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Plasma ricco di piastrine/prp, rigenerazione tissutale, attivazione piastrinica, terapia proliferativa con glucosio, piastrine, terapia proliferativa
Cita questo articolo come: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 maggio 2022) L'effetto del glucosio sulla conta piastrinica e sul volume: implicazioni per la medicina rigenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Le soluzioni di plasma ricco di piastrine (PRP) e glucosio ipertonico sono comunemente utilizzate per l'iniezione nella medicina rigenerativa, a volte insieme.L'effetto del glucosio ipertonico sulla lisi e attivazione piastrinica non è stato riportato in precedenza.Abbiamo testato l'effetto di elevate concentrazioni di glucosio sulla conta piastrinica ed eritrocitaria, nonché sui volumi cellulari nel PRP e nel sangue intero (WB).Si è verificata una rapida riduzione parziale della conta piastrinica con tutte le miscele di glucosio miscelate con PRP o sangue intero, coerente con la lisi parziale. Dopo il primo minuto, la conta piastrinica è rimasta stabile, suggerendo un rapido adattamento delle piastrine residue a un'ipertonicità estrema (>2000 mOsm). Dopo il primo minuto, la conta piastrinica è rimasta stabile, suggerendo un rapido adattamento delle piastrine residue a un'ipertonicità estrema (>2000 mOsm). Dopo un paio di minuti, i trombettisti si sono stabilizzati, quindi si è verificato un errore di registrazione х тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Dopo il primo minuto, la conta piastrinica è rimasta stabile, indicando un rapido adattamento delle piastrine residue a un'ipertonicità estrema (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. Dopo alcuni minuti, il trombettista si è stabilizzato, quindi è possibile adattare la stabilità тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Dopo il primo minuto, la conta piastrinica è rimasta stabile, indicando un rapido adattamento delle piastrine residue allo stato iperosmolare estremo (>2000 mOsm).Concentrazioni di glucosio del 25% e superiori hanno determinato un aumento significativo del volume medio delle piastrine (MPV), indicando uno stadio precoce dell'attivazione piastrinica.Sono necessari ulteriori studi per determinare se si verifica la lisi o l'attivazione piastrinica e se l'iniezione di glucosio ipertonico da sola o in combinazione con PRP può fornire ulteriori benefici clinici.
Negli anni '50, il chirurgo americano George Hackett scoprì di poter alleviare in modo permanente il dolore alle articolazioni e alla schiena in molti pazienti iniettando una soluzione proliferativa nei tendini e nei legamenti.I suoi esperimenti sui conigli mostrarono che il trattamento, che chiamò terapia proliferativa, provocava l'allargamento e il rafforzamento dei tendini.Studi istologici hanno confermato che durante questo processo viene prodotto nuovo collagene [1].
Durante i primi decenni, sono state provate molte diverse soluzioni di distribuzione.Negli anni '90, la maggior parte dei professionisti considerava le alte concentrazioni di glucosio il metodo più sicuro ed efficace.Tuttavia, il meccanismo d'azione rimane poco chiaro.
Pochi studi clinici sono stati condotti nel XX secolo dopo il lavoro di Hackett.Tuttavia, negli anni 2000 c'è stato un rinnovato interesse e sono stati completati con successo diversi studi clinici sulla terapia proliferativa per il trattamento della lombalgia [2], dell'artrosi del ginocchio [3] e dell'epicondilite laterale [4].
La rigenerazione dei tessuti richiede la partecipazione delle cellule staminali.Pertanto, alte concentrazioni di glucosio devono in qualche modo indurre la migrazione, la replicazione e la differenziazione delle cellule staminali.Ipotizziamo che le piastrine possano agire come messaggeri e che alte concentrazioni di glucosio possano indurre le piastrine a rilasciare citochine e fattori di crescita, promuovendo così processi rigenerativi, in particolare la migrazione delle cellule staminali verso aree ad alte concentrazioni di glucosio.
