Matur nuwun kanggo ngunjungi Nature.com.Versi browser sing sampeyan gunakake nduweni dhukungan winates kanggo CSS.Kanggo pengalaman sing paling apik, disaranake sampeyan nggunakake browser sing dianyari (utawa mateni mode kompatibilitas ing Internet Explorer).Sauntara kuwi, kanggo njamin dhukungan sing terus-terusan, kita bakal nampilake situs kasebut tanpa gaya lan JavaScript.
Partikel silika keropos disiapake kanthi metode sol-gel kanthi sawetara modifikasi kanggo entuk partikel makroporous.Partikel kasebut diturunake kanthi polimerisasi transfer rantai fragmentasi tambahan sing bisa dibalik (RAFT) kanthi N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) lan stirena kanggo nyiapake N-phenylmaleimide fase stainless steel1. .8 mm id) dikempalken kanthi packing slurry. Evaluasi pemisahan kolom PMP saka campuran peptida sing kasusun saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin, leucine enkephalin) kinerja serum ekromatografik (kondisi serum ekromatografik, enkephalin leucine, lan ekromatografik). count plate teoritis saka campuran peptida iku minangka dhuwur minangka 280.000 piring / m². Mbandingaken kinerja pamisahan saka kolom dikembangaké karo kolom komersial Ascentis Express RP-Amide, iku diamati yen kinerja misahake saka kolom PMP luwih unggul kanggo kolom komersial ing syarat-syarat efficiency pamisahan lan résolusi.
Ing taun-taun pungkasan, industri biopharmaceutical wis dadi pasar global ngembangaken kanthi nambah substansial ing pangsa pasar. Kanthi wutah mbledhos industri biopharmaceutical1,2,3, analisis peptida lan protein banget dikarepake. Cairan, jaringan lan sel minangka tugas sing angel banget amarga akeh spesies sing bisa dideteksi ing sampel siji. Sanajan spektrometri massa minangka alat sing efektif kanggo urutan peptida lan protein, yen conto kasebut disuntikake menyang spektrometer massa ing siji pass, pemisahan ora bakal becik. meter ing wektu tartamtu4,5,6. Kajaba iku, sajrone pamisahan fase cair, analit bisa fokus ing wilayah sing sempit, saéngga konsentrasi analit kasebut lan ningkatake sensitivitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) wis maju sacara signifikan sajrone dekade kepungkur lan dadi teknik populer ing analisis proteomik7,8,9,10.
Kromatografi cair fase terbalik (RP-LC) akeh digunakake kanggo pemurnian lan pamisahan campuran peptida nggunakake silika sing dimodifikasi octadecyl (ODS) minangka fase stasioner11,12,13. Nanging, fase stasioner RP ora nyedhiyakake pemisahan peptida lan protein sing nyenengake amarga struktur komplèks 14,tofil lan peptida sing dibutuhaké déning 14, philore khusus. nganalisa peptida lan protein kanthi gugus polar lan non-polar kanggo sesambungan karo lan nahan analit iki16.Kromatografi mode campuran, sing nyedhiyakake interaksi multimodal, bisa dadi alternatif kanggo RP-LC kanggo pamisahan peptida, protein, lan campuran kompleks liyane. Sawetara fase stasioner mode campuran, 8,11 lan fase stasioner wis disiapake, lan fase, peptida11 lan fase 19 wis disiapake kanthi fase, peptida17 lan fase 11. 20,21.Fase stasioner mode campuran (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, interkalasi polar/RPLC) cocok kanggo pemisahan peptida lan protein amarga anane gugus polar lan non-polar22,23,24,25,26,27,28 .Semono uga, fase polar polar interkalasi polarisasi polarisasi sing apik lan polarisasi polar sing dipilih kanthi polarisasi sing apik. lan analit non-polar, amarga pamisahan gumantung saka interaksi antara analit lan fase stasioner.Interaksi multimodal 29, 30, 31, 32. Bubar, Zhang et al.30 nyiapake fase stasioner poliamina sing diakhiri dodecyl lan kasil misahake hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukleosida, estrogen, lan sawetara analit liyane.Interkalator polar nduweni gugus polar lan non-polar, saengga bisa digunakake kanggo misahake peptida lan protein sing nduweni gugus-kolom-kolom hidrofobik lan hidrofilik sing kasedhiya (kolom-kolom-kolom-kolom-kolom-kolom-kolom-komersial. miturut jeneng dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, nanging kolom iki digunakake kanggo analisis amina 33 mung.
