցույց է տրված քրոմատոգրամում (Նկար 6), որոնք համապատասխանում են 17 պեպտիդի: Հաշվարկվել է HSA հիդրոլիզատից առանձին գագաթների բաժանման արդյունավետությունը, և արժեքները ներկայացված են աղյուսակ 5-ում:
HSA տրիպսինային հիդրոլիզատները բաժանվել են PMP սյան վրա (ներքին տրամագիծ՝ 100 x 1.8 մմ), հոսքի արագություն (100 մկլ/րոպե), շարժուն փուլ՝ 60/40 ացետոնիտրիլ/ջուր և 0.1% TFA:
որտեղ L-ը սյան երկարությունն է, η-ն՝ շարժական փուլի մածուցիկությունը, ΔP-ն՝ սյան հետադարձ ճնշումը, իսկ u-ն՝ շարժական փուլի գծային արագությունը: PMP սյան թափանցելիությունը կազմել է 2.5 × 10–14 մ2, հոսքի արագությունը՝ 25 մկլ/րոպե, օգտագործվել է 60/40 v/v: ACN/ջուր: PMP սյան թափանցելիությունը (ID 100 × 1.8 մմ) նման էր մեր նախորդ Ref.34 ուսումնասիրության թափանցելիությանը: Մակերեսային ծակոտկեն մասնիկներով լցված սյան թափանցելիությունը կազմում է 1.7×10 .6 մկմ, 2.5×10-14 մ2՝ 5 մկմ մասնիկների համար43: Հետևաբար, PMP փուլի թափանցելիությունը նման է 5 մկմ չափի միջուկ-կեղև մասնիկների թափանցելիությանը:
որտեղ Wx-ը քլորոֆորմով լցված սյան զանգվածն է, Wy-ը՝ մեթանոլով լցված սյան զանգվածը, իսկ ρ-ն՝ լուծիչի խտությունը։ Մեթանոլի (ρ = 0.7866) և քլորոֆորմի (ρ = 1.484) խտությունը։ Սիլիցիում-C18 մասնիկային սյան (100 × 1.8 մմ ներքին տրամագիծ)34 և մեր նախկինում ուսումնասիրված C18-urea31 սյան ընդհանուր ծակոտկենությունը համապատասխանաբար 0.63 և 0.55 էր։ Սա նշանակում է, որ միզանյութի լիգանդների առկայությունը նվազեցնում է ստացիոնար փուլի թափանցելիությունը։ Մյուս կողմից, PMP սյան ընդհանուր ծակոտկենությունը (ներքին տրամագիծը՝ 100 × 1.8 մմ) 0.60 է։ PMP սյուները պակաս թափանցելի են, քան C18-ի հետ կապված սիլիցիումի մասնիկներով լցված սյուները, քանի որ C18 տիպի ստացիոնար փուլերում C18 լիգանդները կցված են սիլիցիումի մասնիկներին գծային շղթաներով, մինչդեռ պոլիստիրոլ տիպի ստացիոնար փուլերում մասնիկների շուրջ ձևավորվում է համեմատաբար հաստ պոլիմեր։ շերտ A: Տիպիկ փորձի ժամանակ սյունակի ծակոտկենությունը հաշվարկվում է հետևյալ կերպ.
Նկար 7A-ում և B-ում ցույց են տրված Վան Դիմտերի գրաֆիկները PMP սյան (id 100 x 1.8 մմ) և Ascentis Express RP-Amide սյան (id 100 x 1.8 մմ) համար նույն էլյուցիայի պայմաններում՝ երկու սյուների վրա 60/40 ACN/H2O և 0.1% TFA 20 մկլ/րոպեից մինչև 800 մկլ/րոպե: Օպտիմալ հոսքի արագության դեպքում (80 մկլ/րոպե) HETP-ի նվազագույն արժեքները համապատասխանաբար 2.6 մկմ և 3.9 մկմ էին PMP սյան և Ascentis Express RP-Amide սյան համար: HETP արժեքները ցույց են տալիս, որ PMP սյան բաժանման արդյունավետությունը (id 100 x 1.8 մմ) շատ ավելի բարձր է, քան առևտրային առումով մատչելի Ascentis Express RP-Amide սյան (id 100 x 1.8 մմ): Նկար 7(A)-ում ներկայացված վան Դեմտերի գրաֆիկը ցույց է տալիս, որ N արժեքի նվազումը զգալիորեն ավելի բարձր չէ հոսքի աճին զուգընթաց՝ համեմատած մեր նախորդ ուսումնասիրության հետ։ Ascentis Express RP-Amide սյան համեմատ PMP սյան ավելի բարձր բաժանման արդյունավետությունը (id 100 × 1.8 մմ) հիմնված է մասնիկների ձևի և չափի բարելավման, ինչպես նաև ներկայիս աշխատանքում օգտագործվող բարդ սյունակի փաթեթավորման ընթացակարգի վրա34։
(Ա) Վան Դիմտերի գրաֆիկը (HETP ընդդեմ շարժուն փուլի գծային արագության), որը ստացվել է PMP սյան վրա (id 100 x 1.8 մմ) 60/40 ACN/H2O-ում 0.1% TFA-ով։ (Բ) Վան Դիմտերի գրաֆիկը (HETP ընդդեմ շարժուն փուլի գծային արագության), որը ստացվել է Ascentis Express RP-Amide սյան վրա (id 100 x 1.8 մմ) 60/40 ACN/H2O-ում 0.1% TFA-ով։
