Uppsöfnun og dreifing næringarefna samþættir fæðuöflun skordýra og lífssögueiginleika. Til að bæta upp skort á sérstökum næringarefnum á mismunandi lífsstigum geta skordýr fengið þessi næringarefni með viðbótarfóðrun, til dæmis með því að nærast á seytingu hryggdýra í ferli sem kallast pollar. Moskítóflugan, Anopheles, þarfnast þess vegna bæði malentrin og arabísk efnaskipti. æxlun. Markmið þessarar rannsóknar var að meta hvort An.arabiensis æsingur á kúaþvagi til næringaröflunar bætir lífssögueiginleika.
Gakktu úr skugga um að það sé öruggt.arabiensis laðaðist að lyktinni af fersku, 24 klst., 72 klst og 168 klst gömlu kúaþvagi, og hýsilleitandi og blóðfóðruð (48 klst. eftir blóðmáltíð) kvendýr voru mæld í Y-rör lyktarlyktarmæli, og meðgöngueðlisfræðilegt efnasamband var notað til að bera kennsl á lífeðlisfræðilega efnafræðilega efnagreiningu og síðan var metið í lífeðlisfræðilegu efnasamböndum. kúaþvag í öllum fjórum aldursflokkunum.Tilbúnar blöndur lífvirkra efnasambanda voru metnar í Y-túpu- og vettvangsrannsóknum.Til að rannsaka kúaþvag og helsta köfnunarefnisinnihaldandi þvagefni sem hugsanlegt viðbótarfæði fyrir malaríuferjur, voru fóðrunarbreytur og lífsferill mældar. Hlutfall kvenkyns moskítóflugna var metið fyrir frásog kvenflugna og magn kvenflugna sem gleypt var af og magn kvenflugna sem tekið var upp og magn kvenflugna var metið. lifun, bundið flug og æxlun.
Leitaðu að blóði og næringu gestgjafans. Í rannsóknarstofu- og vettvangsrannsóknum dregist arabar að náttúrulegum og tilbúnum ilm af fersku og öldruðu kúaþvagi. Þungaðar kvendýr voru áhugalausar um viðbrögð kúaþvags á hrygningarstöðum. Gestgjafaleitandi og blóðsogandi kvendýr taka virkan í sig kúaþvag og söguþvagefni í samræmi við þessar lífeðlisfræðilegu auðlindir og lífeðlisfræðilega auðlind, val, eða æxlun.
Anopheles arabinis öflun og dreifing kúaþvags til að bæta lífssögueiginleikana. Viðbótarfóðrun kúaþvags hefur bein áhrif á getu smitbera með því að auka daglega lifun og ferjuþéttleika og óbeint með því að breyta flugvirkni og ætti því að hafa í huga í framtíðarlíkönum.
Næringarefnaöflun og -dreifing samþættir skordýraleit og lífssögueiginleika [1,2,3]. Skordýr geta valið og aflað fæðu og framkvæmt jöfnunarfóðrun út frá fæðuframboði og næringarefnaþörfum [1, 3]. Dreifing næringarefna fer eftir lífssöguferlinu og getur leitt til mismunandi krafna um fæðugæði og skortur á mismunandi lífsstigum á mismunandi lífsstigum [1,2]. Í tilteknum næringarefnum geta skordýr fengið þessi næringarefni með viðbótarfóðrun, svo sem á leðju, ýmsum saur og seyti hryggdýra, og hræ, ferli sem kallast pollar [2]. Þó að ýmsum fiðrilda- og mölfuglategundum sé fyrst og fremst lýst, koma vatnsholur einnig fyrir í öðrum þessum tegundum skordýra í fóðri og fæðutegundum og geta haft veruleg áhrif á aðrar tegundir skordýra og auðlindir, 2, 4, 5, 6] ,7]. Malaríuflugan Anopheles gambiae sensu lato (sl) kemur fram sem „vannærður“ fullorðinn [8], þannig að vökva getur gegnt mikilvægu hlutverki í lífssögueinkennum hennar, en þessi hegðun hefur hingað til verið vanrækt. Notkun æsinga sem leið til að auka næringarfræðilega athygli í þessu getur haft mikilvægar afleiðingar í för með sér.
Köfnunarefnisneysla hjá fullorðnum kvenkyns Anopheles moskítóflugum er takmörkuð vegna lítillar kaloríuforða sem fluttur er frá lirfustigi og óhagkvæmrar nýtingar á blóðmjöli [9]. Kvenkyns Ann.gambiae sl bætir venjulega upp þetta með því að bæta við viðbótarblóðmáltíðum [10, 11], þar með er hætta á að fleiri smitist af sjúkdómnum og setur meiri hættu á að sýkjast af moskítóflugum og neyta moskítóflugna í mikilli hættu. útskilnaður hryggdýra til að öðlast köfnunarefnissambönd sem auka aðlögun og flugstjórn, eins og önnur skordýr sýna fram á [2]. Í þessu sambandi er sterkt og sérstakt aðdráttarafl einnar af systkinategundum innan An. Gambíska sl tegundasamstæðan, Anopheles arabinis, ferskt og aldrað kúaþvag [12,13, er hýsilsefni þess, anisports, er áhugavert í hýsli og anisport. að umgangast og fæða nautgripi. Kúaþvag er auðlind sem er rík af köfnunarefnissamböndum, þar sem þvagefni er 50-95% af heildar köfnunarefni í fersku þvagi [15, 16]. Þegar kúaþvag eldist, nýta örverur þessar auðlindir til að draga úr flækjustig köfnunarefnisefnasambanda innan 24 klst. kalófílar örverur (sem margar hverjar framleiða efnasambönd sem eru eitruð fyrir moskítóflugur) þrífast [15], sem geta verið kvenkyns Ann.arabiensis laðast helst að þvagi á aldrinum 24 klukkustunda eða minna [13, 14].
Í þessari rannsókn var leitað að hýsil- og blóðfóðruðum Ans. Í fyrstu gónadótrópín-hringrásinni var arabiensis metið með tilliti til öflunar köfnunarefnissambanda, þ.m.t. þvagefnis, með þvagblöndun. Næst var röð tilrauna gerðar til að meta hvernig kvenkyns moskítóflugur úthluta þessari hugsanlegu næringarefnaauðlind til endurframleiðslu, nýrrar þvags og nýrrar lyktar. e var metið til að ákvarða hvort þetta gæfi áreiðanlegar vísbendingar fyrir hýsil og blóðfóðraðan An. Í leit sinni að þessari hugsanlegu næringarauðlind fann arabiensis efnafræðileg fylgni á bak við mismunað aðdráttarafl. Tilbúnar lyktarblöndur rokgjarnra lífrænna efnasambanda (VOC) sem greindust í sólarhrings öldruðu þvagi voru metnar frekar við rannsóknaraðstæður á þvagi, og sýndu enn frekar áhrif á þvagskilyrði í rannsóknastofunni og við rýmandi áhrif þvags. mismunandi lífeðlisfræðilegar aðstæður.Aðdráttarafl moskítóflugna. Niðurstöðurnar sem fengust staðfesta að An.arabiensis tileinkar sér og dreifir köfnunarefnissamböndum sem finnast í þvagi hryggdýra til að hafa áhrif á eiginleika lífsferilsins. Þessar niðurstöður eru ræddar í samhengi við hugsanlegar faraldsfræðilegar afleiðingar og hvernig hægt er að nota þær við eftirlit og eftirlit með smitferjum.
