Daalụ maka ileta Nature.com.Ụdị ihe nchọgharị ị na-eji nwere nkwado CSS nwere oke.Maka ahụmịhe kachasị mma, anyị na-akwado ka ị jiri ihe nchọgharị emelitere (ma ọ bụ gbanyụọ ọnọdụ ndakọrịta na Internet Explorer).Ka ọ dị ugbu a, iji hụ na nkwado na-aga n'ihu, anyị ga-enye saịtị ahụ na-enweghị ụdị na Javascript.
Ọ dị mkpa maka sistemu in vitro nke a pụrụ ịdabere na ya nke nwere ike imepụtaghachi gburugburu anụ ahụ nke obi maka nyocha ọgwụ.Enweghi oke nke sistemu omenaala anụ ahụ mmadụ butere nkọwa na-ezighi ezi nke mmetụta ọgwụ obi obi.N'ebe a, anyị emepụtala ụdị omenala anụ ahụ nke obi (CTCM) nke na-eme ka electromechanically na-akpali mpekere obi ma na-agbatị physiological n'oge systolic na diastolic nke okirikiri obi.Mgbe ụbọchị iri na abụọ nke omenala gachara, ụzọ a mere ka akụkụ akụkụ obi dịkwuo mma, mana echekwaghị nguzosi ike n'ezi ihe ha.Ya mere, mgbe nyocha nke obere molekul, anyị chọpụtara na mgbakwunye 100 nM triiodothyronine (T3) na 1 μM dexamethasone (Dex) na ọkara anyị nọgidere na-enwe microstructure nke ngalaba maka ụbọchị iri na abụọ.Na mgbakwunye na ọgwụgwọ T3/Dex, usoro CTCM na-edobe profaịlụ transcriptional, viability, metabolism, na iguzosi ike n'ezi ihe n'otu ọkwa dị ka anụ ahụ obi ọhụrụ maka ụbọchị iri na abụọ.Tụkwasị na nke ahụ, oke mgbatị nke anụ ahụ obi na omenala na-ebute hypertrophic obi mgbama, na-enye ihe akaebe maka ikike CTCM iji ṅomie ọnọdụ hypertrophic nke na-akpata site na mgbatị obi.N'ikpeazụ, CTCM nwere ike ịṅomi physiology na pathophysiology nke obi na omenala ogologo oge, na-eme ka nyocha ọgwụ a pụrụ ịdabere na ya.
Tupu eme nyocha ụlọ ọgwụ, a na-achọ sistemu in vitro ndị a pụrụ ịdabere na ya nke nwere ike imepụtaghachi gburugburu ebe obibi anụ ahụ nke obi mmadụ n'ụzọ ziri ezi.Usoro ndị dị otú ahụ kwesịrị ịdị na-eṅomi mgbatị igwe agbanwe agbanwe, ọnụọgụ obi, na njirimara electrophysiological.A na-ejikarị ụdị anụmanụ eme ihe dị ka ikpo okwu nyocha maka physiology obi nke nwere oke ntụkwasị obi n'igosipụta mmetụta ọgwụ na obi mmadụ1,2.N'ikpeazụ, Ideal Cardiac Tissue Culture Experimental Model (CTCM) bụ ihe atụ nke nwere mmetụta dị ukwuu na nke akọwapụtara maka ọgwụgwọ dị iche iche na ọgwụgwọ ọgwụ, na-emepụtaghachi nke ọma physiology na pathophysiology nke obi mmadụ3.Enweghị usoro dị otú ahụ na-egbochi nchọpụta ọgwụgwọ ọhụrụ maka nkụda mmụọ obi4,5 ma mee ka ọgwụ cardiotoxicity dị ka isi ihe kpatara ịpụ n'ahịa6.
N'ime afọ iri gara aga, a napụrụ ọgwụ asatọ na-abụghị nke obi site na iji ụlọ ọgwụ eme ihe n'ihi na ha na-ebute ogologo oge QT na-eduga na ventricular arrhythmias na ọnwụ mberede7.N'ihi ya, a na-enwewanye mkpa maka usoro nyocha nke ọma nke a pụrụ ịdabere na ya iji chọpụta ịdị irè nke obi na nsị.Ojiji nke mmadụ kpatara n'oge na-adịbeghị anya pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPS-CM) na nyocha ọgwụ na nyocha nsi na-enye ihe ngwọta nke obere nsogbu a.Otú ọ dị, ọdịdị akabeghị nke hiPS-CM na enweghị mgbagwoju anya multicellular nke anụ ahụ obi bụ oke njedebe nke usoro a.Nnyocha e mere n'oge na-adịbeghị anya egosila na enwere ike imeri mmachi a site na iji hiPS-CM mmalite iji mepụta hydrogels anụ ahụ obi obere oge ka mmalite nke nkwekọrịta mberede na-eji nwayọọ nwayọọ na-abawanye mkpali eletrik na oge.Agbanyeghị, microtissues hiPS-CM ndị a enweghị ikike electrophysiological tozuru oke na nkwekọrịta nke myocardium okenye.Na mgbakwunye, anụ ahụ obi mmadụ nwere usoro dị mgbagwoju anya karị, nke nwere ngwakọta dị iche iche nke ụdị sel dị iche iche, gụnyere sel endothelial, neurons, na fibroblast stromal, jikọtara ya na usoro protein matrix extracellular.Nke a dị iche iche nke ndị na-abụghị cardiomyocyte11,12,13 n'ime obi ndị okenye mammalian bụ nnukwu ihe mgbochi na-eme ka anụ ahụ obi na-eṅomi site na iji ụdị cell onye ọ bụla.Oke oke ndị a na-emesi ike mkpa ọ dị n'ịzụlite ụzọ maka ịzụlite anụ ahụ myocardial adịghị emebi emebi n'okpuru ọnọdụ physiological na pathological.
Akụkụ dị gịrịgịrị (300 µm) nke obi mmadụ egosila na ọ bụ ihe atụ na-ekwe nkwa nke myocardium mmadụ na-emebibeghị.Usoro a na-enye ohere ịnweta usoro multicellular 3D zuru oke yiri anụ ahụ obi mmadụ.Agbanyeghị, ruo n'afọ 2019, iji akụkụ obi emebere emebere site na nlanarị ọdịnala dị mkpụmkpụ (h24).Nke a bụ n'ihi ọtụtụ ihe gụnyere enweghị mgbatị anụ ahụ-mechanical, ikuku-mmiri mmiri interface, na iji mgbasa ozi dị mfe na-akwadoghị mkpa anụ ahụ obi.N'afọ 2019, ọtụtụ ndị otu nyocha gosipụtara na itinye ihe ndị na-emepụta ihe n'ime sistemu omenaala anụ ahụ obi nwere ike ịgbatị ndụ ọdịnala, meziwanye okwu obi, yana iṅomi ọrịa obi.Ihe omumu abuo mara mma 17 na 18 gosiputara na uniaxial mechanical loading nwere mmetụta di mma na phenotype obi obi n'oge omenala.Otú ọ dị, ọmụmụ ihe ndị a ejighị ihe dị ike nke akụkụ atọ physico-mechanical loading nke usoro obi obi, ebe ọ bụ na a na-eju akụkụ obi na ma ọ bụ isometric tensile Force 17 ma ọ bụ linear auxotonic loading 18.Ụzọ ndị a nke ịgbatị anụ ahụ mere ka a kwụsịlata ọtụtụ mkpụrụ ndụ ihe nketa obi ma ọ bụ mwepu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa jikọtara ya na nzaghachi mgbatị na-adịghị mma.N'ụzọ doro anya, Pitoulis et al.19 mepụtara bath omenala iberibe obi siri ike maka mwugharị okirikiri obi site na iji nzaghachi transducer na mkpali esemokwu.Ọ bụ ezie na usoro a na-enye ohere maka ịmegharị okirikiri nke obi na vitro nke ọma, mgbagwoju anya na ntinye dị ala nke usoro ahụ na-egbochi ntinye nke usoro a.Ụlọ nyocha anyị ewepụtala usoro ọdịbendị dị mfe n'oge na-adịbeghị anya site na iji mkpali eletriki na usoro kachasị mma iji nọgide na-enwe ike nke akụkụ nke porcine na anụ ahụ obi mmadụ ruo ụbọchị 620,21.
N'ime ihe odide a dị ugbu a, anyị na-akọwa ụdị omenala anụ ahụ obi (CTCM) na-eji akụkụ nke obi porcine nke na-agụnye ihe ọchị iji nwetaghachi physiology obi obi akụkụ atọ na mgbagwoju anya pathophysiological n'oge okirikiri obi.CTCM a nwere ike ịbawanye izi ezi nke amụma ọgwụ tupu ụlọ ọgwụ ruo ọkwa a na-enwetatụbeghị mbụ site n'inye usoro obi obi na-akwụ ụgwọ ọnụ, nke na-eme ka ọ dị ka physiology / pathophysiology nke obi mammalian maka nyocha ọgwụ tupu ọgwụgwọ.
Ihe nrịbama igwe hemodynamic na-arụ ọrụ dị oke mkpa n'ịkwado ọrụ cardiomyocyte na vitro 22,23,24.N'ime ihe odide dị ugbu a, anyị emepụtala CTCM (Ọnyocha 1a) nke nwere ike iṅomi gburugburu obi ndị okenye site n'ịkwalite ma ọkụ eletrik na nke ígwè ọrụ na ugboro ugboro physiological (1.2 Hz, 72 beats kwa nkeji).Iji zere ịgbatị anụ ahụ dị ukwuu n'oge diastole, a na-eji ngwaọrụ mbipụta 3D mee ka nha anụ ahụ dịkwuo 25% (Fig 1b).Edobere pacing eletriki nke sistemu C-PACE butere iji bido 100 ms tupu systole site na iji sistemụ nweta data iji megharịa okirikiri obi nke ọma.Usoro omenala anụ ahụ na-eji ihe mmemme pneumatic actuator (LB Engineering, Germany) iji gbasaa akpụkpọ anụ silicone na-agbanwe cyclically iji mee ka mgbasawanye nke mpekere obi n'ime ụlọ elu.Ejikọtara usoro ahụ na eriri ikuku dị n'èzí site na ntụgharị nrụgide, nke mere ka o kwe omume ịhazigharị nrụgide nke ọma (± 1 mmHg) na oge (± 1 ms) (Fig 1c).
