Javascript қазір браузеріңізде өшірілген. Бұл веб-сайттың кейбір мүмкіндіктері JavaScript өшірілген кезде жұмыс істемейді.
Арнайы мәліметтерді және қызығушылық тудыратын нақты дәрі-дәрмекпен тіркеліңіз, біз сіз берген ақпаратты біздің кең дерекқорымыздағы мақалалармен сәйкестендіреміз және сізге PDF көшірмесін дереу электрондық пошта арқылы жібереміз.
Стелла С, Витале СР, Марторана Ф, Массимино М, Павоне Д, Ланзафаме К, Бианка С, Барон С, Горгоне С, Фичера М, Манзелла Л.
Стефания Стелла, 1,2 Сильвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Мишель Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланзафаме, 3 Себастьяно Бианка, 4 Чиара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера Лицелина12 және Медицина, Катания университеті, Катания, 95123, Италия; 2 Эксперименттік онкология және гематология орталығы, AOU Policlinico «G.Rodolico – San Marco», Катания, 95123, Италия;3 Медициналық онкология, AOU Policlinico «Г.Rodolico – San Marco”, Катания, 95123, Италия;4 Медициналық генетика, ARNAS Garibaldi, Катания, 95123, Италия;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Италия;6 Биомедициналық және биотехнология ғылымдары бөлімі, Катания университеті, медициналық генетика, Катания, Италия, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Троина, 94018, Италия Байланыс: Стефания Стелла, тел +39 095 378 1946, электрондық пошта [email protected];[email protected] Мақсаты: BRCA1 және BRCA2 және анықталған сүт безі қатерлі ісігіндегі (BC), аналық бездегі (OC) және басқа да қатерлі ісік ауруының өмірлік қаупімен байланысты ұрық сызығының мутациялары. BRCA генін сынау жеке тәуекелді бағалаудың, сондай-ақ сау тасымалдаушыларда алдын алу әдістерін табудың және қатерлі ісікпен ауыратын науқастарда емдеу әдістерін таңдаудың кілті болып табылады. Сицилиялық отбасылардағы BRCA патогендік нұсқаларында бар, Сицилияның шығысындағы популяцияларға арнайы бағытталған зерттеулер жетіспейді. Біздің зерттеуіміздің мақсаты шығыс Сицилияның BC пациенттерінің когортында BRCA патогенді ұрық жасушаларының өзгерістерінің таралуын және таралуын зерттеу және олардың келесі генерацияланған BC белгілерімен байланысын бағалау болды. НӘТИЖЕЛЕР: Жалпы алғанда, 35 пациентте (9%) BRCA патогенді нұсқасы болды, BRCA1-де 17 (49%) және BRCA2-де 18 (51%). BRCA1 өзгерістері үш есе теріс BC пациенттерінде жиі кездеседі, ал BRCA2 мутациялары люминальды, BRCA-дан жоғары түрі бар науқастарда жиі кездеседі. және пролиферативті индекс.Қорытындылар: Біздің қорытындыларымыз шығыс Сицилияның BC пациенттеріндегі BRCA мутациялық күйіне шолу жасайды және тұқым қуалайтын БК бар науқастарды анықтаудағы NGS талдауының рөлін растайды. Жалпы алғанда, бұл деректер мутация тасымалдаушыларында қатерлі ісіктің дұрыс алдын алу және емдеу үшін BRCA скринингін қолдайтын алдыңғы дәлелдерге сәйкес келеді.
