Javascript מושבת כעת בדפדפן שלך. חלק מהתכונות של אתר זה לא יפעלו כאשר javascript מושבת.
הירשם עם הפרטים הספציפיים שלך ותרופה ספציפית לעניין ואנו נתאים את המידע שאתה מספק למאמרים במסד הנתונים הנרחב שלנו ונשלח לך בדוא"ל עותק PDF.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
סטפניה סטלה, 1,2 סילביה ריטה ויטלה, 1,2 פדריקה מרטורנה, 1,2 מיקלה מאסימינו, 1,2 ג'וליאנה פבונה, 3 קטיה לנזפאמה, 3 סבסטיאנו ביאנקה, 4 קיארה ברונה, 5 כריסטינה גורגונה, 6 מרקו פיצ'רה, 6, 7 ליוויה מנצ'למנט, אוניברסיטת קטלין ומנפרי רפואה 6, 7 ליביה, מחלקת רפואה של C1lin, Catzellan 95123, איטליה; 2 המרכז לאונקולוגיה והמטולוגיה ניסויית, AOU Policlinico "G.Rodolico – San Marco", Catania, 95123, איטליה;3 אונקולוגיה רפואית, AOU Policlinico "G.רודוליקו – סן מרקו”, קטניה, 95123, איטליה;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, איטליה;5 Medicine Genetics, ASP, סירקיוז, 96100, איטליה;6 המחלקה למדעי ביו-רפואה וביוטכנולוגיה, אוניברסיטת קטניה, גנטיקה רפואית, קטניה, איטליה, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, איטליה תקשורת: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] מטרה: מוטציות של קו גרמי ב-BRCA1 ו-BRCA2 וסרטן שד מבוסס (BC), שחלות (OC) ואחרים הקשורים לסיכון לכל החיים לסרטן. בדיקת הגן BRCA היא המפתח להערכת סיכון אינדיבידואלי, כמו גם למציאת שיטות מניעה בנשאים בריאים והתאמת טיפולים בחולי סרטן. השכיחות רחבה של נתיב BRCA 2 ואזור גיאוגרפי על פני נתיבים גיאוגרפיים ו-BRCA1. וריאנטים אוגניים במשפחות סיציליאניות, חסרים מחקרים המכוונים ספציפית לאוכלוסיות במזרח סיציליה. מטרת המחקר שלנו הייתה לחקור את השכיחות וההפצה של שינויים פתוגניים ב-BRCA בקבוצת חולי BC ממזרח סיציליה ולהעריך את הקשר שלהם עם תכונות BC ספציפיות תוך שימוש בדור הבא של הדור הבא של רצף גידולים, ו-Correlation proindex. ל-35 מטופלים (9%) הייתה גרסה פתוגנית של BRCA, 17 (49%) ב-BRCA1 ו-18 (51%) בשינויים ב-BRCA2.BRCA1 שכיחים בחולי BC טריפל-שליליים, ואילו מוטציות BRCA2 שכיחות יותר בחולי BC לומינלי. בהשוואה לנשאים שאינם נשאים, לנבדקים עם דרגות BRCA1 גבוהות יותר, היו ממצאים בעלי דרגות גידול גבוהות יותר של BRCA1 וגרסאות גידול מובהקות. מצב מוטציה בחולי BC ממזרח סיציליה ומאשר את תפקידו של ניתוח NGS בזיהוי חולים עם BC תורשתי. בסך הכל, נתונים אלו תואמים ראיות קודמות התומכות בסריקה של BRCA למניעה וטיפול נאותים בסרטן בנשאי מוטציה.