L'attivazione piastrinica precede sempre un aumento del calcio intracellulare [5].Liu et al.nel 2008 ha mostrato che alti livelli di glucosio aumentano l'attività dei canali di tipo 6 canonico del potenziale transitorio del recettore (TRPC6) nella membrana plasmatica, che porta a un afflusso di ioni calcio nelle piastrine [6].Un altro studio ha dimostrato che l'esposizione della zona marginale dei microtubuli agli ioni calcio provoca rilassamento, espansione e deformazione della zona marginale, che a sua volta provoca un cambiamento di forma da disco a sferico, con conseguente volume medio delle piastrine (MPV) [7].
La nostra ipotesi in questo studio è che l'esposizione delle piastrine ad alte concentrazioni di glucosio influisca sulla zona marginale dei microtubuli e sull'ambiente intracellulare, portando ad un aumento del MPV.
Tutti i partecipanti hanno firmato un modulo di consenso informato dopo che i dettagli dello studio sono stati spiegati e prima di ricevere i campioni.In questo studio, sono stati utilizzati solo campioni di PRP con un ematocrito superiore al 2% in modo da poter includere per il confronto la conta degli eritrociti (eritrociti) e il volume corpuscolare medio dei globuli rossi (MCV).
Lo studio è stato condotto in quattro fasi, la prima fase era PRP e le restanti fasi erano sangue intero (Tabella 1).Come descritto in precedenza [8], tutte le forze centrifughe relative (RCF, forza g) sono state calcolate dal punto medio (Rmid, in cm) della colonna di sangue nella siringa centrifuga.Abbiamo scelto di utilizzare MPV come marker di sensibilizzazione piastrinica e conta piastrinica come indicatore di potenziale lisi piastrinica, entrambi facilmente misurabili su analizzatori ematologici standard.
Nella prima fase, 47 volontari hanno donato campioni di sangue: una provetta di acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) e un campione di sangue intero PRP (anticoagulato con citrato di sodio (NaCl, 3%)) (Tabella 1).Posizionare immediatamente il bilanciere nel tubo.L'emocromo completo (CBC) è stato eseguito su campioni di EDTA in triplice copia e i campioni di NaCl sono stati analizzati in triplicato per l'analisi CBC, quindi il PRP è stato preparato con vari metodi descritti sopra [8].Tutti i campioni di PRP sono stati preparati mediante centrifugazione a 900-1000 g.Miscelare ciascun campione di PRP su un agitatore vortex per 5-10 secondi, quindi dividere cinque aliquote da 0,5 ml in provette.
Per valutare l'effetto dell'esposizione piastrinica su concentrazioni elevate di glucosio, quantità uguali (0,5 ml) di glucosio allo 0%, 5%, 12,5%, 25% e 50% in acqua sono state miscelate con campioni di piastrine per ottenere concentrazioni allo 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% e 25% della miscela di glucosio e mescolare le provette su un agitatore per provette per 15 minuti.Il TAC di ciascuna miscela è stato analizzato in triplicato dopo 15 min.Per ogni provetta è stata calcolata la media della conta piastrinica (PLT), della conta dei globuli rossi, dell'MCV e dell'MPV e per tutti i campioni di PRP è stata calcolata la conta piastrinica media, la conta dei globuli rossi, l'MCV e l'MPV.
Dopo che la prima fase della raccolta dei dati è stata completata, abbiamo notato un aumento significativo del volume piastrinico nelle piastrine PRP dopo l'aggiunta di D50W.Le piastrine PRP non rappresentano necessariamente tutte le piastrine nel sangue e il mezzo PRP differisce dal mezzo WB.Pertanto, abbiamo deciso di condurre una seconda fase di sperimentazione sull'effetto dell'aggiunta di D50W al sangue intero.