Сүт безі қатерлі ісігі (BC) дүние жүзінде ең көп таралған қатерлі ісік және әйелдердегі ең өлімге әкелетін қатерлі ісік болып табылады.1 BC болжамын және клиникалық мінез-құлықты анықтайтын биологиялық ерекшеліктер уақыт өте кең көлемде зерттелді және ішінара түсіндірілді. Іс жүзінде, қазіргі уақытта БК-ны әртүрлі молекулалық кіші типтерге жіктеу үшін бірнеше суррогат маркерлер қолданылады. Олар адамда эстроген/эстрогендік өсу (ЭРР) және рецепторлар (рецепторлар) болып табылады. немесе 2 (HER2) күшейту, пролиферация индексі Ki-67 және ісік дәрежесі (G).2 Бұл айнымалылардың комбинациясы келесі BC санаттарын анықтады: 1) ER және/немесе PgR экспрессиясын көрсететін люминальды ісіктер BCs 75% құрады. Бұл ісіктер одан әрі Luminal A болып бөлінді, қашан Luminal A және Ki HER6-дан төмен болғанда, Ki-60 теріс болса, 20%-ға тең немесе одан жоғары болды және пролиферация индексіне қарамастан HER2 күшейту болған кезде;2) ER және PgR теріс, бірақ HER2 күшейтуін көрсететін HER2+ ісіктері. Бұл топ барлық сүт безі ісіктерінің 10% құрайды;3) ER және PgR экспрессиясын және HER2 күшейтуін көрсетпейтін үштік теріс сүт безі обыры (TNBC) сүт безі қатерлі ісігінің шамамен 15% құрайды.2-4
Осы BC қосалқы түрлерінің ішінде ісік дәрежесі мен пролиферация индексі ісік агрессивтілігімен және болжамымен тікелей және тәуелсіз байланысты болатын көлденең қималық биомаркерлерді білдіреді.5,6
Жоғарыда аталған биологиялық ерекшеліктерге қоса, соңғы бірнеше жылда BC дамуына әкелетін тұқым қуалайтын генетикалық өзгерістердің рөлі барған сайын маңызды бола бастады.7 Сүт безінің 10 ісіктерінің 1-ге жуығы нақты гендердегі ұрық сызықтарының өзгеруіне байланысты тұқым қуалайды.8 180 000 астам әйелдерді қамтитын екі үлкен эпидемиологиялық зерттеу (жақында анықталған 180,000 әйелдердің AARD, aBR1, aBR, aBR1, 1000 әйелдер) BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C және RAD51D) негізінен тұқым қуалайтын BC-ге жауап береді. Осы гендердің ішінде BRCA1 және BRCA2 (бұдан әрі - BRCA1/2) сүт безі ісіктерінің дамуымен ең күшті корреляцияны көрсетті.9-12 Іс жүзінде BCCA/2 басқа да қауіпті мутациялар өмір сүру қаупін айтарлықтай арттырады. аналық безді, қуық асты безін, ұйқы безін, тік ішекті және меланоманы қоса алғанда.
Атап айтқанда, жақында жарияланған BC қаупі PV түріне байланысты деп болжайды. Шындығында, патогенді қысқарту нұсқаларымен салыстырғанда, айқын қате нұсқалар, әсіресе BRCA1 генінде, әсіресе егде жастағы әйелдерде BC қаупінің төмендеуімен байланысты.15
BRCA1 немесе BRCA2 PV болуы әртүрлі биологиялық және клиникопатологиялық белгілермен байланысты болды.16,17 BRCA1-ассоциацияланған BCs әдетте клиникалық агрессивті, нашар сараланған және жоғары пролиферативті болады. Бұл ісіктер әдетте үш есе теріс және ерте басталады. және ауыспалы пролиферативті индекстер. Бұл ісіктер B люменінде жиі кездеседі және әдетте егде жастағы адамдарда кездеседі.16-18 Атап айтқанда, BRCA1 және BRCA2 мутациялары арнайы емдеу әдістеріне, соның ішінде платина тұздарына және поли(ADP-рибоза) полимераза тежегіштері (PARPi) сияқты мақсатты препараттарға сезімталдықты арттырады.19,22
Соңғы бірнеше жыл ішінде клиникалық тәжірибеде келесі ұрпақ секвенциясын (NGS) енгізу BC пациенттерінің санының артуы қатерлі ісікке бейімділік синдромдарына, соның ішінде BRCA1/2.21 үшін молекулалық тестілеуден өтуге мүмкіндік берді. Сонымен қатар, отбасылық тарихқа, демографиялық және клиникалық патологияны жақсы анықтауға арналған нақты критерийлерге негізделген анықтамалар/CA122, Осы контекстте географиялық аймақтардағы айырмашылықтарды көрсететін нақты популяциялардағы BRCA1/2 скринингі бойынша дәлелдер жинақталуда.24–27 Сицилияның батысындағы BC когорты туралы есептер болғанымен, Сицилияның шығысындағы популяциядағы BRCA1/2 скринингі туралы деректер азырақ.28,29
Біз мұнда шығыс Сицилияның BC пациенттеріндегі BRCA1/2 ұрық сызығы скринингінің нәтижелерін сипаттаймыз, BRCA1 немесе BRCA2 мутацияларының болуын осы ісіктердің негізгі клиникопатологиялық ерекшеліктерімен одан әрі корреляциялаймыз.
Катаниядағы Родолико – Сан-Марко поликлинико госпиталіндегі «Эксперименттік онкология және гематология орталығында» ретроспективті зерттеу жүргізілді. 2017 жылдың қаңтарынан 2021 жылдың наурызына дейін сүт безі мен аналық безі, меланомасы, ұйқы безі немесе қуық асты безінің қатерлі ісігіне шалдыққан 455 науқас біздің зертханалық генологиялық диагностикаға/БРСТ-ға жіберілді. оның зерттеуі Хельсинки Декларациясына сәйкес жүргізілді және барлық қатысушылар молекулалық талдауға дейін жазбаша ақпараттандырылған келісімін берді.