סרטן השד (BC) הוא הגידול הממאיר השכיח ביותר בעולם והסרטן הקטלני ביותר בנשים.1 המאפיינים הביולוגיים הקובעים פרוגנוזה של BC והתנהגות קלינית נחקרו בהרחבה והובהרו חלקית לאורך זמן. למעשה, מספר סמני פונדקאות משמשים כיום כדי לסווג BC לתת-סוגים מולקולריים שונים. הם אסטרוגן (ER) וקולטן לגידול אנושי (R) 2) הגברה, אינדקס שגשוג Ki-67 ודרגת גידול (G).2 השילוב של משתנים אלו זיהה את קטגוריות ה-BC הבאות: 1) גידולים לומינליים, המראים ביטוי ER ו/או PgR, היוו 75% מה-BCs. גידולים אלו חולקו עוד יותר ל-Luminal A, כאשר Ki-67 היה מתחת ל-20% ו-HER-67 שלילי, ב-Ki-2 ו-HER שלילי ב-20% ו-HER-6. נוכחות של הגברה של HER2, ללא קשר לאינדקס התפשטות;2) גידולי HER2+ שהם ER ו-PgR שליליים אך מראים הגברה של HER2. קבוצה זו מהווה 10% מכלל גידולי השד;3) סרטן שד טריפל שלילי (TNBC), שאינו מראה ביטוי ER ו-PgR והגברת HER2, מהווה כ-15% ממקרי סרטן השד.2-4
בין תת-סוגי BC אלה, דרגת הגידול ואינדקס התפשטות מייצגים סמנים ביולוגיים של חתך רוחביים הקשורים ישירות ובלתי תלוי לתוקפנות הגידול ולפרוגנוזה.5,6
בנוסף למאפיינים הביולוגיים שהוזכרו לעיל, התפקיד של שינויים גנטיים תורשתיים המובילים להתפתחות של BC הפך חשוב יותר ויותר במהלך השנים האחרונות.7 כ-1 מכל 10 גידולי שד עוברים בתורשה עקב שינויים בקו הנבט בגנים ספציפיים.8 שני מחקרים אפידמיולוגיים גדולים שכללו יותר מ-180,000 נשים, BRCA, BRCA, זוהו לאחרונה שמונה קבוצות של A1, BRCA של נשים 2, CHK2, PALB2, RAD51C ו-RAD51D) האחראים העיקריים ל-BC תורשתי. בין הגנים הללו, BRCA1 ו-BRCA2 (להלן יכונו BRCA1/2) הראו את המתאם החזק ביותר עם התפתחות גידולי שד.9-12 למעשה, קו הנבט מגדיל באופן משמעותי את הסיכון ל-BRCA1/2, כמו גם סיכון מוטי של BRCA1/2. , לבלב, מעי גס ומלנומה. מגיל 13 עד 80 שנים, השכיחות המצטברת של BC היא 72% בנשים עם גרסה פתוגנית של BRCA1 (PV) ו-69% בנשים עם BRCA2 PV.14
יש לציין כי פרסום שנערך לאחרונה מצביע על כך שהסיכון ל-BC תלוי בסוג ה-PV. למעשה, בהשוואה לגרסאות קטיעה פתוגניות, וריאנטים של missense בוהטים, במיוחד בגן BRCA1, קשורים לסיכון מופחת ל-BC, במיוחד בנשים מבוגרות.15
הנוכחות של BRCA1 או BRCA2 PV הייתה קשורה למאפיינים ביולוגיים וקליקו-פתולוגיים שונים.16,17 BCs הקשורים ל-BRCA1 נוטים להיות אגרסיביים מבחינה קלינית, מובחנים בצורה גרועה ושגשוג גבוה. הגידולים הללו הם בדרך כלל שליליים משולשים ויש להם גיל מוקדם של הופעה. גידולים המתרחשים בחולים עם BRCA2-מוטציה, מציגים בדרך כלל גידולים מתונים בדרגה מתונה ו-proliferer. s שכיחים יותר בלומן B ומתרחשים בדרך כלל בקרב מבוגרים.16-18 יש לציין שמוטציות ב-BRCA1 ו-BRCA2 מגבירות את הרגישות לטיפולים ספציפיים, כולל מלחי פלטינה ותרופות ממוקדות כגון מעכבי פולימראז (PARPi).19,20
במהלך השנים האחרונות, היישום של רצף הדור הבא (NGS) בפרקטיקה הקלינית אפשר למספר הולך וגדל של חולי BC לעבור בדיקות מולקולריות לגילוי תסמונות רגישות לסרטן, כולל BRCA1/2.21 במקביל, הגדרות המבוססות על קריטריונים מדויקים לגבי היסטוריה משפחתית, דמוגרפית וקליקופתולוגית שראויה לזיהוי טוב יותר של מאפיינים אינדיבידואליים, BR2CA/2. הסתכלות על בדיקת BRCA1/2 באוכלוסיות ספציפיות, תוך הדגשת הבדלים בין אזורים גיאוגרפיים.24-27 למרות שקיימים דיווחים על קבוצת ה-BC במערב סיציליה, זמינים פחות נתונים על סקר BRCA1/2 באוכלוסיית מזרח סיציליה.28,29
אנו מתארים כאן את התוצאות של בדיקת BRCA1/2 של קו הנבט בחולי BC ממזרח סיציליה, ומתאם עוד יותר את הנוכחות של מוטציות BRCA1 או BRCA2 עם המאפיינים הקליקו-פתולוגיים העיקריים של גידולים אלה.
מחקר רטרוספקטיבי בוצע ב"מרכז לאונקולוגיה והמטולוגיה ניסויית" בבית החולים פוליקליניקו. רודוליקו - סן מרקו בקטניה. מינואר 2017 עד מרץ 2021, סך של 455 חולים עם סרטן השד והשחלות, מלנומה, לבלב או ערמונית הופנו לבדיקת המעבדה שלנו לאבחון מולקולרי BRCA/זה הובנה בבדיקת המעבדה הגנטית של BRCA/2. הלסינקי וכל המשתתפים סיפקו הסכמה מדעת בכתב לפני ניתוח מולקולרי.
