Þakka þér fyrir að heimsækja Nature.com. Vafraútgáfan sem þú notar hefur takmarkaðan CSS-stuðning. Til að fá sem bestu upplifun mælum við með að þú notir uppfærðan vafra (eða slökkvir á samhæfingarstillingu í Internet Explorer). Á meðan, til að tryggja áframhaldandi stuðning, munum við birta síðuna án stíla og JavaScript.
Óstjórnleg blæðing er ein helsta dánarorsök. Að ná skjótum blæðingum tryggir lifun einstaklingsins sem fyrsta hjálp í bardögum, umferðarslysum og aðgerðum til að draga úr dauðsföllum. Nanoporous trefjastyrkt samsett stoðgrind (NFRCS), sem er unnin úr einföldum blóðmyndandi filmuformandi samsetningu (HFFC) sem samfelldur fasi, getur virkjað og aukið blæðingu. Þróun NFRCS byggist á hönnun vængs drekaflugunnar. Vængjabygging drekaflugunnar samanstendur af þversum og langsum vængjum og vænghimnurnar eru tengdar saman til að viðhalda heilindum örbyggingarinnar. HFFC húðar yfirborð trefjanna jafnt með filmu af nanómetraþykkt og tengir handahófskennda dreifða bómullarþykkt (Ct) (dreifða fasa) til að mynda nanoporous uppbyggingu. Samsetning samfelldra og dreifðra fasa dregur úr kostnaði við vöruna um tífalt samanborið við vörur sem eru fáanlegar í verslunum. Breytt NFRCS (tampónar eða úlnliðsbönd) er hægt að nota í ýmsum lífeðlisfræðilegum tilgangi. Rannsóknir in vivo hafa leitt í ljós að þróað Cp NFRCS virkjar og eykur storknunarferlið á notkunarstað. NFRCS getur haft áhrif á örumhverfið og virkað á frumustigi vegna nanóholulaga uppbyggingar sinnar sem leiðir til betri sáragræðslu í útskornu sárslíkani.
Óstjórnleg blæðing í bardaga, aðgerðartíma og neyðarástandi getur verið alvarleg ógn við líf særðra1. Þessi ástand leiðir enn fremur til almennrar aukningar á útlægum æðaviðnámi, sem leiðir til blæðingarlosts. Viðeigandi ráðstafanir til að stjórna blæðingum meðan á aðgerð stendur og eftir hana eru taldar lífshættulegar2,3. Skemmdir á stórum æðum leiða til mikils blóðmissis, sem leiðir til dánartíðni ≤ 50% í bardaga og 31% meðan á aðgerð stendur1. Mikill blóðmissir leiðir til minnkunar á líkamsrúmmáli, sem dregur úr hjartastarfsemi. Aukning á heildarútlægum æðaviðnámi og stigvaxandi skerðing á örhringrás leiðir til súrefnisskorts í líffærakerfum. Blæðingarlost getur komið fram ef ástandið heldur áfram án árangursríkrar íhlutunar1,4,5. Aðrir fylgikvillar eru meðal annars framgangur ofkælingar og efnaskiptasýrublóðsýringar, sem og storknunartruflanir sem hindra storknunarferlið. Alvarlegt blæðingarlost tengist meiri hættu á dauða6,7,8. Í III. stigs (stigvaxandi) losti er blóðgjöf nauðsynleg fyrir lifun sjúklings meðan á sjúkdómum og dánartíðni stendur og eftir aðgerð. Til að vinna bug á öllum ofangreindum lífshættulegum aðstæðum höfum við þróað nanóholótt trefjastyrkt samsett stoðgrind (NFRCS) sem notar lágmarks fjölliðuþéttni (0,5%) með því að nota blöndu af vatnsleysanlegum blóðstöðvandi fjölliðum.
Með því að nota trefjastyrkingu er hægt að þróa hagkvæmar vörur. Handahófskenndu trefjarnar líkjast uppbyggingu vængs drekaflugu, en eru jafnvægar með láréttum og lóðréttum röndum á vængjunum. Þver- og langsæðar vængsins tengjast vænghimnunni (Mynd 1). NFRCS er úr styrktu Ct sem uppbyggingarkerfi með betri líkamlegum og vélrænum styrk (Mynd 1). Vegna hagkvæmni og handverks kjósa skurðlæknar að nota bómullarþráðamæla (Ct) við aðgerðir og umbúðir. Þess vegna, í ljósi margvíslegra ávinnings þess, þar á meðal > 90% kristallaðs sellulósa (sem eykur blóðstöðvandi virkni), var Ct notað sem beinagrindarkerfi NFRCS9,10. Þess vegna, í ljósi margvíslegra ávinnings þess, þar á meðal > 90% kristallaðs sellulósa (sem eykur blóðstöðvandi virkni), var Ct notað sem beinagrindarkerfi NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целюческой целюлозвы гемостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Þess vegna, miðað við marga kosti þess, þar á meðal >90% kristallað sellulósa (sem tekur þátt í aukinni blóðstöðvandi virkni), var Ct notað sem NFRCS beinagrindarkerfi9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% 的结晶纤维素（有助于增强歼行t被用作NFRCS9,10 的骨架系统。因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%Þess vegna, miðað við marga kosti þess, þar á meðal yfir 90% kristallað sellulósa (hjálpar til við að auka blóðstöðvandi virkni), var Ct notað sem uppbygging fyrir NFRCS9,10.Ct var yfirborðshúðað (nanóþykk himnamyndun sást) og tengt saman við blóðstöðvandi himnumyndandi efnasamband (HFFC). HFFC virkar eins og matrigel og heldur handahófskenndu Ct saman. Þróuð hönnun flytur spennu innan dreifða fasans (styrkingartrefjar). Það er erfitt að fá nanóholóttar byggingar með góðum vélrænum styrk með því að nota lágmarks fjölliðuþéttni. Þar að auki er ekki auðvelt að aðlaga mismunandi mót fyrir mismunandi lífeðlisfræðilegar notkunarmöguleika.