BC гистологиялық және биологиялық сипаттамалары (ER, PgR, HER2 күйі, Ki-67 және дәрежесі) тек агрессивті ісік компоненттерін ескере отырып, негізгі биопсия немесе хирургиялық үлгілер бойынша бағаланды. Осы сипаттамалар негізінде BCs келесідей жіктеледі: люминальды A (ER+ және/немесе PgR+, HER2-% және Ki-ER, HER2-%, B+R, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, PgR+, B+0, PgR+ және/немесе PgR+), HER2-, Ki-67≥20%), люминальды B-HER2+ (ER және/немесе PgR+, HER2+), HER2+ (ER және PgR-, HER2+) немесе үштік теріс (ER және PgR-, HER2-).
BRCA1 және BRCA2 мутациясының күйін бағалау алдында онкологты, генетикті және психологты қамтитын мультидисциплинарлық топ BRCA1 және/немесе BRCA1 бар-жоғын анықтау үшін әрбір пациент үшін ісік генетикасы бойынша кеңес өткізді.немесе BRCA2 генінде PV қаупі жоғары адамдар. Пациенттерді таңдау Италия медициналық онкология қоғамының (AIOM) нұсқауларына және жергілікті сицилия ұсыныстарына сәйкес жүргізілді.30,31 Бұл критерийлерге мыналар кіреді: (i) сезімталдық гендеріндегі белгілі патогендік нұсқалардың отбасылық тарихы (мысалы, BRCA1, BRCA3TP, EN);(ii) BC бар еркектер;(iii) BC және OC барлар;(iv) BC <36 жаста, TNBC <60 жаста немесе екі жақты БК <50 жаста әйелдер;(v) БК <50 жыл және кем дегенде бір бірінші дәрежелі туысының жеке ауру тарихы: (а) БК < 50 жыл;(b) кез келген жастағы шырышты емес және шекаралық емес ОК;(c) екі жақты BC;(d) еркек BC;(е) ұйқы безінің қатерлі ісігі;(f) простата обыры;(vi) екі немесе одан да көп жеке анамнезінде BC > 50 жыл және отбасылық анамнезінде BC, OC немесе бір-бірімен бірінші дәрежелі туыстары (оның ішінде ол бірінші дәрежелі туыстары болып табылатын туыстары) үшін ұйқы безінің қатерлі ісігі;(vii) ОК және кем дегенде бір бірінші дәрежелі туысының жеке тарихы: (а) BC <50 жас;(b) ҰОК;(c) екі жақты BC;(d) еркек BC;(vii) жоғары дәрежелі серозды OC бар әйел.
Әрбір емделушіден 20 мл перифериялық қан үлгісі алынды және EDTA түтіктеріне (BD Biosciences) жиналды. Геномдық ДНҚ QIAsymphony DSP DNA Midi оқшаулау жинағы (QIAGEN, Hilden, Италия) арқылы өндірушінің нұсқауларына сәйкес 0,7 мл толық қан үлгілерінен бөлініп алынды (Qubitlu S. F. S. F.) , Waltham, MA, USA) Сандық анықтауды орындаңыз.Мақсатты байыту мен кітапхананы дайындауды өндірушінің нұсқауларына сәйкес автоматтандырылған кітапхананы дайындауға арналған Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 жинағына жүктеуге дайын Oncomine™ BRCA Research Assay Chef жүзеге асырады. Жинақ барлық BRCA1 және (NMCA_0500) зерттеу үшін пайдалануға болатын екі мультиплексті ПТР праймер пулынан тұрады (NMCA_0500) гендер. Қысқаша айтқанда, әрбір сұйылтылған ДНҚ үлгісінің 15 мкл (10 нг) кітапхананы дайындау үшін штрих-кодталған пластиналарға қосылды және барлық реагенттер мен шығын материалдары Ion Chef™ құралына жүктелді. Одан кейін Ion Chef™ құралында автоматтандырылған кітапхананы дайындау және штрих-кодталған үлгілер кітапханасын біріктіру орындалды. Содан кейін дайындалған кітапханалардың саны F3000 өлшегіш арқылы бағаланды. tific, Waltham, MA, АҚШ) өндірушінің нұсқауларына сәйкес. Соңында, кітапханалар Ion Chef™ кітапханасының үлгі түтіктерінде (штрих-кодталған түтіктер) эквимолярлық арақатынастарда біріктіріліп, Ion Chef™ құралына жүктеледі. Секвенирлеу Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientifrmo) (Thermo Fisher Scientifrmo) Scientifonci (Thermo Fisher Scientific) I1010 құралы арқылы орындалды. Fisher Scientific).Деректерді талдау Amplicon Suite (SmartSeq srl) және Ion Reporter Software арқылы орындалды.
