Þakka þér fyrir að heimsækja Nature.com. Vafraútgáfan sem þú notar hefur takmarkaðan stuðning fyrir CSS. Til að fá bestu upplifunina mælum við með að þú notir uppfærðan vafra (eða slökktir á samhæfnistillingu í Internet Explorer). Í millitíðinni, til að tryggja áframhaldandi stuðning, munum við birta síðuna án stíla og JavaScript.
Gljúpar kísilagnir voru framleiddar með sól-gel aðferð með nokkrum breytingum til að fá stórgjúpar agnir. Þessar agnir voru afleiddar með afturkræfri viðbót sundrunar keðjuflutnings (RAFT) fjölliðun með N-fenýlmaleimíð-metýlvínýlísósýanati (PMI) og stýreni til að búa til N-fenýlmaleimíð fasa-stálflöskun (PMP) stöðvuð pólýstýrenfasa (NMP) stöðbundin pólýstýren-stýreinfléttun (NMP) 1,8 mm id) var pakkað með slurry pökkun. Metinn PMP súluaðskilnaður peptíðblöndu sem samanstendur af fimm peptíðum (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) litskiljunarskilyrði fyrir mannkynsserkun og ákjósanlegasta litskiljun í mönnum (U-sermi virkni) Fræðileg plötufjöldi peptíðblöndunnar er allt að 280.000 plötur/m². Þegar aðskilnaðarframmistöðu þróaðrar súlunnar var borin saman við Ascentis Express RP-Amide súluna í verslun, kom í ljós að aðskilnaðarframmistaða PMP súlunnar var betri en verslunarsúlan hvað varðar skilvirkni og upplausn aðskilnaðar.
Á undanförnum árum hefur líflyfjaiðnaðurinn orðið að stækkandi alþjóðlegum markaði með umtalsverðri aukningu á markaðshlutdeild. Með sprengilegum vexti líflyfjaiðnaðarins1,2,3 er greining á peptíðum og próteinum mjög eftirsótt. Auk markpeptíðsins myndast nokkur óhreinindi við nýmyndun peptíðs, sem krefst þess vegna hreinsunar á vökvapróteinum í líkamanum til að fá vökvapróteingreiningu á æskilegri próteingreiningu í líkamanum, s og frumur er ákaflega krefjandi verkefni vegna fjölda hugsanlegra greinanlegra tegunda í einu sýni. Þó að massagreining sé áhrifaríkt tæki fyrir peptíð- og próteinraðgreiningu, ef slíkum sýnum er sprautað inn í massarófsmælirinn í einni lotu, verður aðskilnaðurinn ekki tilvalinn. Hægt er að draga úr þessu vandamáli með því að innleiða vökvagreiningu, skilgreiningu (MS LC-massagreiningu) á tilteknum tíma4,5,6.Að auki, við vökvafasaaðskilnað, er hægt að einbeita greiningarefnum á þröngum svæðum og þannig einbeita þessum greiningarefnum og bæta MS greiningarnæmi.Vökvaskiljun (LC) hefur fleygt verulega fram á síðasta áratug og hefur orðið vinsæl tækni í próteingreiningu7,8,9,10.