Per il secondo round, abbiamo scelto una dimensione del campione di 30 in base ai risultati della prima serie, come descritto nella sezione Analisi.In questa serie, 20 volontari hanno donato campioni di sangue (Tabella 1).Il sangue intero (1,8 ml) è stato aspirato in una siringa da 3 ml e anticoagulato con 0,2 ml di NaCl al 40%.La siringa di sangue intero è stata miscelata per cinque secondi con un agitatore a vortice e l'emocromo è stato analizzato in triplicato.Dopo l'analisi, il sangue anticoagulato è stato aggiunto a 2 ml di glucosio al 50% in una siringa da 5 ml (la concentrazione finale di glucosio era di circa il 25% (D25) e collocato in un tubo shake per 30 minuti. Dopo 30 minuti, D25/CBC in WB sono stati analizzati con la conta delle piastrine. Calcolato per ciascun campione prima e dopo l'aggiunta di glucosio.
Poiché le piastrine nel sangue intero sono comunemente esposte al glucosio ipertonico durante la terapia con glucosio proliferativo a causa dell'iniezione minimamente invasiva e non è comune combinare PRP con glucosio ipertonico appena prima dell'iniezione, abbiamo deciso di studiare il glucosio ipertonico in combinazione con WB nella Sezione 1. Fase tre e quattro.In ogni fase, 20 volontari hanno donato 7-8 ml di ACD-A (acido contenente citrato trisodico (22,0 g/l), acido citrico (8,0 g/l) e glucosio (24,5 g/l), soluzione di destrosio citrato) per anticoagulanti del sangue (Tabella 1).Sono state utilizzate solo miscele di glucosio superiori al 12,5% per determinare la percentuale di soglia associata ad un aumento del MPV.Nella terza fase, 1 ml di sangue viene posto in una provetta.Quindi mescolare il sangue su un miscelatore vortex per 10 secondi aggiungendo 1 ml di glucosio al 30%, glucosio al 40% o glucosio al 50% nella provetta per ottenere una concentrazione finale di glucosio rispettivamente del 15%, 20% e 25%.I campioni di glucosio nel sangue sono stati analizzati per l'emocromo immediatamente dopo la miscelazione e ripetuti ogni due minuti per 30 minuti.
Durante la miscelazione iniziale, l'aggiunta di glucosio ipertonico 1:1 e WB o PRP espone le piastrine a concentrazioni superiori al 25% per diversi secondi.Nella quarta fase, per valutare l'effetto del glucosio ipertonico con concentrazioni di picco iniziali minime e testare il limite superiore dell'effetto del glucosio, abbiamo aggiunto solo una piccola quantità di sangue a D25W o D50W.Mettere 1 ml di D25W o D50W in una provetta e aggiungere 0,2 ml di WB agitando il campione su vortex per 10 secondi.In questi casi, il sangue è stato esposto al glucosio a una concentrazione di circa il 20% superiore alla concentrazione finale, anziché del 50% superiore alla concentrazione finale come nella Fase 3, con conseguenti concentrazioni finali di glucosio del 20,8% e del 41,6%.I campioni misti sono stati analizzati allo stesso intervallo di tempo del passaggio 3.
Nella prima fase di ciascuna serie di diluizioni del glucosio, sono stati prelevati 30 campioni poiché questa era la dimensione del campione appropriata per lo studio pilota [9].Alla fine di ogni fase (compresa la prima fase), valutare l'adeguatezza della dimensione del campione utilizzando la formula utilizzata per determinare la dimensione del campione necessaria per stimare la media della variabile di risultato continuo in una popolazione.Formula n = Z2 x SD2 /E2.In questa equazione, Z è il punteggio Z, SD è la deviazione standard ed E è l'errore desiderato [10].Il nostro alfa è 0,05, che corrisponde a un valore Z di 1,96 e ci aspettiamo un errore di 5 (in percentuale).Quindi risolviamo per n = (1.962 x DS2)/52.I risultati hanno mostrato che la dimensione del campione richiesta per ciascuna fase era inferiore al numero effettivo raccolto.