Anopheles arabicans (Dongola stofn) var haldið við 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH og 12:12 klst ljós:dökk hringrás. Lirfur voru ræktaðar í plastbökkum (20 cm × 18 cm × 7 cm) fylltar með eimuðu vatni og fóðraðar með Tetramin® fæðu í fiski (Tetramin®, DEP). 0 ml bollar (Nolato Hertila, Åstorp, SE) og síðan fluttir í Bugdorm búr (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) til að leyfa fullorðnum að koma upp. Fullorðnir fengu 10% súkrósalausn að vild þar til 4 dögum eftir uppkomu var boðið upp á tilraunir strax á undan eða frá stjörnu (dpe, með stjörnu). ræktað vatn áður en tilraunin hófst, eins og lýst er hér að neðan. Konur sem notaðar voru til tilrauna með flugslöngur voru sveltar í aðeins 4-6 klukkustundir með vatni að vild. Til að undirbúa blóðsog moskítóflugur fyrir síðari lífgreiningar, voru 4 dpe kvendýr útveguð með defibrotískt sauðfjárblóð (Håtunalab, Bro, SE) með himnufóðrunarkerfi (Hemotekyccstedly, UK) og þá var kvenkyns fóðrunarkerfi (Hemotekyccstedly, Workshops, UK). einstök búr og útveguðu fæði beint, eins og lýst er hér að neðan, eða 10% súkrósa að vild í 3 daga fyrir tilraunirnar sem lýst er hér að neðan. Síðarnefndu kvendýrin voru notaðar til lífmælinga á flugrörum og fluttar á rannsóknarstofuna og höfðu síðan eimað vatn að vild í 4-6 klukkustundir fyrir tilraunina.
Fóðurmælingar voru notaðar til að mæla þvag- og þvagefnisneyslu hjá fullorðnum An.Arab kvendýrum. Gestgjafaleitandi og blóðfóðruðum kvendýrum var útvegað fæði sem innihélt 1% þynnt ferskt og aldrað kúaþvag, mismunandi styrkleika þvagefnis og tvö samanburðarefni (10% súkrósa og vatn) í 48 klst. Auk þess 5 mg mlaní-12 12 12 12 12 12 12 2000 litarefni (FF; -1; Sigma-Aldrich, Stokkhólmi, SE) var bætt við mataræðið og afgreitt í 4 × 4 fylki í 250 µl örskilvindurörum (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Mynd 1A) Fyllt að brúninni (~300 µl). Til að forðast samkeppni milli moskítóflugna og mögulegra litaflugna í 1 cm í þvermál gæludýra (d. 6 cm á hæð; Semadeni, Ostermundigen, CH; Mynd 1A) í algjöru myrkri við 25 ± 2 cm °C og 65 ± 5% rakastig. Þessar tilraunir voru endurteknar 5 til 10 sinnum. Eftir útsetningu fyrir mataræði voru moskítóflugur settar við -20 °C þar til frekari greiningu.
Leitaðu að nautgripaþvagi og þvagefni sem hýsilinn og blóðsjúgandi kvenkyns Anopheles arabianus frásogast. Í fóðrunarprófi (A) fengu kvenkyns moskítóflugur fæði sem samanstóð af fersku og öldruðu kúaþvagi, mismunandi styrkleika þvagefnis, súkrósa (10%) og eimaðs vatns (H2O). Gestgjafi sótti meira blóð (B) sem sótti meira af kvendýrum (B) sem sóttist eftir blóði (B) sem sótti meira af blóði (B) te að hýsingarleitandi kvendýr tóku upp 72 klst. kúaþvag minna en 168 klst. kúaþvag (B).Meðaltal heildarniturmagns (± staðalfrávik) þvags er táknað í innfellingunni.Hýsingarleitandi (D, F) og blóðsogandi (E, G) kvendýr taka upp þvagefni á skammtaháðan hátt, hvoru öðru nafni (D-nafn) með mismunandi staf (D-einn). leið ANOVA með því að nota Tukey's post hoc greiningu; p < 0,05). Villustikur tákna staðlaða skekkju meðaltals (BE). Bein strikalínan táknar log-línulegu aðhvarfslínuna (F, G)
Til að losa frásogaða fæðu voru moskítóflugur settar hver fyrir sig í 1,5 ml örskilvinduglös sem innihéldu 230 µl af eimuðu vatni og vefurinn var rofinn með einnota stöpli og þráðlausum mótor (VWR International, Lund, SE), fylgt eftir með skilvindu við 10 krpm í 10 mínútur. ríkur) og gleypni (λ620) var ákvörðuð með því að nota litrófsljósmæla-undirstaða örplötulesara (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Að öðrum kosti voru moskítóflugurnar malaðar í 1 ml af eimuðu vatni, 900 µl af því var flutt í kúvettugreiningu 20 fyrir λ,0m0; , Kista, SE). Til að mæla neyslu mataræðis var stöðluð ferill útbúinn með raðþynningu til að gefa 0,2 µl til 2,4 µl af 1 mg ml-1 xýlensýaníði. Síðan var sjónþéttleiki þekkts litarefnisstyrks notaður til að ákvarða magn fæðu sem hver moskítófluga var tekin inn.
Rúmmálsgögn voru greind með einhliða dreifigreiningu (ANOVA) fylgt eftir með Tukey's post hoc parwise samanburði (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Línulegar aðhvarfsgreiningar lýstu þéttniháðri inntöku þvagefnis og bar saman svörun sem var háð þvagefni á milli Prism-hýsils og blóðmúss. 0 fyrir Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, Bandaríkjunum).
Um það bil 20 µl af þvagsýnum úr hverjum aldurshópi voru bundin á Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 möskva, Sigma Aldrich) og hjúpuð í tini hylki (8 mm × 5 mm). Hylkjum var komið fyrir í brunahólfinu í a Wallash, MA20 Fisher, MA, MA, Scientificer, Fisher, 20, 2000. , Bandaríkjunum) til að ákvarða köfnunarefnisinnihald í fersku og þroskuðu þvagi í samræmi við samskiptareglur framleiðanda. Heildarköfnunarefni (g N l-1) var magnmælt út frá þekktum þvagefnisstyrk sem notaður var sem staðall.
