תודה שביקרת ב-Nature.com.לגרסת הדפדפן שבה אתה משתמש יש תמיכת CSS מוגבלת.לקבלת החוויה הטובה ביותר, אנו ממליצים להשתמש בדפדפן מעודכן (או להשבית את מצב תאימות ב-Internet Explorer).בינתיים, כדי להבטיח תמיכה מתמשכת, נעבד את האתר ללא סגנונות ו-JavaScript.
דימום בלתי מבוקר הוא אחד מגורמי המוות המובילים.השגת דימום מהיר מבטיחה את הישרדות הנבדק כעזרה ראשונה במהלך פעולות לחימה, תאונות דרכים ופעולות הפחתת מוות.פיגום מרוכב מחוזק בסיבים ננו-נקביים (NFRCS) המופק מהרכב פשוט של יצירת סרט המוסטטי (HFFC) כשלב מתמשך יכול לעורר ולשפר את הדימום.הפיתוח של ה-NFRCS מבוסס על עיצוב כנף השפירית.מבנה כנפי השפירית מורכב מכנפיים רוחביות ואורכיות, וממברנות הכנפיים מחוברות זו לזו כדי לשמור על שלמות המיקרו-מבנה.HFFC מצפה באופן אחיד את פני הסיב עם סרט בעובי ננומטר ומחבר את עובי הכותנה המופץ באופן אקראי (Ct) (פאזה מפוזרת) ליצירת מבנה ננו-נקבי.השילוב של שלבים רציפים ומפוזרים מוזיל את עלות המוצר פי עשרה בהשוואה למוצרים זמינים מסחרית.ניתן להשתמש ב-NFRCS שונה (טמפונים או צמידי יד) במגוון יישומים ביו-רפואיים.מחקרים in vivo הגיעו למסקנה שה-Cp NFRCS שפותח מפעיל ומשפר את תהליך הקרישה באתר היישום.NFRCS יכול לווסת את המיקרו-סביבה ולפעול ברמה התאית בשל המבנה הננו-נקבי שלו וכתוצאה מכך לריפוי פצעים טוב יותר במודל פצעי הכריתה.
דימום בלתי מבוקר במהלך קרב, תוך ניתוח ומצבי חירום עלולים להוות איום חמור על חיי הפצועים1.מצבים אלה מובילים עוד יותר לעלייה כוללת בתנגודת כלי הדם ההיקפיים, מה שמוביל להלם דימומי.אמצעים מתאימים לשליטה בדימום במהלך ואחרי הניתוח נחשבים לסכנת חיים2,3.נזק לכלי דם גדולים מוביל לאובדן דם מסיבי, וכתוצאה מכך שיעור תמותה של ≤ 50% בקרב ו-31% במהלך הניתוח1.איבוד דם מסיבי מוביל לירידה בנפח הגוף, מה שמפחית את תפוקת הלב.עלייה בהתנגדות הכוללת של כלי הדם ההיקפיים ופגיעה מתקדמת במיקרו-סירקולציה מובילים להיפוקסיה באיברים תומכי החיים.הלם דימום עלול להתרחש אם המצב נמשך ללא התערבות יעילה1,4,5.סיבוכים נוספים כוללים התקדמות של היפותרמיה וחמצת מטבולית, וכן הפרעת קרישה המעכבת את תהליך הקרישה.הלם דימומי חמור קשור לסיכון גבוה יותר למוות6,7,8.בהלם דרגה III (פרוגרסיבי), עירוי דם חיוני להישרדות החולה במהלך תחלואה ותמותה תוך ניתוחית ולאחר ניתוח.כדי להתגבר על כל המצבים מסכני החיים לעיל, פיתחנו פיגום מרוכב מחוזק בסיבים ננו-נקביים (NFRCS) המנצל ריכוז פולימר מינימלי (0.5%) תוך שימוש בשילוב של פולימרים המוסטטיים מסיסים במים.
בעזרת שימוש בחיזוק סיבים, ניתן לפתח מוצרים חסכוניים.הסיבים המסודרים באקראי דומים למבנה של כנף של שפירית, מאוזנים על ידי הפסים האופקיים והאנכיים על הכנפיים.הוורידים הרוחביים והאורכיים של הכנף מתקשרים עם קרום הכנף (איור 1).NFRCS מורכב מ-Ct מחוזק כמערכת פיגום עם חוזק פיזי ומכני טוב יותר (איור 1).בשל הסבירות והאומנות, המנתחים מעדיפים להשתמש במדדי חוטי כותנה (Ct) במהלך ניתוחים וחבישות. לפיכך, בהתחשב ביתרונות המרובים שלו, כולל > 90% תאית גבישית (המעניקה לשיפור הפעילות המוסטטית), Ct שימש כמערכת שלד של NFRCS9,10. לפיכך, בהתחשב ביתרונות המרובים שלו, כולל > 90% תאית גבישית (המעניקה לשיפור הפעילות המוסטטית), Ct שימש כמערכת שלד של NFRCS9,10. Следовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической целюловыш статической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. לכן, לאור היתרונות הרבים שלו, כולל > 90% תאית גבישית (המעורבת בפעילות המוסטטית מוגברת), Ct שימש כמערכת השלד NFRCS9,10.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90% ,10 的骨架系统.因此，考虑到它的多重益处，包括> 90%לכן, לאור היתרונות הרבים שלו, כולל למעלה מ-90% תאית גבישית (עוזר לשפר את הפעילות ההמוסטטית), Ct שימש כפיגום עבור NFRCS9,10.Ct היה מצופה באופן שטחי (נצפתה היווצרות סרט ננו-עבה) ומקושר עם קומפוזיציה יוצרות סרט המוסטטי (HFFC).HFFC מתנהג כמו מטריגל, מחזיק את Ct הממוקם באופן אקראי.העיצוב שפותח מעביר מתח בתוך השלב המפוזר (סיבי חיזוק).קשה להשיג מבנים ננו-נקביים בעלי חוזק מכני טוב באמצעות ריכוזי פולימרים מינימליים.בנוסף, לא קל להתאים אישית תבניות שונות ליישומים ביו-רפואיים שונים.