Myndin sýnir skýringarmynd af hönnun NFRCS byggða á vængbyggingu drekaflugu (A). Þessi mynd sýnir samanburðarlíkingu á vængbyggingu drekaflugu (skurðæðar og langsæðar vængsins eru tengdar saman) og smásjármynd af þversniðsmynd af Cp NFRCS (B). Skýringarmynd af NFRCS.
NFRC-samsetningar voru þróaðar með því að nota HFFC sem samfelldan fasa til að bregðast við ofangreindum takmörkunum. HFFC er samsett úr ýmsum filmumyndandi blóðstöðvandi fjölliðum, þar á meðal kítósan (sem aðal blóðstöðvandi fjölliðan) með metýlsellulósa (MC), hýdroxýprópýlmetýlsellulósa (HPMC 50 cp) og pólývínýlalkóhóli (PVA) (125 kDa) sem stuðningsfjölliðu sem stuðlar að blóðtappamyndun. Viðbót pólývínýlpyrrolidíns K30 (PVP K30) batnaði rakagleypni NFRCS. Pólýetýlen glýkól 400 (PEG 400) var bætt við til að bæta þvertengingu fjölliða í bundnum fjölliðublöndum. Þrjár mismunandi blóðstöðvandi samsetningar HFFC (Cm HFFC, Ch HFFC og Cp HFFC), þ.e. kítósan með MC (Cm), kítósan með HPMC (Ch) og kítósan með PVA (Cp), voru notaðar á Ct. Ýmsar in vitro og in vivo rannsóknir á einkennum hafa staðfest blóðstöðvandi og sárgræðandi virkni NFRCS. Samsett efni sem NFRCS býður upp á er hægt að nota til að sérsníða ýmsar gerðir af vinnupöllum til að mæta sérstökum þörfum.
Að auki er hægt að breyta NFRCS sem sárabindi eða rúllu til að hylja allt meiðslasvæðið á neðri útlimum og öðrum líkamshlutum. Sérstaklega fyrir meiðsli á útlimum í bardaga er hægt að breyta hönnun NFRCS í hálfan handlegg eða allan fótlegg (viðbótarmynd S11). Hægt er að búa til NFRCS í úlnliðsband með vefjalími, sem hægt er að nota til að stöðva blæðingu frá alvarlegum sjálfsvígsáverkum á úlnlið. Meginmarkmið okkar er að þróa NFRCS með eins litlu magni af fjölliðu og mögulegt er sem hægt er að afhenda stórum hópi (undir fátæktarmörkum) og sem hægt er að setja í skyndihjálparkassa. NFRCS er einfalt, skilvirkt og hagkvæmt í hönnun, það gagnast heimamönnum og getur haft hnattræn áhrif.
Kítósan (mólþungi 80 kDa) og amarant voru keypt frá Merck á Indlandi. Hýdroxýprópýl metýlsellulósi 50 Cp, pólýetýlen glýkól 400 og metýlsellulósi voru keypt frá Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbai. Pólývínýlalkóhól (mólþungi 125 kDa) (87-90% vatnsrofið) var keypt frá National Chemicals, Gujarat. Pólývínýlpyrrolidín K30 var keypt frá Molychem, Mumbai, og dauðhreinsuð sýni voru keypt frá Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, með Milli Q vatni (Direct-Q3 vatnshreinsunarkerfi, Merck, Indlandi) sem burðarefni.
NFRCS var þróað með frostþurrkunaraðferð11,12. Allar HFFC samsetningar (Tafla 1) voru útbúnar með vélrænum hrærivél. Útbúið 0,5% lausn af kítósani með 1% ediksýru í vatni með stöðugri hræringu við 800 snúninga á mínútu á vélrænum hrærivél. Nákvæmri þyngd fjölliðunnar sem gefin er upp í töflu 1 var bætt við kítósanlausnina og hrært þar til tær fjölliðulausn fékkst. PVP K30 og PEG 400 voru bætt við blönduna í þeim magni sem tilgreint er í töflu 1 og hrært var áfram þar til tær seigfljótandi fjölliðulausn fékkst. Fjölliðulausnin sem myndaðist var hljóðbeitt í 60 mínútur til að fjarlægja loftbólur úr fjölliðublöndunni. Eins og sést á viðbótarmynd S1(b) var Ct jafnt dreift í hverjum holi á 6 hola plötu (móti) sem bætt var við 5 ml af HFFC.
Sex hols plötunni var hljóðbeitt í 60 mínútur til að ná fram jafnri vætingu og dreifingu HFFC í Ct netinu. Síðan var sex hols plötunni fryst við -20°C í 8-12 klukkustundir. Frystiplöturnar voru frostþurrkaðar í 48 klukkustundir til að fá ýmsar samsetningar af NFRCS. Sama aðferð er notuð til að framleiða mismunandi form og uppbyggingu, svo sem tappa eða sívalningslaga tappa, eða hvaða aðra form sem er fyrir mismunandi notkun.
Nákvæmlega vegið kítósan (80 kDa) (3%) er leyst upp í 1% ediksýru með segulhrærivél. Í kítósanlausnina sem myndaðist var bætt 1% PEG 400 og hrært í 30 mínútur. Hellið lausninni sem myndaðist í ferkantað eða rétthyrnt ílát og frystið við -80°C í 12 klukkustundir. Frosin sýni voru frostþurrkuð í 48 klukkustundir til að fá gegndræpt Cs13.
Þróaða NFRCS var rannsakað með tilraunum með Fourier umbreytingar innrauða litrófsgreiningu (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tókýó, Japan) til að staðfesta efnasamrýmanleika kítósans við önnur fjölliður14,15. FTIR litróf (breidd litrófsbilsins frá 400 til 4000 cm-1) allra prófuðu sýnanna voru fengin með því að framkvæma 32 skannanir.
