გმადლობთ, რომ ეწვიეთ Nature.com-ს. თქვენ იყენებთ ბრაუზერის ვერსიას შეზღუდული CSS მხარდაჭერით. საუკეთესო გამოცდილებისთვის გირჩევთ გამოიყენოთ განახლებული ბრაუზერი (ან გამორთოთ თავსებადობის რეჟიმი Internet Explorer-ში). გარდა ამისა, მუდმივი მხარდაჭერის უზრუნველსაყოფად, ჩვენ ვაჩვენებთ საიტს სტილებისა და JavaScript-ის გარეშე.
ერთდროულად სამი სლაიდის კარუსელის ჩვენება. ერთდროულად სამ სლაიდს შორის გადასაადგილებლად გამოიყენეთ „წინა“ და „შემდეგი“ ღილაკები, ან ერთდროულად სამ სლაიდს შორის გადასაადგილებლად გამოიყენეთ ბოლოში არსებული სლაიდერის ღილაკები.
ფოროვანი სილიციუმის ნაწილაკები მომზადდა სოლ-გელის მეთოდით, გარკვეული მოდიფიკაციებით, ფართოფორიანი ნაწილაკების მისაღებად. ეს ნაწილაკები წარმოიქმნა N-ფენილმალეიმიდ-მეთილვინილ იზოციანატის (PMI) და სტიროლის გამოყენებით უკუჯაჭვური გადაცემის ფრაგმენტაციის (RAFT) პოლიმერიზაციის გზით, N-ფენილმალეიმიდის ინტერკალირებული პოლიამიდების მისაღებად. სტიროლის (PMP) სტაციონარული ფაზა. ვიწრო დიამეტრის უჟანგავი ფოლადის სვეტები (100 × 1.8 მმ შიდა დიამეტრი) შეფუთული იყო სუსპენზიური შეფუთვით. PMP სვეტის ქრომატოგრაფიული მახასიათებლები შეფასდა ხუთი პეპტიდისგან (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu ამინომჟავა ენკეფალინი) და ადამიანის შრატის ალბუმინის ტრიპსული ჰიდროლიზატის (HAS) გამოყოფისთვის. ოპტიმალური ელუირების პირობებში, პეპტიდების ნარევის მქონე ფირფიტების თეორიულმა რაოდენობამ მიაღწია 280,000 ფირფიტას/კვ.მ. შემუშავებული სვეტის გამოყოფის მახასიათებლების კომერციულ Ascentis Express RP-ამიდის სვეტთან შედარებისას დაფიქსირდა, რომ PMP სვეტის გამოყოფის ეფექტურობა გამოყოფის ეფექტურობისა და გარჩევადობის თვალსაზრისით აღემატებოდა კომერციულ სვეტს.
ბიოფარმაცევტული ინდუსტრია გლობალურ ბაზარზე გადაიზარდა, რომლის საბაზრო წილის მნიშვნელოვანი ზრდა ბოლო წლებში შეინიშნება. ბიოფარმაცევტული ინდუსტრიის სწრაფი ზრდის გამო1,2,3 პეპტიდებისა და ცილების ანალიზის დიდი საჭიროება არსებობს. სამიზნე პეპტიდის გარდა, პეპტიდების სინთეზის დროს სხვადასხვა მინარევები წარმოიქმნება, ამიტომ პეპტიდის სასურველი სისუფთავის მისაღებად ქრომატოგრაფიული გაწმენდაა საჭირო. სხეულის სითხეებში, ქსოვილებსა და უჯრედებში ცილების ანალიზი და დახასიათება უკიდურესად რთული ამოცანაა ერთ ნიმუშში არსებული პოტენციურად აღმოსაჩენი სახეობების დიდი რაოდენობის გამო. მიუხედავად იმისა, რომ მას-სპექტრომეტრია პეპტიდებისა და ცილების სეკვენირების ეფექტური ინსტრუმენტია, თუ ასეთი ნიმუშები პირდაპირ მას-სპექტრომეტრში შეჰყავთ, გამოყოფა არადამაკმაყოფილებელი იქნება. ეს პრობლემა შეიძლება გადაწყდეს MS ანალიზამდე თხევადი ქრომატოგრაფიის (LC) ჩატარებით, რაც შეამცირებს მას-სპექტრომეტრში მოცემულ დროს შემავალი ანალიზების რაოდენობას4,5,6. გარდა ამისა, ანალიზებს შეუძლიათ ვიწრო რეგიონში კონცენტრირება თხევადი ფაზის გამოყოფის დროს, რითაც კონცენტრირდება ეს ანალიზები და იზრდება MS დეტექციის მგრძნობელობა. თხევადი ქრომატოგრაფია (LC) ბოლო ათწლეულის განმავლობაში მნიშვნელოვნად განვითარდა და პროტეომიკური ანალიზის ფართოდ გამოყენებულ მეთოდად იქცა7,8,9,10.
უკუფაზური თხევადი ქრომატოგრაფია (RP-LC) ფართოდ გამოიყენება პეპტიდების ნარევების გასაწმენდად და გამოსაყოფად, ოქტადეცილ-მოდიფიცირებული სილიციუმის დიოქსიდის (ODS) გამოყენებით, როგორც სტაციონარული ფაზა11,12,13. თუმცა, მათი რთული სტრუქტურისა და ამფოტერული ბუნების გამო,14,15 RP სტაციონარულ ფაზებს არ შეუძლიათ პეპტიდებისა და ცილების დამაკმაყოფილებელი გამოყოფის უზრუნველყოფა. ამიტომ, პეპტიდებისა და ცილების პოლარული და არაპოლარული ფრაგმენტებით ანალიზისთვის საჭიროა სპეციალურად შექმნილი სტაციონარული ფაზები, რათა ურთიერთქმედებდნენ და შეინარჩუნებდნენ ამ ანალიზებს16. შერეული ქრომატოგრაფია, რომელიც გვთავაზობს მულტიმოდალურ ურთიერთქმედებებს, შეიძლება იყოს RP-LC-ის ალტერნატივა პეპტიდების, ცილების და სხვა რთული ნარევების გამოსაყოფად. მომზადდა რამდენიმე შერეული ტიპის სტაციონარული ფაზა და ამ სტაციონარული ფაზებით შევსებული სვეტები გამოყენებული იქნა პეპტიდებისა და ცილების გამოსაყოფად17,18,19,20,21. პოლარული და არაპოლარული ჯგუფების არსებობის გამო, შერეული რეჟიმის სტაციონარული ფაზები (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, პოლარული ინტერკალაცია/RPLC) შესაფერისია პეპტიდებისა და ცილების გამოყოფისთვის22,23,24,25,26,27,28. , კოვალენტურად შეკავშირებული პოლარული ჯგუფებით პოლარული ინტერკალირებული სტაციონარული ფაზები ავლენენ კარგ გამოყოფის შესაძლებლობებს და უნიკალურ სელექციურობას პოლარული და არაპოლარული ანალიზებისთვის, რადგან გამოყოფა დამოკიდებულია ანალიზსა და სტაციონარულ ფაზას შორის ურთიერთქმედებაზე. მულტიმოდალური ურთიერთქმედებები29,30,31,32. ცოტა ხნის წინ, ჟანგმა და სხვებმა30 მიიღეს პოლიამინების ბეჰენილით დამთავრებული სტაციონარული ფაზები და წარმატებით გამოყვეს ნახშირწყალბადები, ანტიდეპრესანტები, ფლავონოიდები, ნუკლეოზიდები, ესტროგენები და ზოგიერთი სხვა ანალიზები. პოლარულად ჩაშენებულ სტაციონარულ მასალას აქვს როგორც პოლარული, ასევე არაპოლარული ჯგუფები, ამიტომ მისი გამოყენება შესაძლებელია პეპტიდებისა და ცილების ჰიდროფობულ და ჰიდროფილურ ნაწილებად გამოსაყოფად. პოლარული სვეტები (მაგ., C18 სვეტები ამიდის შემცველობით) ხელმისაწვდომია სავაჭრო სახელწოდებით Ascentis Express RP-ამიდის სვეტები, მაგრამ ეს სვეტები მხოლოდ ამინ 33-ის ანალიზისთვის გამოიყენება.