מאפיינים היסטולוגיים וביולוגיים (ER, PgR, HER2 status, Ki-67 ודרגה) של BC הוערכו על דגימות ליבה של ביופסיה או ניתוח, תוך התחשבות רק במרכיבי גידול אגרסיביים. בהתבסס על מאפיינים אלה, BCs סווגו כדלקמן: luminal A (ER+ ו/או PgR+, HER2-, B00 Ki-7+ ER, HER2-,+Ki-6,+, HER2-0, Ki-6%) -67≥20%), B-HER2+ לומינלי (ER ו/או PgR+, HER2+), HER2+ (ER ו-PgR-, HER2+) או שלילי משולש (ER ו-PgR-, HER2-).
לפני הערכת מצב המוטציות BRCA1 ו-BRCA2, צוות רב תחומי הכולל אונקולוג, גנטיקאי ופסיכולוג ערך ייעוץ גנטיקה של הגידול לכל חולה כדי לקבוע את נוכחות BRCA1 ו/או BRCA1.או אנשים עם סיכון גבוה ל-PV בגן BRCA2. בחירת המטופל בוצעה לפי הנחיות האגודה האיטלקית לאונקולוגיה רפואית (AIOM) והמלצות סיציליאניות מקומיות.30,31 קריטריונים אלה כוללים: (i) היסטוריה משפחתית של וריאנטים פתוגניים ידועים בגנים רגישים (למשל, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) זכרים עם BC;(iii) אלה עם BC ו-OC;(iv) נשים עם BC <36 שנים, TNBC < 60 שנים, או דו-צדדיים BC < 50 שנים;(v) היסטוריה רפואית אישית של BC <50 שנים ולפחות קרוב משפחה מדרגה ראשונה: (א) BC < 50 שנים;(ב) OC לא רירי ולא גבולי בכל גיל;(ג) דו צדדי BC;(ד) זכר לפני הספירה;(ה) סרטן הלבלב;(ו) סרטן הערמונית;(vi) שניים או יותר היסטוריה אישית של BC > 50 שנים והיסטוריה משפחתית של BC, OC או סרטן הלבלב עבור קרובי משפחה שהם קרובי משפחה מדרגה ראשונה זה לזה (כולל קרובי משפחה איתם היא קרובת משפחה מדרגה ראשונה);(vii) היסטוריה אישית של OC ולפחות קרוב משפחה מדרגה ראשונה: (א) לפני הספירה <50 שנים;(ב) NOC;(ג) דו צדדי BC;(ד) זכר לפני הספירה;(vii) נקבה עם OC serous בדרגה גבוהה.
דגימת דם היקפית של 20 מ"ל התקבלה מכל מטופל ונאספה לצינורות EDTA (BD Biosciences). DNA גנומי בודד מדגימות דם מלא בנפח 0.7 מ"ל באמצעות QIAsymphony DSP DNA Midi Kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, איטליה) לפי הוראות היצרן והועבר דרך a Flubitor® 3. כימות.העשרת היעד והכנת הספרייה מבוצעות על ידי Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, מוכן לטעינה לערכת Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 להכנה אוטומטית של ספרייה לפי הוראות היצרן. הערכה מורכבת משתי בריכות פריימר PCR משולבות שניתן להשתמש בהן כדי לחקור את כל הגנים BRCA1 (NM_00730) (NM_00730)_00730 (NM_00730) וBRCA1 (NM_00730) (BRCA1)_00730. בקצרה, 15 μL מכל DNA דגימה מדולל (10 ng) נוספו לצלחות עם ברקוד להכנת ספרייה וכל הריאגנטים והחומרים המתכלים הועמסו על מכשיר Ion Chef™. הכנת ספרייה אוטומטית ואיגום ספריית דגימות מבודדת בוצעו לאחר מכן במכשיר Ion Chef™. לאחר מכן הוערך מספר הספריות שהוכנו על ידי ה-Fishometer, 0 Fisherificer. MA, ארה"ב) על פי הוראות היצרן. לבסוף, ספריות משולבות ביחס שווה-מולרי בשפופרות דגימה של ספריית Ion Chef™ (שפופרות עם ברקוד) ומוטענות על מכשיר Ion Chef™. הריצוף בוצע באמצעות מכשיר Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Chip an Fisher Scientific) שבוצע על ידי Amino Fisher Scientific (Thermo Chip an I Scientific 510). plicon Suite (SmartSeq srl) ותוכנת Ion Reporter.