Jikọọ akụkụ anụ ahụ na mgbanaka nkwado 7 mm, nke gosipụtara na-acha anụnụ anụnụ, n'ime ụlọ omenala nke ngwaọrụ ahụ.A na-ekewapụ ụlọ omenala site na ụlọ ikuku site na akpụkpọ anụ silicone dị mkpa na-agbanwe agbanwe.Tinye gasket n'etiti ọnụ ụlọ nke ọ bụla iji gbochie ntapu.Ihe mkpuchi nke ngwaọrụ ahụ nwere electrodes graphite na-enye mkpali eletriki.b Ngosipụta atụmatụ nke nnukwu anụ ahụ, mgbanaka ntuziaka na mgbanaka nkwado.A na-etinye akụkụ anụ ahụ (aja aja) na ngwaọrụ buru ibu na mgbanaka nduzi na-etinye n'ime oghere dị na nsọtụ nke ngwaọrụ ahụ.N'iji ntuziaka ahụ, jiri nlezianya dobe mgbanaka nkwado nke ejiri ihe nrapado anụ ahụ kpuchie ya n'elu akụkụ anụ ahụ obi.c Eserese na-egosi oge mkpali eletriki dị ka ọrụ nke ikuku ikuku na-achịkwa site na mmemme pneumatic actuator (PPD).Ejiri ngwaọrụ nnweta data wee mekọrịta mkpali eletrik site na iji sensọ nrụgide.Mgbe nrụgide dị n'ime ụlọ omenala rutere n'ọnụ ụzọ edoziri, a na-eziga mgbaàmà pulse na C-PACE-EM iji kpalite mkpali eletriki.d Onyonyo nke CTCM anọ etinyere na shelf incubator.Ejikọtara ngwaọrụ anọ na otu PPD site na sekit pneumatic, a na-etinyekwa ihe mmetụta nrụgide n'ime valvụ hemostatic iji nyochaa nrụgide na sekit pneumatic.Ngwaọrụ ọ bụla nwere akụkụ anụ ahụ isii.
N'iji otu pneumatic actuator, anyị nwere ike ijikwa ngwaọrụ 4 CTCM, nke ọ bụla n'ime ha nwere ike ijide akụkụ anụ ahụ 6 (Fig 1d).Na CTCM, a na-atụgharị nrụgide ikuku dị n'ime ụlọ ikuku ka ọ bụrụ nrụgide synchronous n'ime ọnụ ụlọ mmiri ma na-ebute mgbasawanye anụ ahụ nke iberi obi (Ọnọdụ 2a na ihe nkiri mgbakwunye 1).Nyochaa mgbatị anụ ahụ na 80 mm Hg.Art.gosiputara mgbatị nke akụkụ anụ ahụ site na 25% (Fig 2b).Egosiri nrịbarị nke pasentị a kwekọrọ na ogologo sarcomere physiological nke 2.2–2.3 µm maka nkwekọrịta akụkụ obi nkịtị17,19,25.A tụlere mmegharị anụ ahụ site na iji ntọala igwefoto omenala (Ntụpọ mgbakwunye 1).Njupụta na ọsọ nke mmegharị anụ ahụ (Fig 2c, d) kwekọrọ na ịgbatị n'oge okirikiri obi na oge n'oge systole na diastole (Fig 2b).Mgbatị na ọsọ nke anụ ahụ obi n'oge nkwụsịtụ na ntụrụndụ nọgidere na-adịgide adịgide ruo ụbọchị iri na abụọ na omenala (Fig 2f).Iji nyochaa mmetụta nke mkpali eletriki na nkwekọrịta n'oge omenala, anyị mepụtara usoro iji chọpụta nrụrụ arụ ọrụ site na iji shading algọridim (Mgbakwunye Fig. 2a,b) ma nwee ike ịmata ọdịiche dị n'etiti nrụrụ na enweghị ọkụ eletrik.Otu akụkụ nke obi (Fig 2f).Na mpaghara mbughari nke ịkpụ (R6-9), voltaji n'oge mkpali eletrik dị 20% dị elu karịa na enweghị mkpali eletriki, nke na-egosi ntinye aka nke ọkụ eletrik na-arụ ọrụ nkwekọrịta.
Ihe nnọchianya nke nrụgide ụlọ ikuku, nrụgide ụlọ mmiri, na nha mmegharị anụ ahụ na-egosi na nrụgide ụlọ na-agbanwe nrụgide nke ụlọ, na-eme ka mmegharị ahụ kwekọrọ na iberi anụ ahụ.b Ihe nnochite anya nke pasent gbatịa (acha anụnụ anụnụ) nke akụkụ anụ ahụ dabara na pasentị gbatịa (oroma).c Ntugharị a tụrụ atụ nke iberi obi kwekọrọ na ọsọ ngagharị nke atụtara.(d) Nnọchi anya trajectories nke ngagharị cyclic (akara anụnụ anụnụ) na ọsọ (ahịrị nwere ntụpọ oroma) na iberi nke obi.e Quantification nke oge okirikiri (n = 19 mpekere kwa otu, site na ezì dị iche iche), oge nkwekọrịta (n = 19 mpekere kwa otu), oge ezumike (n = 19 mpekere kwa otu, site na ezì dị iche iche), mmegharị anụ ahụ (n = 25).Mpekere)/otu sitere na ezì dị iche iche), ngwa ngwa systolic kacha elu (n = 24 (D0), 25 (D12) mpekere / otu sitere na ezì dị iche iche) na ọnụ ọgụgụ ezumike kacha elu (n = 24 (D0), 25 (D12) mpekere / otu sitere na ezì dị iche iche).Nnwale nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ egosighi nnukwu ihe dị iche na oke ọ bụla.f Ihe nleba anya nyocha nke nnochi anya nke akụkụ anụ ahụ nwere (acha uhie uhie) na enweghị (acha anụnụ anụnụ) mkpali eletriki, mpaghara mpaghara iri nke akụkụ anụ ahụ sitere na otu akụkụ.Oghere ndị dị n'okpuru na-egosi ọnụọgụ nke ọdịiche pasent na nhụjuanya na akụkụ anụ ahụ na-enweghị mkpali eletrik na mpaghara iri site na ngalaba dị iche iche. (n = 8 mpekere / otu sitere na ezì dị iche iche, a na-eme t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 mpekere / otu sitere na ezì dị iche iche, a na-eme t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, **p<0,01). (n = ngalaba 8 / otu sitere na ezì dị iche iche, t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; **** p<0.0001, ** p<0.01, *p<0.05). (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p <0.0001 **p <0.01 *p <0.05） (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p <0.0001 **p <0.01 *p <0.05） (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; **** p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = ngalaba/otu 8, sitere na ezì dị iche iche, t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; ****p <0.0001, ** p<0.01, *p<0.05).Ogwe mperi na-anọchite anya ndahie ọkọlọtọ ±.
N'ime usoro omenala iberi obi biomimetic static anyị gara aga [20, 21], anyị jigidere ike, ọrụ, na nguzosi ike n'ezi ihe nke mpekere obi maka ụbọchị 6 site n'itinye mkpali eletriki na ịkwalite nhazi usoro.Agbanyeghị, ka ụbọchị iri gachara, ọnụọgụ ndị a dara nke ukwuu.Anyị ga-ezo aka na ngalaba nke emebere na sistemụ ọdịnala static biomimetic anyị gara aga 20, ọnọdụ njikwa 21 (Ctrl) na anyị ga-eji usoro izizi anyị nke mbụ dị ka ọnọdụ MC na ọdịbendị n'okpuru mkpali igwe na eletriki (CTCM).akpọ .Nke mbụ, anyị kpebisiri ike na mkpali n'ibu na-enweghị ọkụ eletrik ezughị ezu iji nọgide na-enwe ike anụ ahụ maka ụbọchị 6 (Mgbakwunye 3a,b).N'ụzọ na-akpali mmasị, na iwebata physio-mechanical na eletriki mkpali na-eji STCM, viability nke 12-ụbọchị obi ngalaba nọgidere otu dị ka na ọhụrụ obi ngalaba n'okpuru ọnọdụ MS, ma ọ bụghị n'okpuru Ctrl ọnọdụ, dị ka e gosiri MTT analysis (Fig. 1).3a).Nke a na-egosi na mkpali n'ibu na ịme anwansị nke okirikiri obi nwere ike ime ka akụkụ anụ ahụ dịrị ndụ ugboro abụọ ma ekwuru na usoro omenala static anyị gara aga.Otú ọ dị, ntule nke nhazi nhazi nke akụkụ anụ ahụ site na immunolabeling nke obi troponin T na connexin 43 gosiri na okwu connexin 43 dị elu nke ukwuu na anụ ahụ MC n'ụbọchị 12 karịa na njikwa n'otu ụbọchị ahụ.Otú ọ dị, otu connexin 43 okwu na nhazi Z-disiki adịghị echekwa nke ọma (Fig 3b).Anyị na-eji usoro ọgụgụ isi (AI) na-akọwapụta iguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ26, pipeline mmụta miri emi dabere na onyonyo dabere na troponin-T na connexin staining43 iji wepụta nguzobe n'usoro na nchacha nke mpekere obi n'usoro ike nke mpaghara.Usoro a na-eji Convolutional Neural Network (CNN) na usoro mmụta miri emi iji wepụta n'ụzọ ziri ezi n'usoro nke anụ ahụ obi n'ụzọ akpaaka na enweghị mmasị, dịka akọwara na ntụaka ahụ.26. MC anụ ahụ gosipụtara mma nhazi myirịta ka ụbọchị 0 tụnyere static akara ngalaba.Na mgbakwunye, ntụpọ trichrome Masson kpughere pasentị fibrosis dị ntakịrị n'okpuru ọnọdụ MS ma e jiri ya tụnyere ọnọdụ njikwa na ụbọchị 12 nke omenala (Fig 3c).Ọ bụ ezie na CTCM mụbara ikike nke akụkụ anụ ahụ obi n'ụbọchị 12 ruo n'ọkwa yiri nke anụ ahụ obi ọhụrụ, ọ meghị nke ọma nhazi nhazi nke akụkụ obi.
