Javascript saat ini dinonaktifkan di browser Anda. Beberapa fitur situs web ini tidak akan berfungsi jika javascript dinonaktifkan.
Daftarkan dengan detail spesifik dan obat tertentu yang Anda minati dan kami akan mencocokkan informasi yang Anda berikan dengan artikel di basis data kami yang luas dan segera mengirimkan salinan PDF melalui email kepada Anda.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Departemen Kedokteran Klinis dan Eksperimental, Universitas Catania, Catania, 95123, Italia;2 Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimental, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italia;3 Onkologi Medis, Poliklinik AOU “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia;4 Genetika Medis, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia;5 Kedokteran Genetika, ASP, Syracuse, 96100, Italy;6 Departemen Ilmu Biomedis dan Bioteknologi, Universitas Catania, Genetika Medis, Catania, Italia, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italia Komunikasi: Stefania Stella, telp +39 095 378 1946, email [email dilindungi];[email protected] Tujuan: Mutasi germline pada BRCA1 dan BRCA2 dan kanker payudara (BC), ovarium (OC) dan hal lain yang terkait dengan risiko kanker seumur hidup. Menguji gen BRCA adalah kunci untuk menilai risiko individu, serta untuk menemukan metode pencegahan pada karier yang sehat dan menyesuaikan perawatan pada pasien kanker. Prevalensi perubahan BRCA1 dan BRCA2 sangat bervariasi di seluruh wilayah geografis, dan meskipun ada data tentang varian patogen BRCA dalam keluarga Sisilia, penelitian secara khusus menargetkan populasi s di Sisilia timur kurang. Tujuan dari penelitian kami adalah untuk menyelidiki kejadian dan distribusi perubahan germline patogen BRCA dalam kohort pasien BC dari Sisilia timur dan untuk menilai hubungan mereka dengan ciri-ciri BC spesifik menggunakan pengurutan generasi berikutnya. Kehadiran perubahan berkorelasi dengan tingkat tumor dan indeks proliferasi. HASIL: Secara keseluruhan, 35 pasien (9%) memiliki varian patogen BRCA, 17 (49%) di BRCA1 dan 18 (51%) di BRCA2 Perubahan BRCA1 lazim pada pasien BC triple-negatif, sedangkan mutasi BRCA2 lebih sering terjadi pada pasien BC luminal. Dibandingkan dengan non-carrier, subjek dengan varian BRCA1 memiliki grade tumor dan indeks proliferatif yang jauh lebih tinggi. pembawa mutasi.
Kanker payudara (BC) adalah keganasan yang paling umum di seluruh dunia dan kanker paling mematikan pada wanita.1 Fitur biologis yang menentukan prognosis BC dan perilaku klinis telah dipelajari secara luas dan sebagian dijelaskan dari waktu ke waktu. Faktanya, beberapa penanda pengganti saat ini digunakan untuk mengklasifikasikan BC ke dalam subtipe molekuler yang berbeda. Mereka adalah reseptor estrogen (ER) dan/atau reseptor progesteron (PgR), amplifikasi faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER2), indeks proliferasi Ki-67 dan tingkat tumor (G).2 Kombinasi dari variabel-variabel ini mengidentifikasi kategori BC berikut: 1) Tumor Luminal, menunjukkan ekspresi ER dan/atau PgR, menyumbang 75% dari BC. Tumor ini selanjutnya dibagi menjadi Luminal A, ketika Ki-67 di bawah 20% dan HER2 negatif, dan Luminal B, ketika Ki-67 sama dengan atau di atas 20% dan dengan adanya amplifikasi HER2, terlepas dari indeks proliferasi;2) Tumor HER2+ yang ER dan PgR negatif tetapi menunjukkan amplifikasi HER2. Kelompok ini menyumbang 10% dari semua tumor payudara;3) Kanker payudara triple-negatif (TNBC), yang tidak menunjukkan ekspresi ER dan PgR dan amplifikasi HER2, menyumbang sekitar 15% dari kanker payudara.2-4
Di antara subtipe BC ini, grade tumor dan indeks proliferasi mewakili biomarker cross-sectional yang secara langsung dan independen terkait dengan agresivitas dan prognosis tumor.5,6