האיור מציג דיאגרמה של עיצוב NFRCS המבוסס על מבנה כנף השפירית (A).תמונה זו מציגה אנלוגיה השוואתית של מבנה הכנף של שפירית (הורידים המצטלבים והאורכים של הכנף מחוברים זה לזה) וצילום מיקרו-חתך של Cp NFRCS (B).ייצוג סכמטי של NFRCS.
NFRCs פותחו באמצעות HFFC כשלב מתמשך כדי לטפל במגבלות לעיל.HFFC מורכב מפולימרים המוסטטיים יוצרי סרט שונים, כולל Chitosan (כפולימר ההמוסטטי העיקרי) עם מתילצלולוזה (MC), הידרוקסיפרופיל מתילצלולוזה (HPMC 50 cp) ואלכוהול פוליוויניל (PVA)) (125 kDa) כפולימר תמיכה המקדם היווצרות פקקת.היווצרות.תוספת של polyvinylpyrrolidine K30 (PVP K30) שיפרה את יכולת ספיגת הלחות של NFRCS.פוליאתילן גליקול 400 (PEG 400) נוסף כדי לשפר את הצלבת הפולימר בתערובות פולימרים מלוכדות.שלוש קומפוזיציות דימומיות שונות של HFFC (Cm HFFC, Ch HFFC ו- Cp HFFC), כלומר כיטוזן עם MC (Cm), כיטוזן עם HPMC (Ch), וצ'יטוזן עם PVA (Cp), יושמו על Ct.מחקרים שונים של אפיון חוץ גופית ו-in vivo אישרו את פעילות ההמוסטטית וריפוי הפצעים של NFRCS.חומרים מרוכבים המוצעים על ידי NFRCS יכולים לשמש להתאמה אישית של צורות שונות של פיגומים כדי לענות על צרכים ספציפיים.
בנוסף, ניתן לשנות את NFRCS כתחבושת או גליל כדי לכסות את כל אזור הפציעה של הגפיים התחתונות וחלקים אחרים של הגוף.במיוחד עבור פציעות גפיים קרביות, ניתן לשנות את עיצוב ה-NFRCS המעוצב לחצי יד או רגל מלאה (איור משלים S11).ניתן להפוך את ה-NFRCS לצמיד עם דבק רקמות, אשר ניתן להשתמש בו כדי לעצור דימום מפציעות אובדניות חמורות בשורש כף היד.המטרה העיקרית שלנו היא לפתח NFRCS עם כמה שפחות פולימר שניתן להעביר לאוכלוסיה גדולה (מתחת לקו העוני) וניתן להכניס אותו בערכת עזרה ראשונה.פשוט, יעיל וחסכוני בעיצוב, NFRCS מועיל לקהילות מקומיות ויכול להיות בעל השפעה גלובלית.
Chitosan (משקל מולקולרי 80 kDa) ואמרנט נרכשו מ- Merck, הודו.Hydroxypropyl methylcellulose 50 Cp, פוליאתילן גליקול 400 ומתילצלולוזה נרכשו מ-Loba Chemie Pvt.LLC, מומבאי.אלכוהול פוליוויניל (משקל מולקולרי 125 kDa) (87-90% בהידרוליזה) נרכש מ-National Chemicals, Gujarat.Polyvinylpyrrolidine K30 נרכש ממוליכם, מומבאי, ספוגיות סטריליות נרכשו מ- Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, עם מי Milli Q (מערכת לטיהור מים ישיר-Q3, Merck, הודו) כמנשא.
NFRCS פותח באמצעות שיטת ליאופיליזציה11,12.כל קומפוזיציות HFFC (טבלה 1) הוכנו באמצעות בוחש מכני.הכן תמיסה של 0.5% של צ'יטוזן באמצעות חומצה אצטית 1% במים על ידי ערבוב מתמשך ב-800 סל"ד במערבל מכני.המשקל המדויק של הפולימר הטעון המצוין בטבלה 1 הוסף לתמיסת הצ'יטוזן ונערבב עד לקבלת תמיסת פולימר שקופה.לתערובת שהתקבלה הוספו PVP K30 ו-PEG 400 בכמויות המצוינות בטבלה 1, והערבוב נמשך עד לקבלת תמיסה של פולימר צמיג שקופה.האמבטיה שהתקבלה של תמיסת פולימר עברה צלילים במשך 60 דקות כדי להסיר בועות אוויר כלואות מתערובת הפולימר.כפי שמוצג באיור המשלים S1(b), Ct היה מופץ באופן שווה בכל באר של צלחת 6-בארות (תבנית) בתוספת 5 מ"ל של HFFC.
הצלחת שש-בארים עברה צלילים במשך 60 דקות כדי להשיג הרטבה והפצה אחידה של HFFC ברשת Ct.לאחר מכן הקפיאו את צלחת שש הבארים ב-20 מעלות צלזיוס למשך 8-12 שעות.צלחות הקפאה עברו ליופיליזציה למשך 48 שעות כדי לקבל ניסוחים שונים של NFRCS.אותו הליך משמש לייצור צורות ומבנים שונים, כגון טמפונים או טמפונים גליליים, או כל צורה אחרת עבור יישומים שונים.
צ'יטוזן ששוקל במדויק (80 kDa) (3%) מומס בחומצה אצטית 1% באמצעות בוחש מגנטי.לתמיסת הצ'יטוס שהתקבלה הוסיפו 1% PEG 400 וערבבו במשך 30 דקות.יוצקים את התמיסה שהתקבלה למיכל מרובע או מלבני והקפיאו ב-80 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות.דגימות קפואות עברו ליאופיל למשך 48 שעות כדי לקבל Cs13 נקבובי.
ה-NFRCS שפותח היה נתון לניסויים באמצעות ספקטרוסקופיה אינפרא אדום של פורייה (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, טוקיו, יפן) כדי לאשר את התאימות הכימית של הצ'יטוזן לפולימרים אחרים14,15.ספקטרום ה-FTIR (רוחב הטווח הספקטרלי בין 400 ל-4000 ס"מ-1) של כל הדגימות שנבדקו התקבלו על ידי ביצוע 32 סריקות.
קצב ספיגת הדם (BAR) עבור כל התכשירים הוערך באמצעות השיטה שתוארה על ידי Chen וחב'.16 עם שינויים קלים.NFRKs שפותחו מכל ההרכבים יובשו בתנור ואקום ב-105 מעלות צלזיוס למשך הלילה כדי להסיר שאריות ממס.30 מ"ג NFRCS (משקל דגימה ראשונית - W0) ו-30 מ"ג Ct (ביקורת חיובית) הונחו בכלים נפרדים המכילים תערובת מקדימה של 3.8% נתרן ציטראט.במרווחי זמן קבועים מראש, כלומר 5, 10, 20, 30, 40 ו-60 שניות, ה-NFRCS הוסרו ומשטחיהם נוקו מדם לא נספג על ידי הנחת הדגימות על Ct למשך 30 שניות.המשקל הסופי של הדם שנספג על ידי NFRCS 16 נחשב (W1) בכל נקודת זמן.חשב את אחוז BAR באמצעות הנוסחה הבאה:
זמן קרישת הדם (BCT) נקבע כפי שדווח על ידי Wang et al.17 .הזמן הדרוש לדם מלא (דם חולדה מעורבב מראש עם 3.8% נתרן ציטראט) להקריש בנוכחות NFRCS חושב כ-BCT של דגימת הבדיקה.רכיבי ה-NFRCS השונים (30 מ"ג) הונחו בבקבוקוני מכסה בורג בנפח 10 מ"ל והודגרו ב-37 מעלות צלזיוס.לבקבוקון נוספו דם (0.5 מ"ל) ונוספו 0.3 מ"ל של 0.2 M CaCl2 כדי להפעיל את קרישת הדם.לבסוף, הפוך את הבקבוקון כל 15 שניות (עד 180°) עד שנוצר קריש יציב.ה-BCT של המדגם מוערך לפי מספר ההיפוכים של הדגימות 17,18.בהתבסס על BCT, שני קומפוזיציות אופטימליות מ- NFRCS Cm, Ch ו- Cp נבחרו למחקרי אפיון נוספים.
ה-BCT של קומפוזיציות Ch NFRCS ו-Cp NFRCS נקבע על ידי יישום השיטה שתוארה על ידי Li et al.19 .מניחים 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS ו-Cs (שליטה חיובית) לתוך צלחות פטרי נפרדות (37 מעלות צלזיוס).דם המכיל 3.8% נתרן ציטראט היה מעורבב עם 0.2 M CaCl2 ביחס נפח של 10:1 כדי להתחיל בתהליך קרישת הדם.20 μl של 0.2 M CaCl2 תערובת דם חולדה הוחלו על פני הדגימה והונחו בצלחת פטרי ריקה.הבקרה הייתה דם שנשפך לתוך צלחות פטרי ריקות ללא Ct.במרווחים קבועים של 0, 3 ו-5 דקות, הפסק את הקרישה על ידי הוספת 10 מ"ל של מים דה-יונים (DI) לדגימה המכילה את המנה מבלי להפריע לקריש.אריתרוציטים לא מקורשים (אריתרוציטים) עוברים המוליזה בנוכחות מים מפוזרים ומשחררים המוגלובין.המוגלובין בנקודות זמן שונות (HA(t)) נמדד ב-540 ננומטר (λmax המוגלובין) באמצעות ספקטרופוטומטר UV-Vis.הספיגה המוחלטת של המוגלובין (AH(0)) ב-0 דקות של 20 µl של דם ב-10 מ"ל של מים מופחתים נלקחה כתקן ייחוס.ספיגת ההמוגלובין היחסית (RHA) של דם קרושה חושבה מתוך היחס HA(t)/HA(0) תוך שימוש באותה אצווה של דם.
באמצעות מנתח טקסטורה (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, ארה"ב), נקבעו תכונות ההדבקה של NFRK לרקמה פגועה.מצמידים כלי גלילי עם תחתית פתוחה אל החלק הפנימי של עור החזיר (ללא שכבת השומן).דגימות (Ch NFRCS ו-Cp NFRCS) יושמו באמצעות צינורית לתוך תבניות גליליות כדי ליצור הידבקות לעור החזיר.לאחר דגירה של 3 דקות בטמפרטורת החדר (RT) (25 מעלות צלזיוס), חוזק ההדבקה של NFRCS נרשם בקצב קבוע של 0.5 מ"מ לשנייה.
התכונה העיקרית של חומרי איטום כירורגיים היא הגברת קרישת הדם תוך הפחתת איבוד הדם.קרישה ללא אובדן ב- NFRCS הוערכה באמצעות שיטה שפורסמה בעבר עם שינויים קלים 19 .צור צינור מיקרוצנטריפוגה (2 מ"ל) (קוטר פנימי 10 מ"מ) עם חור בגודל 8 × 5 מ"מ בצד אחד של הצינור הצנטריפוגה (המייצג פצע פתוח).NFRCS משמש לסגירת הפתח וסרט משמש לאיטום הקצוות החיצוניים.הוסף 20 μl של 0.2 M CaCl2 לצינור המיקרוצנטריפוגה המכילה את 3.8% נתרן ציטראט מראש.לאחר 10 דקות, צינורות המיקרוצנטריפוגה הוצאו מהכלים והעלייה במסת הכלים נקבעה עקב יציאת הדם מה-NFRK (n=3).איבוד דם Ch NFRCS ו-Cp NFRCS הושוו ל-Cs.
שלמות רטובה של NFRCS נקבעה על סמך השיטה שתוארה על ידי Mishra ו- Chaudhary21 עם שינויים קלים.מניחים את ה- NFRCS בבקבוק של 100 מ"ל Erlenmeyer עם 50 מ"ל מים ומערבבים במשך 60 שניות מבלי ליצור חלק עליון.בדיקה ויזואלית ותעדוף דגימות לשלמות פיזית על בסיס איסוף.
חוזק הקישור של HFFC ל-Ct נחקר באמצעות שיטות שפורסמו בעבר עם שינויים קלים.שלמות ציפוי פני השטח הוערכה על ידי חשיפת NFRK לגלים אקוסטיים (גירוי חיצוני) בנוכחות מים milliQ (Ct).ה- NFRCS Ch NFRCS ו- Cp NFRCS שפותחו הונחו בכוס מלאה במים ועברו צלילים למשך 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ו-30 דקות, בהתאמה.לאחר הייבוש נעשה שימוש באחוז ההפרש בין המשקל ההתחלתי והסופי של ה- NFRCS לחישוב אחוז אובדן החומר (HFFC).BCT במבחנה תמך עוד יותר בחוזק הקישור או באובדן של חומרי פני השטח.היעילות של קשירת HFFC ל-Ct מספקת קרישת דם וציפוי אלסטי על פני השטח של Ct22.
