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La corrosione microbica (MIC) è un problema serio in molti settori in quanto può causare enormi perdite economiche. L'acciaio inossidabile super duplex 2707 (2707 HDSS) è stato utilizzato in ambienti marini per la sua eccellente resistenza chimica. Tuttavia, la sua resistenza alla MIC non è stata dimostrata sperimentalmente. uginosa nel mezzo 2216E, si è verificato un cambiamento positivo nel potenziale di corrosione e un aumento della densità di corrente di corrosione. L'analisi della spettroscopia fotoelettronica a raggi X (XPS) ha mostrato una diminuzione del contenuto di Cr sulla superficie del campione sotto il biofilm. completamente immuni alla MIC dei biofilm di P. aeruginosa.
Gli acciai inossidabili duplex (DSS) sono ampiamente utilizzati in vari settori per la loro combinazione ideale di eccellenti proprietà meccaniche e resistenza alla corrosione1,2. Tuttavia, la vaiolatura localizzata si verifica ancora e influisce sull'integrità di questo acciaio3,4. Il DSS non è resistente alla corrosione microbica (MIC)5,6. Nonostante l'ampia gamma di applicazioni del DSS, vi sono ancora ambienti in cui la resistenza alla corrosione del DSS non è sufficiente per l'uso a lungo termine. gli acciai inossidabili (SDSS) hanno alcune limitazioni in termini di resistenza alla corrosione. Pertanto, in alcune applicazioni sono richiesti acciai inossidabili super duplex (HDSS) con maggiore resistenza alla corrosione. Ciò ha portato allo sviluppo di HDSS altamente legato.
La resistenza alla corrosione del DSS dipende dal rapporto delle fasi alfa e gamma e dalle regioni impoverite di Cr, Mo e W 8, 9, 10 adiacenti alla seconda fase. L'HDSS contiene un alto contenuto di Cr, Mo e N11, quindi ha un'eccellente resistenza alla corrosione e un valore elevato (45-50) di Pitting Resistance Equivalent Number (PREN), determinato dalla % in peso di Cr + 3,3 (% in peso di Mo + 0,5% in peso di W) + 16% in peso di N 12.La sua eccellente resistenza alla corrosione si basa su una composizione bilanciata contenente circa il 50% di ferrite (α) e il 50% di fasi di austenite (γ), l'HDSS ha migliori proprietà meccaniche e una maggiore resistenza rispetto al DSS13 convenzionale.Proprietà di corrosione da cloruro. La migliore resistenza alla corrosione espande l'uso dell'HDSS in ambienti più corrosivi con cloruro, come gli ambienti marini.
I MIC sono un grave problema in molti settori come petrolio, gas e servizi idrici14.Il MIC rappresenta il 20% di tutti i danni da corrosione15.Il MIC è una corrosione bioelettrochimica che può essere osservata in molti ambienti. I biofilm che si formano sulle superfici metalliche alterano le condizioni elettrochimiche, influenzando così il processo di corrosione. È opinione diffusa che la corrosione da MIC sia causata dai biofilm. trasferimento cellulare di elettroni) è il fattore di limitazione della velocità nella MIC indotta da microrganismi elettrogenici. Zhang et al.18 hanno dimostrato che i mediatori di elettroni accelerano il trasferimento di elettroni tra le cellule di Desulfovibrio sessificans e l'acciaio inossidabile 304, portando a un attacco MIC più grave. Enning et al.19 e Venzlaff et al.20 ha dimostrato che i biofilm di batteri corrosivi che riducono i solfati (SRB) possono assorbire direttamente gli elettroni dai substrati metallici, provocando una grave corrosione per vaiolatura.
È noto che il DSS è suscettibile alla MIC in ambienti contenenti SRB, batteri che riducono il ferro (IRB), ecc. 21 . Questi batteri causano pitting localizzato sulle superfici del DSS sotto i biofilm22,23. A differenza del DSS, la MIC dell'HDSS24 è poco conosciuta.
Pseudomonas aeruginosa è un batterio gram-negativo mobile a forma di bastoncino ampiamente distribuito in natura25. Pseudomonas aeruginosa è anche un importante gruppo microbico nell'ambiente marino, causando MIC nell'acciaio. Pseudomonas è strettamente coinvolto nei processi di corrosione ed è riconosciuto come colonizzatore pioniere durante la formazione di biofilm. Mahat et al.28 e Yuan et al.29 hanno dimostrato che Pseudomonas aeruginosa ha la tendenza ad aumentare il tasso di corrosione dell'acciaio dolce e delle leghe in ambienti acquosi.
