"לעולם אל תפקפקו בכך שקבוצה קטנה של אזרחים מתחשבים ומסורים יכולה לשנות את העולם. למעשה, זוהי היחידה שיש."
המשימה של Cureus היא לשנות את המודל ארוך השנים של פרסום רפואי, שבו הגשת מחקרים יכולה להיות יקרה, מורכבת וגוזלת זמן.
פלזמה/prp עשירה בטסיות דם, התחדשות רקמות, הפעלת טסיות דם, טיפול פרוליפרטיבי בגלוקוז, טסיות דם, טיפול פרוליפרטיבי
צטט מאמר זה כ: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 במאי, 2022) השפעת הגלוקוז על ספירת טסיות דם ונפחן: השלכות על רפואה רגנרטיבית. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
פלזמה עשירה בטסיות דם (PRP) ותמיסות גלוקוז היפרטוניות משמשות בדרך כלל להזרקה ברפואה רגנרטיבית, לעיתים יחד. ההשפעה של גלוקוז היפרטוני על ליזיס והפעלה של טסיות דם לא דווחה בעבר. בדקנו את ההשפעה של ריכוזי גלוקוז מוגברים על ספירת טסיות דם ואדומות דם, כמו גם על נפחי תאים ב-PRP ובדם מלא (WB). ירידה חלקית מהירה בספירת הטסיות התרחשה עם כל תערובות הגלוקוז שמעורבבות עם PRP או דם מלא, בהתאם לליזיס חלקי. לאחר הדקה הראשונה, ספירת טסיות הדם נותרה יציבה, דבר המצביע על התאמה מהירה של טסיות דם שיוריות להיפרטוניות קיצונית (>2000 mOsm). לאחר הדקה הראשונה, ספירת טסיות הדם נותרה יציבה, דבר המצביע על התאמה מהירה של טסיות דם שיוריות להיפרטוניות קיצונית (>2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккоходац тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. לאחר הדקה הראשונה, ספירת הטסיות נותרה יציבה, דבר המצביע על התאמה מהירה של טסיות הדם הנותרות להיפרטוניות קיצונית (>2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（>2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацих тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. לאחר הדקה הראשונה, ספירת הטסיות נותרה יציבה, דבר המצביע על הסתגלות מהירה של טסיות הדם הנותרות למצב היפר-אוסמולרי קיצוני (>2000 מיליו-סמ"ר).ריכוזי גלוקוז של 25% ומעלה הביאו לעלייה משמעותית בנפח הטסיות הממוצע (MPV), דבר המצביע על שלב מוקדם של הפעלת טסיות. יש צורך במחקרים נוספים כדי לקבוע האם מתרחשת ליזיס או הפעלה של טסיות דם, והאם הזרקת גלוקוז היפרטונית בלבד או בשילוב עם PRP עשויה לספק תועלת קלינית נוספת.
בשנות ה-50, המנתח האמריקאי ג'ורג' האקט גילה כי הוא יכול להקל לצמיתות על כאבי מפרקים וגב אצל חולים רבים על ידי הזרקת תמיסה פרוליפרטיבית לגידים ולרצועות. ניסוייו על ארנבות הראו כי הטיפול, אותו כינה טיפול פרוליפרטיבי, גרם להגדלה והתחזקות של הגידים. מחקרים היסטולוגיים אישרו כי קולגן חדש מיוצר במהלך תהליך זה [1].
במהלך העשורים הראשונים נוסו פתרונות רבים ושונים להפצה. עד שנות ה-90, רוב הרופאים ראו בריכוזים גבוהים של גלוקוז את השיטה הבטוחה והיעילה ביותר. עם זאת, מנגנון הפעולה נותר לא ברור.
מעט מחקרים קליניים נערכו במאה ה-20 בעקבות עבודתו של האקט. עם זאת, בשנות ה-2000 חלה התעניינות מחודשת ומספר ניסויים קליניים מוצלחים של טיפול פרוליפרטיבי הושלמו לטיפול בכאבי גב תחתון [2], דלקת מפרקים ניוונית של הברך [3] ואפיקונדיליטיס צידית [4].
התחדשות רקמות דורשת השתתפות של תאי גזע. לכן, ריכוזים גבוהים של גלוקוז חייבים לגרום איכשהו לנדידה, שכפול והתמיינות של תאי גזע. אנו משערים כי טסיות דם עשויות לשמש כשליחים וכי ריכוזי גלוקוז גבוהים עשויים לגרום לטסיות דם לשחרר ציטוקינים וגורמי גדילה, ובכך לקדם תהליכי התחדשות, במיוחד נדידת תאי גזע לאזורים עם ריכוזי גלוקוז גבוהים.
