საკვები ნივთიერებების მიღება და გავრცელება აერთიანებს მწერების საკვებისა და სიცოცხლის ისტორიის მახასიათებლებს. სიცოცხლის სხვადასხვა ეტაპზე სპეციფიკური საკვები ნივთიერებების დეფიციტის კომპენსაციისთვის, მწერებს შეუძლიათ მიიღონ ეს საკვები დამატებითი კვების გზით, მაგალითად, ხერხემლიანთა სეკრეციით კვებით, რომელიც ცნობილია როგორც გუბეები. .ამ კვლევის მიზანი იყო იმის შეფასება, არის თუ არა ენ.arabiensis აგიტაცია ძროხის შარდზე ნუტრიენტების შესაძენად აუმჯობესებს სიცოცხლის ისტორიის მახასიათებლებს.
დარწმუნდით, რომ ის უსაფრთხოა.arabiensis-ს იზიდავდა ახალი, 24-საათიანი, 72-საათიანი და 168-საათიანი ძროხის შარდის სუნი, ხოლო მასპინძლის მაძიებელი და სისხლით ნაკვები (48-საათიანი კვება სისხლის შემდგომი კვება) გაზომეს Y-ტუბით ოლფაქტომეტრში და ორსულთათვის გამოყენებული იქნა ბიოლოგიური ბიოქიმიური ტესტირება. e ნაერთები ძროხის შარდში ოთხივე ასაკობრივ კლასში. ბიოაქტიური ნაერთების სინთეზური ნარევები შეფასებული იყო Y-ტუბსა და საველე კვლევებში. ძროხის შარდისა და მისი ძირითადი აზოტის შემცველი ნაერთის შარდოვანა გამოსაკვლევად, როგორც პოტენციური დამატებითი დიეტა მალარიის ვექტორებისთვის, კვების პარამეტრები და სიცოცხლის ისტორიის მახასიათებლები. შეფასდა გადარჩენის, მიჯაჭვული ფრენისა და რეპროდუქციისთვის.
ეძიეთ მასპინძლის სისხლი და კვება. ლაბორატორიულ და საველე კვლევებში არაბებს მიიპყრო ახალი და დაბერებული ძროხის შარდის ბუნებრივი და სინთეზური სურნელი. ორსული ქალები გულგრილი იყვნენ ძროხის შარდის პასუხების მიმართ ქვირითობის ადგილებში. მასპინძელი და სისხლის მწოველი ქალები აქტიურად შთანთქავენ ძროხის შარდს და შარდოვანს, როგორც ძროხის შარდისა და შარდის ფუნქციის მიხედვით. ფრენა, გადარჩენა ან გამრავლება.
Anopheles arabinis ძროხის შარდის მიღება და განაწილება სიცოცხლის ისტორიის გაუმჯობესებული მახასიათებლებისთვის. ძროხის შარდის დამატებითი კვება პირდაპირ გავლენას ახდენს ვექტორულ შესაძლებლობებზე ყოველდღიური გადარჩენისა და ვექტორის სიმკვრივის გაზრდით და არაპირდაპირი გზით ფრენის აქტივობის შეცვლით და ამიტომ გასათვალისწინებელია მომავალ მოდელებში.
ნუტრიენტების მიღება და განაწილება აერთიანებს მწერების საკვებისა და სიცოცხლის ისტორიის მახასიათებლებს [1,2,3]. მწერებს შეუძლიათ შეარჩიონ და შეიძინონ საკვები და განახორციელონ კომპენსატორული კვება საკვების ხელმისაწვდომობისა და საკვები ნივთიერებების მოთხოვნილებების მიხედვით [1, 3]. ნუტრიენტების განაწილება დამოკიდებულია სიცოცხლის ისტორიის პროცესზე და შეიძლება გამოიწვიოს სხვადასხვა მოთხოვნები დიეტის ხარისხისა და რაოდენობის სპეციფიკის მიმართ. ტრიენტები, მწერებს შეუძლიათ მიიღონ ეს საკვები დამატებითი საკვების საშუალებით, როგორიცაა ტალახი, ხერხემლიანების სხვადასხვა ექსკრეცია და სეკრეცია, და ლეში, პროცესი, რომელიც ცნობილია როგორც გუბეები. 2, 4, 5, 6], 7]. მალარიის კოღო Anopheles gambiae sensu lato (sl) წარმოიქმნება როგორც „არასაზრდოებელი“ ზრდასრული [8], ამიტომ მორწყვა შეიძლება მნიშვნელოვანი როლი ითამაშოს მისი ცხოვრების ისტორიის მახასიათებლებში, მაგრამ ეს ქცევა ჯერჯერობით უგულებელყოფილია. აჟიოტაჟის გამოყენებამ, როგორც ომის დროს, შეიძლება გამოიწვიოს მნიშვნელოვანი შედეგი ამ საკითხზე ყურადღების გაზრდის მიზნით.
ზრდასრული მდედრი ანოფელის კოღოებში აზოტის მიღება შეზღუდულია ლარვის სტადიიდან გადატანილი დაბალი კალორიული რეზერვებისა და სისხლის ფქვილის არაეფექტური გამოყენების გამო [9]. ქალი Ann.gambiae sl, როგორც წესი, ანაზღაურებს ამას დამატებითი სისხლის საკვების დამატებით [10, 11], რითაც აყენებს კოღოების დიდ საფრთხეს. კოღოებს შეუძლიათ გამოიყენონ ხერხემლიანთა ექსკრეტის დამატებითი კვება აზოტოვანი ნაერთების შესაძენად, რომლებიც აძლიერებენ ადაპტაციას და ფრენის მანევრირებას, როგორც ეს სხვა მწერებმა აჩვენეს. binis არის ოპორტუნისტული მისი მასპინძლის პრეფერენციებით და ცნობილია, რომ ასოცირდება და იკვებება პირუტყვთან. ძროხის შარდი არის აზოტოვანი ნაერთებით მდიდარი რესურსი, შარდოვანა შეადგენს სუფთა შარდის მთლიანი აზოტის 50-95%-ს [15, 16]. ვინაიდან ძროხის შარდი ბერდება, მიკროორგანიზმები ამცირებენ 4 საათის განმავლობაში ამ ნაერთების კომპლექსურობას. ამიაკის სწრაფი მატება, რომელიც დაკავშირებულია ორგანული აზოტის დაქვეითებასთან, აყვავდება ალკალოფილური მიკროორგანიზმები (რომელთაგან ბევრი წარმოქმნის კოღოებისთვის ტოქსიკურ ნაერთებს) [15], რომლებიც შეიძლება იყოს მდედრობითი სქესის Ann.arabiensis უპირატესად იზიდავს 24 საათის ან ნაკლები ასაკის შარდს [13, 14].
ამ კვლევაში მოძებნეს მასპინძელი და სისხლით ნაკვები Ans. მისი პირველი გონადოტროპინის ციკლის დროს, arabiensis შეფასდა აზოტოვანი ნაერთების, მათ შორის შარდოვანას, შარდის შერევით. შემდგომში ჩატარდა ექსპერიმენტების სერია იმის შესაფასებლად, თუ როგორ ანაწილებენ მდედრი კოღოები ამ პოტენციურ მკვებავ რესურსს. rine შეფასდა იმის დასადგენად, იყო თუ არა ეს საიმედო მინიშნებებს მასპინძლისა და სისხლით კვებაზე An. ამ პოტენციური კვების რესურსის ძიებისას, arabiensis-მა აღმოაჩინა ქიმიური კორელაციები დაკვირვებული დიფერენციალური მიმზიდველობის მიღმა. 24-საათიანი დაძველებული ორგანული ნაერთების სინთეზური სუნი ფიზიოლოგიური მდგომარეობები.კოღოს მოზიდვა.მოპოვებული შედეგები ადასტურებს, რომ ან.arabiensis იძენს და ავრცელებს ხერხემლიანთა შარდში აღმოჩენილ აზოტოვან ნაერთებს სიცოცხლის ისტორიის მახასიათებლებზე ზემოქმედების მიზნით. ეს შედეგები განხილულია პოტენციური ეპიდემიოლოგიური შედეგების კონტექსტში და როგორ შეიძლება მათი გამოყენება ვექტორული მეთვალყურეობისა და კონტროლისთვის.
