Ụfọdụ isiokwu ndị na-eme nchọpụta nsogbu LC adịghị agwụ agwụ, ebe ọ bụ na e nwere okwu na omume LC, ọbụna dị ka nkà na ụzụ ngwá ọrụ na-eme ka oge na-aga. Enwere ọtụtụ ụzọ nke nsogbu nwere ike isi bilie na usoro LC ma kwụsị na ọdịdị elu dara ogbenye.Mgbe okwu metụtara ọdịdị elu na-ebili, ndepụta dị mkpirikpi nke ihe ndị nwere ike ime maka nsonaazụ ndị a na-enyere aka mee ka ahụmahụ anyị na-achọpụta nsogbu dị mfe.
Ọ na-atọ ụtọ na-ede akwụkwọ a "LC Troubleshooting" kọlụm na-eche echiche banyere isiokwu kwa ọnwa, n'ihi na ụfọdụ isiokwu adịghị aga nke style. Mgbe na ubi nke chromatography nnyocha ụfọdụ isiokwu ma ọ bụ echiche na-aghọ gharazie agwụ ka ha na-anọchi site ọhụrụ na mma echiche, na ubi nke nchọpụta nsogbu, ebe ọ bụ na mbụ nchọpụta nsogbu isiokwu pụtara na nke a journal (na LC ụfọdụ isiokwu n'oge ahụ) 8 mgbe gara aga ole na ole 19O. elekwasịla ọtụtụ akụkụ nsogbu nsogbu LC na ọnọdụ dị ugbu a na-emetụta chromatography mmiri (LC) (dịka ọmụmaatụ, ntụnyere ikwu nke nghọta anyị banyere mmetụta nrụgide na njigide [2] Ọganihu Ọhụụ) Nkọwa anyị nke nsonaazụ LC na otu esi edozi nsogbu na ngwa LC ọgbara ọhụrụ. N'ime nkeji nkeji nke ọnwa a, m na-aga n'ihu usoro m, nke ndụ December 2, nke 2 na-elekwasị anya na isiokwu 1 (3) ting - ihe ndị dị mma maka onye na-ahụ maka nsogbu ọ bụla dị oké mkpa, n'agbanyeghị afọ nke usoro anyị na-eji. Isi isiokwu nke usoro isiokwu a bụ nke ukwuu mkpa ka LCGC si ama "LC Troubleshooting Guide" mgbidi chaatị (4) nghọta na ọtụtụ laboratories.For akụkụ nke atọ nke usoro isiokwu a, M họọrọ ilekwasị anya n'okwu metụtara ọnụ ọgụgụ kasị elu udi ma ọ bụ ọnụ ọgụgụ kasị elu e ji mara.Incrected niile nwere ike ime ka mgbidi dị iche iche na-akpata, 4 nwere ike ime ka ndepụta ndị a na-adịghị mma na-akpata nke ọma. nkọwa zuru ezu n'otu isiokwu, ya mere na nkeji mbụ a na isiokwu ahụ, m ga-elekwasị anya na ụfọdụ n'ime ndị m na-ahụ ọtụtụ ugboro. Enwere m olileanya na ndị na-eto eto na ndị agadi LC ga-achọta ụfọdụ ndụmọdụ na-enye aka na ihe ncheta na isiokwu a dị mkpa.
Achọpụtara m onwe m na-azawanye ajụjụ nsogbu nsogbu na "ihe ọ bụla ga-ekwe omume" nzaghachi a nwere ike iyi ihe dị mfe mgbe ị na-atụle ihe ndị na-esiri ike ịkọwapụta, ma m na-achọpụta na ọ na-adịkarị mma. N'ọtụtụ ihe nwere ike ime ka ọdịdị elu dara ogbenye, ọ dị mkpa ka ị na-eche echiche nke ọma mgbe ị na-atụle ihe nsogbu ahụ nwere ike ịbụ, na iji nwee ike ibute ihe ndị nwere ike ime ka ịmalite mgbalị nchọpụta nsogbu anyị, na-elekwasị anya na ihe ndị a na-emekarị bụ ihe dị mkpa.