L'obiettivo principale di questo lavoro è stato quello di studiare le proprietà MIC di 2707 HDSS causate dal batterio aerobico marino Pseudomonas aeruginosa utilizzando metodi elettrochimici, tecniche analitiche di superficie e analisi dei prodotti di corrosione. Sono stati eseguiti studi elettrochimici tra cui Open Circuit Potential (OCP), Linear Polarization Resistance (LPR), Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS) e Potential Dynamic Polarization per studiare il comportamento MIC di 2707 HDSS. Spettrometro a dispersione di energia (ED) S) è stata eseguita l'analisi per trovare elementi chimici sulla superficie corrosa. Inoltre, l'analisi della spettroscopia fotoelettronica a raggi X (XPS) è stata utilizzata per determinare la stabilità della passivazione del film di ossido sotto l'influenza di un ambiente marino contenente Pseudomonas aeruginosa. La profondità della fossa è stata misurata con un microscopio confocale a scansione laser (CLSM).
La tabella 1 elenca la composizione chimica dell'HDSS 2707. La tabella 2 mostra che l'HDSS 2707 ha eccellenti proprietà meccaniche con una resistenza allo snervamento di 650 MPa. La figura 1 mostra la microstruttura ottica dell'HDSS 2707 trattato termicamente in soluzione. Si possono vedere bande allungate di fasi di austenite e ferrite senza fasi secondarie nella microstruttura contenente circa il 50% di fasi di austenite e il 50% di ferrite.
La Figura 2a mostra il potenziale a circuito aperto (Eocp) rispetto ai dati del tempo di esposizione per 2707 HDSS in terreno abiotico 2216E e brodo di P. aeruginosa per 14 giorni a 37 °C. Mostra che il cambiamento più grande e significativo in Eocp si verifica entro le prime 24 ore. vs. SCE) e -236 mV (vs. SCE) per il campione abiotico e P, rispettivamente).Pseudomonas aeruginosa, rispettivamente. Dopo 24 ore, il valore Eocp di 2707 HDSS per P. aeruginosa era relativamente stabile a -228 mV (rispetto a SCE), mentre il valore corrispondente per i campioni non biologici era di circa -442 mV (rispetto a SCE). Eocp in presenza di P. aeruginosa era piuttosto basso.
Analisi elettrochimica di 2707 campioni HDSS in terreno abiotico e brodo di Pseudomonas aeruginosa a 37 °C:
(a) Eocp in funzione del tempo di esposizione, (b) curve di polarizzazione al giorno 14, (c) Rp in funzione del tempo di esposizione e (d) icorr in funzione del tempo di esposizione.
La Tabella 3 elenca i valori dei parametri di corrosione elettrochimica di 2707 campioni HDSS esposti a mezzo abiotico e mezzo inoculato da Pseudomonas aeruginosa per 14 giorni. Le tangenti delle curve anodiche e catodiche sono state estrapolate per arrivare alle intersezioni che producono densità di corrente di corrosione (icorr), potenziale di corrosione (Ecorr) e pendenze di Tafel (βα e βc) secondo metodi standard30,31.
Come mostrato nella Figura 2b, lo spostamento verso l'alto della curva di P. aeruginosa ha comportato un aumento di Ecorr rispetto alla curva abiotica. Il valore di icorr, che è proporzionale al tasso di corrosione, è aumentato a 0,328 μA cm-2 nel campione di Pseudomonas aeruginosa, quattro volte quello del campione non biologico (0,087 μA cm-2).
LPR è un classico metodo elettrochimico non distruttivo per l'analisi rapida della corrosione. È stato utilizzato anche per studiare MIC32. La Figura 2c mostra la resistenza di polarizzazione (Rp) in funzione del tempo di esposizione. Un valore Rp più elevato significa meno corrosione. Entro le prime 24 ore, l'Rp di 2707 HDSS ha raggiunto un valore massimo di 1955 kΩ cm2 per i campioni abiotici e 1429 kΩ cm2 per i campioni di Pseudomonas aeruginosa.Figura 2 c mostra anche che il valore Rp è diminuito rapidamente dopo un giorno e poi è rimasto relativamente invariato per i successivi 13 giorni. Il valore Rp del campione di Pseudomonas aeruginosa è di circa 40 kΩ cm2, che è molto inferiore al valore di 450 kΩ cm2 del campione non biologico.