Reversed-phase vökvaskiljun (RP-LC) er mikið notuð til að hreinsa og aðskilja peptíðblöndur með því að nota octadecyl-modified silica (ODS) sem kyrrstæða fasa11,12,13. Hins vegar veita RP kyrrstöðufasar ekki fullnægjandi aðskilnað peptíða og próteina vegna flókinnar eðlisbyggingar þeirra og amphirephilic fasa, 14,1 stöðva er nauðsynleg fyrir 14,1 stöðva fasa. að greina peptíð og prótein með skautuðum og óskautuðum hlutum til að hafa samskipti við og halda þessum greiningarefnum16. Blönduð litskiljun, sem veitir margþætta víxlverkanir, getur verið valkostur við RP-LC fyrir aðskilnað peptíða, próteina og annarra flókinna blandna. Nokkrir blandaðir kyrrstæður fasar hafa verið útbúnar með,1 prótínum, 1 próteinum, 1 próteinum 9,20,21.Blandaðir kyrrstæðir fasar (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) henta fyrir peptíð- og próteinaðskilnað vegna nærveru bæði skautaðra og óskautaðra hópa22,23,24,25,26,27,28 .Svipað, samgilt stöðvaafl með samgildum, völdum stöðvaaflum og samgildum stöðvum aðskilnaði skautuð og óskautuð greiniefni, þar sem aðskilnaður er háður víxlverkun greiniefnis og kyrrstöðufasa.Multimodal interactions 29, 30, 31, 32. Nýlega, Zhang o.fl.30 útbjó dodecyl-terminated pólýamín kyrrstæða fasa og skilaði með góðum árangri kolvetni, þunglyndislyf, flavonoids, núkleósíð, estrógen og nokkur önnur greiniefni. Polar intercalatorinn hefur bæði skautaða og óskautaða hópa, svo það er hægt að nota það til að aðskilja peptíð og prótein sem hafa bæði vatnsfælna og vatnssækna dálka, t.d. ) eru fáanlegar undir vöruheitinu Ascentis Express RP-Amide súlur, en þessar súlur eru eingöngu notaðar til greiningar á amíni 33.
Í núverandi rannsókn var skautaður innfelldur kyrrstæður fasi (N-fenýlmaleimíð-innfelldur pólýstýren) útbúinn og metinn með tilliti til aðskilnaðar peptíða og trypsín meltingar HSA. Kyrrstæður fasi var útbúinn með eftirfarandi aðferð. Porous kísilagnir voru framleiddar í samræmi við aðferðina sem gefin var upp í fyrri útgáfu okkar með nokkrum breytingum, Pólýetýlen TM, Pólýetýlen TM aðferð, (Hlutfallið af pólýúreóli TM). , vatnsediksýra var stillt til að búa til kísilagnir með stóra holastærð. Í öðru lagi var ný bindill, fenýlmaleimíð-metýlvínýlísósýanat, smíðaður og notaður til að afleiða kísilagnir til að búa til skautaðan innbyggðan kyrrstæða fasa. Kyrrstöðufasinn sem varð til var pakkaður inn í ryðfríu stáli súlusúluna með því að nota 18 mm0 hjálp úr ryðfríu stáli með því að nota súlupakkninguna. vélrænn titringur til að tryggja að einsleitt rúm myndist innan súlunnar. Metið aðskilnað í pakkaðri súlu á peptíðblöndum sem samanstanda af fimm peptíðum;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) og Trypsin digest of human serum albumin (HAS). Sást að peptíðblandan og trypsin melting HSA skildu sig með góðri upplausn og skilvirkni.Súlan aðskilnaðarframmistöðu PMP-peptíðs var borin saman við PMP-peptíðið. og prótein sáust vel uppleyst og skilvirk á PMP súlunni, sem var skilvirkari en Ascentis Express RP-Amide súlan.
PEG (pólýetýlen glýkól), þvagefni, ediksýra, trímetoxý orþósílíkat (TMOS), trímetýlklórsílan (TMCS), trypsín, mannasermi albúmín (HSA), ammóníumklóríð, þvagefni, hexan metýldisílazan (HMDS), metakrýlóýlklóríð (MC, hýdroxýdroxýdroxý, stýren, 4-4-póloxíð), perzó-MPO, stýren, trile (ACN), metanól, 2-própanól og aseton keypt frá Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Bandaríkjunum).
Blanda af þvagefni (8 g), pólýetýlen glýkóli (8 g) og 8 ml af 0,01 N ediksýru var hrært í 10 mínútur og síðan var 24 ml af TMOS bætt við það við ísköld skilyrði. d við 70°C í 12 klukkustundir. Þurrkaði mjúki massinn var sléttmalaður í ofni og brenndur við 550°C í 12 klukkustundir. Þrjár lotur voru útbúnar og einkenndar til að kanna endurgerðanleika í kornastærð, holastærð og yfirborðsflatarmáli.