ההומוגניות של NFRCS שפותחה נקבעה על ידי BCT של דגימות (30 מ"ג) שנלקחו ממיקומים כלליים שנבחרו באקראי של NFRCS.עקוב אחר נוהל BCT שהוזכר קודם לכן כדי לקבוע תאימות ל-NFRCS.קרבה בין כל חמש הדגימות מבטיחה כיסוי משטח אחיד ותצהיר HFFC ברשת Ct.
אזור מגע הדם הנומינלי (NBCA) נקבע כפי שדווח בעבר עם כמה שינויים.הקרישה את הדם על ידי הידוק של 20 μl של דם בין שני המשטחים של Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS ו-Cs.לאחר שעה, שני חלקי הסטנט הופרדו ונמדדו באופן ידני את שטח הקריש.הערך הממוצע של שלוש חזרות נחשב ל-NBCA NFRCS19.
ניתוח אדים דינמי (DVS) שימש להערכת היעילות של NFRCS לקליטת מים מהסביבה החיצונית או מאתר הפציעה האחראי על התחלת קרישה.ה-DVS מעריך או מתעד את ספיגת האדים והאובדן בדגימה בצורה גרבימטרית באמצעות מאזן רגיש במיוחד עם רזולוציית מסה של ±0.1 מיקרוגרם.לחץ אדים חלקי (לחות יחסית) נוצר על ידי בקר זרימת מסה אלקטרוני מסביב לדגימה על ידי ערבוב גזי נשא רוויים ויבשים. בהתאם להנחיות ה-European Pharmacopeia, בהתבסס על אחוז ספיגת הלחות על ידי הדגימות, הדגימות סווגו ל-4 קטגוריות (0-0.012% w/w- לא היגרוסקופיות, 0.2-2% w/w מעט היגרוסקופיות, 2-15% היגרוסקופיות בינוניות, ו->15% היגרוסקופיות מאוד23). בהתאם להנחיות הפרמקופיה האירופית, בהתבסס על אחוז ספיגת הלחות על ידי הדגימות, הדגימות סווגו ל-4 קטגוריות (0-0.012% w/w- לא היגרוסקופיות, 0.2-2% w/w מעט היגרוסקופיות, 2-15% היגרוסקופיות בינוניות, ו->15% מאוד היגרוסקופיות).בהתאם להמלצות הפרמקופיה האירופית, בהתאם לאחוז ספיגת הלחות על ידי הדגימות, הדגימות חולקו ל-4 קטגוריות (0-0.012% w/w – לא היגרוסקופי, 0.2-2% w/w מעט היגרוסקופי, 2-15%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % היגרוסקופי בינוני ויותר 15% היגרוסקופי מאוד)23.根据欧洲药典指南，根据样品吸收水分的百分比，样品分为4 类（鿁0-0.012% w/0.2% w/0.2% w/0. /w 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿，> 15% 非常吸湿）23.根据 欧洲 药典 指南 ， 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 分为 刱为 刱为 2%-0.湿 性 、 、 、 、 0.2-2% W/w 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ，> 15%非常吸湿）23.בהתאם להמלצות הפרמקופיה האירופית, הדגימות מחולקות ל-4 מחלקות בהתאם לאחוז הלחות הנספגת בדגימה (0-0.012% במשקל - לא היגרוסקופי, 0.2-2% במשקל מעט היגרוסקופי, 2-15% במשקל).% умеренно гигроскопичен, > 15% очень гигроскопичен) 23. % היגרוסקופי בינוני, > 15% היגרוסקופי מאוד) 23.היעילות ההיגרוסקופית של NFCS X NFCS ו-TsN NFCS נקבעה על מנתח DVS TA TGA Q5000 SA.במהלך תהליך זה התקבלו זמן ריצה, לחות יחסית (RH) ומשקל מדגם בזמן אמת ב-25°C24.תכולת הלחות מחושבת על ידי ניתוח מסה מדויק של NFRCS באמצעות המשוואה הבאה:
MC היא לחות NFRCS.m1 - משקל יבש של NSAIDs.m2 היא מסת NFRCS בזמן אמת ב-RH נתון.
שטח הפנים הכולל הוערך באמצעות ניסוי ספיחת חנקן עם חנקן נוזלי לאחר ריקון הדגימות ב-25 מעלות צלזיוס למשך 10 שעות (<7 × 10-3 טור). שטח הפנים הכולל הוערך באמצעות ניסוי ספיחת חנקן עם חנקן נוזלי לאחר ריקון הדגימות ב-25 מעלות צלזיוס למשך 10 שעות (<7 × 10-3 טור). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота жидким азотом при 25 °С в течение 10 ч (<7 × 10–3 Торр). שטח הפנים הכולל הוערך באמצעות ניסוי ספיחת חנקן עם חנקן נוזלי לאחר ריקון דגימות ב-25 מעלות צלזיוס למשך 10 שעות (<7 × 10-3 טור).在25°C 清空样品10 小时（< 7 × 10-3 טור25 מעלות צלזיוס Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидком азота ов в течение 10 часов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). שטח הפנים הכולל הוערך באמצעות ניסויים בספיחת חנקן עם חנקן נוזלי לאחר ריקון דגימות למשך 10 שעות ב-25 מעלות צלזיוס (<7 x 10-3 טור).שטח הפנים הכולל, נפח הנקבוביות וגודל הנקבוביות NFRCS נקבעו עם Quantachrome מ-NOVA 1000e, אוסטריה באמצעות תוכנת RS 232.