მიმდინარე კვლევაში მომზადდა პოლარული ჩანერგვის სტაციონარული ფაზა (N-ფენილმალეიმიდი, ჩანერგვის პოლისტიროლი) და შეფასდა პეპტიდების გამოყოფისა და ტრიპტიკური HSA-ს დაშლის თვალსაზრისით. სტაციონარული ფაზის მოსამზადებლად გამოყენებული იქნა შემდეგი სტრატეგია. ფოროვანი სილიციუმის ნაწილაკები მომზადდა ჩვენს წინა პუბლიკაციებში აღწერილი პროცედურების მიხედვით, მომზადების სქემებში 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 გარკვეული ცვლილებებით. შარდოვანას, პოლიეთილენგლიკოლის (PEG), TMOS-ის და წყალხსნარ-ძმარმჟავას თანაფარდობები დაკორექტირდა დიდი ფორების მქონე სილიციუმის ნაწილაკების მისაღებად. მეორეც, სინთეზირებული იქნა ახალი ფენილმალეიმიდ-მეთილვინილ იზოციანატის ლიგანდი და მისი წარმოებული სილიციუმის ნაწილაკები გამოყენებული იქნა პოლარული ჩანერგვის სტაციონარული ფაზების მოსამზადებლად. მიღებული სტაციონარული ფაზა შეფუთული იქნა უჟანგავი ფოლადის სვეტში (შიდა დიამეტრი 100 × 1.8 მმ) ოპტიმიზებული შეფუთვის სქემის მიხედვით. სვეტის შეფუთვას ხელს უწყობს მექანიკური ვიბრაცია სვეტში ერთგვაროვანი ფენის უზრუნველსაყოფად. შეფუთული სვეტი შეფასდა ხუთი პეპტიდისგან (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, ლეიცინ-ენკეფალინის პეპტიდი) შემდგარი პეპტიდების ნარევის და ადამიანის შრატის ალბუმინის (HSA) ტრიპსული ჰიდროლიზატების გამოყოფის თვალსაზრისით. დაფიქსირდა, რომ პეპტიდური ნარევი და HSA ტრიპსული დაიჯესტი გამოიყო კარგი გარჩევადობითა და ეფექტურობით. PMP სვეტის გამოყოფის ეფექტურობა შედარებული იყო Ascentis Express RP-ამიდის სვეტთან. დაფიქსირდა, რომ პეპტიდებსა და ცილებს აქვთ კარგი გარჩევადობა და მაღალი გამოყოფის ეფექტურობა PMP სვეტზე, ხოლო PMP სვეტის გამოყოფის ეფექტურობა უფრო მაღალია, ვიდრე Ascentis Express RP-ამიდის სვეტისა.
PEG (პოლიეთილენგლიკოლი), შარდოვანა, ძმარმჟავა, ტრიმეტოქსიორთოსილიკატი (TMOS), ტრიმეთილქლოროსილანი (TMCS), ტრიფსინი, ადამიანის შრატის ალბუმინი (HSA), ამონიუმის ქლორიდი, შარდოვანა, ჰექსამეთილმეტაკრილლოილდილაზანი (HMDS), მეტაკრილოლის ქლორიდი (MC), სტიროლი, 4-ჰიდროქსი-TEMPO, ბენზოილ პეროქსიდი (BPO), აცეტონიტრილი (ACN) HPLC-სთვის, მეთანოლი, 2-პროპანოლი და აცეტონი. Sigma-Aldrich Company (სენტ-ლუისი, მისური, აშშ).
შარდოვანას (8 გ), პოლიეთილენგლიკოლის (8 გ) და 8 მლ 0.01 ნ ძმარმჟავას ნარევი 10 წუთის განმავლობაში მოურიეს და ყინულით გაცივების ქვეშ დაუმატეს 24 მლ TMOS. რეაქციის ნარევი გაცხელდა 40°C-ზე 6 საათის განმავლობაში, შემდეგ კი 120°C-ზე 8 საათის განმავლობაში უჟანგავი ფოლადის ავტოკლავში. წყალი გადაწურეს და ნაშთი გააშრეს 70°C-ზე 12 საათის განმავლობაში. გამხმარი რბილი ბლოკები თანაბრად დაფქვა და 12 საათის განმავლობაში 550°C ტემპერატურაზე ღუმელში გამოაცხვეს. მომზადდა და დახასიათდა სამი პარტია ნაწილაკების ზომის, ფორების ზომისა და ზედაპირის ფართობის რეპროდუცირებადობის შესამოწმებლად.
პოლისტიროლის ჯაჭვების პოლარული ჯგუფი და სტაციონარული ფაზა. მომზადების პროცედურა აღწერილია ქვემოთ.
N-ფენილმალეიმიდი (200 მგ) და მეთილვინილიზოციანატი (100 მგ) გახსნეს უწყლო ტოლუოლში, შემდეგ კი რეაქციის კოლბაში დაემატა 0.1 მლ 2,2′-აზოიზობუტირონიტრილი (AIBN), რათა მიღებულ იქნას ფენილმალეიმიდისა და მეთილვინილიზოციანატის (PMCP) კოპოლიმერი. ნარევი გაცხელდა 60°C-ზე 3 საათის განმავლობაში, გაფილტრეს და გააშრეს ღუმელში 40°C-ზე 3 საათის განმავლობაში.