Durante i periodi 1, 3 e 4 utilizzando più di una concentrazione di glucosio, l'effetto delle diverse concentrazioni di glucosio è stato analizzato confrontando la variazione frazionaria tra il tempo 0 e ogni tempo successivo (fase 1 a 15 minuti, periodo 3 a 15 minuti).e quattro a 15 secondi, quindi ogni due minuti.) I tassi di variazione per ciascun periodo di tempo sono stati confrontati utilizzando il test U di Mann-Whitney perché i dati non seguivano una distribuzione normale come determinato dal test di normalità di Shapiro-Wilk.Poiché è stata eseguita un'analisi 1 a 1 di diversi gruppi (cinque) nella prima, terza e quarta fase (cinque in totale), è stata eseguita una correzione di Bonferroni per regolare il valore alfa desiderato a ≤0,01 ma non ≤0,05.
Riduzione della conta piastrinica con tutte le concentrazioni di destrosio ipertonico e aumento dell'MPV nelle piastrine PRP a una concentrazione di destrosio > 12,5%: la conta piastrinica PRP è aumentata da una a cinque volte la concentrazione rispetto al sangue intero basale, variando in base al metodo (non raffigurato). Riduzione della conta piastrinica con tutte le concentrazioni di destrosio ipertonico e aumento dell'MPV nelle piastrine PRP a una concentrazione di destrosio > 12,5%: la conta piastrinica PRP è aumentata da una a cinque volte la concentrazione rispetto al sangue intero basale, variando in base al metodo (non raffigurato). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоци тах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цел ьной кровью, в зависимости от метода (non показано). Diminuzione della conta piastrinica a tutte le concentrazioni ipertoniche di destrosio e aumento dell'MPV nelle piastrine PRP a una concentrazione di destrosio > 12,5%: la conta piastrinica PRP è aumentata di 1-5 volte rispetto al sangue intero basale, a seconda del metodo (non mostrato). ).在> 12.5% ​​的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV 增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 A > 12,5% di concentrazione di glucosio, l'alta concentrazione di glucosio riduce la conta ematica, l'MPV ematico di PRP aumenta: rispetto a 与基线全血, la conta ematica di PRP aumenta da 1 a 5 volte quella della concentrazione (non descritta). При концентрациях глюкозы >12,5% rispetto a гипертонической глюкозы снижали количество тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (non indicato ). A concentrazioni di glucosio > 12,5%, tutte le concentrazioni di glucosio ipertesi hanno ridotto la conta piastrinica e aumentato l'MPV nelle piastrine PRP: la conta piastrinica PRP è aumentata da 1 a 5 volte rispetto alle concentrazioni basali nel sangue intero, a seconda del metodo (come descritto).La Figura 1 mostra che il numero di piastrine è diminuito di quasi il 75% dopo la diluizione in acqua e del 20-30% dopo 15 minuti di diluizione con diverse concentrazioni di glucosio rispetto al PRP basale e una diluizione 1:1 aggiustata per il volume (1-k1 con correzione del volume).k -1 allevamento).1 allevamento).
Il numero di cellule in ogni diluizione è espresso come frazione del numero originale prima della diluizione.
L'MPV è diminuito minimamente durante la produzione di PRP, senza ulteriori variazioni delle concentrazioni di diluizione al 12,5% in acqua o glucosio (comprese le miscele di glucosio PRP al 25%) e aumentato di oltre il 20% dopo la diluizione nella soluzione di glucosio al 50% (Fig. 2).).Al contrario, gli eritrociti non hanno mostrato variazioni significative di volume a qualsiasi diluizione diversa da H2O.
Il volume medio di cellule in ciascuna diluizione è espresso come percentuale del volume originale prima della diluizione.