הכן 5% RBCs (מי מלח כמדלל) מדם מלא.לאחר מכן העבירו מנה של HFFC (0.25 מ"ל) לצלחת בעלת 96 באר ומסת RBC של 5% (0.1 מ"ל).דגירה על התערובת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות.תערובת של תאי דם אדומים וסרום נחשבה כביקורת חיובית, ותערובת של תאי דם אדומים ותאי דם אדומים כביקורת שלילית.ההמגלוטינציה נקבעה לפי סולם סטג'יצקי.הסולמות המוצעים הם כדלקמן: + + + + אגרגטים גרגיריים צפופים;+ + + רפידות תחתונות חלקות עם קצוות מעוקלים;+ + רפידות תחתונות חלקות עם קצוות קרועים;+ טבעות אדומות צרות סביב הקצוות של הרפידות החלקות;– (שלילי) כפתור אדום דיסקרטי 12 במרכז הבאר התחתונה.
תאימות ההמו של NFRCS נחקרה על פי שיטת הארגון הבינלאומי לתקינה (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27.השיטה הגרבימטרית שתוארה על ידי Singh et al.שינויים קלים נעשו כדי להעריך היווצרות פקקת בנוכחות או על פני השטח של NFRCS.500 מ"ג של Cs, Ch NFRCS ו-Cp NFRCS הודגרו במי מלח מאוחסנים בפוספט (PBS) למשך 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס.לאחר 24 שעות, PBS הוסר ו- NFRCS טופל ב-2 מ"ל דם המכיל 3.8% נתרן ציטראט.על פני השטח של NFRCS, הוסף 0.04 מ"ל של 0.1 M CaCl2 לדגימות המודגרות.לאחר 45 דקות, נוספו 5 מ"ל מים מזוקקים כדי לעצור את הקרישה.דם קרוש על פני השטח של NFRK טופל בתמיסת פורמלדהיד 36-38%.הקרישים המקובעים בפורמלדהיד יובשו ונשקלו.אחוז הפקקת הוערך על ידי חישוב משקל הכוס ללא דם ודגימה (בקרה שלילית) והכוס עם דם (ביקורת חיובית).
כאישור ראשוני, הדגימות הוצגו תחת מיקרוסקופ אופטי כדי להבין את היכולת של ציפוי פני השטח HFFC, Ct מחוברים ורשת Ct ליצור נקבוביות.קטעים דקים של Ch ו-Cp מ- NFRCS נחתכו עם להב אזמל.הקטע שהתקבל הונח על שקופית זכוכית, מכוסה בכיסוי כיסוי, והקצוות תוקנו בדבק.השקופיות המוכנות נצפו במיקרוסקופ אופטי ותצלומים צולמו בהגדלות שונות.
שקיעת פולימרים ברשתות Ct הוצגה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי המבוסס על השיטה שתוארה על ידי Rice et al.29. הרכב HFFC המשמש לניסוח היה מעורבב עם צבע ניאון (אמרנט), ו-NFRCS (Ch & Cp) הוכנו לפי השיטה שהוזכרה קודם לכן. הרכב HFFC המשמש לניסוח היה מעורבב עם צבע ניאון (אמרנט), ו-NFRCS (Ch & Cp) הוכנו לפי השיטה שהוזכרה קודם לכן.הרכב HFFC המשמש לניסוח היה מעורבב עם צבע ניאון (אמרנט) והתקבל NFRCS (Ch ו-Cp) לפי השיטה שהוזכרה קודם לכן.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到缈物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到缶。CS（到缄方敳将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到缈物与荧光染料（苋菜）混合，并按照前面提到缶。CS（到缄方敳הרכב HFFC המשמש בניסוח היה מעורבב עם צבע ניאון (Amaranth) וקיבל NFRCS (Ch ו-Cp), כפי שהוזכר קודם לכן.קטעים דקים של NFRK נחתכו מהדגימות שהתקבלו, הונחו על שקופיות זכוכית וכוסו בגליונות כיסוי.התבונן בשקופיות המוכנות תחת מיקרוסקופ פלורסנט באמצעות מסנן ירוק (310-380 ננומטר).התמונות צולמו בהגדלה פי 4 כדי להבין את קשרי ה-Ct ותצהיר פולימר עודף ברשת ה-Ct.
הטופוגרפיה של פני השטח של NFRCS Ch ו-Cp נקבעה באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM) עם שלוחת TESP חדה במיוחד במצב הקשה: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taiwan.חספוס פני השטח נקבע על ידי שורש ממוצע ריבוע (RMS) באמצעות תוכנה (Scanning Probe Image Processor).מיקומי NFRCS שונים הוצגו בתמונות תלת מימד כדי לבדוק את אחידות פני השטח.סטיית התקן של הציון עבור אזור נתון מוגדרת כחספוס פני השטח.משוואת RMS שימשה כדי לכמת את חספוס פני השטח של NFRCS31.
מחקרים מבוססי FESEM בוצעו באמצעות FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, טוקיו, כדי להבין את המורפולוגיה של פני השטח של Ch NFRCS ו-Cp NFRCS, שהראו BCT טוב יותר מאשר Cm NFRCS.מחקר FESEM בוצע על פי השיטה שתוארה על ידי Zhao et al.32 עם שינויים קלים.NFRCS 20 עד 30 מ"ג Ch NFRCS ו-Cp NFRCS היו מעורבבים מראש עם 20 µl של 3.8% נתרן ציטראט מעורבב מראש עם דם חולדה.20 μl של 0.2 M CaCl2 נוספו לדגימות שטופלו בדם כדי להתחיל קרישה והדגימות הודגרו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.בנוסף, עודפי אריתרוציטים הוסרו ממשטח ה-NFRCS על ידי שטיפה במי מלח.
דגימות עוקבות טופלו ב-0.1% גלוטראלדהיד ולאחר מכן יובשו בתנור אוויר חם ב-37 מעלות צלזיוס כדי להסיר לחות.הדגימות המיובשות צופו ונותחו 32 .תמונות נוספות שהתקבלו במהלך הניתוח היו היווצרות קריש על פני השטח של סיבי כותנה בודדים, שקיעת פולימר בין Ct, מורפולוגיה (צורה), שלמות הקריש ומורפולוגיה של אריתרוציטים בנוכחות NFRCS.אזורי NFRCS לא מטופלים ואזורי NFRCS שטופלו ב-Ch ו-Cp שהודגרו בדם נסרקו לאיתור יונים אלמנטריים (נתרן, אשלגן, חנקן, סידן, מגנזיום, אבץ, נחושת וסלניום)33.השווה אחוזי יונים אלמנטריים בין דגימות מטופלות ודגימות לא מטופלות כדי להבין את הצטברות יונים אלמנטריים במהלך היווצרות קריש והומוגניות קריש.