გამხმარი სილიციუმის ნაწილაკები (2 გ) გაიფანტა მშრალ ტოლუოლში (100 მლ), მოურიეს და ულტრაბგერითი დამუშავების შემდეგ 10 წუთის განმავლობაში დაამუშავეს 500 მლ მრგვალძირიან კოლბაში. PMCP (10 მგ) გახსნეს ტოლუოლში და წვეთ-წვეთობით დაუმატეს რეაქციის კოლბას სამატებელი ძაბრის მეშვეობით. ნარევი 8 საათის განმავლობაში ადუღეს 100°C ტემპერატურაზე, გაფილტრეს, გარეცხეს აცეტონით და გააშრეს 60°C ტემპერატურაზე 3 საათის განმავლობაში. შემდეგ, PMCP-სთან (100 გ) დაკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკები გახსნეს ტოლუოლში (200 მლ) და კატალიზატორად დაემატა 4-ჰიდროქსი-TEMPO (2 მლ) 100 μl დიბუტილტინ დილაურატის თანაობისას. ნარევი 8 საათის განმავლობაში მოურიეს 50°C ტემპერატურაზე, გაფილტრეს და გააშრეს 50°C ტემპერატურაზე 3 საათის განმავლობაში.
სტიროლი (1 მლ), ბენზოილ პეროქსიდი BPO (0.5 მლ) და სილიციუმის ნაწილაკები, რომლებიც მიმაგრებული იყო TEMPO-PMCP-ზე (1.5 გ), გაიფანტა ტოლუოლში და გაიწმინდა აზოტით. სტიროლის პოლიმერიზაცია ჩატარდა 100°C ტემპერატურაზე 12 საათის განმავლობაში. მიღებული პროდუქტი გარეცხეს მეთანოლით და გააშრეს მთელი ღამით 60°C ტემპერატურაზე. რეაქციის ზოგადი სქემა ნაჩვენებია ნახ. 1-ში.
ნიმუშები დეგაზირებული იქნა 393 K ტემპერატურაზე 1 საათის განმავლობაში, სანამ ნარჩენი წნევა არ მიღებულ იქნა 10–3 Torr-ზე ნაკლები. ფორების საერთო მოცულობის დასადგენად გამოყენებული იქნა ფარდობითი წნევის P/P0 = 0.99 დროს ადსორბირებული N2-ის რაოდენობა. სუფთა და ლიგანდთან დაკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების მორფოლოგია შესწავლილი იქნა სკანირების ელექტრონული მიკროსკოპის გამოყენებით (Hitachi High Technologies, ტოკიო, იაპონია). მშრალი ნიმუშები (სუფთა სილიციუმი და ლიგანდთან დაკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკები) მოთავსდა ალუმინის ღეროებზე ნახშირბადის ლენტის გამოყენებით. ოქრო დაიტანეს ნიმუშზე Q150T გაფრქვევის მოწყობილობის გამოყენებით, ხოლო ნიმუშზე დაიტანეს 5 ნმ სისქის Au ფენა. ეს აუმჯობესებს დაბალი ძაბვის პროცესის ეფექტურობას და უზრუნველყოფს წვრილ ცივ შესხურებას. ელემენტარული ანალიზი ჩატარდა Thermo Electron (Waltham, MA, აშშ) Flash EA1112 ელემენტარული შემადგენლობის ანალიზატორის გამოყენებით. ნაწილაკების ზომის განაწილების მისაღებად გამოყენებული იქნა Malvern-ის ნაწილაკების ზომის ანალიზატორი (Worcestershire, დიდი ბრიტანეთი) Mastersizer 2000. დაუფარავი სილიციუმის ნაწილაკები და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკები (თითოეული 5 მგ) გაიფანტა 5 მლ იზოპროპანოლში, დამუშავდა ულტრაბგერით 10 წუთის განმავლობაში, შეირყა 5 წუთის განმავლობაში და მოათავსეს Mastersizer-ის ოპტიკურ სკამზე. თერმოგრავიმეტრიული ანალიზი ტარდება წუთში 5°C სიჩქარით, 30-დან 800°C-მდე ტემპერატურის დიაპაზონში.
მინის ბოჭკოთი მოპირკეთებული ვიწრო კალიბრის უჟანგავი ფოლადის სვეტები, რომელთა ზომებია (ID 100 × 1.8 მმ), შეფუთული იქნა სუსპენზიის შევსების მეთოდით, მითითება 31-ში მოცემული პროცედურის შესაბამისად. უჟანგავი ფოლადის სვეტი (მინით მოპირკეთებული, ID 100 × 1.8 მმ) და გამოსასვლელი, რომელიც შეიცავს 1 µm ფრიტს, დაკავშირებული იყო სუსპენზიის შესაფუთ მანქანასთან (Alltech Deerfield, IL, აშშ). მოამზადეთ სტაციონარული ფაზის სუსპენზია 150 მგ სტაციონარული ფაზის 1.2 მლ მეთანოლში შეყვანით და რეზერვუარის სვეტში ჩასხმით. მეთანოლი გამოყენებული იყო როგორც სუსპენზიის გამხსნელი და საკონტროლო გამხსნელი. შეფუთეთ სვეტი 100 MP წნევის თანმიმდევრობით 10 წუთის განმავლობაში, 80 MP - 15 წუთის განმავლობაში და 60 MP - 30 წუთის განმავლობაში. შეფუთვის პროცესში გამოყენებული იყო ორი გაზქურა-ქრომატოგრაფიის სვეტის ვიბრატორი (Alltech, Deerfield, IL, აშშ) მექანიკური ვიბრაციისთვის, რათა უზრუნველყოფილიყო სვეტის ერთგვაროვანი შეფუთვა. დახურეთ სუსპენზიის შემფუთავი და ნელა შეამცირეთ წნევა, რათა თავიდან აიცილოთ ძაფის დაზიანება. სვეტი გათიშული იქნა სუსპენზიის საქშენიდან და შესასვლელთან მიმაგრებული იქნა კიდევ ერთი ფიტინგები, რომლებიც დაკავშირებული იყო LC სისტემასთან მისი მუშაობის შესამოწმებლად.