כל מינוח הווריאציות פעל לפי ההנחיות הנוכחיות של קונסורציום הגנום האנושי האנושי, זמין באינטרנט (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). המשמעות הקלינית של וריאנטים BRCA1/2 הוגדרה באמצעות הסיווג של ה-International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutenmacs/Interpreting Database Germline/Mutenmac) UP, BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD ו-UMD. הסיווג כולל חמש קטגוריות סיכון מובחנות: שפירים (קטגוריה I), שפירים סבירים (קטגוריה II), וריאנט בעל משמעות לא ברורה (VUS, קטגוריה III), פתוגנית צפויה (קטגוריה IV), ופתוגני (קטגוריה V, גם ניתוח של מבנה חלבון ו-3 אפקטים של חלבון מידע 3). 32
כדי להקצות משמעות קלינית פוטנציאלית לכל VUS, נעשה שימוש באלגוריתמים הבאים לחיזוי חלבון חישובי: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) ו-Align_agn.gvgvg.gd.gd.gd.gvgah/ input.php). וריאציות שסווגו כמחלקות 1 ו-2 נחשבו לסוג פראי.
רצף Sanger אישר את נוכחותו של כל וריאנט פתוגני. בקצרה, זוג פריימרים ספציפיים תוכנן עבור כל וריאנט שזוהה על ידי שימוש ברצפי ההתייחסות של הגנים BRCA1 ו-BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 ו-NG_012772.3, NM_000059 שבוצעו על ידי PCR, בהתאמה). צינג.
מטופלים שנבדקו שליליים עבור הגן BRCA1/2 נבדקו על ידי הגברה תלוית בדיקה מולטיפלקסית (MLPA) על פי הוראות היצרן להערכת נוכחותם של סידורים גנומיים גדולים (LGR). בקצרה, דגימות DNA עוברות דנטורציה ונעשה שימוש בעד 60 בדיקות ספציפיות לגנים BRCA1 ו-BRCA2, שכל אחת מהן מזהה רצף DNA באורך 60 amplification של מוצרים ספציפיים באורך של כ-60 DNA. של אמפליקוני PCR, נותחו לאחר מכן על ידי אלקטרופורזה קפילרית ועל ידי תוכנת Cofalyser.Net בשילוב עם טבלאות Cofalyser הספציפיות לאצווה (www.mrcholland.com).
משתנים קלינקופתולוגיים נבחרים (דרגה היסטולוגית ואינדקס שגשוג Ki-67%) היו קשורים לנוכחות של BRCA1/2 PV, שחושבו באמצעות תוכנת Prism v. 8.4 תוך שימוש במבחן המדויק של Fisher בהנחה שערך p <0.05 הוא משמעותי.
בין ינואר 2017 למרץ 2021, 455 מטופלים נבדקו לאיתור מוטציות BRCA1/2 בקו הנבט. בדיקת מוטציות בוצעה במרכז לאונקולוגיה והמטולוגיה ניסויית של בית החולים פוליקליניקו. על פי ההנחיה הסיציליאנית (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indic.it/Indic. 020), הרודוליקו של קטניה – סן מרקו" בסך הכל, 389 חולים היו סרטן השד, 37 סרטן השחלות, 16 סרטן הלבלב, 8 סרטן הערמונית ו-5 מלנומות.התפלגות החולים לפי סוג הסרטן ותוצאות הניתוח מוצגת באיור 1.
איור 1 מציג תרשים זרימה המציג סקירה כללית של המחקר. חולים עם גידולי שד, מלנומה, לבלב, ערמונית או שחלה נבדקו לאיתור מוטציות בגנים BRCA1 ו-BRCA2.
קיצורים: PVs, וריאנט פתוגני;VUS, וריאנט בעל משמעות לא ודאית;WT, רצף BRCA1/2 מסוג בר.
מיקדנו באופן סלקטיבי את המחקרים שלנו בקבוצות סרטן השד. למטופלים היה גיל חציוני של 49 שנים (טווח 23-89) והן היו בעיקר נשים (n=376, או 97%).
מתוך נבדקים אלה, ל-64 (17%) היו מוטציות BRCA1/2 וכולם היו נשים. ל-35 (9%) היו PV ול-29 (7.5%) היו VUS. 17 (48.6%) מתוך 35 הווריאציות הפתוגניות התרחשו ב-BRCA1 ו-18 (51.4%) ב-BRCA2, בעוד שב-BRCA 2.21% ו-BRCA 5 (8.4%). (איורים 1 ו-2). LGR לא היה נוכח בניתוח MLPA.
איור 2. ניתוח מוטציות BRCA1 ו-BRCA2 ב-389 חולות סרטן שד.(א) התפלגות של וריאנטים פתוגניים (PV) (אדום), וריאנטים בעלות משמעות לא ברורה (VUS) (כתום) ו-WT (כחול) ב-389 חולות סרטן שד;(ב) 389 חולות סרטן השד ל-35 (9%) היו וריאנטים פתוגניים של BRCA1/2 (PVs). מביניהם, 17 (48.6%) היו נשאי BRCA1 PV (אדום כהה) ו-18 (51.4%) היו נשאי BRCA2 (אדום בהיר);(C) 29 (7.5%) מתוך 389 נבדקים נשאו VUS, 5 (17.2%) גנים BRCA1 (כתום כהה) ו-24 (82.8%) BRCA2 (כתום בהיר).