Il valore icorr è proporzionale al tasso di corrosione uniforme. Il suo valore può essere calcolato dalla seguente equazione di Stern-Geary,
Dopo Zou et al.33, si presumeva che un valore tipico della pendenza Tafel B in questo lavoro fosse di 26 mV/dec. La Figura 2d mostra che l'icorr del campione non biologico 2707 è rimasto relativamente stabile, mentre il campione di P. aeruginosa ha fluttuato notevolmente dopo le prime 24 ore. I valori di icorr dei campioni di P. aeruginosa erano di un ordine di grandezza superiori rispetto ai controlli non biologici.
EIS è un'altra tecnica non distruttiva utilizzata per caratterizzare le reazioni elettrochimiche alle interfacce corrose. Spettri di impedenza e valori di capacità calcolati di campioni esposti a mezzi abiotici e soluzione di Pseudomonas aeruginosa, resistenza Rb del film passivo/biofilm formato sulla superficie del campione, resistenza al trasferimento di carica Rct, capacità elettrica a doppio strato Cdl (EDL) e parametri QCPE Constant Phase Element (CPE). Questi parametri sono stati ulteriormente analizzati adattando i dati utilizzando un modello di circuito equivalente (EEC).
La figura 3 mostra i tipici grafici di Nyquist (a e b) e i grafici di Bode (a' e b') di 2707 campioni HDSS in terreno abiotico e brodo di P. aeruginosa per diversi tempi di incubazione. Il diametro dell'anello di Nyquist diminuisce in presenza di Pseudomonas aeruginosa. La Figura 4 mostra le strutture fisiche basate su monostrato (a) e doppio strato (b) e i loro corrispondenti EEC. Il CPE viene introdotto nel modello EEC. La sua ammettenza e impedenza sono espresse come segue:
Due modelli fisici e corrispondenti circuiti equivalenti per l'adattamento dello spettro di impedenza del campione 2707 HDSS:
dove Y0 è la grandezza del CPE, j è il numero immaginario o (-1)1/2, ω è la frequenza angolare e n è l'indice di potenza CPE inferiore all'unità35. rispetto ai 489 kΩ cm2 dei campioni non biologici (Tabella 4).
Le immagini CLSM e le immagini SEM nella Figura 5 mostrano chiaramente che la copertura del biofilm sulla superficie del campione HDSS 2707 dopo 7 giorni è densa. Tuttavia, dopo 14 giorni, la copertura del biofilm era scarsa e sono comparse alcune cellule morte. La Tabella 5 mostra lo spessore del biofilm sui campioni HDSS 2707 dopo l'esposizione a P. aeruginosa per 7 e 14 giorni. 9 μm dopo 14 giorni. Anche lo spessore medio del biofilm ha confermato questa tendenza. È diminuito da 22,2 ± 0,7 μm dopo 7 giorni a 17,8 ± 1,0 μm dopo 14 giorni.
(a) immagine CLSM 3-D dopo 7 giorni, (b) immagine CLSM 3-D dopo 14 giorni, (c) immagine SEM dopo 7 giorni e (d) immagine SEM dopo 14 giorni.
L'EDS ha rivelato elementi chimici nei biofilm e nei prodotti di corrosione su campioni esposti a P. aeruginosa per 14 giorni. La Figura 6 mostra che il contenuto di C, N, O e P nei biofilm e nei prodotti di corrosione è molto più alto di quello nei metalli nudi, perché questi elementi sono associati ai biofilm e ai loro metaboliti. I microbi necessitano solo di tracce di cromo e ferro. alla corrosione.
Dopo 14 giorni, è stata osservata la vaiolatura con e senza P. aeruginosa nel mezzo 2216E. Prima dell'incubazione, la superficie del campione era liscia e priva di difetti (Fig. 7a). Dopo l'incubazione e la rimozione del biofilm e dei prodotti di corrosione, le fosse più profonde sulla superficie dei campioni sono state esaminate sotto CLSM, come mostrato nelle Figure 7b e c. La profondità massima della fossa causata da Pseudomonas aeruginosa era di 0,52 μm dopo 7 giorni e 0,69 μm dopo 14 giorni, sulla base della profondità media massima della fossa di 3 campioni (10 valori massimi di profondità della fossa sono stati selezionati per ciascun campione) hanno raggiunto rispettivamente 0,42 ± 0,12 μm e 0,52 ± 0,15 μm (Tabella 5). Questi valori di profondità della fossa sono piccoli ma importanti.
