現在、お使いのブラウザでは Javascript が無効になっています。JavaScript が無効になっていると、この Web サイトの一部の機能が動作しません。
あなたの特定の詳細と興味のある特定の薬剤を登録してください。私たちはあなたが提供した情報を当社の広範なデータベースの記事と照合し、PDF コピーをただちに電子メールで送信します。
著者 ステラ S、ヴィターレ SR、マルトラーナ F、マッシミノ M、パヴォーネ G、ランザファーム K、ビアンカ S、バローネ C、ゴルゴーネ C、フィケラ M、マンゼラ L
ステファニア・ステラ、1,2 シルヴィア・リタ・ヴィターレ、1,2 フェデリカ・マルトラーナ、1,2 ミケーレ・マッシミノ、1,2 ジュリアナ・パヴォーネ、3 カティア・ランザファメ、3 セバスティアーノ・ビアンカ、4 キアラ・バローネ、5 クリスティーナ・ゴルゴーネ、6 マルコ・フィチェラ、6、7 リヴィア・マンゼラ1,21カターニア、カターニア、95123、イタリア;2 実験腫瘍学および血液学センター、AOU ポリクリニック「G.ロドリコ – サンマルコ」、カターニア、95123、イタリア。3 腫瘍内科、AOU ポリクリニック「G.ロドリコ – サンマルコ」、カターニア、95123、イタリア。4 Medical Genetics、ARNAS Garibaldi、カターニア、95123、イタリア;5 Medicine Genetics、ASP、シラキュース、96100、イタリア。6 カターニア大学生物医学・生物工学科学部、医療遺伝学、カターニア、イタリア、95123;7Oasi Research Institute-IRCCS、Troina、94018、イタリア 通信: Stefania Stella、電話 +39 095 378 1946、電子メール [email protected]。[email protected] 目的: BRCA1 および BRCA2 における生殖系列変異、および確立された乳がん (BC) 、卵巣 (OC) およびその他のがんの生涯リスクに関連するもの。BRCA 遺伝子の検査は、個人のリスクを評価するだけでなく、健康保因者の予防法やがん患者の治療法を見つけるための鍵となります。BRCA1 および BRCA2 変異の有病率は地理的地域によって大きく異なり、シチリア人家族における BRCA 病原性多様体に関するデータは存在しますが、特にシチリア島東部の集団を対象とした研究は不足している。我々の研究の目的は、シチリア島東部のBC患者コホートにおけるBRCA病原性生殖細胞系列変化の発生率と分布を調査し、次世代シークエンシングを用いて特定のBC形質との関連性を評価することであった。変化の存在は腫瘍グレードおよび増殖指数と相関していた。結果：全体として、35人の患者（9％）がBRCA病的バリアントを有し、17人（49％）がBRCA病的バリアントを有していた。 BRCA1ではBRCA1、BRCA2では18（51％）。BRCA1変異はトリプルネガティブBC患者で一般的であるのに対し、BRCA2変異は管腔型BC患者でより一般的である。非キャリアと比較して、BRCA1変異を有する被験者は腫瘍悪性度および増殖指数が有意に高かった。全体として、これらのデータは、変異保有者の癌の適切な予防と治療のための BRCA スクリーニングを裏付けるこれまでの証拠と一致しています。
乳がん（BC）は世界中で最も一般的な悪性腫瘍であり、女性の最も致命的な癌です。1BC予後と臨床行動を決定する生物学的特徴は、長期にわたって広範囲に研究され、部分的に解明されています。実際、いくつかの代理マーカーは現在、BCを異なる分子サブタイプに分類するために使用されています。増殖、増殖指数KI-67および腫瘍グレード（G）。2これらの変数の組み合わせは、次のBCカテゴリを識別しました。1）ERおよび/またはPGR発現を示す管腔腫瘍は、BCの75％を説明しました。増殖インデックスの;2) ER および PgR 陰性だが HER2 増幅を示す HER2+ 腫瘍。このグループは全乳房腫瘍の 10% を占めます。3) ER および PgR の発現および HER2 の増幅を示さないトリプルネガティブ乳がん (TNBC) は、乳がんの約 15% を占めます。2-4
これらの BC サブタイプのうち、腫瘍悪性度および増殖指数は、腫瘍の攻撃性および予後に直接的かつ独立して関連する横断的なバイオマーカーを表します。5,6