קיצורים: PVs, וריאנט פתוגני;VUS, וריאנט בעל משמעות לא ודאית;WT, רצף BRCA1/2 מסוג בר.
לאחר מכן חקרנו את השכיחות של תת-סוגים מולקולריים של BC בחולים עם BRCA1/2 PV. ההתפלגות כללה 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ ו-13 (37.1%) מטופלים עם TN4CA-5% חיוביים (37.1%) TNBC. B BC, 2 (11.8%) סבלו ממחלת HER2+, ו-10 (58.8%) סבלו מ-TNBC. גידולים ללא מוטציות BRCA1 היו luminal A או luminal B-HER2+ (איור 3). בתת-הקבוצה החיובית ל-BRCA2, 10 (55.6%) גידולים היו luminal B. 7ER-16%). BC ו-2 (11.1%) היו luminal A (איור 3). לא היו גידולי HER2+ בקבוצה זו. לפיכך, מוטציות BRCA1 נפוצות בחולי TNBC, בעוד ששינויים ב-BRCA2 הם הדומיננטיים אצל אנשים לומן B.
איור 3 שכיחות של תת-סוגים של סרטן שד בחולות עם וריאנטים פתוגניים ב-BRCA1 ו-BRCA2. היסטוגרמות המציגות את התפלגות ה-PVs BRCA1- (אדום כהה) ו-BRCA2- (אדום בהיר) בין תת-סוגים מולקולריים של חולות סרטן שד. המספרים שדווחו בכל תיבה מייצגים את אחוז החולים עם סרטן BRCA1 ו-BRCA2 עבור כל תת-סוג סרטן BRCA2.
קיצורים: PVs, וריאנט פתוגני;HER2+, קולטן לגורם גדילה אפידרמיס אנושי 2 חיובי;TNBC, סרטן שד טריפל שלילי.
לאחר מכן, הערכנו את הסוג והלוקליזציה של הגנים של BRCA1 ו-BRCA2 PVs. ב-BRCA1 PV, צפינו ב-7 וריאנטים של נוקלאוטידים בודדים (SNVs), 6 מחיקות, 3 כפילויות והחדרה אחת. רק מוטציה אחת (c.5522delG) מייצגת תגלית חדשה. התגלית השכיחה ביותר זוהתה בשני הנושאים של BRCA1C05. שינוי כרוך במחיקה של חמישה נוקלאוטידים (CTAAT) ב-BRCA1 אקסון 15, וכתוצאה מכך החלפה של חומצת האמינו לאוצין על ידי טירוזין בקודון 1679, ובשל שינוי מסגרת תרגום עם קודון עצירה חלופי צפוי להוביל לחיתוך חלבון מוקדם. c.4357+1G>T) (טבלה 1).
לגבי BRCA2 PV, צפינו ב-6 מחיקות, 6 SNVs ו-2 כפילויות. אף אחד מהשינויים שנמצאו אינו חדש. שלוש מוטציות חזרו על עצמן באוכלוסיה שלנו, c.428dup ו-c.8487+1G>A נצפו ב-3 נבדקים, ולאחר מכן c.5851_5854c.5851_5854c.5851_5854c.5851_5854c. 5 של BRCA2, הצפוי לקודד לחלבון קטום, לא מתפקד. המוטציה של c.8487+1G>A מתרחשת באזור האינטרוני של BRCA2 intron 19 (± 1,2) ומשפיעה על רצף הקונצנזוס של השחבור, וכתוצאה מכך שחבור שונה וכתוצאה מכך נוצרת חלבון לא תקין או חסר של 585AG-4AG-4AG. מחיקת אוטידים ממיקומי נוקלאוטידים 5851 עד 5854 באקסון 10 המקודד של הגן BRCA2 ומביאה לשינוי מסגרת תרגום עם קודון עצירה חלופי חזוי (p.S1951WfsTer). יש לציין, כפי שדווח בעבר, שני השינויים c.631G>A ו-c.2A החליפו את המוטציה הראשונה של המטופל ב-c.700. אנוזין (A) ב-BRCA2 אקסון 7 עם נוקלאוטיד המכיל גואנין (G) וכתוצאה מכך שינוי של ואלין לאיזולאוצין בקודון 211, חומצת אמינו איזולאוצין היא חומצת אמינו בעלת תכונות דומות ביותר. שינוי זה משפיע על שחבור mRNA תקין. הגרסה השנייה ממוקמת באזור אינטרוני ומביאה להחלפת הגן כפול (T) של BRCAon encothymine. שינוי 7008-2A>T עשוי ליצור תמלילים מרובים באורכים שונים. יתרה מכך, בקבוצת BRCA2 PVs, 4 מתוך 18 שינויים (22.2%) היו אינטרוניים.