(a) prima dell'esposizione, (b) 14 giorni in mezzo abiotico e (c) 14 giorni in brodo di Pseudomonas aeruginosa.
La Figura 8 mostra gli spettri XPS di diverse superfici del campione e le composizioni chimiche analizzate per ciascuna superficie sono riassunte nella Tabella 6. Nella Tabella 6, le percentuali atomiche di Fe e Cr in presenza di P. aeruginosa (campioni A e B) erano molto inferiori a quelle dei campioni di controllo non biologico (campioni C e D). di 574,4, 576,6, 578,3 e 586,8 eV, che possono essere attribuiti rispettivamente a Cr, Cr2O3, CrO3 e Cr(OH)3 (Fig. 9a e b). in Fig. 9c e d, rispettivamente. La differenza più evidente tra i campioni abiotici e P. aeruginosa era la presenza di Cr6 + e una frazione relativa più alta di Cr (OH) 3 (BE di 586, 8 eV) sotto il biofilm.
Gli ampi spettri XPS della superficie del campione 2707 HDSS nei due supporti sono rispettivamente di 7 giorni e 14 giorni.
(a) 7 giorni di esposizione a P. aeruginosa, (b) 14 giorni di esposizione a P. aeruginosa, (c) 7 giorni in mezzo abiotico e (d) 14 giorni in mezzo abiotico.
L'HDSS mostra alti livelli di resistenza alla corrosione nella maggior parte degli ambienti. Kim et al.2 ha riferito che UNS S32707 HDSS è stato definito come un DSS altamente legato con un PREN superiore a 45. Il valore PREN del campione HDSS 2707 in questo lavoro era 49. Ciò è dovuto al suo alto contenuto di cromo e agli alti livelli di molibdeno e Ni, che sono utili in ambienti acidi e ad alto contenuto di cloruri. Inoltre, una composizione ben bilanciata e una microstruttura priva di difetti sono utili per la stabilità strutturale e la resistenza alla corrosione. i dati sperimentali in questo lavoro suggeriscono che 2707 HDSS non è completamente immune alla MIC dei biofilm di P. aeruginosa.
I risultati elettrochimici hanno mostrato che il tasso di corrosione di 2707 HDSS nel brodo di P. aeruginosa era significativamente aumentato dopo 14 giorni rispetto al mezzo non biologico. Eocp biologico. C'è motivo di credere che questa differenza sia dovuta alla formazione del biofilm di P. aeruginosa. In Fig. 2d, in presenza di P. aeruginosa, il valore icorr di 2707 HDSS ha raggiunto 0,627 μA cm-2, che era un ordine di grandezza superiore a quello del controllo abiotico (0,063 μA cm-2), che era coerente con il valore Rct misurato da EIS. i valori di ance nel brodo di P. aeruginosa sono aumentati a causa dell'attaccamento delle cellule di P. aeruginosa e della formazione di biofilm. Tuttavia, quando il biofilm copre completamente la superficie del campione, l'impedenza diminuisce. Lo strato protettivo viene attaccato per primo a causa della formazione di biofilm e metaboliti del biofilm. il controllo era molto più alto del valore corrispondente dei campioni esposti al brodo di P. aeruginosa. Inoltre, per i campioni abiotici, il valore Rct di 2707 HDSS ha raggiunto 489 kΩ cm2 il giorno 14, che era 15 volte il valore Rct (32 kΩ cm2) in presenza di P. aeruginosa. Pertanto, 2707 HDSS ha un'eccellente resistenza alla corrosione in un ambiente sterile, ma non è resistente all'attacco MIC di P. aeruginosa. biofilm inosa.
Questi risultati possono anche essere osservati dalle curve di polarizzazione in Fig. 2b. La ramificazione anodica è stata attribuita alla formazione del biofilm di Pseudomonas aeruginosa e alle reazioni di ossidazione del metallo. Allo stesso tempo la reazione catodica è la riduzione dell'ossigeno. La presenza di P. aeruginosa ha notevolmente aumentato la densità della corrente di corrosione, circa un ordine di grandezza superiore al controllo abiotico. ha scoperto che la densità di corrente di corrosione della lega 70/30 Cu-Ni è aumentata sotto la sfida del biofilm di P. aeruginosa. Ciò può essere dovuto alla biocatalisi della riduzione dell'ossigeno da parte dei biofilm di Pseudomonas aeruginosa. Questa osservazione può anche spiegare la MIC di 2707 HDSS in questo lavoro. I biofilm aerobici possono anche avere meno ossigeno sotto di loro.
