សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។កំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រ CSS ។សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ក្នុងពេលនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្របន្ត យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) គឺជារុក្ខជាតិ leguminous ប្រើសម្រាប់ផលិតអាហារ និងការកែលម្អដី។ការពង្រីកសកលនៃ NLL ជាដំណាំមួយបានទាក់ទាញផ្សិតបង្កជំងឺជាច្រើន រួមទាំង lupine anthracnose ដែលបណ្តាលឱ្យមានជំងឺ anthracnose ដ៏សាហាវ។អាឡែសពីរគឺ Lanr1 និង AnMan ដែលផ្តល់ភាពធន់នឹងការកើនឡើង ត្រូវបានប្រើក្នុងការបង្កាត់ពូជ NLL ប៉ុន្តែយន្តការម៉ូលេគុលមូលដ្ឋាននៅតែមិនស្គាល់។នៅក្នុងការសិក្សានេះ សញ្ញាសម្គាល់ Lanr1 និង AnMan ត្រូវបានប្រើដើម្បីពិនិត្យគំរូ NLL របស់អឺរ៉ុប។ការធ្វើតេស្តវ៉ាក់សាំងនៅក្នុងបរិយាកាសដែលបានគ្រប់គ្រងបានបញ្ជាក់ពីប្រសិទ្ធភាពនៃម្ចាស់ជំនួយដែលធន់ទ្រាំទាំងពីរ។ការបង្ហាញទម្រង់ហ្សែនឌីផេរ៉ង់ស្យែលត្រូវបានអនុវត្តនៅលើបន្ទាត់ដែលធន់ទ្រាំ និងងាយទទួលតំណាង។ភាពធន់នឹងអង់ត្រាក់ណូសត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការបញ្ចេញជ្រុលនៃពាក្យហ្សែន ontology "GO: 0006952 Defense Response", "GO: 0055114 Redox Process" និង "GO: 0015979 Photosynthesis" ។លើសពីនេះ បន្ទាត់ Lanr1(83A:476) បានបង្ហាញពីការសរសេរប្រតិចារិកសំខាន់ៗឡើងវិញយ៉ាងឆាប់រហ័សបន្ទាប់ពីការចាក់បញ្ចូល ខណៈខ្សែផ្សេងទៀតបង្ហាញពីការពន្យារពេលក្នុងការឆ្លើយតបនេះប្រហែល 42 ម៉ោង។ការឆ្លើយតបផ្នែកការពារត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងហ្សែន TIR-NBS, CC-NBS-LRR និង NBS-LRR ប្រូតេអ៊ីន 10 ពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្ករោគ ប្រូតេអ៊ីនផ្ទេរជាតិខ្លាញ់ ប្រូតេអ៊ីន endoglucan-1,3-β-glucosidase ប្រូតេអ៊ីនជញ្ជាំងកោសិកាដែលសំបូរទៅដោយ glycine និងហ្សែនពីផ្លូវប្រតិកម្មនៃអុកស៊ីសែន។ការឆ្លើយតបដំបូងចំពោះ 83A:476 រួមទាំងការទប់ស្កាត់យ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្ននៃហ្សែនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការធ្វើរស្មីសំយោគ ស្របពេលជាមួយនឹងការការពារដោយជោគជ័យក្នុងកំឡុងដំណាក់កាលលូតលាស់លូតលាស់នៃជីវវិទ្យាផ្សិត ដែលបង្ហាញថា ភ្នាក់ងារបង្កបង្កើនភាពស៊ាំ។ប្រតិកម្ម Mandeloop ត្រូវ​បាន​បន្ថយ​ល្បឿន ដូច​នឹង​ការ​អូស​ផ្ដេក​រួម​ដែរ។
lupine ស្លឹកតូចចង្អៀត (NLL, Lupinus angustifolius L.) គឺជាធញ្ញជាតិប្រូតេអ៊ីនខ្ពស់ដែលមានដើមកំណើតនៅតំបន់មេឌីទែរ៉ាណេខាងលិច 1,2 ។បច្ចុប្បន្ន​វា​ត្រូវ​បាន​គេ​ដាំដុះ​ជា​អាហារ​សម្រាប់​សត្វ និង​មនុស្ស។វាត្រូវបានគេចាត់ទុកថាជាលាមកបៃតងផងដែរនៅក្នុងប្រព័ន្ធបង្វិលដំណាំដោយសារតែការជួសជុលអាសូតដោយ symbiotic អាសូតជួសជុលបាក់តេរី និងការកែលម្អទាំងមូលនៃរចនាសម្ព័ន្ធដី។NLL