Með yfirborðsbreytingum á kísilögnum með forsmíðuðum bindli fenýlmaleimíð-metýlvínýlisósýanati (PCMP) fylgt eftir með geislafjölliðun með stýreni, var skautað hópa-innihaldandi efnasamband útbúið.Kyrrstæður fasi fyrir malarefni og pólýstýrenkeðjur. Undirbúningsferlinu er lýst hér að neðan.
N-fenýlmaleimíð (200 mg) og metýlvinýlísósýanat (100 mg) voru leyst upp í þurru tólúeni og 0,1 ml af 2,2'-asóísósósýónítríl (AIBN) var bætt í hvarfflöskuna til að útbúa fenýlmaleimíð-metýlvínýlísósýanatblönduna í 3,0 klst. d í ofni við 40°C í 3 klst.
Þurrkuðum kísilögnum (2 g) var dreift í þurrt tólúen (100 ml), hrært og hljóðbeitt í 500 ml kúlubotna flösku í 10 mínútur. PMCP (10 mg) var leyst upp í tólúeni og bætt við hvarfflöskuna í dropatali í gegnum droptrekt. Blandan var látin hita upp við 80 klst. °C í 3 klukkustundir. Síðan voru PMCP-tengdar kísilagnir (100 g) leystar upp í tólúeni (200 ml) og 4-hýdroxý-TEMPO (2 ml) var bætt við í nærveru 100 µL af díbútýltinndílúrati sem hvata. Blandan var hrærð við 50 °C og síuð í 3 klukkustundir við 50 °C og 8 klukkustundir.
Stýren (1 mL), bensóýlperoxíð BPO (0,5 mL) og TEMPO-PMCP tengdar kísilagnir (1,5 g) voru dreift í tólúen og hreinsaðar með köfnunarefni. Fjölliðun stýrens var framkvæmd við 100°C í 12 klukkustundir. Varan sem fékkst var þvegin með metanóli yfir nótt með etanóli og þurrkuð við 60°C yfir nótt.
Sýnin voru afgasuð við 393 K í 1 klukkustund til að fá afgangsþrýsting undir 10-3 Torr. Magn N2 aðsogaðs við hlutfallslegan þrýsting P/P0 = 0,99 var notað til að ákvarða heildarholarúmmálið. Formgerð berra og bindilbundinna kísilagna var skoðuð með scanning ligand-tengdum kísilagnum (Scanning ligand-tengdum kísilagnum, scanning ligchibond microscopy, Tokyos-electron microscopy, Japan og Japan). ed kísilagnir) voru settar á álsúlu með límbandi úr kolefni. Gull var húðað á sýnin með Q150T sputter coater, og 5 nm Au lag var sett á sýnin. Þetta bætir ferli skilvirkni með því að nota lágspennu og gefur fínkorna, köldu sputtering. A Thermo Electron (Waltham frumefni, USA)1 Flash frumefni, EA1 MalW1 greining var notað fyrir greiningu. orcestershire, Bretlandi) Mastersizer 2000 kornastærðargreiningartæki var notað til að fá kornastærðardreifingu. Naktar kísilagnir og bindiltengdar kísilagnir (5 mg hvor) var dreift í 5 mL af ísóprópanóli, hljóðbeitt í 10 mínútur, hringið í hringið í 5 mínútur og sett á sjónræna perlubekkinn á °C greiningu á 5 mínútum. hitastig á bilinu 30 til 800 °C.
Glerfóðruðum ryðfríu stáli þröngum stöngum af stærð (100 × 1,8 mm id) var pakkað með því að nota slurry pökkunaraðferðina, með því að beita sömu aðferð og notuð var í Ref.31.Súla úr ryðfríu stáli (glerfóðruð, 100 × 1,8 mm innviði) með úttakstengi sem innihélt 1 µm frit var tengdur við slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA). Undirbúðu kyrrstæða fasa slurry með því að blanda 150 mg af kyrrstæðum fasa af leysinum af metanóli og metanóli sem notaður var í 1.2 metanól sem notaður var metanól í geymslusúluna. sem drifleysi.Fylltu súluna í röð með því að beita þrýstingi upp á 100 MP í 10 mínútur, 80 MP í 15 mínútur og 60 MP í 30 mínútur.Við pökkun var vélrænni titringi beitt með tveimur GC súluhristara (Alltech, Deerfield, IL, USA) til að tryggja samræmda pakkningu á súlunni og koma í veg fyrir að súluna sleppti þrýstingnum hægt og hægt. slurry pökkunareininguna og tengdu aðra festingu við inntakið og við LC kerfið til að athuga frammistöðu þess.