Una riduzione simile ma meno pronunciata della conta piastrinica e un aumento della CVR sono stati osservati in BC esposti al 50% di glucosio (da formulare con il 25% di glucosio).La tabella 2 confronta i numeri e i volumi cellulari nel sangue intero diluito in destrosio al 50% con i dati PRP di fase 1 diluiti in destrosio al 50%.I cambiamenti nella conta dei globuli rossi e nel MCV dei globuli rossi non erano evidenti e non erano al centro della nostra attenzione.
DS = deviazione standard, MD = differenza media tra i gruppi, SE = deviazione standard della differenza media, RBC = eritrociti, PLT = piastrine, PRP = plasma ricco di piastrine, WB = sangue intero
Dopo aver aggiunto D50W a WB, la percentuale di perdita piastrinica aggiustata per la diluizione è stata del 7,7% (310±73 vs. 286±96) rispetto al 17,8% per la diluizione PRP in D50W (664±348 vs. 544±277).MPV WB è aumentato del 16,8% (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mentre MPV PRP è aumentato del 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Sebbene le differenze medie sia nella riduzione della conta piastrinica che nell'aumento di MPV fossero significativamente maggiori con PRP, le variazioni nella riduzione della conta piastrinica all'interno della WB erano quasi significative (da 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e l'aumento di MPV era significativo (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Sebbene le differenze medie sia nella riduzione della conta piastrinica che nell'aumento di MPV fossero significativamente maggiori con PRP, le variazioni nella riduzione della conta piastrinica all'interno della WB erano quasi significative (da 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) e l'aumento di MPV era significativo (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Sebbene le differenze medie sia nella riduzione della conta piastrinica che nell'aumento della CVR fossero significativamente maggiori con PRP, le variazioni nel declino della conta piastrinica all'interno del WB erano quasi significative (da 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). l'aumento del MPV è stato significativo (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 prp 在 血小板 计数 减少 和 mpv 增加 方面 的 差异 显着 更 大 ， 但 WB 内血小板 计数 减少 的 变化 几乎 是 是 显着 的 （310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； P = .06） 和 MPV 的 的 的 （（10.5 ± 0,5 16.8) p <.001）。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大, 但 但 内血小板 计数 减少 的几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+1 6.8) p < .001）。La variazione nella riduzione della conta piastrinica all'interno del WB era quasi significativa (da 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), sebbene il PRP presentasse differenze medie significativamente maggiori nel declino della conta piastrinica e nell'aumento del MPV.e l'aumento del MPV è stato significativo.(da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) ð < 0,001). (da 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Era necessaria una concentrazione finale del 20% di glucosio per vedere un cambiamento significativo nel MPV, ma il cambiamento nel MPV era più pronunciato alla concentrazione finale del 25%.La perdita piastrinica si è stabilizzata dopo il declino iniziale.Abbiamo notato una forte diminuzione iniziale della CVR, tuttavia, la CVR è stata rapidamente ripristinata alla concentrazione finale di glucosio del 25%, che era significativamente più alta dei livelli di CVR osservati alle concentrazioni finali di glucosio del 20% e 15% (Fig. 3 e a sinistra della Tabella 3; riquadri ombreggiati).indicare p-value ≤ alfa con una correzione di Bonferroni di 0,01).C'è stato anche un forte calo iniziale del numero di PLT, osservato nella fase iniziale di 0-15 s, e poi rimasto stabile (da 15 s a 30 min; a sinistra della tabella 4).
L'aggiunta di varie concentrazioni di glucosio al sangue intero ha provocato una rapida diminuzione iniziale di MPV seguita da un recupero dipendente dalla concentrazione di oltre il 20%.La legenda mostra la concentrazione di glucosio dopo la diluizione.D15, D20 e D25 sono stati eseguiti in una diluizione 1:1.D21 e D41 sono stati eseguiti con una diluizione 1:5.