Anopheles arabicans (Dongola შტამი) შენარჩუნებული იყო 25 ± 2 °C ტემპერატურაზე, 65 ± 5% RH და 12:12 სთ სინათლის:ბნელი ციკლი. ლარვები გაიზარდა პლასტმასის უჯრებში (20 სმ × 18 სმ × 7 სმ), სავსე გამოხდილი წყლით და შეაგროვეს თევზის საკვები (ტეტრა). 30 მლ ჭიქებში (Nolato Hertila, Åstorp, SE) და შემდეგ გადაიტანეს Bugdorm-ის გალიებში (30 სმ × 30 სმ × 30 სმ; MegaView Science, Taichung, ტაივანი) ზრდასრულთა გამოჩენის დასაშვებად. მოზრდილებს მიეწოდებათ 10% საქაროზას ხსნარი, რომელიც სთავაზობდნენ მდედრობითი სქესის ხსნარს 4 დღის შემდეგ ლიბიტამდე. უშუალოდ ექსპერიმენტამდე, ან შიმშილობდნენ ღამით გამოხდილი წყლით ექსპერიმენტამდე, როგორც ეს აღწერილია ქვემოთ. საფრენი მილის ექსპერიმენტებისთვის გამოყენებული მდედრები შიმშილობდნენ მხოლოდ 4-6 საათის განმავლობაში წყლის თავისუფლებით. სისხლის მწოველი კოღოების მოსამზადებლად შემდგომი ბიოანალიზებისთვის, 4 დპ მდედრს მიაწოდეს დეფიბროზული ცხვრის სისხლი (Håt, დისკების სისხლძარღვი) აკრინგტონი, დიდი ბრიტანეთი). სრულად გადატვირთულ მდედრებს გადაჰყავდათ ცალკეულ გალიებში და უშუალოდ უტარებდნენ დიეტას, როგორც ეს აღწერილია ქვემოთ, ან 10% საქაროზა ad libitum 3 დღით ადრე აღწერილ ექსპერიმენტებამდე. ეს უკანასკნელი მდედრები გამოიყენეს საფრენი მილის ბიოანალიზებისთვის და გადაიყვანეს ლაბორატორიაში, შემდეგ კი გამოხდილი წყალი ad libitum 4-6 საათით ადრე.
კვების ანალიზები გამოყენებული იყო შარდისა და შარდოვანას მოხმარების რაოდენობრივად დასადგენად ზრდასრულ ანა არაბულ ქალებში. მასპინძლის მაძიებელ და სისხლით კვებავ ქალებს მიეწოდათ დიეტა, რომელიც შეიცავდა 1% განზავებულ ახალ და დაძველებულ ძროხის შარდს, შარდოვანას სხვადასხვა კონცენტრაციას და ორ საკონტროლო ჯგუფს (10% საქაროზა და წყალი) 48 სთ-ის განმავლობაში. გარდა ამისა, საკვების შეღებვა c1-მლ1-1015 (1-მლ1-მლ-იანიდი) 1; Sigma-Aldrich, Stokholm, SE) დაემატა დიეტას და მიეწოდება 4 × 4 მატრიცაში 250 μl მიკროცენტრიფუგის მილებში (Axygen Scientific, Union City, CA, აშშ; სურათი 1A) შეავსეთ კიდემდე (~ 300 μl). იმისათვის, რომ თავიდან აიცილოთ კონკურენცია პეტრეს 10 სმ-ში დიდი ფერის და კოღოების პოტენციურ ეფექტებს შორის. დიამეტრი და 6 სმ სიმაღლე; Semadeni, Ostermundigen, CH; სურათი 1A) სრულ სიბნელეში 25 ± 2 სმ °C და 65 ± 5% ფარდობითი ტენიანობის პირობებში. ეს ექსპერიმენტები განმეორდა 5-დან 10-ჯერ. დიეტაზე ზემოქმედების შემდეგ, კოღოები მოათავსეს -20 °C-ზე შემდგომ ანალიზამდე.
მოძებნეთ მსხვილფეხა რქოსანი შარდი და შარდოვანა, რომელიც შეიწოვება მასპინძლის მიერ და სისხლის მწოველი მდედრი Anopheles arabianus. კვების ცდაში (A), მდედრი კოღოებს მიეწოდებათ დიეტა, რომელიც შედგებოდა ახალი და დაბერებული ძროხის შარდისგან, შარდოვანას სხვადასხვა კონცენტრაციისგან, საქაროზასა (10%) და გამოხდილ წყალში (H2O). მასპინძლის მაძიებელმა მდედრებმა შთანთქა 72-საათიანი ძროხის შარდი 168-საათიან ძროხის შარდზე ნაკლები (B). შარდის საშუალო მთლიანი აზოტის შემცველობა (± სტანდარტული გადახრა) წარმოდგენილია ჩანართში. მასპინძელი (D, F) და სისხლის მწოველი (E, G) მდედრები იღებენ შარდოვანას (დოზაზე დამოკიდებულები) მამაკაცისგან განსხვავებული მოცულობით. (ცალმხრივი ANOVA Tukey's post hoc ანალიზის გამოყენებით; p <0.05). შეცდომის ზოლები წარმოადგენს საშუალოს სტანდარტულ შეცდომას (BE). სწორი წყვეტილი ხაზი წარმოადგენს ლოგი-წრფივი რეგრესიის ხაზს (F, G)
აბსორბირებული საკვების გასათავისუფლებლად, კოღოები ინდივიდუალურად მოათავსეს 1,5 მლ მიკროცენტრიფუგა მილაკებში, რომლებიც შეიცავდა 230 μl გამოხდილ წყალს და ქსოვილი გაფუჭდა ერთჯერადი წამლის და უსადენო ძრავის გამოყენებით (VWR International, Lund, SE), რასაც მოჰყვა ცენტრიფუგაცია 10 μS სიჩქარით 10 წთ. ldrich) და შთანთქმა (λ620) განისაზღვრა სპექტროფოტომეტრზე დაფუძნებული მიკროპლატის წამკითხველის გამოყენებით (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) ნმ). ალტერნატიულად, კოღოები დაფქული იყო 1 მლ გამოხდილ წყალში, რომლის 900 μl გადაყვანილი იყო 60mV88 სპექტზე ანალიზისთვის. 0, Shimadzu, Kista, SE). დიეტური მოხმარების რაოდენობრივი დასადგენად, მომზადდა სტანდარტული მრუდი სერიული განზავების გზით, რათა გამოეღო 0.2 μl-დან 2.4 μl 1 მგ მლ-1 ქსილენ ციანიდი. შემდეგ, საღებავის ცნობილი კონცენტრაციების ოპტიკური სიმკვრივე გამოიყენეს თითოეული მიღებული საკვების ოდენობის დასადგენად.
მოცულობის მონაცემები გაანალიზებული იყო ცალმხრივი დისპერსიის ანალიზის (ANOVA) გამოყენებით, რასაც მოჰყვა ტუკეის პოსტ-ჰოკ წყვილი შედარება (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, აშშ, 1989–2007). .0.0 Mac-ისთვის, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
დაახლოებით 20 μl შარდის ნიმუშები თითოეული ასაკობრივი ჯგუფიდან იყო შეკრული Chromosorb® W/AW-ზე (10 მგ 80/100 mesh, Sigma Aldrich) და ჩასმული იყო თუნუქის კაფსულებში (8 მმ × 5 მმ). კაფსულები ჩასვეს წვის პალატაში (her CHNS, The Scientificr0, CHNS/O, Scientificr0, CHNS/O20, CHNS/O). აშშ) ახალ და დაძველებულ შარდში აზოტის შემცველობის დასადგენად მწარმოებლის პროტოკოლის მიხედვით. ჯამური აზოტი (გ N l-1) რაოდენობრივად იქნა განსაზღვრული სტანდარტად გამოყენებული შარდოვანას ცნობილი კონცენტრაციების საფუძველზე.
დიეტის გავლენის შესაფასებლად მასპინძელი და სისხლისმწოველი ქალის გადარჩენაზე, კოღოები ინდივიდუალურად მოათავსეს პეტრის დიდ ჭურჭელში (12 სმ დიამეტრით და 6 სმ სიმაღლით; სემადენი) სახურავზე ბადისებრი ნახვრეტით (დიამეტრის 3 სმ) ვენტილაციისთვის და საკვების მიწოდებისთვის. , 10% საქაროზა და წყალი. თითოეული დიეტა პიპეტი იყო სტომატოლოგიურ ტამპონზე (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) ჩასმული 5 მლ შპრიცში (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), დგუში ამოიღეს და მოთავსებული იყო პეტრის ჭურჭლის თავზე ყოველი დღის განმავლობაში. კოღოებს ითვლიდნენ დღეში ორჯერ, ხოლო მკვდარი კოღოები უგულებელყოფდნენ ბოლო კოღოს სიკვდილამდე (n = 40 თითო მკურნალობაზე).