Ing panliten saiki, fase stasioner polar-embedded (polistirena N-phenylmaleimide-embedded) disiapake lan dievaluasi kanggo pamisahan peptida lan trypsin digests saka HSA. Fase stasioner disiapake kanthi nggunakake strategi ing ngisor iki. kanggo nyiapake partikel silika kanthi ukuran pori gedhe.Kapindho, ligan anyar, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, disintesis lan digunakake kanggo derivatize partikel silika kanggo nyiapake fase stasioner polar. kolom.Ngevaluasi pemisahan kolom sing dikemas saka campuran peptida sing dumadi saka limang peptida;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) lan Trypsin digest of human serum albumin (HAS) . .Loro-lorone peptida lan protein diamati kanthi apik lan efisien ing kolom PMP, sing luwih efisien tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Asam Asetat, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Amonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Metacryloyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl Chloride (MC-TEMP) trile (ACN), Metanol, 2-Propanol, lan Aseton Dituku saka Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Campuran urea (8 g), polietilen glikol (8 g), lan 8 mL asam asetat 0,01 N diaduk suwene 10 menit, banjur ditambahake 24 ml TMOS ing kahanan kadhemen es. Campuran reaksi dipanasake ing suhu 40 ° C suwene 6 jam banjur ing 120 ° C diwutahake ing banyu sing garing ing banyu tahan karat sajrone 8 jam. 70 ° C kanggo jam 12. Massa alus sing garing dilebokake ing lemah ing oven lan dikalsinasi ing 550 ° C kanggo jam 12. Telung batch disiapake lan ditondoi kanggo mriksa reproducibility ing ukuran partikel, ukuran pori lan area permukaan.
Kanthi modifikasi permukaan partikel silika kanthi ligan sing wis disintesis phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) diikuti polimerisasi radial karo stirena, senyawa sing ngemot gugus polar disiapake.Fase stasioner kanggo agregat lan rantai polystyrene.Proses persiapan diterangake ing ngisor iki.
N-phenylmaleimide (200 mg) lan metil vinyl isocyanate (100 mg) dibubarake ing toluene garing, lan 0,1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahake ing labu reaksi kanggo nyiapake phenylmaleimide-metil vinyl isocyanate copolymer ing 3 jam kopolimer vinil isocyanate (PMCated lan 3 ° C). 40 ° C suwene 3 jam.
Partikel silika garing (2 g) disebarake ing toluene garing (100 mL), diaduk lan disonikasi ing labu ngisor bunder 500 mL suwene 10 menit. jam.Banjur, partikel silika sing diikat PMCP (100 g) dibubarake ing toluena (200 ml) lan 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) ditambahake ing ngarsane 100 µL dibutyltin dilaurate minangka katalis. Campuran kasebut diaduk ing suhu 50 ° C suwene 8 jam, disaring lan garing.
Stirena (1 mL), benzoil peroksida BPO (0,5 mL), lan partikel silika sing disambungake TEMPO-PMCP (1,5 g) disebarake ing toluena lan diresiki nganggo nitrogen. Polimerisasi stirena ditindakake ing suhu 100 ° C suwene 12 jam. Produk sing diasilake dikumbah nganggo metanol lan dikeringake ing wayah wengi ing 60 ° C.