La tabella 4 mostra la variazione della conta piastrinica quando diluita in glucosio ipertonico.Abbiamo osservato una relazione dose-dipendente tra il calo immediato dei numeri PLT alla diluizione 1:1 e alla diluizione 1:5.Confrontando le diluizioni 1:1 come gruppo singolo con le diluizioni 1:5, il gruppo 1:1 ha avuto un'immediata diminuzione della conta piastrinica inferiore al gruppo 1:5 66±48.000 (23%) rispetto a 99±69.000 (37%)., p = 0,014) nel gruppo 1:5.Dopo un calo iniziale al primo punto di misurazione, la conta piastrinica come percentuale di glucosio si è stabilizzata (Fig. 4).
Quando il sangue intero viene aggiunto al glucosio in un rapporto 1:1, la conta piastrinica si riduce di circa il 25%.Tuttavia, quando è stato aggiunto sangue intero in un rapporto di 1:5, la riduzione è stata molto maggiore, circa il 50%.
Il 41% di glucosio ha aumentato l'MPV più velocemente e in modo più drammatico rispetto al 25% o al 21%.I risultati di MPV sono mostrati nella Figura 3. A tutte le altre diluizioni, non è stata osservata alcuna diminuzione iniziale immediata di MPV dopo l'aggiunta del 50% di glucosio.Quando si utilizzava il 25% di glucosio (concentrazione di glucosio 20,8% alla diluizione finale), la variazione di MPV era paragonabile alla variazione di glucosio al 20% a una diluizione 1:1 (Fig. 3).Sebbene le variazioni di MPV fossero inizialmente maggiori alla concentrazione mista del 41% che al 25%, la differenza di MPV tra il 41% e il 25% dopo 16 minuti non era più significativa (Tabella 3, a destra).È anche interessante notare che il 25% di glucosio ha aumentato l'MPV in modo più efficace rispetto al 20,8%.
Questo studio in vitro ha parzialmente confermato la nostra ipotesi. Ha mostrato una potenziale lisi piastrinica parziale mediante miscela di destrosio, un rapido adattamento delle piastrine a ipertonicità estrema e un aumento significativo del MPV in risposta a concentrazioni > 25% di destrosio ipertonico. Ha mostrato una potenziale lisi piastrinica parziale mediante miscela di destrosio, un rapido adattamento delle piastrine a ipertonicità estrema e un aumento significativo del MPV in risposta a concentrazioni > 25% di destrosio ipertonico. A causa di un potente segnale acustico, il suono del trampolino di lancio viene attivato о экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Ha mostrato una potenziale lisi piastrinica parziale con destrosio, un rapido accomodamento piastrinico a ipertonicità estrema e un aumento significativo di MPV in risposta a livelli ipertonici di destrosio >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应端高渗，以及响应> 25%浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。以及 响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Per ottenere un suono potente e stabile, i trombettisti si adattano al suono, quindi adattano i trombi con l'aumento del tasso di cambio e l'aumento della percentuale di MPV al di fuori del tasso di conversione del tasso di cambio > 25%. Mostra una potenziale lisi piastrinica parziale da miscele di glucosio, un rapido adattamento piastrinico a ipertonicità estrema e un aumento significativo di MPV in risposta a glucosio ipertonico > 25%.L'aumento iniziale era massimo al 41,6% di esposizione al glucosio, ma l'aumento di MPV si avvicinava al 25% di esposizione al glucosio circa 20 minuti dopo l'esposizione.
La concentrazione delle piastrine è influenzata dal glucosio.Abbiamo notato che la quantità di PLT diminuiva a tutte le diluizioni di glucosio.Un forte calo del numero di piastrine nelle diluizioni H2O (0%) della serie PRP può essere associato alla lisi osmotica.In alternativa, questo potrebbe essere un artefatto causato dall'aggregazione piastrinica, ma questo è in contrasto con la mancanza di cambiamento MPV a questa diluizione.Questa scoperta significa che alcune piastrine sono molto sensibili all'ipoosmolarità.