עובי ציפוי פני השטח Cp HFFC על פני השטח Ct נקבע באמצעות FESEM.חתכי הרוחב של Cp NFRCS נחתכו מהמסגרת וצופו מקרטעים.דגימות ציפוי הקפיצה שהתקבלו נצפו על ידי FESEM ועובי ציפוי פני השטח נמדד 34, 35, 36.
רנטגן מיקרו-CT מספק הדמיה תלת מימדית לא הרסנית ברזולוציה גבוהה ומאפשרת לך ללמוד את הסידור המבני הפנימי של NFRK.Micro-CT משתמש בקרן רנטגן העוברת דרך הדגימה כדי לתעד את מקדם ההנחתה הליניארי המקומי של קרני הרנטגן בדגימה, מה שעוזר לקבל מידע מורפולוגי.המיקום הפנימי של Ct ב-Cp NFRCS ו-Cp NFRCS שטופלו בדם נבדק על ידי מיקרו-CT כדי להבין את יעילות הספיגה וקרישת הדם בנוכחות NFRCS37,38,39.המבנים התלת-ממדיים של דגימות Cp NFRCS שטופלו בדם ולא טופלו שוחזרו באמצעות מיקרו-CT (V|tome|x S240, פיניקס, גרמניה).באמצעות תוכנת VG STUDIO-MAX גרסה 2.2, צולמו מספר תמונות רנטגן מזוויות שונות (באופן אידיאלי כיסוי של 360°) כדי לפתח תמונות תלת מימד עבור NFRCS.נתוני ההקרנה שנאספו שוחזרו לתמונות נפחיות תלת-ממדיות באמצעות התוכנה הפשוטה התלת-ממדית ScanIP Academic.
בנוסף, כדי להבין את התפלגות הקריש, נוספו ל-NFRCS 20 µl של דם ציטראט מעורב מראש ו-20 µl של 0.2 M CaCl2 כדי להתחיל קרישת דם.את הדוגמאות המוכנות משאירים להתקשות.משטח NFRK טופל ב-0.5% גלוטראלדהיד וייבש בתנור אוויר חם ב-30-40 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.קריש הדם שנוצר על ה- NFRCS נסרק, שוחזר ותמונת תלת מימד של קריש הדם הוצגה.
בדיקות אנטיבקטריאליות בוצעו על Cp NFRCS (הטוב ביותר בהשוואה ל-Ch NFRCS) באמצעות השיטה שתוארה קודם לכן עם שינויים קלים.הפעילות האנטיבקטריאלית של Cp NFRCS ו-Cp HFFC נקבעה באמצעות שלושה מיקרואורגניזמים שונים בבדיקה [S.aureus (חיידקים גרם חיוביים), E.coli (חיידקים גרם שליליים) וקנדידה לבנה (C.albicans)] הגדלים על אגר בצלחות פטרי באינקובטור.יש לחסן באופן אחיד 50 מ"ל של תרחיף תרבית חיידקים מדוללת בריכוז של 105-106 CFU ml-1 על מדיום האגר.יוצקים את המדיום לצלחת פטרי ונותנים לו להתמצק.נעשו בארות על פני צלחת האגר למילוי HFFC (3 בארות עבור HFFC ו-1 עבור בקרה שלילית).הוסף 200 µl HFFC ל-3 בארות ו-200 µl pH 7.4 PBS לבאר הרביעית.בצד השני של צלחת הפטרי, הניחו דיסק 12 מ"מ Cp NFRCS על האגר המוצק והרטיבו ב-PBS (pH 7.4).טבליות Ciprofloxacin, Ampicillin ו- Fluconazole נחשבות לתקני ייחוס עבור Staphylococcus aureus, Escherichia coli ו-Candida albicans.מדוד את אזור העיכוב באופן ידני וצלם תמונה דיגיטלית של אזור העיכוב.
לאחר אישור מוסרי אתי, המחקר נערך במכללה הרפואית לחינוך ומחקר Kasturba במניפאל, קרנטקה, בדרום הודו.הפרוטוקול הניסיוני של TEG במבחנה נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית של המכללה הרפואית של Kasturba, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020).הנבדקים גויסו מתורמי דם מתנדבים (בני 18 עד 55) מבנק הדם של בית החולים.כמו כן, התקבל טופס הסכמה מדעת מהמתנדבים לאיסוף דגימות דם.נעשה שימוש ב-TEG מקורי (N-TEG) ​​כדי לחקור את ההשפעה של תכשיר Cp HFFC על דם מלא מעורבב מראש עם נתרן ציטראט.N-TEG זוכה להכרה נרחבת בתפקידה בהחייאה נקודתית, מה שיוצר בעיות עבור רופאים בשל הפוטנציאל לעיכוב קליני משמעותי בתוצאות (בדיקות קרישה שגרתיות).ניתוח N-TEG בוצע באמצעות דם מלא.הסכמה מדעת והיסטוריה רפואית מפורטת התקבלו מכל המשתתפים.המחקר לא כלל משתתפים עם סיבוכים המוסטטיים או פקקתיים כגון הריון/אחרי לידה או מחלת כבד.גם נבדקים שנטלו תרופות המשפיעות על מפל הקרישה לא נכללו במחקר.בדיקות מעבדה בסיסיות (המוגלובין, זמן פרותרומבין, טרומבופלסטין מופעל וספירת טסיות דם) בוצעו לכל המשתתפים על פי נהלים סטנדרטיים.N-TEG קובע את צמיגות קריש הדם, מבנה הקריש הראשוני, אינטראקציה בין חלקיקים, חיזוק קריש ותמוגגת קריש.ניתוח N-TEG מספק נתונים גרפיים ומספריים על ההשפעות הקולקטיביות של מספר אלמנטים תאיים ופלזמה.ניתוח N-TEG בוצע בשני נפחים שונים של Cp HFFC (10 μl ו-50 μl).כתוצאה מכך, 1 מ"ל של דם מלא עם חומצת לימון התווסף ל-10 μl של Cp HFFC.הוסף 1 מ"ל (Cp HFFC + דם citrated), 340 μl דם מעורב ל-20 μl 0.2 M CaCl2 המכיל צלחת TEG.לאחר מכן, מנות TEG הועמסו לתוך TEG® 5000, US כדי למדוד R, K, אלפא זווית, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% מדגימות הדם בנוכחות Cp HFFC41.
