Sawetara topik pemecahan masalah LC ora tau kedaluwarsa, amarga ana masalah ing praktik LC, sanajan teknologi instrumen saya suwe saya suwe. Ana akeh cara sing bisa muncul ing sistem LC lan pungkasane ana ing wangun puncak sing kurang apik.
Seneng nulis kolom "LC Troubleshooting" iki lan mikir babagan topik saben wulan, amarga sawetara topik ora tau metu saka gayane. Nalika ing bidang kromatografi, riset topik utawa gagasan tartamtu dadi lungse amarga diganti karo gagasan sing luwih anyar lan luwih apik, ing babagan pemecahan masalah, amarga artikel pemecahan masalah pisanan muncul ing jurnal iki (sawetawis topik LC ing wektu iku isih ana 19) (saiki 19 Jurnal LC isih relevan). sawetara taun kepungkur, Aku wis fokus sawetara bagean Ngatasi masalah LC ing tren kontemporer mengaruhi kromatografi Cairan (LC) (contone, comparison relatif saka pangerten kita saka efek meksa ing penylametan [2] New Advances) interpretasi kita asil LC lan carane ngatasi masalah karo instruments LC modern. Topik "urip lan pati" kanggo ngatasi masalah LC - unsur sing apik kanggo ngatasi masalah penting, ora ketompo umur sistem sing digunakake. Topik inti saka seri iki cocog banget karo grafik tembok "LC Troubleshooting Guide" sing misuwur ing LCGC (4) sing digantung ing akeh laboratorium. panyebab potensial beda saka wangun puncak miskin!Kita ora bisa nimbang kabeh masalah iki ing rinci ing siji artikel, supaya ing cicilan pisanan iki ing topik, aku bakal fokus ing sawetara sing paling kerep aku ndeleng.Mugi-mugi pangguna LC enom lan tuwa bakal nemokake sawetara tips mbiyantu lan pangeling ing topik penting iki.
Aku nemokake aku tambah akeh njawab pitakonan pemecahan masalah karo "apa wae bisa".Tanggepan iki bisa uga katon gampang nalika nimbang pengamatan sing angel diinterpretasikake, nanging aku kerep nemokake iku cocok.Kanthi akeh kemungkinan nimbulaké wangun puncak miskin, iku penting kanggo tetep mbukak pikiran nalika considering apa masalah bisa, lan kanggo bisa kanggo prioritize sabab potensial kanggo miwiti efforts ngatasi masalah kita, fokus ing sing paling penting, kemungkinan paling umum.
Langkah kunci ing sembarang latihan pemecahan masalah - nanging siji sing aku ora dianggep - yaiku ngerteni manawa ana masalah sing kudu dirampungake. Ngenali yen ana masalah asring tegese ngerteni manawa apa sing kedadeyan ing alat kasebut beda karo pangarepan kita, sing dibentuk kanthi teori, kawruh empiris, lan pengalaman (5). Gamelan, alus, anjog pinggiran, tailing, etc.), nanging uga kanggo width.Pangarepan kita kanggo wangun puncak nyata prasaja.Teori (6) uga ndhukung pangarepan buku teks sing, ing paling kasus, puncak kromatografi kudu simetris lan salaras karo wangun distribusi Gaussian, minangka ditampilake ing Figure 1a. Apa sing kita ngarepake Jeksa Agung bisa ngetokake komplèks mangsa luwih saka puncak lan topik sing bakal kita ngarepake saka puncak. artikel. Wangun puncak liyane ing Figure 1 nuduhake sawetara kemungkinan liyane sing bisa diamati-ing tembung liyane, sawetara cara sing bisa salah.
Kadhangkala puncak ora diamati ing kabeh kromatogram ngendi padha samesthine kanggo eluted. Bagan tembok ndhuwur nuduhake yen anané saka puncak (assuming sampel bener ngemot analyte target ing konsentrasi sing ngirim nggawe respon detector cukup kanggo ndeleng iku ndhuwur gangguan) biasane ana hubungane karo sawetara masalah instrument utawa kondisi fase seluler salah (yen diamati ing kabeh). puncak, biasane banget "lemah").Dhaptar singkat masalah potensial lan solusi ing kategori iki bisa ditemokake ing Tabel I.
Kaya kasebut ing ndhuwur, pitakonan saka carane akeh broadening puncak kudu ngejarke sadurunge mbayar manungsa waé lan nyoba kanggo ndandani iku topik Komplek sing bakal aku rembugan ing artikel mangsa.Pengalaman saya sing pinunjul broadening pinunjul asring diiringi owah-owahan pinunjul ing wangun puncak, lan puncak tailing luwih umum tinimbang pra-puncak utawa pamisah.
