Sawetara topik pemecahan masalah LC ora tau kedaluwarsa, amarga ana masalah ing praktik LC, sanajan teknologi instrumen saya suwe saya suwe. Ana akeh cara sing bisa muncul ing sistem LC lan pungkasane ana ing wangun puncak sing kurang apik.
Seneng nulis kolom "LC Troubleshooting" iki lan mikir babagan topik saben wulan, amarga sawetara topik ora tau metu saka gaya. Nalika ing bidang kromatografi, riset topik utawa gagasan tartamtu dadi lungse amarga diganti karo gagasan sing luwih anyar lan luwih apik, ing babagan pemecahan masalah, wiwit artikel pemecahan masalah pisanan muncul ing jurnal iki (sawetara topik LC ing wektu iku isih ana 19). Aku wis fokus sawetara bagean Ngatasi masalah LC ing tren kontemporer mengaruhi kromatografi Cairan (LC) (contone, comparison relatif saka pangerten kita efek saka meksa ing penylametan [2] New Advances) interpretasi kita asil LC lan carane ngatasi masalah karo instruments LC modern. troubleshooting — unsur sing apik kanggo troubleshooter sembarang iku penting, ora ketompo umur sistem sing digunakake. Topik inti saka seri iki Highly cocog kanggo LCGC kang misuwur "LC Troubleshooting Guide" wall chart (4) hanging ing akeh Laboratorium.Kanggo bagean katelu saka seri iki, aku milih kanggo fokus ing masalah sing ana hubungane karo wangun puncak utawa karakteristik puncak LCGC kang misuwur. masalah iki ing rinci ing siji artikel, supaya ing cicilan pisanan ing topik iki, aku bakal fokus ing sawetara sing paling kerep aku ndeleng. Muga-muga pangguna LC sing enom lan tuwa bakal nemokake sawetara tips lan pangeling sing migunani babagan topik penting iki.
Aku nemokake aku tambah akeh njawab pitakonan pemecahan masalah karo "apa wae bisa".Tanggepan iki bisa uga katon gampang nalika nimbang pengamatan sing angel diinterpretasikake, nanging aku kerep nemokake iku cocok.Kanthi akeh kemungkinan nimbulaké wangun puncak miskin, iku penting kanggo tetep mbukak pikiran nalika considering apa masalah bisa, lan kanggo bisa kanggo prioritize sabab potensial kanggo miwiti efforts ngatasi masalah kita, fokus ing sing paling penting, kemungkinan paling umum.
Langkah kunci ing sembarang latihan pemecahan masalah - nanging siji sing aku dianggep kurang - ngerteni yen ana masalah sing kudu ditanggulangi. Ngenali yen ana masalah asring tegese ngerteni manawa apa sing kedadeyan ing alat kasebut beda karo pangarepan kita, sing dibentuk kanthi teori, kawruh empiris, lan pengalaman (5). , anjog pinggiran, tailing, etc.), nanging uga kanggo jembaré.Pangarepan kita kanggo wangun puncak nyata sing prasaja.Teori (6) uga ndhukung pangarepan buku teks sing, ing paling kasus, puncak kromatografi kudu simetris lan salaras karo wangun distribusi Gaussian, minangka ditampilake ing Figure 1a. Apa kita nyana saka topik jembaré puncak ing artikel iki bakal luwih rumit. e 1 nuduhake sawetara kemungkinan liyane sing bisa diamati-kanthi tembung liya, sawetara cara sing bisa salah.
Kadhangkala puncak ora diamati ing kabeh kromatogram ngendi padha samesthine bakal eluted. Bagan tembok ndhuwur nuduhake yen anané saka puncak (assuming sampel bener ngemot analyte target ing konsentrasi sing kudu nggawe respon detector cukup kanggo ndeleng iku ndhuwur gangguan) biasane ana hubungane karo sawetara masalah instrument utawa kondisi fase seluler salah (yen diamati ing kabeh).puncak, biasane banget "lemah").Dhaptar singkat masalah potensial lan solusi ing kategori iki bisa ditemokake ing Tabel I.