前述の生物学的特徴に加えて、BC の発症につながる遺伝的遺伝子変化の役割は、ここ数年でますます重要になってきています。7 乳房腫瘍の約 10 人に 1 人は、特定の遺伝子の生殖細胞系変化により遺伝します。8 180,000 人以上の女性が参加した 2 つの大規模な疫学研究により、最近 8 つの遺伝子グループ (つまり、ATM、BARD1、BRCA1、BRCA2、CHK2、PALB2、RAD51C、および RAD51) が特定されました。 D) 主に遺伝性 BC の原因となる。これらの遺伝子の中で、BRCA1 および BRCA2 (以下、BRCA1/2 と呼ぶ) は、乳房腫瘍の発症と最も強い相関関係を示した。9-12 実際、生殖細胞系 BRCA1/2 変異は、BC だけでなく、卵巣、前立腺、膵臓、結腸直腸、黒色腫などの他の悪性腫瘍の生涯リスクを大幅に増加させる。13 歳から 80 歳までの累積罹患率は、 BCの罹患率は、BRCA1病原性多様体（PV）を持つ女性では72％、BRCA2 PVを持つ女性では69％である14。
注目すべきことに、最近の論文では、BCのリスクはPVの種類に依存することが示唆されています。実際、病原性切断型バリアントと比較して、特にBRCA1遺伝子における明らかなミスセンスバリアントは、特に高齢の女性においてBCのリスク低下と関連しています15。
BRCA1 または BRCA2 PV の存在は、さまざまな生物学的および臨床病理学的特徴と関連していました。16,17 BRCA1 関連 BC は、臨床的に悪性度が高く、低分化で、増殖性が高い傾向があります。これらの腫瘍は、通常、トリプルネガティブであり、発症年齢が早いです。BRCA2 変異患者に発生する腫瘍は、通常、中等度から高分化型のグレードと可変の増殖指数を示します。これらの腫瘍は、内腔 B でより一般的であり、通常は内腔 B で発生します。特に、BRCA1 および BRCA2 の変異は、白金塩やポリ (ADP-リボース) ポリメラーゼ阻害剤 (PARPi) などの標的薬物を含む特定の治療に対する感受性を高めます。19,20
過去数年にわたり、臨床現場での次世代シーケンス（NGS）の導入により、BRCA1/2 を含むがん感受性症候群の分子検査を受ける BC 患者の数が増加しています。21 同時に、家族歴、人口統計、および臨床病理学的特徴に関する正確な基準に基づいた定義により、BRCA1/2 検査に値する個人をより適切に特定できるようになりました。22,23 これに関連して、特定の集団における BRCA1/2 スクリーニングに関する証拠が蓄積されており、地理的な差異が浮き彫りになっています。シチリア島西部の BC コホートに関する報告はありますが、シチリア島東部の人口における BRCA1/2 スクリーニングに関して入手可能なデータはほとんどありません。28,29
我々はここで、シチリア島東部のBC患者における生殖細胞系BRCA1/2スクリーニングの結果を報告し、BRCA1またはBRCA2変異の存在とこれらの腫瘍の主な臨床病理学的特徴をさらに相関させる。
後ろ向き研究は、カターニアのロドリコ・サンマルコポリクリニコ病院の「実験腫瘍学および血液学センター」で実施されました。2017年1月から2021年3月まで、合計455人の乳がん、卵巣がん、黒色腫、膵臓がんまたは前立腺がんの患者がBRCA/2遺伝子検査のために当社の分子診断研究所に紹介されました。この研究はヘルシンキ宣言に従って実施され、参加者全員に書面による情報提供が行われました。分子分析の前に同意してください。
BC の組織学的および生物学的特徴 (ER、PgR、HER2 状態、Ki-67、グレード) は、侵襲性の高い腫瘍成分のみを考慮して、コア生検または外科サンプルで評価されました。これらの特徴に基づいて、BC は次のように分類されました: ルミナル A (ER+ および/または PgR+、HER2-、Ki-67<20%)、ルミナル B (ER+ および/または PgR+、HER2-、Ki-67 ≥20%)、管腔B-HER2+（ERおよび/またはPgR+、HER2+）、HER2+（ERおよびPgR-、HER2+）、またはトリプルネガティブ（ERおよびPgR-、HER2-）。