Барлық нұсқа номенклатурасы онлайн режимінде қолжетімді (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) Адам геномының өзгеру консорциумының ағымдағы нұсқауларына сәйкес болды. BRCA1/2 нұсқаларының клиникалық маңыздылығы ENIGMA халықаралық консорциумының (Evidence-Based Germline Network for Interpretanting All Consultium, https://Consulting All Consulting Gergerm Network) классификациясы арқылы BRCA1/2 нұсқалары анықталды. ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD және UMD сияқты әртүрлі дерекқорларды қамтиды. Жіктеу бес түрлі тәуекел санаттарын қамтиды: қатерсіз (I санат), ықтимал қатерсіз (II санат), белгісіз маңыздылық нұсқасы (VUS, III санат), ықтимал патогенді (IV санат) және патогендік (сондай-ақ IV санаттағы протеинді талдау құралы), сондай-ақ патогендік құрылымның мутаативті құрылымына, мутативтік функцияны талдау. 30 дерекқорға қол жеткізумен.32
Әрбір VUS-ға әлеуетті клиникалық мәнді тағайындау үшін келесі есептеуіш ақуызды болжау алгоритмдері пайдаланылды: MUTATION DASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu//genetics.bwh.harvard.edu/http://pph2hd.Gv. u/agvgd_input.php).1 және 2-сынып ретінде жіктелген нұсқалар жабайы түр деп саналды.
Сэнгер секвенциясы әрбір патогендік нұсқаның болуын растады. Қысқаша айтқанда, BRCA1 және BRCA2 генінің анықтамалық реттіліктерін (NG_005905.2, NM_007294.3 және NG_012772.3, NM_030 сәйкес орындалды, PC500 талабына сай орындалды) пайдалану арқылы әрбір анықталған нұсқа үшін арнайы праймерлер жұбы құрастырылды. герді реттілік.
BRCA1/2 гені үшін теріс сыналған емделушілер өндірушінің нұсқауларына сәйкес үлкен геномдық қайта құрылымдаулардың (LGR) бар-жоғын бағалау үшін мультиплексті байланыстыруға тәуелді зонд күшейту (MLPA) арқылы сыналған. Қысқаша айтқанда, ДНҚ үлгілері денатуратталған және 60-қа дейін BRCA1 және BRCA2 гендерінің әрқайсысында спецификалық нуклелерді анықтау үшін пайдаланылады. Ұзындығы. ПТР ампликондарының бірегей жиынтығынан тұратын зондты күшейту өнімдері содан кейін капиллярлық электрофорез арқылы және Cofalyser.Net бағдарламалық құралымен сәйкес топтамаға тән Cofalyser кестелерімен (www.mrcholland.com) бірге талданды.
Таңдалған клиникопатологиялық айнымалылар (гистологиялық дәреже және Ki-67% пролиферация индексі) BRCA1/2 PV болуымен байланысты болды, Prism бағдарламалық құралының v. 8.4 көмегімен Фишердің p-мәні <0,05 мәнді деп болжайтын дәл сынағы арқылы есептелді.
2017 жылдың қаңтары мен 2021 жылдың наурызы аралығында 455 пациент ұрық сызығының BRCA1/2 мутациясына скринингтен өтті. Мутация сынағы Поликлинико ауруханасының Эксперименттік онкология және гематология орталығында жүргізілді. Сицилия нұсқаулығына сәйкес (http://www.gurs.regione.it.0mcilia, N-1V, N-1V, 2017) Gennaio 2020), Родолико Катания – Сан-Марко» жалпы алғанда, 389 науқас Сүт безі обыры, 37 аналық без обыры, 16 ұйқы безі обыры, 8 простата обыры және 5 меланома болды.Науқастарды ісік түріне және талдау нәтижелеріне сәйкес бөлу 1-суретте көрсетілген.
1-суретте зерттеуге шолу көрсетілген ағын диаграммасы көрсетілген. Сүт безі, меланома, ұйқы безі, простата немесе аналық без ісіктері бар емделушілер BRCA1 және BRCA2 гендерінің мутацияларына сыналған.
Қысқартулар: PVs, патогендік нұсқа;VUS, белгісіз мәнді нұсқа;WT, жабайы типті BRCA1/2 тізбегі.
Біз зерттеулерімізді сүт безі обыры когорттарына іріктеп бағыттадық. Пациенттердің орташа жасы 49 жас (диапазон 23-89) және негізінен әйелдер (n=376 немесе 97%) болды.
Осы субъектілердің 64-інде (17%) BRCA1/2 мутациялары болды және барлығы әйелдер болды. Отыз бесінде (9%) PV және 29-ында (7,5%) VUS болды. 35 патогендік нұсқаның он жетеуі (48,6%) BRCA1-де және 18-і (51,4%) BRCA2-де (%18) және VCA2-де (%) және 182-де (%18). BRCA2-де (1 және 2-суреттер). LGR MLPA талдауында болған жоқ.