Til að meta áhrif mataræðis á lifun kvenna sem leitar hýsils og blóðsjúgandi, voru moskítóflugur settar hver fyrir sig í stóra Petri diska (12 cm í þvermál og 6 cm á hæð; Semadeni) með möskvaþektu gati á lokinu (3 cm í þvermál) með Fyrir loftræstingu og fæðuöflun. Mataræði var gefið beint eftir 4 dpe og innihélt ferskt þvag og 1% þynnt þvag, 1 styrkur, 1 þéttni 0% súkrósa og vatn. Hvert mataræði var pípettað á tanntappann (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) settur í 5 ml sprautu (Thermo Fisher Scientific, Gautaborg, SE), stimpillinn fjarlægður og settur ofan á petrískál (mynd 1).1A). tvisvar á dag, á meðan dauðum moskítóflugum var hent þar til síðasta moskítóflugan dó (n = 40 í hverri meðferð). Lifun moskítóflugna sem voru fóðraðar á ýmsum fæði var tölfræðilega greind með Kaplan-Meyer lifunarferlum og log-rank prófum til að bera saman lifunardreifingu á milli fæðis (IBM SPSS Statistics 0.04).
Sérsniðin flugaflugmylla byggð á Attisano o.fl.[17], gerð úr 5 mm þykkum glærum akrýlplötum (10 cm á breidd x 10 cm á lengd x 10 cm á hæð) án fram- og afturhliðar (Mynd 3: efst). Snúningssamsetning með lóðréttu röri úr gasskiljunarsúlu (0,275 mm límd í L) og þarf að líma upp á milli 0,275 mm. par af neodymium seglum með 9 cm millibili. Lárétt rör úr sama efni (6,5 cm L) skar lóðrétta rörið í tvennt og myndaði tjóðraðan arm og arm sem bar lítið stykki af álpappír sem ljósrof.
Kvendýr sem voru svelti allan sólarhringinn fengu ofangreint fæði í 30 mínútur áður en þær voru haldnar. Fullfóðraðar kvenkyns moskítóflugur voru síðan svæfðar hver fyrir sig á ís í 2-3 mínútur og festar við skordýrapinnar með bývaxi (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) og síðan bundnar við armana af láréttu flugi. r, síðan geymt og sýnt með PC-Lab 2000™ hugbúnaði (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Flugmyllan var sett í loftslagsstýrt herbergi (12 klst:12 klst., ljós: dimmt, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Til að sjá mynstur flugvirkninnar var heildarvegalengd flogin (m) og heildarfjöldi samfelldra flugathafna reiknuð út á klukkustund yfir 24 klst. tímabil. Auk þess voru meðalvegalengdir sem einstakar konur flogið voru bornar saman á milli meðferða og greind með einstefnu ANOVA og Tukey's post hoc greiningu (JMP Pro, v14.0.0), þar sem meðaltalsfjarlægð er háð meðferð í stofnuninni, Inc. , meðalfjöldi umferða er reiknaður í 10 mínútna þrepum.
Til að meta áhrif fæðis á æxlunargetu An.arabiensis voru sex kvendýr (4 dpe) fluttar beint í Bugdorm búr (30 cm × 30 cm × 30 cm) eftir blóðsöfnun og síðan útvegað tilraunafæði í 48 klst. eins og lýst er hér að ofan. Fæði voru síðan fjarlægð og hrygningarbollar (30 ml; ml af eimuðu vatni í 4 klst. , skipt um á 24 klst fresti. Endurtaktu hverja fæðuáætlun 20-50 sinnum. Egg voru talin og skráð fyrir hvert tilraunabúr. Undirsýni af eggjum voru notuð til að meta meðalstærð og lengdarbreytileika einstakra eggja (n ≥ 200 á fæði) með Dialux-20 smásjá (Wetz a Camera, DM10000) með Ernstz a, DETzlar, DM1000000; 20 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Eggin sem eftir voru voru geymd í loftslagsstýrðu herbergi við staðlaðar eldisaðstæður í 24 klst. og undirsýni af nýkomnum lirfum á fyrsta stigi (n ≥ 200 á fæði) var mæld, eins og lýst er hér að ofan. Fjöldi eggja og stærð eggja og lirfa var borin saman á milli meðferða á einum stað eftir AJNO, Pro v4c og Tukey meðferð (Tukey meðferð eftir AMP, Ho, 2000). 0.0, SAS Institute Inc.).
Rokgjarnt höfuðrými frá fersku (1 klst. eftir sýnatöku), 24 klst, 72 klst og 168 klst gamalt þvag var safnað úr sýnum sem safnað var úr Zebu nautgripum, Arsi kynþáttum. Til hægðarauka var þvagsýnum safnað snemma að morgni á meðan kýrnar voru enn í fjósi. Þvagsýni voru tekin úr 000 ml einstökum sýnum af hverju baki. pokar (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH og Co., Minden, DE) í 3 l pólýamíði með loki Í vínýlklóríð plasttunnur. Rjúkandi efna úr hverju þvagsýni úr nautgripum var safnað annaðhvort beint (fersku) eða eftir þroska við stofuhita í 24 klst., 72 klst. og 168 klst. í hverju þvagsýni.
Fyrir söfnun rokgjarnra efna í loftrýminu var lokað hringrásarkerfi notað til að dreifa virkjaðri kolefnissíuðri gasstraumi (100 ml mín-1) í gegnum pólýamíðpoka í aðsogssúluna í 2,5 klst með því að nota lofttæmisdælu (KNF Neuberger, Freiburg, DE).Sem stjórn var höfuðrýmissöfnunin gerð úr tómri pólýamíðsúlu úr 5 cm x 5 mm poka. id) sem innihélt 35 mg af Porapak Q (50/80 möskva; Waters Associates, Milford, MA, Bandaríkjunum) á milli glerullartappa. Fyrir notkun var súlan skoluð með 1 ml endureimuðu n-hexani (Merck, Darmstadt, DE) og 1 ml af pentani (99,0% flokki, hreinu leysiefni, 40 gC). μl af pentani. Höfuðrýmissöfn voru sett saman og síðan geymd við -20°C þar til þau eru notuð til frekari greiningar.