הפעלת טסיות דם תמיד קודמת לעלייה בסידן התוך תאי [5]. ליו ועמיתיו בשנת 2008 הראו שרמות גלוקוז גבוהות מגבירות את פעילותן של ערוצי TRPC6 (potential receptor canonical type 6) בקרום הפלזמה, מה שמוביל לזרימה של יוני סידן לתוך טסיות הדם [6]. מחקר נוסף הראה שחשיפה של אזור השוליים של המיקרוטובולים ליוני סידן גורמת להרפיה, התרחבות ועיוות של אזור השוליים, מה שבתורו גורם לשינוי צורה מדיסק לכדורי, וכתוצאה מכך נפח טסיות דם ממוצע (MPV) [7].
ההשערה שלנו במחקר זה היא שחשיפה של טסיות דם לריכוזים גבוהים של גלוקוז משפיעה על אזור השוליים של המיקרוטובולים ועל הסביבה התוך תאית, מה שמוביל לעלייה ב-MPV.
כל המשתתפים חתמו על טופס הסכמה מדעת לאחר שהוסברו פרטי המחקר ולפני קבלת הדגימות. במחקר זה, נעשה שימוש רק בדגימות PRP עם המטוקריט גבוה מ-2%, כך שניתן היה לכלול ספירת כדוריות הדם האדומות (אריתרוציטים) ונפח גופי הדמה הממוצע של כדוריות הדם האדומות (MCV) לצורך השוואה.
המחקר נערך בארבעה שלבים, השלב הראשון היה PRP והשלבים הנותרים היו דם מלא (טבלה 1). כפי שתואר קודם לכן [8], כל הכוחות הצנטריפוגליים היחסיים (RCF, כוח g) חושבו מנקודת האמצע (Rmid, בס"מ) של עמודת הדם במזרק הצנטריפוגלי. בחרנו להשתמש ב-MPV כסמן לסנסיטיזציה של טסיות דם ובספירת טסיות דם כאינדיקטור לליזה פוטנציאלית של טסיות דם, אשר שניהם ניתנים למדידה בקלות במכשירי אנליזה המטולוגיים סטנדרטיים.
בשלב הראשון, 47 מתנדבים תרמו דגימות דם - מבחנה אחת של חומצה אתילן-דיאמין-טטרא-אצטית (EDTA) ודגימת דם מלאה אחת של PRP (מונעת קרישה עם נתרן ציטרט (NaCl, 3%)) (טבלה 1). הכניסו את הנדנדה למבחנה מיד. ספירת דם מלאה (CBC) בוצעה על דגימות EDTA בשלושה עותקים, ודגימות NaCl נותחו בשלושה עותקים לניתוח CBC, ולאחר מכן הוכן PRP בשיטות שונות שתוארו לעיל [8]. כל דגימות ה-PRP הוכנו על ידי צנטריפוגה ב-900-1000 גרם. ערבבו כל דגימת PRP במיקסר וורטקס במשך 5-10 שניות, ולאחר מכן חלקו חמישה חלקים של 0.5 מ"ל למבחנים.
כדי להעריך את השפעת החשיפה לטסיות דם על ריכוזי גלוקוז מוגברים, כמויות שוות (0.5 מ"ל) של גלוקוז במים בריכוזים של 0%, 5%, 12.5%, 25% ו-50% עורבבו עם דגימות טסיות דם כדי לקבל ריכוזים של 0%, 2.5%, 6.25%, 12.5% ​​ו-25% של תערובת הגלוקוז, וערבבו את המבחנות על מבחנה במשך 15 דקות. ערך ה-TAC של כל תערובת נותח בשלושה עותקים לאחר 15 דקות. ממוצע ספירת טסיות דם (PLT), ספירת כדוריות דם אדומות (RBC), MCV ו-MPV חושבו עבור כל מבחנה, וממוצע ספירת טסיות דם, ספירת כדוריות דם אדומות (RBC), MCV ו-MPV חושבו עבור כל דגימות PRP.
לאחר השלמת השלב הראשון של איסוף הנתונים, שמנו לב לעלייה משמעותית בנפח טסיות הדם בטסיות PRP לאחר הוספת D50W. טסיות PRP אינן מייצגות בהכרח את כל טסיות הדם, ומדיום PRP שונה ממדיום WB. לכן, החלטנו לערוך ניסוי שלב שני של השפעת הוספת D50W לדם מלא.