LC dæla (10AD Shimadzu, Japan), inndælingartæki (Valco (Bandaríkin) C14 W.05) með 50nL inndælingarlykkju, himnuafgasara (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS háræðaglugga var smíðuð. band breikkun.Eftir pökkun voru háræðar (50 μm id 365 og afoxandi háræðar (50 μm) settar upp við 1/16″ úttak afoxunarsambandsins. Gagnasöfnun og litskiljunarvinnsla var unnin með Multichro 2000 hugbúnaði. Vöktun á 254 gögnum var prófuð við 254 uppruni. (Northampton, MA).
Albúmín úr mannasermi, frostþurrkað duft, ≥ 96% (agarósugel rafdráttur) 3 mg blandað með trypsíni (1,5 mg), 4,0 M þvagefni (1 mL) og 0,2 M ammóníumbíkarbónati (1 mL). Hrært var í lausninni í 10 mínútur og haldið í vatnsbaði í 1 mL í 1 mL, síðan 1 7 klst. TFA.Síið lausnina og geymið við lægri hita en 4 °C.
Aðskilnaður peptíðblandna og HSA trypsínmeltunar var metinn sérstaklega á PMP súlum. Athugaðu aðskilnað peptíðblöndunnar og trypsínmeltu HSA með PMP súlunni og berðu saman niðurstöðurnar við Ascentis Express RP-Amide dálkinn. Fræðilegt plötunúmer er reiknað út sem hér segir:
SEM myndir af berum kísilögnum og bindilltengdum kísilögnum eru sýndar á mynd.2 .SEM myndir af berum kísilögnum (A, B) sýna að öfugt við fyrri rannsóknir okkar, eru þessar agnir kúlulaga þar sem agnirnar eru ílangar eða hafa óreglulega samhverfu. Yfirborð bindilbundinna kísilagnanna (C, D) er sléttara en beru kísilagnanna á yfirborði kísilagnanna, sem getur verið á yfirborði kísilagnanna.
Skanna rafeindasmásjármyndir af berum kísilögnum (A, B) og bindiltengdum kísilögnum (C, D).
Kornastærðardreifing berra kísilagna og bindilbundinna kísilagna er sýnd á mynd 3(A). Rúmmálsmiðaðar kornastærðardreifingarferlar sýndu að stærð kísilagnanna jókst eftir efnafræðilega breytingu (Mynd 3A). Kornastærðardreifingargögn kísilagnanna úr núverandi rannsókn og fyrri kornstærð 1(A) eru borin saman í T,(A5) kornastærð. 3,36 μm, samanborið við fyrri rannsókn okkar með ad(0,5) gildi 3,05 μm (pólýstýrenbundnar kísilagnir)34. Þessi lota hafði þrengri kornastærðardreifingu samanborið við fyrri rannsókn okkar vegna mismunandi hlutfalls PEG, þvagefnis, TMOS og ediksýruagna í pólýstýrenfasanum sem er örlítið stór í pólýstýren efnablöndunni. áfanga sem við rannsökuðum áður. Þetta þýðir að yfirborðsvirkni kísilagna með stýreni setti aðeins pólýstýrenlag (0,97 µm) á kísilyfirborðið, en í PMP fasanum var lagþykktin 1,38 µm.
Kornastærðardreifing (A) og porastærðardreifing (B) á berum kísilagnum og bindilbundnum kísilagnum.