Hegðunarviðbrögð hýsilsleitandi og blóð étandi An.Headspace rokgjarnra útdrætti sem safnað var úr fersku, 24 klst, 72 klst og 168 klst gamalt þvagi voru greind með tilliti til rokgjarnra útdrátta frá Arabidopsis moskítóflugum með því að nota beinar lyktarmælir úr glerröri [18]. Tilraunirnar voru gerðar á 13-1 tíma virkni á heimili ZT,'Ar. [19].Glerrörslyktarmælir (80 cm × 9,5 cm id) var upplýstur með 3 ± 1 lx af rauðu ljósi að ofan. Kolsíað og rakað loftstreymi (25 ± 2 °C, 65 ± 2% rakastig) fór í gegnum lífgreininguna við 30 cm stálflæði og myndast í gegnum 30 cm röð af s-1 a mesh. samræmd plóma uppbygging.Tanntampon skammtari (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), upphengdur í 5 cm spólu á vindenda lyktarmælisins, með örvunarskiptum á 5 mínútna fresti.Til greiningar var 10 μl af hverju headspace útdrætti, þynnt 1:10, notað sem hýsilstýring eða pentan jafnmikið af blóðörvun. Mýflugur voru settar í einstök losunarbúr 2-3 tímum áður en tilraunin hófst. Losunarbúrið var komið fyrir vindmegin á lyktarmælinum og moskítóflugurnar fengu að aðlagast í 1 mín., og síðan var fiðrildaloki búrsins opnuð til að losa. Aðdráttarafl til meðferðar eða eftirlits var greind sem hlutfall af 5 mínútna snertingu við losun fluga og fluga í 5 mínútur. voru endurteknar að minnsta kosti 30 sinnum, og til að forðast áhrif hvers dags, var sami fjöldi meðferða og viðmiðunarprófa á hverjum tilraunadegi. Leitaðu að svörum frá hýsils- og blóðfóðruðum Ans. Arabic versus headspace-settum voru greind með því að nota nafnfræðilega aðhvarf og fylgt eftir með parvísum samanburði fyrir oddahlutföll (JMP.0 Institute Inc., v4AS.01).
Hrygningarsvörun An. Höfuðrýmisútdrættir úr fersku og öldruðu kúaþvagi voru greindir í Bugdorm búrum (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastbollar (30 mL; Nolato Hertila) fylltir með 20 mL af eimuðu vatni veittu hrygningarundirlaginu og voru settir í 24 cm hornið í sundur. með 10 μl af hverju headspace útdrætti í 1:10 þynningu. Jafnt magn af pentani var notað til að stilla viðmiðunarbikarinn. Skipt var um meðferðar- og viðmiðunarbolla á milli hverrar tilraunar til að stjórna stöðuáhrifum. Tíu blóðfóðruðum kvendýrum var sleppt í tilraunabúr á ZT 9-11 og egg í bollum voru reiknuð út með formúlubikarnum fyrir 24 klst. lagður í meðferðarbikarinn – fjöldi eggja sem verpt hefur verið í viðmiðunarbikarnum)/(heildarfjöldi eggja verpt).Hver meðferð var endurtekin 8 sinnum.
Gasskiljun og rafeindaloftnetmynsturgreining (GC-EAD) greining á kvenkyns An.arabiensis var framkvæmd eins og áður hefur verið lýst [20]. Í stuttu máli voru ferskir rokgjarnir útdrættir í höfuðrýminu aðskildir með því að nota Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, Bandaríkin) búin með HP-5 súlu (305 mm × 5 þykkt, Agilent Technologies 6890 GC) með HP-5 súlu (305 mm × 5 þykkt, A 205 mm × 5 0). ).og öldrun þvags.Vetni var notað sem hreyfanlegur fasi með að meðaltali línulegu flæðihraða 45 cm s-1. Hvert sýni (2 μl) var sprautað í 30 sekúndur í klofningslausri stillingu með inntakshitastig upp á 225 °C. GC ofnhitastigið var forritað frá 35 °C (3 mínútna bið) til 300 mínútna bið °C við 100 mín. 4 psi af köfnunarefni var bætt við og skipt 1:1 í Gerstel 3D/2 lágt dauðarúmmáls kross (Gerstel, Mülheim, DE) á milli logajónunarskynjarans og EAD. GC frárennslisháræðið fyrir EAD var leitt í gegnum Gerstel ODP-2 flutningslínu, sem fylgist með GC ofninum hitastigi auk 5 °C síu, með 0 cm glerröri, - 8 mm síu. rakt loft (1,5 l mín−1). Loftnetið var komið fyrir 0,5 cm frá úttak túpunnar. Hver einstök moskítófluga stóð fyrir einni endurtekningu og fyrir hýsilleitar moskítóflugur voru að minnsta kosti þrjár endurtekningar gerðar á þvagsýnum á hverjum aldri.
Greining á lífvirkum efnasamböndum í höfuðrýmissöfnum fersku og öldruðu nautgripaþvags með því að nota samsettan GC og massarófsmæli (GC-MS; 6890 GC og 5975 MS; Agilent Technologies) til að kalla fram loftnetssvörun í GC-EAD greiningu, sem starfar í rafeindaáhrifsjónunarham við 70 HP-súlu- 5 eV-súlu-súlu-5 eV. (60 m × 0,25 mm innra þvermál, 0,25 μm filmuþykkt) með helíum sem hreyfanlegur fasi með línulegu meðalflæðihraða 35 cm s-1. 2 μl sýni var sprautað með sömu inndælingarstillingum og ofnhita og fyrir GC-EAD greininguna. Efnasambönd voru auðkennd á grundvelli sérsniðinnar varðveislutíma N og Ková vísitölu og libr 4) ary (Agilent).Auðkennd efnasambönd voru staðfest með því að sprauta ósviknum stöðlum (Viðbótarskrá 1: Tafla S2). Til magngreiningar var heptýlasetati (10 ng, 99,8% efnahreinleiki, Aldrich) sprautað sem ytri staðall.