მორგებული MLC აშენდა LC ტუმბოს (10AD Shimadzu, იაპონია), 50 ნლ ინექციური მარყუჟის მქონე სინჯის ამღების (Valco (USA) C14 W.05), მემბრანული დეგაზერის (Shimadzu DGU-14A) და UV-VIS კაპილარული ფანჯრით გამოყენებით. დეტექტორის მოწყობილობა (UV-2075) და ემალირებული მიკროსვეტი. სვეტის დამატებითი გაფართოების ეფექტის მინიმიზაციისთვის გამოიყენეთ ძალიან ვიწრო და მოკლე შემაერთებელი მილები. სვეტის შევსების შემდეგ, 1/16″ აღმდგენი შეერთების გამოსასვლელში დაამონტაჟეთ კაპილარი (50 µm id 365) და აღმდგენი შეერთების კაპილარი (50 µm). მონაცემების შეგროვება და ქრომატოგრამის დამუშავება ხორციელდება Multichro 2000 პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით. 254 ნმ-ზე, საკვლევი ანალიტების ულტრაიისფერი შთანთქმის მონიტორინგი განხორციელდა 0-ზე. ქრომატოგრაფიული მონაცემები გაანალიზდა OriginPro8-ის (ნორთჰემპტონი, მასაჩუსეტსი) გამოყენებით.
ადამიანის შრატის ალბუმინი, ლიოფილიზირებული ფხვნილი, ≥ 96% (აგაროზის გელის ელექტროფორეზი) 3 მგ, შერეული ტრიპსინთან (1.5 მგ), 4.0 M შარდოვანასთან (1 მლ) და 0.2 M ამონიუმის ბიკარბონატთან (1 მლ). ხსნარი მოურიეთ 10 წუთის განმავლობაში და გააჩერეთ წყლის აბაზანაში 37°C ტემპერატურაზე 6 საათის განმავლობაში, შემდეგ ჩააქრეთ 1 მლ 0.1%-იანი TFA-თი. ხსნარი გაფილტრეთ და შეინახეთ 4°C-ზე დაბალ ტემპერატურაზე.
პეპტიდებისა და ტრიპტიკური დაიჯესტის HSA-ს ნარევის გამოყოფა PMP სვეტზე ცალკე შეფასდა. შეამოწმეთ PMP სვეტით გამოყოფილი პეპტიდებისა და HSA-ს ნარევის ტრიპტიკური ჰიდროლიზი და შეადარეთ შედეგები Ascentis Express RP-ამიდის სვეტს. თეორიული ფირფიტების რაოდენობა გამოითვლება შემდეგი განტოლების გამოყენებით:
სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების SEM გამოსახულებები ნაჩვენებია ნახაზ 2-ში. სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების (A, B) SEM გამოსახულებები აჩვენებს სფერულ ფორმას, რომელშიც ნაწილაკები წაგრძელებულია ან აქვთ არარეგულარული სიმეტრია ჩვენს წინა კვლევებთან შედარებით. ლიგანდით (C, D) შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების ზედაპირი უფრო გლუვია, ვიდრე სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების, რაც შეიძლება განპირობებული იყოს სილიციუმის ნაწილაკების ზედაპირის დაფარვით პოლისტიროლის ჯაჭვებით.
სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების (A, B) და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების (C, D) სკანირებადი ელექტრონული მიკროგრაფიები.
სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების ნაწილაკების ზომის განაწილება ნაჩვენებია ნახ. 2.3(A)-ში. მოცულობითი ნაწილაკების ზომის განაწილების მრუდებმა აჩვენა, რომ სილიციუმის ნაწილაკების ზომა გაიზარდა ქიმიური მოდიფიკაციის შემდეგ (ნახ. 3A). მიმდინარე და წინა კვლევებიდან მიღებული სილიციუმის ნაწილაკების ზომის განაწილების მონაცემები შედარებულია ცხრილში 1(A). PMP-ის მოცულობითი ნაწილაკების ზომა d(0.5) იყო 3.36 µm, ჩვენს წინა კვლევაში (პოლისტიროლთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკები)34 3.05 µm-ის ad(0.5) მნიშვნელობასთან შედარებით. რეაქციის ნარევში PEG-ის, შარდოვანას, TMOS-ის და ძმარმჟავას თანაფარდობის ცვლილების გამო, ამ პარტიის ნაწილაკების ზომის განაწილება უფრო ვიწრო იყო ჩვენს წინა კვლევასთან შედარებით. PMP ფაზის ნაწილაკების ზომა ოდნავ აღემატება პოლისტიროლთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების ფაზის ზომას, რომელიც ადრე შევისწავლეთ. ეს ნიშნავს, რომ სილიციუმის ნაწილაკების ზედაპირული ფუნქციონალიზაცია სტიროლით სილიციუმის ზედაპირზე მხოლოდ პოლისტიროლის ფენას (0.97 µm) ათავსებდა, ხოლო PMP ფაზაში ფენის სისქე 1.38 µm იყო.
სუფთა სილიციუმის ნაწილაკებისა და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების ნაწილაკების ზომის განაწილება (A) და ფორების ზომის განაწილება (B).
ამ კვლევაში გამოყენებული სილიციუმის ნაწილაკების ფორების ზომა, ფორების მოცულობა და ზედაპირის ფართობი ნაჩვენებია ცხრილში 1 (B). სუფთა სილიციუმის ნაწილაკების და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების PSD პროფილები ნაჩვენებია ნახ. 3 (B). შედეგები შედარებადი იყო ჩვენს წინა კვლევასთან34. სუფთა და ლიგანდთან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკების ფორების ზომები იყო შესაბამისად 310 Å და 241 Å, რაც მიუთითებს, რომ ქიმიური მოდიფიკაციის შემდეგ, ფორების ზომა შემცირდა 69 Å-ით, როგორც ეს ნაჩვენებია ცხრილში 1 (B), ხოლო გადახრის მრუდი ნაჩვენებია ნახ. 1 (B)-ში. მიმდინარე კვლევაში სილიციუმის ნაწილაკების სპეციფიკური ზედაპირის ფართობია 116 მ2/გ, რაც შედარებადია ჩვენს წინა კვლევასთან (124 მ2/გ). როგორც ნაჩვენებია ცხრილში 1 (B), ქიმიური მოდიფიკაციის შემდეგ სილიციუმის ნაწილაკების ზედაპირის ფართობი (მ2/გ) ასევე შემცირდა 116 მ2/გ-დან 105 მ2/გ-მდე.