Սինթետիկ պեպտիդների և մարդու շիճուկային ալբումինի (HSA) տրիպսինային հիդրոլիզատի խառնուրդի բարձր արդյունավետությամբ հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի միջոցով բաժանման համար պատրաստվել և գնահատվել է ինտերկալացված պոլիստիրոլի բևեռային ստացիոնար փուլը: Պեպտիդային խառնուրդների համար PMP սյուների քրոմատոգրաֆիկ կատարողականությունը գերազանց է բաժանման արդյունավետության և լուծաչափի առումով: PMP սյուների բարելավված բաժանման արդյունավետությունը պայմանավորված է մի քանի պատճառներով, ինչպիսիք են սիլիցիումի մասնիկների չափը և ծակոտիների չափը, ստացիոնար փուլերի վերահսկվող սինթեզը և սյունակի բարդ փաթեթավորման նյութերը: Բարձր բաժանման արդյունավետությունից բացի, այս ստացիոնար փուլի մեկ այլ առավելություն է սյունակի ցածր հետադարձ ճնշումը բարձր հոսքի արագությունների դեպքում: PMP սյուները բարձր վերարտադրելիություն ունեն և կարող են օգտագործվել պեպտիդների խառնուրդների և տարբեր սպիտակուցների տրիպսինային մարսման վերլուծության համար: Մենք մտադիր ենք օգտագործել այս սյունը բնական արտադրանքներից, բուժիչ բույսերի և սնկերի քաղվածքներից կենսաակտիվ միացությունների բաժանման համար հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի միջոցով: Ապագայում PMP սյուները կգնահատվեն նաև սպիտակուցների և մոնոկլոնալ հակամարմինների բաժանման համար:
Ֆիլդ, Ջ.Կ., Էյվերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Թյոգերսեն, Հ. և Պետերսոն, Պ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի պեպտիդային բաժանման համակարգերի հետազոտություն, մաս I. Սյունակի բնութագրման արձանագրության մշակում։ Ֆիլդ, Ջ.Կ., Էյվերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Թյոգերսեն, Հ. և Պետերսոն, Պ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի պեպտիդային բաժանման համակարգերի հետազոտություն, մաս I. Սյունակային բնութագրման արձանագրության մշակում:Ֆիլդ, Ջ.Կ., Օուերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Տոգերսեն, Հ., և Պետերսոն, Պ. Պեպտիդների բաժանման համակարգերի հետազոտություն հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով, Մաս I. Սյունակի բնութագրման արձանագրության մշակում: Ֆիլդ, Ջ.Կ., Էուերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Թյոգերսեն, Հ. և Պետերսոն, Պ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի պեպտիդային բաժանման համակարգերի հետազոտություն, մաս I. Սյունակի բնութագրերի արձանագրության մշակում: Ֆիլդ, Ջ.Կ., Էուերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Թյոգերսեն, Հ. և Պետերսոն, Պ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի պեպտիդային բաժանման համակարգերի հետազոտություն, մաս I. Սյունակի բնութագրերի արձանագրության մշակում:Ֆիլդ, Ջ.Կ., Օուերբի, Մ.Ռ., Լաու, Ջ., Տոգերսեն, Հ., և Պետերսոն, Պ. Պեպտիդների բաժանման համակարգերի հետազոտություն հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով, Մաս I. Սյունակի բնութագրման արձանագրության մշակում:J.色谱法。 1603，113-129։ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)։
Գոմես, Բ. և այլք։ Վարակիչ հիվանդությունների բուժման համար բարելավված ակտիվ պեպտիդներ ստեղծելու մեթոդներ։ Կենսատեխնոլոգիա։ Նվաճումներ 36(2), 415–429։ https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)։
Վլիեգե, Պ., Լիսովսկի, Վ., Մարտինես, Ջ. և Խրեստչատիսկի, Մ. Սինթետիկ թերապևտիկ պեպտիդներ. Գիտություն և շուկա։ Վլիեգե, Պ., Լիսովսկի, Վ., Մարտինես, Ջ. և Խրեստչատիսկի, Մ. Սինթետիկ թերապևտիկ պեպտիդներ. Գիտություն և շուկա։Վլիեգե Պ., Լիսովսկի Վ., Մարտինես Ջ. և Չրեշատիսկի Մ. Սինթետիկ թերապևտիկ պեպտիդներ. գիտություն և շուկա։Վլիեգե Պ., Լիսովսկի Վ., Մարտինես Ջ. և Խրեշչացկի Մ. Սինթետիկ թերապևտիկ պեպտիդներ. գիտություն և շուկա։ Դեղերի հայտնաբերում։ Today 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)։