Mat á virkni tilbúnar lyktarblöndu sem samanstendur af lífvirkum efnasamböndum sem auðkennd eru í fersku og öldruðu þvagi til að laða að hýsilleitandi og blóðsogandi Ans.arabiensis, með því að nota sama lyktarmæli og samskiptareglur og hér að ofan.Tilbúnar blöndur líktu eftir samsetningu og hlutföllum efnasambanda í blönduðum rokgjörnum útdrætti í loftrými af ferskum, - 4 klst., - 2 klst. -klukkutíma gamalt þvag (Mynd 5D-G; Viðbótarskrá 1: Tafla S2). Til greiningar skal nota 10 μl af 1:100 þynningu af fullgerfnu blöndunni, með heildarlosunarhraða á bilinu um það bil 140-2400 ng h-1, til að meta aðdráttarafl fyrir hýsil og blóðsog blöndunnar í moskítóblöndunni sem er fullkomin fyrir moskítósog. stök efnasambönd úr heildarblöndunni eru fjarlægð. Leitaðu að svörum frá hýsils og blóðfóðruðum Ans.Arab vs tilbúnum og frádráttarblöndum voru greind með því að nota nafnhvarf og fylgt eftir með parslegum samanburði fyrir oddahlutföll (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Til að meta hvort kúaþvag gæti virkað sem hýsilvísun fyrir malaríu moskítóflugur, var fersku og öldruðu kúaþvagi, safnað eins og lýst er hér að ofan, og vatni sett í möskvaðar 3 l fötur (100 ml) og sett í beitugildrur hýsilsins.(BG-HDT útgáfa; BioGents, Regensburg, DE). Tíu gildrur settar með 50 m millibili í haga, 400 m frá þorpssamfélagi (Silay, Eþíópíu, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) og enginn nautgripur, á varanlegum uppeldissvæðum og þorpum. Fimm gildrur voru eftir til meðferðar á meðan fimm gildrur voru eftir. er skipt á nóttu í samtals fimm nætur. Fjöldi moskítóflugna sem teknar voru í gildrur sem beittar voru með þvagi á mismunandi aldri voru bornar saman með því að nota logistic regression með beta tvínómadreifingu (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Í þorpi þar sem malaríu er landlægt, nálægt bænum Maki, Oromia svæðinu, Eþíópíu (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Mynd 6A). Rannsóknin var gerð á milli miðjan ágúst og miðjan september áður en árlegt leifar innanhúss var úðað ásamt 50 m millibili og 50 m millibili. útjaðri þorpsins voru valin fyrir rannsóknina (mynd 6A). Viðmiðin sem notuð voru til að velja húsin voru: engin dýr leyfð í húsinu, engin innieldun (að teikna eldivið eða kol) var leyfð (a.m.k. á tilraunatímabilinu), og hús með að hámarki tvo íbúa, sofandi í skordýraeitri.undir meðhöndluðu flugnanetinu.Siðferðilegt samþykki hefur verið veitt af Institutional Research Ethics Review Board (IRB/022/2016) á náttúruvísindadeild (CNS-IRB), Addis Ababa University, í samræmi við viðmiðunarreglur sem settar eru í World Medical Association Declaration of Helsinki.Samþykki frá sérhverjum yfirmanni heilbrigðisstarfsmanna og heilbrigðisstarfsfólki á staðnum var aflað með héraðshöfum. 'kebele') stigi. Tilraunahönnunin fylgdi 2 × 2 latneskri ferningahönnun, þar sem tilbúnar blöndur og stýringar voru úthlutaðar á pöruð hús fyrstu nóttina og skipt á milli húsa á næstu tilraunakvöldi. Þetta ferli var endurtekið tíu sinnum. Auk þess, til að áætla moskítóvirkni í völdum húsum, voru CDC-gildrurnar settar á upphafsmínútuna á miðnættinu á sama tíma og lok dagsins á sama tíma á þremur nætur.
Tilbúin blanda sem innihélt sex lífvirk efnasambönd var leyst upp í heptani (97,0% leysi GC einkunn, Sigma Aldrich) og losuð við 140 ng h-1 með því að nota bómullarvökvaskammtara [20]. Vökuskammtarinn leyfði öllum efnasamböndum að losna í föstum hlutföllum í 12 klst. tilraunina. Control and Prevention (CDC) ljósgildra (John W. Hock Company, Gainesville, FL, Bandaríkjunum; mynd 6A). Gildurnar voru hengdar 0,8 – 1 m yfir jörðu, nálægt rætur rúmsins, og sjálfboðaliði svaf undir ómeðhöndlaðri moskítóneti og starfrækt á milli 18:00 og 06:30. , og barnshafandi [21] voru í kjölfarið skimaðar með því að nota pólýmerasa keðjuverkun (PCR) greiningu til að bera kennsl á tegundina formfræðilega auðkenndar sem A. gambiae sl. Meðlimir fléttunnar [23]. Í vettvangsrannsókninni var gildrufanga á pöruðum húsum greind með því að nota nefnileg logistic fit líkan, þar sem aðdráttaraflið var háð blandan og meðferðin (J.) Föst áhrifin (J.)0. SAS Institute Inc.).Hér tilkynnum við χ2 og p-gildin úr líkindahlutfallsprófinu.
Metið hvort það sé öruggt.arabiensis tókst að fá þvag, aðal köfnunarefnisgjafa þess, þvagefni, með beinni fóðrun, innan 48 klst. frá gjöf í 4 daga eftir (dpe) hýsilleitarprófanir og blóðfóðraðar kvenkyns fóðrunarrannsóknir (Mynd 1A). Bæði hýsilleitandi og blóðsjúgandi kvendýr gleyptu marktækt meira af súkrósa, 206 f. = 5 p. 0,0001 og F(5,299) = 56,00, p < 0,0001, í sömu röð; mynd 1B,C). Ennfremur borðuðu konur sem leita að hýsils minna í þvagi eftir 72 klst. samanborið við þvag eftir 168 klst. (mynd 1B).Þegar kvendýrum var boðið upp á mataræði sem innihélt 2 M m. borið saman við allan annan styrk og vatn, en ekki aðgreinanlegt frá 10% súkrósa (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; mynd 1D). Þetta var öfugt við svörun kvenna sem fengu blóðfóðrun, sem venjulega gleyptu marktækt meira fæði sem innihélt þvagefni en vatn, þó marktækt minna en vatn, að vísu 50% súkrósa, að vísu 50% súkrósa, þó 50% súkrósa. 5, p < 0,0001; mynd 1).1E). Ennfremur, þegar borin voru saman lífeðlisfræðilegu ástandin tvö, gleyptu kvendýr sem fengu blóðflæði meira þvagefni en kvendýr sem leita að hýsils í lægsta styrknum og þessar kvendýr gleyptu svipað magn af þvagefni í hærri styrk (F(1,953,082,01,08;Mynd 1F, G). Þó að inntaka úr mataræði sem innihélt þvagefni virtist hafa ákjósanleg gildi (mynd 1D, E), gátu konur í báðum lífeðlisfræðilegum ástandi stillt magn þvagefnis sem frásogast yfir allt svið þvagefnisstyrks á log-línulegan hátt (mynd 1F, G).Á sama hátt virðast moskítóflugur stjórna niturupptöku sinni með því að stjórna magni þvags sem frásogast, þar sem magn köfnunarefnis í þvagi endurspeglast í magni sem frásogast (mynd 1B, C og B innfellingar).