Selain fitur biologis yang disebutkan di atas, peran perubahan genetik yang diwariskan yang mengarah pada perkembangan BC telah menjadi semakin penting selama beberapa tahun terakhir. Sekitar 1 dari 10 tumor payudara diwariskan karena perubahan germline pada gen tertentu. Dua studi epidemiologi besar yang melibatkan lebih dari 180.000 wanita baru-baru ini mengidentifikasi sekelompok delapan gen (yaitu, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, dan RAD51D) terutama bertanggung jawab atas BC herediter. Di antara gen-gen ini, BRCA1 dan BRCA2 (selanjutnya disebut BRCA1/2) menunjukkan korelasi terkuat dengan perkembangan tumor payudara.9-12 Faktanya, mutasi germline BRCA1/2 secara signifikan meningkatkan risiko seumur hidup dari BC serta keganasan lainnya, termasuk ovarium, prostat, pankreas, kolorektal, dan melanoma. Dari usia 13 hingga 80 tahun, insiden kumulatif BC adalah 72% pada wanita dengan varian patogen BRCA1 (PV) dan 69% pada wanita dengan PV BRCA2.14
Khususnya, publikasi baru-baru ini menunjukkan bahwa risiko BC bergantung pada jenis PV. Faktanya, dibandingkan dengan varian truncating patogen, varian missense yang mencolok, terutama pada gen BRCA1, dikaitkan dengan penurunan risiko BC, terutama pada wanita yang lebih tua.15
Kehadiran BRCA1 atau BRCA2 PV dikaitkan dengan fitur biologis dan klinikopatologis yang berbeda. 16,17 BC terkait BRCA1 cenderung agresif secara klinis, berdiferensiasi buruk, dan sangat proliferatif. Tumor ini biasanya triple negatif dan memiliki onset usia dini. dewasa.16-18 Khususnya, mutasi pada BRCA1 dan BRCA2 meningkatkan kepekaan terhadap pengobatan spesifik, termasuk garam platinum dan obat-obatan yang ditargetkan seperti penghambat polimerase poli(ADP-ribosa) (PARPi).19,20
Selama beberapa tahun terakhir, penerapan next-generation sequencing (NGS) dalam praktik klinis telah memungkinkan peningkatan jumlah pasien BC untuk menjalani pengujian molekuler untuk sindrom kerentanan kanker, termasuk BRCA1/2.21 Secara bersamaan, definisi berdasarkan kriteria yang tepat mengenai riwayat keluarga, demografi, dan karakteristik klinikopatologis untuk lebih mengidentifikasi individu yang layak untuk pengujian BRCA1/2.22,23 Dalam konteks ini, bukti terakumulasi pada skrining BRCA1/2 pada populasi tertentu, menyoroti perbedaan di seluruh wilayah geografis .24–27 Meskipun ada laporan tentang kohort BC di Sisilia barat, lebih sedikit data yang tersedia tentang skrining BRCA1/2 pada populasi Sisilia timur.28,29
Kami menjelaskan di sini hasil skrining germline BRCA1 / 2 pada pasien BC dari Sisilia timur, yang selanjutnya menghubungkan keberadaan mutasi BRCA1 atau BRCA2 dengan fitur klinikopatologis utama dari tumor ini.
Sebuah studi retrospektif dilakukan di “Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimental” di Rumah Sakit Policlinico.Rodolico – San Marco di Catania. Dari Januari 2017 hingga Maret 2021, total 455 pasien dengan kanker payudara dan ovarium, melanoma, pankreas, atau prostat dirujuk ke laboratorium diagnostik molekuler kami untuk pengujian genetik BRCA/2. Studi ini dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki, dan semua peserta memberikan persetujuan tertulis sebelum analisis molekuler.
Karakteristik histologis dan biologis (ER, PgR, status HER2, Ki-67, dan grade) dari BC dinilai pada biopsi inti atau sampel bedah, dengan mempertimbangkan hanya komponen tumor yang agresif. Berdasarkan karakteristik ini, BC diklasifikasikan sebagai berikut: luminal A (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER dan/atau PgR+, HER2+), HER2+ (ER dan PgR-, HER2+) atau triple negatif (ER dan PgR-, HER2-).