לאחר מכן מיפינו מוטציות מזיקות של BRCA1/2 בתחומים פונקציונליים ובאזורים מקושרים לחלבונים (איור 4). בגן BRCA1, 50% מה-PVs היו ממוקמים באזור אשכול סרטן השד (BCCR), בעוד ש-22% מהמוטציות היו ממוקמות באזור צביר סרטן השחלות (OCCR) (איור 4A%, ב-BRCA 4A 7, ב-PVCR). 42.8% מהמוטציות אותרו ב-OCCR (איור 4B). לאחר מכן, הערכנו את מיקומו של PV בתוך תחומי החלבון BRCA1 ו-BRCA2. עבור חלבון BRCA1, מצאנו שלושה PVs בתחומי הלולאה והסליל המפותל, ושתי מוטציות בתחום ה-BRCT במיפוי תחום ה-BRCT (איור 4A PV, ב-BRC 4A, ב-BRC). טרוניים ו-3 שינויים אקסוניים זוהו בתחומי האוליגו/אוליגוסכריד (OB) והמגדל (T) (איור 4B).
איור 4 ייצוג סכמטי של חלבוני BRCA1 ו-BRCA2 ולוקליזציה של וריאנטים פתוגניים. איור זה מציג את התפלגות הווריאציות הפתוגניות של BRCA1 (A) ו-BRCA2 (B) בחולות סרטן שד. מוטציות אקסוניות מוצגות בכחול, בעוד וריאנטים אינטרוניים מוצגים בכתום. גובה הפס מייצג את מספר המקרים. הלולאה של BRCA1 ו-BRCA2 (הפרוטאינים הפונקציונליים) מדווחים הם. ב-(RING) ורצף לוקליזציה גרעיני (NLS), תחום סליל מפותל, תחום SQ/TQ cluster (SCD) ותחום BRCA1 C-terminal (BRCT).(B) חלבון BRCA2 מכיל שמונה חזרות של BRC, תחום מקשר ל-DNA עם תחום סליל (Helical) קושר דומיינים (Helical) oligon/OB, שלושה דומיינים-oligonachar/OB. (T), ו-NLS בצד C. אזורים הנקראים אזור סרטן השד (BCCR) ו-Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) מוצגים בתחתית.*מייצג מוטציות הקובעות קודונים לעצור.
לאחר מכן חקרנו מאפיינים קליניים-פתולוגיים של BC שעשויים להיות מתואמים עם נוכחות של BRCA1/2 PV. רשומות קליניות מלאות היו זמינות עבור 181 חולים שליליים BRCA1/2 (לא נשאים) וכל הנשאים (n=35). היה מתאם בין שיעור התפשטות הגידול והדרגה.
חישבנו את ההתפלגות של Ki-67 בהתבסס על החציון של העוקבה שלנו (25%, טווח <10-90%). נבדקים עם Ki-67 < 25% הוגדרו כ"קי-67 נמוכים", בעוד שאנשים עם ערכים ≥ 25% נחשבו ל"קי-67 גבוהים". נמצאו הבדלים משמעותיים של Ki-67 ו-1 CA-pv לא מובהקים (1-0 CA). מנשאים (איור 5A).
איור 5 מתאם של Ki-67 עם התפלגות דרגות בנשים עם סרטן שד עם וללא BRCA1 ו-BRCA2 PVs.(A) תרשים קופסא המראה ערכי Ki-67 חציוניים ב-181 חולי BC שאינם נשאים לעומת BRCA1 (18) או BRCA2 (17) PV חולי. קבוצות כיתה (G2 ו-G3) לפי מצב המוטציה BRCA1 ו-BRCA2 (נבדקי WT, נשאי PVs BRCA1 ו-BRCA2).
באופן דומה, בדקנו אם דרגת הגידול מתאמת לנוכחות של BRCA1/2 PV. מאחר ש-G1 BC נעדר באוכלוסייתנו, חילקנו את החולים לשתי קבוצות (G2 או G3). בהתאם לתוצאות Ki-67, הניתוח גילה מתאם מובהק סטטיסטית בין דרגת גידול למוטציה ב-BRCA1, עם שיעור גבוה יותר של גידולי BRCA-<5-Fi0p בהשוואה לנשאי BRCA-<5. ה 5ב).