Сурет 2. Сүт безі обыры бар 389 емделушідегі BRCA1 және BRCA2 мутацияларының талдауы.(A) Сүт безі обыры бар 389 науқаста патогендік нұсқалардың (PV) (қызыл), белгісіз мәнді нұсқалардың (VUS) (қызғылт сары) және WT (көк) таралуы;(B) 389 сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастар Отыз бесінде (9%) BRCA1/2 патогендік нұсқалары (PVs) болды. Олардың ішінде 17 (48,6%) BRCA1 PV тасымалдаушылары (қара қызыл) және 18 (51,4%) BRCA2 тасымалдаушылары (ашық қызыл);(C) 389 субъектінің 29 (7,5%) VUS, 5 (17,2%) BRCA1 гендерін (қара қызғылт сары) және 24 (82,8%) BRCA2 гендерін (ашық қызғылт сары) тасымалдады.
Қысқартулар: PVs, патогендік нұсқа;VUS, белгісіз мәнді нұсқа;WT, жабайы типті BRCA1/2 тізбегі.
Келесі кезекте біз BRCA1/2 PV бар емделушілерде BC молекулалық қосалқы түрлерінің таралуын зерттедік. Бөлімге 2 (5,7%) люминальды А, 15 (42,9%) люминальды B, 3 (8,6%) люминальды B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ және 13 (37,7%) HER2+ және 13 (37,7%) (372,3%), TCA11, 13 (372,5%) люминальды А люминальды емделушілерді, BCN15. 9,4%-да люминальды В BC, 2-де (11,8%) HER2+ ауруы және 10-ында (58,8%) TNBC болды. BRCA1 мутациялары жоқ ісіктер люминальды А немесе люминальды B-HER2+ болды (3-сурет). BRCA2-оң топшада 10 luminal (%), 10 luminal (%) (%), B. B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC және 2 (11,1%) люминальды А болды (3-сурет). Бұл топта HER2+ ісіктері болған жоқ. Осылайша, BRCA1 мутациялары TNBC пациенттерінде басым, ал BRCA2 өзгерістері B люмені адамдарда басым.
3-сурет BRCA1 және BRCA2 патогендік нұсқалары бар емделушілерде сүт безі обырының қосалқы түрлерінің таралуы. Сүт безі обырына шалдыққан науқастардың молекулалық кіші түрлері арасында BRCA1- (қара қызыл) және BRCA2- (ашық қызыл) PVs таралуын көрсететін гистограммалар. Әр қорапта берілген сандар BRCA21 және әрбір BRCAPV субтипі үшін сүт безі обыры бар науқастардың пайызын білдіреді.
Қысқартулар: PVs, патогендік нұсқа;HER2+, адамның эпидермиялық өсу факторы рецепторы 2 оң;TNBC, үштік теріс сүт безі қатерлі ісігі.
Кейіннен біз BRCA1 және BRCA2 PVs түрі мен генінің локализациясын бағаладық. BRCA1 PV-да біз 7 жалғыз нуклеотидтік нұсқаны (SNV), 6 жоюды, 3 қайталауды және 1 кірістіруді байқадық. Тек бір мутация (c.5522delG) BRCA1 PV-да ең көп анықталған жаңа ашылымды білдіреді. c.1505. delCTAAT. Бұл өзгеріс BRCA1 15 экзонындағы бес нуклеотидтің (CTAAT) жойылуын қамтиды, нәтижесінде амин қышқылы лейцинді 1679 кодонында тирозинмен алмастырады және болжамды альтернативті тоқтату кодонымен трансляциялық жақтаудың ауысуына байланысты мезгілінен бұрын бір ақуыздың қысқаруына әкеліп соғады, PV жағдайында бір ғана басқа өзгерістер анықталған жоқ. қосылу орнының консенсус аймағы (c.4357+1G>T) (1-кесте).
BRCA2 PV қатысты, біз 6 жоюды, 6 SNV және 2 қайталауды байқадық. Табылған өзгерістердің ешқайсысы жаңа емес. Біздің популяцияда үш мутация қайталанды, c.428dup және c.8487+1G>A 3 субъектіде байқалды, одан кейін c.5851_5854del AG4-те екі рет қайталану C.5851_5854del AG4. BRCA2 5-экзонында кесілген, жұмыс істемейтін ақуызды кодтайды деп болжанған. c.8487+1G>A мутация BRCA2 интронының 19 интрондық аймағында (± 1,2) орын алады және сплайсинг консенсус тізбегіне әсер етеді, нәтижесінде сплайсинг өзгереді немесе аномалдан тыс сплайс пайда болады c.848.AG. BRCA2 генінің 10 кодтау экзонындағы 5851-ден 5854-ке дейінгі нуклеотидтік позициялардан 4-нуклеотидтің жойылуына байланысты және болжамды балама тоқтату кодонымен (p.S1951WfsTer) трансляциялық фреймнің ығысуына әкеледі. Атап айтқанда, бұрын хабарланғандай, екі өзгеріс те c>01G және c>03.A пациентте анықталды. 4 Бірінші мутация BRCA2 7 экзонындағы аденозинді (A) құрамында гуанинді (G) бар нуклеотидпен алмастыруды қамтиды, нәтижесінде валин 211 кодонында изолейцинге ауысады, изолейцин Амин қышқылы өте ұқсас қасиеттері бар амин қышқылы болып табылады. Бұл өзгеріс қалыпты мРНҚ қосындысына әсер етеді және A қосындысында орналасқан экзондық аймақта екінші қосалқы нұсқаға әсер етеді. BRCA2 кодтайтын геннің 13-інде. c.7008-2A>T өзгеруі әртүрлі ұзындықтағы бірнеше транскрипттерді тудыруы мүмкін. Бұдан басқа, BRCA2 PV тобында 18 өзгерістердің 4-і (22,2%) интрондық болды.