Otu isi nzọụkwụ na ihe ọ bụla na-eme nchọpụta nsogbu - ma otu nke m na-eche na ọ bụ underrated - na-aghọta na e nwere nsogbu nke kwesịrị idozi. Ịghọta na e nwere nsogbu na-apụtakarị ịghọta na ihe na-eme na ngwá ọrụ dị iche na anyị na-atụ anya, nke na-emepụta site tiori, empirical ihe ọmụma, na ahụmahụ (5) .The "peak shape" zoro aka na ebe a n'ezie shapes, fluymmetrical na-ezo aka na ọ bụghị nanị na-eme ka ihe na-eme ngwá ọrụ dị iche na atụmanya anyị. onu, ọdụdụ, wdg), kamakwa na obosara.Anyị na-atụ anya n'ezie ọnụ ọgụgụ kasị elu dị mfe. Theory (6) na-akwado nke ọma akwụkwọ ọgụgụ na-atụ anya na, n'ọtụtụ ọnọdụ, chromatographic ọnụ ọnụ elu kwesịrị ịdị symmetrical na kwekọọ na ọdịdị nke a Gaussian nkesa, dị ka e gosiri na Figure 1a. Ihe anyị na-atụ anya site na ọnụ ọgụgụ kasị elu bụ isiokwu dị mgbagwoju anya nke ọzọ n'isiokwu a, na anyị ga-egosi na ọnụ ọgụgụ kasị elu nke peak1 bụ isiokwu ọzọ dị mgbagwoju anya. biliities nke enwere ike ịhụ-n'ikwu ya n'ụzọ ọzọ, ụfọdụ n'ime ụzọ ihe nwere ike isi na-ezighị ezi. N'ime nkeji ole na ole nke a, anyị ga-etinye oge na-ekwurịta ụfọdụ ihe atụ kpọmkwem nke ọnọdụ ndị nwere ike iduga ụdị ọdịdị a.
Mgbe ụfọdụ, ọnụ ọgụgụ kasị elu na-adịghị hụrụ ma ọlị na chromatogram ebe a na-atụ anya eluted. The n'elu mgbidi chaatị na-egosi na enweghị a ọnụ ọgụgụ kasị elu (na-eche na sample n'ezie nwere lekwasịrị analyte na a ịta nke kwesịrị ime ka onye nchọpụta nzaghachi zuru ezu ịhụ ya n'elu mkpọtụ) na-emekarị metụtara ụfọdụ ngwá ọrụ ma ọ bụ na-ezighị ezi mobile usoro ọnọdụ (ọ bụrụ na a na-ahụ na niile).ọnụ ọgụgụ kasị elu, na-abụkarị “adịghị ike”) .Enwere ike ịhụ ndepụta dị mkpirikpi nke nsogbu na ngwọta dị na ngalaba a na Tebụl I.
Dị ka e kwuru n'elu, ajụjụ nke ọnụ ọgụgụ kasị elu nke ịgbasawanye kwesịrị ekwesị tupu ị na-aṅa ntị na-agbalị imezi ya bụ isiokwu dị mgbagwoju anya nke m ga-atụle n'isiokwu ga-eme n'ọdịnihu. Ahụmahụ m bụ na mmụba dị ịrịba ama na-ejikọta ya na mgbanwe dị ịrịba ama na ọdịdị elu elu, na ọnụ ọgụgụ kasị elu na-emekarị karịa tupu elu ma ọ bụ nkewa. Otú ọ dị, ọnụ ọgụgụ ọnụ ọgụgụ nke ọnụ ọgụgụ dị iche iche na-eme ka ọnụ ọgụgụ dị iche iche nwee ike gbasaa site na ihe ole na ole dị iche iche.
A tụlere nke ọ bụla n'ime okwu ndị a n'ụzọ zuru ezu na mbipụta ndị gara aga nke Nchọpụta nsogbu LC, na ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na isiokwu ndị a nwere ike ịtu aka na isiokwu ndị a gara aga maka ozi gbasara ihe kpatara ya na ihe ngwọta nke nsogbu ndị a.Nkọwa ndị ọzọ.
Ọnụ ọgụgụ kasị elu n'ihu ọdụ, ọnụ ọgụgụ kasị elu, na nkewa nwere ike ịbụ ihe niile sitere na kemịkal ma ọ bụ ọdịdị anụ ahụ, na ndepụta nke ngwọta nwere ike ime maka nsogbu ndị a dịgasị iche iche, dabere na ma anyị na-enwe nsogbu nke kemịkal ma ọ bụ nke anụ ahụ. Ọtụtụ mgbe, site n'iji tụnyere ọnụ ọgụgụ dị iche iche dị na chromatogram, ị nwere ike ịchọta ihe ngosi dị mkpa banyere nke bụ ihe kpatara ya. A na-emetụta ọnụ ọgụgụ kasị elu, ma ndị ọzọ dị mma, ihe kpatara ya bụ kemịkal.