Svitaholastærð, holarúmmál og yfirborðsflatarmál kísilagnanna í núverandi rannsókn eru gefin upp í töflu 1(B). PSD snið berra kísilagna og bindilbundinna kísilagna eru sýnd á mynd 3(B). Niðurstöðurnar eru sambærilegar við fyrri rannsókn okkar. Svitastærð berra og bindilbundinna kísilagnanna gefa til kynna að 243110 kísilagnirnar minnki um 243110. 69 eftir efnabreytingu, eins og sýnt er í töflu 1(B), og breytingin á ferlinum er sýnd á mynd 3(B). Á sama hátt minnkaði holarúmmál kísilagnanna úr 0,67 í 0,58 cm3/g eftir efnafræðilega breytingu. Sértækt yfirborð kísilagnanna sem nú er rannsakað er sambærilegt við T2/116 í m2/116 í rannsókninni okkar (eins og m2/116 í rannsókninni okkar). 1(B), yfirborðsflatarmál (m2/g) kísilagnanna minnkaði einnig úr 116 m2/g í 105 m2/g eftir efnafræðilega breytingu.
Niðurstöður frumefnagreiningar á kyrrstöðufasanum eru sýndar í töflu 2. Kolefnishleðsla núverandi kyrrstöðufasa er 6,35%, sem er lægra en kolefnishleðsla fyrri rannsóknarinnar okkar (pólýstýrentengdar kísilagnir, 7,93%35 og 10,21%, í sömu röð) 42. Kolefnishleðsla núverandi kyrrstöðufasa, stýren og stýren í núverandi kyrrstöðufasa, er lítil samlagning við núverandi kyrrstæða fasa. Notuð voru fenýlmaleimíð-metýlvínýlísósýanat (PCMP) og 4-hýdroxý-TEMPO. Þyngdarprósenta köfnunarefnis í núverandi kyrrstöðufasa er 2,21%, samanborið við 0,1735 og 0,85% af þyngd köfnunarefnis í fyrri rannsóknum, í sömu röð. s af vörum (4) og (5) voru 2,7% og 2,9%, í sömu röð, en kolefnishleðsla lokaafurðarinnar (6) var 6,35%, eins og sýnt er í töflu 2. Þyngdartapið var athugað með PMP kyrrstöðufasa, og TGA ferillinn er sýndur á mynd 4. TGA ferillinn sýnir þyngdartapið upp á 8% og kolefni er ekki gott, þar sem hleðsla er aðeins 8% og kolefni er ekki gott. en einnig N, O og H.
Fenýlmaleimíð-metýlvínýlísósýanat bindillinn var valinn til að breyta yfirborði kísilagna vegna þess að hann hefur skautaða fenýlmaleimíð hópa og vínýísósýanathópa. Vínýlísósýanathópar geta hvarfast frekar við stýren með lifandi róttækum fjölliðun. Önnur ástæðan er að setja inn hóp sem hefur miðlungs og engin víxlverkun milli greiningarfasans og efnagreiningarstöðvarinnar og engin víxlverkun milli greiningarfasa ylmaleimid hluti hefur enga sýndarhleðslu við eðlilegt pH. Skautun kyrrstæða fasans er hægt að stjórna með ákjósanlegu magni af stýreni og hvarftíma sindurefna fjölliðunar. Síðasta skref efnahvarfsins (radical fjölliðun) er mikilvægt og getur breytt pólun kyrrstæða fasans. Frumgreining var gerð til að athuga kolefnishleðslu þessara kyrrstæðu fasa og stýren efnahvarfstíminn í kyrrstæðum fasa og vikna var aukinn efnahvarfstími á kyrrstæðu fasa og víxl. versa.SPs sem eru útbúin með mismunandi styrk af stýreni hafa mismunandi kolefnishleðslu. Aftur skaltu hlaða þessum kyrrstæðu fasum í ryðfríu stálsúlur og athuga skiljunargetu þeirra (valhæfi, upplausn, N gildi, osfrv.). Byggt á þessum tilraunum var valin fínstillt samsetning til að undirbúa PMP kyrrstöðu fasann til að tryggja stýrða pólun og góða varðveislu greiningarefna.