სტაციონარული ფაზის ელემენტარული ანალიზის შედეგები წარმოდგენილია ცხრილში 2. მიმდინარე სტაციონარული ფაზის ნახშირბადის შემცველობა 6.35%-ია, რაც უფრო დაბალია, ვიდრე ჩვენს წინა კვლევაში (პოლისტიროლთან ასოცირებული სილიციუმის ნაწილაკები, შესაბამისად, 7.93%35 და 10.21%)42. ქვემოთ მოცემულია მიმდინარე სტაციონარული ფაზის ნახშირბადის შემცველობა, რადგან SP-ის მომზადებაში სტიროლთან ერთად გამოყენებულია ზოგიერთი პოლარული ლიგანდი, როგორიცაა ფენილმალეიმიდი მეთილვინილიზოციანატი (PCMP) და 4-ჰიდროქსი-TEMPO. მიმდინარე სტაციონარული ფაზაში აზოტის წონითი პროცენტული მაჩვენებელია 2.21%, წინა კვლევებში 0.1735 და 0.85%-თან შედარებით42. ეს ნიშნავს, რომ მიმდინარე სტაციონარული ფაზას აქვს აზოტის მაღალი წონითი პროცენტული მაჩვენებელი ფენილმალეიმიდის გამო. ანალოგიურად, პროდუქტებს (4) და (5) აქვთ ნახშირბადის შემცველობა შესაბამისად 2.7% და 2.9%, ხოლო საბოლოო პროდუქტს (6) აქვს ნახშირბადის შემცველობა 6.35%, როგორც ეს ნაჩვენებია ცხრილში 2. წონის კლების შესამოწმებლად PMP-ის სტაციონარულ ფაზაზე გამოყენებული იქნა თერმოგრავიმეტრიული ანალიზი (TGA) და TGA მრუდი ნაჩვენებია ნახაზ 4-ში. TGA მრუდი აჩვენებს წონის 8.6%-იან კლებას, რაც კარგად შეესაბამება ნახშირბადის შემცველობას (6.35%), რადგან ლიგანდები შეიცავს არა მხოლოდ C-ს, არამედ N-ს, O-ს და H-ს.
ლიგანდი ფენილმალეიმიდი-მეთილვინილ იზოციანატი შეირჩა სილიციუმის ნაწილაკების ზედაპირის მოდიფიკაციისთვის მისი პოლარული ფენილმალეიმიდისა და ვინილიზოციანატის ჯგუფების გამო. ვინილის იზოციანატის ჯგუფებს შეუძლიათ სტირენთან რეაქციაში შეყვანა ცოცხალი რადიკალური პოლიმერიზაციით. მეორე მიზეზი არის ისეთი ჯგუფის ჩასმა, რომელსაც აქვს ზომიერი ურთიერთქმედება ანალიზატთან და არ აქვს ძლიერი ელექტროსტატიკური ურთიერთქმედება ანალიზატსა და სტაციონარულ ფაზას შორის, რადგან ფენილმალეიმიდის ნაწილს არ აქვს ვირტუალური მუხტი ნორმალურ pH-ზე. სტაციონარული ფაზის პოლარობის კონტროლი შესაძლებელია სტიროლის ოპტიმალური რაოდენობით და თავისუფალი რადიკალური პოლიმერიზაციის რეაქციის დროით. რეაქციის ბოლო ეტაპი (თავისუფალი რადიკალური პოლიმერიზაცია) კრიტიკულია, რადგან ის ცვლის სტაციონარული ფაზის პოლარობას. ელემენტარული ანალიზი ჩატარდა ამ სტაციონარულ ფაზებში ნახშირბადის შემცველობის შესამოწმებლად. დაფიქსირდა, რომ სტიროლის რაოდენობისა და რეაქციის დროის გაზრდა ზრდის სტაციონარული ფაზის ნახშირბადის შემცველობას და პირიქით. სტიროლის სხვადასხვა კონცენტრაციით მომზადებულ SP-ებს აქვთ სხვადასხვა ნახშირბადის დატვირთვა. ანალოგიურად, ეს სტაციონარული ფაზები განთავსდა უჟანგავი ფოლადის სვეტებზე და შემოწმდა მათი ქრომატოგრაფიული მახასიათებლები (სელექტიურობა, გარჩევადობა, N მნიშვნელობა და ა.შ.). ამ ექსპერიმენტების საფუძველზე, PMP სტაციონარული ფაზის მოსამზადებლად შეირჩა ოპტიმიზებული შემადგენლობა, რათა უზრუნველყოფილიყო კონტროლირებადი პოლარობა და ანალიტის კარგი შეკავება.
PMP სვეტი ასევე შეფასდა პეპტიდების ხუთი ნარევის (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, ლეიცინ-ენკეფალინი) ანალიზისთვის მობილური ფაზის ტევადობის გამოყენებით. 60/40 (v/v) ACN/წყალი (0.1% TFA) 80 µl/წთ ნაკადის სიჩქარით. ოპტიმალური ელუირების პირობებში (200,000 ფირფიტა/მ²), თეორიული ფირფიტების რაოდენობა (N) სვეტზე (100 × 1.8 მმ) არის 20,000 ± 100. სამი PMP სვეტის N მნიშვნელობები ნაჩვენებია ცხრილში 3, ხოლო ქრომატოგრამები ნაჩვენებია ნახაზ 5A-ში. სწრაფი ანალიზი მაღალი ნაკადის სიჩქარით (700 µლ/წთ) PMP სვეტზე, ხუთი პეპტიდი გამოიყო ერთ წუთში, შესანიშნავი N მნიშვნელობა 13,500 ± 330 სვეტზე (100 x 1.8 მმ დიამეტრი), რაც ექვივალენტურია 135,000 ფირფიტის/მ² (სურ. 5B). ერთი და იგივე ზომის სამი სვეტი (შიდა დიამეტრი 100 x 1.8 მმ) შეივსო PMP სტაციონარული ფაზის სამი განსხვავებული პარტიით რეპროდუცირების შესამოწმებლად. ანალიტები ჩაიწერა თითოეული სვეტისთვის ერთი და იგივე სატესტო ნარევის გამოყოფით თითოეულ სვეტზე ოპტიმალური ელუირების პირობების, თეორიული ფირფიტების რაოდენობის N და შეკავების დროის გამოყენებით. PMP სვეტების რეპროდუცირების მონაცემები ნაჩვენებია ცხრილში 4. PMP სვეტის რეპროდუცირება კარგად კორელირებდა ძალიან დაბალ %RSD მნიშვნელობებთან, როგორც ეს ნაჩვენებია ცხრილში 3.
პეპტიდური ნარევების გამოყოფა PMP სვეტზე (B) და Ascentis Express RP-ამიდის სვეტზე (A), მობილური ფაზა 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP სვეტის ზომები (100 x 1.8 მმ შიდა დიამეტრი), ანალიზი. ნაერთების ელუირების თანმიმდევრობა: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) და 5 (ლეიცინის მჟავას ენკეფალინი).