Содан кейін біз функционалды домендерде және ақуызды байланыстыратын аймақтарда BRCA1/2 зиянды мутацияларын картаға түсірдік (4-сурет). BRCA1 генінде PV-ның 50% сүт безі обыры кластері аймағында (BCCR), мутациялардың 22% аналық без обыры кластері аймағында (OCCR) орналасқан (Cурет 4A PVBC3 нұсқасында, PVBR 425. нұсқада). CR аймағы және мутациялардың 42,8% OCCR (сур. 4B) орналасқан. Әрі қарай, біз BRCA1 және BRCA2 протеин домендері ішінде PV орнын бағалады. BRCA1 протеині үшін, біз цикл және ширатылған катушкалар домендерінде үш PV табылды, және екі мутация BRCT доменінде (Cурет 4B үшін қайталау, maPV4 үшін домен белок үшін maPV2 үшін). Олиго/олигосахаридпен байланыстыру (ОБ) және мұнара (T) домендерінде 3 интрондық және 3 экзоникалық өзгерістер анықталды (4В сурет).
4-сурет BRCA1 және BRCA2 ақуыздарының схемалық көрінісі және патогендік нұсқалардың локализациясы. Бұл сурет сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарда BRCA1 (A) және BRCA2 (B) патогенді нұсқаларының таралуын көрсетеді. Экзоникалық мутациялар көк түспен, ал интрондық нұсқалар қызғылт сары түспен көрсетілген. Жолақ биіктігі жағдайлардың санын және олардың хабарланған BRCABR протеиндері (BRCA21) болып табылады. ақуыздың құрамында циклдік домен (RING) және ядролық локализация тізбегі (NLS), орамдық домен, SQ/TQ кластерлік домен (SCD) және BRCA1 C-терминал домені (BRCT) бар.(B) BRCA2 протеинінде сегіз BRC қайталануы, ДНҚ-байланыстырушы домен, үш спиральдық домен (гелккле-бинолидтер), oligonide (гелкклеолидтер) бар. мұнара домені (T) және C жағындағы NLS. Сүт безі обыры кластерінің аймағы (BCCR) және аналық без обыры кластерінің аймағы (OCCR) деп аталатын аймақтар төменгі жағында көрсетілген.*Тоқтату кодондарын анықтайтын мутацияларды білдіреді.
Содан кейін біз BRCA1/2 PV бар болуымен байланысты болуы мүмкін BC клиникопатологиялық ерекшеліктерін зерттедік. Толық клиникалық жазбалар 181 BRCA1/2-теріс пациенттер (тасымалдаушылар емес) және барлық тасымалдаушылар (n = 35) үшін қол жетімді болды. Ісік пролиферациясының жылдамдығы мен дәрежесі арасында корреляция болды.
Біз Ki-67 таралуын біздің когорттың медианасы негізінде есептедік (25%, диапазоны <10-90%). Ki-67 < 25% бар субъектілер "төмен Ki-67" деп анықталса, ≥ 25% мәндері бар адамдар "жоғары Ki-67" деп есептелді. Ki-67 және CA-100 емес елеулі айырмашылықтар табылды. тасымалдаушылар (Cурет 5А).
5-сурет BRCA1 және BRCA2 PVs бар және жоқ сүт безі обыры бар әйелдерде дәрежесінің таралуымен Ki-67 корреляциясы.(A) BRCA1 (18) немесе BRCA2 (17) PV пациенттерімен салыстырғанда 181 BC тасымалдаушы емес пациенттердегі Ki-67 медиандық мәндерін көрсететін бокс схемасы. P мәндері 0,5 грамнан төмен қатерлі ісікке тағайындалды. BRCA1 және BRCA2 мутация күйіне сәйкес гистологиялық дәреже топтары (G2 және G3) (WT субъектілері, BRCA1 және BRCA2 PVs тасымалдаушылары).
Сол сияқты, біз ісік дәрежесінің BRCA1/2 PV болуымен корреляциясы бар-жоғын зерттедік. Біздің популяцияда G1 BC болмағандықтан, біз пациенттерді екі топқа бөлдік (G2 немесе G3). Ki-67 нәтижелеріне сәйкес талдау ісік дәрежесі мен BRCA1 пропорционалды GBR емес карциозды мутациямен салыстырғанда, статистикалық маңызды корреляцияны анықтады. тіректер (p<0,005) (5В-сурет).