Fimm peptíðblöndur (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) voru einnig metnar með því að nota PMP súlu með því að nota farsímafasa;60/40 (v/v) asetónítríl/vatn (0,1% TFA) með 80 μL/mín. litskiljun eru sýnd á mynd 5A. Hröð greining á PMP súlu við háan flæðishraða (700 μL/mín.), fimm peptíð voru skoluð út á einni mínútu, N gildi voru mjög góð, 13.500 ± 330 á súlu (100 × 1,8 mm id), samsvarar 0 og 03 m súlu stærð, 0/03 m). (100 × 1,8 mm id) var pakkað með þremur mismunandi lotum af PMP kyrrstöðufasa til að kanna endurgerðanleika. Styrkur greiniefna fyrir hverja súlu var skráður með því að nota ákjósanlegar skolunaraðstæður og fjölda fræðilegra platna N og varðveislutíma til að aðskilja sömu prófunarblönduna á hverri súlu. Fjölbreytanleg gögn fyrir PMP súlurnar eru sýndar í töflu 4. Mikið lágt endurskapanlegt gildi TRS er sýnt í töflu 4. .
Aðskilnaður peptíðblöndu á PMP súlu (B) og Ascentis Express RP-Amide súlu (A);hreyfanlegur fasi 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP dálkamál (100 × 1,8 mm auðkenni);greinandi. Skolunaröð efnasambandanna: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) og 5 (leucín) sýru enkephalin)).
PMP súla (100 × 1,8 mm id) var metin með tilliti til aðskilnaðar á tryptic meltingarefni úr mannasermi albúmíni í hágæða vökvaskiljun. Litskiljunin á mynd 6 sýnir að sýnið er vel aðskilið og upplausnin er mjög góð. HSA meltingar voru greind með flæðihraða 100 µL/10mín, hreyfanlegur fasa 100 µL/tríl/10mín. Eins og sýnt er á litskiljuninni (mynd 6) hefur HSA meltingunni verið skipt í 17 toppa sem samsvara 17 peptíðum. Skilvirkni hvers topps í HSA meltingu var reiknuð út og gildin eru gefin upp í töflu 5.
Tryptic melting HSA (100 × 1,8 mm id) var aðskilin á PMP súlu;rennsli (100 µL/mín.), hreyfanlegur fasi 60/40 asetónítríl/vatn með 0,1% TFA.
þar sem L er súlulengd, η er seigja hreyfanlega fasans, ΔP er súlubakþrýstingur, og u er línulegur hraði hreyfanlegra fasa. Gegndræpi PMP súlunnar var 2,5 × 10-14 m2, rennslishraði var 25 μL/mín og 60/40 v/v PMP1-súlan var notuð af 0,0 mm/v/vatni. var svipað og í fyrri rannsókn okkar Ref.34. Gegndræpi súlunnar sem er pakkað með yfirborðsgljúpum ögnum er: 1,7 × 10-15 fyrir 1,3 μm agnir, 3,1 × 10-15 fyrir 1,7 μm agnir, 5,2 × 10-15 og 2-1 m fyrir 102 m agnir. μm agnir 43. Þess vegna er gegndræpi PMP fasans svipað og 5 μm kjarna-skel agna.
þar sem Wx er þyngd súlunnar sem er pakkað með klóróformi, Wy er þyngd súlunnar sem er pakkað með metanóli og ρ er þéttleiki leysisins. Þéttleiki metanóls (ρ = 0,7866) og klóróforms (ρ = 1,484). Heildargljúpur KÍSLAAGNA-C1008 súlu-C1008 dálka (C1008) × C31 mm dálka. s 31 sem við rannsökuðum áður voru 0,63 og 0,55, í sömu röð. Þetta þýðir að nærvera þvagefnisbindla dregur úr gegndræpi kyrrstöðufasans. Á hinn bóginn er heildargljúpa PMP súlunnar (100 × 1,8 mm id) 0,60. Gegndræpi kísilsúlnatengdrar í C1 dálkum er lægra en C1 dálka-tengd stöð í C1 dálkum. arfasar eru C18 bindlarnir festir við kísilagnirnar sem línulegar keðjur, en í kyrrstæðum fasum af pólýstýrengerð myndast tiltölulega þykkt fjölliðalagið utan um það. Í dæmigerðri tilraun er grop súlu reiknuð sem:
Mynd 7A,B sýnir PMP dálkinn (100 × 1,8 mm id) og Ascentis Express RP-Amide dálkinn (100 × 1,8 mm id) með sömu skolunarskilyrðum (þ.e. 60/40 ACN/H2O og 0,1% TFA).) af van Deemter lóðinni.Valdar peptíðblöndur (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) voru útbúnar í 20 µL/ Lágmarksrennsli fyrir báðar súlurnar er 800 µL/mín. Lágmarksflæðið er hámarksflæðisgildi og µL súluna (MP8 cent) is Express RP-Amide dálkurinn var 2,6 µm og 3,9 µm, í sömu röð. HETP gildin gefa til kynna að skilvirkni PMP súlunnar (100 × 1,8 mm id) er mun betri en Ascentis Express RP-Amide súlan sem er fáanleg í verslun (100 × 1,8 mm id A) samanborið við marktæka lækkun á N-flæði (mynd. við fyrri rannsókn okkar.Hærri skilvirkni PMP dálksins (100 × 1,8 mm id) samanborið við Ascentis Express RP-Amide dálkinn byggist á endurbótum á lögun agna, stærð og flóknum súlupökkunaraðferðum sem notuð eru í núverandi vinnu34.