In tutte le diluizioni 1:1 del glucosio, la quantità di PLT è diminuita del 20-30%, anche di D5W (ipotonica a 252 mOsm), il che può indicare uno specifico effetto non osmotico del glucosio, poiché sia ​​PLT che MPV sono rimasti invariati a un aumento di tre volte della concentrazione.glucosio.da D5W a D25W.Infatti, le concentrazioni di PLT tendevano ad aumentare leggermente con l'aumentare dell'osmolarità.
La diminuzione del PLT tra diluizioni 1:1 e 1:5 significa che l'effetto di dissoluzione dipende dalla concentrazione di glucosio iniziale e finale.Se dipendesse solo dalla concentrazione iniziale, ci si aspetterebbe di vedere una differenza nella riduzione del PLT tra le concentrazioni 1:1.Ma non lo facciamo.Se l'effetto di lisi dipende solo dalla concentrazione finale di glucosio, allora non ci aspettiamo molta differenza tra una diluizione 1:1 del 20% e una diluizione 1:5 del 20,8%.Eppure ce l'abbiamo fatta.
Se la perdita piastrinica si verifica a causa della lisi piastrinica, si forma un lisato parziale, dopo il quale le citochine e i fattori di crescita vengono rilasciati nell'ambiente extracellulare.Diversi studi hanno dimostrato che il lisato piastrinico è efficace quasi quanto il PRP come soluzione di proliferazione [11].Il PRP stesso ha dimostrato di essere una soluzione efficace per il trattamento della proliferazione [12-14].
Le piastrine inattive circolano sotto forma di un disco rinforzato con diverse strutture interne.Durante l'attivazione, assumono una forma più sferica o ameba, con conseguente aumento di volume.L'aumento di volume richiede un aumento della superficie, che è il risultato dell'estrusione del sistema di tubuli aperti (OCS) e dell'aggiunta di granuli esocitici alla membrana.Resta da determinare se l'aumento di MPV indotto dal glucosio ipertonico coinvolge uno o entrambi questi meccanismi, ma se quest'ultimo, allora un aumento di MPV indicherebbe degranulazione.
Questo studio ha dimostrato che l'esposizione ad alte concentrazioni di glucosio su PRP o piastrine del sangue intero ha provocato un aumento del MPV entro 15 minuti con una concentrazione di glucosio rispettivamente del 25% e del 41,6%.
L'aumento del MPV piastrinico può essere dovuto alla dilatazione dei grovigli di microtubuli circostanti in risposta all'afflusso di calcio.Liu et al.È stato dimostrato che il glucosio media l'afflusso di calcio attraverso il canale piastrinico TRPC6 [6].La nostra ipotesi è che il glucosio induca il rilassamento dei grovigli di microtubuli, portando ad un aumento di MPV e sensibilizzazione e/o attivazione piastrinica.Tuttavia, a giudicare dai nostri risultati, questa è solo una parte della storia.Nei nostri test, nessuna concentrazione inferiore a D25W ha comportato un aumento del MPV.Dato che non abbiamo testato l'esposizione a concentrazioni di glucosio comprese tra il 12,5% e il 25%, i nostri risultati di fase 1 suggeriscono che potrebbe esserci una soglia in questo intervallo di concentrazioni di glucosio che porta ad un aumento del MPV.Ulteriori test nelle fasi 3 e 4 hanno mostrato che il 20-25% di glucosio sembra essere la soglia per questo, ma non è chiaro perché.
Abbiamo anche osservato una diminuzione del ~ 9% in MPV dopo la centrifugazione.Non è chiaro se questa diminuzione di MPV sia dovuta a piastrine più grandi e più dense intrappolate nello strato RBC della centrifuga.Questa osservazione può essere importante per i medici in quanto può implicare che le piastrine PRP siano un sottoinsieme più piccolo e meno denso delle piastrine WB.