បានឆ្លងកាត់ដំណើរការយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃការចិញ្ចឹមក្នុងស្រុកនៅក្នុងសតវត្សចុងក្រោយនេះ ហើយនៅតែស្ថិតនៅក្រោមសម្ពាធនៃការចិញ្ចឹមខ្ពស់3,4,5,6,7,8,9,10,11,12។ជាមួយនឹងការដាំដុះយ៉ាងទូលំទូលាយនៃ NLL ការបន្តពូជនៃផ្សិតបង្កជំងឺបានបង្កើតទីផ្សារកសិកម្មថ្មីៗ និងបណ្តាលឱ្យមានជំងឺបំផ្លាញដំណាំថ្មីៗ។ គួរឱ្យកត់សម្គាល់បំផុតសម្រាប់កសិករ និងអ្នកបង្កាត់ពូជ lupine គឺរូបរាងរបស់ anthracnose ដែលបណ្តាលមកពីផ្សិតបង្កជំងឺ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ។ គួរឱ្យកត់សម្គាល់បំផុតសម្រាប់កសិករ និងអ្នកបង្កាត់ពូជ lupine គឺរូបរាងរបស់ anthracnose ដែលបណ្តាលមកពីផ្សិតបង្កជំងឺ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ។ Наиболее примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление антракноза, вызванногонтракноза, вызванногонтранного ini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. គួរឱ្យកត់សម្គាល់បំផុតចំពោះកសិករនិងអ្នកបង្កាត់ពូជ lupine គឺការលេចឡើងនៃ anthracnose ដែលបណ្តាលមកពីផ្សិតបង្កជំងឺ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ។对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真真真真真 它是由病原真真 菌35起的។对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真真菌 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление антракноза, выгрогромтам Richum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. ភាពទាក់ទាញបំផុតចំពោះកសិករ និងអ្នកបង្កាត់ពូជ lupine គឺការលេចឡើងនៃ anthracnose ដែលបណ្តាលមកពីផ្សិតបង្កជំងឺ Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ។របាយការណ៍ដំបូងបំផុតនៃជំងឺនេះបានមកពីប្រទេសប្រេស៊ីល និងសហរដ្ឋអាមេរិក ជាមួយនឹងរោគសញ្ញាធម្មតាបានលេចឡើងនៅឆ្នាំ 1912 និង 1929 រៀងគ្នា។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយបន្ទាប់ពីប្រហែល 30 ឆ្នាំ ភ្នាក់ងារបង្ករោគត្រូវបានគេកំណត់ថាជា Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz ។ & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., teleomorph នៃ Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., 有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ។ & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии ។ & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld ក្នុង morphology គោលដៅ។ & H. Schrenk, ។ & H. Schrenk, .និង H. Schrenk ។ & H.施伦克, ។ & H.施伦克, ។និង H. Schlenk, .