a Bar graph na-egosi quantification nke MTT viability nke ọhụrụ obi mpekere (D0) ma ọ bụ obi mpekere omenala maka 12 ụbọchị ma na static omenala (D12 Ctrl) ma ọ bụ na CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) iberi / otu ụzọ tụnyere A #0 # 0 pigs, otu ụzọ e si atụnyere NO # 0. na D0 na ** p <0.01 ma e jiri ya tụnyere D12 Ctrl). a Bar graph na-egosi quantification nke MTT viability nke ọhụrụ obi mpekere (D0) ma ọ bụ obi mpekere omenala maka 12 ụbọchị ma na static omenala (D12 Ctrl) ma ọ bụ na CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) Mpekere / otu ụzọ rụrụ si dị iche iche #0 # 0 pigs. tụnyere D0 na ** p <0.01 tụnyere D12 Ctrl).histogram na-egosi quantification nke viability nke MTT ọhụrụ obi ngalaba (D0) ma ọ bụ omenala nke obi ngalaba maka 12 ụbọchị na ma static omenala (D12 njikwa) ma ọ bụ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 njikwa) )), 12 (D12 MC) ngalaba / VA otu ụzọ rụrụ - pigs.####p <0,0001 pо сравнению с D0 и **p <0,01 pо сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 tụnyere D0 na **p <0.01 tụnyere D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心心切片(D0)天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 ，#12相比, *** p <0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) 丌12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p <0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)histogram na-egosi quantification nke MTT viability na ọhụrụ obi ngalaba (D0) ma ọ bụ akụkụ obi omenala maka 12 ụbọchị na static omenala (D12 njikwa) ma ọ bụ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 njikwa)) , 12 (D12 MC) ngalaba / otu si dị iche iche pigs, otu-way####p <0,0001 pо сравнению с D0, **p <0,01 pо сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 tụnyere D0, **p <0.01 tụnyere D12 Ctrl).b Troponin-T (akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ), connexin 43 (red) na DAPI (acha anụnụ anụnụ) na akụkụ obi dịpụrụ adịpụ (D0) ma ọ bụ akụkụ obi nke emebere n'okpuru ọnọdụ static (Ctrl) ma ọ bụ ọnọdụ CTCM (MC) maka ụbọchị 12) nke ihe oyiyi immunofluorescence nnọchiteanya (ọnụọgụ oghere = 100 µm). Artificial ọgụgụ isi quantification nke obi anụ ahụ structural iguzosi ike n'ezi ihe (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) mpekere / otu ọ bụla si dị iche iche ezi, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; Artificial ọgụgụ isi quantification nke obi anụ ahụ structural iguzosi ike n'ezi ihe (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) mpekere / otu ọ bụla si dị iche iche ezi, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D15), 7 (D15) пот разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ****p <0,000расt 1 пню. Nhazi nke nguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ obi site na ọgụgụ isi (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ngalaba / otu dị iche iche site na pigs dị iche iche, otu ụzọ ANOVA ule mere; ####p <0.0001 vs. na D0 na ****p <1 tụnyere D0 na ****p <0.00C.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) mpekere / otu nke ọ bụla nke ezi ezi, otu ụzọ ANOVA ule; ，#0#0p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) mpekere / otu ọ bụla nke ezi pigs dị iche iche, otu ụzọ ANOVA ule ，#0#0p 0.0001 与D12 Ctrl 相比） Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0) руппу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p <0,0001 по срав . Artificial ọgụgụ isi iji chọpụta nguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ obi (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ngalaba / otu ọ bụla nke pigs dị iche iche, otu ụzọ ANOVA ule; ####p <0.0001 vs .D0 Maka ntụnyere ****p <0t . c ihe oyiyi nnọchiteanya (aka ekpe) na quantification (n'aka nri) maka mpekere obi nke nwere ntụpọ Masson's trichrome (Scale bare = 500 µm) (n = 10 mpekere / otu nke ọ bụla site na ezì dị iche iche, a na-eme ule ANOVA otu ụzọ; ####p <0.0001 tụnyere D0 na 0.1 p = 0.1 p. c ihe oyiyi nnọchiteanya (aka ekpe) na quantification (n'aka nri) maka mpekere obi nke nwere ntụpọ Masson's trichrome (Scale bare = 500 µm) (n = 10 mpekere / otu nke ọ bụla site na ezì dị iche iche, a na-eme ule ANOVA otu ụzọ; #### p <0.0001 jiri tụnyere D0 na 0.1 p. c Репрезентативные изображения (слева) сштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/групу от разных свиней, выполняется одностостороняется односторороняется одностороняется одностороронний тест ANO0; с D0 na ***p <0,001 na сравнению с D12 Ctrl). c ihe oyiyi nnọchite anya (aka ekpe) na quantification (n'aka nri) nke akụkụ obi nke ejiri Masson's trichrome stains (uncoated scale = 500 µm) (n = 10 ngalaba / otu sitere na ezì dị iche iche, otu ụzọ ANOVA ule mere; #### p <0 .0001 tụnyere D0 na *** 2t C tụnyere 0. c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度）片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 丯 C 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 （左 左） 量化500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单向 Anova 测试； 0##. ***p <0.001 与D12 Ctrl 相比） c Репрезентативные изображения (слева) стая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа анализа ;### #p <0,0001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ihe oyiyi nnọchiteanya (aka ekpe) na quntitation (n'aka nri) nke akụkụ obi nke nwere ntụpọ Masson's trichrome stains (oghere = 500 µm) (n = 10 ngalaba / otu, nke ọ bụla sitere na ezì dị iche, nwalere site na nyocha nke otu ụzọ nke iche iche; ### # p <0.0001 tụnyere D0.0.1 <t.Ogwe mperi na-anọchite anya ndahie ọkọlọtọ ±.
Anyị chere na site n'ịgbakwunye obere ụmụ irighiri ihe na usoro omenala, enwere ike imezi iguzosi ike n'ezi ihe nke cardiomyocyte yana ibelata mmepe fibrosis n'oge omenala CTCM.Ya mere, anyị na-enyocha obere ụmụ irighiri ihe site na iji omenala njikwa anyị static20,21 n'ihi ọnụ ọgụgụ dị nta nke ihe mgbagwoju anya.Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), na SB431542 (SB) ka ahọpụtara maka ihuenyo a.A na-ejibu obere ụmụ irighiri ihe ndị a mee ihe na omenala hiPSC-CM iji kpalite maturation nke cardiomyocytes site n'ịbawanye ogologo sarcomere, T-tubules, na ọsọ ntụgharị.Na mgbakwunye, ma Dex (a glucocorticoid) na SB mara na-egbochi mbufụt29,30.Ya mere, anyị nwalere ma ntinye nke otu ma ọ bụ ngwakọta nke obere ụmụ irighiri ihe ndị a ga-eme ka nhazi nke akụkụ obi dị mma.Maka nyocha mbụ, a na-ahọrọ dose nke ogige ọ bụla dabere na nchịkọta a na-ejikarị na ụdị omenala cell (1 μM Dex27, 100 nM T327, na 2.5 μM SB31).Mgbe ụbọchị 12 nke omenala gasịrị, nchikota nke T3 na Dex rụpụtara ezigbo nhazi nhazi nke cardiomyocyte kacha mma na nhazigharị fibrous dị ntakịrị (Ngbakwunye 4 na 5).Tụkwasị na nke ahụ, iji okpukpu abụọ ma ọ bụ okpukpu abụọ nke T3 na Dex rụpụtara mmetụta na-adịghị mma ma e jiri ya tụnyere mkpokọta nkịtị (Mgbakwunye 6a,b).
Mgbe nyocha nke mbụ gasịrị, anyị mere ntụnyere isi na isi nke ọnọdụ omenala 4 (Nyocha 4a): Ctrl: akụkụ obi omenala na omenala static anyị kọwara na mbụ site na iji usoro kachasị mma anyị;20.21 TD: T3 na Ctrl s Agbakwunyere Dex na Wednesde;MC: akụkụ obi azụlitere na CTCM na-eji usoro kachasị mma anyị na mbụ;na MT: CTCM nwere T3 na Dex agbakwunyere na ọkara.Mgbe ụbọchị iri na abụọ nke ihe ọkụkụ gasịrị, viability nke MS na MT anụ ahụ nọgidere na-adị ka na anụ ahụ ọhụrụ nke MTT nyocha (Fig 4b).N'ụzọ na-akpali mmasị, mgbakwunye nke T3 na Dex na omenala transwell (TD) emeghị ka ọganihu dị ịrịba ama na viability ma e jiri ya tụnyere ọnọdụ Ctrl, na-egosi ọrụ dị mkpa nke mkpali ígwè ọrụ na-ejigide ike nke akụkụ obi.
ihe osise nnwale nke na-egosi ọnọdụ ọdịnala anọ a na-eji nyochaa mmetụta nke mkpali igwe na mgbakwunye T3/Dex na ọkara maka ụbọchị iri na abụọ. b Bar graph na-egosi quantification nke viability 12 ụbọchị post omenala na niile 4 omenala ọnọdụ (Ctrl, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi mpekere (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD na D12 MT), 12 (D12 MC) pigs 12 (D12 MC) pigs / otu-ụzọ dị iche iche a rụrụ <0 # 0 pigs. 01, ###p <0.001 tụnyere D0 na **p <0.01 tụnyere D12 Ctrl). b Bar graph na-egosi quantification nke viability 12 ụbọchị post omenala na niile 4 omenala ọnọdụ (Ctrl, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi mpekere (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD na D12 MT), 12 (D12 MC) pigs 12 (D12 MC) pigs / otu-ụzọ dị iche iche a rụrụ <0 # 0 pigs. 01, ###p <0.001 tụnyere D0 na **p <0.01 tụnyere D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественую оценку ирования (контроль, TD, MC и MT) site na сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD) уппу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **1 с D0 и **1. ). b The mmanya graph na-egosi quantification nke viability na 12 ụbọchị post omenala na niile 4 omenala ọnọdụ (njikwa, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi ngalaba (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, na D12 MT), 12 (D12 MC) dị iche iche piks . 01, ###p <0.001 vs. D0 na **p <0.01 ma e jiri ya tụnyere D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0) 12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA控制).b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC na MT) 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD na D12 MT), nke разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; ю с D0, ** p <0,01 na сравнению с контролем D12). b Histogram na-egosi ọnọdụ omenala 4 niile (njikwa, TD, MC na MT) tụnyere akụkụ obi ọhụrụ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD na D12 MT), site na pigs dị iche iche 12 (D12 MC) ngalaba / otu, otu ụzọ ANOVA ule, ###0#0. p <0.01 vs. njikwa D12). c Bar eserese na-egosi quantification nke glucose flux 12 ụbọchị post omenala na niile 4 omenala ọnọdụ (Ctrl, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi mpekere (D0) (n = 6 mpekere / otu si dị iche iche ezì, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; ###p <0.001, jiri ya tụnyere D0 na ***2 p <0.1). c Bar eserese na-egosi quantification nke glucose flux 12 ụbọchị post omenala na niile 4 omenala ọnọdụ (Ctrl, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi mpekere (D0) (n = 6 mpekere / otu si dị iche iche ezì, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; ###p <0.001, jiri ya tụnyere D0 na ***2 p <0.1). c Гистограмма показывает количественую оценку потока глюкозы через 12 ирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со сравнению няется тест ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Histogram na-egosi quantification nke glucose flux 12 ụbọchị post-omenala n'okpuru niile 4 omenala ọnọdụ (nchịkwa, TD, MC na MT) tụnyere ọhụrụ obi ngalaba (D0) (n = 6 ngalaba / otu si dị iche iche pigs, otu ụzọ ANOVA ule rụrụ ; ###p <0.001 tụnyere D0 na *** p <0.02C tụnyere D1). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 玡件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心切片(D0)通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA . C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 ， 来自 ， ， ， ， ， ， 猪 ， ， ， 猪 猪单向评（ 0相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）. c Гистограмма, показывающая количественную. льтивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению. Были проведены тесты ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 (контроль). c Histogram na-egosi quantification nke glucose flux na 12 ụbọchị post-omenala maka niile 4 omenala ọnọdụ (nchịkwa, TD, MC, na MT) tụnyere ọhụrụ obi ngalaba (D0) (n = 6 ngalaba / otu, si dị iche iche pigs, unilateral Were ANOVA ule e mere, ###p <0.001 tụnyere D0,1 ***1 ma e jiri ya tụnyere D0,1 ***1).d Strain analysis plots nke ọhụrụ (acha anụnụ anụnụ), ụbọchị 12 MC (green), na ụbọchị 12 MT (red) anụ ahụ na mpaghara anụ ahụ akụkụ iri (n = 4 mpekere / otu, otu ụzọ ANOVA ule; ọ dịghị ịrịba ọdịiche dị n'etiti otu).e Atụmatụ mgbawa ugwu na-egosi mkpụrụ ndụ ihe nketa dị iche iche na ngalaba obi ọhụrụ (D0) ma e jiri ya tụnyere akụkụ obi emebere n'okpuru ọnọdụ static (Ctrl) ma ọ bụ n'okpuru ọnọdụ MT (MT) maka ụbọchị 10-12.f Heatmap nke mkpụrụ ndụ ihe nketa sarcomere maka akụkụ obi emebere n'okpuru ọnọdụ omenala ọ bụla.Ogwe mperi na-anọchite anya ndahie ọkọlọtọ ±.