Blóðupptökuhraði (BAR) allra samsetninga var metinn með aðferðinni sem lýst er af Chen o.fl. 16 með smávægilegum breytingum. Þróuðu NFRK-efnin úr öllum samsetningum voru þurrkuð í lofttæmisofni við 105°C yfir nótt til að fjarlægja leifar af leysi. 30 mg af NFRCS (upphafsþyngd sýnis – W0) og 30 mg af Ct (jákvæð samanburðarþáttur) voru sett í aðskildar skálar sem innihéldu forblöndu af 3,8% natríumsítrati. Á fyrirfram ákveðnum tíma, þ.e. 5, 10, 20, 30, 40 og 60 sekúndum, voru NFRCS fjarlægð og yfirborð þeirra hreinsað af óuppsoguðu blóði með því að setja sýnin á Ct í 30 sekúndur. Lokaþyngd blóðs sem NFRCS 16 frásogaði var tekin með í reikninginn (W1) á hverjum tímapunkti. Reiknaðu BAR-prósentuna með eftirfarandi formúlu:
Blóðstorknunartími (BCT) var ákvarðaður samkvæmt grein Wang o.fl. 17. Tíminn sem það tók heilblóð (rottublóð blandað með 3,8% natríumsítrati) að storkna í viðurvist NFRCS var reiknaður sem BCT sýnisins. Ýmsir NFRCS þættir (30 mg) voru settir í 10 ml skrúftappaglös og ræktaðir við 37°C. Blóð (0,5 ml) var bætt í glasið og 0,3 ml af 0,2 M CaCl2 var bætt við til að virkja blóðstorknun. Að lokum er glasinu snúið á 15 sekúndna fresti (allt að 180°) þar til fastur storknunartími myndast. BCT sýnisins er áætlaður með fjölda snúninga á blóðinu 17,18. Byggt á BCT voru tvær bestu samsetningar úr NFRCS Cm, Ch og Cp valdar fyrir frekari greiningarrannsóknir.
BCT (Bacterial Thrombosis Storclear Clear NFRCS) og Cp NFRCS samsetninga var ákvarðað með því að nota aðferðina sem lýst er af Li o.fl. 19. Setjið 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS og Cs (jákvæð samanburðarlausn) í aðskildar Petri skálar (37°C). Blóð sem innihélt 3,8% natríumsítrat var blandað saman við 0,2 M CaCl2 í hlutfallinu 10:1 til að hefja blóðstorknunarferlið. 20 µl af 0,2 M CaCl2 rottublóðsblöndu voru sett á yfirborð sýnisins og sett í tóma Petri skál. Samanburðarlausnin var blóð sem hellt var í tómar Petri skálar án Ct. Á föstum millibilum, 0, 3 og 5 mínútur, er storknun stöðvuð með því að bæta 10 ml af afjónuðu (DI) vatni við sýnið sem inniheldur skálina án þess að raska storknuninni. Óstorknuð rauð blóðkorn gangast undir blóðrauðasundrun í viðurvist afjónaðs vatns og losa blóðrauða. Blóðrauði á mismunandi tímapunktum (HA(t)) var mælt við 540 nm (λmax blóðrauði) með UV-Vis litrófsmæli. Algjör upptaka blóðrauða (AH(0)) á 0 mínútum af 20 µl af blóði í 10 ml af afjónuðu vatni var tekin sem viðmiðunarstaðall. Hlutfallsleg upptaka blóðrauða (RHA) í storknuðu blóði var reiknuð út frá hlutfallinu HA(t)/HA(0) með því að nota sama blóðskammt.
Með áferðargreiningartæki (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, Bandaríkjunum) voru viðloðunareiginleikar NFRK við skaddaða vefi ákvarðaðir. Þrýstið sívalningslaga skál með opnum botni að innanverðu svínahúðarinnar (án fitulagsins). Sýni (Ch NFRCS og Cp NFRCS) voru sett með stút í sívalningslaga mót til að skapa viðloðun við húð svínsins. Eftir 3 mínútna ræktun við stofuhita (RT) (25°C) var viðloðunarstyrkur NFRCS skráður með stöðugum hraða, 0,5 mm/sek.
Helsta einkenni skurðlækningaþéttiefna er að auka blóðstorknun og draga úr blóðmissi. Tapslaus storknun í NFRCS var metin með áður birtri aðferð með smávægilegum breytingum 19. Búið til örskilvindurör (2 ml) (innra þvermál 10 mm) með 8 × 5 mm2 gati á annarri hlið skilvindurörsins (sem táknar opið sár). NFRCS er notað til að loka opnuninni og límband er notað til að innsigla ytri brúnirnar. Bætið 20 µl af 0,2 M CaCl2 út í örskilvindurörið sem inniheldur 3,8% natríumsítrat forblönduna. Eftir 10 mínútur voru örskilvindurörin fjarlægð úr skálunum og aukning á massa skálanna var ákvörðuð vegna blóðflæðis úr NFRK (n = 3). Blóðmissir Ch NFRCS og Cp NFRCS voru bornir saman við Cs.
Rakheilleiki NFRCS var ákvarðaður út frá aðferð sem Mishra og Chaudhary21 lýstu með minniháttar breytingum. Setjið NFRCS í 100 ml Erlenmeyer-flösku með 50 ml af vatni og hvirflið í 60 sekúndur án þess að mynda topp. Sjónræn skoðun og forgangsröðun sýna með tilliti til efnislegs heilleika byggt á söfnun.
Bindingarstyrkur HFFC við Ct var rannsakaður með áður birtum aðferðum með minniháttar breytingum. Heilleiki yfirborðshúðar var metinn með því að útsetja NFRK fyrir hljóðbylgjum (ytri áreiti) í viðurvist milliQ vatns (Ct). Þróuðu NFRCS Ch NFRCS og Cp NFRCS voru sett í bikarglas fyllt með vatni og hljóðbeitt í 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 og 30 mínútur, talið í sömu röð. Eftir þurrkun var prósentumunurinn á upphafs- og lokaþyngd NFRCS notaður til að reikna út prósentu efnistaps (HFFC). In vitro BCT studdi enn frekar bindingarstyrk eða tap yfirborðsefna. Skilvirkni HFFC bindingar við Ct veitir blóðstorknun og teygjanlega húð á yfirborði Ct22.