Ihe na-akpata kemịkalụ nke ọdụdụ elu dị oke mgbagwoju anya iji kwurịta okwu nkenke ebe a. Onye na-agụ nwere mmasị na-ezo aka na mbipụta na-adịbeghị anya nke "LC Troubleshooting" maka mkparịta ụka miri emi karị (10) . Otú ọ dị, ihe dị mfe ịgbalị bụ iji belata ọnụ ọgụgụ nke nyocha nke injected ma hụ ma ọ bụrụ na ọnụ ọgụgụ kasị elu na-eme ka ọ dịkwuo mma. Ọ bụrụ otú ahụ, mgbe ahụ, nke a bụ ihe ngosi dị mma nke na-eme ka nsogbu ahụ dị ntakịrị "N'ime usoro dị ntakịrị na-eme ka ọ dị ntakịrị". sses, ma ọ bụ ọnọdụ chromatographic ga-agbanwerịrị ka e wee nweta ọdịdị elu dị mma ọbụlagodi na agbanyere nnukwu mmadụ.
Enwerekwa ọtụtụ ihe kpatara anụ ahụ maka ọdụdụ elu. Ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na mkparịta ụka zuru ezu banyere ohere ndị a na-ezo aka na mbipụta ọzọ na-adịbeghị anya nke "LC Troubleshooting" (11) .Otu n'ime ihe ndị na-emekarị nke anụ ahụ nke ọdụdụ elu bụ njikọ na-adịghị mma n'ebe dị n'etiti injector na onye nchọpụta (12) .E gosipụtara ihe atụ dị oke egwu na-egosi na Figure 1d, nke nwetara n'ime usoro nyocha nke a n'ime izu ole na ole gara aga, anyị na-eji valvụ ọhụrụ eme ihe n'izu gara aga. obere olu injection loop na ferrule nke a na-akpụzi na capillary igwe anaghị agba nchara. Mgbe ụfọdụ nyocha nchọpụta nsogbu mbụ, anyị ghọtara na omimi nke ọdụ ụgbọ mmiri na stator valve injection dị nnọọ omimi karịa ka anyị na-eji eme ihe, na-eme ka nnukwu olu nwụrụ anwụ dị na ala nke ọdụ ụgbọ mmiri. A na-edozi nsogbu a ngwa ngwa site n'iji dochie ntanye ntanye na ọdụ ụgbọ mmiri ọzọ, anyị nwere ike ịhazigharị olu nke nwụrụ anwụ na ọdụ ụgbọ mmiri ọzọ.
Ọnụ ọgụgụ kasị elu n'ihu dị ka ndị e gosiri na Figure 1e nwekwara ike mere site anụ ahụ ma ọ bụ kemịkal nsogbu. A nkịtị nkịtị na-akpata nke na-eduga n'ọnụ bụ na urughuru bed nke kọlụm na-adịghị mma juru n'ọnụ, ma ọ bụ na ụmụ irighiri emezigharị ka oge na-aga. Dị ka ọnụ ọgụgụ kasị elu tailing kpatara nke a anụ ahụ phenomen, ụzọ kasị mma idozi nke a bụ iji dochie kọlụm na-aga n'ihu na-aga n'ihu. N'okpuru ọnọdụ dị mma (linear), ọnụ ọgụgụ nke nyocha na-ejigide site na nkeji oge (n'ihi ya, ihe njigide) na-ejikọta ya na ntinye uche nke nyocha na kọlụm. Chromatographically, nke a pụtara na dị ka ọnụ ọgụgụ nyocha nke a na-agbanye n'ime kọlụm na-abawanye, ọnụ ọgụgụ kasị elu na-aghọ ogologo, ma ọ bụghị wider. Nke a mmekọrịta na-agbajikwa mgbe njide na-eme ka ọ bụghị nanị na-eme ka a na-ejigide ihe na-eme ka ọ bụrụ ihe na-adịghị mma na-eme ka ọ bụrụ ihe na-eme ka ọ bụrụ ihe na-eme ka ọ bụrụ ihe na-eme ka ọ dị elu. ed.Na mgbakwunye, ụdị ndị na-abụghị nke na-ekpebi ọdịdị nke ọnụ ọgụgụ chromatographic, nke na-ebute ụzọ ma ọ bụ na-esote akụkụ.Dịka na-ebufe oke nke na-akpata ọdụdụ elu (10), ọnụ ọgụgụ kasị elu nke na-ebute site na njigide na-enweghị ihe ọ bụla nwekwara ike ịchọpụta site n'ibelata ọnụ ọgụgụ nyocha nke injected. Ọ bụrụ na ọnụ ọgụgụ kasị elu na-emeziwanye, usoro ahụ ga-agbanwerịrị àgwà nke na-eme ka ọ bụrụ ihe na-eduga n'ókè nke chromat.
Mgbe ụfọdụ, anyị na-ahụ ihe na-egosi na ọ bụ "kewara" elu, dị ka e gosiri na Figure 1f. Nzọụkwụ mbụ na-edozi nsogbu a bụ iji chọpụta ma ọnụ ọgụgụ kasị elu bụ n'ihi na akụkụ nke co-elution (ie, ọnụnọ nke abụọ dị iche iche ma nso eluting ogige) .Ọ bụrụ na e nwere n'ezie abụọ dị iche iche analytes eluting nso ọnụ, mgbe ahụ, ọ bụ ihe na-emeziwanye mkpebi ha (dịka ọmụmaatụ, site n'ịba ụba ma ọ bụ n'ụdị anụ ahụ), nkwụghachi azụ na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche na-eme ka ihe dị iche iche dị iche iche na-eme ka ọnụ ọgụgụ nke anụ ahụ na-eme ka ọ dịkwuo elu. ance enweghị ihe jikọrọ ya na kọlụm n'onwe ya. Ọtụtụ mgbe, ihe kachasị mkpa na-egosi na mkpebi a bụ ma ọnụ ọgụgụ niile dị na chromatogram na-egosipụta ụdị nkewa, ma ọ bụ naanị otu ma ọ bụ abụọ.ọ bụrụ na agbawara ọnụ ọnụ niile, ọ nwere ike bụrụ ihe gbasara anụ ahụ, o yikarịrị ka ọ metụtara kọlụm n'onwe ya.
Kewaa ọnụ ọgụgụ kasị elu metụtara anụ ahụ Njirimara nke kọlụm n'onwe ya na-abụkarị n'ihi akụkụ ụfọdụ egbochiri inlet ma ọ bụ outlet frits, ma ọ bụ reorganization nke ahụ na kọlụm, ikwe ka mobile frasi na-asọ ọsọ ọsọ karịa mobile na-adọ na ụfọdụ ebe nke kọlụm ọwa e guzobere .na ndị ọzọ na mpaghara (11) .Partially clogged frit nwere ike mgbe ụfọdụ kpochapụ site reversing eruba site na kọlụm;Otú ọ dị, na ahụmahụ m, nke a na-abụkarị obere oge kama ngwọta dị ogologo oge. Nke a na-egbukarị egbu egbu na ogidi nke oge a ma ọ bụrụ na ihe ndị ahụ na-ejikọta n'ime kọlụm. N'oge a, ọ kacha mma iji dochie kọlụm ma gaa n'ihu.
Ọnụ ọgụgụ kasị elu na Figure 1g, nakwa site n'oge na-adịbeghị anya na ụlọ nyocha nke m, na-emekarị na-egosi na mgbaàmà ahụ dị elu nke na ọ ruru elu njedebe nke nzaghachi nzaghachi. Maka ndị na-achọpụta ihe na-ahụ maka nyocha anya (UV-vis na nke a), mgbe nchịkọta nyocha dị elu nke ukwuu, onye nyocha ahụ na-etinye ọtụtụ n'ime ọkụ na-agafe site na cell detector eruba cell, na-ahapụ nnọọ obere ìhè na-achọpụta site na ọnọdụ dị iche iche nke eletrik, ọ na-enwe mmetụta dị iche iche nke eletriki. dị ka ìhè kpafuru akpafu na "ụgbụgbọ gbara ọchịchịrị", na-eme ka mgbama ahụ bụrụ "ihe na-adịghị mma" n'ọdịdị ya na enweghị ike itinye uche na nyocha.Mgbe nke a mere, a na-edozi nsogbu ahụ n'ụzọ dị mfe site n'ibelata ụda ntụtụ nke onye nyocha - ibelata olu ntụtụ, ịgbanye ihe atụ, ma ọ bụ abụọ.
N'ụlọ akwụkwọ chromatography, anyị na-eji akara ngosi (ie, y-axis na chromatogram) dị ka ihe na-egosi ntinye uche nke nyocha na sample. Ya mere, ọ dị ka ihe na-adịghị mma ịhụ chromatogram na akara n'okpuru efu, dị ka nkọwa dị mfe bụ na nke a na-egosi mkpokọta nyocha na-adịghị mma - nke n'ezie ọ gaghị ekwe omume n'anụ ahụ. Na ahụmahụ m, a na-ahụkarị ọnụ ọgụgụ na-adịghị mma mgbe ị na-eji nhọrọ U).
Na nke a, a na-adịghị mma ọnụ ọgụgụ kasị elu nanị pụtara na ụmụ irighiri eluting si kọlụm banye obere ìhè karịa mobile frasi onwe ya ozugbo tupu na mgbe peak.This nwere ike ime, n'ihi na ihe atụ, mgbe iji dịtụ ala nchọpụta wavelengths (<230 nm) na mobile frasi mgbakwunye na-amịkọrọ ọtụtụ nke ìhè na ndị a wavelengths.Such mgbakwunye nwere ike ịbụ mobile frasi usoro ihe mgbaze ma ọ bụ n'ezie aceffer nwere ike ịbụ mobile frasi methante ihe mgbaze dị otú ahụ. aks iji kwadebe a calibration curve na nweta ziri ezi quantitative ọmụma, otú ọ dịghị isi ihe mere na-ezere ha kwa se (usoro a na-mgbe ụfọdụ zoro aka dị ka "indirect UV nchọpụta") (13) .Otú ọ dị, ma ọ bụrụ na anyị chọrọ n'ezie iji zere ọjọọ ọnụ ọnụ ọnụ kpam kpam, n'ihe banyere absorbance nchọpụta, ndị kasị mma ngwọta bụ iji a dị iche iche nchọpụta wavelength na-adọ, nke kasị mma ngwọta bụ iji a dị iche iche nchọpụta wavelength na-adọ, nke na-eme ka mobile ìhè na-amịkọrọ na-adọ na-erughị na-adọ na-adọrọ adọrọ na-adọrọ adọrọ na-adọrọ adọrọ na-akpali akpali nke na-eme ka a na-agba ọsọ na-agba ọsọ na-agba ọsọ nke mobile na-eme ka a na-agba ọsọ na-adọrọ adọrọ nke na-adọrọ adọrọ nke na-adọrọ adọrọ ma ọ bụ na-egbuke egbuke nke na-egbuke egbuke nke na-eme ka usoro nke mobile na-adọrọ adọrọ nke na-eme ka usoro mgbanaka ahụ dịkwuo ogologo oge na-adọrọ adọrọ nke mobile. nyocha.
Na-adịghị mma ọnụ ọnụ ọgụgụ kasị elu nwekwara ike ịpụta mgbe iji refractive index (RI) nchọpụta mgbe refractive index nke components ndị ọzọ karịa nyocha na sample, dị ka ihe mgbaze matrix, dị iche na refractive index nke mobile phase.This na-eme na UV-vis nchọpụta, ma nke a mmetụta na-emekarị na-attenuated ikwu na RI nchọpụta.Na abụọ ahụ nwere ike ịbụ sample na-adịghị mma pempek nke mobile usoro nke nsochi nchọpụta. usoro.
Na akụkụ nke atọ na isi isiokwu nke LC nchọpụta nsogbu, M atụle ọnọdụ na nke hụrụ elu udi dị iche iche na-atụ anya ma ọ bụ nkịtị elu shape.Irè Nchọpụta nsogbu nke nsogbu ndị dị otú ahụ na-amalite na ihe ọmụma nke na-atụ anya elu shapes (dabere na tiori ma ọ bụ tupu ahụmahụ na ẹdude ụzọ), otú deviations si ndị a na-atụ anya bụ doro anya.Peak ụdị nsogbu nwere ọtụtụ dị iche iche nwere ike na-akpata (oke obosara, tailing, m na-akparịta ụka n'ụzọ zuru ezu nke a, wdg). nkọwa na-enye ebe dị mma ịmalite nchọpụta nsogbu, ma ọ dịghị ejide ohere niile. Ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na ndepụta miri emi nke ihe na-akpata na ngwọta nwere ike na-ezo aka na chaatị mgbidi LCGC "LC Troubleshooting Guide".
(4) chaatị mgbidi LCGC "Nduzi Nchọpụta nsogbu LC".https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Nyocha data na nhazi akara ngosi na Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), p. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF na Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.