(A) van Deemter plot (HETP á móti línulegum hraða farsímafasa) fengin með því að nota PMP súlu (100 × 1,8 mm id) í 60/40 ACN/H2O með 0,1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP á móti línulegum hraða farsímafasa) fengin með Ascentis Express RP-Amid dálki (A100 0 0 mm 4 í 0,6 mm) með 0,1% TFA.
Stöðugur pólýstýrenfasi var útbúinn og metinn fyrir aðskilnað á tilbúnum peptíðblöndum og trypsínmeltum mannaserumalbúmíns (HAS) í hágæða vökvaskiljun. Skiljunarárangur PMP súlna fyrir peptíðblöndur er framúrskarandi hvað varðar skilvirkni og upplausn. agnir, stýrð nýmyndun kyrrstæða fasans og flókin súlupökkun. Auk mikillar skilvirkni er lágur súlubakþrýstingur við háan flæðishraða annar kostur þessa kyrrstæða fasa. PMP súlur sýna góðan endurgerðanleika og er hægt að nota til greiningar á peptíðblöndum og trypsínmeltunar ýmissa próteina. , PMP súlur verða einnig metnar með tilliti til aðskilnaðar próteina og einstofna mótefna.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Bætt virk peptíð hönnuð til meðferðar á smitsjúkdómum.Líftækni.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (120.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Háþróuð vökvaskiljun-massagreining gerir kleift að innlima víðtæka efnaskiptafræði og proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Hlutverk UHPLC í lyfjaþróun.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Grundvallar- og hagnýtar þættir ofurháþrýstings vökvaskiljunar fyrir hraða aðskilnað.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Notkun ofur-high performance vökvaskiljunar í lyfjaþróun.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolithic macroporous hydrogel framleidd úr olíu-í-vatni hár innri fasa fleyti fyrir skilvirka hreinsun á enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Hlutverk vökvaskiljunar í próteómfræði.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Ný þróun í öfugfasa vökvaskiljun aðskilnað meðferðarpeptíða og próteina: kenning og notkun.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Tvívíð aðskilnaður peptíða með því að nota RP-RP-HPLC kerfi sem notar mismunandi pH gildi í fyrstu og annarri aðskilnaðarvídd.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. o.fl. Könnuð voru massaflutningseiginleikar og hreyfiafköst afkastamikilla litskiljunarsúlna sem eru pakkaðar með C18 undir-2 μm fullum og yfirborðsgljúpum ögnum.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. o.fl. Nýlegar tilhneigingar og greiningaráskoranir í einangrun, auðkenningu og staðfestingu á lífvirkum plöntupeptíðum.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08.
Mueller, JB o.fl. The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. o.fl. Niðurstraumsvinnsla meðferðarpeptíða með undirbúningsvökvaskiljun. Molecule (Basel, Sviss) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography and application its to biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands for mixed-mode próteinskiljun: meginregla, persónulýsing og hönnun.J.Líftækni.144(1), 3-11 (2009).