פרוטוקול המחקר in vivo נבדק ואושר על ידי הוועדה המוסדית לאתיקה של בעלי חיים (IAEC), בית הספר לרפואה של Kasturba, Manipal Institute of Higher Education, Manipal (IAEC/KMC/69/2020).כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להמלצות הוועדה לבקרה ופיקוח על ניסויים בבעלי חיים (CPCSEA).כל מחקרי NFRCS in vivo (2 × 2 cm2) בוצעו על חולדות Wistar נקבות (במשקל 200 עד 250 גרם).כל החיות התאקלמו בטמפרטורה של 24-26 מעלות צלזיוס, לבעלי החיים הייתה גישה חופשית למזון ומים סטנדרטיים באופן חופשי.כל החיות חולקו באופן אקראי לקבוצות שונות, כל קבוצה כללה שלוש חיות.כל המחקרים בוצעו בהתאם למחקרים בבעלי חיים: דיווח של ניסויים ב-Vivo 43.לפני המחקר, החיות הורדמו על ידי מתן תוך-צפקי (ip) של תערובת של 20-50 מ"ג קטמין (לכל ק"ג משקל גוף) ו-2-10 מ"ג קסילאזין (לכל ק"ג משקל גוף).לאחר המחקר, נפח הדימום חושב על ידי הערכת ההבדל בין המשקל ההתחלתי והסופי של הדגימות, הערך הממוצע שהתקבל משלוש הבדיקות נלקח כנפח הדימום של הדגימה.
מודל קטיעת זנב החולדה יושם כדי להבין את הפוטנציאל של NFRCS לווסת דימום בטראומה, קרב או תאונת דרכים (מודל פציעה).חתוך 50% מהזנב בעזרת להב אזמל והנח באוויר למשך 15 שניות כדי להבטיח דימום תקין.בנוסף, דגימות בדיקה הונחו על זנבה של חולדה על ידי הפעלת לחץ (Ct, Cs, Ch NFRCS ו-Cp NFRCS).דימום ו-PCT דווחו עבור דגימות הבדיקה (n=3)17,45.
היעילות של בקרת לחץ NFRCS בלחימה נחקרה על דגם של עורק הירך השטחי.עורק הירך נחשף, מנוקב בטרוקר 24G ומדמם תוך 15 שניות.לאחר שנצפה דימום בלתי מבוקר, דגימת הבדיקה מונחת באתר הדקירה תוך הפעלת לחץ.מיד לאחר יישום דגימת הבדיקה, זמן הקרישה נרשם ונצפה ביעילות המוסטטית למשך 5 הדקות הבאות.אותו הליך חזר על עצמו עם Cs ו-Ct46.
דאולינג וחב'.47 הציע מודל של פגיעה בכבד להערכת הפוטנציאל ההמוסטטי של חומרים המוסטטיים בהקשר של דימום תוך ניתוחי.BCT נרשם עבור דגימות Ct (בקרה שלילית), מסגרת Cs (בקרה חיובית), דגימות Ch NFRCS ודגימות Cp NFRCS.הווריד הנבוב העל-הפטי של החולדה נחשף על ידי ביצוע לפרוטומיה חציונית.לאחר מכן, החלק המרוחק של האונה השמאלית נחתך במספריים.בצע חתך בכבד עם להב אזמל ונותן לו לדמם במשך כמה שניות.דגימות בדיקה של Ch NFRCS ו-Cp NFRCS שנשקלו בצורה מדויקת הונחו על המשטח הפגוע ללא כל לחץ חיובי ו-BCT תועד.לאחר מכן קבוצת הביקורת (Ct) הפעילה לחץ ואחריו Cs 30 s47 מבלי לשבור את הפציעה.
מבחני ריפוי פצעים in vivo בוצעו באמצעות מודל פצעי כריתה כדי להעריך את תכונות ריפוי הפצעים של NFRCS המפותחים על בסיס פולימרים.מודלים של פצעי כריתה נבחרו ובוצעו על פי שיטות שפורסמו בעבר עם שינויים קלים19,32,48.כל החיות הורדמו כפי שתואר קודם לכן.השתמש באגרוף ביופסיה (12 מ"מ) כדי לבצע חתך עגול בעור הגב.אתרי הפצע שהוכנו הולבשו עם Cs (ביקורת חיובית), Ct (הכרה שכריות כותנה מפריעות להחלמה), Ch NFRCS ו-Cp NFRCS (קבוצת ניסוי) ובקרה שלילית ללא כל טיפול.בכל יום של המחקר, שטח הפצע נמדד בכל החולדות.השתמש במצלמה דיגיטלית כדי לצלם את אזור הפצע וללבוש חבישה חדשה.אחוז סגירת הפצע נמדד בנוסחה הבאה:
בהתבסס על אחוז סגירת הפצע ביום ה-12 של המחקר, עור החולדות של הקבוצה הטובה ביותר נכרת ((Cp NFRCS) וקבוצת הביקורת) ונחקר על ידי צביעת H&E וצביעת טריכרום מאסון. בהתבסס על אחוז סגירת הפצע ביום ה-12 של המחקר, עור החולדות של הקבוצה הטובה ביותר נכרת ((Cp NFRCS) וקבוצת הביקורת) ונחקר על ידי צביעת H&E וצביעת טריכרום מאסון.בהתבסס על אחוז סגירת הפצע ביום ה-12 למחקר, עורם של החולדות מהקבוצה הטובה ביותר ((Cp NFRCS) וקבוצת הביקורת) נכרת ונבדק על ידי צביעה עם המטוקסילין-אאוזין וטריכרום מאסון.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大雤行暄大雤硌Ma三色染色研究.根据研究第12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大雤行的大雼行根据研究第眳组）חולדות בקבוצה הטובה ביותר ((Cp NFRCS) וקבוצות ביקורת) נכרתו עבור צביעת המטוקסילין-אאוזין וצביעת טריכרום מאסון על סמך אחוז סגירת הפצע ביום ה-12 של המחקר.הליך הצביעה המיושם בוצע על פי שיטות שתוארו קודם לכן49,50.בקצרה, לאחר קיבוע בפורמלין 10%, הדגימות התייבשו באמצעות סדרה של אלכוהול מדורג.השתמש במיקרוטום כדי להשיג קטעים דקים (5 מיקרומטר בעובי) של הרקמה שנכרתה.קטעים סדרתיים דקים של ביקורת ו-Cp NFRCS טופלו בהמטוקסילין ואאוזין כדי לחקור שינויים היסטופתולוגיים.כתם הטריכרום של מאסון שימש לזיהוי היווצרות של סיבים של קולגן.התוצאות שהתקבלו נחקרו באופן עיוור על ידי פתולוגים.