Saben masalah iki wis rembugan ing rinci ing masalah sadurunge Ngatasi masalah LC, lan nonton kasengsem ing topik iki bisa waca artikel sadurunge iki kanggo informasi ing sabab ROOT lan solusi potensial kanggo masalah iki. rincian liyane.
Peak tailing, peak fronting, lan splitting kabeh bisa disebabake dening fenomena kimia utawa fisik, lan dhaptar solusi potensial kanggo masalah iki beda-beda gumantung, gumantung apa kita ngatasi masalah kimia utawa fisik. Asring, kanthi mbandhingake puncak sing beda ing kromatogram, sampeyan bisa nemokake pitunjuk penting babagan sing dadi penyebabe. sawetara puncak kena pengaruh, nanging liyane katon apik, sabab paling kamungkinan kimia.
Panyebab kimia saka tailing puncak banget Komplek kanggo ngrembug sedhela kene. Sing maca kasengsem diarani Jeksa Agung bisa ngetokake anyar saka "LC Ngatasi Masalah" kanggo diskusi luwih ing-ambane (10). Nanging, ing bab gampang kanggo nyoba kanggo ngurangi massa analyte nyuntikaken lan ndeleng yen wangun puncak mbenakake. Yen mangkono, banjur iki minangka pitunjuk apik kanggo kasus overloading iki ". massa analit, utawa kondisi kromatografi kudu diganti supaya wangun puncak apik bisa dipikolehi malah karo massa gedhe nyuntikaken.
Ana uga akeh alasan fisik potensial kanggo puncak tailing.Readers kasengsem ing rembugan rinci kemungkinan diarani masalah anyar liyane "LC Troubleshooting" (11). sing kita wis ora digunakake sadurunge, lan diinstal daur ulang injeksi volume cilik karo ferrule sing wis nyetak dhateng kapiler stainless steel.After sawetara nyobi ngatasi masalah dhisikan, kita temen maujud sing ambane port ing stator tutup injeksi ana akeh luwih jero tinimbang kita padha digunakake kanggo, asil ing volume mati gedhe ing ngisor port. volume mati ing ngisor port.
Puncak ngarep kaya sing ditampilake ing Figure 1e uga bisa disebabake masalah fisik utawa kimia.A sabab fisik umum saka pinggiran anjog iku amben partikel kolom ora uga dikempalken, utawa sing partikel wis reorganized liwat wektu.Minangka tailing puncak disebabake fénoména fisik iki, cara paling apik kanggo ndandani iki kanggo ngganti kolom lan terus arep.Fundamentally njedhul saka wangun peach asring njedhul saka apa sing asalé saka kimia saka wangun sing mimpin kita. Kondisi retensi "non-linear". Ing kahanan sing becik (linear), jumlah analit sing ditahan dening fase stasioner (mulane, faktor retensi) ana hubungane karo konsentrasi analit ing kolom. Secara kromatografis, iki tegese nalika massa analit sing disuntikake menyang kolom mundhak, puncak kasebut dadi luwih dhuwur, nanging ora ana hubungane sing luwih dhuwur. Ora mung dadi luwih dhuwur nanging uga luwih akeh amarga luwih akeh massa disuntikake. Kajaba iku, wangun nonlinear nemtokake wangun puncak kromatografi, asil ing anjog utawa mburine pinggiran. Kaya karo kakehan massa sing nimbulaké puncak tailing (10), puncak anjog disebabake penylametan nonlinear uga bisa didiagnosis dening ngurangi disuntikake nyuntikaken cara analyte kudu nambah massa, yen cara injeksi puncak ora kudu nambah massa. pinggiran, utawa kondisi kromatografi kudu diganti kanggo nyilikake prilaku iki.
Kadhangkala kita mirsani apa sing katon minangka puncak "pamisah", kaya sing ditampilake ing Figure 1f. Langkah pisanan kanggo ngrampungake masalah iki yaiku kanggo nemtokake manawa wangun puncak amarga ko-elusi parsial (yaiku, ana rong senyawa sing beda nanging rapet eluting). Puncak "pamisah" ana hubungane karo Kinerja fisik ora ana hubungane karo kolom kasebut. Asring, pitunjuk sing paling penting kanggo keputusan iki yaiku manawa kabeh puncak ing kromatogram nuduhake bentuk pamisah, utawa mung siji utawa loro. Yen mung siji utawa loro, mesthine masalah elusi; yen kabeh puncak dipérang, iku mbokmenawa masalah fisik, paling kamungkinan related kanggo kolom dhewe.