Շիե, Ֆ., Սմիթ, ՌԴ և Շեն, Յ. Առաջադեմ պրոտեոմիկ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա։ Շիե, Ֆ., Սմիթ, ՌԴ և Շեն, Յ. Առաջադեմ պրոտեոմիկ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա։Տես Ֆ., Սմիթ ՌԴ և Շեն Յու։ Առաջադեմ պրոտեոմիկ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա։ Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ընդլայնված սպիտակուցային բաղադրություն 液相色谱.Տես Ֆ., Սմիթ ՌԴ և Շեն Յու։ Առաջադեմ պրոտեոմիկ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա։J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012)։
Լյու, Վ. և այլք։ Առաջադեմ հեղուկ քրոմատոգրաֆիա-զանգվածային սպեկտրոմետրիան կարող է համատեղել լայնածավալ մետաբոլոմիկան և պրոտեոմիկան։ anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019)։
Չեսնատ, ՍՄ և Սալիսբերի, ՋՋ։ UHPLC-ի դերը դեղագործական զարգացման մեջ։ Չեսնատ, ՍՄ և Սալիսբերի, ՋՋ։ UHPLC-ի դերը դեղագործական զարգացման մեջ։Չեսնատ, ՍՄ և Սալիսբերի, ՋՋ։ UHPLC-ի դերը դեղագործական զարգացման մեջ։Չեսնատ, ՍՄ և Սալիսբերի, ՋՋ։ UHPLC-ի դերը դեղերի մշակման գործում։ J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007)։
Վու, Ն. և Կլաուսեն, Ա.Մ. Արագ բաժանման համար գերբարձր ճնշման հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի հիմնարար և գործնական ասպեկտները։ Վու, Ն. և Կլաուսեն, Ա.Մ. Արագ բաժանման համար գերբարձր ճնշման հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի հիմնարար և գործնական ասպեկտները։Վու, Ն. և Կլաուսեն, Ա.Մ. Բարձր ճնշման հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի հիմնարար և գործնական ասպեկտները արագ բաժանման համար։ Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Վու, Ն. և Կլաուսեն, Ա.Մ. Արագ բաժանման համար գերբարձր ճնշման հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի հիմնական և գործնական ասպեկտները։Վու, Ն. և Կլաուսեն, Ա.Մ. Բարձր ճնշման հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի հիմնարար և գործնական ասպեկտները արագ բաժանման համար։J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)։
Վրեն, Ս.Ա. և Չելիչեֆ, Պ. Ուլտրաարդյունավետ հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի կիրառումը դեղագործական մշակումներում։ Վրեն, Ս.Ա. և Չելիչեֆ, Պ. Ուլտրաարդյունավետ հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի կիրառումը դեղագործական մշակումներում։Ռեն, ՍԱ և Չելիշեֆ, Պ. Գերբարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի կիրառումը դեղագործական մշակումներում։ Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Ռեն, Ս.Ա. և Չելիչեֆ, Պ.Ռեն, ՍԱ և Չելիշեֆ, Պ. Ուլտրաարդյունավետ հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի կիրառումը դեղերի մշակման մեջ։Քրոմատոգրաֆիա։ 1119(1-2), 140-146։ https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)։
Գու, Հ. և այլք։ Մոնոլիտ մակրոպորոզ հիդրոգել, որը ստացվել է յուղ-ջրային էմուլսիայից՝ բարձր ներքին փուլով, էնտերովիրուս 71-ի արդյունավետ մաքրման համար։ Քիմիական նախագիծ։ Journal 401, 126051 (2020)։
Շի, Յ., Շիանգ, Ռ., Հորվաթ, Ք. և Ուիլկինս, Ջ.Ա. Հեղուկային քրոմատոգրաֆիայի դերը պրոտեոմիկայի մեջ։ Շի, Յ., Շիանգ, Ռ., Հորվաթ, Ք. և Ուիլկինս, Ջ.Ա. Հեղուկային քրոմատոգրաֆիայի դերը պրոտեոմիկայի մեջ։Շի, Յ., Շիանգ, Ռ., Հորվաթ, Ս. և Ուիլկինս, Ջ.Ա. Հեղուկային քրոմատոգրաֆիայի դերը պրոտեոմիկայի մեջ։ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAՇի, Յ., Շիանգ, Ռ., Հորվաթ, Ս. և Ուիլկինս, Ջ.Ա. Հեղուկային քրոմատոգրաֆիայի դերը պրոտեոմիկայի մեջ։J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004):