Til að meta áhrif þvags og þvagefnis á hýsilsleitandi og blóðsogandi moskítólifun, fengu kvendýr þvag á öllum fjórum aldri (fersku, 24 klst., 72 klst. og 168 klst. eftir útfellingu) og margvísleg þvagefnisstyrkur, auk eimaðs vatns og 10% súkrósi virkaði sem 2A greining (þessi survi-greining hafði marktæk áhrif á 2A). líf í hýsingarleitandi konum (þvag: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; þvagefni: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; mynd 2B, C) og blóðfóðruðum konum (þvagi: χ.02, d = 0,5,0, d = 9,0,0; χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; mynd 2D,E).Í öllum tilraunum höfðu konur sem fengu þvag, þvagefni og vatn marktækt lægri lifunartíðni samanborið við konur sem fengu súkrósa (Mynd 2B-E). h gamalt þvag (p = 0,016) með lægstu lifunarlíkur (Mynd 2B). Ennfremur lifðu hýsilleitandi konur sem fengu 135 mM þvagefni lengur en vatnseftirlit (p < 0,04) (Mynd.2C). Í samanburði við vatn lifðu konur sem fengu ferskt þvag og sólarhringsþvagi lengur (p = 0,001 og p = 0,012, í sömu röð; mynd 2D), en konur sem fengu 72 klst. þvag lifðu lengur en þær sem fengu stutt ferskt þvag kvenna og 24 klst. e 2D). Þegar þær fengu 135 mM þvagefni lifðu blóðfóðraðar konur lengur en allur annar styrkur þvagefnis og vatns (p < 0,013; mynd 2E).
Lifun hýsils og blóðsjúgandi kvenkyns Anopheles arabinis sem nærist á kúaþvagi og þvagefni. Í lífgreiningunni (A) fengu kvenkyns moskítóflugur fæði sem samanstóð af fersku og öldruðu kúaþvagi, mismunandi styrkleika þvagefnis, súkrósa (10%) og eimaðs vatns (H2O). Lifun hverrar moskítóflugu sem leituðu af hýsil (B, C) og hverri moskító (E) sem leituðu af hýsil (E) 2 klukkustundir þar til allar konur sem eru fóðraðar á þvagi (B, D) og þvagefni (C, E), og viðmiðunarefni, súkrósa og vatn, eru dánar
Heildarfjarlægð og fjöldi umferða sem ákvarðað var í flugmyllaprófinu yfir 24 klukkustunda tímabil var mismunandi á milli hýsilleitandi og blóðsogandi moskítóflugna, sem sýndu minni flugvirkni í heildina (Mynd 3). Gestgjafaleitarflugur sem gáfu ferskt og aldrað þvag eða súkrósa og vatn sýndu sérstakt flugmynstur á meðan ferskt þvag var virkt á daw, en kvenkyns fóðruðu meira á daw (mynd 2). 4 og 168 klst. moskítóflugur sem nærðust á þvagi sýndu mismunandi flugmynstur og voru fyrst og fremst daglegar. Kvenkyns moskítóflugur sem útveguðu súkrósa eða 72 klst. þvag sýndu virkni allan sólarhringinn, en kvendýr sem gáfu vatni voru virkari á miðju tímabili. Moskítóflugur neyttu súkkítóflugur seint á morgnana og mest á morgnana og á þeim morgni 72 klst. gamalt þvag minnkaði stöðugt á 24 klst. (mynd 3).
Flugárangur veiðimanna sem leitar að blóðsjúgandi kvenkyns Anopheles arabinis sem nærist á kúaþvagi og þvagefni. Í flugmyllaprófinu voru kvenkyns moskítóflugur fóðraðar á fersku og öldruðu kúaþvagi, mismunandi styrkur þvagefnis, súkrósa (10%) og eimaðs vatns (H2O) tjóðrað við lárétta, snúna kvenkyns blóð (fyrir hönd sem snýst frjálst). , var heildarvegalengd og fjöldi flugferða á klukkustund fyrir hvert fæði yfir 24 klukkustunda tímabil skráð (dökkt: grátt; ljós: hvítt).Meðalfjarlægð og meðalfjöldi lota eru sýnd hægra megin á grafi yfir dægurvirkni.Villustikur tákna staðalvillu meðaltalsins.Tölfræðileg greining sjá texta
Almennt fylgdi heildarflugvirkni kvenna sem leita að hýs svipuðu mynstri og flugfjarlægð yfir 24 klukkustunda tímabil. Meðalflugfjarlægð hafði marktæk áhrif á inntöku fæðis (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), og hýsilleitandi kvendýr innbyrtu 72 klst. moskítóflugur sem fóðruðust flugu lengur en ferskar (p = 0,022) og 24 klst. gamalt þvag (p = 0,022) moskítóflugur. Öfugt við flugvirknimynstrið sem lýst er með þvagfæði, sýndu þvagefnafóðraðar hýsingarleitar konur viðvarandi flugvirkni yfir 24 klst. að leita að kvendýrum sem fengu þvagefni jókst marktækt meðalflugfjarlægð eftir frásognum styrk (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Konur sem sóttu um gestgjafa sem fengu hvaða styrk sem var af þvagefni flugu lengur en konur sem fengu annað hvort vatn eða súkrósa (p < 0,03).
Heildarflugvirkni blóðsogandi moskítóflugna var stöðug og hélst í 24 klukkustundir á öllum fæði, með aukinni þvagvirkni á seinni hluta myrkratímabilsins hjá konum sem fengu vatn sem og konur sem fengu ferskar og 24 klst. gamlar (mynd 3). Á meðan þvagfæði hafði marktæk áhrif á meðalflugfjarlægð hjá konum sem fengu blóðfóðrun (F = 38(5, 0a), deyja = 38(5, 0a). t gerði það ekki (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .með öðru þvagi og viðmiðunarfæði (fersku, p = 0,0091; 72 klst., p = 0,0022; 168 klst., p = 0,001; súkrósa, p = 0,02017, p.
Áhrif þvags og þvagefnisfóðrunar á æxlunarbreytur voru metin í eggjavörpum (Mynd 4A) og voru rannsökuð með hliðsjón af fjölda eggja sem hverja kvendýr verpti, stærð eggja og nýklæddum lirfum á fyrsta stigi. 4B). Konur fengu sólarhringsþvag, blóðmjöl varpaði marktækt fleiri eggjum en kvendýr sem fengu annað þvagfæði og voru svipaðar þeim sem fengu súkrósa (Mynd 4B). Sömuleiðis var stærð eggja sem þvagfóðruð kvendýr voru breytileg eftir mataræði (F(5, 209) = 128.0 r,-0,-0,-128,-0rse og sucrose. fóðraðar kvendýr sem verpa marktækt stærri eggjum en vatnsfóðraðar kvenfuglar, en egg kvendýra sem fengu 168 klst af þvagi voru marktækt minni (mynd 4C). Auk þess hafði þvagfæði marktæk áhrif á lirfustærð (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), með marktækt magn af eggjum - 2 - 2 stærra eggjum og gamlar þvagfóðraðar kvendýr en úr eggjum sem verpt eru úr egglirfum. Vatnsfóðraðar og 168 klst. þvagfóðraðar konur (Mynd 4D).