Einsleitni þróaða NFRCS var ákvörðuð með BCT sýna (30 mg) sem tekin voru af handahófskenndum almennum stöðum á NFRCS. Fylgið áðurnefndri BCT aðferð til að ákvarða samræmi NFRCS. Nálægð milli allra fimm sýnanna tryggir einsleita yfirborðsþekja og HFFC útfellingu í Ct möskvanum.
Nafnlægt snertiflatarmál blóðs (NBCA) var ákvarðað eins og áður hefur verið greint frá með nokkrum breytingum. Blóðið var storknað með því að klemma 20 µl af blóði á milli tveggja yfirborða Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS og Cs. Eftir 1 klukkustund voru hlutar stentsins aðskildir og flatarmál storknunarinnar mælt handvirkt. Meðalgildi þriggja endurtekninga var talið NBCA NFRCS19.
Greining á kraftmikilli gufusogi (DVS) var notuð til að meta virkni NFRCS til að taka upp vatn úr ytra umhverfi eða frá meiðslustað sem veldur storknun. DVS metur eða skráir gufuupptöku og -tap í sýni með þyngdarmælingu með því að nota ofurnæma vog með massaupplausn upp á ±0,1 µg. Hlutþrýstingur (rakastig) er myndaður með rafrænum massaflæðisstýri í kringum sýnið með því að blanda saman mettuðum og þurrum burðargasi. Samkvæmt leiðbeiningum Evrópsku lyfjaskrárinnar voru sýnin flokkuð í fjóra flokka (0–0,012% w/w - ekki rakadræg, 0,2–2% w/w lítillega rakadræg, 2–15% miðlungi rakadræg og > 15% mjög rakadræg)23, byggt á hlutfalli rakaupptöku sýnanna. Samkvæmt leiðbeiningum Evrópsku lyfjaskrárinnar voru sýnin flokkuð í fjóra flokka (0–0,012% w/w - ekki rakadræg, 0,2–2% w/w lítillega rakadræg, 2–15% miðlungi rakadræg og > 15% mjög rakadræg)23, byggt á hlutfalli rakaupptöku sýnanna.Í samræmi við ráðleggingar Evrópsku lyfjaskrárinnar voru sýnin skipt í fjóra flokka (0–0,012% w/w – ekki rakadrægt, 0,2–2% w/w lítillega rakadrægt, 2–fimmtán%), allt eftir hlutfalli raka frásogs sýnanna.% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % miðlungi rakadrepandi og > 15% mjög rakadrepandi)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（0-0,012% w/w/w非吸湿性、0,2-2% w/w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23。根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为刱为 分为刱为 刱为 ,0＆为. W/w- 吸湿 性 、 、 、 、 0,2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15 %非常吸湿）23㹿）Í samræmi við ráðleggingar Evrópsku lyfjaskrárinnar eru sýni skipt í 4 flokka eftir því hversu mikið raka sýnið frásogar (0-0,012% miðað við þyngd – ekki rakadrepandi, 0,2-2% miðað við þyngd lítillega rakadrepandi, 2-15% miðað við þyngd).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % miðlungi rakadrepandi, > 15% mjög rakadrepandi) 23.Rakanýtni NFCS X NFCS og TsN NFCS var ákvörðuð með greiningartæki DVS TA TGA Q5000 SA. Í þessu ferli var keyrslutími, rakastig (RH) og rauntímaþyngd sýnisins við 25°C24 mæld. Rakainnihald er reiknað með nákvæmri NFRCS massagreiningu með eftirfarandi jöfnu:
MC er rakastig í geislavirku efni (NFRCS). m1 – þurrþyngd NSAID lyfja. m2 er massi NFRCS í rauntíma við tiltekið RH.
Heildaryfirborðsflatarmálið var áætlað með köfnunarefnisadsorpsjónstilraun með fljótandi köfnunarefni eftir að sýnin höfðu verið tæmd við 25 °C í 10 klst. (< 7 × 10–3 Torr). Heildaryfirborðsflatarmálið var áætlað með köfnunarefnisadsorpsjónstilraun með fljótandi köfnunarefni eftir að sýnin höfðu verið tæmd við 25 °C í 10 klst. (< 7 × 10–3 Torr). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента á tækjabúnaði азота. образцов при 25 °С в течение 10 ч (< 7 × 10–3 Торр). Heildaryfirborðsflatarmálið var áætlað með tilraun með köfnunarefnisadsorpsjón með fljótandi köfnunarefni eftir að sýnin höfðu verið tæmd við 25°C í 10 klst. (< 7 × 10–3 Torr).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计怢积駯逢硝Um 25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидким азото образцов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). Heildaryfirborðsflatarmálið var áætlað með tilraunum með köfnunarefnisadsorpsjón með fljótandi köfnunarefni eftir að sýnin höfðu verið tæmd í 10 klukkustundir við 25°C (< 7 x 10-3 torr).Heildaryfirborðsflatarmál, porumagn og NFRCS porustærð voru ákvörðuð með Quantachrome frá NOVA 1000e í Austurríki og RS 232 hugbúnaði.
Útbúið 5% rauð blóðkorn (saltlausn sem þynningarefni) úr heilblóði. Færið síðan skammt af HFFC (0,25 ml) yfir í 96 hols plötu og 5% massa rauðra blóðkorna (0,1 ml). Ræktið blönduna við 37°C í 40 mínútur. Blöndu af rauðum blóðkornum og sermi var talin jákvæð viðmiðun og blanda af saltlausn og rauðum blóðkornum sem neikvæð viðmiðun. Blóðkekkjun var ákvörðuð samkvæmt Stajitzky kvarðanum. Tillögurnar að kvarðanum eru eftirfarandi: + + + + þétt kornótt efni; + + + sléttir botnpúðar með bogadregnum brúnum; + + sléttir botnpúðar með rifnum brúnum; + mjóir rauðir hringir í kringum brúnir sléttu púðanna; – (neikvæð) stakur rauður hnappur 12 í miðju neðri holsins.