Sampel degassed ing 393 K kanggo 1 jam kanggo entuk tekanan residual kurang saka 10-3 Torr. Jumlah N2 adsorbed ing tekanan relatif P / P0 = 0,99 digunakake kanggo nemtokake volume pori total. partikel silika ded) diselehake ing kolom aluminium nggunakake tape karbon adhesive.Emas dilapisi ing conto nggunakake Q150T sputter coater, lan lapisan Au 5 nm setor ing samples.Iki mbenakake efficiency proses nggunakake voltase kurang lan menehi gandum nggoleki, sputtering kadhemen.A Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash elemental analysis (Waltham, MA, USA) analisa EA1Worshire sterling (Waltham, MA, USA). Penganalisa ukuran partikel Mastersizer 2000 digunakake kanggo entuk distribusi ukuran partikel. Partikel silika telanjang lan partikel silika sing diikat ligan (masing-masing 5 mg) disebarake ing 5 ml isopropanol, disonikasi sajrone 10 menit, vortexed kanggo 5 menit, lan diselehake ing bangku optik saka Mastersizer. Analisis termogravimetri 0 °C ditindakake ing kisaran suhu 8 °C nganti 8 °C.
Kolom baja tahan karat sing dilapisi kaca kanthi ukuran (100 × 1,8 mm id) dikempalken nggunakake metode pengepakan slurry, kanthi prosedur sing padha digunakake ing Ref.31. Kolom baja tahan karat (dilapisi kaca, 100 × 1,8 mm id) karo fitting stopkontak sing ngemot frit 1 µm disambungake menyang pengepakan slurry (Alltech Deerfield, IL, USA). uga minangka solvent propelling.Isi kolom kanthi urutan kanthi nggunakake tekanan 100 MP sajrone 10 menit, 80 MP sajrone 15 menit, lan 60 MP sajrone 30 menit. Sajrone packing, getaran mekanik ditrapake kanthi rong shaker kolom GC (Alltech, Deerfield, IL, USA) kanggo mesthekake packing seragam saka kolom lan ngeculake kolom. kolom saka unit packing slurry lan nyambung fitting liyane kanggo welingan lan kanggo sistem LC kanggo mriksa kinerja sawijining.
Pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), injektor (Valco (USA) C14 W.05) kanthi daur ulang injeksi 50nL, degasser membran (Shimadzu DGU-14A), jendhela kapiler UV-VIS dibangun Detektor piranti µLC khusus (UV-2075) lan mikrokolum sing disambungake kanthi lapisan kaca sing sithik banget lan efek mikrokolum sing disambungake menyang kolom cendhak sing dilapisi kaca. kemasan ter, kapiler (50 μm id 365 lan ngurangi kapiler union (50 μm) dipasang ing stopkontak 1/16″ saka serikat pereduksi. Pangumpulan data lan pangolahan kromatografi ditindakake kanthi nggunakake piranti lunak Multichro 2000. Ngawasi ing 254 nm Analytes diuji kanggo absorbansi data UV, Prodthanol.
Albumin saka serum manungsa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (elektroforesis gel agarose) 3 mg dicampur karo trypsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 mL), lan 0,2 M amonium bikarbonat (1 mL). Ganti solusi lan simpen ing ngisor 4 ° C.
Pemisahan campuran peptida lan HSA trypsin digest dievaluasi kanthi kapisah ing kolom PMP. Priksa pamisahan campuran peptida lan trypsin digest saka HSA dening kolom PMP lan mbandhingake asil menyang kolom Ascentis Express RP-Amide. Nomer piring teoritis diitung kaya ing ngisor iki:
Gambar SEM partikel silika gundhul lan partikel silika ikatan ligan ditampilake ing Gbr.2 .Gambar SEM partikel silika gundhul (A, B) nuduhake yen, ing kontras kanggo pasinaon sadurunge, partikel iki bunder kang partikel sing elongated utawa duwe simetri ora duwe aturan baku.Permukaan partikel silika-ikatan ligan (C, D) punika Gamelan saka partikel silika gundhul, kang bisa amarga saka lapisan polystyrene lumahing partikel silika.