Ndabere metabolic na ngbanwe site na fatty acid oxidation gaa na glycolysis bụ ihe ama ama nke mwepu cardiomyocyte.Cardiomyocytes akabeghị aka na-eji glucose emeputa ATP ma nwee hypoplastic mitochondria nwere cristae5,32 ole na ole.Nyocha ojiji glucose gosipụtara na n'okpuru ọnọdụ MC na MT, ojiji glucose yiri nke anụ ahụ nke ụbọchị 0 (Njirimara 4c).Agbanyeghị, ihe nlele Ctrl gosipụtara mmụba dị ukwuu na ojiji glucose ma e jiri ya tụnyere anụ ahụ ọhụrụ.Nke a na-egosi na nchikota CTCM na T3/Dex na-eme ka anụ ahụ nwee ike ịdị ndụ ma na-echekwa ụdị phenotype metabolic nke akụkụ obi zụlitere ụbọchị iri na abụọ.Tụkwasị na nke ahụ, nyocha nke nhụjuanya gosiri na ọkwa dị iche iche nọgidere bụrụ otu na anụ ahụ obi ọhụrụ maka ụbọchị 12 n'okpuru ọnọdụ MT na MS (Fig 4d).
Iji nyochaa mmetụta CTCM na T3/Dex n'ozuzu ya na mpaghara ederede ederede zuru ụwa ọnụ nke anụ ahụ obi, anyị mere RNAseq na mpekere obi sitere na ọnọdụ ọdịbendị anọ dị iche iche (Ngbakwunye Data 1).N'ụzọ na-akpali mmasị, akụkụ MT gosipụtara myirịta dị elu nke ederede na anụ ahụ obi ọhụrụ, na-enwe nanị 16 dị iche iche n'ime mkpụrụ ndụ ihe nketa 13,642.Otú ọ dị, dị ka anyị gosipụtara na mbụ, Mpekere Ctrl gosipụtara 1229 dị iche iche gosipụtara mkpụrụ ndụ ihe nketa mgbe 10-12 ụbọchị na omenala (Fig 4e).Ekwenyere data ndị a site na qRT-PCR nke mkpụrụ ndụ obi na fibroblast (Foto mgbakwunye 7a-c).N'ụzọ na-akpali mmasị, ngalaba Ctrl gosipụtara mbelata nke mkpụrụ ndụ mkpụrụ ndụ obi na mkpụrụ ndụ na ịgbalite mmemme mkpụrụ ndụ mkpali.Ihe omuma a na-egosi na ngbanwe, nke na-emekarị mgbe omechara ogologo oge gasịrị, na-ebelata kpamkpam n'okpuru ọnọdụ MT (Mgbakwunye 8a,b).Nnyocha nke ọma nke mkpụrụ ndụ ihe nketa sarcomere gosiri na ọ bụ naanị n'okpuru ọnọdụ MT ka a na-echekwa mkpụrụ ndụ ihe nketa nke sarcomere (Fig. 4f) na ion channel (Mgbakwunye 9).Data ndị a na-egosi na site na nchikota nke igwe na mkpali ọchị (T3/Dex), transcriptome iberi obi nwere ike ịnọgide na-adị ka mpekere obi ọhụrụ mgbe ụbọchị iri na abụọ gachara na omenala.
A na-akwado nchoputa ihe odide ndị a site n'eziokwu ahụ bụ na a na-echekwa ihe nhazi nke cardiomyocytes na akụkụ obi n'okpuru ọnọdụ MT maka ụbọchị 12, dị ka e gosiri site na connexin 43 na-adịghị na mpaghara (Fig 5a).Na mgbakwunye, fibrosis na akụkụ obi n'okpuru ọnọdụ MT belatara nke ukwuu ma e jiri ya tụnyere Ctrl ma yiri akụkụ obi ọhụrụ (Fig 5b).Ihe omuma a gosiputara na nchikota nke mkpali igwe na ọgwụgwọ T3/Dex na-echekwa usoro obi obi nke oma na ngalaba obi na omenala.
Ihe onyonyo immunofluorescence nke nnọchite anya nke troponin-T (green), connexin 43 (red), na DAPI (acha anụnụ anụnụ) na ngalaba obi dịpụrụ adịpụ (D0) ma ọ bụ emebere ya maka ụbọchị 12 n'ọnọdụ ọdịbendị akụkụ obi anọ niile (ihe mgbochi = 100 µm).). Artificial ọgụgụ isi quantification nke obi anụ ahụ structural iguzosi ike n'ezi ihe (n = 7 (D0 na D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC na D12 MT) mpekere / otu si dị iche iche pigs, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; ####p <0.0001 ma e jiri ya tụnyere D0.0.0p <0.0p <0.0p <0p> rl). Artificial ọgụgụ isi quantification nke obi anụ ahụ structural iguzosi ike n'ezi ihe (n = 7 (D0 na D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC na D12 MT) mpekere / otu si dị iche iche ezì, otu ụzọ ANOVA ule a na-eme; #### p <0.0001 tụnyere D0.0.0p <0.0p <0.0p <0p> rl). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 2), 1 (DMC) и D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p <0,0001 по сравнению, 01 по сравнению с D12 Ctrl). Ikwu nke iguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ na-eji ọgụgụ isi (n = 7 (D12 mc).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和D12 、D12 MC 和D12 ／智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比，或****p <0.0001 与对 不同 猪 的 心脏结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl）量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ######### p <0.0001 )Nhazi nke nguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ obi site na iji ọgụgụ isi dị iche iche (n = 7 (D0 na D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC na D12 MT) ngalaba / otu) na otu ụzọ ANOVA ule;#### p <0,0001 по сравнению с D0 na *p <0,05 ma ọ bụ ****p <0,0001 na сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 tụnyere D0 na *p <0.05 ma ọ bụ ****p <0.0001 ma e jiri ya tụnyere D12 Ctrl). b ihe nnochite anya onyogho na quantification maka iberibe obi ntụpọ na Masson's trichrome stain (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, na D12 MC), 9 (D12 MT) mpekere / otu si dị iche iche ezi, otu ụzọ ANOVA ule <0 na-emere <1 ##0. .001, ma ọ bụ ****p <0.0001 tụnyere D12 Ctrl). b ihe nnochite anya onyogho na quantification maka iberibe obi ntụpọ na Masson's trichrome stain (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, na D12 MC), 9 (D12 MT) mpekere / otu si dị iche iche ezi, otu ụzọ ANOVA ule <0 na-emere <1 ##0. .001, ma ọ bụ ****p <0.0001 tụnyere D12 Ctrl). b Репрезентативные изображения ка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD na D12 MC), 9 (D12 MT) 0001 по сравнению с D0 na ***p <0,001 ma ọ bụ ****p <0,0001 na сравнению с D12 Ctrl). b ihe oyiyi na-anọchi anya na quantification nke akụkụ obi ntụpọ na Masson's trichrome stain (scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD na D12 MC), 9 (D12 MT) ngalaba / otu sitere na pigs dị iche iche, rụrụ otu ụzọ ANOVA na <1##0. 1 ma ọ bụ ****p <0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）（n = 1000 µm）（n = 10% D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；#*##p < 0.0001 丛行单因素方差分析；#*##p < 0.0001或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比） b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 0.0001或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比） b Репрезентативные изображения ) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD na D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / групппы, один- способ ANOVA; ####p <10. 0,001 ma ọ bụ ****p <0,0001 na сравнению с D12 Ctrl). b foto ndị nnọchite anya na ọnụọgụ akụkụ nke akụkụ obi nwere ntụpọ Masson's trichrome (akara mmanya = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD na D12 MC), 9 (D12 MT) ngalaba sitere na ezì/otu dị iche iche, otu ANOVA usoro, <1 ma ọ bụ 0#0p. ****p <0.0001 tụnyere D12 Ctrl).Ogwe mperi na-anọchite anya ndahie ọkọlọtọ ±.
N'ikpeazụ, a tụlere ike CTCM iṅomi hypertrophy obi site n'ịbawanye mgbatị anụ ahụ obi.Na CTCM, nrụgide ọnụ ụlọ ikuku kacha elu mụbara site na 80 mmHg ruo 80 mmHg.Art.(mgbatị nkịtị) ruo 140 mmHg Art.(Fig 6a).Nke a kwekọrọ na mmụba 32% na mgbatị ahụ (Fig 6b), bụ nke egosipụtara na mbụ dị ka pasent nke nha nha chọrọ maka akụkụ obi iji nweta ogologo sarcomere dị ka nke a hụrụ na hypertrophy.Mgbatị na ọsọ nke anụ ahụ obi n'oge nkwụsịtụ na ntụrụndụ nọgidere na-adịgide adịgide n'ime ụbọchị isii nke omenala (Fig 6c).A na-etinye anụ ahụ obi site na ọnọdụ MT na mgbatị nkịtị (MT (Normal)) ma ọ bụ ọnọdụ mgbatị (MT (OS)) ruo ụbọchị isii.Ugbua mgbe ụbọchị anọ gasịrị na omenala, hypertrophic biomarker NT-ProBNP buliri elu na ọkara n'okpuru ọnọdụ MT (OS) ma e jiri ya tụnyere ọnọdụ MT (nkịtị) (Fig 7a).Na mgbakwunye, mgbe ụbọchị isii nke ọdịbendị gasịrị, ọnụ ọgụgụ cell dị na MT (OS) (Fig 7b) mụbara nke ukwuu ma e jiri ya tụnyere akụkụ nke obi MT (nkịtị).Na mgbakwunye, NFATC4 ntugharị nuklia abawanyela nke ukwuu na anụ ahụ gbatịrị agbatị (Fig 7c).Nsonaazụ ndị a na-egosi ọganihu na-aga n'ihu nke imezigharị pathological mgbe hyperdistension na-akwado echiche na ngwaọrụ CTCM nwere ike iji mee ihe dị ka ikpo okwu iji mụọ ihe mgbaàmà hypertrophy nke obi na-agbatị.