ДНҚ секвенирлеу технологиясының жетістіктері BRCA1/2 генетикалық тестілеуде бұрын-соңды болмаған жетістіктерге қол жеткізді, бұл отбасылық қатерлі ісік тарихы бар емделушілерге маңызды әсер етті. Бүгінгі күнге дейін BRCA1/2-нің шамамен 20 000 нұсқасы анықталды және Америка медициналық генетика қоғамы 35 және EN5CA3/132 мутация жүйесі бойынша жіктелді. географиялық аймақтарда кеңінен өзгереді.37 Италияда BRCA1/2 PVs көрсеткіші 8%-дан 37%-ға дейін ауытқиды, бұл ел ішіндегі кең өзгермелілігін көрсетті.38,39 5 миллионға жуық халқы бар Сицилия тұрғындарының саны бойынша Италиядағы бесінші үлкен аймақ. аралдың бір бөлігі.
Біздің зерттеуіміз шығыс Сицилиядағы BC пациенттерінде BRCA1/2 PV жиілігі туралы алғашқы есептердің бірі болып табылады.28 Біз талдауымызды BC-ге арнадық, өйткені бұл біздің когортадағы ең көп таралған ауру.
Біздің эрамызға дейінгі 389 пациентті сынаған кезде, 9% BRCA1/2 PV тасымалдады, олар BRCA1 және BRCA2 арасында біркелкі бөлінген. Бұл нәтижелер итальяндық популяцияда бұрын хабарланған нәтижелерге сәйкес келеді.28 Бір қызығы, біздің топтың 3% (13/389) ер адамдар болды. Бұл көрсеткіш біздің сүт безі қатерлі ісігінің барлық іріктелуіне негізделген ер адамдар үшін күтілгеннен жоғары (BRCA14%) мутация қаупі.Алайда, бұл ерлердің ешқайсысы BRCA1/2 PV дамытпады, сондықтан олар PALB2, RAD51C және D сияқты азырақ таралған мутациялардың болуын жоққа шығару үшін әрі қарай молекулалық талдауға үміткер болды. Белгісіз мәнге ие нұсқалар BRCA2 VUS алдын ала дәлелденген субъектілердің 7% -ында алынды, бұл нәтиже анық болды.142.
BRCA1 / 2 мутантты әйелдердегі BC-дің молекулалық қосқыштарының таралуын талдағанымызда, біз TNBC және BRCA1 PV (58,8%) және BRCA2 PV (55,6%).
Содан кейін біз BRCA1/2 PV түрі мен орнына назар аударамыз. Біздің когортада ең көп таралған BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT болды. Дегенмен Incorvaia және т.б.Сицилия когортында бұл нұсқаны сипаттамады, басқа авторлар оны BRCA1 PV ұрық сызығы ретінде хабарлады.34 Біздің когортада бірнеше BRCA1 PV табылды – мысалы c.181T>G, c.514del, c.3253dupA және c.5266dupC – бұл екі мутация, SBRCA118. >G және c.5266dupC) әдетте Шығыс және Орталық Еуропа (Польша, Чехия), словен, австриялық, венгр, беларусь және неміс еврейлерінің ашкеназиялық еврейлерінде кездеседі ), ​​44,45 және АҚШ пен Аргентинада жақында «қайталанатын ұрық сызығының нұсқасы» ретінде анықталған, BC148 BC және солтүстік сүт безі қатерлі ісігі бар итальяндық науқастарда алдыңғы OC34c нұсқасы анықталды. Палермо мен Мессинадағы Сицилия. Бір қызығы, тіпті Incorvaia et al.Катаниядағы кейбір отбасыларда c.3253dupA нұсқасын тапты.28 Ең өкілді BRCA2 PVs c.428dup, c.5851_5854delAGTT және интрондық нұсқа c.8487+1G>A болып табылады, олар Палермодағы пациентте c.428855, c.45888 үйінде байқалған. Сицилияның солтүстік-батысында, негізінен Трапани және Палермо аймақтарында, ал c.5851_5854delAGTT PV Сицилияның солтүстік-батысындағы үй шаруашылықтарында байқалды. 8487+1G>A нұсқасы Мессина, Палермо және Кальтаниссеттадан келген субъектілерде жиі болды.28 Реббек және т.б.Колумбиядағы c.5851_5854delAGTT өзгерісі бұрын сипатталған.37 Тағы бір BRCA2 PV, c.631+1G>A, Сицилиядан (Агридженто, Сиракуса және Рагуса) келген BC және OC пациенттерінде табылған.28 Атап айтқанда, біз екі BRCA2 және c.-3AG нұсқасының (BRCA2 c.>3A06) қатар өмір сүруін байқадық. сол емделушіде, біз бұрын хабарлағанымыздай, cis режимінде бөлінген деп болжадық.34,46 Бұл BRCA2 uble мутациялары итальяндық аймақта жиі байқалады және хабаршы РНҚ сплайсингіне әсер етіп, BRCA2 ақуызының істен шығуына әкелетін мерзімінен бұрын тоқтату кодондарын енгізетіні анықталды.47,48
Біз сондай-ақ протеин домендері мен гендерінің болжамды OCCR және BCCR аймақтарында BRCA1 және BRCA2 PV картасын жасадық. Бұл аймақтарды Реббек және т.б. сипаттаған.сәйкесінше аналық без және сүт безі қатерлі ісігінің даму қаупі аймақтары ретінде.49 Дегенмен, ұрық сызығының нұсқаларының орналасуы мен сүт безі немесе аналық без обыры қаупі арасындағы байланысқа қатысты дәлелдер даулы болып қала береді.28,50-52 Біздің популяцияда BRCA1 PVs негізінен BCCR аймағында орналасқан, ал біз BRCA2-ге дейінгі кез келген PVCR аймағында орналаспаған едік. болжамды OCCR және BCCR аймақтары мен BC ерекшеліктері арасындағы байланыс. Бұл BRCA1/2 мутациялары бар емделушілердің шектеулі санына байланысты болуы мүмкін. Протеин домені тұрғысынан BRCA1 PVs бүкіл ақуыз бойына таратылады және BRCA2 өзгерістері BRC қайталау доменінде жақсырақ кездеседі.