Gambar mikroskop elektron scan partikel silika gundhul (A, B) lan partikel silika ikatan ligan (C, D).
Distribusi ukuran partikel partikel silika gundhul lan partikel silika sing diikat ligan ditampilake ing Gambar 3(A). Kurva distribusi ukuran partikel adhedhasar volume nuduhake yen ukuran partikel silika mundhak sawise modifikasi kimia (Gambar 3A). kanggo panaliten sadurunge kita kanthi nilai ad(0,5) 3,05 μm (partikel silika sing diikat polistirena)34.Batch iki nduweni distribusi ukuran partikel sing luwih sempit dibandhingake karo panliten sadurunge amarga rasio PEG, urea, TMOS, lan asam asetat ing campuran reaksi sing beda. styrene mung nyimpen lapisan polistirena (0,97 µm) ing permukaan silika, dene ing fase PMP ketebalan lapisan 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) lan distribusi ukuran pori (B) partikel silika gundhul lan partikel silika terikat ligan.
Ukuran pori, volume pori lan area lumahing partikel silika saka panliten saiki diwenehi ing Tabel 1(B). Profil PSD partikel silika gundhul lan partikel silika sing diikat ligan ditampilake ing Gambar 3(B).Asil kasebut bisa dibandhingake karo panaliten sadurunge. modifikasi kimia, kaya sing ditampilake ing Tabel 1 (B), lan owah-owahan kurva ditampilake ing Fig. 3 (B). Kajaba iku, volume pori partikel silika mudhun saka 0,67 dadi 0,58 cm3 / g sawise modifikasi kimia. B), area lumahing (m2 / g) partikel silika uga mudhun saka 116 m2 / g dadi 105 m2 / g sawise modifikasi kimia.
Asil analisis unsur fase stasioner ditampilake ing Tabel 2. Muatan karbon fase stasioner saiki yaiku 6,35%, sing luwih murah tinimbang muatan karbon ing panliten sadurunge (partikel silika ikatan polistirena, 7,93% 35 lan 10,21%, masing-masing) 42. Muatan karbon saka fase stasioner SP saiki, minangka tambahan saka popherene saiki, amarga ligand ing fase stasioner saiki kurang saka , nylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) lan 4-hydroxy-TEMPO digunakake. Persentase bobot nitrogen fase stasioner saiki yaiku 2,21%, dibandhingake karo 0,1735 lan 0,85% bobot nitrogen ing panliten sadurunge. yaiku 2,7% lan 2,9%, dene beban karbon saka produk akhir (6) yaiku 6,35%, kaya sing ditampilake ing Tabel 2. Mundhut bobot dicenthang nganggo fase stasioner PMP, lan kurva TGA ditampilake ing Gambar 4. Kurva TGA nuduhake penurunan bobot 8,6%, sing ana ing persetujuan apik karo muatan karbon, nanging uga N.
Ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate dipilih kanggo modifikasi permukaan partikel silika amarga nduweni gugus phenylmaleimide polar lan gugus vinilisocyanate. Gugus isosianat vinil bisa luwih bereaksi karo styrene kanthi polimerisasi radikal sing urip. Alasan kapindho yaiku nglebokake gugus sing nduweni interaksi moderat karo analit lan interaksi analitik lan ora ana interaksi stasioner elektrostatik, lan ora ana interaksi stasioner elektrostatik lan analitik. Ora ana muatan virtual ing pH normal. Polaritas fase stasioner bisa dikontrol kanthi jumlah optimal stirena lan wektu reaksi polimerisasi radikal bebas. Langkah pungkasan reaksi (polimerisasi radikal bebas) kritis lan bisa ngganti polaritas fase stasioner. Analisis unsur ditindakake kanggo mriksa beban karbon fase stasioner kasebut. disiapake karo konsentrasi beda saka styrene duwe loadings karbon beda.Maneh, mbukak iki fase stasioner menyang kolom stainless steel lan mriksa kinerja kromatografi sing (selectivity, résolusi, Nilai N, etc.). Adhedhasar nyobi iki, formulasi optimized dipilih kanggo nyiapake phase stasioner PMP kanggo mesthekake polaritas kontrol lan retensi analyte apik.