In uno studio precedente, abbiamo dimostrato che la preparazione del PRP con metodi manuali è poco costosa [8].Se il glucosio sensibilizza le piastrine tissutali o il PRP, rendendole più suscettibili all'attivazione, o se il PRP viene prodotto con proprietà di lisato parziale, ciò può migliorare la rigenerazione e ridurre la necessità di terapia.Pertanto, la combinazione di PRP e glucosio altamente concentrato può essere più conveniente rispetto al PRP o al glucosio da soli.
Il nostro studio ha diversi difetti.Innanzitutto, utilizziamo il PRP ottenuto da diversi metodi.Questo può portare a risultati contrastanti.In secondo luogo, non siamo stati in grado di eseguire un'analisi biochimica di nessuno dei nostri campioni per determinare con maggiore precisione se si fosse verificata l'attivazione piastrinica.Vorremmo misurare la P-selectina, il fattore piastrinico 4, gli aggregati piastrinici monocitici o altri marcatori di attivazione piastrinica per comprendere meglio il grado o la presenza della degranulazione dei granuli alfa, ma questo va oltre lo scopo di questo studio.In terzo luogo, non siamo stati in grado di confermare mediante microscopia elettronica o altri metodi che l'aumento di MPV nelle piastrine esposte al glucosio fosse dovuto all'effetto sui grovigli di microtubuli.
Miscele di WB o PRP con glucosio al 25% hanno aumentato l'MPV, segnalando l'inizio dell'attivazione piastrinica, sebbene questo studio non abbia dimostrato la progressione dell'aggregazione o della degranulazione.La miscela di glucosio ipertonico ha provocato la perdita di piastrine, probabilmente rappresentando un effetto litico.L'attivazione parziale o la lisi delle piastrine può causare la rigenerazione dei tessuti dopo l'iniezione di piastrine.Non è chiaro a quali conseguenze cliniche possano portare questi cambiamenti.Ulteriori studi hanno dimostrato misurazioni più accurate dell'attivazione o della lisi e hanno valutato i diversi effetti clinici delle miscele ipertoniche di glucosio con WB o PRP.
La terapia proliferativa del glucosio è una terapia rigenerativa semplice ed economica che si sta rapidamente espandendo e supporta la ricerca clinica.Questo studio suggerisce un meccanismo fisiologico che, se confermato, potrebbe aiutarci a comprendere parte del meccanismo rigenerativo della terapia proliferativa.
Biomedical and Health Informatics presso l'Università del Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Soggetti umani: tutti i partecipanti a questo studio hanno dato o non dato il consenso.L'International Society for Cellular Medicine ha rilasciato l'approvazione ICMS-2017-003.Il seguente protocollo è stato approvato per un ulteriore utilizzo dall'Institutional Review Board della International Society for Cellular Medicine: Titolo: Calcolo della resa del farmaco nel plasma ricco di piastrine basato sulla conta piastrinica CBC al basale.Soggetti animali: tutti gli autori hanno confermato che in questo studio non sono stati coinvolti animali o tessuti.Conflitti di interesse: in conformità con il modulo di divulgazione uniforme dell'ICMJE, tutti gli autori dichiarano quanto segue: Informazioni sul pagamento/servizio: tutti gli autori dichiarano di non aver ricevuto sostegno finanziario da alcuna organizzazione per il lavoro presentato.Rapporti finanziari: tutti gli autori dichiarano di non avere attualmente o negli ultimi tre anni rapporti finanziari con qualsiasi organizzazione che possa essere interessata al lavoro presentato.Altre relazioni: Tutti gli autori dichiarano che non ci sono altre relazioni o attività che possono influenzare il lavoro presentato.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al.(17 maggio 2022) L'effetto del glucosio sulla conta piastrinica e sul volume: implicazioni per la medicina rigenerativa.Cura 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
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