היציבות של דגימות Cp NFRCS נחקרה בטמפרטורת החדר (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) במשך 12 חודשים51.Cp NFRCS (שינוי צבע פני השטח וצמיחת חיידקים) נבדק ויזואלית ונבדק עבור עמידות לבלאי קפלים ו-BCT לפי השיטות לעיל המתוארות בסעיף חומרים ושיטות.
יכולת ההרחבה והשחזור של Cp NFRCS נבדקה על ידי הכנת Cp NFRCS בגודל של 15×15 cm2.בנוסף, דגימות של 30 מ"ג (n=5) נכרתו משברי Cp NFRCS שונים וה-BCT של הדגימות שנחקרו הוערך כמתואר קודם לכן בסעיף השיטות.
ניסינו לפתח צורות ומבנים שונים באמצעות קומפוזיציות Cp NFRCS עבור יישומים ביו-רפואיים שונים.צורות או תצורות כאלה כוללות ספוגיות חרוטיות לדימומים מהאף, הליכים דנטליים וספוגיות גליליות לדימום נרתיקי.
כל מערכי הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית תקן ונותחו על ידי ANOVA באמצעות Prism 5.03 (GraphPad, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב) ואחריו מבחן ההשוואות המרובות של Bonferroni (*p<0.05).
כל ההליכים שבוצעו במחקרים בבני אדם היו בהתאם לסטנדרטים של המכון ושל מועצת המחקר הלאומית, כמו גם הצהרת הלסינקי 1964 ותיקוניה הבאים, או תקנים אתיים דומים.כל המשתתפים קיבלו מידע על תכונות המחקר ואופיו הוולונטרי.נתוני המשתתפים נשארים חסויים לאחר איסוף.הפרוטוקול הניסיוני של TEG במבחנה נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית של המכללה הרפואית של Kasturba, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020).מתנדבים חתמו על הסכמה מדעת לאיסוף דגימות דם.
כל ההליכים שבוצעו במחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לפקולטה לרפואה של קסטובה, המכון המניפלי להשכלה גבוהה, מניפאל (IAEC/KMC/69/2020).כל הניסויים בבעלי חיים שתוכננו נערכו בהתאם להנחיות הוועדה לבקרה ופיקוח על ניסויים בבעלי חיים (CPCSEA).כל המחברים פועלים לפי הנחיות ARRIVE.
ספקטרום FTIR של כל NFRCS נותחו והשוו עם ספקטרום הצ'יטוזן המוצג באיור 2A.פסגות ספקטרליות אופייניות של כיטוזן (מתועדות) ב-3437 ס"מ-1 (מתיחה של OH ו-NH, חפיפה), 2945 ו-2897 ס"מ-1 (מתיחה CH), 1660 ס"מ-1 (זן NH2), 1589 ס"מ-1 (כיפוף N-H), 1157 ס"מ-1 מתיחה 6-1 ס"מ (שני ס"מ-1) הידרוקסיל), 993 ס"מ-1 (מתיחה CO, Bo-OH) 52.53.54.טבלה משלימה S1 מציגה את ערכי ספקטרום הספיגה של FTIR NFRCS עבור chitosan (מדווח), chitosan טהור, Cm, Ch ו-Cp.ספקטרום FTIR של כל NFRCS (Cm, Ch ו- Cp) הראו את אותן פסי ספיגה אופייניים כמו צ'יטוסן טהור ללא שינויים משמעותיים (איור 2A).תוצאות ה-FTIR אישרו את היעדר אינטראקציות כימיות או פיזיקליות בין הפולימרים המשמשים לפיתוח ה- NFRCS, מה שמצביע על כך שהפולימרים בהם נעשה שימוש אינרטיים.
אפיון במבחנה של Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS ו-Cs.(א) מייצג את הספקטרום המשולב של FTIR של הרכבים של chitosan ו-Cm NFRCS, Ch NFRCS ו-Cp NFRCS תחת דחיסה.(ב) א) קצב ספיגת הדם המלא של NFRCS Cm, Ch, Cp ו-Cg (n = 3);דגימות ה-Ct הראו BAR גבוה יותר מכיוון שלצמר גפן יש יעילות ספיגה גבוהה יותר;ב) דם לאחר ספיגת דם איור של הדגימה הנספגת.ייצוג גרפי של ה-BCT של דגימת בדיקה C (ל-Cp NFRCS היה ה-BCT הטוב ביותר (15 שניות, n = 3)). נתונים ב-C, D, E ו-G הוצגו כממוצע ± SD, ופסי השגיאה מייצגים SD, ***p < 0.0001. נתונים ב-C, D, E ו-G הוצגו כממוצע ± SD, ופסי השגיאה מייצגים SD, ***p < 0.0001. Данные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляю, планки погрешностей представляю, 0,0001. הנתונים ב-C, D, E ו-G מוצגים כממוצע ± סטיית תקן, ופסי שגיאה מייצגים סטיית תקן, ***p<0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001. C、D、E 和G 中的数据显示为平均值± SD，误差线代表SD，***p < 0.0001. Данные в C, D, E ו-G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей предноставля*** p <0,0001. נתונים ב-C, D, E ו-G מוצגים כממוצע ± סטיית תקן, פסי שגיאה מייצגים סטיית תקן, ***p<0.0001.