ការវិភាគជំងឺបឋមដែលបានធ្វើនៅពាក់កណ្តាលសតវត្សទី 20 បានបង្ហាញពីភាពធន់មួយចំនួននៅក្នុង NLL និងពណ៌លឿង lupine (L. luteus L.) ប៉ុន្តែការចូលប្រើ lupine ពណ៌ស (L. albus L.) ទាំងអស់ដែលត្រូវបានធ្វើតេស្តគឺមានភាពងាយរងគ្រោះខ្លាំង15,16។ការសិក្សាបានបង្ហាញថាការវិវត្តនៃ anthracnose ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងទឹកភ្លៀង (សំណើមខ្យល់) និងសីតុណ្ហភាព (ក្នុងចន្លោះពី 12-28°C) ដែលនាំឱ្យមានការរំលោភលើការធន់ទ្រាំនៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ជាង 17, 18។ ជាការពិត ពេលវេលាដែលត្រូវការសម្រាប់ conidia ដើម្បីដុះពន្លក និងជំងឺចាប់ផ្តើមគឺខ្លីជាង 4 ដងនៅសីតុណ្ហភាព 24°C (16 ម៉ោង) ក្រោមលក្ខខណ្ឌ 11°C។ដូច្នេះ ការឡើងកំដៅផែនដីជាបន្តបាននាំឱ្យមានការរីករាលដាលនៃមេរោគ anthracnose ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ជំងឺនេះត្រូវបានសង្កេតឃើញនៅក្នុងប្រទេសបារាំង (1982) និងអ៊ុយក្រែន (1983) ថាជាការគម្រាមកំហែងដែលជិតមកដល់ ប៉ុន្តែជាក់ស្តែងត្រូវបានគេមិនអើពើដោយឧស្សាហកម្ម lupine នៅពេលវេលា 20,21 ។ពីរបីឆ្នាំក្រោយមក ជំងឺដ៏កាចសាហាវនេះបានរីករាលដាលពាសពេញពិភពលោក ហើយថែមទាំងប៉ះពាល់ដល់ប្រទេសដែលផលិត lupine ធំៗដូចជា អូស្ត្រាលី ប៉ូឡូញ និងអាល្លឺម៉ង់ 22,23,24។បន្ទាប់ពីការផ្ទុះឡើងនៃ anthracnose នៅពាក់កណ្តាលទសវត្សរ៍ឆ្នាំ 1990 ការត្រួតពិនិត្យយ៉ាងទូលំទូលាយបានបណ្តាលឱ្យមានការកំណត់អត្តសញ្ញាណម្ចាស់ជំនួយដែលធន់ទ្រាំជាច្រើននៅក្នុងគំរូ NLL19 ។ភាពធន់របស់ NLL ទៅនឹងជំងឺ anthracnose ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយ alleles លេចធ្លោដាច់ដោយឡែកពីរដែលត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងប្រភពមេរោគផ្សេងៗគ្នា: Lanr1 នៅក្នុងពូជ Tanjil និង Wonga និង AnMan នៅក្នុងពូជ។Mandalay 25, 26. Alleles ទាំងនេះបំពេញបន្ថែមនូវសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលដែលគាំទ្រដល់ការជ្រើសរើសមេរោគដែលធន់ទ្រាំនៅក្នុងកម្មវិធីបង្កាត់ពូជ25,26,27,28,29,30។ខ្សែបង្កាត់ពូជដែលធន់ទ្រាំ 83A:476 ដែលផ្ទុក Lanr1 allele ត្រូវបានឆ្លងកាត់ជាមួយបន្ទាត់ព្រៃដែលងាយរងគ្រោះ P27255 ដើម្បីទទួលបានចំនួនប្រជាជន RIL ដាច់ដោយឡែកសម្រាប់ភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose ដែលធ្វើឱ្យវាអាចកំណត់ទីតាំង Lanr1 ទៅក្រូម៉ូសូម NLL-1131, 32, 33 ។ ការតម្រឹមនៃភាពធន់នឹងការសម្គាល់នៃតំណ ការងារ NLL បានបង្ហាញទីតាំងនៃអាឡែរទាំងបីនៅលើក្រូម៉ូសូមដូចគ្នា (NLL-11) ប៉ុន្តែនៅក្នុងមុខតំណែងផ្សេងគ្នា 29,34,35 ។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដោយសារតែចំនួន RILs តិចតួច និងចម្ងាយហ្សែនដ៏ធំរវាងសញ្ញាសម្គាល់ និងអាឡែរដែលត្រូវគ្នានោះ គ្មានការសន្និដ្ឋានដែលអាចជឿទុកចិត្តបានអំពីហ្សែនមូលដ្ឋានរបស់វានោះទេ។ម៉្យាងវិញទៀត ការប្រើប្រាស់ហ្សែនបញ្ច្រាសនៅក្នុង lupins គឺពិបាកដោយសារតែសក្តានុពលនៃការបង្កើតឡើងវិញរបស់ពួកគេទាបបំផុត ដែលធ្វើឱ្យការគ្រប់គ្រងហ្សែនមានភាពលំបាក37។