Blóðsamrýmanleiki NFRCS var rannsakaður samkvæmt aðferð Alþjóðlegu staðlasamtakanna (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27. Þyngdarmælingaraðferðin sem Singh o.fl. lýstu. Minniháttar breytingar voru gerðar til að meta blóðtappamyndun í návist eða á yfirborði NFRCS. 500 mg af Cs, Ch NFRCS og Cp NFRCS voru ræktuð í fosfatlausn (PBS) í 24 klukkustundir við 37°C. Eftir 24 klukkustundir var PBS fjarlægt og NFRCS var meðhöndlað með 2 ml af blóði sem innihélt 3,8% natríumsítrat. Á yfirborð NFRCS var bætt 0,04 ml af 0,1 M CaCl2 við ræktuðu sýnin. Eftir 45 mínútur voru 5 ml af eimuðu vatni bætt við til að stöðva storknun. Storknað blóð á yfirborði NFRK var meðhöndlað með 36-38% formaldehýðlausn. Storknarnir sem festir voru með formaldehýði voru þurrkaðir og vigtaðir. Hlutfall blóðtappa var áætlað með því að reikna út þyngd glassins án blóðs og sýnis (neikvæð viðmiðun) og glassins með blóði (jákvæð viðmiðun).
Sem upphafsstaðfesting voru sýnin skoðuð undir ljósasmásjá til að skilja getu HFFC yfirborðshúðarinnar, samtengdra Ct og Ct netsins til að mynda svigrúm. Þunnir sneiðar af Ch og Cp úr NFRCS voru skornar með skalpelblaði. Sneiðin sem myndaðist var sett á gler, þakin hlífðargleri og brúnirnar festar með lími. Tilbúnu glærurnar voru skoðaðar undir ljósasmásjá og ljósmyndir teknar með mismunandi stækkun.
Útfelling fjölliða í Ct-netum var sýnd með flúrljómunarsmásjá byggða á aðferðinni sem lýst er af Rice o.fl.29. HFFC samsetningin sem notuð var í formúluna var blönduð við flúrljómandi litarefni (amarant) og NFRCS (Ch & Cp) voru útbúin samkvæmt aðferðinni sem áður hefur verið getið. HFFC samsetningin sem notuð var í formúluna var blönduð við flúrljómandi litarefni (amarant) og NFRCS (Ch & Cp) voru útbúin samkvæmt aðferðinni sem áður hefur verið getið.HFFC samsetningin sem notuð var í formúluna var blönduð við flúrljómandi litarefni (amarant) og NFRCS (Ch og Cp) var fengið samkvæmt áðurnefndri aðferð.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方提到的方戇 &NFR Cp）.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到的方提到的方戇 &NFR Cp）.HFFC samsetningin sem notuð var í formúlunni var blönduð við flúrljómandi litarefni (Amaranth) og fékk NFRCS (Ch og Cp), eins og áður hefur komið fram.Þunnir sneiðar af NFRK voru skornir úr sýnunum sem fengust, settir á glerþynnur og þaktir með hlífðarglerjum. Skoðið undirbúnu glærurnar undir flúrljómandi smásjá með grænum síu (310-380 nm). Myndir voru teknar með 4x stækkun til að skilja tengsl Ct og umfram fjölliðuútfellingu í Ct netinu.
Yfirborðslag NFRCS Ch og Cp var ákvarðað með lotukerfiskraftssmásjá (AFM) með afar skarpri TESP-kantilever í tapping ham: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taívan. Yfirborðshrjúfleiki var ákvarðaður með rót meðaltals fernings (RMS) með því að nota hugbúnað (Scanning Probe Image Processor). Ýmsar NFRCS staðsetningar voru birtar á þrívíddarmyndum til að athuga einsleitni yfirborðsins. Staðalfrávik stiga fyrir tiltekið svæði er skilgreint sem yfirborðshrjúfleiki. RMS jafnan var notuð til að magngreina yfirborðshrjúfleika NFRCS31.
FESEM-byggðar rannsóknir voru gerðar með FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tókýó, til að skilja yfirborðsformgerð Ch NFRCS og Cp NFRCS, sem sýndi betri BCT en Cm NFRCS. FESEM rannsóknin var framkvæmd samkvæmt aðferð sem lýst er af Zhao o.fl. 32 með minniháttar breytingum. NFRCS 20 til 30 mg Ch NFRCS og Cp NFRCS voru forblanduð með 20 µl af 3,8% natríumsítrati sem forblandað var með rottublóði. 20 µl af 0,2 M CaCl2 voru bætt við blóðmeðhöndluðu sýnin til að hefja storknun og sýnin voru ræktuð við stofuhita í 10 mínútur. Að auki voru umfram rauðkorn fjarlægð af yfirborði NFRCS með því að skola með saltvatni.
Síðari sýni voru meðhöndluð með 0,1% glútaraldehýði og síðan þurrkuð í heitum loftofni við 37°C til að fjarlægja raka. Þurrkuðu sýnin voru húðuð og greind 32. Aðrar myndir sem fengust við greininguna voru myndun blóðtappa á yfirborði einstakra bómullarþráða, útfelling fjölliða milli Ct, formgerð rauðra blóðkorna (lögun), heilleiki blóðtappa og formgerð rauðra blóðkorna í viðurvist NFRCS. Ómeðhöndluð NFRCS svæði og Ch og Cp meðhöndluð NFRCS svæði sem höfðu verið ræktuð með blóði voru skönnuð fyrir frumefnisjónir (natríum, kalíum, köfnunarefni, kalsíum, magnesíum, sink, kopar og selen) 33. Berið saman prósentu frumefnisjóna milli meðhöndluðra og ómeðhöndluðra sýna til að skilja uppsöfnun frumefnisjóna við myndun blóðtappa og einsleitni blóðtappa.