ადამიანის შრატის ალბუმინის ტრიპსული ჰიდროლიზატის გამოყოფის შესაფასებლად შეფასდა PMP სვეტი (შიდა დიამეტრი 100 x 1.8 მმ) HPLC-ის მეთოდით. ​​ნახაზი 6-ზე მოცემული ქრომატოგრამა აჩვენებს, რომ ნიმუშები კარგად არის გამოყოფილი ძალიან კარგი გარჩევადობით. HSA ხსნარები გაანალიზდა 100 μl/წთ ნაკადის სიჩქარის, 70/30 აცეტონიტრილი/წყლის მობილური ფაზის და 0.1% TFA-ს გამოყენებით. HSA-ს დაშლა დაიყო 17 პიკად, როგორც ეს ნაჩვენებია ქრომატოგრამაზე (ნახ. 6), რაც შეესაბამება 17 პეპტიდს. HSA ჰიდროლიზატიდან ცალკეული პიკების გამოყოფის ეფექტურობა გამოითვალა და მნიშვნელობები ნაჩვენებია ცხრილში 5.
HSA ტრიპტიკური ჰიდროლიზატები გამოეყო PMP სვეტზე (შიდა დიამეტრი 100 x 1.8 მმ), ნაკადის სიჩქარე (100 μl/წთ), მობილური ფაზა 60/40 აცეტონიტრილი/წყალი და 0.1% TFA.
სადაც L არის სვეტის სიგრძე, η არის მობილური ფაზის სიბლანტე, ΔP არის სვეტის უკუწნევა და u არის მობილური ფაზის წრფივი სიჩქარე. PMP სვეტის გამტარიანობა იყო 2.5 × 10–14 მ2, ნაკადის სიჩქარე იყო 25 µl/წთ, გამოყენებული იყო 60/40 v/v. ACN/წყალი. PMP სვეტის გამტარიანობა (ID 100 × 1.8 მმ) მსგავსი იყო ჩვენი წინა Ref.34 კვლევისა. ზედაპირულად ფოროვანი ნაწილაკებით სავსე სვეტის გამტარიანობა არის 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 მ2 5 µm ნაწილაკებისთვის43. ამიტომ, PMP ფაზის გამტარიანობა მსგავსია 5 μm ზომის ბირთვ-გარსიანი ნაწილაკების გამტარიანობისა.
სადაც Wx არის ქლოროფორმით შევსებული სვეტის მასა, Wy არის მეთანოლით შევსებული სვეტის მასა, ხოლო ρ არის გამხსნელის სიმკვრივე. მეთანოლის (ρ = 0.7866) და ქლოროფორმის (ρ = 1.484) სიმკვრივე. სილიციუმ-C18 ნაწილაკების სვეტის (100 × 1.8 მმ ID)34 და ჩვენი ადრე შესწავლილი C18-შარდოვანას31 სვეტის სრული ფორიანობა შესაბამისად 0.63 და 0.55 იყო. ეს ნიშნავს, რომ შარდოვანას ლიგანდების არსებობა ამცირებს სტაციონარული ფაზის გამტარიანობას. მეორეს მხრივ, PMP სვეტის (შიდა დიამეტრი 100 × 1.8 მმ) სრული ფორიანობა 0.60-ია. PMP სვეტები ნაკლებად გამტარია, ვიდრე C18-თან შეკავშირებული სილიციუმის ნაწილაკებით შევსებული სვეტები, რადგან C18 ტიპის სტაციონარულ ფაზებში C18 ლიგანდები მიმაგრებულია სილიციუმის ნაწილაკებზე წრფივი ჯაჭვებით, ხოლო პოლისტიროლის ტიპის სტაციონარულ ფაზებში ნაწილაკების გარშემო შედარებით სქელი პოლიმერი წარმოიქმნება. ფენა A. ტიპურ ექსპერიმენტში, სვეტის ფორიანობა გამოითვლება შემდეგნაირად:
ნახ. 7A, B-ზე ნაჩვენებია ვან დეემტერის დიაგრამები PMP სვეტისთვის (ID 100 x 1.8 მმ) და Ascentis Express RP-Amide სვეტისთვის (ID 100 x 1.8 მმ) იმავე ელუირების პირობებში, ორივე სვეტზე 60/40 ACN/H2O და 0.1% TFA 20 µl/წთ-დან 800 µl/წთ-მდე. ოპტიმალური ნაკადის სიჩქარის (80 µl/წთ) დროს მინიმალური HETP მნიშვნელობები იყო 2.6 µm და 3.9 µm შესაბამისად PMP სვეტისთვის და Ascentis Express RP-Amide სვეტისთვის. HETP მნიშვნელობები აჩვენებს, რომ PMP სვეტის გამოყოფის ეფექტურობა (ID 100 x 1.8 მმ) გაცილებით მაღალია, ვიდრე კომერციულად ხელმისაწვდომი Ascentis Express RP-Amide სვეტის (ID 100 x 1.8 მმ). ნახ. 7(A)-ზე მოცემული ვან დეემტერის გრაფიკი აჩვენებს, რომ N-ის მნიშვნელობის შემცირება მნიშვნელოვნად არ იზრდება ნაკადის ზრდასთან ერთად ჩვენს წინა კვლევასთან შედარებით. PMP სვეტის უფრო მაღალი გამოყოფის ეფექტურობა (id 100 × 1.8 მმ) Ascentis Express RP-ამიდის სვეტთან შედარებით განპირობებულია ნაწილაკების გაუმჯობესებული ფორმითა და ზომით და მიმდინარე ნაშრომში გამოყენებული დახვეწილი სვეტის შეფუთვის პროცედურათი34.
(A) ვან დიმტერის დიაგრამა (HETP vs. მოძრავი ფაზის ხაზოვანი სიჩქარე), მიღებული PMP სვეტზე (ID 100 x 1.8 მმ) 60/40 ACN/H2O-ში 0.1% TFA-თი. (B) ვან დიმტერის დიაგრამა (HETP vs. მოძრავი ფაზის ხაზოვანი სიჩქარე), მიღებული Ascentis Express RP-Amide სვეტზე (ID 100 x 1.8 მმ) 60/40 ACN/H2O-ში 0.1% TFA-თი.