ការអភិវឌ្ឍន៍នៃមេរោគក្នុងស្រុកដែលផ្ទុកសារធាតុ allele ដែលចង់បាននៅក្នុងរដ្ឋ homozygous ដូចជា 83A:476 (Lanr1) និង Mandelup (AnMan) បានបើកទ្វារសម្រាប់ការសិក្សាពីភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose នៅចំពោះមុខវត្តមាននៃការរួមបញ្ចូលគ្នាប្រឆាំងនៃ alleles នៅក្នុងប្រជាជនព្រៃ។លទ្ធភាពនៃយន្តការម៉ូលេគុល។ប្រៀបធៀបការឆ្លើយតបការពារដែលបង្កើតដោយហ្សែនជាក់លាក់។ការសិក្សានេះបានវាយតម្លៃការឆ្លើយតបដំបូងរបស់ NLL ទៅនឹងការចាក់វ៉ាក់សាំង C. lupini ។ទីមួយ បន្ទះមេរោគ NLL អឺរ៉ុបដែលមាន 215 បន្ទាត់ត្រូវបានពិនិត្យដោយប្រើសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលដែលសម្គាល់ Lanr1 និង AnMan alleles ។បន្ទាប់មក ការធ្វើ phenotyping Anthracnose ត្រូវបានអនុវត្តលើ 50 NLL ដែលត្រូវបានជ្រើសរើសពីមុនសម្រាប់សញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុល ក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រង។ដោយផ្អែកលើការពិសោធន៍ទាំងនេះ បន្ទាត់ចំនួន 4 ខុសគ្នានៅក្នុងភាពធន់នឹង anthracnose និងសមាសធាតុ Allelic Lanr1/AnMan ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ទម្រង់នៃការបញ្ចេញហ្សែនការពារឌីផេរ៉ង់ស្យែលដោយប្រើវិធីសាស្រ្តបំពេញបន្ថែមពីរ៖ លំដាប់ RNA ឆ្លងកាត់កម្រិតខ្ពស់ និងបរិមាណ PCR ពេលវេលាពិត។
ការពិនិត្យមើលសំណុំនៃ NLL germplasm (N = 215) ជាមួយនឹងសញ្ញាសម្គាល់ Lanr1 (Anseq3 និង Anseq4) និង AnMan (Anseq4) និង AnMan (AnManM1) បានបង្ហាញថាមានតែបន្ទាត់មួយ (95726 នៅជិត Salamanca-b) ពង្រីក "ការតស៊ូ" allele សម្រាប់សញ្ញាសម្គាល់ទាំងអស់ដែលរកឃើញ 'ខណៈពេលដែលសមាមាត្រ 1 នៃសញ្ញាសម្គាល់ទាំងអស់' 58 (~73.5%) បន្ទាត់។ខ្សែចំនួន 13 បានបង្កើតអាឡែស "ធន់" ពីរនៃសញ្ញាសម្គាល់ Lanr1 ហើយ 8 ខ្សែបានផលិតអាឡែរ "ធន់" នៃ Lanr1 ។សញ្ញាសម្គាល់។Allele "តស៊ូ" នៃសញ្ញាសម្គាល់ AnMan (តារាងបន្ថែម S1) ។បន្ទាត់ពីរត្រូវបានសម្គាល់សម្រាប់សញ្ញាសម្គាល់ Anseq3 និងមួយ heterozygous សម្រាប់សញ្ញាសម្គាល់ AnManM1 ។42 បន្ទាត់ (19.5%) បានអនុវត្តដំណាក់កាលផ្ទុយគ្នានៃអាឡែរ Anseq3 និង Anseq4 ដែលបង្ហាញពីប្រេកង់ខ្ពស់នៃការបញ្ចូលគ្នារវាង loci ទាំងពីរនេះ។phenotypes Anthracnose ក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រង (តារាងបន្ថែម S2) បង្ហាញពីភាពប្រែប្រួលនៃភាពធន់ទ្រាំនៃហ្សែនដែលបានសាកល្បង ដែលត្រូវបានឆ្លុះបញ្ចាំងនៅក្នុងភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃ anthracnose ។ភាពខុសគ្នានៃពិន្ទុមធ្យមមានចាប់ពី 1.8 (ធន់នឹងមធ្យម) ដល់ 6.9 (ងាយរងគ្រោះ) និងភាពខុសគ្នានៃទម្ងន់រុក្ខជាតិមានចាប់ពី 0.62 (ងាយរងគ្រោះ) ដល់ 4.45 ក្រាម (ធន់)។ មានការជាប់ទាក់ទងគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងតម្លៃដែលបានសង្កេតឃើញនៅក្នុងការចម្លងពីរនៃការពិសោធន៍ (0.51 សម្រាប់ពិន្ទុភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ P = 0.00017 និង 0.61 សម្រាប់ទំងន់រុក្ខជាតិ P < 0.0001) ក៏ដូចជារវាងប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរនេះ (− 0.59 និង − 0.77, P < 0.000) ។ មានការជាប់ទាក់ទងគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងតម្លៃដែលបានសង្កេតឃើញនៅក្នុងការចម្លងពីរនៃការពិសោធន៍ (0.51 សម្រាប់ពិន្ទុភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ P = 0.00017 និង 0.61 សម្រាប់ទំងន់រុក្ខជាតិ P < 0.0001) ក៏ដូចជារវាងប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរនេះ (− 0.59 និង − 0.77, P < 10)។ Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях экспериментлаля (0,5 зеденталя) ни, P = 0,00017 и 0,61 для массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,0,579), 0,0,57,0,0,0,0,0 ការជាប់ទាក់ទងគ្នាដ៏សំខាន់មួយត្រូវបានរកឃើញរវាងតម្លៃដែលបានសង្កេតនៅក្នុងពាក្យដដែលៗចំនួនពីរនៃការពិសោធន៍ (0.51 សម្រាប់ពិន្ទុភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ P = 0.00017 និង 0.61 សម្រាប់ទំងន់រុក្ខជាតិ P < 0.0001) ក៏ដូចជារវាងប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរនេះ (- 0.59 និង -0.77, P < 10.010) ។在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评，分为0.51，重显着相关性（疾病严重程度评，分为0.51，里疾病严重程度评，为0.51，釤版0.51，010. 61，P < 0.0001)以及这两个参数之间（- 0.59和- 0.77，P < 0.0001)។在两次重复实验中观察的值之间存在相关性（疾病严重程度评分为。 5 分为。 00017，植物为为 0.61，p<0.0001）以及两个参数之间（（（- 0.59和– 0.59 5及两 个参数之间（（- 0.59和– 0.59 5和– 0.59–9.7–0. .0001). Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тя,0бя,0ст 017 и масса растения 0,61, P<0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,0001) 0,77, P <0,0001. មានការជាប់ទាក់ទងគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងតម្លៃដែលបានសង្កេតនៅក្នុងស្ទួន (ពិន្ទុភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ 0.51, P = 0.00017 និងទម្ងន់រុក្ខជាតិ 0.61, P < 0.0001) និងរវាងប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរនេះ (-0.59 និង -0.0001) 0.700 P.<0. ).រោគសញ្ញាធម្មតាដែលឃើញនៅក្នុងរុក្ខជាតិដែលងាយរងគ្រោះរួមមានការកៀប និងការរមួលនៃដើមដែលស្រដៀងនឹងរចនាសម្ព័ន្ធ "ធ្នូរបស់អ្នកគង្វាល" អមដោយដំបៅរាងពងក្រពើជាមួយនឹង sporozoites ពណ៌ទឹកក្រូច / ពណ៌ផ្កាឈូក (រូបភាពបន្ថែម 1) ។ការចូលរបស់អូស្ត្រាលីដែលផ្ទុកហ្សែន Lanr1 (83A:476 និង Tanjil) និង AnMan (Mandelup) មានភាពធន់នឹងមធ្យម 0.0331 និង 0.0036)។ខ្សែមួយចំនួនដែលផ្ទុក Lanr1 និង/ឬ AnMan alleles "ធន់ទ្រាំ" បង្ហាញរោគសញ្ញានៃជំងឺ។
គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ខ្សែ NLL មួយចំនួនដែលខ្វះសញ្ញាសម្គាល់ "ធន់" ណាមួយបានបង្ហាញឱ្យឃើញនូវកម្រិតខ្ពស់នៃភាពធន់ទ្រាំ anthracnose (ប្រៀបធៀបឬខ្ពស់ជាងសម្រាប់ Lanr1 ឬ AnMan genotypes) ដូចជា Boregine (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរ) Bojar (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់ពិន្ទុ និងតម្លៃ <0.0001 B និង 0.009/9 សម្រាប់រុក្ខជាតិ។ 1 សម្រាប់ពិន្ទុនិងមិនសំខាន់សម្រាប់ទម្ងន់) ។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ខ្សែ NLL មួយចំនួនដែលខ្វះសញ្ញាសម្គាល់ "ធន់" ណាមួយបានបង្ហាញឱ្យឃើញនូវកម្រិតខ្ពស់នៃភាពធន់ទ្រាំ anthracnose (ប្រៀបធៀបឬខ្ពស់ជាងសម្រាប់ Lanr1 ឬ AnMan genotypes) ដូចជា Boregine (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរ) Bojar (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់ពិន្ទុ និងតម្លៃ <0.0001 B និង 0.009/9 សម្រាប់រុក្ខជាតិ។ 1 សម្រាប់ពិន្ទុនិងមិនសំខាន់សម្រាប់ទម្ងន់) ។ Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показьрикий и к антракнозу (сопоставимый или более высокий, чем для генотипов Lanr1 или AnMan), таких как Boregine (значения 0,0,000) ar (значение P < 0,0001 для оценки и 0,001 для массы растения) និង популяции B-549/79b (знамчение P < 0,0001 для зиноя для ссы)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ខ្សែ NLL មួយចំនួនដែលខ្វះសញ្ញាសម្គាល់ 'ធន់' ណាមួយបានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់នៃភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose (អាចប្រៀបធៀបទៅនឹងឬខ្ពស់ជាងសម្រាប់ Lanr1 ឬ AnMan genotypes) ដូចជា Boregine (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរ), Bojar (តម្លៃ P < 0.0001 សម្រាប់តម្លៃ 5.0001 និងតម្លៃរុក្ខជាតិ 0.0001 សម្រាប់ការវាយតម្លៃ និងមិនសំខាន់សម្រាប់ទម្ងន់)។有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疟病抗渧因帎当或更高),例如Boregine（两个参数的P值< 0.0001）、Bojar（P值<得分为0.0001，植物重量不0.001）值< 0.0001，重量不显着). វាគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ដែលថាប្រព័ន្ធ NLL មួយចំនួនដែលមិនមានសញ្ញាសម្គាល់ "antigenic" ណាមួយបង្ហាញពីភាពធន់ទ្រាំផ្ដេកខ្ពស់ (សមមូលទៅនឹងហ្សែន Lanr1 ឬ AnMan ឬខ្ពស់ជាងនេះ) ដូចជា Boregine (ប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរ P < 0.0001), Bojar (តម្លៃ P < 0.0001, ទំងន់រុក្ខជាតិ 0.0015) និងតម្លៃមិនសំខាន់ 49/09b) ។ Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показаткини вести антракнозу (сравнимые или выше, чем у генотипов Lanr1 или AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметр010,0заметров) <0,000,000,000 масса растения 0,001) និង популяция B-549/79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ខ្សែ NLL មួយចំនួនដែលខ្វះ 'resistance' marker alleles បានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់នៃភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose (អាចប្រៀបធៀបទៅនឹងឬខ្ពស់ជាង Lanr1 ឬ AnMan genotypes) ដូចជា Boregine (តម្លៃ P សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងពីរ <0.0001), Bojar (P-value < 0.0001 B, ប្រជាជន 9.04) និងទំងន់រុក្ខជាតិ .0001, ទម្ងន់មិនសំខាន់).