Dikinson et al.38 ha suggerito che le velocità delle reazioni chimiche ed elettrochimiche possono essere direttamente influenzate dall'attività metabolica dei batteri sessili sulla superficie del campione e dalla natura dei prodotti di corrosione. Come mostrato nella Figura 5 e nella Tabella 5, sia il numero di cellule che lo spessore del biofilm sono diminuiti dopo 14 giorni. Ciò può essere ragionevolmente spiegato che dopo 14 giorni, la maggior parte delle cellule sessili sulla superficie di 2707 HDSS è morta a causa dell'esaurimento dei nutrienti nel mezzo 2216E o del rilascio di ioni metallici tossici dalla matrice HDSS 2707. Questa è una limitazione degli esperimenti batch.
In questo lavoro, il biofilm di P. aeruginosa ha promosso l'esaurimento locale di Cr e Fe sotto il biofilm sulla superficie 2707 HDSS (Fig. 6). è paragonabile a quello trovato nell'acqua di mare naturale. La presenza di 17700 ppm Cl- è stata la ragione principale della riduzione del Cr nei campioni abiotici a 7 e 14 giorni analizzati con XPS. la rimozione di Cr dalle superfici in acciaio mediante biofilm di P. aeruginosa, come suggerito da Chen e Clayton.
A causa della crescita batterica, i valori di pH del terreno prima e dopo la coltivazione erano rispettivamente di 7,4 e 8,2. Pertanto, al di sotto del biofilm di P. aeruginosa, è improbabile che la corrosione dell'acido organico sia un fattore che contribuisce a questo lavoro a causa del pH relativamente alto nel terreno di massa. a causa dell'attività metabolica di P. aeruginosa e si è scoperto che aveva lo stesso effetto sul pH in assenza di strisce reattive.
Come mostrato nella Figura 7, la profondità massima della fossa causata dal biofilm di P. aeruginosa era di 0,69 μm, molto più grande di quella del mezzo abiotico (0,02 μm). Ciò è coerente con i dati elettrochimici sopra descritti. resistenza rispetto a 2205 DSS. Ciò non dovrebbe sorprendere, poiché 2707 HDSS ha un contenuto di cromo più elevato, fornendo una passivazione più duratura, grazie alla struttura di fase bilanciata senza precipitati secondari dannosi, che rende più difficile la depassivazione di P. aeruginosa e l'eclissi dei punti di partenza.
In conclusione, sulla superficie dell'HDSS 2707 nel brodo di P. aeruginosa è stata riscontrata una vaiolatura MIC rispetto alla vaiolatura trascurabile nei mezzi abiotici. Questo lavoro mostra che l'HDSS 2707 ha una resistenza MIC migliore rispetto al DSS 2205, ma non è completamente immune alla MIC a causa del biofilm di P. aeruginosa. Questi risultati aiutano nella selezione di acciai inossidabili adatti e nella durata stimata per l'ambiente marino.
Il coupon per 2707 HDSS è fornito dalla School of Metallurgy della Northeastern University (NEU) di Shenyang, in Cina. La composizione elementare di 2707 HDSS è mostrata nella Tabella 1, che è stata analizzata dal dipartimento di analisi e test dei materiali della NEU. Tutti i campioni sono stati trattati in soluzione a 1180 ° C per 1 ora. con carta al carburo di silicio e ulteriormente lucidato con una sospensione di polvere Al2O3 da 0,05 μm. I lati e il fondo sono protetti da vernice inerte. Dopo l'asciugatura, i campioni sono stati risciacquati con acqua deionizzata sterile e sterilizzati con etanolo al 75% (v/v) per 0,5 ore. Sono stati quindi asciugati all'aria sotto luce ultravioletta (UV) per 0,5 ore prima dell'uso.