კოღოების მფრინავი წისქვილი, რომელიც დაფუძნებულია Attisano et al.-ზე [17], დამზადებულია 5 მმ სისქის გამჭვირვალე აკრილის პანელებისგან (10 სმ სიგანე x 10 სმ სიგრძე x 10 სმ სიმაღლე) წინა და უკანა პანელების გარეშე (ნახ. 3: ზედა). წყვილ ნეოდიმის მაგნიტებს შორის 9 სმ დაშორებით. იმავე მასალისგან დამზადებული ჰორიზონტალური მილი (6,5 სმ ლ) ორად გაყოფს ვერტიკალურ მილს, რათა ჩამოყალიბდეს მიბმული მკლავი და მკლავი, რომელიც ატარებდა ალუმინის ფოლგის პატარა ნაჭერს, როგორც სინათლის შეწყვეტის სიგნალს.
24-საათიანი შიმშილის მქონე მდედრებს აძლევდნენ ზემოაღნიშნულ დიეტას შეკავებამდე 30 წუთით ადრე. სრულად კვებაზე მყოფ მდედრ კოღოებს შემდეგ ინდივიდუალურად ანესთეზირებდნენ ყინულზე 2-3 წუთის განმავლობაში და მიამაგრებდნენ მწერების ქინძისთავებს ფუტკრის ცვილით (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungvolution. ჩაწერილი იყო სპეციალურად შექმნილი მონაცემთა ლოგერით, შემდეგ ინახებოდა და ნაჩვენები იყო PC-Lab 2000™ პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით (v4.01; Velleman, Gavere, BE). ფრენის წისქვილი მოთავსებული იყო კლიმატით რეგულირებულ ოთახში (12 სთ:12 სთ, სინათლე: ბნელი, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
ფრენის აქტივობის ნიმუშის ვიზუალიზაციისთვის, ფრენის მთლიანი მანძილი (მ) და ზედიზედ ფრენის აქტივობების ჯამური რაოდენობა გამოითვლებოდა საათში 24 საათის განმავლობაში. გარდა ამისა, ცალკეული ქალების მიერ გავლილი საშუალო მანძილი შედარებული იყო მკურნალობაში და გაანალიზებული იყო ცალმხრივი ANOVA და Tukey's post hoc ანალიზის გამოყენებით (JMP Pro, v14.0.0.0, S. პირობითად, რაუნდების საშუალო რაოდენობა გამოითვლება 10 წუთიანი მატებით.
An.arabiensis-ის რეპროდუქციულ უნარზე დიეტის გავლენის შესაფასებლად, ექვსი მდედრი (4 დპ) გადაიყვანეს პირდაპირ ბუგდორმის გალიებში (30 სმ × 30 სმ × 30 სმ) სისხლის შეგროვების შემდეგ და შემდეგ მიიღეს ექსპერიმენტული დიეტა 48 საათის განმავლობაში, როგორც ზემოთ იყო აღწერილი. შემდეგ დიეტები ამოიღეს და ქვირითის ჭიქები (30 მლ) აავსეს 4 საათის განმავლობაში ნოლატო ჰერ-ს წყლით 4 საათის განმავლობაში. იცვლებოდა ყოველ 24 საათში. გაიმეორეთ თითოეული დიეტური რეჟიმი 20-50-ჯერ. კვერცხები დაითვალეს და ჩაიწერეს თითოეული ექსპერიმენტული გალიისთვის. კვერცხების ქვენიმუშები გამოყენებული იყო ცალკეული კვერცხების საშუალო ზომისა და სიგრძის ცვალებადობის შესაფასებლად (n ≥ 200 დიეტაზე) Dialux-20 მიკროსკოპით აღჭურვილი Dialux-20 (DM1000000) (DFC) 320 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). დარჩენილი კვერცხები ინახებოდა კლიმატის კონტროლირებად ოთახში სტანდარტული აღზრდის პირობებში 24 საათის განმავლობაში და ახლახან გამოჩენილი 1 ვარსკვლავის A ლარვის ქვენიმუში (n ≥ 200 დიეტაზე), როგორც ზემოთ აღწერილი იყო. c ანალიზი (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
ზებუს მსხვილფეხა რქოსანი ჯიშის, Arsi რასებიდან შეგროვებული ნიმუშებიდან შეგროვდა ცერებრული (1 სთ აღებიდან 1 საათის შემდეგ), 24 სთ, 72 სთ და 168 სთ ასაკის შარდი. მოხერხებულობისთვის შარდის ნიმუშები შეგროვდა დილით ადრე, ხოლო ძროხები ჯერ კიდევ ბეღელში იყვნენ. საცხობი ჩანთები (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 ლ პოლიამიდში თავსახურით ვინილის ქლორიდის პლასტმასის დასარტყამებში. მსხვილფეხა რქოსანი აქროლადი ნივთიერებები შეგროვდა მსხვილფეხა რქოსანი შარდის თითოეული ნიმუშიდან ან პირდაპირ (ახალი) ან მომწიფების შემდეგ თითოეული ნიმუში ოთახის ტემპერატურაზე 22 სთ და 1 სთ.
სათავე სივრცეში აქროლადი ნივთიერებების შეგროვებისთვის გამოყენებული იქნა დახურული მარყუჟის სისტემა გააქტიურებული ნახშირბადით გაფილტრული გაზის ნაკადის (100 მლ წთ-1) ცირკულაციისთვის პოლიამიდის პარკში ადსორბციულ სვეტამდე 2,5 საათის განმავლობაში დიაფრაგმის ვაკუუმ ტუმბოს გამოყენებით (KNF Neuberger, Freiburg, DE). n მილაკი (5,5 სმ x 3 მმ id) რომელიც შეიცავს 35 მგ Porapak Q-ს (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, აშშ) შუშის ბამბის საცობებს შორის. გამოყენებამდე სვეტი გარეცხილი იყო 1 მლ ხელახალი გამოხდილი n-ჰექსანით (Merck, Darmstadt, 9 მლ. ) ადსორბირებული აქროლადი ნივთიერებები გამოირეცხებოდა 400 μl პენტანით. Headspace კოლექციები დაგროვდა და შემდეგ ინახებოდა -20°C-ზე შემდგომი ანალიზისთვის გამოყენებამდე.
მასპინძლის მაძიებელი და სისხლისმჭამელი An. Headspace აქროლადი ექსტრაქტები, შეგროვებული ახალი, 24-საათიანი, 72-საათიანი და 168-სთ-ის შარდიდან გაანალიზებული იყო Arabidopsis კოღოების აქროლად ექსტრაქტებზე სწორი შუშის მილის ოლფაქტომეტრის გამოყენებით. .არაბი [19]. შუშის მილის ოლფაქტომეტრი (80 სმ × 9,5 სმ id) განათდა 3 ± 1 lx წითელი შუქით ზემოდან. ნახშირით გაფილტრული და დატენიანებული ჰაერის ნაკადი (25 ± 2 °C, 65 ± 2% ფარდობითი ტენიანობა) გავლილია 1 სმ A სერიით 1 სმ-ზე. s, ქმნის ლამინურ ნაკადს და ერთგვაროვან ბუმბულის სტრუქტურას. სტომატოლოგიური ტამპონის დისპენსერი (4 სმ × 1 სმ; L:D; DAB Dental AB), ჩამოკიდებული 5 სმ კოჭიდან ოლფაქტომეტრის ქარის ბოლოზე, სტიმულატორის ცვლილებით ყოველ 5 წუთში. ანალიზისთვის გამოიყენებოდა 10 μl ყოველი სტიმულატორის ტოლი, როგორც 1 სტიმულატორი. კონტროლი. ინდივიდუალური მასპინძლის მაძიებელი ან სისხლის მწოველი კოღოები მოათავსეს ინდივიდუალურ გამოშვების გალიებში ექსპერიმენტის დაწყებამდე 2-3 საათით ადრე. გამოშვების გალია მოთავსდა ოლფაქტომეტრის ქარის ქვემოთ და კოღოებს აძლევდნენ აკლიმატის საშუალებას 1 წუთის განმავლობაში, შემდეგ კი გალიის პეპლის სარქველი გაიხსნა გალიის პროპორციულად. წყარო გამოშვებიდან 5 წუთის განმავლობაში. ყოველი სათავე სივრცის აქროლადი ექსტრაქტი და კონტროლი განმეორდა მინიმუმ 30-ჯერ და, რათა თავიდან იქნას აცილებული რომელიმე დღის ეფექტი, იგივე რაოდენობის მკურნალობა და კონტროლის ტესტირება ჩატარდა ყოველ ექსპერიმენტულ დღეს. მოიძიეთ პასუხები მასპინძლისა და სისხლით კვებაზე Ans.Arabic და headspace კომპლექტები გაანალიზებული იყო ნომინალური შედარების გამოყენებით, მოჰყვა logistic regressodi0.MP4. .0, SAS Institute Inc.).
An-ის ქვირითობის პასუხი. ახალი და დაძველებული ძროხის შარდის თავის სივრცის ექსტრაქტები გაანალიზებული იყო Bugdorm გალიებში (30 სმ × 30 სმ × 30 სმ; MegaView Science). 10 μl თითოეული სათავე ექსტრაქტით 1:10 განზავებით. თანაბარი რაოდენობით პენტანი იყო გამოყენებული საკონტროლო ჭიქის დასარეგულირებლად. სამკურნალო და საკონტროლო ჭიქები გაცვალეს თითოეულ ექსპერიმენტს შორის პოზიციის ეფექტის გასაკონტროლებლად. სისხლით ნაკვები ათი მდედრი გაათავისუფლეს ექსპერიმენტულ გალიებში ZT 9-11 და კვერცხები ჭიქებში დათვლილი იყო 2 საათის შემდეგ ფორმულა. სამკურნალო თასში – საკონტროლო ჭიქაში დადებული კვერცხების რაოდენობა)/(დადებული კვერცხების საერთო რაოდენობა).თითოეული დამუშავება მეორდებოდა 8-ჯერ.
მდედრობითი სქესის An.arabiensis-ის გაზის ქრომატოგრაფიული და ელექტრონული ანტენის ნიმუშის გამოვლენის (GC-EAD) ანალიზი ჩატარდა, როგორც ადრე იყო აღწერილი [20]. მოკლედ, ახალი აქროლადი ექსტრაქტები გამოეყო Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US), რომელიც აღჭურვილი იყო HP-5 მმ5 მმ 5 მმ სისქის ფენით (30 მმ5 × 5 A სვეტით 0). gilent ტექნოლოგიები).და შარდის დაბერება. წყალბადი გამოიყენებოდა მოძრავ ფაზად, საშუალო ხაზოვანი ნაკადის სიჩქარით 45 სმ წ-1. თითოეული ნიმუში (2 მკლ) შეჰყავდათ 30 წამის განმავლობაში გაყოფის რეჟიმში 225 °C შესასვლელი ტემპერატურით. GC ღუმელის ტემპერატურა დაპროგრამებული იყო 35 °C-დან (3 წუთის შეკავება)-დან 300 °C-მდე (300 °C წუთში) გამყოფში, დაემატა 4 psi აზოტი და გაიყო 1:1 Gerstel 3D/2 დაბალი მკვდარი მოცულობის ჯვარში (Gerstel, Mülheim, DE) ალი იონიზაციის დეტექტორსა და EAD-ს შორის. GC გამონადენის კაპილარი EAD-სთვის გაიარა Gerstel ODP-2 გადაცემის ხაზში, სადაც მას 8 °C, პლუს 5 სმ ტემპერატურაზე აფიქსირებს. შერეული იყო ნახშირბადით გაფილტრულ, დატენიანებულ ჰაერში (1,5 ლ წთ−1). ანტენა მოთავსებული იყო მილის გამოსასვლელიდან 0,5 სმ დაშორებით. თითოეული ცალკეული კოღო შეადგენდა თითო რეპლიკას, ხოლო მასპინძელი მაძიებელი კოღოებისთვის, სულ მცირე სამი გამეორება შესრულდა თითოეული ასაკის შარდის ნიმუშებზე.
ბიოაქტიური ნაერთების იდენტიფიცირება მსხვილფეხა რქოსანი ახალი და დაძველებული მსხვილფეხა რქოსანი შარდის კოლექციებში კომბინირებული GC და მასის სპექტრომეტრის გამოყენებით (GC-MS; 6890 GC და 5975 MS; Agilent Technologies) ანტენალური პასუხების გამოსაწვევად GC-EAD ანალიზში, რომელიც აღჭურვილი იყო ელექტრონის ზემოქმედების eMSV-ით აღჭურვილი 70-co-ზე. კაპილარული სვეტი (60 მ × 0,25 მმ შიდა დიამეტრი, 0,25 მკმ ფირის სისქე) ჰელიუმის გამოყენებით, როგორც მობილური ფაზა, საშუალო ხაზოვანი ნაკადის სიჩქარით 35 სმ s-1. 2 μl ნიმუში შეყვანილი იქნა იგივე ინჟექტორის პარამეტრების და ღუმელის ტემპერატურის გამოყენებით, როგორც GC-EAD ბიბლიოთეკის ანალიზისთვის. NIST14 ბიბლიოთეკა (Agilent). იდენტიფიცირებული ნაერთები დადასტურდა ავთენტური სტანდარტების ინექციით (დამატებითი ფაილი 1: ცხრილი S2). რაოდენობრივად, ჰეპტილის აცეტატი (10 ნგ, 99.8% ქიმიური სისუფთავე, Aldrich) შეყვანილი იყო როგორც გარე სტანდარტი.
სინთეზური სუნის ნარევის ეფექტურობის შეფასება, რომელიც შედგება ახალ და დაძველებულ შარდში იდენტიფიცირებული ბიოაქტიური ნაერთებისგან, რათა მიიზიდოს მასპინძელი მაძიებელი და სისხლის მწოველი Ans.arabiensis, იგივე ოლფაქტომეტრისა და პროტოკოლის გამოყენებით, როგორც ზემოთ. სინთეზური ნარევები ასახავს ნაერთების შემადგენლობას და პროპორციებს საათი და 168 საათი დაძველებული შარდი (სურათი 5D-G; დამატებითი ფაილი 1: ცხრილი S2). ანალიზისთვის გამოიყენეთ 10 μl 1:100 განზავება სრულად სინთეზური ნარევით, საერთო გამოშვების სიჩქარით, რომელიც მერყეობს დაახლოებით 140-2400 ნგ სთ-1-დან, მასპინძლის სისხლის მიმზიდველობის შესაფასებლად. s, რომელშიც ამოღებულია მთლიანი ნარევის ცალკეული ნაერთების გამოკლებადი ნარევები. პასუხების ძიება მასპინძლისა და სისხლით კვებაზე Ans.Arab vs სინთეზური და გამოკლებული ნარევები გაანალიზებული იყო ნომინალური ლოგისტიკური რეგრესიის გამოყენებით, რასაც მოჰყვა კენტი შეფარდების წყვილი შედარება (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
იმის შესაფასებლად, შეიძლება თუ არა ძროხის შარდი იყოს მასპინძელი ჰაბიტატი მალარიის კოღოებისთვის, ახალი და დაძველებული ძროხის შარდი, შეგროვილი, როგორც ზემოთ აღწერილია, და წყალი მოთავსდა 3 ლიტრიან თაიგულებში (100 მლ) და დაყენდა მასპინძლის სატყუარას ხაფანგში.(BG-HDT ვერსია; BioGents, Regensburg, DE). ათი ხაფანგი, რომლებიც განთავსებული იყო ერთმანეთისგან 50 მ მანძილზე საძოვრებზე, 400 მეტრში სოფლის თემიდან (Silay, ეთიოპია, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) და არც ერთი პირუტყვი, მუდმივ სანაშენე ადგილებზე და სოფლებში არ იყო დატოვებული. შეჭამეს.თითოეული მკურნალობის ადგილი ტრიალებს ღამით სულ ხუთი ღამის განმავლობაში. კოღოების რიცხვი, რომლებიც დატყვევებული იყო ხაფანგებში, სხვადასხვა ასაკის შარდთან ერთად, შედარებული იყო ლოგისტიკური რეგრესიის გამოყენებით ბეტა ბინომიალური განაწილებით (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
მალარიის ენდემურ სოფელში, ქალაქ მაკის, ორომიის რეგიონის მახლობლად, ეთიოპია (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; სურათი 6A). კვლევა ჩატარდა აგვისტოს შუა რიცხვებში და სექტემბრის შუა რიცხვებში, სანამ ყოველწლიური დახურული სეზონი 08″ ხანგრძლივი წვიმა. გამოკვლევისთვის შეირჩა სოფლის გარეუბანში მდებარე (ნახ. 6A). სახლების ასარჩევად გამოყენებული კრიტერიუმები იყო: სახლში ცხოველების დაშვება, შიდა სამზარეულოს (შეშის ან ნახშირის დახატვა) დაუშვებელია (მინიმუმ საცდელ პერიოდში) და სახლები, სადაც მაქსიმუმ ორი მოსახლეა, ძილი არაინსექტიციდებში.დამუშავებული კოღოს ბადის ქვეშ. ეთიკური დამტკიცება გაცემულია ინსტიტუციური კვლევის ეთიკის მიმოხილვის საბჭომ (IRB/022/2016) საბუნებისმეტყველო მეცნიერებათა ფაკულტეტის (CNS-IRB), ადის აბაბას უნივერსიტეტი, ჰელსინკის მსოფლიო სამედიცინო ასოციაციის დეკლარაციის მიერ დადგენილი გაიდლაინების შესაბამისად. ოჯახის თითოეული უფროსის თანხმობა მიიღეს მთელი რაიონის ადმინისტრაციის მიერ. ('kebele') დონე. ექსპერიმენტული დიზაინი მოჰყვა 2 × 2 ლათინურ კვადრატულ დიზაინს, რომელშიც სინთეტიკური ნარევები და კონტროლი მინიჭებული იყო დაწყვილებულ სახლებს პირველ ღამეს და ცვლიდნენ სახლებს შორის მომდევნო ექსპერიმენტულ ღამეს. ეს პროცესი ათჯერ განმეორდა. გარდა ამისა, შერჩეულ სახლებში კოღოს აქტივობის შესაფასებლად, CDC ხაფანგები დაყენებული იყო დღის დასასრულის დაწყების დროს ხუთივე ხაფანგზე. .