Þykkt Cp HFFC yfirborðshúðarinnar á Ct yfirborðinu var ákvörðuð með FESEM. Þversnið Cp NFRCS var skorið úr grindinni og sprautað. Sýnin sem mynduðust sprautuhúðun voru skoðuð með FESEM og þykkt yfirborðshúðarinnar mæld 34, 35, 36.
Röntgen-smásjármyndataka veitir þrívíddarmyndatöku án eyðileggingar í hárri upplausn og gerir þér kleift að rannsaka innri byggingarfyrirkomulag NFRK. Í smásjármyndatöku er notuð röntgengeisli sem fer í gegnum sýnið til að skrá staðbundna línulega deyfingarstuðul röntgengeislanna í sýninu, sem hjálpar til við að fá upplýsingar um formgerð. Innri staðsetning Ct í Cp NFRCS og blóðmeðhöndluðum Cp NFRCS var skoðuð með smásjármyndatöku til að skilja frásogsvirkni og blóðstorknun í viðurvist NFRCS37,38,39. Þrívíddarbygging blóðmeðhöndluðra og ómeðhöndluðra Cp NFRCS sýna var endurgerð með smásjármyndatöku (V|tome|x S240, Phoenix, Þýskalandi). Með því að nota VG STUDIO-MAX hugbúnaðarútgáfu 2.2 voru nokkrar röntgenmyndir teknar frá mismunandi sjónarhornum (helst 360° þekju) til að þróa þrívíddarmyndir fyrir NFRCS. Söfnuðu vörpunargögnunum var breytt í þrívíddar rúmmálsmyndir með samsvarandi einföldum 3D ScanIP Academic hugbúnaði.
Auk þess, til að skilja dreifingu blóðtappans, voru 20 µl af forblönduðu sítratblóði og 20 µl af 0,2 M CaCl2 bætt við NFRCS til að hefja blóðstorknun. Sýnin sem voru tilbúin eru látin harðna. Yfirborð NFRK var meðhöndlað með 0,5% glútaraldehýði og þurrkað í heitloftsofni við 30–40°C í 30 mínútur. Blóðtappinn sem myndaðist á NFRCS var skannaður, endurbyggður og þrívíddarmynd af blóðtappanum var sýnd.
Sýklalyfjaprófanir voru framkvæmdar á Cp NFRCS (best borið saman við Ch NFRCS) með því að nota áður lýsta aðferð með minniháttar breytingum. Sýklalyfjavirkni Cp NFRCS og Cp HFFC var ákvörðuð með því að nota þrjár mismunandi prófunarörverur [S. aureus (gram-jákvæðar bakteríur), E. coli (gram-neikvæðar bakteríur) og hvítar Candida (C. albicans)] sem uxu á agar í Petri-skálum í ræktunarofni. Sáð er 50 ml af þynntri bakteríuræktunarlausninni jafnt í styrk 105-106 CFU ml-1 á agarmiðilinn. Hellið miðlinum í Petri-skál og látið hann storkna. Brunnar voru gerðar á yfirborði agarplötunnar til að fylla með HFFC (3 brunnar fyrir HFFC og 1 fyrir neikvæða samanburðarhópinn). Bætið 200 µl af HFFC í 3 brunna og 200 µl af pH 7,4 PBS í 4. brunninn. Hinum megin við petriskálina skal setja 12 mm Cp NFRCS disk á storknaðan agar og væta með PBS (pH 7,4). Cíprófloxasín, ampisillín og flúkónazól töflur eru taldar vera viðmiðunarstaðlar fyrir Staphylococcus aureus, Escherichia coli og Candida albicans. Mælið hömlunarsvæðið handvirkt og takið stafræna mynd af hömlunarsvæðinu.
Eftir siðferðilegt samþykki stofnana var rannsóknin framkvæmd við læknaháskólann í Kasturba í Manipal, Karnataka, í suðurhluta Indlands. Siðanefnd læknaháskólans í Kasturba í Manipal, Karnataka, hefur endurskoðað og samþykkt tilraunaaðferðina fyrir in vitro TEG. Þátttakendur voru valdir úr sjálfboðaliðum blóðgjafa (á aldrinum 18 til 55 ára) úr blóðbanka sjúkrahússins. Að auki var upplýst samþykkiseyðublað fengið frá sjálfboðaliðunum fyrir söfnun blóðsýna. Náttúrlegt TEG (N-TEG) ​​var notað til að rannsaka áhrif Cp HFFC formúlunnar á heilblóð blandað með natríumsítrati. N-TEG er almennt þekkt fyrir hlutverk sitt í endurlífgun á heilsugæslustöð, sem skapar vandamál fyrir lækna vegna möguleika á klínískt marktækum töfum á niðurstöðum (venjubundnar storkuprófanir). N-TEG greining var framkvæmd með heilblóði. Upplýst samþykki og ítarleg sjúkrasaga var fengin frá öllum þátttakendum. Rannsóknin tók ekki til þátttakenda með blóðstöðvandi eða segamyndunarkvilla eins og meðgöngu/eftir fæðingu eða lifrarsjúkdóm. Þátttakendur sem tóku lyf sem hafa áhrif á storknunarferlið voru einnig útilokaðir frá rannsókninni. Grunnrannsóknir á rannsóknarstofu (hemóglóbín, próþrombíntími, virkjað þrómboplastín og blóðflagnafjöldi) voru framkvæmdar á öllum þátttakendum samkvæmt stöðluðum aðferðum. N-TEG ákvarðar seigju teygjanleika blóðtappa, upphaflega storknunarbyggingu, víxlverkun agna, styrkingu storknunar og lýsu storknunar. N-TEG greiningin veitir myndræn og töluleg gögn um sameiginleg áhrif nokkurra frumuþátta og plasma. N-TEG greining var framkvæmd á tveimur mismunandi rúmmálum af Cp HFFC (10 µl og 50 µl). Fyrir vikið var 1 ml af heilu blóði með sítrónusýru bætt við 10 µl af Cp HFFC. Bætið 1 ml (Cp HFFC + sítratblóð), 340 µl af blönduðu blóði við 20 µl af 0,2 M CaCl2 sem innihélt TEG skál. Því næst voru TEG-skálar settar í TEG® 5000, US til að mæla R, K, alfahorn, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% af blóðsýnum í viðurvist Cp HFFC41.