עבור הסיבוב השני, בחרנו גודל דגימה של 30 בהתבסס על התוצאות מהסדרה הראשונה, כמתואר בסעיף הניתוח. בסדרה זו, 20 מתנדבים תרמו דגימות דם (טבלה 1). דם מלא (1.8 מ"ל) נשאב למזרק של 3 מ"ל ועבר טיפול נוגד קרישה עם 0.2 מ"ל של NaCl 40%. מזרק הדם המלא עורבב במשך חמש שניות בעזרת מערבל וורטקס ו-CBC נותח בשלושה עותקים. לאחר הניתוח, דם נוגד קרישה נוסף ל-2 מ"ל של גלוקוז 50% במזרק של 5 מ"ל (ריכוז הגלוקוז הסופי היה כ-25% (D25)) והוכנס למבחנה ניעור למשך 30 דקות. לאחר 30 דקות, D25/CBC במזרקי WB נותחו בשלושה עותקים. חושבו ממוצעים של ספירת טסיות דם, ספירת כדוריות דם אדומות (RBC), MCV ו-MPV למזרק, וחושבו ממוצעי PLT, ספירת כדוריות דם אדומות (RBC), MCV ו-MPV עבור כל דגימה לפני ואחרי הוספת גלוקוז.
מכיוון שטסיות דם בדם מלא נחשפות בדרך כלל לגלוקוז היפרטוני במהלך טיפול גלוקוז פרוליפרטיבי עקב הזרקה זעיר פולשנית, ולא מקובל לשלב PRP עם גלוקוז היפרטוני ממש לפני ההזרקה, החלטנו לחקור גלוקוז היפרטוני בשילוב עם WB בסעיף 1. שלב שלישי ורביעי. בכל שלב, 20 מתנדבים תרמו 7-8 מ"ל של ACD-A (חומצה המכילה טריסודיום ציטרט (22.0 גרם/ליטר), חומצת לימון (8.0 גרם/ליטר) וגלוקוז (24.5 גרם/ליטר), תמיסת דקסטרוז ציטרט) עבור נוגדי קרישה בדם (טבלה 1). רק תערובות של גלוקוז גדולות מ-12.5% ​​שימשו לקביעת אחוז הסף הקשור לעלייה ב-MPV. בשלב השלישי, 1 מ"ל של דם מוכנס למבחנה. לאחר מכן, ערבבו את הדם במיקסר וורטקס במשך 10 שניות על ידי הוספת 1 מ"ל של 30% גלוקוז, 40% גלוקוז או 50% גלוקוז למבחנה כדי לקבל ריכוז גלוקוז סופי של 15%, 20% ו-25%, בהתאמה. דגימות דם גלוקוז נותחו ל-CBC מיד לאחר הערבוב וחזרו על הפעולה כל שתי דקות במשך 30 דקות.
במהלך הערבוב הראשוני, הוספת גלוקוז היפרטוני 1:1 ו-WB או PRP חושפת את טסיות הדם לריכוזים מעל 25% למשך מספר שניות. בשלב הרביעי, כדי להעריך את השפעת הגלוקוז ההיפרטוני עם ריכוזי שיא התחלתיים מינימליים ולבחון את הגבול העליון של השפעת הגלוקוז, הוספנו רק כמות קטנה של דם ל-D25W או D50W. הניחו 1 ​​מ"ל של D25W או D50W במבחנה והוסיפו 0.2 מ"ל של WB תוך כדי מערבולת הדגימה למשך 10 שניות. במקרים אלה, הדם נחשף לגלוקוז בריכוז של כ-20% מעל הריכוז הסופי, ולא 50% מעל הריכוז הסופי כמו בשלב 3, וכתוצאה מכך ריכוזי גלוקוז סופיים של 20.8% ו-41.6%. דגימות מעורבות נותחו באותו מרווח זמן כמו בשלב 3.
בשלב הראשון של כל סדרת דילול גלוקוז, נלקחו 30 דגימות מכיוון שזה היה גודל המדגם המתאים למחקר הפיילוט [9]. בסוף כל שלב (כולל השלב הראשון), יש להעריך את התאמת גודל המדגם באמצעות הנוסחה המשמשת לקביעת גודל המדגם הדרוש להערכת ממוצע משתנה התוצאה הרציף באוכלוסייה אחת. נוסחה n = Z2 x SD2 /E2. במשוואה זו, Z הוא ציון ה-Z, SD הוא סטיית התקן, ו-E הוא השגיאה הרצויה [10]. האלפא שלנו הוא 0.05, התואם לערך Z של 1.96, ואנו מצפים לשגיאה של 5 (באחוזים). לפיכך אנו פותרים עבור n = (1.962 x SD2)/52. התוצאות הראו שגודל המדגם הנדרש לכל שלב היה קטן יותר מהמספר בפועל שנאסף.