Sebelum menilai status mutasi BRCA1 dan BRCA2, tim multidisiplin termasuk ahli onkologi, ahli genetika, dan psikolog melakukan konsultasi genetika tumor pada setiap pasien untuk menentukan keberadaan BRCA1 dan/atau BRCA1.atau individu dengan risiko tinggi PV pada gen BRCA2. Seleksi pasien dilakukan sesuai dengan pedoman Italian Society of Medical Oncology (AIOM) dan rekomendasi lokal Sisilia. Kriteria ini meliputi: (i) riwayat keluarga dari varian patogen yang diketahui pada gen kerentanan (misalnya, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) laki-laki dengan BC;(iii) mereka dengan BC dan OC;(iv) wanita dengan BC <36 tahun, TNBC <60 tahun, atau bilateral BC <50 tahun;(v) riwayat medis pribadi BC <50 tahun dan setidaknya satu kerabat tingkat pertama: (a) BC <50 tahun;(b) OC non-mucinous dan non-borderline dari segala usia;(c) BC bilateral;(d) BC laki-laki;(e) kanker pankreas;(f) kanker prostat;(vi) dua atau lebih riwayat pribadi BC > 50 tahun dan riwayat keluarga BC, OC, atau kanker pankreas untuk kerabat yang merupakan kerabat tingkat pertama satu sama lain (termasuk kerabat dengan siapa dia adalah kerabat tingkat pertama);(vii) Riwayat pribadi OC dan setidaknya satu kerabat tingkat pertama: (a) BC <50 tahun;(b) NOC;(c) BC bilateral;(d) BC laki-laki;(vii) perempuan dengan OC serosa bermutu tinggi.
Sampel darah tepi 20 mL diperoleh dari setiap pasien dan dikumpulkan ke dalam tabung EDTA (BD Biosciences). DNA genom diisolasi dari 0,7 mL sampel darah utuh menggunakan QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) sesuai dengan instruksi pabrik dan melewati Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) Melakukan kuantifikasi.Pengayaan target dan persiapan pustaka dilakukan oleh Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, siap untuk dimuat ke dalam Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit untuk persiapan pustaka otomatis sesuai dengan petunjuk pabrikan. Kit ini terdiri dari dua kumpulan primer PCR multipleks yang dapat digunakan untuk mempelajari semua gen BRCA1 (NM_007300.3) dan BRCA2 (NM_000059.3).Secara singkat, 15 µ L dari setiap sampel DNA yang diencerkan (10 ng) ditambahkan ke pelat barcode untuk persiapan perpustakaan dan semua reagen dan bahan habis pakai dimuat pada instrumen Ion Chef™. Persiapan perpustakaan otomatis dan kumpulan perpustakaan sampel barcode kemudian dilakukan pada instrumen Ion Chef™. Jumlah perpustakaan yang disiapkan kemudian dinilai oleh Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) sesuai dengan instruksi pabrik. Akhirnya, perpustakaan digabungkan dalam rasio ekuimolar dalam Tabung sampel pustaka Ion Chef™ (tabung berkode batang) dan dimuat ke instrumen Ion Chef™. Pengurutan dilakukan menggunakan instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) menggunakan Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Analisis data dilakukan oleh Amplicon Suite (SmartSeq srl) dan Perangkat Lunak Ion Reporter.
Semua nomenklatur varian mengikuti pedoman saat ini dari Konsorsium Variasi Genom Manusia, tersedia online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Signifikansi klinis varian BRCA1/2 didefinisikan menggunakan klasifikasi Konsorsium Internasional ENIGMA (Jaringan Berbasis Bukti untuk Menafsirkan Alel Mutan Germline, https://enigmaconsortium.org/) dan berkonsultasi dengan database yang berbeda seperti AUP, BRCAEXCHANG E , ClinVar, IARC_LOVD, dan UMD. Klasifikasi tersebut mencakup lima kategori risiko yang berbeda: jinak (kategori I), kemungkinan jinak (kategori II), varian dengan signifikansi yang tidak pasti (VUS, kategori III), kemungkinan patogen (kategori IV), dan patogen (kategori V). VarSome juga menganalisis efek mutasi pada struktur dan fungsi protein, alat informatif dengan akses ke 30 database.32
Untuk menetapkan signifikansi klinis potensial untuk setiap VUS, algoritme prediksi protein komputasi berikut digunakan: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (//provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) dan Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varian diklasifikasikan sebagai kelas 1 dan 2 dianggap tipe liar.