Limang campuran peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) uga dievaluasi nggunakake kolom PMP nggunakake fase seluler;60/40 (v/v) asetonitril/banyu (0,1% TFA) kanthi laju alir 80 μL/menit. Ing kondisi elusi sing optimal, nomer plat teoretis (N) saben kolom (100 × 1,8 mm id) yaiku 20.000 ± 100 (200.000 plat N/m²). gram ditampilake ing Figure 5A. Analisis cepet ing kolom PMP ing tingkat aliran dhuwur (700 μL / min), limang peptida padha eluted ing siji menit, Nilai N apik banget, 13.500 ± 330 saben kolom (100 × 1.8 mm id), Cocog karo 135,000 plate 135,000 mm (135,000 mm) cocog karo 135,0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000. × 1,8 mm id) dikempalken kanthi telung macem-macem fase stasioner PMP kanggo mriksa reproduksibilitas. Konsentrasi analit kanggo saben kolom dicathet kanthi nggunakake kondisi elusi optimal lan jumlah piring teoritis N lan wektu retensi kanggo misahake campuran tes sing padha ing saben kolom.
Pemisahan campuran peptida ing kolom PMP (B) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (A);fase seluler 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 × 1,8 mm id);analitik Urutan elusi senyawa: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) lan 5 (leucine) asam enkephalin).
Kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dievaluasi kanggo pamisahan tryptic digests saka albumin serum manungsa ing kromatografi cair kinerja dhuwur.Kromatogram ing Gambar 6 nuduhake yen sampel wis dipisahake kanthi apik lan resolusi apik banget. Digest HSA dianalisis nggunakake laju aliran 100 µL/min. ditampilake ing kromatogram (Gambar 6), pencernaan HSA wis dipérang dadi 17 puncak sing cocog karo 17 peptida.
Pencernaan tryptic saka HSA (100 × 1,8 mm id) dipisahake ing kolom PMP;laju aliran (100 µL/min), fase gerak 60/40 asetonitril/banyu kanthi 0,1% TFA.
ing ngendi L yaiku dawa kolom, η yaiku viskositas fase gerak, ΔP minangka tekanan bali kolom, lan u minangka kecepatan linier fase gerak. padha karo panaliten sadurunge Ref.34. Permeabilitas kolom sing dikemas karo partikel superfisial keropos yaiku: 1,7 × 10-15 kanggo partikel 1,3 μm, 3,1 × 10-15 kanggo partikel 1,7 μm, 5,2 × 10-15 lan 2,5 × 10-15 μm kanggo partikel 2,5 × 2,5 μm refore, permeabilitas fase PMP padha karo partikel inti-cangkang 5 μm.
ngendi Wx yaiku bobot kolom sing dikemas karo kloroform, Wy yaiku bobot kolom sing dikemas karo metanol, lan ρ minangka kapadhetan pelarut. Kapadhetan metanol (ρ = 0,7866) lan kloroform (ρ = 1,484). s 31 sing sadurunge diteliti yaiku 0,63 lan 0,55. Iki tegese anane ligan urea nyuda permeabilitas fase stasioner. Ing sisih liya, porositas total kolom PMP (100 × 1,8 mm id) yaiku 0,60. Permeabilitas saka kolom-kolom C8 luwih murah tinimbang kolom C8 kolom C8. fase ligan C18 ditempelake ing partikel silika minangka rantai linear, nalika ing fase stasioner tipe polystyrene, lapisan polimer sing relatif kandel dibentuk ing saubengé. Ing eksperimen khas, porositas kolom diitung minangka:
Gambar 7A,B nuduhake kolom PMP (100 × 1,8 mm id) lan Ascentis Express RP-Amide kolom (100 × 1,8 mm id) nggunakake kondisi elusi padha (ie, 60/40 ACN/H2O lan 0,1% TFA).) saka plot van Deemter.Campuran peptida sing dipilih (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) disiapake ing 20 µL/ Laju aliran minimal kanggo loro kolom yaiku 800 µL/menit. yaiku kolom Express RP-Amide masing-masing 2,6 µm lan 3,9 µm. Nilai HETP nuduhake yen efisiensi pemisahan kolom PMP (100 × 1,8 mm id) luwih apik tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide sing kasedhiya sacara komersial (100 × 1,8 mm id sing dikurangi ing plot) (100 × 1,8 mm id) nuduhake nilai N sing mundhak. pinunjul dibandhingake karo sinau sadurunge.Efisiensi pamisahan sing luwih dhuwur saka kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide adhedhasar perbaikan ing wangun partikel, ukuran, lan prosedur pengepakan kolom kompleks sing digunakake ing karya saiki34.