ההתקדמות בטכנולוגיית ריצוף ה-DNA אפשרה התקדמות חסרת תקדים בבדיקות גנטיות BRCA1/2, עם השלכות מכריעות על חולים עם היסטוריה משפחתית של סרטן. עד כה, כ-20,000 גרסאות BRCA1/2 זוהו וסווגו על פי האגודה האמריקאית לגנטיקה רפואית 35 ומערכת ENIGMA 6 ידועה היטב כי האזור הגיאוגרפי/המוטציוני של ENIGMA35 ידוע היטב. s.37 בתוך איטליה, שיעור ה-BRCA1/2 PVs נע בין 8% ל-37%, מה שמראה שונות פנים-ארצית רחבה.38,39 עם אוכלוסייה של כמעט 5 מיליון, סיציליה היא האזור החמישי בגודלו באיטליה מבחינת מספר התושבים. למרות שקיימים נתונים על התפוצה של BRCA1/2 במזרח המזרח, אין עדויות נרחבות ל-BRCA1/2 במזרח.
המחקר שלנו הוא אחד הדיווחים הראשונים על שכיחות BRCA1/2 PV בחולי BC במזרח סיציליה. 28 מיקדנו את הניתוח שלנו ב-BC, מכיוון שזוהי ללא ספק המחלה השכיחה ביותר בקבוצה שלנו.
בעת בדיקת 389 מטופלים לפני הספירה, 9% נשאו PVs BRCA1/2, בחלוקה שווה בין BRCA1 ו-BRCA2. תוצאות אלו תואמות את אלו שדווחו בעבר באוכלוסיה האיטלקית.28 מעניין לציין ש-3% (13/389) מהקבוצה שלנו היו גברים. שיעור זה גבוה מהצפוי עבור סרטן שד זכרי / 1% מכלל הסיכון לסרטן השד של גברים (1% מכלל הסיכון של BRCA1 BC1). , אף אחד מהגברים הללו לא פיתח BRCA1/2 PV, ולכן הם היו מועמדים לניתוח מולקולרי נוסף כדי לשלול נוכחות של מוטציות פחות שכיחות כגון PALB2, RAD51C ו-D, בין היתר. גרסאות בעלות מובהקות לא ודאית אוחזרו ב-7% מהנבדקים שבהם BRCA2 VUS היה ברור.
כאשר ניתחנו את התפלגות תת-הסוגים המולקולריים של BC בנשים מוטנטיות BRCA1/2, אישרנו קשרים ידועים בין TNBC ו-BRCA1 PV (58.8%) ובין luminal B BC ו-BRCA2 PV (55.6%).16,43 הגידולים הלומינליים A ו- HER2+ ב-BRCA1 ו-BRCA2 PV4 תואמים את הנתונים הקיימים בספרות 4.
לאחר מכן אנו מתמקדים בסוג ובמיקום של BRCA1/2 PV. בקבוצה שלנו, ה-BRCA1 PV הנפוץ ביותר היה c.5035_5039delCTAAT. למרות ש- Incorvaia et al.לא תיארו את הווריאציה הזו בקבוצה הסיציליאנית שלהם, מחברים אחרים דיווחו עליה כ-germline BRCA1 PV.34 נמצאו מספר BRCA1 PVs בקבוצה שלנו - למשל c.181T>G, c.514del, c.3253dupA ו-c.5266dupC - אשר נצפו ב-1 BRCA1 PVs אלה בשתי ו-1T muter. .5266dupC) נמצאים בדרך כלל ביהודים אשכנזים ממזרח ומרכז אירופה (פולין, צ'כית), סלובנית, אוסטרית, הונגרית, בלארוסית וגרמנית), 44,45 ובארה"ב ובארגנטינה, הוגדר לאחרונה כ"וריאנט נבט חוזר" בחולים איטלקיים עם סרטן BC ו-OC51434, שזוהה בעבר סרטן מסוג S1434 בצפון. בפאלרמו ומסינה. מעניין שאפילו Incorvaia et al.מצא את הווריאציה c.3253dupA בכמה משפחות בקטניה.28 ה-BRCA2 PVs המייצגים ביותר הם c.428dup, c.5851_5854delAGTT והגרסה האינטרונית c.8487+1G>A, אשר דווחו ביתר פירוט 28 בחולה בפלרמו עם c.428dup in c.4258d. צפון-מערב סיציליה, בעיקר באזורי Trapani ו-Palermo, בעוד ש-c.5851_5854delAGTT PV נצפתה במשקי בית בצפון-מערב סיציליה. וריאנט 8487+1G>A היה נפוץ יותר בנבדקים מסינה, פלרמו ו-Caltanissetta.28 Rebbeck et al.תיאר בעבר את השינוי ב-c.5851_5854delAGTT בקולומביה.37 נוסף BRCA2 PV, c.631+1G>A, נמצא בחולי BC ו-OC מסיציליה (Agrigento, Siracusa ו-Ragusa).28 יש לציין שצפינו בדו-קיום של שתי גרסאות BRCA2 ב-BRCA2->208 אותו חולה (BRCA2>C208). אשר הנחנו כי הם מופרדים במצב cis, כפי שדווח בעבר כך.34,46 מוטציות אלו של BRCA2 uble אכן נצפות לעתים קרובות באזור האיטלקי ונמצאו כמציגות קודוני עצירה בטרם עת, המשפיעות על שחבור RNA שליח וגורמות לכשל של חלבון BRCA2.47,48