ინტერკალირებული პოლისტიროლის პოლარული სტაციონარული ფაზა მომზადდა და შეფასდა სინთეზური პეპტიდებისა და ადამიანის შრატის ალბუმინის ტრიპსული ჰიდროლიზატის (HSA) ნარევის გამოყოფისთვის მაღალი ხარისხის თხევად ქრომატოგრაფიაში. პეპტიდური ნარევებისთვის PMP სვეტების ქრომატოგრაფიული მუშაობა შესანიშნავია გამოყოფის ეფექტურობისა და გარჩევადობის თვალსაზრისით. PMP სვეტების გაუმჯობესებული გამოყოფის ეფექტურობა განპირობებულია რამდენიმე მიზეზით, როგორიცაა სილიციუმის ნაწილაკების ზომა და ფორების ზომა, სტაციონარული ფაზების კონტროლირებადი სინთეზი და სვეტის რთული შემფუთავი მასალები. მაღალი გამოყოფის ეფექტურობის გარდა, ამ სტაციონარული ფაზის კიდევ ერთი უპირატესობაა სვეტის დაბალი უკუწნევა მაღალი ნაკადის სიჩქარის დროს. PMP სვეტები მაღალი რეპროდუცირებადობით ხასიათდება და შეიძლება გამოყენებულ იქნას პეპტიდების ნარევების ანალიზისა და სხვადასხვა ცილების ტრიპსული დაშლისთვის. ჩვენ ვაპირებთ ამ სვეტის გამოყენებას ბიოაქტიური ნაერთების ბუნებრივი პროდუქტებიდან, სამკურნალო მცენარეების ექსტრაქტებიდან და სოკოებიდან გამოყოფისთვის თხევად ქრომატოგრაფიაში. მომავალში, PMP სვეტები ასევე შეფასდება ცილებისა და მონოკლონური ანტისხეულების გამოყოფისთვის.
ფილდი, ჯ.კ., ეუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., თოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. შებრუნებული ფაზის ქრომატოგრაფიის პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა, ნაწილი I: სვეტის დახასიათების პროტოკოლის შემუშავება. ფილდი, ჯ.კ., ეუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., თოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. შებრუნებული ფაზის ქრომატოგრაფიის პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა, ნაწილი I: სვეტის დახასიათების პროტოკოლის შემუშავება.ფილდი, ჯ.კ., ოუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., ტოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა უკუფაზური ქრომატოგრაფიით, ნაწილი I: სვეტის დახასიათების პროტოკოლის შემუშავება. ფილდი, ჯ.კ., ეუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., თოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. შებრუნებული ფაზის ქრომატოგრაფიის პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა, ნაწილი I: სვეტის მახასიათებლების პროტოკოლის შემუშავება. ფილდი, ჯ.კ., ეუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., თოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. შებრუნებული ფაზის ქრომატოგრაფიის პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა, ნაწილი I: სვეტის მახასიათებლების პროტოკოლის შემუშავება.ფილდი, ჯ.კ., ოუერბი, მ.რ., ლაუ, ჯ., ტოგერსენი, ჰ. და პეტერსონი, პ. პეპტიდების გამოყოფის სისტემების კვლევა უკუფაზური ქრომატოგრაფიით, ნაწილი I: სვეტის დახასიათების პროტოკოლის შემუშავება.J.色谱法。 1603，113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
გომესი, ბ. და სხვ. ინფექციური დაავადებების სამკურნალოდ გაუმჯობესებული აქტიური პეპტიდების შექმნის მეთოდები. ბიოტექნოლოგია. მიღწევები 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
ვლიეგე, პ., ლისოვსკი, ვ., მარტინესი, ჯ. და ხრესტჩატისკი, მ. სინთეტიკური თერაპიული პეპტიდები: მეცნიერება და ბაზარი. ვლიეგე, პ., ლისოვსკი, ვ., მარტინესი, ჯ. და ხრესტჩატისკი, მ. სინთეტიკური თერაპიული პეპტიდები: მეცნიერება და ბაზარი.ვლიგე პ., ლისოვსკი ვ., მარტინესი ჯ. და კრეშატისკი მ. სინთეზური თერაპიული პეპტიდები: მეცნიერება და ბაზარი.ვლიგე პ., ლისოვსკი ვ., მარტინესი ჯ. და ხრეშატსკი მ. სინთეზური თერაპიული პეპტიდები: მეცნიერება და ბაზარი. წამლის აღმოჩენა. Today 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
სიე, ფ., სმიტი, რდ. და შენი, ი. მოწინავე პროტეომიკური თხევადი ქრომატოგრაფია. სიე, ფ., სმიტი, რდ. და შენი, ი. მოწინავე პროტეომიკური თხევადი ქრომატოგრაფია.იხილეთ ფ., სმიტი რდ.დ. და შენ იუ. პროტეომიკური სითხით ქრომატოგრაფია. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. გაფართოებული ცილის შემადგენლობა 液相色谱.იხილეთ ფ., სმიტი რდ.დ. და შენ იუ. პროტეომიკური სითხით ქრომატოგრაფია.ჟ. ქრომატოგრაფია. A 1261, 78–90 (2012).
ლიუ, ვ. და სხვ. მოწინავე თხევადი ქრომატოგრაფია-მას-სპექტრომეტრია საშუალებას იძლევა გაერთიანდეს ფართომასშტაბიანი მეტაბოლომიკა და პროტეომიკა. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
ჩესნატი, ს.მ. და სოლსბერი, ჯ.ჯ. UHPLC-ის როლი ფარმაცევტულ განვითარებაში. ჩესნატი, ს.მ. და სოლსბერი, ჯ.ჯ. UHPLC-ის როლი ფარმაცევტულ განვითარებაში.ჩესნატი, ს.მ. და სოლსბერი, ჯ.ჯ. UHPLC-ის როლი ფარმაცევტულ განვითარებაში.ჩესნატი, ს.მ. და სოლსბერი, ჯ.ჯ. UHPLC-ის როლი წამლების შემუშავებაში. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
ვუ, ნ. და კლაუსენი, ა.მ. სწრაფი გამოყოფისთვის ულტრამაღალი წნევის თხევადი ქრომატოგრაფიის ფუნდამენტური და პრაქტიკული ასპექტები. ვუ, ნ. და კლაუსენი, ა.მ. სწრაფი გამოყოფისთვის ულტრამაღალი წნევის თხევადი ქრომატოგრაფიის ფუნდამენტური და პრაქტიკული ასპექტები.ვუ, ნ. და კლაუზენი, ა.მ. სწრაფი გამოყოფისთვის მაღალი წნევის თხევადი ქრომატოგრაფიის ფუნდამენტური და პრაქტიკული ასპექტები. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 ვუ, ნ. და კლაუსენი, ა.მ. სწრაფი გამოყოფისთვის ულტრამაღალი წნევის თხევადი ქრომატოგრაფიის ძირითადი და პრაქტიკული ასპექტები.ვუ, ნ. და კლაუზენი, ა.მ. სწრაფი გამოყოფისთვის მაღალი წნევის თხევადი ქრომატოგრაფიის ფუნდამენტური და პრაქტიკული ასპექტები.J. Sept. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
რენი, ს.ა. და ჩელიჩეფი, პ. ულტრაეფექტური თხევადი ქრომატოგრაფიის გამოყენება ფარმაცევტულ შემუშავებაში. რენი, ს.ა. და ჩელიჩეფი, პ. ულტრაეფექტური თხევადი ქრომატოგრაფიის გამოყენება ფარმაცევტულ შემუშავებაში.რენი, ს.ა. და ჩელიშეფი, პ. ულტრამაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის გამოყენება ფარმაცევტულ შემუშავებაში. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 რენი, ს.ა. და ჩელიჩეფი, პ.რენი, ს.ა. და ჩელიშეფი, პ. ულტრაეფექტური თხევადი ქრომატოგრაფიის გამოყენება წამლების შემუშავებაში.ჟურნ. ქრომატოგრაფია. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
გუ, ჰ. და სხვ. მონოლითური მაკროფოროვანი ჰიდროგელი, მიღებული ზეთი-წყალში ემულსიიდან მაღალი შიდა ფაზით ენტეროვირუსის 71-ის ეფექტური გაწმენდისთვის. ქიმიური პროექტი. ჟურნალი 401, 126051 (2020).
ში, ი., სიანგი, რ., ჰორვატი, ს. და უილკინსი, ჯ.ა. თხევადი ქრომატოგრაფიის როლი პროტეომიკაში. ში, ი., სიანგი, რ., ჰორვატი, ს. და უილკინსი, ჯ.ა. თხევადი ქრომატოგრაფიის როლი პროტეომიკაში.ში, ი., სიანგი, რ., ჰორვატი, ს. და უილკინსი, ჯ.ა. თხევადი ქრომატოგრაფიის როლი პროტეომიკაში. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAში, ი., სიანგი, რ., ჰორვატი, ს. და უილკინსი, ჯ.ა. თხევადი ქრომატოგრაფიის როლი პროტეომიკაში.ქრომატოგრაფია. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ფეკეტე, ს., ვუტეი, ჯ.-ლ. & გილარმე, დ. თერაპიული პეპტიდებისა და ცილების შებრუნებული ფაზის სითხით ქრომატოგრაფიული გამოყოფის ახალი ტენდენციები: თეორია და გამოყენება. & გილარმე, დ. თერაპიული პეპტიდებისა და ცილების შებრუნებული ფაზის სითხით ქრომატოგრაფიული გამოყოფის ახალი ტენდენციები: თეორია და გამოყენება. & Guillarme, D. ახალი ტენდენციები განსხვავებულ თერაპიულ თერაპიულ პეპტიდებთან და белков со помош жидкостной хроматографии со обращенной фазой: теория и приложения. & გილარმე, დ. თერაპიული პეპტიდებისა და ცილების გამოყოფის ახალი ტენდენციები უკუფაზური თხევადი ქრომატოგრაფიით: თეორია და გამოყენება. და გილარმი, დ. & გილარმე, დ.და გილარმე, დ. თერაპიული პეპტიდებისა და ცილების გამოყოფის ახალი ტენდენციები უკუფაზური თხევადი ქრომატოგრაფიით: თეორია და გამოყენება.J. Pharm. ბიომედიცინის მეცნიერება. ანუსი. 69, 9–27 (2012).
გილარი, მ., ოლივოვა, პ., დეილი, ა.ე. და გებლერი, ჯ.ს. პეპტიდების ორგანზომილებიანი გამოყოფა RP-RP-HPLC სისტემის გამოყენებით, განსხვავებული pH-ით პირველ და მეორე გამოყოფის განზომილებებში. გილარი, მ., ოლივოვა, პ., დეილი, ა.ე. და გებლერი, ჯ.ს. პეპტიდების ორგანზომილებიანი გამოყოფა RP-RP-HPLC სისტემის გამოყენებით, განსხვავებული pH-ით პირველ და მეორე გამოყოფის განზომილებებში.გილარ მ., ოლივოვა პ., დალი ა.ე. და გებლერი ჯ.კ. პეპტიდების ორგანზომილებიანი გამოყოფა RP-RP-HPLC სისტემის გამოყენებით, განსხვავებული pH-ით პირველ და მეორე გამოყოფის განზომილებებში.გილარ მ., ოლივოვა პ., დალი ა.ე. და გებლერი ჯ.კ. პეპტიდების ორგანზომილებიანი გამოყოფა RP-RP-HPLC სისტემის გამოყენებით პირველ და მეორე გამოყოფის განზომილებებში სხვადასხვა pH მნიშვნელობების გამოყენებით. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
ფელიტი, ს. და სხვ. 2 µm-ზე ნაკლები ზომის სრულად ფოროვანი და ზედაპირულად ფოროვანი C18 ნაწილაკებით შევსებული მაღალეფექტური ქრომატოგრაფიული სვეტების მასის გადაცემის და კინეტიკური მახასიათებლების კვლევა. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
პიოვესანა, ს. და სხვ. მცენარეთა ბიოაქტიური პეპტიდების იზოლაციის, იდენტიფიკაციისა და ვალიდაციის ბოლოდროინდელი ტენდენციები და ანალიტიკური გამოწვევები. ანუსი. არსება ანალური. ქიმიური. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
მიულერი, ჯ.ბ. და სხვ. სიცოცხლის სამეფოს პროტეომიკური ლანდშაფტი. ბუნება 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
დე ლუკა, კ. და სხვ. თერაპიული პეპტიდების შემდგომი დამუშავება პრეპარაციული თხევადი ქრომატოგრაფიით. Molecules (ბაზელი, შვეიცარია) 26(15), 4688 (2021).
იანგი, ი. და გენგი, X. შერეული რეჟიმის ქრომატოგრაფია და მისი გამოყენება ბიოპოლიმერებში. იანგი, ი. და გენგი, X. შერეული რეჟიმის ქრომატოგრაფია და მისი გამოყენება ბიოპოლიმერებში.იანგი, იუ. და გენგი, X. შერეული რეჟიმის ქრომატოგრაფია და მისი გამოყენება ბიოპოლიმერებში. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 იანგი, ი. და გენგი, X. შერეული რეჟიმის ქრომატოგრაფია და მისი გამოყენება ბიოპოლიმერებში.იანგი, იუ. და ჯინი, X. შერეული რეჟიმის ქრომატოგრაფია და მისი გამოყენება ბიოპოლიმერებში.ქრომატოგრაფია. A 1218(49), 8813–8825 (2011).