(A) plot van Deemter (HETP versus mobile phase linear velocity) dipikolehi nggunakake kolom PMP (100 × 1,8 mm id) ing 60/40 ACN/H2O kanthi 0,1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) dipikolehi nggunakake Ascentis Express RP/CN0 × id 1 kolom (10 mm0 × id2) ing kolom Ascentis Express RP/CN0 × id1. O karo 0,1% TFA.
Fase stasioner polistirena polar sing ditempelake disiapake lan dievaluasi kanggo pamisahan campuran peptida sintetik lan nyerna trypsin saka albumin serum manungsa (HAS) ing kromatografi cair kinerja dhuwur. nthesis saka phase stasioner, lan packing kolom Komplek.Saliyane efficiency pamisahan dhuwur, kurang kolom bali meksa ing tingkat aliran dhuwur kauntungan liyane saka phase stasioner iki.Kolom PMP nuduhake reproducibility apik lan bisa digunakake kanggo analisis campuran peptida lan pencernaan trypsin saka macem-macem protein.We dienggo kanggo nggunakake kolom iki kanggo misahake produk alam, tanduran PMP medicinal uga bakal diekstrak saka senyawa kimia PMP ing mangsa ngarep. dievaluasi kanggo pamisahan protein lan antibodi monoklonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Riset babagan Sistem Pemisahan Peptida dening Kromatografi Fase Reverse Part I: Pengembangan Protokol Karakterisasi Kolom.J.Kromatografi.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved peptida aktif dirancang kanggo perawatan saka penyakit infèksius.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu lan pasar.penemuan obat.15 (1-2) dina iki, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi Cairan Proteomik Lanjut.J.Kromatografi.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Spektrometri massa kromatografi cair canggih mbisakake nggabungake metabolomik lan proteomik sing ditargetake sacara luas.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC ing pangembangan obat.J.Sep Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh kanggo pamisahan kanthi cepet.J.Sep Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikasi kromatografi cair kinerja ultra-dhuwur ing pangembangan obat.J.Kromatografi.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Hidrogel macroporous monolitik sing disiapake saka emulsi fase internal dhuwur lenga-ing-banyu kanggo pemurnian efisien enterovirus.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik.J.Kromatografi.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Tren berkembang ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: teori lan aplikasi.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC nggunakake nilai pH sing beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho.J.Sep Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Karakteristik transfer massa lan kinerja kinetik kolom kromatografi efisiensi dhuwur sing dikempalken karo partikel C18 sub-2 μm kanthi partikel keropos lan superficially diselidiki.J.Sep Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Tren anyar lan tantangan analitis ing isolasi, identifikasi lan validasi peptida bioaktif tanduran.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-x.
Mueller, JB et al. Lanskap proteomik saka karajan urip. Alam 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Pangolahan hilir peptida terapeutik kanthi kromatografi cair preparatif.Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer.J.Kromatografi.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligand kanggo kromatografi protein mode campuran: prinsip, karakterisasi, lan desain.J.Bioteknologi.144(1), 3-11 (2009).