ექვსი ბიოაქტიური ნაერთის შემცველი სინთეზური ნარევი იხსნება ჰეპტანში (97.0% გამხსნელი GC კლასის, Sigma Aldrich) და გამოუშვეს 140 ნგ სთ-1 ბამბის დისპენსერის გამოყენებით [20]. ფითილის დისპენსერი საშუალებას აძლევდა ყველა ნაერთს გამოეთავისუფლებინათ მუდმივი პროპორციებით. დაავადებათა კონტროლისა და პრევენციის (CDC) მსუბუქი ხაფანგი (John W. Hock Company, Gainesville, FL, აშშ; სურათი 6A). ხაფანგები ჩამოკიდებული იყო მიწიდან 0.8 – 1 მ სიმაღლეზე, საწოლის ძირთან და მოხალისეს ეძინა დაუმუშავებელი მწერების ბადის ქვეშ და მუშაობდა 18:00-დან 18:00 საათამდე. ed, საკვები, ნახევრად ორსული და ორსული [21] შემდგომში ჩაუტარდა სკრინინგი პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის (PCR) ანალიზის გამოყენებით სახეობების იდენტიფიცირება მორფოლოგიურად, როგორც A. gambiae sl. კომპლექსის წევრები [23]. საველე კვლევაში, დაწყვილებული სახლების ხაფანგის ხაფანგი გაანალიზებული იყო დაწყვილებული სახლების ხაფანგში, სადაც გაანალიზებული იყო მოზიდვისა და დამუშავების დამოკიდებული მოდელის გამოყენებით. იყო ფიქსირებული ეფექტი (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.).აქ ჩვენ ვახსენებთ χ2 და p-მნიშვნელობებს ალბათობის თანაფარდობის ტესტიდან.
შეაფასეთ არის თუ არა ის უსაფრთხო.arabiensis-მა შეძლო მიეღო შარდი, მისი მთავარი აზოტის წყარო, შარდოვანა, პირდაპირი კვებით, მიღებიდან 48 საათის განმავლობაში (dpe) მასპინძლის მოძიებიდან და სისხლით კვებაზე მყოფი ქალის კვების კვლევებიდან (ნახ. 1A). ორივე მასპინძლის მაძიებელი და სისხლის მწოველი მდედრები შთანთქავენ მნიშვნელოვნად მეტ წყალს, ვიდრე სხვა დიეტა (F1,20, ვიდრე ნებისმიერი სხვა დიეტა, 20-ზე მეტი სუკრო). < 0.0001 და F(5,299) = 56.00, p <0.0001, შესაბამისად; სურ. 1B,C). გარდა ამისა, მასპინძლის მაძიებელი ქალები ჭამდნენ ნაკლებ შარდს 72 საათზე, შარდთან შედარებით 168 საათზე (ნახ. 1B). როდესაც სთავაზობდნენ მასპინძელი 2-ის შემცველ დიეტას, დიდი რაოდენობით. 69 მმ ყველა სხვა კონცენტრაციასთან და წყალთან შედარებით, ხოლო არ განსხვავდება 10% საქაროზასგან (F(10,813) = 15.72, p <0.0001; სურათი 1D). ეს განსხვავებით სისხლით ნაკვები ქალების რეაქციას, რომლებიც ჩვეულებრივ შთანთქავდნენ მნიშვნელოვნად მეტ შარდოვანას, ვიდრე 50F (50% 5-ზე ნაკლები წყალს) 78.35, p <0.0001; სურათი 1).1E). გარდა ამისა, ორ ფიზიოლოგიურ მდგომარეობას შორის შედარებისას, ფლებოტომიზებულმა მდედრებმა შთანთქა უფრო მეტი შარდოვანა, ვიდრე მასპინძლის მაძიებელმა მდედრებმა ყველაზე დაბალ კონცენტრაციებში, და ეს მდედრები შთანთქავდნენ შარდოვანას ანალოგიურ რაოდენობას უფრო მაღალ კონცენტრაციებში (F2,1,085).სურ. 1F, G). მიუხედავად იმისა, რომ შარდოვანას შემცველი დიეტიდან მიღებას ჰქონდა ოპტიმალური მნიშვნელობები (ნახ. 1D, E), ორივე ფიზიოლოგიურ მდგომარეობაში მყოფმა მდედრებმა შეძლეს შარდოვანას შთანთქმის ოდენობის მოდულირება ლოგ-წრფივი სახით შარდოვანას შემცველობის მთელ დიაპაზონში (ნახ. 1F,G).ანალოგიურად, კოღოები, როგორც ჩანს, აკონტროლებენ აზოტის ათვისებას შთანთქმის შარდის რაოდენობის რეგულირებით, რადგან შარდში აზოტის რაოდენობა აისახება შეწოვილ რაოდენობაზე (სურათი 1B, C და B ჩასვლები).
შარდისა და შარდოვანას ზემოქმედების შესაფასებლად მასპინძლის მაძიებელი და სისხლის მწოველი კოღოების გადარჩენაზე, მდედრებს იკვებებოდნენ ოთხივე ასაკის შარდით (ახალი, 24 სთ, 72 სთ და 168 სთ დეპონირების შემდეგ) და შარდოვანას კონცენტრაციების დიაპაზონში, ასევე გამოხდილ წყალს და 10% საქაროზას აჩვენა ანალიზზე მნიშვნელოვანი ეფექტი. მთელი გადარჩენა მასპინძლის მაძიებელ ქალებში (შარდი: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; შარდოვანა: χ2 = 122,8, df = 5, p <0,0001; სურ. 2B, C) და სისხლით ნაკვებ მდედრებში (შარდი: 9.00, დ. : χ2 = 137.9, df = 5, p <0.0001; სურათი 2D, E). ყველა ექსპერიმენტში, ქალებს, რომლებიც იკვებებოდნენ დიეტით შარდით, შარდოვანა და წყალი ჰქონდათ მნიშვნელოვნად დაბალი გადარჩენის მაჩვენებელი ქალებთან შედარებით, რომლებიც იკვებებოდნენ საქაროზას დიეტაზე (სურათი 2B-E). შემორჩენილი შარდი (p = 0.016), რომელსაც აქვს გადარჩენის ყველაზე დაბალი ალბათობა (ნახ. 2B). გარდა ამისა, მასპინძელი ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ 135 მმ შარდოვანათი, უფრო მეტხანს გადარჩნენ, ვიდრე წყლის კონტროლი (p <0.04) (ნახ.2C). წყალთან შედარებით, ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ სუფთა შარდით და 24-საათიანი შარდით, უფრო მეტხანს ცოცხლობდნენ (p = 0.001 და p = 0.012, შესაბამისად; სურათი 2D), ხოლო ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ 72-საათიანი შარდით, უფრო მეტხანს იკვებებოდნენ, ვიდრე ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ ქალის მოკლე სუფთა შარდით და 24-საათიანი (p <0,30, შესაბამისად ასაკი p. სურათი 2D). როდესაც იკვებება 135 მმ შარდოვანა, სისხლით ნაკვები მდედრები უფრო მეტხანს ცოცხლობენ, ვიდრე შარდოვანას და წყლის ყველა სხვა კონცენტრაცია (p <0.013; სურათი 2E).
მასპინძლისა და სისხლის მწოველი მდედრი Anopheles arabinis-ის გადარჩენა, რომელიც იკვებება ძროხის შარდით და შარდოვანით. ბიოანალიზში (A), მდედრი კოღოებს მიეწოდებათ დიეტა, რომელიც შედგებოდა ახალი და დაბერებული ძროხის შარდისგან, შარდოვანას სხვადასხვა კონცენტრაციისგან, საქაროზას (10%) და გამოხდილ წყალში (H2O). 12 საათი, სანამ ყველა ქალი იკვებება შარდით (B, D) და შარდოვანა (C, E) და კონტროლი, საქაროზა და წყალი, მოკვდება
ფრენის წისქვილის ტესტში განსაზღვრული მთლიანი მანძილი და რაუნდების რაოდენობა 24 საათის განმავლობაში განსხვავდებოდა მასპინძლის მაძიებელ და სისხლისმწოველ კოღოებს შორის, რომლებიც აჩვენებდნენ მთლიან ფრენის ნაკლებ აქტივობას (ნახ. 3). მასპინძლის მაძიებელი კოღოები, რომლებიც უზრუნველყოფდნენ ახალ და დაბერებულ შარდს ან საქაროზას და წყალს, აჩვენებდნენ ფრენის მკაფიო ნიმუშებს (ნახ. 168-საათიანი ასაკის კოღოები, რომლებიც იკვებებოდნენ შარდით, ავლენდნენ ფრენის განსხვავებულ სქემებს და ძირითადად დღის განმავლობაში იყვნენ. მდედრობითი კოღოები, რომლებიც უზრუნველყოფდნენ საქაროზას ან 72-საათიან შარდს, აჩვენებდნენ აქტივობას მთელი 24 საათის განმავლობაში, ხოლო ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ წყლით, უფრო აქტიურები იყვნენ შუა პერიოდში. 72-საათიანი შარდი განიცდიდა აქტივობის მუდმივ დაქვეითებას 24 საათის განმავლობაში (სურათი 3).
ძროხის შარდითა და შარდოვანით იკვებება მონადირის მაძიებელი სისხლის მწოველი ქალის Anopheles arabinis-ის ფრენის შესრულება. ფრენის წისქვილზე ტესტის დროს მდედრი კოღოები იკვებებოდნენ ახალი და დაბერებული ძროხის შარდით, შარდოვანას სხვადასხვა კონცენტრაციით, საქაროზა (10%) და გამოხდილი წყალი (H2O). მარჯვნივ) მდედრობითი სქესის, თითოეული დიეტისთვის 24-საათიანი პერიოდის განმავლობაში დაფიქსირდა მთლიანი მანძილი და საათში ფრენების რაოდენობა (მუქი: ნაცრისფერი; ღია: თეთრი). საშუალო მანძილი და შეტევების საშუალო რაოდენობა ნაჩვენებია ცირკადული აქტივობის გრაფიკის მარჯვნივ. შეცდომის ზოლები წარმოადგენს საშუალო სტანდარტულ შეცდომას. სტატისტიკური ანალიზი იხილეთ ტექსტი
ზოგადად, მასპინძლის მაძიებელი ქალების საერთო ფრენის აქტივობა მიჰყვებოდა ფრენის მანძილის მსგავს შაბლონს 24 საათის განმავლობაში. ფრენის საშუალო მანძილზე მნიშვნელოვნად იმოქმედა მიღებულმა დიეტამ (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001), ხოლო მასპინძლის მაძიებელი ქალები მიიღეს 72 საათიანი დიეტის დროს და სხვა დიეტის დროს (01-ზე მეტი დისტანცია). -კვებადი კოღოები ახალზე მეტხანს დაფრინავდნენ, ვიდრე ახალი (p = 0,022) და 24 საათის ასაკის შარდი (p = 0,022) იკვებება კოღოები. შარდის დიეტაში აღწერილი ფრენის აქტივობის ნიმუშისგან განსხვავებით, შარდოვანას კვება მასპინძლის მაძიებელმა მდედრებმა აჩვენეს მუდმივი ფრენის აქტივობა 24-საათიანი პერიოდის განმავლობაში. მასპინძელი მდედრობითი სქესის ქალბატონები, რომლებიც იკვებებოდნენ შარდოვანა, მნიშვნელოვნად ზრდიდნენ ფრენის საშუალო მანძილს, აბსორბირებული კონცენტრაციის მიხედვით (F(5, 138) = 1310.91, p <0.0001). მასპინძელი ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ შარდოვანას ნებისმიერი კონცენტრაციით, უფრო მეტხანს დაფრინავდნენ, ვიდრე ქალები იკვებებოდნენ წყლით ან საქაროზათ (p <0.03).
სისხლის მწოველი კოღოების საერთო ფრენის აქტივობა იყო სტაბილური და შენარჩუნებული 24 საათის განმავლობაში ყველა დიეტაში, შარდის აქტივობის გაზრდილი ბნელი პერიოდის მეორე ნახევარში მდედრებისთვის, რომლებიც იკვებებოდნენ წყლით, ისევე როგორც მდედრებში, რომლებიც იკვებებოდნენ ახალი და 24 საათის ასაკში (სურათი 3). მაშინ, როდესაც შარდის დიეტა მნიშვნელოვნად იმოქმედა ფრენის საშუალო მანძილზე . დიეტა არ იყო (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24). სხვა შარდთან ერთად და საკონტროლო დიეტა (ახალი, p = 0.0091; 72 საათი, p = 0.0022; 168 საათი, p = 0.001; საქაროზა, p = 0.0017, p.
შარდისა და შარდოვანას კვების ეფექტი რეპროდუქციულ პარამეტრებზე შეფასებული იყო კვერცხუჯრედის ბიოანალიზში (სურათი 4A) და გამოკვლეული იყო თითოეული მდედრის მიერ დადებული კვერცხების რაოდენობის, კვერცხის ზომისა და ახლად გამოჩეკილი პირველი ვარსკვლავის ლარვის მიხედვით. დადებული კვერცხების რაოდენობა. შარდით ნაკვები არაბები (2,3 =0, მერყეობდა დიეტის მიხედვით). 8; სურ. 4B). მდედრები, რომლებიც იკვებებოდნენ 24-საათიანი შარდით, სისხლის კვება დებდნენ მნიშვნელოვნად მეტ კვერცხს, ვიდრე ქალები, რომლებიც იკვებებოდნენ შარდის სხვა დიეტებით და მსგავსი იყო საქაროზას მიღებულმა ქალებმა (ნახ. 4B). ანალოგიურად, შარდით ნაკვები მდედრების მიერ დადებული კვერცხების ზომა იცვლებოდა დიეტის მიხედვით (F(5, 2-10,00,100), რინითა და საქაროზით ნაკვები მდედრობითი სქესის დედები მნიშვნელოვნად უფრო დიდ კვერცხებს დებენ, ვიდრე წყლით კვებავენ მდედრებს, მაშინ როცა 168 სთ შარდით იკვებება მდედრების კვერცხები მნიშვნელოვნად უფრო მცირე იყო (ნახ. 4C). გარდა ამისა, შარდის დიეტა მნიშვნელოვნად იმოქმედა ლარვის ზომაზე (F(5, 187) = 7.80, 200-ზე მეტი, p <10-ით უფრო დიდი, p <10). 4 და 72 საათის ასაკის შარდით ნაკვები მდედრები, ვიდრე კვერცხების ლარვისგან დადებული კვერცხებიდან. წყლით და 168 საათის შარდით ნაკვები მდედრები (სურათი 4D).
ძროხის შარდითა და შარდოვანით იკვებება მდედრი Anopheles arabinis-ის რეპროდუქციული ფუნქციონირება. სისხლით ნაკვები მდედრი კოღოები იკვებებოდნენ დიეტით, რომელიც შედგებოდა ახალი და დაძველებული ძროხის შარდით, შარდოვანას სხვადასხვა კონცენტრაციით, საქაროზა (10%) და გამოხდილი წყალი (H2O) 48 საათის განმავლობაში, სანამ კვერცხს ათავსებდნენ (კვერცხუჯრედებში 8 სთ-ში, ქვეკვერცხების ზომით A, ქვეკვერცხების რაოდენობა) მიიღეს. (C, F) და ლარვის ზომაზე (D, G) მნიშვნელოვნად იმოქმედა მოწოდებულმა დიეტამ (ძროხის შარდი: BD; შარდოვანა: EG). თითოეული პარამეტრის საშუალო მნიშვნელობა მნიშვნელოვნად განსხვავდებოდა ერთმანეთისგან (ცალმხრივი ANOVA Tukey's post hoc ანალიზის გამოყენებით; p <0.05). შეცდომის ზოლები წარმოადგენს mean-ის სტანდარტულ შეცდომას.
როგორც შარდის მთავარი აზოტოვანი კომპონენტი, შარდოვანა, როდესაც მიეწოდება დიეტის სახით სისხლით ნაკვებ მდედრებს, მნიშვნელოვნად იმოქმედა რეპროდუქციულ პარამეტრებზე ყველა კვლევაში. კვერცხების რაოდენობა, რომლებიც დედებმა დებდნენ შარდოვანას, სისხლში ჭამის შემდეგ, შარდოვანას კონცენტრაციის მიხედვით (F(11, 360) = 4.69; 31 μლ კონცენტრაცია შორის 4.69; p < 0.0 მკვ. mM დებს უფრო მეტ კვერცხს (სურათი 4E). ქალები, რომლებიც იკვებებიან შარდოვანას 134 μM ან მეტი კონცენტრაციით, დებენ უფრო დიდ კვერცხებს, ვიდრე მდედრები, რომლებიც იკვებებიან წყალზე (F(10, 4245) = 36.7; p <0.0001; სურათი 4F) და ლარვის ზომა (3F0) მსგავსი კონცენტრაციით (3F0). 9; p <0.0001) იყო უფრო ცვალებადი (ნახ. 4G).
საერთო მიზიდულობა მსხვილფეხა რქოსანი მსხვილფეხა რქოსანი შარდის არასტაბილური ექსტრაქტების მიმართ. შუშის მილის ოლფაქტომეტრში შეფასებული arabiensis (ნახ. 5A) მნიშვნელოვნად იმოქმედა შარდის ასაკზე (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; ნახ. ყველა სხვა მკურნალობა (72 საათი: p = 0,0060, 168 საათი: p = 0,012, პენტანი: p = 0,00070), გარდა სუფთა შარდის სუნისა (p = 0,13; სურათი 5B). მიუხედავად იმისა, რომ სისხლის მწოვთა საერთო მიზიდულობა იყო 4, x2, მკვეთრად განსხვავებული იყო = 7 8 კოღოები = 8 o 8. 0.067; სურ. 5C), აღმოჩნდა, რომ ეს მდედრობითი სქესის წარმომადგენლები მნიშვნელოვნად უფრო მიმზიდველნი იყვნენ 72-საათიანი ასაკის შარდთან შედარებით საკონტროლოებთან შედარებით (p = 0.0066; სურათი 5C).
ქცევითი რეაქციები ძროხის შარდის ბუნებრივ და სინთეზურ სუნს მასპინძლისა და სისხლით კვებაზე Anopheles arabianus-ის ძიებაში. შუშის მილის ოლფაქტომეტრის სქემა (A). ახალი და დაძველებული ძროხის შარდის მოზიდვა მასპინძელზე (B) და სისხლის შთანთქმის (C) კოღოების (უფროსი) რეაქციის ექსტრაქტი. ნაჩვენებია 24-საათიანი (E), 72-საათიანი (F) და 168-საათიანი (G) ასაკის ძროხის შარდი. ელექტრონული ანტენის გამოვლენის (EAD) კვალი აჩვენებს ძაბვის ცვლილებებს ბიოაქტიური ნაერთების საპასუხოდ გაზის ქრომატოგრაფიდან გამოწურული და აღმოჩენილი ფლეიმის ხელახალი IDs plitu detector. ნაჩვენებია ბიოლოგიურად აქტიური ნაერთების თვისებები და გამოყოფის სიჩქარე (მკგ h-1). ერთი ვარსკვლავი (*) მიუთითებს თანმიმდევრულ დაბალი ამპლიტუდის პასუხზე. ორმაგი ვარსკვლავი (**) მიუთითებს განუმეორებელ პასუხებზე. იპოვნეთ მასპინძელი (H) და სისხლის მწოველი (I). ed სხვადასხვა ასოების სახელები მნიშვნელოვნად განსხვავდებოდა ერთმანეთისგან (ცალმხრივი ANOVA Tukey's post hoc ანალიზის გამოყენებით;p <0.05). შეცდომის ზოლები წარმოადგენს მასშტაბის სტანდარტულ შეცდომას
მდედრობითი სქესის Ann.arabiensis, სისხლის მიღებიდან 72 სთ და 120 სთ-ის შემდეგ, ქვირითობის დროს, არ აჩვენა უპირატესობა სათავეში არასტაბილურ ექსტრაქტებს ახალი და დაძველებული ძროხის შარდიდან პენტანთან შედარებით (χ2 = 3.07, p > 0.05; დამატებითი ფაილი 1: ნახ. S1).
მდედრობითი სქესის Ann.arabiensis, GC-EAD და GC-MS ანალიზებმა გამოავლინა რვა, ექვსი, სამი და სამი ბიოაქტიური ნაერთი (სურათი 5D-G). მიუხედავად იმისა, რომ დაფიქსირდა განსხვავება ნაერთების რაოდენობაში, რომლებიც იწვევდნენ ელექტროფიზიოლოგიურ პასუხებს, ამ ნაერთების უმეტესობა იყო წარმოდგენილი თითოეულ თავში არასტაბილური ექსტრაქტი. ანტენები ზღურბლზე ზემოთ იყო ჩართული შემდგომ ანალიზებში.
ბიოაქტიური ნაერთების საერთო არასტაბილური გამოყოფის სიჩქარე სათავეში გაიზარდა 29 მკგ სთ-1-დან ახალ შარდში 242 მკგ სთ-1-მდე 168 საათის ასაკის შარდში, ძირითადად პ-კრეზოლისა და მ-ფორმალდეჰიდის ფენოლის და ფენოლის ზრდის გამო. ასაკი, რომელიც დაკავშირებულია ქრომატოგრამაში სიგნალის ინტენსივობის (სიმრავლის) დაფიქსირებულ შემცირებასთან (ნახ. 5D)-G მარცხენა პანელზე) და ფიზიოლოგიურ პასუხებთან ამ ნაერთებზე (ნახ. 5D-G მარჯვენა პანელი).
მთლიანობაში, სინთეტიკურ ნარევს გააჩნდა ბიოაქტიური ნაერთების მსგავსი ბუნებრივი თანაფარდობა, რომლებიც იდენტიფიცირებულია ახალი და დაძველებული შარდის არასტაბილურ ექსტრაქტებში (ნახ. 5D–G) და არ გამოირჩეოდა მნიშვნელოვანი მიმზიდველობა მასპინძლის ძიებაში (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083, χ 2, 2-9, 1, 2, 1, 1, 1, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 1, 2, 2, 2, 2, 2, 1, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 1, 2, 2, 1, 2, 1, 2, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 10, 10, 10, 10, 10, 2-4, ნახ. f = 4, p = 0.30; სურ. 5I). თუმცა, პოსტ-ჰოკ წყვილ-წყვილმა შედარებამ მკურნალობას შორის აჩვენა, რომ მასპინძელი მაძიებელი კოღოები მნიშვნელოვნად მიმზიდველი იყო 24 საათის ასაკის შარდის სინთეტიკური ნარევისთვის პენტანის კონტროლთან შედარებით (p = 0.0086; სურათი 5H).
ცალკეული კომპონენტების როლის შესაფასებლად 24 საათის ასაკის შარდის სინთეტიკურ ნარევებში, ექვსი სუბტრაქციული ნარევები შეფასდა სრული ნარევების წინააღმდეგ Y- მილის ანალიზში, რომელშიც ცალკეული ნაერთები ამოღებულ იქნა. მასპინძელი მაძიებელი კოღოებისთვის, ცალკეული ნაერთების გამოკლებას მნიშვნელოვანი გავლენა ჰქონდა ქცევით პასუხებზე (χ2 = 19.6, დამატებული ფაილი = 0.6, 2 = 19.6; სურათი S2A), ყველა გამოკლებადი ნარევები უფრო მიმზიდველი იყო, ვიდრე პატარა, ვიდრე მთლიანად შერეული. ამის საპირისპიროდ, ცალკეული ნაერთების ამოღება სრულად სინთეზური ნარევიდან არ იმოქმედა სისხლის მწოვ კოღოების ქცევაზე (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077; გარდა 20-ზე დაბალ დონეზე შედარებაზე (p. ფაილი 1: სურათი S2B).
მალარიის ენდემურ სოფელში ეთიოპიაში, ძროხის 24-საათიანი შარდის სინთეზური ნარევის ეფექტურობა კოღოების მიზიდვაში საველე პირობებში შეფასდა ათი ღამის განმავლობაში (ნახ. 6A). სულ 4861 კოღო იქნა დაჭერილი და იდენტიფიცირებული, რომელთაგან 45.7% იყო Anthropus. 35.4% იყო Culex spp. (დამატებითი ფაილი 1: ცხრილი S1). Anopheles arabinis არის An.Gambian სახეობების კომპლექსის ერთადერთი წევრი, რომელიც გამოვლენილია PCR ანალიზით. საშუალოდ, 320 კოღო იჭერდა ღამეში, ამ დროის განმავლობაში ხაფანგები სინთეზური ნარევის სატყუარათ იჭერდნენ ხაფანგებს სინთეზური ნარევის სატყუარასთან ერთად 3χ10 ხაფანგზე მეტი (3χ10, ვიდრე კოღოების გარეშე). p < 0.0001) .სატყუარა ხაფანგები დაყენებული იყო ხუთი საკონტროლო ღამედან თითოეულზე ცდის დასაწყისში, შუა და ბოლოს. კოღოების მსგავსი რაოდენობა დაიჭირეს ხაფანგების თითოეულ წყვილში, რაც მიუთითებს სახლებს შორის მიკერძოების არარსებობაზე (χ2(0, 1665) = 9 × p 10-0 შემცირებით. სინთეზური ნარევის შემცველ ხაფანგებში დაჭერილი კოღოების რაოდენობა მნიშვნელოვნად გაიზარდა: მასპინძლის მოძიება (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), ბოლოდროინდელი სისხლით კვება (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) და ორსულობა (χ2 (χ20)დამატებითი ფაილი 1: ცხრილი S1). ეს ასევე აისახება დატყვევებული კოღოების საერთო რაოდენობაზე: მასპინძელი ეძებს > სისხლისმწოვ > ორსული > ნახევრად ორსული > მამაკაცი.
ძროხის 24-საათიანი სინთეტური შარდის სუნის ნარევის ეფექტურობის საველე შეფასება. საველე ცდები ჩატარდა სამხრეთ-ცენტრალურ ეთიოპიაში (რუკა), ქალაქ მაკის მახლობლად (ჩასმა), დაწყვილებულ სახლებში დაავადებათა კონტროლის ცენტრის (CDC) სინათლის ხაფანგის (მარჯვნივ) გამოყენებით, ლათინური კვადრატული დიზაინით (საჰაერო ფოტოსურათი და CDA). არაბესკები (B), მაგრამ არა Anopheles farroes (C), სხვაგვარად, ფიზიოლოგიურ მდგომარეობაზე დამოკიდებული ეფექტი. გარდა ამისა, ამ ხაფანგებმა დაიჭირეს მასპინძელი Culex კოღოების მნიშვნელოვნად გაზრდილი რაოდენობა. წარმოადგენს საშუალო შერჩევის ინდექსს საკონტროლო ხაფანგების წყვილებში (ღია; N = 5).).ვარსკვლავები მიუთითებს სტატისტიკური მნიშვნელოვნების დონეებს (*p = 0.01 და ***p <0.0001)
სამი სახეობა განსხვავებულად იქნა დაჭერილი ხაფანგებში, რომლებიც შეიცავს სინთეზურ ნარევებს. ვეძებთ მასპინძელს (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001), სისხლით კვება (χ2(1, 517) = 16.7, p <0.0001) და ორსულობა (χ2(1, 1, 1, 4) = 61. sis იყო ჩარჩენილი ხაფანგში, რომელიც ათავისუფლებს სინთეზურ ნარევს (ნახ. 6B), ხოლო An-ის რაოდენობა არ განსხვავდებოდა. Pharoensis სხვადასხვა ფიზიოლოგიურ მდგომარეობაში იყო ნაპოვნი (ნახ. 6C). Culex-ისთვის მხოლოდ მნიშვნელოვანი ზრდა დაფიქსირდა მასპინძლების მძებნელ კოღოების რაოდენობაში ხაფანგებში, რომლებიც სატყუარას შეიცავს სინთეზური ნარევით (χ19,60 =1. ), საკონტროლო ხაფანგებთან შედარებით.
მასპინძელი სატყუარას ხაფანგები, რომლებიც განთავსებული იყო პოტენციური მასპინძლების გარეთ, ეთიოპიის გამრავლების ადგილებსა და სოფლებში შორის, გამოიყენეს იმის შესაფასებლად, იყენებენ თუ არა მალარიის კოღოები ძროხის შარდის სუნს მასპინძლის ჰაბიტატის ნიშნად. მალარიის მდედრობითი სქესის კოღოები იზიდავდნენ და დაიჭირეს, თუმცა მცირე რაოდენობით, შარდის ასაკისგან დამოუკიდებლად (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; დამატებითი ფაილი 1: სურათი S3 ). ამის საპირისპიროდ, წყლის კონტროლერებმა არ დააფიქსირეს მალარიის კოღოები მაღალ ტემპერატურაზე (დამატებითი ფაილი S3: 1:).
მალარიის კოღოები იძენენ და ავრცელებენ აზოტის შემცველ ნაერთებს ძროხის შარდით კომპენსატორული კვების გზით (მაგ., გუბეები), რათა გააძლიერონ სიცოცხლის ისტორიის თვისებები, სხვა მწერების მსგავსად [2, 4, 24, 25, 26]. ძროხის შარდი არის ადვილად ხელმისაწვდომ განახლებული მცენარეული რესურსი, რომელიც მჭიდროდ არის დაკავშირებული მალარიასთან. სოფლის სახლები და ქვირითის ადგილები. მდედრი კოღოები ამ რესურსს სუნით პოულობენ და შეუძლიათ შარდში აზოტოვანი ნაერთების შეწოვის რეგულირება, მათ შორის შარდოვანა, შარდის მთავარი აზოტოვანი კომპონენტი [15, 16]. მდედრი კოღოს ფიზიოლოგიური მდგომარეობიდან გამომდინარე, მდედრი კოღოების ფიზიოლოგიური მდგომარეობიდან გამომდინარე, მკვებავი ნივთიერებები აძლიერებს შარდის აქტივობას. პირველი გონადოტროპული ციკლის დროს სისხლით კვებაზე მყოფი პირების გადარჩენა და რეპროდუქციული მახასიათებლები. ამიტომ, შარდის შერევა მნიშვნელოვან კვებით როლს თამაშობს მალარიის ვექტორებისთვის, რომლებიც დახურულია, როგორც არასრულფასოვანი კვება [8], რადგან ის აძლევს მდედრ კოღოებს მნიშვნელოვანი აზოტოვანი ნაერთების შეძენის უნარს დაბალი რისკის შემცველი კვებით. ეს ყველაფერი გავლენას ახდენს ვექტორულ შესაძლებლობებზე. გარდა ამისა, ეს ქცევა შეიძლება იყოს მომავალი ვექტორული მართვის პროგრამების სამიზნე.