מיפינו גם BRCA1 ו-BRCA2 PVs באזורי OCCR ו-BCCR משוערים של תחומי חלבון וגנים. אזורים אלה תוארו על ידי Rebbeck et al.כאזורי סיכון לפתח סרטן שחלות וסרטן שד, בהתאמה.49 עם זאת, העדויות לגבי הקשר בין מיקומן של וריאנטים של קו הנבט לבין הסיכון לסרטן השד או השחלות נותרו שנויות במחלוקת.28,50-52 באוכלוסייתנו, PVs BRCA1 היו ממוקמים בעיקר באזור BCCR, בעוד שאזורי BRCA2 PV נמצאו בעיקר באזורים של OCCR. אזורי OCCR ו-BCCR ותכונות BC. ייתכן שהסיבה לכך היא מספר מוגבל של חולים עם מוטציות BRCA1/2. מנקודת מבט של תחום החלבון, PVs BRCA1 מפוזרים לאורך כל החלבון, ושינויים ב-BRCA2 נמצאים עדיפות בתחום החוזר של BRC.
לבסוף, קשרנו מאפיינים קליניים-פתולוגיים של BC עם BRCA1/2 PV. בשל המספר המצומצם של חולים שנכללו, מצאנו רק מתאם מובהק בין Ki-67 לדרגת הגידול. למרות שההערכה והפרשנות של Ki-67 נותרו שנויים במחלוקת במקצת, בטוח ששיעורי שגשוג גבוהים קשורים עם סיכון מוגבר להישנות המחלה לבין "הפסקת הישרדות המחלה" ו"הפסקת הישנות המחלה" ו"הפסקת המחלה". נמוך" Ki-67 הוא 20%. עם זאת, סף זה אינו חל על אוכלוסיית חולי המוטציות BRCA1/2 שלנו, שיש לה ערך Ki-67 חציוני של 25%. מגמה זו בשיעורי Ki-67 גבוהים יכולה להיות מוסברת על ידי השכיחות בעוקבות ה-luminal B ו-TNBC שלנו, שמספר גידולי luminal Aver מצביעים על כך שחלק מהגידולים של luminal Aver -7% נראים טוב יותר (Howe-60% יותר). יש לרבד את המטופלים בהתאם לפרוגנוזה שלהם.53,54 מתוצאות הניתוח שלנו, מתאם משמעותי אינו מפתיע.מתרחש בין Ki-67 ודרגות גבוהות לבין נוכחות של BRCA1 PV.למעשה, גידולים הקשורים ל-BRCA1 אופייניים ל-TNBC ומציגים תכונות אגרסיביות יותר.16,17
לסיכום, מחקר זה מספק דו"ח על המצב המוטציוני של BRCA1/2 בקבוצת BC ממזרח סיציליה. בסך הכל, הממצאים שלנו תואמים ראיות קיימות, הן מבחינת שכיחות המוטציות והן מבחינת מאפיינים קליניים-פתולוגיים ב-BC. מחקרים נוספים באוכלוסיות גדולות יותר של חולי BC עם BRCA1/2 מוטציות, כגון שימוש בניתוח מולטיגנום, מורחבים ופחות נוכחות מוטציות של PV מורחבים. תכופות מ-BRCA1/2. זה יאפשר זיהוי וניהול נכון של מספר הגובר של נבדקים בסיכון מוגבר לסרטן עקב מוטציות גנטיות.
אישרנו כי מטופלים חתמו על הסכמה מדעת לשחרור דגימות הגידול שלהם בעילום שם למטרות מחקר. כל המטופלים חתמו על הסכמה מדעת בכתב על פי הצהרת הלסינקי. בהתאם למדיניות של AOU Policlinico "G.Rodolico – S.Marco", מחקר זה היה פטור מסקירה אתית מכיוון שניתוח BRCA1/2 בוצע על פי נתוני המחקר שהסכימו למטופלים בכתב, והסכמתם של חולים למטרות מדעת בכתב. .
אנו מודים לפרופ' פאולו ויגנרי על סיועו בטיפול בחולות סרטן השד כפי שביקשה ועדת האתיקה.
פדריקה מרטורנה מדווחת על כבוד מאת Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. המחברים האחרים מצהירים על ניגוד עניינים בעבודה זו.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN מעריך את השכיחות והתמותה של 36 סוגי סרטן ב-185 מדינות ברחבי העולם.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 2160322/160322.