Sequencing Sanger mengkonfirmasi keberadaan setiap varian patogen. Secara singkat, sepasang primer spesifik dirancang untuk setiap varian yang terdeteksi dengan menggunakan urutan referensi gen BRCA1 dan BRCA2 (masing-masing NG_005905.2, NM_007294.3 dan NG_012772.3, NM_000059.3). Oleh karena itu, PCR yang ditargetkan dilakukan diikuti oleh Sanger sequencing.
Pasien yang dites negatif untuk gen BRCA1/2 diuji dengan multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) sesuai dengan instruksi pabrik untuk menilai keberadaan large genomic rearrangements (LGR). Secara singkat, sampel DNA didenaturasi dan hingga 60 probe khusus gen BRCA1 dan BRCA2 digunakan, masing-masing mendeteksi urutan DNA spesifik dengan panjang sekitar 60 nukleotida. Produk amplifikasi probe, terdiri dari satu set amplikon PCR yang unik, kemudian dianalisis dengan elektroforesis kapiler dan oleh perangkat lunak Cofalyser.Net bersama dengan tabel Cofalyser khusus batch yang sesuai (www.mrcholland.com).
Variabel klinikopatologi terpilih (tingkat histologis dan indeks proliferasi Ki-67%) dikaitkan dengan keberadaan BRCA1/2 PV, dihitung menggunakan perangkat lunak Prism v. 8.4 menggunakan uji eksak Fisher dengan asumsi nilai p <0,05 menjadi signifikan.
Antara Januari 2017 dan Maret 2021, 455 pasien diskrining untuk mutasi germline BRCA1/2. Pengujian mutasi dilakukan di Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimental Rumah Sakit Policlinico. co dari Catania – San Marco” secara keseluruhan, 389 pasien Ada kanker payudara, 37 kanker ovarium, 16 kanker pankreas, 8 kanker prostat dan 5 melanoma.Distribusi pasien menurut jenis kanker dan hasil analisis ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 menunjukkan diagram alir yang menunjukkan ikhtisar penelitian. Pasien dengan tumor payudara, melanoma, pankreas, prostat, atau ovarium diuji mutasi pada gen BRCA1 dan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogen;VUS, varian dari signifikansi yang tidak pasti;WT, urutan BRCA1/2 tipe liar.
Kami secara selektif memfokuskan studi kami pada kohort kanker payudara. Pasien memiliki usia rata-rata 49 tahun (kisaran 23-89) dan sebagian besar perempuan (n=376, atau 97%).
Dari subjek ini, 64 (17%) memiliki mutasi BRCA1/2 dan semuanya perempuan. Tiga puluh lima (9%) memiliki PV dan 29 (7,5%) memiliki VUS. Tujuh belas (48,6%) dari 35 varian patogen muncul di BRCA1 dan 18 (51,4%) di BRCA2, sedangkan 5 VUS terjadi di BRCA1 (17,2%) dan 24 (82,8%) di BRCA2 (Gambar s 1 dan 2). LGR tidak hadir dalam analisis MLPA.
Gambar 2. Analisis mutasi BRCA1 dan BRCA2 pada 389 pasien kanker payudara.(A) Distribusi varian patogen (PV) (merah), varian dengan signifikansi tidak pasti (VUS) (oranye), dan WT (biru) pada 389 pasien kanker payudara;(B) 389 pasien kanker payudara Tiga puluh lima (9%) memiliki varian patogen BRCA1/2 (PV). Di antara mereka, 17 (48,6%) adalah pembawa BRCA1 PV (merah tua) dan 18 (51,4%) adalah pembawa BRCA2 (merah terang);(C) 29 (7,5%) dari 389 subjek membawa VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (oranye tua) dan 24 (82,8%) gen BRCA2 (oranye terang).
Singkatan: PV, varian patogen;VUS, varian dari signifikansi yang tidak pasti;WT, urutan BRCA1/2 tipe liar.
Kami selanjutnya menyelidiki prevalensi subtipe molekuler BC pada pasien dengan BRCA1/2 PV. Distribusi termasuk 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ dan 13 (37,1%) pasien TNBC. Di antara pasien BRCA1-positif, 5 (29,4%) memiliki luminal B BC, 2 (11,8%) %) memiliki penyakit HER2+, dan 10 (58,8%) memiliki TNBC. Tumor tanpa mutasi BRCA1 adalah luminal A atau luminal B-HER2+ (Gambar 3). Pada subkelompok BRCA2-positif, 10 (55,6%) tumor adalah luminal B, 3 (16,7%) adalah luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC dan 2 (11,1%) adalah luminal A (Gambar 3 ). Tidak ada tumor HER2+ pada kelompok ini. Dengan demikian, mutasi BRCA1 lazim pada pasien TNBC, sedangkan perubahan BRCA2 dominan pada individu lumen B.
Gambar 3 Prevalensi subtipe kanker payudara pada pasien dengan varian patogen pada BRCA1 dan BRCA2. Histogram menunjukkan distribusi PV BRCA1- (merah tua) dan BRCA2- (merah muda) di antara subtipe molekuler pasien kanker payudara. Angka yang dilaporkan dalam setiap kotak mewakili persentase pasien dengan BRCA1 dan BRCA2 PV untuk setiap subtipe kanker payudara.
Singkatan: PV, varian patogen;HER2+, reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 positif;TNBC, kanker payudara triple-negatif.
Selanjutnya, kami menilai jenis dan lokalisasi gen dari PV BRCA1 dan BRCA2. Dalam PV BRCA1, kami mengamati 7 varian nukleotida tunggal (SNV), 6 penghapusan, 3 duplikasi, dan 1 penyisipan. Hanya satu mutasi (c.5522delG) yang mewakili penemuan baru. PV BRCA1 paling umum yang terdeteksi pada kedua subjek adalah c.5035_5039delCTAAT. Perubahan ini melibatkan penghapusan lima nukleotida (CTAAT) dalam BRCA1 ekson 15, menghasilkan substitusi asam amino leusin oleh tirosin pada kodon 1679, dan karena pergeseran kerangka terjemahan dengan kodon stop alternatif yang diprediksi menyebabkan pemotongan protein prematur.
Mengenai PV BRCA2, kami mengamati 6 penghapusan, 6 SNV dan 2 duplikasi. untuk menyandikan protein non-fungsional yang terpotong. Mutasi c.8487+1G>A terjadi di wilayah intronik BRCA2 intron 19 (± 1,2) dan memengaruhi urutan konsensus splicing, menghasilkan splicing yang berubah yang mengakibatkan protein abnormal atau tidak ada. Varian patogen c.5851_5854delAGTT disebabkan oleh penghapusan 4-nukleotida dari posisi nukleotida 5851 hingga 5854 dalam ekson pengkodean 10 gen BRCA2 dan menghasilkan pergeseran bingkai translasi dengan kodon stop alternatif yang diprediksi (p.S1951WfsTer). Khususnya, seperti yang dilaporkan sebelumnya, kedua perubahan c.631G>A dan c.7008-2A>T terdeteksi pada pasien yang sama. Mutasi pertama melibatkan penggantian adenosin (A) pada BRCA2 ekson 7 dengan guanin (G) yang mengandung nukleotida yang menghasilkan perubahan ine menjadi isoleusin pada kodon 211, asam amino isoleusin adalah asam amino dengan sifat yang sangat mirip. Perubahan ini memengaruhi penyambungan mRNA normal. Varian kedua terletak di daerah intronik dan menghasilkan substitusi A ganda menjadi timin (T) sebelum ekson 13 dari gen yang mengkode BRCA2. Perubahan c.7008-2A>T dapat menghasilkan banyak transkrip dengan panjang berbeda. Selanjutnya, dalam kelompok PV BRCA2, 4 dari 18 perubahan (22,2%) bersifat intronik.
Kami kemudian memetakan mutasi merusak BRCA1/2 dalam domain fungsional dan daerah pengikat protein (Gbr. 4). Pada gen BRCA1, 50% PV terletak di wilayah kluster kanker payudara (BCCR), sementara 22% mutasi terletak di wilayah kluster kanker ovarium (OCCR) (Gbr. 4A). Pada PV BRCA2, 35,7% varian terletak di wilayah BCCR dan 42,8% mutasi terletak di OCCR (Gbr. 4B). Selanjutnya, kami menilai lokasi PV dalam domain protein BRCA1 dan BRCA2. Untuk protein BRCA1, kami menemukan tiga PV dalam domain loop dan coiled coil, dan dua mutasi dalam domain BRCT (Gbr. 4A). -binding (OB) dan domain tower (T) (Gambar 4B).
Gambar 4 Representasi skematis dari protein BRCA1 dan BRCA2 dan lokalisasi varian patogen. Gambar ini menunjukkan distribusi varian patogen BRCA1 (A) dan BRCA2 (B) pada pasien kanker payudara. Mutasi eksonik ditunjukkan dengan warna biru, sedangkan varian intronik ditunjukkan dengan warna oranye. Tinggi batang mewakili jumlah kasus. Protein BRCA1 dan BRCA2 dan domain fungsionalnya dilaporkan. (A) Protein BRCA1 berisi domain lingkaran (RING) dan lokalisasi nuklir sequence (NLS), domain coiled-coil, domain cluster SQ/TQ (SCD), dan domain terminal-C BRCA1 (BRCT).(B) Protein BRCA2 mengandung delapan pengulangan BRC, domain pengikat DNA dengan domain heliks (Heliks), tiga lipatan pengikat oligonukleotida/oligosakarida (OB), domain menara (T), dan NLS di sisi C. Area yang disebut Wilayah Kluster Kanker Payudara (BCCR) dan Ovarium Cancer Cluster Region (OCCR) ditampilkan di bagian bawah.*Mewakili mutasi yang menentukan kodon stop.
Kami kemudian menyelidiki fitur klinikopatologi BC yang mungkin berkorelasi dengan keberadaan BRCA1/2 PV. Catatan klinis lengkap tersedia untuk 181 pasien BRCA1/2-negatif (non-pembawa) dan semua pembawa (n = 35). Terdapat korelasi antara tingkat proliferasi tumor dan derajat.
Kami menghitung distribusi Ki-67 berdasarkan median kohort kami (25%, rentang <10-90%). Subjek dengan Ki-67 <25% didefinisikan sebagai "Ki-67 rendah", sedangkan individu dengan nilai ≥ 25% dianggap "Ki-67 tinggi". A).
Gambar 5 Korelasi Ki-67 dengan distribusi grade pada wanita kanker payudara dengan dan tanpa BRCA1 dan BRCA2 PVs.(A) Boxplot menunjukkan nilai median Ki-67 pada 181 pasien BC non-carrier versus BRCA1 (18) atau BRCA2 (17) pasien PV. Nilai P di bawah 0,5 dianggap signifikan secara statistik.(B) Histogram mewakili penugasan pasien kanker BC ke dalam kelompok grade histologis (G2 dan G 3) menurut status mutasi BRCA1 dan BRCA2 (subjek WT, pembawa PV BRCA1 dan BRCA2).
Demikian pula, kami memeriksa apakah derajat tumor berkorelasi dengan keberadaan BRCA1/2 PV. Karena G1 BC tidak ada dalam populasi kami, kami membagi pasien menjadi dua kelompok (G2 atau G3). Konsisten dengan hasil Ki-67, analisis menunjukkan korelasi yang signifikan secara statistik antara derajat tumor dan mutasi BRCA1, dengan proporsi tumor G3 yang lebih tinggi pada pembawa BRCA1 dibandingkan dengan bukan pembawa (p<0,005) (Gambar 5B ).
Kemajuan dalam teknologi sekuensing DNA telah memungkinkan kemajuan yang belum pernah terjadi sebelumnya dalam pengujian genetik BRCA1/2, dengan implikasi penting bagi pasien dengan riwayat keluarga kanker. Sampai saat ini, sekitar 20.000 varian BRCA1/2 telah diidentifikasi dan diklasifikasikan menurut American Society of Medical Genetics 35 dan sistem ENIGMA.35,36 Telah diketahui bahwa spektrum mutasi BRCA1/2 sangat bervariasi di seluruh wilayah geografis.37 Di Italia, tingkat rentang BRCA1/2 PVs d dari 8% menjadi 37%, menunjukkan variabilitas intra-negara yang luas.38,39 Dengan populasi hampir 5 juta, Sisilia adalah wilayah terbesar kelima di Italia dalam hal jumlah penduduk. Meskipun ada data tentang distribusi BRCA1/2 di Sisilia barat, tidak ada bukti ekstensif di bagian timur pulau.
Studi kami adalah salah satu laporan pertama tentang kejadian BRCA1/2 PV pada pasien BC di Sisilia timur.28 Kami memfokuskan analisis kami pada BC, karena sejauh ini merupakan penyakit yang paling umum dalam kohort kami.
Ketika menguji 389 pasien BC, 9% membawa BRCA1/2 PV, didistribusikan secara merata antara BRCA1 dan BRCA2. Hasil ini konsisten dengan yang dilaporkan sebelumnya pada populasi Italia.28 Menariknya, 3% (13/389) dari kohort kami adalah laki-laki. Angka ini lebih tinggi dari yang diharapkan untuk kanker payudara laki-laki (1% dari semua BC),40 mencerminkan pemilihan populasi kami berdasarkan risiko mutasi BRCA1/2. Namun, tidak satu pun dari laki-laki ini mengembangkan BRCA 1/2 PV, jadi mereka adalah kandidat untuk analisis molekuler lebih lanjut untuk mengesampingkan keberadaan mutasi yang kurang umum seperti PALB2, RAD51C dan D, antara lain. Varian dengan signifikansi yang tidak pasti diambil pada 7% subjek di mana BRCA2 VUS terbukti. Bahkan hasil ini konsisten dengan bukti yang sudah ada sebelumnya.28,41,42
Ketika kami menganalisis distribusi subtipe molekuler BC pada wanita mutan BRCA1/2, kami mengkonfirmasi hubungan yang diketahui antara TNBC dan BRCA1 PV (58,8%) dan antara luminal B BC dan BRCA2 PV (55,6%).16,43 Luminal A dan tumor HER2+ pada pembawa BRCA1 dan BRCA2 PV konsisten dengan data literatur yang ada.16,43
Kami kemudian fokus pada jenis dan lokasi BRCA1/2 PV. Dalam kelompok kami, PV BRCA1 yang paling umum adalah c.5035_5039delCTAAT. Meskipun Incorvaia et al.tidak menggambarkan varian ini dalam kohort Sisilia mereka, penulis lain telah melaporkannya sebagai germline BRCA1 PV.34 Beberapa PV BRCA1 ditemukan dalam kohort kami – misalnya c.181T>G, c.514del, c.3253dupA dan c.5266dupC – yang telah diamati di Sisilia.28 Dari jumlah tersebut, dua mutasi pendiri BRCA1 (c.181T>G dan c.5 266dupC) umumnya ditemukan pada orang Yahudi Ashkenazi di Eropa Timur dan Tengah (Polandia, Ceko), Slovenia, Austria, Hongaria, Belarusia, dan Jerman), 44,45 dan, di Amerika Serikat dan Argentina, baru-baru ini didefinisikan sebagai "varian germline berulang" pada pasien Italia dengan BC dan OC. Varian 34c.514del sebelumnya diidentifikasi pada 8 pasien kanker payudara dari Sisilia utara di Palermo dan Messina. Menariknya, bahkan Incorvaia et al .menemukan varian c.3253dupA di beberapa keluarga di Catania.28 PV BRCA2 yang paling representatif adalah c.428dup, c.5851_5854delAGTT dan varian intronik c.8487+1G>A, yang telah dilaporkan secara lebih rinci 28 pada pasien di Palermo dengan c.428dup, c.5851_5854delaGTT PV diamati di rumah tangga di barat laut Sisilia, terutama di wilayah Trapani dan Palermo, sedangkan c.5851_5854delAGTT PV diamati pada rumah tangga di barat laut Sisilia. Varian 8487+1G>A lebih umum pada subjek dari Messina, Palermo, dan Caltanissetta.28 Rebbeck et al.sebelumnya menjelaskan perubahan c.5851_5854delAGTT di Kolombia.37 PV BRCA2 lainnya, c.631+1G>A, telah ditemukan pada pasien BC dan OC dari Sisilia (Agrigento, Siracusa dan Ragusa).28 Khususnya, kami mengamati koeksistensi dua varian BRCA2 (BRCA2 c.631G>A dan c.7008-2A>T) pada pasien yang sama, yang kami asumsikan sebagai dipisahkan dalam mode cis, seperti yang dilaporkan sebelumnya seperti itu.34,46 Mutasi uble BRCA2 ini memang sering diamati di wilayah Italia dan telah ditemukan untuk memperkenalkan kodon stop prematur, mempengaruhi splicing RNA messenger dan menyebabkan protein BRCA2 gagal.47,48
Kami juga memetakan PV BRCA1 dan BRCA2 di wilayah OCCR dan BCCR yang diduga dari domain protein dan gen. Wilayah ini dijelaskan oleh Rebbeck et al.sebagai area risiko untuk mengembangkan kanker ovarium dan payudara, masing-masing.49 Namun, bukti mengenai hubungan antara lokasi varian germline dan risiko kanker payudara atau ovarium masih kontroversial.28,50-52 Dalam populasi kami, PV BRCA1 sebagian besar terletak di wilayah BCCR, sedangkan PV BRCA2 sebagian besar terletak di wilayah OCCR. Namun, kami tidak dapat menemukan hubungan apa pun antara wilayah OCCR dan BCCR diduga dan fitur BC. Hal ini mungkin disebabkan oleh terbatasnya jumlah pasien dengan BRCA 1/2 mutasi. Dari perspektif domain protein, PV BRCA1 didistribusikan di sepanjang protein, dan perubahan BRCA2 lebih disukai ditemukan di domain pengulangan BRC.
Akhirnya, kami mengkorelasikan fitur klinikopatologis BC dengan BRCA1/2 PV. Karena terbatasnya jumlah pasien yang disertakan, kami hanya menemukan korelasi yang signifikan antara Ki-67 dan derajat tumor. Meskipun penilaian dan interpretasi Ki-67 tetap agak kontroversial, dapat dipastikan bahwa tingkat proliferatif yang tinggi dikaitkan dengan peningkatan risiko kekambuhan penyakit dan penurunan kelangsungan hidup. Sampai saat ini, batasan untuk membedakan antara Ki-67 "tinggi" dan "rendah" adalah 20%. Populasi pasien mutasi BRCA1/2, yang memiliki nilai median Ki-67 25%. Kecenderungan tingkat Ki-67 yang tinggi ini dapat dijelaskan oleh prevalensi dalam kohort luminal B dan TNBC kami, di mana terdapat beberapa tumor luminal A. Namun, beberapa bukti tampaknya menunjukkan bahwa batas Ki-67 yang lebih tinggi (25-30%) dapat membuat stratifikasi pasien lebih baik menurut prognosis mereka.53,54 Dari hasil analisis kami, korelasi yang signifikan tidak mengherankan. Terjadi antara tinggi Ki-67 dan grade serta keberadaan BRCA1 PV. Faktanya, tumor terkait BRCA1 adalah tipikal TNBC dan menunjukkan fitur yang lebih agresif.16,17
Sebagai kesimpulan, penelitian ini memberikan laporan tentang status mutasi BRCA1/2 dalam kohort BC dari Sisilia timur. Secara keseluruhan, temuan kami konsisten dengan bukti yang sudah ada sebelumnya, baik dalam hal prevalensi mutasi dan fitur klinikopatologis pada BC. Studi lebih lanjut pada populasi yang lebih besar dari pasien BC mutan BRCA1/2, seperti menggunakan analisis mutasi yang diperluas multigenom, diperlukan untuk menilai keberadaan PV yang berbeda dan lebih jarang daripada BRCA1/2. Ini akan memungkinkan identifikasi dan manajemen yang tepat meningkatnya jumlah subjek yang berisiko tinggi terkena kanker akibat mutasi genetik.
Kami mengkonfirmasi bahwa pasien menandatangani persetujuan untuk melepaskan sampel tumor mereka secara anonim untuk tujuan penelitian. Semua pasien menandatangani persetujuan tertulis sesuai dengan Deklarasi Helsinki. Menurut kebijakan AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, penelitian ini dibebaskan dari tinjauan etis karena analisis BRCA1/2 dilakukan sesuai dengan praktik klinis dan semua pasien memberikan persetujuan tertulis. Pasien juga menyetujui penggunaan data mereka untuk tujuan penelitian.
Kami berterima kasih kepada Prof. Paolo Vigneri atas bantuannya dalam perawatan pasien kanker payudara seperti yang diminta oleh Komite Etik.
Federica Martorana melaporkan honorarium dari Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Para penulis lainnya menyatakan tidak ada konflik kepentingan dalam karya ini.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, dkk. Statistik Kanker Global 2020: GLOBOCAN memperkirakan kejadian dan kematian 36 kanker di 185 negara di seluruh dunia. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660