Siðanefnd dýra (IAEC), læknadeild Kasturba við háskólanám í Manipal, Manipal (IAEC/KMC/69/2020), yfirfarin og samþykkti rannsóknarferlið in vivo (IAEC/KMC/69/2020). Allar dýratilraunir voru framkvæmdar í samræmi við tilmæli nefndarinnar um eftirlit með dýratilraunum (CPCSEA). Allar in vivo NFRCS rannsóknir (2 × 2 cm2) voru framkvæmdar á kvenkyns Wistar rottum (sem vógu 200 til 250 g). Öll dýrin voru aðlöguð við 24-26°C hitastig og dýrin höfðu frjálsan aðgang að venjulegu fóðri og vatni að vild. Öllum dýrunum var skipt af handahófi í mismunandi hópa, hver hópur samanstóð af þremur dýrum. Allar rannsóknir voru framkvæmdar í samræmi við Dýrarannsóknir: Skýrsla um in vivo tilraunir 43. Fyrir rannsóknina voru dýrin svæfð með inndælingu í kviðarhol (ip) af blöndu af 20-50 mg af ketamíni (á hvert 1 kg líkamsþyngdar) og 2-10 mg af xýlazíni (á hvert 1 kg líkamsþyngdar). Eftir rannsóknina var blæðingarrúmmálið reiknað með því að meta mismuninn á upphafs- og lokaþyngd sýnanna, meðalgildið sem fékkst úr þremur prófunum var tekið sem blæðingarrúmmál sýnisins.
Líkanið fyrir aflimun rottuhala var notað til að skilja möguleika NFRCS til að stjórna blæðingum í áverkum, bardögum eða umferðarslysum (meiðslalíkan). Skerið var af 50% af halanum með skurðhníf og látið hann vera í lofti í 15 sekúndur til að tryggja eðlilega blæðingu. Að auki voru prófunarsýni sett á hala rottunnar með því að beita þrýstingi (Ct, Cs, Ch NFRCS og Cp NFRCS). Blæðingar og PCT voru skráð fyrir prófunarsýnin (n = 3)17,45.
Árangur þrýstingsstýringar með NFRCS í bardaga var rannsakaður á líkani af yfirborðslægri lærlegg. Lærleggurinn er afhjúpaður, stunginn með 24G trokar og blættur innan 15 sekúndna. Eftir að stjórnlaus blæðing hefur sést er prófunarsýnið sett á stungustaðinn með þrýstingi beittum. Strax eftir að prófunarsýnið var borið á var storknunartíminn skráður og blóðstöðvunarvirkni mæld næstu 5 mínútur. Sama aðferð var endurtekin með Cs og Ct46.
Dowling o.fl. 47 lögðu til líkan fyrir lifrarskaða til að meta blóðstöðvandi möguleika blóðstöðvandi efna í samhengi við blæðingu meðan á aðgerð stendur. BCT var skráð fyrir Ct sýni (neikvæð viðmiðun), Cs ramma (jákvæð viðmiðun), Ch NFRCS sýni og Cp NFRCS sýni. Ofanheilaæð rottunnar var afhjúpuð með miðlægri kviðarholsskurði. Að því loknu var neðsti hluti vinstri blaðsins klipptur út með skærum. Skurður var gerður í lifur með skurðhníf og látið blæða í nokkrar sekúndur. Nákvæmlega vigtuð Ch NFRCS og Cp NFRCS prófsýni voru sett á skemmda yfirborðið án nokkurs jákvæðs þrýstings og BCT var skráð. Viðmiðunarhópurinn (Ct) beitti síðan þrýstingi og síðan Cs 30 s47 án þess að brjóta meiðslin.
In vivo sárgræðsluprófanir voru framkvæmdar með útskurðarsárslíkani til að meta sárgræðslueiginleika þróaðra fjölliðu-byggðra NFRCS. Líkön af útskurðarsárum voru valin og framkvæmd samkvæmt áður birtum aðferðum með minniháttar breytingum19,32,48. Öll dýrin voru svæfð eins og áður hefur verið lýst. Notað var vefjasýnisspípu (12 mm) til að gera djúpan hringlaga skurð í húð baksins. Undirbúin sársvæði voru sett með Cs (jákvæð viðmiðun), Ct (meðvitað um að bómullarþurrkur trufla græðslu), Ch NFRCS og Cp NFRCS (tilraunahópur) og neikvæðri viðmiðun án nokkurrar meðferðar. Á hverjum degi rannsóknarinnar var flatarmál sársins mælt hjá öllum rottum. Notað var stafræn myndavél til að taka mynd af sársvæðinu og sett á nýjan umbúða. Hlutfall sárlokunar var mælt með eftirfarandi formúlu:
Miðað við hlutfall sárlokunar á 12. degi rannsóknarinnar var rottuhúð besta hópsins skorin út ((Cp NFRCS) og samanburðarhópsins) og rannsökuð með H&E litun og Masson-tríkrómlitinun. Miðað við hlutfall sárlokunar á 12. degi rannsóknarinnar var rottuhúð besta hópsins skorin út ((Cp NFRCS) og samanburðarhópsins) og rannsökuð með H&E litun og Masson-tríkrómlitinun.Miðað við hlutfall sárlokunar á 12. degi rannsóknarinnar var húð rottanna í besta hópnum ((Cp NFRCS) og samanburðarhópnum) skorin út og skoðuð með litun með hematoxýlín-eósíni og Masson-tríkrómi.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和眳组）Rottur í besta hópnum ((Cp NFRCS) og samanburðarhópum) voru skornar út til hematoxýlín-eósín litunar og Masson-tríkrómlitsunar byggt á prósentu sárlokunar á 12. degi rannsóknarinnar.Litunaraðferðin var framkvæmd samkvæmt áður lýstum aðferðum49,50. Í stuttu máli, eftir festingu í 10% formalíni, voru sýnin þurrkuð með röð af stigvaxandi alkóhólum. Notið var örtækið til að fá þunnar sneiðar (5 µm þykkar) af útskorna vefnum. Þunnar raðsneiðar af samanburðarhópnum og Cp NFRCS voru meðhöndlaðar með hematoxýlíni og eósíni til að rannsaka vefjameinafræðilegar breytingar. Masson-tríkrómlitin var notuð til að greina myndun kollagenþráða. Meinafræðingar rannsökuðu niðurstöðurnar blint.