Æxlunarárangur kvenkyns Anopheles arabinis sem nærðist á kúaþvagi og þvagefni. Blóðfóðraðar kvenflugur voru fóðraðar sem samanstóð af fersku og öldruðu kúaþvagi, ýmsum styrkum þvagefnis, súkrósa (10%) og eimuðu vatni (H2O) í 48 klukkustundir áður en þær voru settar í lífmælingar (Egg-stærð A, 8 klst.), eggstærð (Egg stærð, B). , F) og stærð lirfa (D, G) voru marktæk fyrir áhrifum af mataræðinu (kúaþvagi: BD; þvagefni: EG). Meðaltal fyrir hverja færibreytu sem mæld var með mismunandi bókstafanöfnum var marktækt frábrugðin hvert öðru (einstefnu ANOVA með Tukey's post hoc greiningu; p < 0,05). Villustikur tákna staðalvillu meðaltalsins.
Sem aðal köfnunarefnisþátturinn í þvagi hafði þvagefni, þegar það var gefið sem fæði til blóðfóðraðra kvendýra, marktæk áhrif á æxlunarbreytur í öllum rannsóknum. Fjöldi eggja sem kvendýr sem voru fóðruð með þvagefni, eftir blóðmáltíð, fer eftir þvagefnisstyrk (F(11, 360) = 4,69; p < 0,00 kvenkyns styrkur á milli 1 M µa og 1M µa, 3M µa. 34 mM verptu fleiri eggjum (Mynd 4E). Konur fóðraðar á þvagefnisstyrk sem er 134 µM eða hærri verpa stærri eggjum en kvendýr sem eru fóðraðar á vatni (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; Mynd 4F), og lirfuþéttni af (31) móðir, þó þær séu fyrir áhrifum af (31) mæðrum (31) ; p < 0,0001) var breytilegri (mynd 4G).
Almennt aðdráttarafl að hýsilsleitandi nautgripaþvagi höfuðrými rokgjarnra útdrátta. Arabiensis metinn í glerrörslyktarmælinum (mynd 5A) hafði marktæk áhrif á þvagaldur (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; mynd 5B). Post hoctal greining olli marktækri lykt í 24 klst. við allar aðrar meðferðir (72 klst.: p = 0,0060, 168 klst.: p = 0,012, pentan: p = 0,00070), Nema lykt af fersku þvagi (p = 0,13; mynd 5B). Þó að heildaraðdráttarafl blóðsogandi moskítóflugna hafi verið óveruleg þvaglykt = 7,2 pg = 7,0,2 (χ, 8,2). .067; mynd 5C), reyndust þessar kvendýr vera marktækt meira aðlaðandi fyrir rokgjörn útdrætti í höfuðrými samanborið við 72 klukkustunda gamalt þvag samanborið við viðmið (p = 0,0066; mynd 5C).
Hegðunarviðbrögð við náttúrulegum og tilbúnum kúaþvaglykt í leit að hýsil og blóðfóðruðum Anopheles arabianus. Skýringarmynd glerrörslyktarmælis (A). Aðdráttur rokgjarnra útdrátta í höfuðrými frá fersku og öldruðu kúaþvagi í hýsil (B) og blóðsogandi (C) moskítóflugur. Finndu ferskar moskítóflugur, 2 og Drottins viðbragð. Sýnt er -klst (E), 72 klst (F) og 168 klst (G) gamalt kúaþvag. Rafeindaloftnetsskynjun (EAD) spor sýna spennubreytingar sem svar við lífvirkum efnasamböndum í höfuðrýminu sem skolað er út úr gasskiljun og greint með logajónunarskynjara (FID). s (µg h-1) af líffræðilega virku efnasamböndunum eru sýnd.Ein stjarna (*) gefur til kynna stöðuga svörun með lágum amplitude.Tvöfaldar stjörnur (**) gefa til kynna óafritanleg svör.Finndu hýsilinn (H) og blóðsogandi (I) An.arabiensis hefur mismunandi skírskotun til tilbúna blanda af ferskum og aldraðri lykt af mýflugum, mismunandi nöfnum af þvagi og öldruðum kýr. hvert annað (einstefnu ANOVA með því að nota Tukey's post hoc greiningu;p < 0,05). Villustikur tákna staðalvillu á kvarðanum
Kvenkyns Ann.arabiensis, 72 klst. og 120 klst. eftir blóðmáltíð, meðan á hrygningu stóð, var ekki sýnt fram á val fyrir rokgjörnu útdrætti úr fersku og öldruðu kúaþvagi samanborið við pentanviðmið (χ2 = 3,07, p > 0,05; Viðbótarskrá 1: mynd S1).
Fyrir Ann.arabiensis kvenkyns, GC-EAD og GC-MS greiningar greindust átta, sex, þrjú og þrjú lífvirk efnasambönd (Mynd 5D-G). Þó að munur hafi komið fram á fjölda efnasambanda sem framkallaði raflífeðlisfræðileg svörun, voru flest þessara efnasambanda til staðar í hverju rokgjörnu útdrætti í höfuðrýminu sem safnað var úr fersku og öldruðu kvenkyns efnasambandi, fyrir hvert kvenkyns efnasamband, sem framleitt var hér að ofan. viðmiðunarmörkin voru tekin með í frekari greiningum.
Heildar rokgjörn losunarhraði lífvirkra efnasambanda í höfuðrýmissafninu jókst úr 29 µg h-1 í fersku þvagi í 242 µg h-1 í 168 klst. öldruðu þvagi, aðallega vegna p-kresóls og m-formaldehýðs Fenól eykst sem og fenól. Aftur á móti minnkar losunarhraði 1-sýklónal efnasambanda, eins og 1-sýklónal efnasambanda, eins og 1-sýklónal efnasambanda. aldur, sem hafði fylgni við minnkun á merki styrkleika (gnægð) í litskiljun (Mynd 5D)-G vinstri spjaldið) og lífeðlisfræðileg viðbrögð við þessum efnasamböndum (Mynd 5D-G hægri spjaldið).
Á heildina litið hafði tilbúna blandan svipað náttúrulegt hlutfall af lífvirkum efnasamböndum sem greindust í rokgjörnum útdrætti úr fersku og öldruðu þvagi höfuðrými (mynd 5D-G) og virtist ekki vekja marktæka aðdráttarafl í leitinni að hýsil (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; mynd. = 0,30; mynd 5I). Hins vegar sýndi post hoc parslegur samanburður milli meðferða að moskítóflugur sem leituðu hýsils voru marktækt aðlaðandi fyrir tilbúna blöndu 24 klst.