Ақырында, біз BC клиникопатологиялық ерекшеліктерін BRCA1/2 PV-мен корреляцияладық. Қамтылған пациенттердің шектеулі санына байланысты біз тек Ki-67 мен ісік дәрежесі арасында маңызды корреляцияны таптық. Ki-67 бағалауы мен интерпретациясы біршама даулы болып қала берсе де, жоғары пролиферативті көрсеткіштер аурудың қайталану қаупінің жоғарылауымен және қайталану мерзімінің төмендеуімен байланысты екені сөзсіз. жоғары» және «төмен» Ki-67 20% құрайды. Дегенмен, бұл шекті Ki-67 орташа мәні 25% болатын BRCA1/2 мутация пациенттерінің популяциясына қолданылмайды. Ki-67 жоғары көрсеткіштерінің бұл тенденциясы біздің B luminal B және TNBC когорттарындағы таралумен түсіндіріледі, олардың кейбіреулері Ki-H6-ның жоғарырақ болғанын көрсетеді. 7 кесіндісі (25–30%) пациенттерді болжамына сәйкес жақсырақ стратификациялауы мүмкін.53,54 Біздің талдау нәтижелерімізден айтарлықтай корреляция таңқаларлық емес. Жоғары Ki-67 және дәрежелері және BRCA1 PV болуы арасында орын алады. Шын мәнінде, BRCA1-мен байланысты ісіктер TNBC-ге тән және одан да көп белгілерді көрсетеді.
Қорытындылай келе, бұл зерттеу Сицилияның шығысындағы BC когортындағы BRCA1/2 мутациялы күйі туралы есеп береді. Жалпы алғанда, біздің тұжырымдар мутацияның таралуы тұрғысынан да, BC-дегі клиникопатологиялық ерекшеліктер бойынша да бұрыннан бар дәлелдемелерге сәйкес келеді. BRCA1/2-мутантының үлкен популяцияларында көбірек зерттеулер жүргізілді, мысалы, мультипликациялық BC-ге қарсы талдау, мутантты BC-ге қарсы талдауды қолдану, кеңейтілген BCF-ның болуы. BRCA1/2-ге қарағанда ерекше және сирек кездеседі. Бұл генетикалық мутацияларға байланысты қатерлі ісік қаупі жоғары субъектілердің санын анықтауға және дұрыс басқаруға мүмкіндік береді.
Біз пациенттердің зерттеу мақсатында ісік үлгілерін жасырын түрде шығаруға ақпараттандырылған келісімге қол қойғанын растадық. Барлық емделушілер Хельсинки декларациясына сәйкес жазбаша ақпараттандырылған келісімге қол қойды. AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco» саясатына сәйкес, бұл зерттеу этикалық тексеруден босатылды, өйткені BRCA1/2 жазбаша түрде талдау жүргізілді және барлық пациенттерге талдау жүргізілді. сонымен қатар олардың деректерін зерттеу мақсатында пайдалануға келісім береді.
Профессор Паоло Вигнериге Этика комитетінің сұрауы бойынша сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарға көмек көрсеткені үшін алғыс айтамыз.
Федерика Марторана Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer компанияларының гонорарлары туралы хабарлайды. Басқа авторлар бұл жұмыста ешқандай мүдделер қақтығысын жарияламайды.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN дүние жүзіндегі 185 елдегі 36 қатерлі ісік ауруының жиілігі мен өлімін бағалайды.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.ca362.doi: