“Jangan pernah ragu bahwa sekelompok kecil warga negara yang bijaksana dan berdedikasi dapat mengubah dunia.Bahkan, itu satu-satunya di sana.”
Misi Cureus adalah mengubah model penerbitan medis yang sudah lama ada, di mana pengajuan penelitian bisa jadi mahal, rumit, dan memakan waktu.
Plasma/prp kaya trombosit, regenerasi jaringan, aktivasi trombosit, terapi proliferatif glukosa, trombosit, terapi proliferatif
Kutip artikel ini sebagai: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, dkk.(17 Mei 2022) Efek glukosa pada jumlah dan volume trombosit: implikasi untuk pengobatan regeneratif.Menyembuhkan 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Plasma kaya trombosit (PRP) dan larutan glukosa hipertonik biasanya digunakan untuk injeksi dalam pengobatan regeneratif, terkadang bersamaan.Efek glukosa hipertonik pada lisis dan aktivasi trombosit belum pernah dilaporkan sebelumnya.Kami menguji efek peningkatan konsentrasi glukosa pada jumlah trombosit dan eritrosit, serta volume sel dalam PRP dan darah lengkap (WB).Penurunan parsial yang cepat dalam jumlah trombosit terjadi dengan semua campuran glukosa yang dicampur dengan PRP atau darah lengkap, konsisten dengan lisis parsial. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi yang cepat dari sisa trombosit hingga hipertonisitas ekstrim (>2000 mOsm). Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi yang cepat dari sisa trombosit hingga hipertonisitas ekstrim (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю aккомода цию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan akomodasi yang cepat dari sisa trombosit hingga hipertonisitas ekstrim (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптац ию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Setelah menit pertama, jumlah trombosit tetap stabil, menunjukkan adaptasi yang cepat dari sisa trombosit ke keadaan hiperosmolar yang ekstrim (>2000 mOsm).Konsentrasi glukosa 25% atau lebih menghasilkan peningkatan yang signifikan dalam volume rata-rata trombosit (MPV), menunjukkan tahap awal aktivasi trombosit.Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah lisis atau aktivasi trombosit terjadi dan apakah injeksi glukosa hipertonik saja atau dalam kombinasi dengan PRP dapat memberikan manfaat klinis tambahan.
Pada tahun 1950-an, ahli bedah Amerika George Hackett menemukan bahwa ia dapat meredakan nyeri sendi dan punggung secara permanen pada banyak pasien dengan menyuntikkan larutan proliferatif ke dalam tendon dan ligamen.Eksperimennya pada kelinci menunjukkan bahwa pengobatan, yang disebut terapi proliferatif, menyebabkan tendon membesar dan menguat.Studi histologis telah mengkonfirmasi bahwa kolagen baru diproduksi selama proses ini [1].
Selama beberapa dekade pertama, banyak solusi distribusi yang berbeda dicoba.Pada tahun 1990-an, sebagian besar praktisi menganggap konsentrasi glukosa yang tinggi sebagai metode yang paling aman dan efektif.Namun, mekanisme kerjanya masih belum jelas.
Beberapa studi klinis dilakukan pada abad ke-20 setelah penelitian Hackett.Namun, pada tahun 2000-an ada minat baru dan beberapa uji klinis terapi proliferatif yang berhasil diselesaikan untuk pengobatan nyeri punggung bawah [2], osteoartritis lutut [3], dan epikondilitis lateral [4].
Regenerasi jaringan membutuhkan partisipasi sel punca.Oleh karena itu, konsentrasi glukosa yang tinggi entah bagaimana harus menginduksi migrasi, replikasi, dan diferensiasi sel punca.Kami berhipotesis bahwa trombosit dapat bertindak sebagai pembawa pesan dan konsentrasi glukosa yang tinggi dapat menyebabkan trombosit melepaskan sitokin dan faktor pertumbuhan, sehingga mendorong proses regeneratif, terutama migrasi sel punca ke area dengan konsentrasi glukosa tinggi.
Aktivasi trombosit selalu mendahului peningkatan kalsium intraseluler [5].Liu dkk.pada tahun 2008 menunjukkan bahwa kadar glukosa yang tinggi meningkatkan aktivitas kanal transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) di membran plasma, yang menyebabkan masuknya ion kalsium ke dalam trombosit [6].Studi lain menunjukkan bahwa paparan zona marginal mikrotubulus terhadap ion kalsium menyebabkan relaksasi, ekspansi, dan deformasi zona marginal, yang pada gilirannya menyebabkan perubahan bentuk dari cakram menjadi bola, menghasilkan volume trombosit rata-rata (MPV) [7].
Hipotesis kami dalam penelitian ini adalah bahwa paparan trombosit terhadap glukosa konsentrasi tinggi memengaruhi zona marginal mikrotubulus dan lingkungan intraseluler, yang mengarah pada peningkatan MPV.
Semua peserta menandatangani formulir persetujuan setelah rincian penelitian dijelaskan dan sebelum menerima sampel.Dalam penelitian ini, hanya sampel PRP dengan hematokrit lebih besar dari 2% yang digunakan sehingga jumlah eritrosit (eritrosit) dan volume rata-rata sel darah merah (MCV) dapat dimasukkan untuk perbandingan.
Penelitian dilakukan dalam empat tahap, tahap pertama adalah PRP dan tahap selanjutnya adalah whole blood (Tabel 1).Seperti yang dijelaskan sebelumnya [8], semua gaya sentrifugal relatif (RCF, g-force) dihitung dari titik tengah (Rmid, dalam cm) kolom darah di jarum suntik sentrifugal.Kami memilih untuk menggunakan MPV sebagai penanda sensitisasi trombosit dan jumlah trombosit sebagai indikator potensi lisis trombosit, keduanya dapat dengan mudah diukur pada penganalisa hematologi standar.
Pada fase pertama, 47 sukarelawan menyumbangkan sampel darah — satu tabung asam etilendiamintetraasetat (EDTA) dan satu sampel darah utuh PRP (antikoagulan dengan natrium sitrat (NaCl, 3%)) (Tabel 1).Tempatkan rocker di dalam tabung segera.Hitung darah lengkap (CBC) dilakukan pada sampel EDTA dalam rangkap tiga, dan sampel NaCl dianalisis dalam rangkap tiga untuk analisis CBC, dan kemudian PRP disiapkan dengan berbagai metode yang dijelaskan di atas [8].Semua sampel PRP disiapkan dengan sentrifugasi pada 900-1000 g.Campurkan setiap sampel PRP pada vortex mixer selama 5–10 detik, lalu bagi lima alikuot 0,5 ml ke dalam tabung.
Untuk mengevaluasi pengaruh pajanan trombosit pada peningkatan konsentrasi glukosa, jumlah yang sama (0,5 ml) dari 0%, 5%, 12,5%, 25%, dan 50% glukosa dalam air dicampur dengan sampel trombosit untuk mendapatkan 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% dan 25% konsentrasi campuran glukosa dan mencampur tabung pada pengocok tabung reaksi selama 15 menit.TAC masing-masing campuran dianalisis dalam rangkap tiga setelah 15 menit.Jumlah trombosit (PLT), jumlah RBC, MCV, dan MPV dirata-rata untuk setiap tabung, dan rata-rata jumlah trombosit, jumlah RBC, MCV, dan MPV dihitung untuk semua sampel PRP.
Setelah pengumpulan data tahap pertama selesai, kami melihat peningkatan volume trombosit yang signifikan pada trombosit PRP setelah penambahan D50W.Trombosit PRP tidak harus mewakili semua trombosit dalam darah, dan media PRP berbeda dari media WB.Oleh karena itu, kami memutuskan untuk melakukan uji coba tahap kedua tentang efek penambahan D50W ke darah lengkap.
Untuk putaran kedua, kami memilih ukuran sampel 30 berdasarkan hasil dari seri pertama, seperti yang dijelaskan di bagian Analisis.Dalam seri ini, 20 relawan menyumbangkan sampel darah (Tabel 1).Seluruh darah (1,8 ml) ditarik ke dalam jarum suntik 3 ml dan antikoagulan dengan 0,2 ml 40% NaCl.Jarum suntik darah utuh dicampur selama lima detik dengan mixer vortex dan CBC dianalisis dalam rangkap tiga.Setelah analisis, darah antikoagulan ditambahkan ke 2 ml glukosa 50% dalam jarum suntik 5 ml (konsentrasi glukosa akhir sekitar 25% (D25) dan ditempatkan dalam tabung kocok selama 30 menit. Setelah 30 menit, D25/CBC dalam jarum suntik WB dianalisis dalam rangkap tiga. Jumlah trombosit, jumlah RBC, MCV, dan MPV per jarum suntik dirata-rata, dan rata-rata PLT, jumlah RBC, MCV, dan MPV dihitung untuk setiap sampel sebelum dan sesudah menambahkan glukosa .
Karena trombosit dalam darah lengkap biasanya terpapar glukosa hipertonik selama terapi glukosa proliferatif karena injeksi invasif minimal, dan tidak umum menggabungkan PRP dengan glukosa hipertonik sesaat sebelum injeksi, kami memutuskan untuk mempelajari glukosa hipertonik dalam kombinasi dengan WB di Bagian 1. Langkah Tiga dan empat.Pada setiap tahap, 20 relawan menyumbangkan 7-8 ml ACD-A (asam yang mengandung trisodium sitrat (22,0 g/l), asam sitrat (8,0 g/l) dan glukosa (24,5 g/l), larutan dekstrosa sitrat) untuk antikoagulan darah (Tabel 1).Hanya campuran glukosa yang lebih besar dari 12,5% yang digunakan untuk menentukan persentase ambang yang terkait dengan peningkatan MPV.Pada tahap ketiga, 1 ml darah ditempatkan dalam tabung reaksi.Kemudian campurkan darah pada vortex mixer selama 10 detik dengan menambahkan 1 ml glukosa 30%, glukosa 40%, atau glukosa 50% ke dalam tabung hingga diperoleh konsentrasi glukosa akhir masing-masing 15%, 20%, dan 25%.Sampel darah glukosa dianalisis untuk CBC segera setelah pencampuran dan diulang setiap dua menit selama 30 menit.
Selama pencampuran awal, penambahan glukosa hipertonik 1:1 dan WB atau PRP memaparkan trombosit ke konsentrasi di atas 25% selama beberapa detik.Pada langkah keempat, untuk mengevaluasi efek glukosa hipertonik dengan konsentrasi puncak awal minimal dan menguji batas atas efek glukosa, kami hanya menambahkan sedikit darah ke D25W atau D50W.Masukkan 1 ml D25W atau D50W ke dalam tabung dan tambahkan 0,2 ml WB sambil memvorteks sampel selama 10 detik.Dalam kasus ini, darah terpapar glukosa pada konsentrasi kira-kira 20% di atas konsentrasi akhir, bukan 50% di atas konsentrasi akhir seperti pada Fase 3, menghasilkan konsentrasi glukosa akhir 20,8% dan 41,6%.Sampel campuran dianalisis pada interval waktu yang sama seperti pada langkah 3.
Pada langkah pertama dari setiap rangkaian pengenceran glukosa, diambil 30 sampel karena ini adalah ukuran sampel yang sesuai untuk studi percontohan [9].Di akhir setiap fase (termasuk fase pertama), evaluasi kecukupan ukuran sampel menggunakan rumus yang digunakan untuk menentukan ukuran sampel yang diperlukan untuk memperkirakan rata-rata variabel hasil kontinu dalam satu populasi.Rumus n = Z2 x SD2 /E2.Dalam persamaan ini, Z adalah Z-score, SD adalah standar deviasi, dan E adalah error yang diinginkan [10].Alfa kami adalah 0,05, yang sesuai dengan nilai Z 1,96, dan kami mengharapkan kesalahan 5 (dalam persen).Oleh karena itu kami memecahkan n = (1,962 x SD2)/52.Hasil penelitian menunjukkan bahwa ukuran sampel yang dibutuhkan untuk setiap tahap lebih kecil dari jumlah sebenarnya yang terkumpul.
Selama periode 1, 3 dan 4 menggunakan lebih dari satu konsentrasi glukosa, pengaruh konsentrasi glukosa yang berbeda dianalisis dengan membandingkan perubahan fraksional antara waktu 0 dan setiap waktu berikutnya (fase 1 pada 15 menit, periode 3 pada 15 menit).dan empat pada 15 detik, kemudian setiap dua menit.) Laju perubahan untuk setiap periode waktu dibandingkan menggunakan uji Mann-Whitney U karena data tidak mengikuti distribusi normal seperti yang ditentukan oleh uji normalitas Shapiro-Wilk.Karena analisis 1-ke-1 dari beberapa kelompok (lima) dilakukan pada langkah pertama, ketiga dan keempat (total lima), koreksi Bonferroni dilakukan untuk menyesuaikan nilai alfa yang diinginkan menjadi ≤0,01 tetapi tidak ≤0,05.
Pengurangan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV dalam trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat dari satu hingga lima kali konsentrasi dibandingkan dengan darah lengkap pada awal, bervariasi berdasarkan metode (tidak digambarkan). Pengurangan jumlah trombosit dengan semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV dalam trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat dari satu hingga lima kali konsentrasi dibandingkan dengan darah lengkap pada awal, bervariasi berdasarkan metode (tidak digambarkan). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось 1-5 раз по сравн ению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (nе показано). Penurunan jumlah trombosit pada semua konsentrasi dekstrosa hipertonik dan peningkatan MPV dalam trombosit PRP pada konsentrasi dekstrosa >12,5%: Jumlah trombosit PRP meningkat 1-5 kali dibandingkan dengan darah lengkap awal, tergantung pada metode (tidak ditampilkan). ).12.5% ​​12.5%线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Pada konsentrasi glukosa >12,5%, konsentrasi glukosa yang tinggi mengurangi jumlah darah, MPV darah PRP meningkat: dibandingkan dengan 与基线全血, jumlah darah PRP meningkat dari 1 hingga 5 kali lipat dari konsentrasi (tidak dijelaskan). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбо цитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентра ций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (nе описано ). Pada konsentrasi glukosa >12,5%, semua konsentrasi glukosa hipertensi menurunkan jumlah trombosit dan meningkatkan MPV dalam trombosit PRP: jumlah trombosit PRP meningkat 1 hingga 5 kali lipat dibandingkan dengan konsentrasi darah utuh awal, tergantung pada metode (seperti yang dijelaskan).Gambar 1 menunjukkan bahwa jumlah trombosit menurun hampir 75% setelah pengenceran dalam air dan 20-30% setelah 15 menit pengenceran dengan konsentrasi glukosa yang berbeda dibandingkan dengan PRP awal dan pengenceran 1:1 yang disesuaikan dengan volume (1-k1 dengan koreksi volume).k -1 berkembang biak).1 berkembang biak).
Jumlah sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai pecahan dari jumlah awal sebelum pengenceran.
MPV menurun minimal selama produksi PRP, tanpa perubahan lebih lanjut dalam konsentrasi pengenceran menjadi 12,5% dalam air atau glukosa (termasuk 25% campuran glukosa PRP) dan meningkat lebih dari 20% setelah pengenceran dalam larutan glukosa 50% (Gbr. 2).).Sebaliknya, eritrosit tidak menunjukkan perubahan volume yang signifikan pada pengenceran apa pun selain H2O.
Volume rata-rata sel dalam setiap pengenceran dinyatakan sebagai persentase volume asli sebelum pengenceran.
Penurunan jumlah trombosit yang serupa tetapi kurang jelas dan peningkatan CVR diamati pada BC yang terpapar glukosa 50% (untuk diformulasikan dengan glukosa 25%).Tabel 2 membandingkan jumlah sel dan volume sel dalam darah lengkap yang diencerkan dalam 50% dekstrosa dengan data PRP fase 1 yang diencerkan dalam 50% dekstrosa.Perubahan jumlah RBC dan RBC MCV tidak jelas dan tidak menjadi fokus perhatian kami.
SD = standar deviasi, MD = perbedaan rata-rata antar kelompok, SE = standar deviasi perbedaan rata-rata, RBC = eritrosit, PLT = trombosit, PRP = plasma kaya trombosit, WB = darah utuh
Setelah menambahkan D50W ke WB, persentase kehilangan trombosit yang disesuaikan dengan pengenceran adalah 7,7% (310±73 vs. 286±96) dibandingkan dengan 17,8% untuk pengenceran PRP di D50W (664±348 vs. 544±277).MPV WB meningkat sebesar 16,8% (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6), sedangkan MPV PRP meningkat sebesar 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Meskipun perbedaan rata-rata penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV lebih signifikan dengan PRP, perubahan penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 hingga 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <.001). Meskipun perbedaan rata-rata penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV lebih signifikan dengan PRP, perubahan penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 hingga 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) dan peningkatan MPV signifikan (10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <.001).Meskipun perbedaan rata-rata penurunan jumlah trombosit dan peningkatan CVR secara signifikan lebih besar dengan PRP, perubahan penurunan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (310 ± 73 hingga 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). peningkatan MPV signifikan (dari 10,1 ± 0,5 menjadi 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <0,001).PRP dan MPV dan MPV几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06） dan MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001 ）。尽管 PRP的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06） dan MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0. 6 (+16,8) p < 0,001）。Perubahan pengurangan jumlah trombosit dalam WB hampir signifikan (dari 310 ± 73 menjadi 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), meskipun PRP memiliki perbedaan rata-rata yang lebih besar secara signifikan dalam penurunan jumlah trombosit dan peningkatan MPV.dan peningkatan MPV sangat signifikan.(oleh 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). (dari 10,1 ± 0,5 hingga 11,8 ± 0,6 (+16,8) p <0,001).
Konsentrasi akhir glukosa 20% diperlukan untuk melihat perubahan MPV yang signifikan, tetapi perubahan MPV lebih terlihat pada konsentrasi akhir 25%.Kehilangan trombosit menjadi stabil setelah penurunan awal.Kami mencatat penurunan tajam CVR awal, bagaimanapun, CVR dengan cepat dipulihkan pada konsentrasi glukosa akhir 25%, yang secara signifikan lebih tinggi daripada level CVR yang diamati pada konsentrasi glukosa akhir 20% dan 15% (Gbr. 3 dan di sebelah kiri Tabel 3; kotak berbayang).tunjukkan nilai-p ≤ alpha dengan koreksi Bonferroni 0,01).Ada juga penurunan tajam awal dalam jumlah PLT, diamati pada fase awal 0-15 detik, dan kemudian tetap stabil (dari 15 detik menjadi 30 menit; tersisa dari tabel 4).
Penambahan berbagai konsentrasi glukosa ke seluruh darah menghasilkan penurunan MPV awal yang cepat diikuti dengan pemulihan yang bergantung pada konsentrasi lebih dari 20%.Legenda menunjukkan konsentrasi glukosa setelah pengenceran.D15, D20 dan D25 dilakukan dalam pengenceran 1:1.D21 dan D41 dilakukan pada pengenceran 1:5.
Tabel 4 menunjukkan perubahan jumlah trombosit saat diencerkan dalam glukosa hipertonik.Kami mengamati hubungan ketergantungan dosis antara penurunan langsung jumlah PLT pada pengenceran 1:1 dan pada pengenceran 1:5.Membandingkan pengenceran 1:1 sebagai satu kelompok dengan pengenceran 1:5, kelompok 1:1 mengalami penurunan langsung jumlah trombosit kurang dari kelompok 1:5 66 ± 48.000 (23%) dibandingkan 99 ± 69.000 (37%)., p = 0,014) pada kelompok 1:5.Setelah penurunan awal pada titik pengukuran pertama, jumlah trombosit sebagai persentase glukosa stabil (Gbr. 4).
Ketika seluruh darah ditambahkan ke glukosa dalam rasio 1:1, jumlah trombosit berkurang sekitar 25%.Namun, ketika seluruh darah ditambahkan dengan perbandingan 1:5, pengurangannya jauh lebih besar – sekitar 50%.
Glukosa 41% meningkatkan MPV lebih cepat dan lebih dramatis dibandingkan 25% atau 21%.Hasil MPV ditunjukkan pada Gambar 3. Pada semua pengenceran lainnya, tidak ada penurunan MPV awal langsung setelah penambahan glukosa 50%.Saat menggunakan glukosa 25% (konsentrasi glukosa 20,8% pada pengenceran akhir), perubahan MPV sebanding dengan perubahan glukosa 20% pada pengenceran 1:1 (Gbr. 3).Meskipun perubahan MPV awalnya lebih besar pada konsentrasi campuran 41% daripada 25%, perbedaan MPV antara 41% dan 25% setelah 16 menit tidak lagi signifikan (Tabel 3, kanan).Menarik juga bahwa 25% glukosa meningkatkan MPV lebih efektif daripada 20,8%.
Studi in vitro ini sebagian mengkonfirmasi hipotesis kami. Ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran dekstrosa, akomodasi cepat trombosit hingga hipertonisitas ekstrim, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran dekstrosa, akomodasi cepat trombosit hingga hipertonisitas ekstrim, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap konsentrasi dekstrosa hipertonik > 25%. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодаци ю тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV di ответ на гипертоническую конц ентрацию декстрозы > 25%. Ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial dengan dekstrosa, akomodasi trombosit yang cepat hingga hipertonisitas ekstrim, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap kadar dekstrosa hipertonik >25%.25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗, 以及 响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптац ию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертон ической глюкозы > 25%. Ini menunjukkan potensi lisis trombosit parsial oleh campuran glukosa, adaptasi cepat trombosit terhadap hipertonisitas ekstrim, dan peningkatan MPV yang signifikan sebagai respons terhadap glukosa hipertonik >25%.Peningkatan awal maksimal pada paparan glukosa 41,6%, tetapi peningkatan MPV mendekati paparan glukosa 25% kira-kira 20 menit setelah paparan.
Konsentrasi trombosit dipengaruhi oleh glukosa.Kami melihat bahwa jumlah PLT menurun pada semua pengenceran glukosa.Penurunan tajam jumlah trombosit dalam pengenceran H2O (0%) dari seri PRP dapat dikaitkan dengan lisis osmotik.Alternatifnya, ini bisa menjadi artefak yang disebabkan oleh penggumpalan trombosit, tapi ini berbeda dengan kurangnya perubahan MPV pada pengenceran ini.Temuan ini berarti bahwa beberapa trombosit sangat sensitif terhadap hipoosmolaritas.
Dalam semua pengenceran glukosa 1:1, jumlah PLT menurun 20-30%, bahkan oleh D5W (hipotonik pada 252 mOsm), yang mungkin menunjukkan efek non-osmotik spesifik glukosa, karena PLT dan MPV tetap tidak berubah pada peningkatan konsentrasi tiga kali lipat.glukosa.dari D5W ke D25W.Faktanya, konsentrasi PLT cenderung meningkat sedikit dengan meningkatnya osmolaritas.
Penurunan PLT antara pengenceran 1:1 dan 1:5 berarti bahwa efek disolusi bergantung pada konsentrasi glukosa awal dan akhir.Jika hanya bergantung pada konsentrasi awal, maka diharapkan akan terlihat perbedaan penurunan PLT antara konsentrasi 1:1.Tapi kami tidak.Jika efek lisis hanya bergantung pada konsentrasi glukosa akhir, maka kami tidak mengharapkan banyak perbedaan antara pengenceran 1:1 20% dan pengenceran 20,8% 1:5.Namun kami melakukannya.
Jika kehilangan trombosit terjadi karena lisis trombosit, sebagian lisat terbentuk, setelah itu sitokin dan faktor pertumbuhan dilepaskan ke lingkungan ekstraseluler.Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa lisat trombosit hampir sama efektifnya dengan PRP sebagai larutan proliferasi [11].PRP sendiri telah terbukti menjadi solusi yang efektif untuk pengobatan proliferasi [12-14].
Trombosit yang tidak aktif bersirkulasi dalam bentuk piringan yang diperkuat dengan beberapa struktur internal.Selama aktivasi, mereka mengambil bentuk yang lebih bulat atau amuba, menghasilkan peningkatan volume.Peningkatan volume membutuhkan peningkatan luas permukaan, yang merupakan hasil dari ekstrusi sistem tubulus terbuka (OCS) dan penambahan butiran eksositik ke membran.Masih harus ditentukan apakah peningkatan MPV yang diinduksi oleh glukosa hipertonik melibatkan salah satu atau kedua mekanisme ini, tetapi jika yang terakhir, maka peningkatan MPV akan mengindikasikan degranulasi.
Studi ini menunjukkan bahwa paparan glukosa konsentrasi tinggi pada PRP atau platelet darah utuh menghasilkan peningkatan MPV dalam waktu 15 menit dengan konsentrasi glukosa masing-masing 25% dan 41,6%.
Peningkatan MPV trombosit mungkin disebabkan oleh dilatasi kekusutan mikrotubulus di sekitarnya sebagai respons terhadap masuknya kalsium.Liu dkk.Glukosa telah terbukti memediasi masuknya kalsium melalui saluran TRPC6 trombosit [6].Hipotesis kami adalah bahwa glukosa menginduksi relaksasi kusut mikrotubulus, yang menyebabkan peningkatan sensitisasi dan / atau aktivasi MPV dan trombosit.Namun, dilihat dari hasil kami, ini hanya sebagian dari cerita.Dalam pengujian kami, tidak ada konsentrasi di bawah D25W yang menghasilkan peningkatan MPV.Mengingat bahwa kami belum menguji paparan konsentrasi glukosa antara 12,5% dan 25%, hasil fase 1 kami menunjukkan bahwa mungkin ada ambang batas dalam rentang konsentrasi glukosa ini yang mengarah pada peningkatan MPV.Pengujian lebih lanjut pada tahap 3 dan 4 menunjukkan bahwa glukosa 20-25% tampaknya menjadi ambang batas untuk ini, tetapi masih belum jelas alasannya.
Kami juga mengamati penurunan MPV ~9% setelah sentrifugasi.Tidak jelas apakah penurunan MPV ini disebabkan oleh trombosit yang lebih besar dan lebih padat yang terperangkap di lapisan RBC sentrifugal.Pengamatan ini mungkin penting bagi dokter karena dapat menyiratkan bahwa trombosit PRP adalah subset trombosit WB yang lebih kecil dan kurang padat.
Dalam studi sebelumnya, kami menunjukkan bahwa persiapan PRP dengan metode manual tidak mahal [8].Jika glukosa mensensitisasi platelet jaringan atau PRP, membuatnya lebih rentan terhadap aktivasi, atau jika PRP diproduksi dengan sifat lisat parsial, hal ini dapat meningkatkan regenerasi dan mengurangi kebutuhan akan terapi.Oleh karena itu, kombinasi PRP dan glukosa pekat mungkin lebih hemat biaya daripada PRP atau glukosa saja.
Penelitian kami memiliki beberapa kekurangan.Pertama, kami menggunakan PRP yang diperoleh dari beberapa metode berbeda.Ini dapat menyebabkan hasil yang bertentangan.Kedua, kami tidak dapat melakukan analisis biokimia dari salah satu sampel kami untuk lebih akurat menentukan apakah aktivasi trombosit telah terjadi.Kami ingin mengukur P-selektin, faktor trombosit 4, agregat trombosit monositik, atau penanda aktivasi trombosit lainnya untuk lebih memahami derajat atau adanya degranulasi granula alfa, tetapi ini berada di luar cakupan penelitian ini.Ketiga, kami tidak dapat mengkonfirmasi dengan mikroskop elektron atau metode lain bahwa peningkatan MPV pada trombosit yang terpajan glukosa disebabkan oleh efek pada kekusutan mikrotubulus.
Campuran WB atau PRP dengan glukosa 25% meningkatkan MPV, menandakan dimulainya aktivasi trombosit, meskipun penelitian ini tidak menunjukkan perkembangan agregasi atau degranulasi.Campuran glukosa hipertonik mengakibatkan hilangnya trombosit, mungkin mewakili efek litik.Aktivasi parsial atau lisis trombosit dapat menyebabkan regenerasi jaringan setelah injeksi trombosit.Tidak jelas apa konsekuensi klinis dari perubahan ini.Studi lebih lanjut telah menunjukkan pengukuran aktivasi atau lisis yang lebih akurat dan telah mengevaluasi efek klinis yang berbeda dari campuran glukosa hipertonik dengan WB atau PRP.
Terapi proliferatif glukosa adalah terapi regeneratif sederhana dan murah yang berkembang pesat dan mendukung penelitian klinis.Studi ini menunjukkan mekanisme fisiologis yang, jika dikonfirmasi, dapat membantu kita memahami bagian dari mekanisme regeneratif terapi proliferatif.
Biomedis dan Informatika Kesehatan di University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, AS
Subyek Manusia: Semua peserta dalam penelitian ini memberikan atau tidak memberikan persetujuan.International Society for Cellular Medicine telah mengeluarkan persetujuan ICMS-2017-003.Protokol berikut telah disetujui untuk digunakan lebih lanjut oleh Institutional Review Board dari International Society for Cellular Medicine: Judul: Perhitungan hasil obat plasma kaya trombosit berdasarkan jumlah trombosit CBC dasar.Subyek Hewan: Semua penulis menegaskan bahwa tidak ada hewan atau jaringan yang terlibat dalam penelitian ini.Konflik Kepentingan: Sesuai dengan Formulir Pengungkapan Seragam ICMJE, semua penulis menyatakan sebagai berikut: Informasi pembayaran/layanan: Semua penulis menyatakan bahwa mereka tidak menerima dukungan keuangan dari organisasi mana pun untuk karya yang dikirimkan.Hubungan Keuangan: Semua penulis menyatakan bahwa mereka saat ini atau dalam tiga tahun terakhir tidak memiliki hubungan keuangan dengan organisasi mana pun yang mungkin tertarik dengan karya yang dikirimkan.Hubungan Lain: Semua penulis menyatakan bahwa tidak ada hubungan atau kegiatan lain yang dapat mempengaruhi karya yang dikirimkan.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K dkk.(17 Mei 2022) Efek glukosa pada jumlah dan volume trombosit: implikasi untuk pengobatan regeneratif.Menyembuhkan 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© Hak Cipta 2022 Harrison dkk.Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons CC-BY 4.0.Penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun diizinkan, asalkan penulis dan sumber asli disebutkan.