Kaya kasebut ing ndhuwur, pitakonan saka carane akeh broadening puncak kudu ngejarke sadurunge mbayar manungsa waé lan nyoba kanggo ndandani iku topik Komplek sing bakal aku rembugan ing artikel mangsa.Pengalaman saya sing pinunjul broadening pinunjul asring diiringi owah-owahan pinunjul ing wangun puncak, lan puncak tailing luwih umum tinimbang pra-puncak utawa pamisah.
Saben masalah iki wis rembugan ing rinci ing masalah sadurunge Ngatasi masalah LC, lan nonton kasengsem ing topik iki bisa deleng artikel sadurunge iki kanggo informasi bab ROOT nimbulaké lan solusi potensial kanggo masalah iki.rincian liyane.
Peak tailing, peak fronting, lan splitting kabeh bisa disebabake dening fenomena kimia utawa fisik, lan dhaptar solusi potensial kanggo masalah iki beda-beda, gumantung apa kita ngadhepi masalah kimia utawa fisik. kena pengaruh, nanging liyane katon nggoleki, sabab paling kamungkinan kimia.
Panyebab kimia saka tailing puncak banget Komplek kanggo ngrembug sedhela kene.The maca interested diarani Jeksa Agung bisa ngetokake anyar saka "LC Troubleshooting" kanggo diskusi luwih jero-ambane (10).Nanging, bab gampang kanggo nyoba kanggo ngurangi massa analyte nyuntikaken lan ndeleng yen wangun ana puncak nambah. utawa kondisi kromatografi kudu diganti supaya wangun puncak apik bisa dipikolehi sanajan karo massa luwih gedhe disuntikake.
Ana uga akeh alasan fisik potensial kanggo puncak tailing.Readers kasengsem ing rembugan rinci kemungkinan diarani masalah anyar liyane saka "LC Troubleshooting" (11). sadurunge, lan diinstal daur ulang injeksi volume cilik karo ferrule sing wis nyetak dhateng kapiler stainless steel.After sawetara nyobi ngatasi masalah dhisikan, kita temen maujud sing ambane port ing stator tutup injeksi ana akeh luwih jero saka kita padha digunakake kanggo, asil ing volume mati gedhe ing ngisor port.Masalah iki gampang ditanggulangi dening ngganti daur ulang injeksi ing ngisor iki bisa kanggo ngilangke volume saka tabung liyane, kita bisa ngilangke daur ulang injeksi karo tabung liyane.
Front Puncak kaya sing ditampilake ing Gambar 1e uga bisa disebabake dening masalah fisik utawa kimia.Asun, sing paling apik kanggo ngganti kolom, utawa sing paling apik kanggo ngganti kolom sing digawe kanthi cara sing diarani "non-linear" kahanan. Ing kahanan sing cocog (linear), jumlah analitis sing disimpen dening phase stasioner (mula, faktor sing disengiti, nanging ora ana hubungane karo kolom, nanging ora ana sing luwih dhuwur Kajaba iku, tambahan non-inlinear nemtokake bentuk puncak kromatografi, nyebabake sudhut utama utawa tilase puncak sing disebabake dening pendhudhuk, utawa kahanan puncak sing disedhiyakake, utawa kahanan kromatografi kudu diowahi dadi minimalake iki prilaku.
Kadhangkala kita mirsani apa sing katon minangka puncak "pamisah", kaya sing ditampilake ing Figure 1f. Langkah pisanan kanggo ngrampungake masalah iki yaiku kanggo nemtokake manawa wangun puncak amarga ko-elusi parsial (yaiku, ana rong senyawa sing beda nanging rapet eluting). ks ana hubungane karo Kinerja fisik ora ana hubungane karo kolom kasebut. Asring, pitunjuk sing paling penting kanggo keputusan iki yaiku manawa kabeh puncak ing kromatogram nuduhake bentuk pamisah, utawa mung siji utawa loro. Yen mung siji utawa loro, mesthine masalah elusi;yen kabeh puncak dipérang, iku mbokmenawa masalah fisik, paling kamungkinan related kanggo kolom dhewe.