Il ceppo Marine Pseudomonas aeruginosa MCCC 1A00099 è stato acquistato dal Xiamen Marine Culture Collection Center (MCCC), Cina. La Pseudomonas aeruginosa è stata coltivata aerobicamente a 37°C in flaconi da 250 ml e celle di vetro elettrochimiche da 500 ml utilizzando il terreno liquido Marine 2216E (Qingdao Hope Biotechnology Co., Ltd., Qingdao, Cina). Medio (g/L): 19,45 NaCl, 5,98 MgCl2, 3,24 Na2SO4, 1,8 CaCl2, 0,55 KCl, 0,16 Na2CO3, 0,08 KBr, 0,034 SrCl2, 0,08 SrBr2, 0,022 H3BO3, 0,004 NaSiO3, 0016 NH3, 0016 NH3, 0016 NaH2PO4, 5,0 peptone, 1,0 estratto di lievito e 0,1 citrato ferrico. Autoclavare a 121°C per 20 minuti prima dell'inoculazione. Contare le cellule sessili e planctoniche utilizzando un emocitometro sotto un microscopio ottico a 400 ingrandimenti.
I test elettrochimici sono stati eseguiti in una classica cella di vetro a tre elettrodi con un volume medio di 500 ml. Un foglio di platino e un elettrodo a calomelano saturo (SCE) sono stati collegati al reattore tramite capillari Luggin riempiti con ponti salini, che servono rispettivamente come elettrodi contatore e di riferimento. i campioni sono stati posti in terreno 2216E e mantenuti a una temperatura di incubazione costante (37 °C) in un bagno d'acqua. I dati OCP, LPR, EIS e potenziale polarizzazione dinamica sono stati misurati utilizzando un potenziostato Autolab (riferimento 600TM, Gamry Instruments, Inc., USA). un'onda sinusoidale nell'intervallo di frequenza da 0,01 a 10.000 Hz utilizzando una tensione applicata di 5 mV allo stato stazionario Eocp. Prima della scansione del potenziale, gli elettrodi erano in modalità a circuito aperto fino a quando non veniva raggiunto un valore di potenziale di corrosione libera stabile. Le curve di polarizzazione sono state quindi eseguite da -0,2 a 1,5 V vs.
I campioni per l'analisi metallografica sono stati lucidati meccanicamente con carta SiC bagnata a grana 2000 e quindi ulteriormente lucidati con una sospensione di polvere di Al2O3 da 0,05 μm per l'osservazione ottica. L'analisi metallografica è stata eseguita utilizzando un microscopio ottico. I campioni sono stati incisi con una soluzione di idrossido di potassio al 10% in peso 43.
Dopo l'incubazione, i campioni sono stati lavati 3 volte con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) (pH 7,4 ± 0,2) e quindi fissati con glutaraldeide al 2,5% (v/v) per 10 ore per fissare i biofilm. alleato, la superficie del campione viene spruzzata con una pellicola d'oro per fornire conduttività per l'osservazione SEM. Le immagini SEM sono state focalizzate sui punti con le cellule P. aeruginosa più sessili sulla superficie di ciascun campione. Eseguire l'analisi EDS per trovare elementi chimici. secondo lo standard nazionale cinese (CNS) GB/T4334.4-2000 per rimuovere i prodotti di corrosione e il biofilm sulla superficie del pezzo di prova.
L'analisi della spettroscopia fotoelettronica a raggi X (XPS, ESCALAB250 surface analysis system, Thermo VG, USA) è stata eseguita utilizzando una sorgente di raggi X monocromatica (linea Kα in alluminio a 1500 eV di energia e 150 W di potenza) su un ampio intervallo di energia di legame 0 in condizioni standard -1350 eV. Gli spettri ad alta risoluzione sono stati registrati utilizzando 50 eV di energia di passaggio e 0,2 eV di passo.
I campioni incubati sono stati rimossi e risciacquati delicatamente con PBS (pH 7,4 ± 0,2) per 15 s45. Per osservare la vitalità batterica dei biofilm sui campioni, i biofilm sono stati colorati utilizzando il kit LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit (Invitrogen, Eugene, OR, USA). i punti con verde fluorescente e rosso rappresentano rispettivamente cellule vive e morte. Per la colorazione, una miscela da 1 ml contenente 3 μl di SYTO-9 e 3 μl di soluzione PI è stata incubata per 20 minuti a temperatura ambiente (23 oC) al buio. Successivamente, i campioni colorati sono stati osservati a due lunghezze d'onda (488 nm per le cellule vive e 559 nm per le cellule morte) utilizzando una macchina Nikon CLSM (C2 Plus, Nikon, Giappone). Lo spessore del biofilm è stato misurato in 3-D modalità di scansione.
Come citare questo articolo: Li, H. et al.Microbial corrosion of 2707 super duplex stainless steel by marine Pseudomonas aeruginosa biofilm.science.Rep.6, 20190;doi: 10.1038/srep20190 (2016).
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