Ֆեկետե, Ս., Վուտեյ, Ջ.-Լ. & Գիլյարմե, Դ. Թերապևտիկ պեպտիդների և սպիտակուցների հակադարձ փուլային հեղուկ քրոմատոգրաֆիկ բաժանման նոր միտումներ. տեսություն և կիրառություններ։ & Գիլյարմե, Դ. Թերապևտիկ պեպտիդների և սպիտակուցների հակադարձ փուլային հեղուկ քրոմատոգրաֆիկ բաժանման նոր միտումներ. տեսություն և կիրառություններ։ & Guillarme, D. Novыe tendence в разделени терапевтских пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографии со обращенной фазой: теория и приложения. & Գիլյարմե, Դ. Թերապևտիկ պեպտիդների և սպիտակուցների հակադարձ փուլային հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի միջոցով բաժանման նոր միտումներ. տեսություն և կիրառություններ։ & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 և Գիլյարմե, Դ.և Գիլյարմե, Դ. Թերապևտիկ պեպտիդների և սպիտակուցների հակադարձ փուլային հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի միջոցով բաժանման նոր միտումներ. տեսություն և կիրառություններ։J. Pharm. Կենսաբժշկական գիտություն։ anus. 69, 9–27 (2012)։
Գիլար, Մ., Օլիվովա, Պ., Դեյլի, Ա.Ե. և Գեբլեր, Ջ.Ս. Պեպտիդների երկչափ բաժանում RP-RP-HPLC համակարգի միջոցով՝ տարբեր pH-ով առաջին և երկրորդ բաժանման չափումներում։ Գիլար, Մ., Օլիվովա, Պ., Դեյլի, Ա.Ե. և Գեբլեր, Ջ.Ս. Պեպտիդների երկչափ բաժանում RP-RP-HPLC համակարգի միջոցով՝ տարբեր pH-ով առաջին և երկրորդ բաժանման չափումներում։Գիլար Մ., Օլիվովա Պ., Դալի Ա.Ե. և Գեբլեր Ջ.Կ. Պեպտիդների երկչափ բաժանում RP-RP-HPLC համակարգի միջոցով՝ տարբեր pH արժեքներով առաջին և երկրորդ բաժանման չափումներում։Գիլար Մ., Օլիվովա Պ., Դալի Ա.Ե. և Գեբլեր Ջ.Կ. Պեպտիդների երկչափ բաժանումը՝ օգտագործելով տարբեր pH արժեքներ առաջին և երկրորդ բաժանման չափումներում՝ օգտագործելով RP-RP-HPLC համակարգը: J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005):
Ֆելլիտի, Ս. և այլք։ Բարձր արդյունավետության քրոմատոգրաֆիայի սյուների զանգվածի փոխանցման և կինետիկ բնութագրերի հետազոտություն, որոնք լցված են 2 մկմ-ից փոքր լիովին ծակոտկեն և մակերեսային ծակոտկեն C18 մասնիկներով։ J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020)։
Պիովեսանա, Ս. և այլք։ Բույսերի կենսաակտիվ պեպտիդների մեկուսացման, նույնականացման և վավերացման վերջին միտումները և վերլուծական մարտահրավերները։ anus։ Creature anal։ Chemical։ 410(15), 3425-3444։ https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)։
Մյուլլեր, Ջ.Բ. և այլք։ Կյանքի թագավորության պրոտեոմիկ լանդշաֆտը։ Nature 582 (7813), 592–596։ https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)։
Դե Լուկա, Կ. և այլք։ Թերապևտիկ պեպտիդների հետմշակում պրեպարատիվ հեղուկային քրոմատոգրաֆիայի միջոցով։ Molecules (Բազել, Շվեյցարիա) 26(15), 4688 (2021)։
Յանգ, Յ. և Գենգ, Շ. Խառը ռեժիմային քրոմատոգրաֆիա և դրա կիրառությունները կենսապոլիմերներում։ Յանգ, Յ. և Գենգ, Շ. Խառը ռեժիմային քրոմատոգրաֆիա և դրա կիրառությունները կենսապոլիմերներում։Յանգ, Յու. և Գենգ, Շ. Խառը ռեժիմի քրոմատոգրաֆիա և դրա կիրառումը կենսապոլիմերներում։ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Յանգ, Յ. և Գենգ, Շ. Խառը ռեժիմի քրոմատոգրաֆիա և դրա կիրառումը կենսապոլիմերներում։Յանգ, Յու. և Ջին, Շ. Խառը ռեժիմի քրոմատոգրաֆիա և դրա կիրառումը կենսապոլիմերներում։J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011):