במהלך תקופות 1, 3 ו-4, תוך שימוש ביותר מריכוז גלוקוז אחד, נותחה ההשפעה של ריכוזי גלוקוז שונים על ידי השוואת השינוי החלקי בין זמן 0 לכל זמן עוקב (שלב 1 ב-15 דקות, תקופה 3 ב-15 דקות), וארבעה ב-15 שניות, ולאחר מכן כל שתי דקות.) קצבי השינוי עבור כל תקופת זמן הושוו באמצעות מבחן מאן-ויטני U מכיוון שהנתונים לא עקבו אחר התפלגות נורמלית כפי שנקבע על ידי מבחן הנורמליות שפירו-וילק. מאחר שבוצע ניתוח 1 ל-1 של מספר קבוצות (חמש) בשלבים הראשון, השלישי והרביעי (חמש בסך הכל), בוצע תיקון בונפרוני כדי להתאים את ערך האלפא הרצוי ל-≤0.01 אך לא ל-≤0.05.
הפחתה של ספירת טסיות דם עם כל ריכוזי הדקסטרוז היפרטוני ועלייה ב-MPV בטסיות PRP בריכוז דקסטרוז >12.5%: ספירת טסיות PRP עלתה מפי אחד עד פי חמישה מהריכוז בהשוואה לדם מלא בנקודת ההתחלה, בהתאם לשיטה (לא מתואר). הפחתה של ספירת טסיות דם עם כל ריכוזי הדקסטרוז היפרטוני ועלייה ב-MPV בטסיות PRP בריכוז דקסטרוז >12.5%: ספירת טסיות PRP עלתה מריכוז פי אחד עד פי חמישה בהשוואה לדם מלא בנקודת ההתחלה, בהתאם לשיטה (לא מתואר). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV вхRP концентрации декстрозы > 12.5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходноов, зависимости от метода (не показано). ירידה בספירת טסיות הדם בכל ריכוזי הדקסטרוז ההיפרטוניים ועלייה ב-MPV בטסיות PRP בריכוז דקסטרוז >12.5%: ספירת טסיות PRP עלתה פי 1-5 בהשוואה לדם מלא בנקודת ההתחלה, בהתאם לשיטה (לא מוצג). ).在> 12.5% ​​的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方漳，因方潂 בריכוז גלוקוז >12.5%, ריכוז הגלוקוז הגבוה מפחית את ספירת הדם, ערך ה-MPV בדם של PRP עולה: בהשוואה ל-与基线全血, ספירת ה-PRP בדם עולה מפי 1 עד פי 5 מהריכוז (לא מתואר). שיעורי רווחים > 12.5% ​​מכלל החברות הגיפיות, פרויקטים ב-PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- 5-кратных концентраций исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). בריכוזי גלוקוז >12.5%, כל ריכוזי הגלוקוז עם יתר לחץ דם הפחיתו את ספירת הטסיות והגדילו את MPV בטסיות PRP: ספירת טסיות PRP עלתה פי 1 עד 5 בהשוואה לריכוזי דם מלא בבסיס, בהתאם לשיטה (כמתואר).איור 1 מראה שמספר טסיות הדם ירד בכמעט 75% לאחר דילול במים וב-20-30% לאחר 15 דקות של דילול עם ריכוזים שונים של גלוקוז בהשוואה ל-PRP הבסיסי ודילול 1:1 מותאם לנפח (1-k1 עם תיקון נפח). k -1 הרבייה).1 הרבייה).
מספר התאים בכל דילול מבוטא כשבר מהמספר המקורי לפני הדילול.
ערך ה-MPV ירד באופן מינימלי במהלך ייצור PRP, ללא שינוי נוסף בריכוזי הדילול ל-12.5% ​​במים או גלוקוז (כולל תערובות גלוקוז של 25% PRP) ועלה ביותר מ-20% לאחר דילול בתמיסת גלוקוז של 50% (איור 2). לעומת זאת, אריתרוציטים לא הראו שינוי משמעותי בנפח בכל דילול מלבד H2O.
הנפח הממוצע של תאים בכל דילול מבוטא כאחוז מהנפח המקורי לפני הדילול.
ירידה דומה אך פחות בולטת בספירת טסיות הדם ועלייה ב-CVR נצפתה בבלוטות הלסת שנחשפו ל-50% גלוקוז (לפורמולציה עם 25% גלוקוז). טבלה 2 משווה את מספר התאים ונפחי התאים בדם מלא מדולל ב-50% דקסטרוז עם נתוני PRP שלב 1 מדולל ב-50% דקסטרוז. שינויים בספירת כדוריות הדם האדומות ובנפח תאי הדם המרבי של כדוריות הדם האדומות לא היו ברורים ולא היו במרכז תשומת ליבנו.
סטיית תקן = סטיית תקן, MD = הפרש ממוצע בין הקבוצות, SE = סטיית תקן של הפרש ממוצע, RBC = אריתרוציטים, PLT = טסיות דם, PRP = פלזמה עשירה בטסיות דם, WB = דם מלא
לאחר הוספת D50W ל-WB, אחוז אובדן הטסיות המותאם לדילול היה 7.7% (310±73 לעומת 286±96) בהשוואה ל-17.8% עבור דילול PRP ב-D50W (664±348 לעומת 544±277). MPV WB גדל ב-16.8% (מ-10.1 ± 0.5 ל-11.8 ± 0.6), בעוד ש- MPV PRP גדל ב-26% (9.2 ± 0.8 לעומת 11.6 ± 0.7). למרות שההבדלים הממוצעים הן בירידה בספירת הטסיות והן בעלייה בספירת ה-MPV היו גדולים משמעותית עם PRP, השינויים בירידה בספירת הטסיות בתוך WB היו כמעט משמעותיים (310 ± 73 עד 286 ± 96 (-7.7%); p = .06) והעלייה בספירת ה-MPV הייתה משמעותית (10.1 ± 0.5 עד 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001). למרות שההבדלים הממוצעים הן בירידה בספירת הטסיות והן בעלייה בספירת ה-MPV היו גדולים משמעותית עם PRP, השינויים בירידה בספירת הטסיות בתוך WB היו כמעט משמעותיים (310 ± 73 עד 286 ± 96 (-7.7%); p = .06) והעלייה בספירת ה-MPV הייתה משמעותית (10.1 ± 0.5 עד 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001).למרות שההבדלים הממוצעים הן בירידה בספירת הטסיות והן בעלייה ב-CVR היו גדולים משמעותית עם PRP, השינויים בירידה בספירת הטסיות בתוך WB היו כמעט משמעותיים (310 ± 73 עד 286 ± 96 (-7.7%); p = 0.06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 עד 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). העלייה ב-MPV הייתה משמעותית (מ-10.1 ± 0.5 ל-11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06）和的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 殌 但 轿 内减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的瀄增和MPV 的睯映1. ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001）.השינוי בירידה בספירת הטסיות בתוך ה-WB היה כמעט משמעותי (מ-310 ± 73 ל-286 ± 96 (-7.7%); p = 0.06), למרות של-PRP היו הבדלים ממוצעים גדולים משמעותית בירידה בספירת הטסיות ובעלייה בספירת ה-MPV, והעלייה בספירת ה-MPV הייתה משמעותית.(от 10,1 ± 0,5 עד 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (מ-10.1 ± 0.5 עד 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001).
נדרש ריכוז סופי של 20% גלוקוז כדי לראות שינוי משמעותי ב-MPV, אך השינוי ב-MPV היה בולט יותר בריכוז סופי של 25%. אובדן טסיות הדם התייצב לאחר הירידה הראשונית. ציינו ירידה חדה ראשונית ב-CVR, אולם CVR שוחזר במהירות בריכוז גלוקוז סופי של 25%, שהיה גבוה משמעותית מרמות ה-CVR שנצפו בריכוזי גלוקוז סופיים של 20% ו-15% (איור 3 ומשמאל לטבלה 3; משבצות מוצללות). מצביע על ערכי p ≤ אלפא עם תיקון בונפרוני של 0.01). כמו כן, נצפתה ירידה חדה ראשונית במספר מקרי ה-PLT, שנצפתה בשלב הראשוני של 0-15 שניות, ולאחר מכן נותרה יציבה (מ-15 שניות עד 30 דקות; משמאל לטבלה 4).
הוספת ריכוזים שונים של גלוקוז לדם מלא הביאה לירידה מהירה ראשונית ב-MPV ולאחריה התאוששות תלוית ריכוז של יותר מ-20%. המקרא מציג את ריכוז הגלוקוז לאחר הדילול. D15, D20 ו-D25 בוצעו בדילול 1:1. D21 ו-D41 בוצעו בדילול 1:5.
טבלה 4 מציגה את השינוי בספירת טסיות הדם כאשר מדולל בגלוקוז היפרטוני. צפינו בקשר תלוי-מינון בין הירידה המיידית במספר טסיות הדם (PLT) בדילול 1:1 ובדילול 1:5. בהשוואה בין דילולים 1:1 כקבוצה אחת לבין דילולים 1:5, בקבוצת 1:1 חלה ירידה מיידית בספירת טסיות הדם, פחות מקבוצת 1:5 (66±48,000 (23%) לעומת 99±69,000 (37%). (p = 0.014) בקבוצת 1:5. לאחר ירידה ראשונית בנקודת המדידה הראשונה, ספירת טסיות הדם כאחוז מגלוקוז התייצבה (איור 4).
כאשר מוסיפים דם מלא לגלוקוז ביחס של 1:1, ספירת טסיות הדם יורדת בכ-25%. עם זאת, כאשר מוסיפים דם מלא ביחס של 1:5, הירידה הייתה גדולה בהרבה - כ-50%.
גלוקוז של 41% הגדיל את ריכוז ה-MPV מהר יותר ודרמטי יותר מאשר 25% או 21%. תוצאות ה-MPV מוצגות באיור 3. בכל שאר הדילולים, לא נצפתה ירידה ראשונית מיידית ב-MPV לאחר הוספת גלוקוז של 50%. בעת שימוש ב-25% גלוקוז (ריכוז גלוקוז 20.8% בדילול הסופי), השינוי ב-MPV היה דומה לשינוי ב-20% גלוקוז בדילול 1:1 (איור 3). למרות שהשינויים ב-MPV היו בתחילה גדולים יותר בריכוז מעורב של 41% מאשר ב-25%, ההבדל ב-MPV בין 41% ל-25% לאחר 16 דקות לא היה משמעותי עוד (טבלה 3, מימין). מעניין גם שגלוקוז של 25% הגדיל את ה-MPV בצורה יעילה יותר מאשר 20.8%.
מחקר חוץ גופי זה אישר חלקית את השערתנו. הוא הראה פוטנציאל ליזיס חלקי של טסיות דם על ידי ערבוב דקסטרוז, התאמה מהירה של טסיות דם להיפרטוניות קיצונית, ועלייה משמעותית ב-MPV בתגובה לריכוזים של > 25% של דקסטרוז היפרטוני. הוא הראה פוטנציאל ליזיס חלקי של טסיות דם על ידי ערבוב דקסטרוז, התאמה מהירה של טסיות דם להיפרטוניות קיצונית, ועלייה משמעותית ב-MPV בתגובה לריכוזים של > 25% של דקסטרוז היפרטוני. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациц тромби экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ על гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. הוא הראה פוטנציאל ליזיס חלקי של טסיות דם עם דקסטרוז, אקאמאדציה מהירה של טסיות דם עד להיפרטוניות קיצונית, ועלייה משמעותית ב-MPV בתגובה לרמות דקסטרוז היפרטוניות >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庸响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптациц тромбоцитов экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. זה מראה פוטנציאל ליזיס חלקי של טסיות דם על ידי תערובות גלוקוז, הסתגלות מהירה של טסיות דם להיפרטוניות קיצונית, ועלייה משמעותית ב-MPV בתגובה לגלוקוז היפרטוני >25%.העלייה הראשונית הייתה מקסימלית בחשיפה לגלוקוז של 41.6%, אך העלייה ב-MPV התקרבה לחשיפה לגלוקוז של 25% כ-20 דקות לאחר החשיפה.
ריכוז הטסיות מושפע מגלוקוז. שמנו לב שכמות ה-PLT ירדה בכל דילולי הגלוקוז. ירידה חדה במספר הטסיות בדילולי H2O (0%) של סדרת PRP עשויה להיות קשורה לתמיסה אוסמוטית. לחלופין, זה יכול להיות ארטיפקט הנגרם על ידי התקבצות טסיות, אך זה בניגוד לחוסר שינוי MPV בדילול זה. ממצא זה אומר שחלק מהטסיות רגישות מאוד להיפוסמולריות.
בכל דילולי הגלוקוז ביחס של 1:1, כמות ה-PLT ירדה ב-20-30%, אפילו ב-D5W (היפוטוני ב-252 mOsm), דבר שעשוי להצביע על השפעה לא-אוסמוטית ספציפית של גלוקוז, מכיוון שגם PLT וגם MPV נותרו ללא שינוי בעלייה פי שלושה בריכוז הגלוקוז מ-D5W ל-D25W. למעשה, ריכוזי PLT נטו לעלות מעט עם עליית האוסמולריות.
הירידה ב-PLT בין דילולים של 1:1 ל-1:5 פירושה שאפקט ההמסה תלוי בריכוז הגלוקוז ההתחלתי והסופי. אם זה היה תלוי רק בריכוז ההתחלתי, אז אפשר היה לצפות לראות הבדל בהפחתת PLT בין ריכוזים של 1:1. אבל אנחנו לא. אם אפקט הליזיס תלוי רק בריכוז הגלוקוז הסופי, אז אנחנו לא מצפים להבדל גדול בין דילול של 20% ביחס של 1:1 לדילול של 20.8% ביחס של 1:5. ובכל זאת הצלחנו.
אם מתרחש אובדן טסיות דם עקב פירוק טסיות דם, נוצר ליזט חלקי, ולאחר מכן משתחררים ציטוקינים וגורמי גדילה לסביבה החוץ-תאית. מספר מחקרים הראו כי ליזט טסיות דם יעיל כמעט כמו PRP כתמיסת ריבוי [11]. PRP עצמו הוכח כפתרון יעיל לטיפול בריבוי [12-14].
טסיות דם לא פעילות מסתובבות בצורת דיסק מחוזק במספר מבנים פנימיים. במהלך ההפעלה, הן מקבלות צורה כדורית או אמבה, וכתוצאה מכך עלייה בנפח. העלייה בנפח דורשת עלייה בשטח הפנים, שהיא תוצאה של יציאה של מערכת הצינוריות הפתוחה (OCS) והוספת גרגירים אקסוציטים לממברנה. נותר לקבוע האם העלייה ב-MPV הנגרמת על ידי גלוקוז היפרטוני כרוכה באחד או בשני המנגנונים הללו, אך אם מדובר באחרון, אז עלייה ב-MPV תצביע על דה-גרנולציה.
מחקר זה הראה כי חשיפה לריכוזים גבוהים של גלוקוז על גבי PRP או טסיות דם מלאות הביאה לעלייה ב-MPV תוך 15 דקות עם ריכוז גלוקוז של 25% ו-41.6%, בהתאמה.
ייתכן שהעלייה בריכוז ה-MPV בטסיות הדם נובעת מהרחבת סבכי המיקרוטובולים שמסביב בתגובה לזרימת סידן. ליו ועמיתיו. גלוקוז הוכח כמתווך זרימת סידן דרך ערוץ TRPC6 בטסיות הדם [6]. ההשערה שלנו היא שגלוקוז גורם להרפיה של סבכי המיקרוטובולים, מה שמוביל לעלייה בריכוז ה-MPV וברגישות ו/או הפעלה של טסיות הדם. עם זאת, אם לשפוט לפי תוצאותינו, זהו רק חלק מהסיפור. בבדיקות שלנו, אף ריכוז מתחת ל-D25W לא הביא לעלייה בריכוז ה-MPV. בהתחשב בכך שלא בדקנו חשיפה לריכוזי גלוקוז בין 12.5% ​​ל-25%, תוצאות שלב 1 שלנו מצביעות על כך שייתכן שיש סף בטווח ריכוזי גלוקוז זה שמוביל לעלייה בריכוז ה-MPV. בדיקות נוספות בשלבים 3 ו-4 הראו שנראה כי 20-25% גלוקוז הוא הסף לכך, אך עדיין לא ברור מדוע.
כמו כן, ראינו ירידה של כ-9% ב-MPV לאחר צנטריפוגה. לא ברור האם ירידה זו ב-MPV נובעת מטסיות דם גדולות וצפופות יותר הלכודות בשכבת כדוריות הדם האדומות (RBC) של הצנטריפוגה. תצפית זו עשויה להיות חשובה לרופאים מכיוון שהיא עשויה לרמוז שטסיות PRP הן תת-קבוצה קטנה ופחות צפופה של טסיות דם WB.
במחקר קודם, הראינו כי הכנת PRP בשיטות ידניות אינה יקרה [8]. אם גלוקוז גורם לרגישות של טסיות רקמה או PRP, מה שהופך אותן לרגישות יותר להפעלה, או אם PRP מיוצר עם תכונות ליזט חלקיות, הדבר עשוי לשפר את ההתחדשות ולהפחית את הצורך בטיפול. לכן, השילוב של PRP וגלוקוז בריכוז גבוה עשוי להיות יעיל יותר מבחינת עלות מאשר PRP או גלוקוז בלבד.
למחקר שלנו מספר חסרונות. ראשית, אנו משתמשים ב-PRP שהושג במספר שיטות שונות. מצב זה יכול להוביל לתוצאות סותרות. שנית, לא הצלחנו לבצע ניתוח ביוכימי של אף אחת מהדגימות שלנו כדי לקבוע בצורה מדויקת יותר אם התרחשה הפעלת טסיות דם. ברצוננו למדוד P-selectin, גורם טסיות דם 4, אגרגטים מונוציטים של טסיות דם, או סמנים אחרים של הפעלת טסיות דם כדי להבין טוב יותר את מידת או נוכחות של דה-גרנולציה של גרגירי אלפא, אך זה חורג מתחום מחקר זה. שלישית, לא הצלחנו לאשר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים או שיטות אחרות שהעלייה ב-MPV בטסיות דם שנחשפו לגלוקוז נבעה מהשפעה על סבכי מיקרוטובולים.
תערובות של WB או PRP עם 25% גלוקוז הגבירו את רמת ה-MPV, מה שסימן את תחילת הפעלת טסיות הדם, אם כי מחקר זה לא הדגים התקדמות של צבירה או דה-גרנולציה. תערובת הגלוקוז ההיפרטונית גרמה לאובדן טסיות דם, דבר שעשוי לייצג אפקט ליטית. הפעלה חלקית או ליזיס של טסיות דם יכולות לגרום להתחדשות רקמות לאחר הזרקת טסיות דם. לא ברור לאילו השלכות קליניות שינויים אלה עלולים להוביל. מחקרים נוספים הדגימו מדידות מדויקות יותר של הפעלה או ליזיס והעריכו את ההשפעות הקליניות השונות של תערובות גלוקוז היפרטוניות עם WB או PRP.
טיפול פרוליפרטיבי לגלוקוז הוא טיפול רגנרטיבי פשוט וזול המתרחב במהירות ותומך במחקר קליני. מחקר זה מציע מנגנון פיזיולוגי שאם יאושר, יוכל לעזור לנו להבין חלק ממנגנון הרגנרטיבי של טיפול פרוליפרטיבי.
ביו-רפואית ואינפורמטיקה בריאותית בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת מיזורי, קנזס סיטי, קנזס סיטי, ארה"ב
נבדקים בבני אדם: כל המשתתפים במחקר זה נתנו או לא נתנו את הסכמתם. האגודה הבינלאומית לרפואה תאית הנפיקה אישור ICMS-2017-003. הפרוטוקול הבא אושר לשימוש נוסף על ידי ועדת הביקורת המוסדית של האגודה הבינלאומית לרפואה תאית: כותרת: חישוב תפוקת תרופות בפלזמה עשירה בטסיות דם על סמך ספירת טסיות דם CBC בתחילת המחקר. נבדקים בבעלי חיים: כל המחברים אישרו כי לא היו מעורבים במחקר זה בעלי חיים או רקמות. ניגודי עניינים: בהתאם לטופס הגילוי האחיד של ICMJE, כל המחברים מצהירים את הדברים הבאים: פרטי תשלום/שירות: כל המחברים מצהירים כי לא קיבלו תמיכה כספית מאף ארגון עבור העבודה שהוגשה. קשרים פיננסיים: כל המחברים מצהירים כי אין להם כיום או בשלוש השנים האחרונות קשרים פיננסיים עם כל ארגון שעשוי להיות מעוניין בעבודה שהוגשה. קשרים אחרים: כל המחברים מצהירים כי אין קשרים או פעילויות אחרים שעשויות להשפיע על העבודה שהוגשה.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 במאי, 2022) השפעת הגלוקוז על ספירת טסיות דם ונפחן: השלכות על רפואה רגנרטיבית. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© זכויות יוצרים 2022 הריסון ואחרים. זהו מאמר גישה פתוחה המופץ תחת תנאי רישיון ייחוס Creative Commons CC-BY 4.0. שימוש, הפצה ורבייה ללא הגבלה בכל מדיום מותרים, ובלבד שיינתנו קרדיט למחבר ולמקור המקוריים.