Til að meta hlutverk einstakra efnisþátta í tilbúnum blöndum af 24 klst öldruðu þvagi, voru sex frádráttarblöndur metnar á móti heilum blöndum í Y-túpuprófinu, þar sem einstök efnasambönd voru fjarlægð. Fyrir hýsilleitar moskítóflugur hafði það að draga einstök efnasambönd frá heildarblöndunni marktæk áhrif á hegðunarsvörun (χ2 = 19.60, mynd = 19,60; 2A), voru allar frádráttarblöndur meira aðlaðandi en Minni en að fullu blandað. Aftur á móti hafði fjarlæging einstakra efnasambanda úr fullgerfðu blöndunni ekki áhrif á hegðunarviðbrögð blóðsogandi moskítóflugna (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), að undanskildum decanal stigi, sem leiddi til lægra decanal stigs, samanborið við 20 viðbótarblanda: 2. B).
Í þorpi þar sem malaríu er landlægt í Eþíópíu var virkni tilbúinnar blöndu af 24 tíma kúaþvagi metin til að laða að moskítóflugur við akuraðstæður í tíu nætur (mynd 6A). Alls voru 4.861 moskítóflugur fangaðar og auðkenndar, þar af 45,7% anthropusis, 5% sykursýki og 5% mýfluga. .4% voru Culex spp.(Viðbótarskrá 1: Tafla S1). Anopheles arabinis er eini meðlimurinn í An.Gambian tegundasamstæðu sem greindur var með PCR greiningu. Að meðaltali voru 320 moskítóflugur fangaðar á nóttu, á þeim tíma veiddu gildrur með tilbúnum blöndubeitu fleiri moskítóflugur en paraðar gildrur án blöndu, (χ.06 pörar gildrur án blöndu, (χ.06 pörar). ) .Vildrur sem ekki eru beitnar voru settar á hverja af fimm samanburðarnóttunum í upphafi, miðri og lok rannsóknarinnar. Svipaður fjöldi moskítóflugna var fangaður í hverju gildrupari, sem gefur til kynna að engin hlutdrægni sé á milli húsa (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0,05 týnur sem voru í samanburði við rannsóknina og engin moskítófjöldi. sem var veiddur í gildrurnar sem innihéldu tilbúnu blönduna jókst marktækt: hýsilleit (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), nýleg blóðgjöf (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) og meðganga (χ22(0, 0,28; 0, 0, 0, 0, 0, 0,28;Viðbótarskrá 1: Tafla S1). Þetta endurspeglast einnig í heildarfjölda moskítóflugna sem teknar hafa verið: hýsil leitar > blóðsog > ólétt > hálffríð > karlkyns.
Vettvangsmat á virkni sólarhrings tilbúnar kúaþvaglyktarblöndu. Vetrartilraunir voru gerðar í suður-miðhluta Eþíópíu (kort), nálægt bænum Maki (innskot), með því að nota Centers for Disease Control (CDC) ljósgildru (hægri) í pöruðum húsum, með latneskri ferningahönnun (loftmynd sem lokkar kvenkyns geisladiska) (Aearial-raphelt-lykt af kvenkyns lokkara). besques (B), en ekki Anopheles farroes (C), á annan hátt, lífeðlisfræðileg ástand háð áhrif. Auk þess fanguðu þessar gildrur marktækt aukinn fjölda hýsils Culex moskítóflugna.(D) Samanborið við stjórn. Stöngin til vinstri tákna meðalvalsvísitölu moskítóflugna sem eru veiddar í pörum af lyktargildru = baren0 beita (opna lyktargildru) og (N) vísitölu í pörum af stjórngildrum (opnar; N = 5).).Stjörnumerki gefa til kynna tölfræðilega marktækni (*p = 0,01 og ***p < 0,0001)
Tegundirnar þrjár voru fangaðar á mismunandi hátt í gildrum sem innihéldu tilbúnar blöndur. Leitað er að hýsil (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), blóðfóðrun (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) og meðgöngu (χ182,01) = 182,01, 0,01) = χ1,01) = χ1,01) .arabiensis var föst í gildrunni sem sleppti tilbúnu blöndunni (Mynd 6B), en magn An var ekki mismunandi. Pharoensis í mismunandi lífeðlisfræðilegu ástandi fannst (Mynd 6C). Fyrir Culex fannst aðeins marktæk aukning á fjölda moskítóflugna sem leituðu hýsils í gildrum sem voru beitaðar með tilbúnu blöndunni, χ.09 (13129) (χ.0; .6D), samanborið við stjórngildrur.
Hýsilbeitagildrur staðsettar utan hugsanlegra hýsils milli ræktunarstaða og dreifbýlissamfélaga í Eþíópíu voru notaðar til að meta hvort malaríuflugur noti kúaþvaglykt sem hýsilhugmynd. Í fjarveru hýsilbendinga, hita, og með eða án tilvistar af kúaþvaglykt, voru engar moskítóflugur fangaðar (Fig. Aría moskítóflugur laðast að og fangaðar, að vísu í litlu magni, óháð þvagaldur (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Viðbótarskrá 1: Mynd S3). Aftur á móti fanguðu vatnsstýringar ekki malaríu moskítóflugur við háan hita (Viðbótarskrá 1: Mynd S3).
Malaríu moskítóflugur eignast og dreifa efnasamböndum sem innihalda köfnunarefni með jöfnunarfóðrun á kúaþvagi (þ.e. pollum) til að efla lífssögueiginleika, svipað og önnur skordýr [2, 4, 24, 25, 26]. Kúaþvag er auðfáanleg endurnýjanleg auðlind sem er nátengd við áningarstaði fyrir malaríu og gróðursetur, t.d. Kvenkyns moskítóflugur staðsetja þessa auðlind með lykt og geta stjórnað upptöku köfnunarefnisefna í þvagi, þar á meðal þvagefni, aðal köfnunarefnisþátturinn í þvagi [15, 16]. Það fer eftir lífeðlisfræðilegu ástandi kvenflugunnar, næringarefnum í þvagi er úthlutað til að auka lifunarvirkni hýsils og lifunarfluga, auk lifunarvirkni kvenkyns moskítóflugna. einkenni blóðfóðraðra einstaklinga í fyrstu kynkirtlahringrásinni. Þess vegna gegnir þvagblöndun mikilvægu næringarhlutverki fyrir malaríuferjur sem eru lokaðar eins og vannærðir fullorðnir [8], þar sem það veitir kvenkyns moskítóflugum getu til að eignast mikilvæg köfnunarefnissambönd með því að taka þátt í áhættulítilli fóðrun. getu. Ennfremur gæti þessi hegðun verið skotmark framtíðaráætlana um stjórnun ferjunnar.