Ihe nnọchianya nke nrụgide ụlọ ikuku, nrụgide ụlọ mmiri, na nha mmegharị anụ ahụ na-egosi na nrụgide ụlọ na-agbanwe nrụgide nke ụlọ, na-eme ka mmegharị ahụ kwekọrọ na iberi anụ ahụ.b Pasent gbatịa na-anọchi anya na gbatịa ọnụego maka akụkụ anụ ahụ agbatịkarị (oroma) na agbatị (acha anụnụ anụnụ).c Bar eserese na-egosi oge okirikiri (n = 19 mpekere kwa otu, site na ezì dị iche iche), oge nkwekọrịta (n = 18-19 mpekere kwa otu, site na ezì dị iche iche), oge ezumike (n = 19 mpekere kwa otu, site na ezì dị iche iche)), njupụta nke mmegharị anụ ahụ (n = 14 mpekere / otu, site na ezì dị iche iche), ọnụ ọgụgụ kasị elu systolic systolic na pigs dị iche iche). ọnụego (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ngalaba / otu) sitere na ezì dị iche iche), T-ule ụmụ akwụkwọ nwere ọdụ abụọ egosighi ọdịiche dị ịrịba ama na oke ọ bụla, na-egosi na paramita ndị a nọgidere na-adịgide adịgide n'oge 6 ụbọchị omenala na oke ọkụ.Ogwe mperi na-anọchite anya ndahie ọkọlọtọ ±.
a Bar graph quantification nke NT-ProBNP itinye uche na omenala mgbasa ozi si na obi mpekere omenala n'okpuru MT nkịtị gbatịa (Norm) ma ọ bụ overstretching (OS) ọnọdụ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, na D4 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs, Abụọ ụzọ ANOVA na-eme ka a rụrụ na nkịtị;). a Bar graph quantification quantification nke NT-ProBNP itinye uche na omenala mgbasa ozi si n'obi mpekere omenala n'okpuru MT nkịtị gbatịa (Norm) ma ọ bụ overstretching (OS) ọnọdụ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, na D4 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs, Abụọ-ụzọ ANOVA na-eme ka nkịtị0;).Quantitative histogram nke NT-ProBNP itinye uche na omenala omenala site na mpekere obi na-etolite n'okpuru ọnọdụ MT gbatịa (norm) ma ọ bụ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, na D4) .MTOS) mpekere / otu sitere na ezì dị iche iche, a na-eme nyocha ihe abụọ nke ọdịiche;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 ma e jiri ya tụnyere ịgbatị nkịtị). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) rm)3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与手析；**与︎：1 <0 . a Quantification nke NT-ProBNP itinye uche na obi mpekere omenala n'okpuru MT normal stretch (Norm) ma ọ bụ overstretch (OS) ọnọdụ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) si dị iche iche ed na mgbatị nkịtị, p <0.01).histogram Quantification nke NT-ProBNP ntinye uche na obi mpekere omenala n'okpuru ọnọdụ nke nkịtị MT gbatịa (norm) ma ọ bụ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) na D4 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs, ụzọ abụọ nyocha nke iche iche;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 ma e jiri ya tụnyere ịgbatị nkịtị). b Ihe onyonyo nnochite anya maka mpekere obi nke nwere troponin-T na WGA (n'aka ekpe) na nha nha cell (n'aka nri) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sel / otu sitere na 10 dị iche iche iberibe sitere na ezì dị iche iche, a na-eme T-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; 0****p <10. b Ihe onyonyo nnọchi anya maka mpekere obi nwere ntụpọ na troponin-T na WGA (n'aka ekpe) na nha nha cell (n'aka nri) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sel / otu sitere na mpekere 10 dị iche iche sitere na ezì dị iche iche, a na-eme t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ; 0****p <10. b Репрезентативные изображения срезов сердцать к (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) юдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Ihe onyonyo nnochite anya nke akụkụ obi nke nwere troponin-T na AZP (n'aka ekpe) na nha nha cell (n'aka nri) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sel / otu sitere na ngalaba 10 dị iche iche sitere na ezì dị iche iche, agba abụọ-tailed Student's t-ule 00 . b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表））：来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t ) b Ihe onyonyo nnochite anya nke mpekere obi nke nwere calcarein-T na WGA (n'aka ekpe) na nha cell (n'aka nri) (n = 330 (D6 MTOS), 369 sitere na mpekere iri dị iche iche 10 (D6 MTNorm)) Cells / 组，两方****有尾学甹****有尾学甹 **** 有尾学生 na-agbatị 0 na nkịtị. b Репрезентативные изображения срезов сердца. а) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/групппа, **** двусторонть кри0; 01 по сравнению с нормальным растяжением). b Ihe onyonyo nnochite anya nke akụkụ obi nke nwere troponin-T na AZP (n'aka ekpe) na nha nke nha cell (n'aka nri) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sitere na ngalaba 10 dị iche iche sitere na ezì dị iche iche) Sel / otu, njigide abụọ nwere ọdụ Student's t;****p <0.0001 ma e jiri ya tụnyere ụdị nkịtị). c ihe oyiyi maka ụbọchị 0 na ụbọchị 6 MTOS obi mpekere immunolabeled maka troponin-T na NFATC4 na quantification nke translocation nke NFATC4 na nuclei nke CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs, Abụọ-tailed Student rụrụ 0; - 5. c ihe oyiyi maka ụbọchị 0 na ụbọchị 6 MTOS obi mpekere immunolabeled maka troponin-T na NFATC4 na quantification nke translocation nke NFATC4 na nuclei nke CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs, Abụọ-tailed Stu. c. NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , ihe; *p <0,05). c onyogho maka akụkụ obi na 0 na 6 ụbọchị MTOS, immunolabeled maka troponin-T na NFATC4, na quantification nke NFATC4 translocation na nucleus nke cavernous cell (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) Mpekere / otu si dị iche iche pigs) rụrụ abụọ-tailed ttutest;p <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p 5) <. c ihe nnochita anya calcanin-T na NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS mpekere obi, na NFATC4 sitere na NFATC4 dị iche iche学生et 电影；*p <0.05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для ранслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критеридет, 0, 5. c ihe oyiyi nnọchiteanya nke MTOS obi mpekere na ụbọchị 0 na 6 maka troponin-T na NFATC4 immunolabeling na quantification nke NFATC4 translocation na nucleus nke CM si dị iche iche pigs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) Mpekere / otu, abụọ-tailed t -criterion; 0 Student.Ogwe mperi na-anọchi anya ± ọkọlọtọ ngbanwe.
Nnyocha gbasara obi na ntụgharị asụsụ chọrọ ụdị ekwentị na-emepụtagharị gburugburu obi nke ọma.N'ime ọmụmụ ihe a, e mepụtara ngwaọrụ CTCM ma mara nke nwere ike ịkpalite akụkụ ultrathin nke obi.Sistemu CTCM gụnyere mkpali elektrọnik mekọrịtara n'ụzọ anụ ahụ yana ịba ụba mmiri T3 na Dex.Mgbe ekpughere akụkụ obi porcine n'ihe ndị a, ike ha, iguzosi ike n'ezi ihe nhazi, ọrụ metabolic, na okwu ederede nọgidere bụrụ otu ihe ahụ dị na anụ ahụ obi ọhụrụ mgbe ụbọchị iri na abụọ nke omenala gasịrị.Na mgbakwunye, oke ịgbatị anụ ahụ obi nwere ike ibute hypertrophy nke obi nke hyperextension kpatara.N'ozuzu, nsonaazụ ndị a na-akwado ọrụ dị oke egwu nke ọnọdụ omenala physiological n'ịkwado phenotype obi nkịtị ma na-enye ikpo okwu maka nyocha ọgwụ.
Ọtụtụ ihe na-enye aka n'ịmepụta ebe kachasị mma maka ịrụ ọrụ na ndụ nke cardiomyocytes.Ihe kacha pụta ìhè n'ime ihe ndị a metụtara (1) mmekọrịta intercellular, (2) mkpali electromechanical, (3) ihe na-atọ ọchị, na (4) ihe ndị na-emepụta ihe.Mmekọrịta anụ ahụ na cell na cell chọrọ mgbagwoju anya netwọk akụkụ atọ nke ọtụtụ ụdị cell nke matrix extracellular na-akwado.Mkparịta ụka cellular dị mgbagwoju anya dị otú ahụ siri ike ịmaliteghachi na vitro site na omenala nke ụdị sel nke ọ bụla, mana enwere ike nweta ya ngwa ngwa site na iji ọdịdị organotypic nke akụkụ obi.
Mgbatị igwe na mkpali eletriki nke cardiomyocytes dị oke mkpa maka idowe phenotype obi obi33,34,35.Ọ bụ ezie na a na-eji mkpali arụ ọrụ eme ihe maka nhazi hiPSC-CM na maturation, ọtụtụ ihe ọmụmụ mara mma agbalịwo n'oge na-adịbeghị anya mkpali usoro nke mpekere obi na omenala site na iji uniaxial loading.Ọmụmụ ihe ndị a na-egosi na 2D uniaxial mechanical loading nwere mmetụta dị mma na phenotype nke obi n'oge omenala.N'ime ọmụmụ ihe ndị a, akụkụ nke obi ejirila ike tensile isometric17, linear auxotonic loading18, ma ọ bụ megharịa okirikiri obi site na iji nzaghachi transducer na draịvụ ike.Otú ọ dị, ụzọ ndị a na-eji uniaxial anụ ahụ gbatịa na-enweghị njikarịcha gburugburu ebe obibi, na-akpata nkwụsị nke ọtụtụ mkpụrụ ndụ obi obi ma ọ bụ nkwubi okwu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa jikọtara ya na nzaghachi mgbatị na-adịghị mma.CTCM akọwara ebe a na-enye ihe mkpali eletrọkị 3D nke na-eṅomi okirikiri obi eke n'ihe gbasara oge okirikiri na mgbatị ahụ physiological (25% gbatịa, 40% systole, 60% diastole, na 72 na-akụ kwa nkeji).Ọ bụ ezie na mkpali usoro ihe atọ a ezughị ezu iji nọgide na-eguzosi ike n'ezi ihe nke anụ ahụ, nchikota nke mkpali na mkpali na-eji T3 / Dex chọrọ iji nọgide na-enwe ike, ọrụ, na iguzosi ike n'ezi ihe.
Ihe ndị na-akpa ọchị na-arụ ọrụ dị mkpa n'ịgbanwe ụdị obi phenotype nke okenye.E mere ka nke a pụta ìhè na ọmụmụ HiPS-CM nke etinyere T3 na Dex na mgbasa ozi omenala iji mee ka mkpụrụ ndụ dịkwuo elu.T3 nwere ike imetụta mbufe nke amino acid, sugars na calcium gafee cell membranes36.Tụkwasị na nke ahụ, T3 na-akwalite okwu MHC-α na MHC-β downregulation, na-akwalite nhazi ngwa ngwa myofibrils na cardiomyocytes tozuru okè ma e jiri ya tụnyere nwayọọ nwayọọ myofibrils na nwa ebu n'afọ CM.Enweghị T3 na ndị ọrịa hypothyroid na-ebute mfu nke myofibrillar bands na mbelata ọnụego nke mmepe ụda37.Dex na-arụ ọrụ na ndị na-anabata glucocorticoid ma gosi na ọ na-abawanye nkwekọrịta myocardial n'ime obi ndị dịpụrụ adịpụ;38 a na-eche na nkwalite a nwere njikọ na mmetụta na ntinye ntinye ego nke calcium (SOCE) 39,40.Na mgbakwunye, Dex na-ejikọta ya na ndị na-anabata ya, na-eme ka nzaghachi intracellular sara mbara nke na-egbochi ọrụ mgbochi na mbufụt30.