Stöðugleiki Cp NFRCS sýna var rannsakaður við stofuhita (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) í 12 mánuði51. Cp NFRCS (mislitun yfirborðs og örveruvöxtur) var skoðað sjónrænt og prófað fyrir fellingarþol og BCT samkvæmt ofangreindum aðferðum sem lýst er í kaflanum um efni og aðferðir.
Stærðarhæfni og endurtekningarhæfni Cp NFRCS var skoðuð með því að útbúa Cp NFRCS með stærðinni 15×15 cm2. Að auki voru 30 mg sýni (n = 5) skorin út úr ýmsum Cp NFRCS brotum og BCT sýnanna sem rannsökuð voru metin eins og lýst er fyrr í aðferðakaflanum.
Við höfum reynt að þróa ýmsar gerðir og uppbyggingar með því að nota Cp NFRCS efnasamsetningar fyrir ýmsar líflæknisfræðilegar notkunarmöguleika. Slíkar gerðir eða útfærslur eru meðal annars keilulaga pinnar fyrir nefblæðingar, tannlækningar og sívalningslaga pinnar fyrir blæðingar úr leggöngum.
Öll gagnasöfn eru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik og voru greind með ANOVA með Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, Kaliforníu, Bandaríkjunum) og síðan með Bonferroni-margfeldi samanburðarprófi (*p < 0,05).
Allar aðferðir sem framkvæmdar voru í rannsóknum á mönnum voru í samræmi við staðla stofnunarinnar og Þjóðarrannsóknarráðsins, sem og yfirlýsinguna frá Helsinki frá 1964 og síðari breytingum á henni, eða svipaða siðferðisstaðla. Öllum þátttakendum var upplýst um eiginleika rannsóknarinnar og sjálfboðaliðastarf hennar. Gögn þátttakenda eru trúnaðarmál eftir að þeim hefur verið safnað. Siðanefnd læknaháskólans í Kasturba í Manipal í Karnataka hefur yfirfarið og samþykkt rannsóknaráætlunina fyrir in vitro TEG tilraunina (IEC: 674/2020). Sjálfboðaliðar undirrituðu upplýst samþykki fyrir söfnun blóðsýna.
Allar aðferðir sem framkvæmdar voru í dýrarannsóknum voru framkvæmdar í samræmi við leiðbeiningar læknadeildar Kastuba, Manipal Institute of Higher Education, Manipal (IAEC/KMC/69/2020). Allar dýrarannsóknir sem hannaðar voru voru framkvæmdar í samræmi við leiðbeiningar nefndarinnar um eftirlit og eftirlit með dýratilraunum (CPCSEA). Allir höfundar fylgja leiðbeiningum ARRIVE.
FTIR litróf allra NFRCS voru greind og borin saman við kítósan litrófið sem sýnt er á mynd 2A. Einkennandi litrófstoppar kítósans (skráðir) við 3437 cm-1 (OH og NH teygja, skörun), 2945 og 2897 cm-1 (CH teygja), 1660 cm-1 (NH2 álag), 1589 cm-1 (N–H beygja), 1157 cm-1 (brúarteygja O-), 1067 cm-1 (teygja C–O, auka hýdroxýl), 993 cm-1 (teygja CO, Bo-OH) 52.53.54. Viðbótartafla S1 sýnir FTIR NFRCS frásogslitrófsgildi fyrir kítósan (skýrsluefni), hreint kítósan, Cm, Ch og Cp. FTIR litróf allra NFRCS (Cm, Ch og Cp) sýndu sömu einkennandi frásogsbönd og hreint kítósan án nokkurra marktækra breytinga (Mynd 2A). Niðurstöður FTIR staðfestu að engin efna- eða eðlisfræðileg víxlverkun væri á milli fjölliðanna sem notaðar voru til að þróa NFRCS, sem bendir til þess að fjölliðurnar sem notaðar voru séu óvirkar.
In vitro greining á Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS og Cs. (A) sýnir sameinaða FTIR litrófsgreiningu á efnasamsetningum kítósans og Cm NFRCS, Ch NFRCS og Cp NFRCS undir þjöppun. (B) a) Upptökuhraði Cm, Ch, Cp og Cg í heilu blóði fyrir NFRCS (n = 3); Ct sýnin sýndu hærri BAR vegna þess að bómullarpinnar höfðu meiri frásogsgetu; b) Frásog blóðs eftir blóð Mynd af frásoguðu sýninu. Grafísk framsetning á BCT prófunarsýnis C (Cp NFRCS hafði besta BCT (15 s, n = 3)). Gögn í C, D, E og G voru sýnd sem meðaltal ± staðalfrávik, og villustikurnar tákna staðalfrávik, ***p < 0,0001. Gögn í C, D, E og G voru sýnd sem meðaltal ± staðalfrávik, og villustikurnar tákna staðalfrávik, ***p < 0,0001. Данные в C, D, E og G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляюю отклонение, ***p <0,0001. Gögn í C, D, E og G eru kynnt sem meðaltal ± staðalfrávik og villustikur tákna staðalfrávik, ***p < 0,0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0,0001。 C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0,0001。 Данные в C, D, E og G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей предностей представля отклонение, ***p <0,0001. Gögn í C, D, E og G eru sýnd sem meðaltal ± staðalfrávik, villustikur tákna staðalfrávik, ***p < 0,0001.