Pucuk pamisah sing ana hubungane karo sifat fisik kolom kasebut biasane amarga frits inlet utawa outlet sing diblokir sebagian, utawa reorganisasi partikel ing kolom kasebut, saéngga fase seluler mili luwih cepet tinimbang fase seluler ing wilayah tartamtu saka tatanan saluran kolom .ing wilayah liyane (11) .Frit sebagean clogged kadhangkala bisa dibusak kanthi mbalikke aliran liwat kolom;Nanging, ing pengalamanku, iki biasane dadi solusi jangka pendek tinimbang solusi jangka panjang. Iki asring nyebabake fatal karo kolom modern yen partikel gabung maneh ing kolom kasebut. Ing titik iki, luwih becik ngganti kolom lan terus.
Puncak ing Figure 1g, uga saka conto anyar ing lab dhewe, biasane nuduhake yen sinyal dhuwur banget sing wis tekan mburi dhuwur saka sawetara respon. Kanggo detektor absorbansi optik (UV-vis ing kasus iki), nalika konsentrasi analyte dhuwur banget, analyte nyerep paling saka cahya liwat sel aliran detector, ninggalake sethitik banget cahya saka macem-macem kahanan sing ora bisa dideteksi dening cahya saka sumber listrik, kang ora bisa dideteksi dening sinyal photoavictor. Ise, kayata cahya keblasuk lan "saiki peteng", nggawe sinyal banget "kabur" ing katon lan ora gumantung konsentrasi analyte.Yen kedadeyan kasebut, masalah kasebut bisa gampang dirampungake kanthi nyuda volume injeksi analit - nyuda volume injeksi, ngencerake sampel, utawa loro-lorone.
Ing sekolah kromatografi, kita nggunakake sinyal detektor (yaiku, sumbu-y ing kromatogram) minangka indikator konsentrasi analit ing sampel. Dadi katon aneh kanggo ndeleng kromatogram kanthi sinyal ing ngisor nol, amarga interpretasi prasaja iki nuduhake konsentrasi analit negatif - sing mesthi ora bisa ditindakake kanthi fisik.
Ing kasus iki, puncak negatif mung tegese molekul eluting saka kolom nyerep cahya kurang saka fase seluler dhewe sakcepete sadurunge lan sawise puncak. Iki bisa kedadeyan, contone, nalika nggunakake dawa gelombang deteksi relatif kurang (<230 nm) lan aditif fase seluler sing nyerep paling cahya ing dawa gelombang iki. Aditif kasebut bisa dadi komponen pelarut fase seluler utawa pelarut sing bener-bener bisa digunakake minangka a. kurva libration lan entuk informasi kuantitatif akurat, supaya ora ana alesan dhasar kanggo supaya wong-wong mau per se (cara iki kadhangkala disebut minangka "deteksi UV ora langsung") (13). Nanging, yen kita pancene pengin supaya puncak negatif kabeh, ing cilik saka deteksi absorbance, solusi sing paling apik kanggo nggunakake dawa gelombang deteksi beda supaya analyte saka phase nyerep cahya utawa ngganti luwih saka fase seluler.
Puncak negatif uga bisa katon nalika nggunakake deteksi indeks bias (RI) nalika indeks bias komponen liyane saka analit ing sampel, kayata matriks pelarut, beda karo indeks bias fase seluler.
Ing bagean telu ing topik dhasar ngatasi masalah LC, Aku rembugan kahanan kang wangun puncak diamati beda-beda saka wangun puncak samesthine utawa normal. Ngatasi masalah efektif masalah kuwi wiwit karo kawruh saka wangun puncak samesthine (adhedhasar teori utawa pengalaman sadurunge karo cara sing wis ana), supaya penyimpangan saka pangarepan iki ketok. Masalah wangun Peak duwe akeh macem-macem nimbulaké potensial (Ing pinggiran aku, ndeleng rinci, etc.). asring.Ngerti rincian iki menehi panggonan sing apik kanggo miwiti ngatasi masalah, nanging ora njupuk kabeh kemungkinan. Readers kasengsem ing dhaftar luwih jero saka sabab lan solusi bisa deleng LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" wall chart.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Analisis Data lan Pangolahan Sinyal ing Kromatografi (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF lan Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.