Nsonaazụ anyị na-egosi na mkpali igwe anụ ahụ (MS) kwalitere arụmọrụ omenala n'ozuzu ya ma e jiri ya tụnyere Ctrl, mana ọ naghị akwado ike, nguzosi ike n'ezi ihe, na okwu obi obi karịa ụbọchị iri na abụọ na omenala.Tụnyere Ctrl, mgbakwunye T3 na Dex na omenala CTCM (MT) kwalitere ịdị mma yana idobe profaịlụ ederede ederede, nguzosi ike n'ezi ihe, yana ọrụ metabolic na anụ ahụ dị ọhụrụ maka ụbọchị iri na abụọ.Tụkwasị na nke ahụ, site na ịchịkwa ogo nke mgbatị anụ ahụ, a na-emepụta ụdị hypertrophy nke obi hyperextension na-eji STCM, na-egosi mgbanwe nke usoro STCM.Ekwesiri iburu n'uche na n'agbanyeghi na imeghari obi na fibrosis na-agụnyekarị akụkụ ahụ na-adịghị emebi emebi nke mkpụrụ ndụ na-ekesa nwere ike inye cytokines kwesịrị ekwesị yana phagocytosis na ihe ndị ọzọ na-emezigharị, akụkụ nke obi ka nwere ike iṅomi usoro fibrotic na nzaghachi nke nrụgide na trauma.n'ime myofibroblasts.A tụlere nke a na mbụ n'ụdị iberi obi a.Ekwesiri ighota na enwere ike imeghari paramita CTCM site n'igbanwe nrusi ike / njupụta eletrik na ugboro ole iji mee ka ọtụtụ ọnọdụ dị ka tachycardia, bradycardia, na nkwado ọbara na-arụ ọrụ (mechanical unloaded heart).Nke a na-eme ka usoro ahụ bụrụ ihe na-emepụta ihe maka nyocha ọgwụ.Ikike nke CTCM iji nleba anya hypertrophy obi obi na-emebiga ihe ókè na-emeghe ụzọ maka ịnwale usoro a maka ọgwụgwọ ahaziri onwe ya.N'ikpeazụ, ọmụmụ ihe dị ugbu a na-egosi na mgbatị ígwè ọrụ na mkpali ọchị dị oke mkpa maka ịkwado omenala akụkụ anụ ahụ obi.
Ọ bụ ezie na data ewepụtara ebe a na-egosi na CTCM bụ ikpo okwu na-ekwe nkwa nke ukwuu maka ịmegharị myocardium adịghị emebi emebi, usoro omenala a nwere oke ụfọdụ.Isi mmachi nke omenala CTCM bụ na ọ na-etinye nrụgide n'ịrụ ọrụ ike na-aga n'ihu na mpekere ndị ahụ, nke na-egbochi ikike iji nlezianya nyochaa mkpụkọ iberibe obi obi n'oge okirikiri ọ bụla.Na mgbakwunye, n'ihi obere akụkụ nke obi obi (7 mm), ikike inyocha ọrụ systolic n'èzí usoro omenala site na iji ihe mmetụta ike ọdịnala nwere oke.N'ime ihe odide a dị ugbu a, anyị na-emeri njedebe a site n'ịtụle voltaji anya dị ka ihe na-egosi ọrụ nkwekọrịta.Otú ọ dị, mmachi a ga-achọkwu ọrụ ma nwee ike ịkwado ya n'ọdịnihu site n'iwebata ụzọ maka nlekota anya anya nke ọrụ nke mpekere obi na omenala, dị ka nkewa anya site na iji calcium na voltaji-sensitive agba.Mgbochi ọzọ nke CTCM bụ na ụdị ọrụ anaghị achịkwa nrụgide physiological (bugo ibu na mgbe ibu).Na CTCM, a kpaliri nrụgide n'akụkụ dị iche iche iji mepụtaghachi 25% physiological stretch na diastole (nkwụsị zuru oke) na systole (ogologo nke nkwekọrịta n'oge mkpali eletrik) na nnukwu anụ ahụ.Ekwesịrị iwepụ mmachi a n'ichepụta CTCM n'ọdịnihu site na nrụgide zuru oke na anụ ahụ obi sitere n'akụkụ abụọ yana site n'itinye ezigbo mmekọrịta oke nrụgide na-eme n'ime ụlọ nke obi.
Ndozigharị ihe nfefe karịrị nke a kọrọ n'edemede a bụ naanị iṅomi nrịbama hypertrophic hyperstretch.Ya mere, ihe nlereanya a nwere ike inye aka n'ịmụ ihe mgbaàmà hypertrophic na-agbatị na-enweghị mkpa maka ihe ọchị ma ọ bụ ihe nhụjuanya (nke na-adịghị adị na usoro a).A na-achọkwu ọmụmụ ihe iji mụbaa ụbara CTCM, dịka ọmụmaatụ, ịmekọ ihe na mkpụrụ ndụ na-alụso ọrịa ọgụ, na-ekesa ihe ọchị na-eme ka plasma, na innervation mgbe ị na-emekọ ihe na sel neuronal ga-eme ka ohere nke ịmepụta ọrịa na CTCM dịkwuo mma.
A na-eji ezì iri na atọ mee ihe n'ọmụmụ ihe a.Emere usoro anụmanụ niile n'ụzọ kwekọrọ na ntuziaka ụlọ ọrụ wee kwado ya na Mahadum Louisville Institutional Animal Care and Use Committee.A na-amachi oghere aortic na obi ejiri 1 L nke cardioplegia na-adịghị mma (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U / ml heparin, pH ruo 7.4); A na-echekwa obi ndị ahụ na ngwọta obi obi jụrụ oyi ruo mgbe a na-ebuga ya na ụlọ nyocha na ice nke na-abụkarị <10 min. A na-echekwa obi ndị ahụ na ngwọta obi obi jụrụ oyi ruo mgbe a na-ebuga ya na ụlọ nyocha na ice nke na-abụkarị <10 min. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортиртировки в лабораторию на льду, что обымы. A na-echekwa obi na ngwọta cardioplegic oyi oyi ruo mgbe ebuga na ụlọ nyocha na ice, nke na-ewekarị <10 min.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. Debe obi na ice cardioplegia ruo mgbe ebuga na ụlọ nyocha na ice, na-emekarị <10 min.
Emepụtara ngwaọrụ CTCM na ngwanrọ SolidWorks na-enyere kọmputa aka (CAD).Ụlọ omenala, nkewa na ikuku ikuku bụ nke CNC doro anya plastic.Ihe mgbanaka azụ azụ nke 7mm bụ nke nnukwu njupụta polyethylene (HDPE) dị n'etiti ma nwee oghere o-mgbanaka iji nabata mgbanaka silicone nke ejiri mechie mgbasa ozi n'okpuru.Akpụkpọ anụ silica dị mkpa na-ekewa ụlọ omenala na efere nkewa.A na-ebipụ akpụkpọ ahụ silicone site na mpempe akwụkwọ silicone nke 0.02 inch ma nwee ike nke 35A.A na-ebipụ gaskets silicone nke dị n'elu site na 1/16 ″ mpempe akwụkwọ silicone ma nwee ike nke 50A.316L igwe anaghị agba nchara skru na nku akụ na-eji maka ịgbado ngọngọ na-eke airtight akara.
Emebere bọọdụ sekit e biri ebi (PCB) ka etinyere ya na sistemụ C-PACE-EM.Njikọ igwe swiss igwe na PCB ejikọrọ na graphite electrodes site ọlaọcha plated ọla kọpa wires na bronze 0-60 kposara screwed n'ime electrodes.A na-etinye bọọdụ sekit e biri ebi na mkpuchi nke ngwa nbipute 3D.
Ngwaọrụ CTCM na-achịkwa ihe mmemme pneumatic actuator (PPD) nke na-emepụta nrụgide ọbara na-achịkwa nke yiri okirikiri obi.Ka nrụgide dị n'ime ụlọ ikuku na-abawanye, akpụkpọ anụ silicone na-agbanwe agbanwe na-agbasawanye elu, na-amanye ndị na-ajụ n'okpuru ebe anụ ahụ.A ga-agbatị mpaghara anụ ahụ site na nchụpụ nke mmiri a, na-eṅomi mgbasawanye physiological nke obi n'oge diastole.N'ebe kachasị elu nke ntụrụndụ, a na-etinye mkpali eletriki site na electrodes graphite, nke na-ebelata nrụgide n'ime ụlọ ikuku ma mee ka ọkpụkpụ nke akụkụ anụ ahụ dị.N'ime ọkpọkọ ahụ bụ valvụ hemostatic nke nwere ihe mmetụta nrụgide iji chọpụta nrụgide na usoro ikuku.A na-etinye nrụgide nke ihe mmetụta nrụgide na-etinye na onye nchịkọta data jikọtara na laptọọpụ.Nke a na-enye ohere nlekota na-aga n'ihu nke nrụgide n'ime ụlọ gas.Mgbe a ruru nrụgide ụlọ kacha elu (ọkọlọtọ 80 mmHg, 140 mmHg OS), ngwaọrụ nnweta data nyere iwu ka iziga akara na sistemụ C-PACE-EM iji mepụta mgbama voltaji biphasic maka 2 ms, ka edobere na 4 V.
A na-enweta akụkụ obi na ọnọdụ omenala na olulu mmiri 6 dị ka ndị a: Nyefee obi ndị a na-egbute site na ụgbọ mmiri na-ebufe gaa na tray nwere oyi (4 ° C.) cardioplegia.A na-ekewa ventricle aka ekpe ya na agụba na-adịghị mma ma bee n'ime iberibe 1-2 cm3.A na-ejikọta ihe mgbochi anụ ahụ na nkwado anụ ahụ na nrapado anụ ahụ ma tinye ya na bath microtome anụ ahụ na-ama jijiji nke nwere ngwọta Tyrode na-aga n'ihu na oxygenated (3 g / L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g). S (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ngwọta), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M ngwọta), ruo 1 L ddH2O).Edebere microtome na-ama jijiji ka ọ belata mpekere gbara ọkpụrụkpụ 300 µm n'ogo nke 80 Hz, njupụta nke ọma jijiji kwụ ọtọ nke 2 mm, yana ọnụego ọbịbịa nke 0.03 mm/s.Akpụkpọ anụ ahụ gbara gburugburu na ice iji mee ka ihe ngwọta dị jụụ ma debe okpomọkụ na 4 Celsius.Nyefee akụkụ anụ ahụ site na bath microtome gaa na bath incubation nke nwere ngwọta Tyrode oxygen na-aga n'ihu na ice ruo mgbe enwetara akụkụ zuru oke maka otu efere omenala.Maka omenala transwell, a na-ejikọta akụkụ anụ ahụ na nkwado polyurethane 6 mm na-adịghị mma ma tinye ya na 6 ml nke usoro kachasị mma (199 medium, 1x ITS supplement, 10% FBS, 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml FGF-alkaline na 2X ọgwụ nje-antifungal).A na-etinye mkpali eletriki (10 V, ugboro 1.2 Hz) na akụkụ anụ ahụ site na C-Pace.Maka ọnọdụ TD, agbakwunyere T3 na Dex ọhụrụ na 100 nM na 1 μM na mgbanwe ọ bụla.A na-eju usoro ahụ na oxygen tupu dochie ya ugboro 3 n'ụbọchị.Azụlitere akụkụ anụ ahụ n'ime incubator na 37 Celsius C yana 5% CO2.
Maka omenala CTCM, etinyere akụkụ anụ ahụ na ngwa nbipute 3D emebere n'ime efere Petri nwere ngwọta Tyrode gbanwetụrụ.Emebere ngwaọrụ ahụ iji bulie nha nke iberi nke obi site na 25% nke mpaghara mgbanaka nkwado.A na-eme nke a ka akụkụ nke obi ghara ịgbatị mgbe ebufere ya na ngwọta Tyrode na ọkara na n'oge diastole.N'iji gluu histoacrylic, etinyere akụkụ 300 µm gbara ọkpụrụkpụ na mgbanaka nkwado 7 mm na dayameta.Mgbe ị na-ejikọta akụkụ anụ ahụ na mgbanaka nkwado ahụ, bepụ akụkụ anụ ahụ gafere ma tinye akụkụ anụ ahụ agbakwunyere azụ n'ime bath nke ngwọta Tyrode na ice (4 ° C) ruo mgbe a kwadebere akụkụ zuru ezu maka otu ngwaọrụ.Oge nhazi oge maka ngwaọrụ niile ekwesịghị gafere awa 2.Mgbe etinyere akụkụ anụ ahụ 6 na mgbanaka nkwado ha, kpọkọtara ngwaọrụ CTCM.Ime ụlọ omenaala CTCM ejiri ụzọ 21 ml emejuru ikuku oxygen.Nyefee akụkụ anụ ahụ na ụlọ omenala ma jiri nlezianya wepụ ihe ọ bụla ikuku ikuku na pipette.A na-eduzi akụkụ anụ ahụ n'ime oghere ma jiri nwayọọ tinye ya n'ime ya.N'ikpeazụ, tinye okpu electrode na ngwaọrụ ma nyefee ngwaọrụ ahụ na incubator.Mgbe ahụ jikọọ CTCM na tube ikuku na usoro C-PACE-EM.The pneumatic actuator meghere na ikuku valvụ meghere CTCM.A haziri sistemu C-PACE-EM ka ọ wepụta 4 V na 1.2 Hz n'oge pacing biphasic maka 2 ms.A na-agbanwe usoro ahụ ugboro abụọ n'ụbọchị ma gbanwee electrodes otu ugboro n'ụbọchị iji zere nchịkọta graphite na electrodes.Ọ bụrụ na ọ dị mkpa, enwere ike iwepụ akụkụ anụ ahụ n'olulu mmiri omenala ha iji wepụ ikuku ikuku ọ bụla dabara n'okpuru ha.Maka ọnọdụ ọgwụgwọ MT, T3/Dex agbakwunyere ọhụrụ yana mgbanwe mgbanwe ọ bụla na 100 nM T3 na 1 μM Dex.Emebere ngwaọrụ CTCM n'ime incubator na 37°C na 5% CO2.
Iji nweta trajectories agbatị nke mpekere obi, e mepụtara usoro igwefoto pụrụ iche.Ejiri igwe foto SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) jiri igwe mbugharị Navitar 7000 18-108mm (Navitar, San Francisco, CA).A na-eme ihe ngosi n'ime ụlọ okpomọkụ mgbe ejiri ọkara ọhụrụ dochie ọkara.Edobere igwefoto n'akuku 51° yana edekọ vidiyo na okpokolo agba 30 kwa nkeji.Nke mbu, ejiri ihe onyonyo-J mee ihe ngwanrọ mepere emepe (MUSCLEMOTION43) iji wepụta mmegharị nke mpekere obi.Emebere nkpuchi site na iji MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) iji kọwaa mpaghara mmasị maka ịkụ mpekere obi iji zere mkpọtụ.A na-etinye ihe mkpuchi ejiri aka kewaa n'ihe onyonyo niile dị n'usoro etiti wee bufee na nkwụnye MUSCLEMOTION.Motion Muscle na-eji nkezi ike pikselụ dị na etiti ọ bụla iji tụọ mmegharị ya na etiti ntụaka.A na-edekọ data, nyochaa ma jiri ya mee ihe iji chọpụta oge okirikiri ma chọpụta mgbatị anụ ahụ n'oge okirikiri obi.Ejiri nzacha dijitalụ efu na nke mbụ wee hazie vidiyo e dekọrọ.Iji gụpụta mgbatị anụ ahụ (peak-to-peak), a na-eme nyocha kacha elu-na-elu iji mara ọdịiche dị n'etiti ọnụ ọnụ ọnụ na ọwa mmiri na mgbama e dekọrọ.Na mgbakwunye, a na-eme detrending site na iji usoro 6th polynomial iji kpochapụ mkpagharị mgbaama.Emepụtara koodu mmemme na MATLAB iji chọpụta mmegharị anụ ahụ zuru ụwa ọnụ, oge okirikiri, oge ezumike, na oge mkpirisi (Code Mgbakwunye 44).
Maka nyocha nsogbu, na-eji otu vidiyo emepụtara maka ntule ịgbatị igwe, anyị buru ụzọ chọpụta onyonyo abụọ na-anọchite anya ọnụ ọgụgụ ngagharị (nke kachasị elu (elu) na nke kachasị ala (nke dị ala) dị ka sọftụwia MUSCLEMOTION siri dị.Anyị wee kewaa mpaghara anụ ahụ ma tinye ụdị nke shading algọridim n'anụ ahụ nke kewara (Mgbakwunye Fig. 2a).A na-ekewa anụ ahụ nke a na-ekewa n'ime ala iri, a na-agbakọkwa nrụgide dị n'elu nke ọ bụla site na iji akara ndị a: Strain = (Sup-Sdown) / Sdown, ebe Sup na Sdown bụ ebe dị anya nke ọdịdị ahụ site na n'elu na onyinyo ala nke ákwà ahụ, n'otu n'otu (Mgbakwunye Fig. .2b).
Edobere akụkụ obi na 4% paraformaldehyde maka awa 48.A na-akpọnwụ anụ ahụ edobere na 10% na 20% sucrose maka awa 1, emesia na 30% sucrose n'abali.A na-etinye akụkụ ndị ahụ na ngwakọta okpomọkụ kacha mma (OCT compound) wee jiri nwayọọ nwayọọ mee ka oyi kpọnwụrụ n'ime mmiri ịsa ahụ nke isopentane/akọrọ.Chekwaa ihe mgbochi OCT na -80 Celsius ruo mgbe nkewa.A kwadebere ihe mmịfe dị ka akụkụ nke nwere ọkpụrụkpụ nke 8 μm.
Iji wepu OCT na ngalaba obi, kpoo ihe mmịfe ahụ na ngọngọ kpo oku na 95 Celsius C maka 5 min.Tinye 1 ml PBS na slide ọ bụla wee tinye ya maka nkeji 30 n'ime ụlọ okpomọkụ, wee gbasaa akụkụ ndị ahụ site na ịtọ 0.1% Triton-X na PBS maka nkeji 15 na ụlọ okpomọkụ.Iji gbochie ọgwụ mgbochi ndị na-abụghị nke akọwapụtara na-ejikọta na nlele ahụ, tinye 1 ml nke 3% BSA ngwọta na slides na incubate maka 1 hour na ụlọ okpomọkụ.E wepụrụ BSA ma jiri PBS sachaa slide ndị ahụ.Jiri pensụl dee ihe nlele ọ bụla.Antibodies nke izizi (diluted 1:200 na 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) na troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ka agbakwunyere ihe karịrị nkeji 90, wee gbakwunye ọgwụ mgbochi abụọ nke B. 488 (Thermo Scientific; #A16079), megide oke bekee Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) maka nkeji 90 ọzọ wee sachaa ugboro 3 na PBS Iji mata ọdịiche dị iche iche site na ndabere, anyị na-eji naanị ihe mgbochi nke abụọ dị ka njikwa. nification) na microscope Keyence nwere nkwalite 40x.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) na 5 μg / ml na PBS ka ejiri mee ihe maka ntụpọ WGA ma tinye ya na ngalaba edozi maka nkeji 30 n'ime ụlọ okpomọkụ.A na-eji PBS sachaa ihe mmịfe ahụ ma tinye nwa Sudan na slide ọ bụla wee tinye ya maka nkeji iri atọ.A na-eji PBS saa ihe mmịfe ahụ ma tinyekwa ihe mgbakwunye vectashield.A na-ahụ anya ihe mmịfe na microscope Keyence na mmụba 40x.
E wepụrụ OCT na nlele ndị a dịka akọwara n'elu.Mgbe ewepụchara OCT, mikpuo ihe mmịfe ahụ na ngwọta Bouin n'otu abalị.A na-asacha ihe mmịfe ahụ na mmiri a na-ekpo ọkụ maka elekere 1 wee tinye ya na ngwọta Bibrich aloe acid fuchsin maka nkeji iri.Mgbe ahụ, a na-asacha ihe mmịfe ahụ na mmiri a na-ekpo ọkụ ma tinye ya na ngwọta nke 5% phosphomolybdenum/5% phosphotungstic acid maka nkeji 10.Na-asachapụghị, nyefee slides ozugbo n'ime ihe ngwọta aniline blue maka nkeji iri na ise.Mgbe ahụ, a na-asacha ihe mmịfe ahụ na mmiri mmiri na-ekpo ọkụ ma tinye ya na 1% acetic acid ngwọta maka nkeji 2.E kpochara ihe mmịfe na ethanol 200 N ma bufee ya na xylene.A na-ahụ ihe nkiri slide ndị nwere ntụpọ site na iji microscope Keyence nwere ebumnuche 10x.A na-agbakọ pasentị mpaghara fibrosis site na iji ngwanrọ Keyence Analyzer.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), katalọgụ nọmba V13154, dị ka onye nrụpụta protocol nwere ụfọdụ mgbanwe.Karịsịa, a na-eji punch ịwa ahụ nke nwere dayameta nke 6 mm iji hụ na nha anụ ahụ dị n'otu n'oge nyocha MTT.A na-etinye anụ ahụ n'otu n'otu n'ime olulu mmiri nke efere olulu mmiri iri na abụọ nwere mkpụrụ MTT dị ka ụkpụrụ ndị nrụpụta siri dị.A na-etinye akụkụ ndị ahụ na 37 ° C. maka awa 3 na anụ ahụ dị ndụ na-eme ka mkpụrụ MTT na-emepụta ihe na-acha odo odo nke formazan.Dochie ihe ngwọta MTT na 1 ml DMSO na incubate na 37 Celsius C maka nkeji 15 iji wepụ formazan odo odo na ngalaba obi.A na-agbanye ihe nlele 1: 10 na DMSO na 96-nke ọma doro anya na efere ala na agba odo odo na-atụ na 570 nm site na iji Cytation plate reader (BioTek).A na-ahazi agụmagụ na ịdị arọ nke iberi obi ọ bụla.
Ejiri mgbasa ozi nwere 1 μCi/ml [5-3H] -glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) dochie anya mgbasa ozi mkpụrụ obi maka ojiji glucose dị ka akọwara na mbụ.Mgbe awa 4 gachara, tinye 100 µl nke ọkara na tube microcentrifuge mepere emepe nwere 100 µl nke 0.2 N HCl.Mgbe ahụ, a na-etinye tube ahụ n'ime tube scintillation nke nwere 500 μl dH2O iji kpochapụ [3H] 2O maka awa 72 na 37 ° C.Mgbe ahụ, wepụ microcentrifuge tube na scintillation tube na tinye 10 ml nke scintillation mmiri mmiri.A na-eme ọnụ ọgụgụ scintillation site na iji Tri-Carb 2900TR liquid scintillation analyzer (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA).A na-agbakọkwa itinye glucose n'ọrụ na-eburu n'uche [5-3H]-glucose kpọmkwem ọrụ, nha anya ezughị ezu na ndabere, mgbaze nke [5-3H]-na glucose na-enweghị akara, yana arụmọrụ counter scintillation.A na-ahazi data ahụ na oke akụkụ nke obi.
Mgbe emechara anụ ahụ na Trizol, RNA kewapụrụ ya na ngalaba obi site na iji Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 dị ka usoro ndị nrụpụta si dị.Emere nkwadebe ọbá akwụkwọ RNAsec, usoro na nyocha data dị ka ndị a:
A na-eji 1 μg nke RNA n'otu nlele mee ihe dị ka mmalite ihe maka nkwadebe nke ọba akwụkwọ RNA.Ejiri NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit maka Illumina (NEB, USA) mepụta ọba akwụkwọ usoro ihe, na-agbaso ndụmọdụ ndị nrụpụta, na agbakwunyere koodu ndeksi n'usoro njirimara maka nlele ọ bụla.Na nkenke, a sachara mRNA site na mkpokọta RNA site na iji bead ndọta jikọtara ya na poly-T oligonucleotides.A na-eme nkewa site na iji cations divalent na oke okpomọkụ na NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X).Ejikọtara cDNA eriri mbụ site na iji hexamer primers na M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-).A na-ejikọta eriri cDNA nke abụọ site na iji DNA polymerase I na RNase H. A na-atụgharị ihe ndị fọdụrụ na njedebe na njedebe site na ọrụ exonuclease/polymerase.Mgbe a gbasasịrị njedebe nke 3′ nke iberibe DNA, ihe nkwụnye NEBNext nwere usoro loop ntutu na-etinye na ya iji kwado ya maka ngwakọ.Maka nhọrọ nke iberibe cDNA nke ogologo 150-200 bp họọrọ.A na-eji usoro AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA) sachapụ iberibe ọba akwụkwọ dị ọcha.Mgbe ahụ, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) nke nwere cDNA ahọpụtara nha nke jikọtara ya na ihe nkwụnye maka nkeji 15 na 37 Celsius C wee mee maka nkeji 5 na 95 ° C tupu PCR.Emere PCR site na iji Phusion High-Fidelity DNA polymerase, premier PCR zuru ụwa ọnụ na Index (X).N'ikpeazụ, a sachara ngwaahịa PCR (AMPure XP) yana ogo ọba akwụkwọ nyochara na sistemụ Agilent Bioanalyzer 2100.A na-ahazi ọba akwụkwọ cDNA ahụ site na iji usoro Novaseq.Ejiri CASAVA Base Calling tụgharịrị faịlụ onyonyo dị raw sitere na Illumina ka ọ bụrụ ihe na-agụ ya.A na-echekwa data raw na faịlụ usoro FASTQ(fq) nwere usoro ọgụgụ na àgwà ntọala kwekọrọ.Họrọ HISAT2 iji dakọọ usoro nzacha agụ na genome ntụaka Sscrofa11.1.N'ozuzu, HISAT2 na-akwado genomes nke nha ọ bụla, gụnyere genomes buru ibu karịa 4 ijeri bases, na ụkpụrụ ndabara ka edobere maka ọtụtụ paramita.Enwere ike ịhazi splicing na-agụ site na data RNA Seq nke ọma site na iji HISAT2, usoro kachasị dị ugbu a, yana otu izi ezi ma ọ bụ ka mma karịa usoro ọ bụla ọzọ.
Ọnụ ọgụgụ nke ederede na-egosipụta kpọmkwem ọkwa nke okwu mkpụrụ ndụ ihe nketa.A na-enyocha ọkwa mkpụrụ ndụ ihe nketa site na njupụta nke ederede (ọnụọgụ usoro) jikọtara na genome ma ọ bụ exons.Ọnụọgụ nke agụpụtara dabara na ọkwa mkpụrụ ndụ ihe nketa, ogologo mkpụrụ ndụ ihe nketa, na omimi usoro usoro.A gbakọrọ FPKM (iberibe kwa puku ụzọ abụọ nke ederede ederede kwa nde ụzọ abụọ) na-ekpebi ụkpụrụ P-ụkpụrụ dị iche iche site na iji ngwugwu DSeq2.Anyị wee gbakọọ ọnụego nchọpụta ụgha (FDR) maka uru P ọ bụla site na iji usoro Benjamini-Hochberg9 dabere na arụ ọrụ R arụnyere "p.adjust".
A gbanwere RNA dịpụrụ adịpụ site na akụkụ obi na cDNA na ntinye nke 200 ng / μl site na iji SuperScript IV Vilo Master mix si Thermo (Thermo, cat. No. 11756050).Quantitative RT-PCR rụrụ site na iji Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-nke ọma transperent mmeghachi omume efere (Thermo, cat. No. 4483319) na microamp optical adhesive (Thermo, cat. No. 4311971).Ngwakọta mmeghachi omume ahụ nwere 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, pusi # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer na 3.5 µl H2O agwakọta kwa nke ọma.A na-agba ọsọ okirikiri qPCR ọkọlọtọ wee tụọ ụkpụrụ CT site na iji ngwa PCR Applied Biosystems Quantstudio 5 ezigbo oge PCR (modul 384-well; ngwaahịa # A28135).A zụtara primers Taqman n'aka Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss03375629_u1) mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424558CTs) ihe niile na-eme ka ihe atụ nke ụlọ na-emepụta ihe.
A tụlere ntọhapụ mgbasa ozi nke NT-ProBNP site na iji ngwa NT-ProBNP (ezi) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) dịka ụkpụrụ ndị nrụpụta si dị.Na nkenke, 250 µl nke sample na ọkọlọtọ agbakwunyere na oyiri n'olulu mmiri ọ bụla.Ozugbo ịgbakwunye sample, tinye 50 µl nke Assay Reagent A na nke ọ bụla.Jiri nwayọ maa efere ahụ ma jiri ihe mkpuchi mechie.Mgbe ahụ, a na-etinye mbadamba nkume ndị ahụ na 37 Celsius C maka otu awa.Mgbe ahụ, gbanye ihe ngwọta ahụ ma saa olulu mmiri ugboro 4 na 350 µl nke 1X ngwọta na-asachapụ, na-etinye ihe ngwọta maka 1-2 nkeji oge ọ bụla.Mgbe ahụ, tinye 100 µl nke Assay Reagent B kwa olulu mmiri ma jiri akara efere mechie.A na-amagharị mbadamba nkume ahụ nke ọma ma tinye ya na 37 Celsius C maka nkeji iri atọ.Gwakọta ihe ngwọta ahụ ma sachaa olulu mmiri ugboro ise na 350 µl nke 1X ngwọta.Tinye 90 µl nke ihe ngwọta n'olulu mmiri ọ bụla ma mechie efere ahụ.Tinye efere na 37 Celsius C maka nkeji 10-20.Tinye 50 µl Ngwọta Kwụsị n'olulu mmiri ọ bụla.A tụrụ efere ahụ ozugbo site na iji ihe na-agụ efere Cytation (BioTek) setịpụrụ na 450 nm.
Emere nyocha ike iji họrọ nha otu nke ga-enye> 80% ike ịchọpụta mgbanwe 10% zuru oke na oke yana ọnụego njehie 5% Ụdị I. Emere nyocha ike iji họrọ nha otu nke ga-enye> 80% ike ịchọpụta mgbanwe 10% zuru oke na oke yana ọnụego njehie 5% Ụdị I. Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат > 80% ения параметра с 5% частотой ошибок типа I. Emere nyocha ike iji họrọ nha otu ga-enye> 80% ike ịchọpụta 10% ngbanwe oke oke yana ọnụego njehie 5% Ụdị I.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I型给介看關进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I型给介看關 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнаю 1% менения параметров na 5% частоты ошибок типа I. Emere nyocha ike iji họrọ nha otu nke ga-enye> 80% ike ịchọpụta 10% mgbanwe paramita zuru oke yana ọnụego mperi ụdị 5%.Ahọpụtara akụkụ anụ ahụ na-akpaghị aka tupu nnwale ahụ.Ntụle niile kpuru ìsì ma dezie ihe nlele naanị mgbe nyochachara data niile.Ejiri ngwanrọ GraphPad Prism (San Diego, CA) mee nyocha ọnụọgụgụ niile. Maka ọnụ ọgụgụ niile, a na-ewere p-uru dị mkpa na ụkpụrụ <0.05. Maka ọnụ ọgụgụ niile, a na-ewere p-uru dị mkpa na ụkpụrụ <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Maka ọnụ ọgụgụ niile, a na-ewere p-uru dị mkpa na ụkpụrụ <0.05.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Maka ọnụ ọgụgụ niile, a na-ewere p-uru dị mkpa na ụkpụrụ <0.05.Emere t-ule nwata akwụkwọ nwere ọdụ abụọ na data ahụ yana naanị ntụnyere 2.Ejiri ANOVA otu ụzọ ma ọ bụ ụzọ abụọ iji chọpụta mkpa dị n'etiti ọtụtụ otu.Mgbe a na-eme ule post hoc, a na-etinye mmezi Tukey na akaụntụ maka ọtụtụ ntụnyere.Ihe data RNAsec nwere nleba anya ngụkọ ọnụ ọgụgụ pụrụ iche mgbe ị na-agbakọ FDR na p.adjust dị ka akọwara na ngalaba Ụzọ.
Maka ozi ndị ọzọ gbasara imepụta ọmụmụ ihe, lee akụkọ nyocha nke okike ejikọtara na edemede a.