Pucuk pamisah sing ana hubungane karo sifat fisik kolom kasebut biasane amarga frits inlet utawa outlet sing diblokir sebagian, utawa reorganisasi partikel ing kolom kasebut, saéngga fase seluler mili luwih cepet tinimbang fase seluler ing wilayah tartamtu saka tatanan saluran kolom .ing wilayah liyane (11) .Frit sebagean clogged kadhangkala bisa dibusak kanthi mbalikke aliran liwat kolom; Nanging, ing pengalamanku, iki biasane dadi solusi jangka pendek tinimbang solusi jangka panjang. Iki asring nyebabake fatal karo kolom modern yen partikel gabung maneh ing kolom kasebut. Ing titik iki, luwih becik ngganti kolom lan terus.
Puncak ing Figure 1g, uga saka conto anyar ing lab dhewe, biasane nuduhake yen sinyal dhuwur banget sing wis tekan mburi dhuwur saka respon range.Kanggo detektor absorbance optik (UV-vis ing kasus iki), nalika konsentrasi analyte dhuwur banget, analyte nyerep paling saka cahya liwat sel aliran detector, ninggalake sethitik banget cahya saka kahanan sing dideteksi dening electrical sinyal photoavide. dening macem-macem sumber gangguan, kayata cahya keblasuk lan "saiki peteng", nggawe sinyal banget "kabur" ing katon lan ora gumantung konsentrasi analyte. Yen kedadeyan kasebut, masalah kasebut bisa gampang dirampungake kanthi nyuda volume injeksi analit - nyuda volume injeksi, ngencerake sampel, utawa loro-lorone.
Ing sekolah kromatografi, kita nggunakake sinyal detektor (yaiku, sumbu-y ing kromatogram) minangka indikator konsentrasi analit ing sampel. Dadi katon aneh kanggo ndeleng kromatogram kanthi sinyal ing ngisor nol, amarga interpretasi prasaja iki nuduhake konsentrasi analit negatif - sing mesthi ora bisa ditindakake kanthi fisik.
Ing kasus iki, puncak negatif mung tegese molekul sing eluting saka kolom nyerep cahya kurang saka fase seluler dhewe sakcepete sadurunge lan sawise puncak. Iki bisa kedadeyan, contone, nalika nggunakake dawa gelombang deteksi sing relatif kurang (<230 nm) lan aditif fase seluler sing nyerep sebagian besar cahya ing dawa gelombang kasebut. Aditif kasebut bisa dadi komponen pelarut fase seluler kayata metanol utawa komponen pelarut sing bener-bener bisa digunakake kayata metanol orcetne. puncak kanggo nyiapake kurva kalibrasi lan njupuk informasi kuantitatif akurat, supaya ora ana alesan dhasar kanggo supaya wong-wong mau saben se (cara iki kadhangkala disebut minangka "deteksi UV ora langsung") (13). Nanging, yen kita pancene pengin supaya puncak negatif kabeh, ing cilik saka deteksi absorbance, solusi sing paling apik kanggo nggunakake dawa gelombang deteksi beda, supaya fase nyerep luwih saka fase seluler, supaya fase nyerep luwih saka fase seluler. cahya tinimbang analit.
Puncak negatif bisa uga katon nalika nggunakake deteksi indeks bias (RI) nalika indeks bias komponen liyane saka analit ing sampel, kayata matriks pelarut, beda karo indeks bias fase seluler. Iki uga kedadeyan karo deteksi UV-vis, nanging efek iki cenderung dikurangi relatif marang deteksi RI. fase seluler.
Ing bagean telu ing topik dhasar ngatasi masalah LC, Aku rembugan kahanan kang wangun puncak diamati beda-beda saka wangun puncak samesthine utawa normal. Ngatasi masalah efektif saka masalah kuwi wiwit karo kawruh saka wangun puncak samesthine (adhedhasar teori utawa pengalaman sadurunge karo cara sing wis ana), supaya penyimpangan saka pangarepan iki ketok. Masalah wangun Peak duwe akeh sabab potensial beda (ing pinggiran banget, etc.). alasan aku ndeleng paling asring.Ngerti rincian iki menehi panggonan sing apik kanggo miwiti ngatasi masalah, nanging ora dijupuk kabeh kemungkinan.Readers kasengsem ing dhaftar liyane ing-ambane sabab lan solusi bisa deleng LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Analisis Data lan Pangolahan Sinyal ing Kromatografi (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF lan Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.