BRCA1 および BRCA2 の変異状態を評価する前に、腫瘍学者、遺伝学者、心理学者を含む学際的なチームが各患者の腫瘍遺伝学相談を実施し、BRCA1 および/または BRCA1 の存在を判定しました。患者の選択は、イタリア臨床腫瘍学会 (AIOM) のガイドラインおよび地元のシチリアの推奨事項に従って行われました。 30,31 これらの基準には以下が含まれます: (i) 感受性遺伝子における既知の病原性バリアント (例、BRCA1、BRCA2、TP53、PTEN)(ii) BC の男性。(iii) BC および OC を有するもの。(iv) BC が 36 歳未満、TNBC が 60 歳未満、または両側性 BC が 50 歳未満の女性。(v) BC 50 年未満の個人病歴および少なくとも 1 人の第一度親族: (a) BC 50 年未満。(b) あらゆる年齢の非粘液性および非境界性OC。(c) 両側性BC。(d) 男性のBC。(e) 膵臓がん。(f) 前立腺がん。(vi) 2 人以上の 50 年を超える BC の個人歴、および互いに一等親族である親族 (一親等の親族を含む) の BC、OC、または膵臓がんの家族歴。(vii) OC および少なくとも 1 人の第一度親族の個人歴: (a) BC <50 年。(b) NOC。(c) 両側性BC。(d) 男性のBC。(vii) 高度漿液性 OC の女性。
各患者から 20 mL の末梢血サンプルを採取し、EDTA チューブ (BD Biosciences) に集めました。メーカーの指示に従って QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN、Hilden、Italy) を使用して 0.7 mL の全血サンプルからゲノム DNA を単離し、Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific、Waltham、MA、USA) に通して定量を実行しました。ターゲットの濃縮とライブラリーの調製は、Oncomine™ BRCA Research Assay Chef によって実行され、メーカーの指示に従って自動ライブラリー調製のために Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 キットにロードする準備ができています。このキットは、すべての BRCA1 (NM_007300.3) および BRCA2 (NM_000059.3) 遺伝子の研究に使用できる 2 つのマルチプレックス PCR プライマー プールで構成されています。簡単に言うと、15 μL各希釈サンプル DNA (10 ng) をライブラリー調製用のバーコード付きプレートに添加し、すべての試薬と消耗品を Ion Chef™ 装置にロードしました。次に、自動ライブラリー調製とバーコード付きサンプルライブラリーのプールを Ion Chef™ 装置で実行しました。次に、製造元の指示に従って、Qubit® 3.0 蛍光光度計 (Thermo Fisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム) で調製したライブラリーの数を評価しました。最後に、ライブラリーを組み合わせます。シーケンスは、Ion 510 チップ (Thermo Fisher Scientific) を使用した Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) 機器 (Thermo Fisher Scientific) を使用して実行されました。データ分析は、Amplicon Suite (SmartSeq srl) および Ion Reporter ソフトウェアによって実行されました。
すべての変異体の命名法は、オンラインで入手可能なヒトゲノム変異コンソーシアムの現在のガイドライン (HGVS、http://www.hgvs.org/mutnomen) に従いました。BRCA1/2 変異体の臨床的重要性は、国際コンソーシアム ENIGMA (生殖系列変異対立遺伝子解釈のための証拠に基づくネットワーク、https://enigmaconsortium.org/) の分類を使用し、ARUP、BRCAEXCHANGE、C などのさまざまなデータベースを参照して定義されました。 linVar、IARC_LOVD、UMD。この分類には、良性 (カテゴリー I)、良性の可能性が高い (カテゴリー II)、重要性が不明瞭な変異体 (VUS、カテゴリー III)、病原性の可能性が高い (カテゴリー IV)、および病原性 (カテゴリー V) という 5 つの異なるリスク カテゴリが含まれています。VarSome は、タンパク質の構造と機能に対する変異の影響も分析しました。これは、30 のデータベースにアクセスできる有益なツールです。32
各 VUS に潜在的な臨床的重要性を割り当てるために、次の計算タンパク質予測アルゴリズムが使用されました: MUTATION TASTER、33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php)、POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)、および Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input)。 php)。クラス 1 および 2 に分類された変異体は野生型とみなされました。
サンガーシークエンシングにより、各病原性バリアントの存在が確認されました。簡単に説明すると、BRCA1 および BRCA2 遺伝子参照配列 (それぞれ NG_005905.2、NM_007294.3 および NG_012772.3、NM_000059.3) を使用して、検出された各バリアントに対して特異的なプライマーのペアを設計しました。したがって、ターゲット PCR を実行し、続いてサンガーシークエンシングを実行しました。
BRCA1/2 遺伝子検査で陰性となった患者は、大規模ゲノム再構成 (LGR) の存在を評価するために、メーカーの指示に従ってマルチプレックスライゲーション依存性プローブ増幅 (MLPA) によって検査されました。簡単に説明すると、DNA サンプルが変性され、最大 60 個の BRCA1 および BRCA2 遺伝子特異的プローブが使用され、それぞれが長さ約 60 ヌクレオチドの特定の DNA 配列を検出します。プローブ増幅産物は、PCR アンプリコンの独自のセットで構成されます。次に、キャピラリー電気泳動と、適切なバッチ固有の Cofalyser テーブル (www.mrcholland.com) を組み合わせた Cofalyser.Net ソフトウェアによって分析しました。
選択された臨床病理学的変数 (組織学的グレードおよび Ki-67% 増殖指数) は、BRCA1/2 PV の存在と関連しており、Prism ソフトウェア v. 8.4 を使用し、p 値 <0.05 を有意であると仮定してフィッシャーの直接確率検定を使用して計算されました。
2017年1月から2021年3月までに、455人の患者が生殖細胞系列BRCA1/2変異のスクリーニングを受けた。変異検査はポリクリニコ病院の実験腫瘍血液学センターで実施された。シチリアのガイドライン（http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm、N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020）によると、 「カターニアのロドリコ – サンマルコ」全体では、患者数 389 人で、乳がん、卵巣がん 37 人、膵臓がん 16 人、前立腺がん 8 人、黒色腫が 5 人でした。がんの種類別の患者分布と解析結果を図1に示します。
図 1 は、研究の概要を示すフローチャートです。乳房、黒色腫、膵臓、前立腺、または卵巣腫瘍を有する患者を対象に、BRCA1 および BRCA2 遺伝子の変異が検査されました。
略語: PV、病原性変異。VUS、重要性が不確かな変異体。WT、野生型 BRCA1/2 配列。
私たちは乳がんコホートに選択的に研究を集中させました。患者の年齢中央値は 49 歳 (範囲 23 ～ 89 歳) で、大部分が女性でした (n=376、または 97%)。
これらの被験者のうち、64人（17％）がBRCA1/2変異を有し、全員が女性であった。35人（9％）がPVを有し、29人（7.5％）がVUSを有していた。35の病的バリアントのうち17（48.6％）がBRCA1で発生し、18（51.4％）がBRCA2で発生し、5つのVUSがBRCA1（17.2％）と24（82.8％）で発生した。 ) BRCA2 (図 1 および 2)。LGR は MLPA 分析には存在しませんでした。
図 2. 389 人の乳がん患者における BRCA1 および BRCA2 変異の分析。(A) 389 人の乳がん患者における病的バリアント (PV) (赤)、有意性不明バリアント (VUS) (オレンジ)、および WT (青) の分布。(B) 乳がん患者 389 名 35 名 (9%) が BRCA1/2 病原性多様体 (PV) を持っていました。そのうち 17 名 (48.6%) が BRCA1 PV キャリア (暗赤色)、18 名 (51.4%) が BRCA2 キャリア (薄赤色) でした。(C) 389 人の被験者中 29 人 (7.5%) が VUS、5 人 (17.2%) の BRCA1 遺伝子 (濃いオレンジ色)、および 24 人 (82.8%) の BRCA2 遺伝子 (薄いオレンジ色) を保有していました。
略語: PV、病原性変異。VUS、重要性が不確かな変異体。WT、野生型 BRCA1/2 配列。
次に、BRCA1/2 PV患者におけるBC分子サブタイプの有病率を調査した。分布には、ルミナールAが2人（5.7％）、ルミナールBが15人（42.9％）、ルミナールB-HER2+が3人（8.6％）、HER2+が2人（5.7％）、TNBC患者が13人（37.1％）であった。BRCA1陽性患者のうち、5人（29.4％）は、ルミナル B BC、2 例 (11.8%) が HER2+ 疾患、10 例 (58.8%) が TNBC でした。BRCA1 変異のない腫瘍はルミナル A またはルミナル B-HER2+ でした (図 3)。BRCA2 陽性サブグループでは、10 例 (55.6%) の腫瘍がルミナル B、3 例 (16.7%) がルミナル B-HER2+、3 例 (16) .7％）TNBCおよび2人（11.1％）はルーメンAでした（図3）。このグループにはHER2+腫瘍は存在しませんでした。したがって、BRCA1変異はTNBC患者に多くみられますが、BRCA2変化はルーメンBの個人で優勢です。
図 3 BRCA1 および BRCA2 に病的バリアントを有する患者における乳がんサブタイプの有病率。乳がん患者の分子サブタイプ間の BRCA1- (暗赤色) および BRCA2- (薄赤色) PV の分布を示すヒストグラム。各ボックス内に報告された数値は、各乳がんサブタイプの BRCA1 および BRCA2 PV を持つ患者の割合を表します。
略語: PV、病原性変異。HER2+、ヒト上皮成長因子受容体 2 陽性。TNBC、トリプルネガティブ乳がん。
続いて、BRCA1 PV および BRCA2 PV の種類と遺伝子局在を評価しました。BRCA1 PV では、7 つの一塩基変異体 (SNV)、6 つの欠失、3 つの重複、および 1 つの挿入が観察されました。1 つの変異 (c.5522delG) のみが新しい発見を示しています。両方の被験者で検出された最も一般的な BRCA1 PV は c.5035_5039delCTAAT でした。この変化には、 BRCA1エクソン15の5つのヌクレオチド（CTAAT）により、コドン1679でアミノ酸ロイシンがチロシンに置換され、予測される代替終止コドンによる翻訳フレームシフトによりタンパク質の早期切断が引き起こされます。その他すべての変化は1例のみで検出されます。特に、報告されたPVの1つはスプライス部位コンセンサス領域（c.4357+1G>T）に位置していました（表1）。 。
BRCA2 PV に関して、6 つの欠失、6 つの SNV、および 2 つの重複が観察されました。見つかった変化はどれも新規なものではありません。3 つの変異が私たちの集団で再発しました。c.428dup および c.8487+1G>A が 3 人の被験者で観察され、続いて c.5851_5854delAGTT が 2 つの症例で検索されました。c.428dup の変化には、BRCA2 のエクソン 5 の C の繰り返しが含まれており、コードすると予測されています。切断された非機能性タンパク質。c.8487+1G>A 変異は BRCA2 イントロン 19 (± 1,2) のイントロン領域で発生し、スプライシングのコンセンサス配列に影響を及ぼし、スプライシングの変化をもたらし、タンパク質の異常または欠失をもたらします。c.5851_5854delAGTT 病的変異は、コード内のヌクレオチド位置 5851 から 5854 の 4 ヌクレオチドの欠失が原因です。これは、BRCA2 遺伝子のエクソン 10 に結合し、予測された代替終止コドン (p.S1951WfsTer) による翻訳フレームシフトを引き起こします。注目すべきことに、以前に報告されたように、c.631G>A と c.7008-2A>T の両方の変化が同じ患者で検出されました 34。最初の変異は、BRCA2 エクソン 7 のアデノシン (A) をグアニン (G) を含むヌクレオチドで置換することにより、va が変化します。アミノ酸は、コドン 211 のイソロイシンに類似した性質を持つアミノ酸です。この変化は正常な mRNA スプライシングに影響します。2 番目の変異体はイントロン領域に位置し、BRCA2 をコードする遺伝子のエクソン 13 の前に二重 A からチミン (T) への置換が生じます。c.7008-2A>T の変化により、異なる長さの複数の転写産物が生成される可能性があります。さらに、BRCA2 PV のグループでは、4 18 件の変更のうち (22.2%) はイントロン性でした。
次に、BRCA1/2の有害な変異を機能ドメインとタンパク質結合領域にマッピングしました（図4）。BRCA1遺伝子では、PVの50％が乳がんクラスター領域（BCCR）に位置し、変異の22％が卵巣がんクラスター領域（OCCR）に位置していました（図4A）。BRCA2 PVでは、変異の35.7％がBCCR領域に位置し、4変異の2.8%はOCCRにありました（図4B）。次に、BRCA1およびBRCA2タンパク質ドメイン内のPVの位置を評価しました。BRCA1タンパク質では、ループおよびコイルドコイルドメインに3つのPVが見つかり、BRCTドメインに2つの変異が見つかりました（図4A）。BRCA2タンパク質では、4つのPVがBRCリピートドメインにマッピングされ、3つのイントロンと3つのエクソンの変化が見られました。オリゴ/オリゴ糖結合 (OB) およびタワー (T) ドメインで検出されました (図 4B)。
図 4 BRCA1 および BRCA2 タンパク質の概略図と病的バリアントの局在。この図は、乳がん患者における BRCA1 (A) および BRCA2 (B) の病的バリアントの分布を示しています。エキソン変異は青で示され、イントロン変異はオレンジで示されています。バーの高さは症例数を表します。BRCA1 および BRCA2 タンパク質とその機能ドメインが報告されています。(A) BRCA1 タンパク質にはループ ドメイン (RING) と核局在配列（NLS）、コイルドコイルドメイン、SQ/TQクラスタードメイン（SCD）、およびBRCA1 C末端ドメイン（BRCT）。（B）BRCA2タンパク質には、8つのBRCリピート、らせんドメイン（Helical）を持つDNA結合ドメイン、3つのオリゴヌクレオチド/オリゴ糖結合（OB）フォールド、タワードメイン（T）、およびC側のNLSが含まれています。乳がんと呼ばれる領域クラスター領域 (BCCR) と卵巣癌クラスター領域 (OCCR) が下部に表示されます。 * 終止コドンを決定する変異を表します。
次に、BRCA1/2 PV の存在と相関する可能性のある BC の臨床病理学的特徴を調査しました。181 人の BRCA1/2 陰性患者 (非キャリア) とすべてのキャリア (n = 35) について完全な臨床記録が入手できました。腫瘍の増殖率と悪性度の間には相関関係がありました。
コホートの中央値（25％、範囲<10-90％）に基づいてKI-67の分布を計算しました。KI-67 <25％の被験者は「低KI-67」と定義されましたが、25％以上の人は「高KI-67」と見なされました。
図5 BRCA1およびBRCA2 PVの有無にかかわらず、乳がん女性におけるKi-67とグレード分布との相関関係。(A)非キャリアBC患者181名とBRCA1(18名)またはBRCA2(17名)のPV患者におけるKi-67値の中央値を示す箱ひげ図。0.5未満のP値は統計的に有意であるとみなされた。(B)組織学的グレードグループ(G2)へのBCがん患者の割り当てを表すヒストグラム。およびG3）BRCA1およびBRCA2の変異状態に応じて（WT対象、BRCA1およびBRCA2 PVキャリア）。
同様に、腫瘍悪性度がBRCA1/2 PVの存在と相関するかどうかを調べました。G1 BCが私たちの集団には存在しなかったため、患者を2つのグループ（G2またはG3）に分けました。Ki-67の結果と一致して、分析により、腫瘍悪性度とBRCA1変異の間に統計的に有意な相関関係が明らかになり、BRCA1保因者では非保因者と比較してG3腫瘍の割合が高かった（p<0.005）（図5B）。
DNA 配列決定技術の進歩により、BRCA1/2 遺伝子検査は前例のない進歩を可能にし、がんの家族歴を持つ患者に重大な影響を及ぼしています。現在までに、米国医療遺伝学会 35 および ENIGMA システムに従って、約 20,000 個の BRCA1/2 変異体が特定され、分類されています 35,36。 BRCA1/2 変異スペクトルが地理的地域によって大きく異なることはよく知られています。 37 イタリア国内では、BRCA1/2 の割合が2 つの PV は 8% から 37% の範囲であり、国内のばらつきが大きいことが示されています。38,39 人口約 500 万人のシチリア島は、住民数の点でイタリアで 5 番目に大きい地域です。シチリア島西部の BRCA1/2 分布に関するデータは存在しますが、島の東部では広範な証拠がありません。
私たちの研究は、シチリア島東部のBC患者におけるBRCA1/2 PVの発生率に関する最初の報告の1つです28。BCは私たちのコホートで最も一般的な疾患であるため、BCに焦点を当てて分析しました。
389人のBC患者を検査したところ、9％がBRCA1/2 PVを保有しており、BRCA1とBRCA2に均等に分布していた。これらの結果は、イタリア人集団で以前に報告された結果と一致している。28興味深いことに、我々のコホートの3％（389人中13人）が男性であった。この割合は男性乳がん（全BCの1％）で予想されるよりも高く、40BRCA1/2変異リスクに基づいて集団を選択したことを反映している。しかしながら、これらの男性はいずれもBRCAを発症しなかった。 1/2 PV であるため、これらは、特に PALB2、RAD51C、D などのあまり一般的ではない変異の存在を除外するためのさらなる分子分析の候補でした。BRCA2 VUS が明らかな被験者の 7% で、重要性が不確かな変異体が検出されました。この結果でさえ、既存の証拠と一致しています。28、41、42
BRCA1/2 変異女性における BC 分子サブタイプの分布を分析したところ、TNBC と BRCA1 PV の間（58.8%）、およびルミナル B BC と BRCA2 PV の間（55.6%）の既知の関連性が確認されました。16,43 BRCA1 および BRCA2 PV キャリアにおけるルミナル A および HER2+ 腫瘍は、既存の文献データと一致しています。16,43
次に、BRCA1/2 PV の種類と位置に焦点を当てます。私たちのコホートでは、最も一般的な BRCA1 PV は c.5035_5039delCTAAT でした。著者らはこの変異をシチリア人コホートでは説明していませんが、他の著者はこれを生殖細胞系列の BRCA1 PV として報告しています 34。いくつかの BRCA1 PV が私たちのコホートで見つかりました – 例えば、c.181T>G、c.514del、c.3253dupA および c.5266dupC – これらはシチリアで観察されています 28。これらのうち、2 つの BRCA1 創始者変異 (c.181T>G および c.526) 6dupC)は、東および中央ヨーロッパ(ポーランド、チェコ)、スロベニア人、オーストリア人、ハンガリー人、ベラルーシ人、ドイツ人のアシュケナージ系ユダヤ人に一般的に見られ44,45、米国とアルゼンチンでは最近、イタリアのBCおよびOC患者における「再発性生殖細胞系列変異体」と定義された。34c.514del変異体は、以前にシチリア島北部のパレルモとメッシーナの乳がん患者8人で同定されていた。興味深いことに、Incorvaia らでもカターニアの一部の家族で c.3253dupA 変異体を発見しました。 28 最も代表的な BRCA2 PV は、c.428dup、c.5851_5854delAGTT およびイントロン変異体 c.8487+1G>A であり、これらはパレルモの c.428dup、c.5851_5854delAGTT を持つ患者でより詳細に報告されています 28。 北西部の世帯で PV が観察されました。一方、c.5851_5854delAGTT PV はシチリア北西部の家庭で観察されました。8487+1G>A 変異体は、メッシーナ、パレルモ、カルタニッセッタの被験者でより一般的でした。28 Rebbeck et al.以前、コロンビアにおける c.5851_5854delAGTT 変化について報告しました。 37 別の BRCA2 PV、c.631+1G>A が、シチリア島 (アグリジェント、シラクーサ、ラグーザ) の BC および OC 患者で見つかりました。 28 注目すべきことに、同じ患者に 2 つの BRCA2 変異体 (BRCA2 c.631G>A および c.7008-2A>T) が共存することが観察されました。以前にそのように報告されたように、我々はシスモードで分離されていると仮定しました。 34,46 これらの BRCA2 ユーブル変異は実際にイタリア地域で頻繁に観察されており、中途終止コドンを導入し、メッセンジャー RNA スプライシングに影響を与え、BRCA2 タンパク質の機能不全を引き起こすことがわかっています。 47,48
また、タンパク質ドメインおよび遺伝子の推定上の OCCR および BCCR 領域に BRCA1 および BRCA2 PV をマッピングしました。これらの領域は Rebbeck et al. によって記載されています。しかし、生殖細胞系列変異の位置と乳がんまたは卵巣がんのリスクとの関連性に関する証拠は依然として議論の余地がある28,50-52。私たちの集団では、BRCA1 PV は主に BCCR 領域に位置し、BRCA2 PV は主に OCCR 領域に位置していました。しかし、推定上の OCCR 領域および BCCR 領域と BC の特徴との間に関連性は見つかりませんでした。これは、BRCA1/2 変異を持つ患者の数が限られているためである可能性があります。タンパク質ドメインの観点から見ると、BRCA1 PV はタンパク質全体に沿って分布しており、BRCA2 の変化は BRC リピート ドメインで優先的に見られます。
最後に、BC の臨床病理学的特徴を BRCA1/2 PV と相関させました。対象となった患者数が限られていたため、Ki-67 と腫瘍グレードとの間の有意な相関関係のみが見つかりました。Ki-67 の評価と解釈には多少の議論の余地がありますが、高い増殖率が疾患再発リスクの増加と生存率の低下に関連していることは確かです。現在まで、Ki-67 の「高」と「低」を区別するためのカットオフは 20% です。ただし、この閾値は適用されません。この高い Ki-67 率の傾向は、ルミナル B および TNBC コホートにおける有病率によって説明でき、そのコホートにはルミナル A 腫瘍がほとんど存在しませんでした。しかしながら、いくつかの証拠は、より高い Ki-67 カットオフ (25 ～ 30%) が予後に従って患者をより適切に層別化する可能性があることを示唆しているようです。53,54 私たちの分析の結果から、有意な相関関係は驚くべきことではありません。高い Ki-67 およびグレードと BRCA1 PV の存在との間で発生します。実際、BRCA1 関連腫瘍は TNBC に典型的であり、より悪性度の高い特徴を示します。16,17
結論として、この研究は、シチリア島東部のBCコホートにおけるBRCA1/2の変異状態に関する報告を提供する。全体として、我々の発見は、BCにおける変異有病率と臨床病理学的特徴の両方の点で、既存の証拠と一致している。マルチゲノム拡大変異解析を使用するなど、BRCA1/2変異BC患者のより大きな集団を対象としたさらなる研究が、BRCA1/2よりも特徴的で頻度の低いPVの存在を評価するために正当化される。これにより、遺伝子変異によりがんのリスクが増加している被験者の数が増加していることを特定し、適切に管理することが可能になります。
患者が研究目的で腫瘍サンプルを匿名で公開するためのインフォームド・コンセントに署名したことを確認しました。ヘルシンキ宣言に従って、すべての患者が書面によるインフォームド・コンセントに署名しました。AOUポリクリニコ「G.ロドリコ – S.マルコ」の方針に従って、BRCA1/2分析は臨床実践に従って行われ、すべての患者が書面によるインフォームド・コンセントを与えたため、この研究は倫理審査の対象から除外されました。また、患者は研究目的でのデータの使用にも同意しています。
倫理委員会の要請に応じて乳がん患者のケアにご協力いただいたパオロ・ヴィネリ教授に感謝いたします。
Federica Martorana は、Istituto Gentili、Eli Lilly、Novartis、Pfizer からの謝礼金を報告しています。他の著者は、この研究に関して利益相反はないと宣言しています。
1. Sung H、Ferlay J、Siegel RL ら、2020 年の世界がん統計: GLOBOCAN は、世界 185 か国の 36 種類のがんの発生率と死亡率を推定しています。CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660