Matur nuwun kanggo ngunjungi Nature.com.Versi browser sing sampeyan gunakake nduweni dhukungan winates kanggo CSS.Kanggo pengalaman sing paling apik, disaranake sampeyan nggunakake browser sing dianyari (utawa mateni mode kompatibilitas ing Internet Explorer).Sauntara kuwi, kanggo njamin dhukungan sing terus-terusan, kita bakal nampilake situs tanpa gaya lan JavaScript.
Partikel silika keropos disiapake kanthi metode sol-gel kanthi sawetara modifikasi kanggo entuk partikel macroporous.Partikel kasebut diturunake kanthi polimerisasi transfer rantai fragmentasi tambahan sing bisa dibalik (RAFT) kanthi N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) lan stirena kanggo nyiapake N-phenylmaleimide fase stasioner stasioner baja N-phenylmaleimide (PMP). (100 × 1.8 mm id) dikempalken kanthi pengepakan slurry. Evaluasi pemisahan kolom PMP saka campuran peptida sing kasusun saka limang peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) kinerja albuminorganik leusin lan kromatografik. (HAS) .Ing kahanan elusi optimal, count piring teori saka campuran peptida minangka dhuwur minangka 280.000 piring / m². Mbandingaken kinerja pamisahan kolom dikembangaké karo kolom komersial Ascentis Express RP-Amide, iku diamati yen kinerja pamisahan saka kolom PMP luwih unggul kanggo kolom komersial ing syarat-syarat efisiensin pamisahan lan résolusi.
Ing taun anyar, industri biopharmaceutical wis dadi pasar global ngembangaken karo Tambah substansial ing pangsa pasar.Kanthi wutah explosive saka industri biopharmaceutical1,2,3, analisis peptida lan protein banget dikarepake. Protein ing cairan awak, jaringan lan sel minangka tugas sing angel banget amarga akeh spesies sing bisa dideteksi ing sampel siji. Sanajan spektrometri massa minangka alat sing efektif kanggo urutan peptida lan protein, yen conto kasebut disuntikake menyang spektrometer massa ing siji pass, pemisahan kasebut ora bakal becik. analit mlebu spektrometer massa ing wektu tartamtu4,5,6. Kajaba iku, sajrone pamisahan fase cair, analit bisa difokusake ing wilayah sing sempit, saéngga konsentrasi analit kasebut lan ningkatake sensitivitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) wis maju sacara signifikan sajrone dekade kepungkur lan wis dadi teknik sing populer ing proteomik 8,9,17,17.
Kromatografi cair fase terbalik (RP-LC) akeh digunakake kanggo pemurnian lan pamisahan campuran peptida nggunakake silika sing dimodifikasi octadecyl (ODS) minangka fase stasioner11,12,13. Nanging, fase stasioner RP ora nyedhiyakake pemisahan peptida lan protein sing marem amarga struktur komplèks 14, philore15 sing didesain khusus. fase dibutuhake kanggo nganalisa peptida lan protein kanthi gugus polar lan non-polar kanggo sesambungan karo lan nahan analit kasebut16. Kromatografi mode campuran, sing nyedhiyakake interaksi multimodal, bisa dadi alternatif kanggo RP-LC kanggo pamisahan peptida, protein, lan campuran kompleks liyane. Sawetara peptida mode campuran lan fase stasioner wis disiapake kanggo fase stasioner lan fase protein sing wis disiapake kanggo fase stasioner campuran lan fase stasioner. pemisahan17,18,19,20,21.Fase stasioner mode campuran (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, interkalasi polar/RPLC) cocok kanggo pemisahan peptida lan protein amarga ana gugus polar lan non-polar22,23,24,25,26,27,28 stasioner interkalasi,27,28. gugus polar terikat nuduhake daya pamisah sing apik lan selektivitas unik kanggo analit polar lan non-polar, amarga pamisahan gumantung ing interaksi antarane analit lan fase stasioner. Interaksi multimodal 29, 30, 31, 32. Bubar, Zhang et al. 30 nyiapake fase stasioner poliamina sing diakhiri dodesil lan kasil misahake hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukleosida, estrogen, lan sawetara analit liyane. Interkalator polar nduweni gugus polar lan non-polar, saengga bisa digunakake kanggo misahake peptida lan protein sing nduweni gugus hidrofobik lan hidrofilik C-embedded. kolom) kasedhiya komersial ing jeneng dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, nanging kolom iki digunakake kanggo analisis amina 33 mung.
Ing panliten saiki, fase stasioner polar-embedded (polistirena N-phenylmaleimide-embedded) disiapake lan dievaluasi kanggo pamisahan peptida lan trypsin digests saka HSA.Fase stasioner disiapake nggunakake strategi ing ngisor iki.Partikel silika keropos disiapake miturut prosedur sing diwenehake ing publikasi sadurunge kanthi sawetara modifikasi protokol persiapan, PEGlikogen, rasio banyu polyceleneure. Asam disetel kanggo nyiapake partikel silika kanthi ukuran pori gedhe. Kapindho, ligan anyar, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, disintesis lan digunakake kanggo derivatize partikel silika kanggo nyiapake fase stasioner polar. mesthekake amben homogen dibentuk ing kolom.Ngevaluasi pemisahan kolom sing dikemas saka campuran peptida sing dumadi saka limang peptida; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) lan Trypsin digest of human serum albumin (HAS) . Kolom RP-Amide.Loro peptida lan protein diamati kanthi apik lan efisien ing kolom PMP, sing luwih efisien tinimbang kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Asam Asetat, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Amonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Metacryloyl Chloride (MC-TEMP), Benzoldroxy-Byrene HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Metanol, 2-Propanol, lan Aseton Dituku saka Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Campuran urea (8 g), polietilen glikol (8 g), lan 8 mL asam asetat 0,01 N diaduk nganti 10 menit, banjur ditambahake 24 ml TMOS ing kahanan sing adhem. dikeringake ing 70 ° C kanggo jam 12. Massa alus sing garing dilebokake ing lemah ing oven lan dikalsinasi ing 550 ° C kanggo jam 12. Telung batch disiapake lan ditondoi kanggo mriksa reproducibility ing ukuran partikel, ukuran pori lan area permukaan.
Kanthi modifikasi permukaan partikel silika kanthi ligan sing wis disintesis phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) diikuti polimerisasi radial karo stirena, senyawa sing ngemot gugus polar disiapake. Fase stasioner kanggo agregat lan rantai polystyrene.Proses persiapan diterangake ing ngisor iki.
N-phenylmaleimide (200 mg) lan metil vinyl isocyanate (100 mg) dibubarake ing toluene garing, lan 0,1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahake ing labu reaksi kanggo nyiapake phenylmaleimide-metil vinyl isocyanate copolymer (PMCP) lan campuran 3 ° C. garing ing oven kanthi suhu 40 ° C suwene 3 jam.
Partikel silika garing (2 g) disebarake ing toluene garing (100 mL), diaduk lan disonikasi ing labu ngisor bunder 500 ml suwene 10 menit.PMCP (10 mg) dibubarake ing toluene lan ditambahake dropwise menyang labu reaksi liwat corong tetes. 60 ° C suwene 3 jam. Banjur, partikel silika ikatan PMCP (100 g) dibubarake ing toluena (200 ml) lan 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) ditambahake ing ngarsane 100 µL dibutyltin dilaurate minangka katalis.
Styrene (1 mL), benzoyl peroksida BPO (0,5 mL), lan partikel silika sing disambungake TEMPO-PMCP (1,5 g) disebarake ing toluene lan diresiki nganggo nitrogen. Polimerisasi stirena ditindakake ing suhu 100 ° C suwene 12 jam. Produk sing diasilake dicuci nganggo metanol lan dikeringake ing wayah wengi ing 60 ° C.
Sampel degassed ing 393 K kanggo 1 jam kanggo entuk tekanan residual kurang saka 10-3 Torr. Jumlah N2 adsorbed ing tekanan relatif P / P0 = 0,99 digunakake kanggo nemtokake volume pori total. lan partikel silika sing diikat ligan) dilebokake ing kolom aluminium kanthi nggunakake pita karbon adesif. Emas dilapisi ing conto nggunakake lapisan sputter Q150T, lan lapisan Au 5 nm didepositake ing sampel. Iki nambah efisiensi proses nggunakake voltase rendah lan nyedhiyakake gandum sing apik, sputtering kadhemen. Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ukuran partikel analyzer iki digunakake kanggo njupuk distribusi ukuran partikel. Partikel silika wuda lan partikel silika ligan-ikatan (5 mg saben) padha buyar ing 5 ml isopropanol, sonicated kanggo 10 min, vortexed kanggo 5 min, lan diselehake ing bench optik overThermogravizer saka menit ing Masters 5 menit. kisaran suhu 30 nganti 800 °C.
Kolom baja tahan karat sing dilapisi kaca kanthi ukuran (100 × 1,8 mm id) dikempalken nggunakake metode pengepakan slurry, kanthi prosedur sing padha digunakake ing Ref. 31. Kolom baja tahan karat (dilapisi kaca, 100 × 1,8 mm id) kanthi fitting stopkontak sing ngemot frit 1 µm disambungake menyang pengepakan slurry (Alltech Deerfield, IL, USA). slurry solvent uga propelling solvent.Isi kolom sequentially dening aplikasi meksa saka 100 MP kanggo 10 menit, 80 MP kanggo 15 menit, lan 60 MP kanggo 30 menit. Sajrone packing, getaran mechanical iki Applied karo rong kolom shakers GC (Alltech, Deerfield, IL, IL, USA) kanggo mesthekake packing meksa alon-alon Clurry packing saka kolom Clurry. kanggo nyegah karusakan ing kolom. Pedhot kolom saka unit pengepakan slurry lan sambungake fitting liyane menyang inlet lan menyang sistem LC kanggo mriksa kinerja.
Pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), injektor (Valco (USA) C14 W.05) kanthi daur ulang injeksi 50nL, degasser membran (Shimadzu DGU-14A), jendhela kapiler UV-VIS dibangun Detektor piranti µLC khusus (UV-2075) lan mikrokolum sing disambungake kanthi lapisan kaca sing sithik banget lan efek kolom sing disambungake menyang kolom sing sithik banget. broadening.Sawise packaging, kapiler (50 μm id 365 lan reducing union capillaries (50 μm) dipasang ing stopkontak 1/16″ saka reducing union. Pengumpulan data lan pangolahan kromatografi ditindakake nggunakake piranti lunak Multichro 2000. Pemantauan ing 254 nm Analytes dites kanggo analisis data UVPro 8. (Northampton, MA).
Albumin saka serum manungsa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (elektroforesis gel agarose) 3 mg dicampur karo tripsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 mL), lan 0,2 M amonium bikarbonat (1 mL). 0,1% TFA. Filter solusi lan simpen ing ngisor 4 °C.
Pemisahan campuran peptida lan HSA trypsin digest dievaluasi kanthi kapisah ing kolom PMP. Priksa pamisahan campuran peptida lan trypsin digest saka HSA dening kolom PMP lan mbandhingake asil menyang kolom Ascentis Express RP-Amide. Nomer piring teoritis diitung kaya ing ngisor iki:
Gambar SEM partikel silika gundhul lan partikel silika ikatan ligan ditampilake ing Gbr. 2 .Gambar SEM partikel silika gundhul (A, B) nuduhake yen, ing kontras kanggo pasinaon sadurunge, partikel iki bunder kang partikel sing elongated utawa duwe simetri ora duwe aturan baku.Permukaan partikel silika-ikatan ligan (C, D) punika Gamelan saka partikel silika gundhul, kang bisa amarga saka lapisan polystyrene lumahing partikel silika.
Gambar mikroskop elektron scan partikel silika gundhul (A, B) lan partikel silika ikatan ligan (C, D).
Distribusi ukuran partikel partikel silika gundhul lan partikel silika ikatan ligan ditampilake ing Gambar 3(A). Kurva distribusi ukuran partikel adhedhasar volume nuduhake yen ukuran partikel silika mundhak sawise modifikasi kimia (Gambar 3A). μm, dibandhingake karo panliten sadurunge kanthi nilai ad(0,5) 3,05 μm (partikel silika sing diikat polistirena) 34. Batch iki nduweni distribusi ukuran partikel sing luwih sempit dibandhingake karo panliten sadurunge amarga rasio PEG, urea, TMOS, lan asam asetat ing campuran reaksi sing beda-beda. fungsionalisasi permukaan partikel silika kanthi stirena mung nyimpen lapisan polistirena (0,97 µm) ing permukaan silika, dene ing fase PMP ketebalan lapisan 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) lan distribusi ukuran pori (B) partikel silika gundhul lan partikel silika terikat ligan.
Ukuran pori, volume pori lan area lumahing partikel silika saka panliten saiki diwenehi ing Tabel 1(B). Profil PSD partikel silika gundhul lan partikel silika sing diikat ligan ditampilake ing Gambar 3(B).Asil kasebut bisa dibandhingake karo panaliten sadurunge. dening 69 sawise modifikasi kimia, minangka ditampilake ing Tabel 1(B), lan owah-owahan saka kurva ditampilake ing Fig. 3 (B). Kajaba iku, volume pori saka partikel silika sudo saka 0,67 kanggo 0,58 cm3 / g sawise modifikasi kimia. m2 / g). Kaya sing dituduhake ing Tabel 1 (B), area permukaan (m2 / g) partikel silika uga mudhun saka 116 m2 / g dadi 105 m2 / g sawise modifikasi kimia.
Asil analisis unsur saka fase stasioner ditampilake ing Tabel 2. The loading karbon saka phase stasioner saiki 6,35%, kang luwih murah tinimbang loading karbon saka sinau sadurunge kita (polystyrene bonded silika partikel, 7,93% 35 lan 10,21%, mungguh) 42. The loading karbon saka saiki SP ing phase stasioner, Kajaba saka polystyrene kurang saka , amarga saka saiki SP ing preparation saka styrene kurang saka, ligan kayata phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) lan 4-hydroxy-TEMPO digunakake. Persentase bobot nitrogen saka fase stasioner saiki yaiku 2,21%, dibandhingake karo 0,1735 lan 0,85% bobot nitrogen ing studi sadurunge. beban produk (4) lan (5) yaiku 2,7% lan 2,9%, dene beban karbon produk akhir (6) yaiku 6,35%, kaya sing ditampilake ing Tabel 2. Mundhut bobot dicenthang nganggo fase stasioner PMP, lan kurva TGA ditampilake ing Gambar 4. Kurva TGA nuduhake penurunan bobot 8,6% amarga bobote bobote 8,6%, yaiku 8,6%. ligan ngandhut ora mung C nanging uga N, O, lan H.
Ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate dipilih kanggo modifikasi permukaan partikel silika amarga nduweni gugus phenylmaleimide polar lan gugus vinilisocyanate. Gugus isosianat vinil bisa luwih bereaksi karo stirena kanthi polimerisasi radikal sing urip. Alasan kapindho yaiku nglebokake gugus sing nduweni interaksi moderat karo analit lan interaksi analitik lan ora ana fase stasioner kuat. phenylmaleimide moiety ora duwe daya virtual ing pH normal. Polaritas fase stasioner bisa dikontrol kanthi jumlah optimal stirena lan wektu reaksi polimerisasi radikal bebas. Langkah pungkasan reaksi (polimerisasi radikal bebas) kritis lan bisa ngganti polaritas fase stasioner. loading saka phase stasioner lan kosok balene.SPs disiapake karo konsentrasi beda saka styrene duwe loadings karbon beda.Maneh, mbukak iki fase stasioner menyang kolom stainless steel lan mriksa kinerja kromatografi sing (selectivity, résolusi, Nilai N, etc.). Adhedhasar nyobi iki, formulasi optimized dipilih kanggo nyiapake PMP stasioner phase lan mesthekake kontrol polatelarity phase apik.
Limang campuran peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) uga dievaluasi nggunakake kolom PMP nggunakake fase seluler; 60/40 (v/v) asetonitril/banyu (0,1% TFA) kanthi laju aliran 80 μL/menit. Ing kondisi elusi optimal, nomer plat teoretis (N) saben kolom (100 × 1,8 mm id) yaiku 20.000 ± 100 (200.000 N/m² kanggo kolom T 3). lan kromatogram ditampilake ing Figure 5A. Analisis cepet ing kolom PMP ing tingkat aliran dhuwur (700 μL / min), limang peptida padha eluted ing siji menit, nilai N apik banget, 13.500 ± 330 saben kolom (100 × 1.8 mm id), Cocog kanggo 5 peptida (Gambar 135.000) kolom ukuran podho rupo (100 × 1,8 mm id) padha dikempalken karo telung macem-macem PMP phase stasioner kanggo mriksa reproducibility.Konsentrasi analit kanggo saben kolom direkam nggunakake kondisi elusi optimal lan nomer piring teoritis N lan wektu retensi kanggo misahake campuran test padha ing saben kolom. nilai %RSD sing kurang, kaya sing dituduhake ing Tabel 3.
Pemisahan campuran peptida ing kolom PMP (B) lan kolom Ascentis Express RP-Amide (A); fase seluler 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 × 1,8 mm id); analitik Urutan elusi senyawa: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) lan 5 (leucine) asam enkephalin).
Kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dievaluasi kanggo pamisahan tryptic digests saka albumin serum manungsa ing kromatografi cair kinerja dhuwur. TFA. Kaya sing dituduhake ing kromatogram (Gambar 6), pencernaan HSA wis dipérang dadi 17 puncak sing cocog karo peptida 17. Efisiensi pamisahan saben puncak ing pencernaan HSA diwilang lan nilai diwenehi ing Tabel 5.
Pencernaan tryptic saka HSA (100 × 1,8 mm id) dipisahake ing kolom PMP; laju aliran (100 µL/min), fase gerak 60/40 asetonitril/banyu kanthi 0,1% TFA.
ngendi L yaiku dawa kolom, η minangka viskositas fase gerak, ΔP minangka tekanan bali kolom, lan u minangka kecepatan linier fase seluler. mm id) padha karo panaliten sadurunge Ref.34. Permeabilitas kolom sing dikemas karo partikel superfisial keropos yaiku: 1,7 × 10-15 kanggo partikel 1,3 μm, 3,1 × 10-15 kanggo partikel 1,7 μm, 5,2 × 10-15 lan 2,5 μm kanggo partikel partikel μm 43. Mula, permeabilitas fase PMP padha karo partikel cangkang inti 5 μm.
ngendi Wx minangka bobot kolom sing dikemas karo kloroform, Wy yaiku bobot kolom sing dikemas karo metanol, lan ρ minangka kapadhetan pelarut. Kapadhetan metanol (ρ = 0,7866) lan kloroform (ρ = 1,484). Kolom C18-Urea 31 sing sadurunge kita sinau yaiku 0,63 lan 0,55. Iki tegese anane ligan urea nyuda permeabilitas fase stasioner. Ing sisih liya, porositas total kolom PMP (100 × 1,8 mm id) yaiku 0,60. partikel silika amarga ing fase stasioner C18-jinis ligan C18 ditempelake ing partikel silika minangka chain linear, nalika ing polystyrene-jinis fase stasioner, A lapisan polimer relatif kandel kawangun watara iku. Ing eksperimen khas, porositas kolom diitung minangka:
Gambar 7A,B nuduhake kolom PMP (100 × 1,8 mm id) lan Ascentis Express RP-Amide kolom (100 × 1,8 mm id) nggunakake kondisi elusi padha (ie, 60/40 ACN/H2O lan 0,1% TFA). ) saka plot van Deemter. Campuran peptida sing dipilih (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) disiapake ing 20 µL/ Laju aliran minimal kanggo loro kolom yaiku 800 µL/min. kolom lan kolom Ascentis Express RP-Amide yaiku 2,6 µm lan 3,9 µm. nyuda ing Nilai N karo nambah aliran ora pinunjul dibandhingake sinau kita sadurungé.Efisiensi pamisahan sing luwih dhuwur saka kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dibandhingake karo kolom Ascentis Express RP-Amide adhedhasar dandan ing wangun partikel, ukuran, lan prosedur packing kolom Komplek digunakake ing karya saiki34.
(A) plot van Deemter (HETP versus mobile phase linear velocity) dipikolehi nggunakake kolom PMP (100 × 1,8 mm id) ing 60/40 ACN/H2O kanthi 0,1% TFA. (B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) dipikolehi nggunakake kolom Ascentis Express RP-Amide/06 × 1 (10 mm Amide 1.8 mm) ACN / H2O karo 0,1% TFA.
Fase stasioner polistirena polar-ditempelake disiapake lan dievaluasi kanggo misahake campuran peptida sintetik lan nyerna trypsin saka albumin serum manungsa (HAS) ing kromatografi cair kinerja dhuwur. partikel, sintesis kontrol saka phase stasioner, lan packing kolom Komplek.Saliyane efficiency misahake dhuwur, kurang kolom bali meksa ing tingkat aliran dhuwur kauntungan liyane saka phase stasioner iki.Kolom PMP nuduhake reproducibility apik lan bisa digunakake kanggo analisis campuran peptida lan pencernaan trypsin saka macem-macem protein. kromatografi.Ing mangsa ngarep, kolom PMP uga bakal dievaluasi kanggo pamisahan protein lan antibodi monoklonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Riset babagan Sistem Pemisahan Peptida dening Kromatografi Fase Reverse Part I: Pengembangan Protokol Karakterisasi Kolom.J. Kromatografi.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved peptida aktif dirancang kanggo perawatan saka penyakit infèksius.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetis: ilmu lan pasar.penemuan obat.15 (1-2) dina iki, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi Cairan Proteomik Lanjut.J. Kromatografi.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Spektrometri massa kromatografi cair canggih mbisakake nggabungake metabolomik lan proteomik sing ditargetake sacara luas.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC ing pangembangan obat.J. Sep Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspek dhasar lan praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh kanggo pamisahan kanthi cepet.J. Sep Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikasi kromatografi cair kinerja ultra-dhuwur ing pangembangan obat.J. Kromatografi.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Hidrogel macroporous monolitik sing disiapake saka emulsi fase internal dhuwur lenga-ing-banyu kanggo pemurnian efisien enterovirus.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair ing proteomik.J. Kromatografi.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Tren berkembang ing pamisahan kromatografi cair fase terbalik saka peptida lan protein terapeutik: teori lan aplikasi.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pemisahan peptida rong dimensi nggunakake sistem RP-RP-HPLC nggunakake nilai pH sing beda ing dimensi pamisahan pisanan lan kapindho.J. Sep Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Karakteristik transfer massa lan kinerja kinetik kolom kromatografi efisiensi dhuwur sing dikempalken karo partikel C18 sub-2 μm kanthi partikel keropos lan superficially diselidiki.J. Sep Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Tren anyar lan tantangan analitis ing isolasi, identifikasi lan validasi peptida bioaktif tanduran.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-x.
Mueller, JB et al. Lanskap proteomik saka karajan urip. Alam 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Pangolahan hilir peptida terapeutik kanthi kromatografi cair preparatif.Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran lan aplikasi kanggo biopolimer.J. Kromatografi.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligand kanggo kromatografi protein mode campuran: prinsip, karakterisasi, lan desain.J. Bioteknologi.144(1), 3-11 (2009).