បាតុភូតនេះបង្ហាញពីលទ្ធភាពនៃប្រភពហ្សែនថ្មីនៃភាពធន់ ដោយពន្យល់ពីការខ្វះខាតនៃការជាប់ទាក់ទងគ្នារវាងហ្សែនសញ្ញាសម្គាល់ និងប្រភេទជំងឺ (តម្លៃ P ពី ~ 0.42 ដល់ ~ 0.98) ។ដូច្នេះការធ្វើតេស្ត Kolmogorov-Smirnov បានបង្ហាញថាទិន្នន័យស្តីពីការធន់ទ្រាំនឹងជំងឺ anthracnose ត្រូវបានចែកចាយប្រហែលជាធម្មតាសម្រាប់ពិន្ទុ (P-តម្លៃ 0.25 និង 0.11) និងម៉ាស់រុក្ខជាតិ (P-តម្លៃ 0.47 និង 0.55) ដែលបង្ហាញថាខ្ញុំសន្មត់ថាពាក់ព័ន្ធនឹង alleles ច្រើនជាង Lanr.1 និង AnMan ។
ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលនៃការពិនិត្យភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose បន្ទាត់ចំនួន 4 ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការវិភាគប្រតិចារិក៖ 83A:476, Boregine, Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660។ បន្ទាត់ទាំងនេះត្រូវបានធ្វើតេស្តឡើងវិញសម្រាប់ភាពធន់នឹងជំងឺគ្រុនចាញ់ក្នុងការពិសោធន៍ inoculation ដោយ RNA sequencing ផ្តល់ថាពួកគេដូចគ្នាទៅនឹងការធ្វើតេស្តមុនដែរ។តម្លៃពិន្ទុមានដូចខាងក្រោម៖ Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (6.11 ± 1.29) ។
ពិធីការ Illumina NovaSeq 6000 សម្រេចបានជាមធ្យម 40.5 Mread គូក្នុងមួយគំរូ (29.7 ទៅ 54.4 Mreads) (តារាងបន្ថែម S3) ។ពិន្ទុតម្រឹមក្នុងលំដាប់យោងមានចាប់ពី 75.5% ដល់ 88.6%។ការជាប់ទាក់ទងគ្នាជាមធ្យមនៃទិន្នន័យរាប់អានរវាងបំរែបំរួលពិសោធន៍រវាងការចម្លងជីវសាស្ត្រមានចាប់ពី 0.812 ដល់ 0.997 (មធ្យម 0.959)។ ក្នុងចំណោមហ្សែន 35,170 ដែលត្រូវបានវិភាគនោះ 2917 មិនបង្ហាញការបញ្ចេញមតិទេ ហើយហ្សែន 4785 ផ្សេងទៀតត្រូវបានបង្ហាញក្នុងកម្រិតតិចតួច (មធ្យមមធ្យម < 5) ។ ក្នុងចំណោមហ្សែន 35,170 ដែលត្រូវបានវិភាគនោះ 2917 មិនបង្ហាញការបញ្ចេញមតិទេ ហើយហ្សែន 4785 ផ្សេងទៀតត្រូវបានបង្ហាញក្នុងកម្រិតតិចតួច (មធ្យមមធ្យម < 5) ។ Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрелисир на кспрельсир не (базовое среднее <5). ក្នុងចំណោមហ្សែន 35,170 ដែលត្រូវបានវិភាគ 2917 មិនបានបង្ហាញពីការបញ្ចេញមតិទេ ហើយហ្សែនចំនួន 4785 ដែលនៅសេសសល់ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងកម្រិតមួយដែលមិនច្បាស់លាស់ (មូលដ្ឋានមធ្យម <5) ។在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（幇最5）៣៥.១៧០ Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели бепрессировалисьт реднее значение <5). ក្នុងចំណោមហ្សែន 35,170 ដែលត្រូវបានវិភាគ 2917 មិនត្រូវបានបង្ហាញទេ ហើយហ្សែនចំនួន 4785 ដែលនៅសេសសល់មានការបញ្ចេញមតិតិចតួច (មូលដ្ឋានមធ្យម <5) ។ដូច្នេះចំនួនហ្សែនដែលត្រូវបានចាត់ទុកថាបង្ហាញ (មធ្យមមធ្យម≥ 5) ក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍គឺ 27,468 (78.1%) (តារាងបន្ថែម S4) ។
ចាប់ពីចំនុចដំបូង បន្ទាត់ NLL ទាំងអស់បានឆ្លើយតបទៅនឹងការបញ្ចូល C. lupini (strain Col-08) ដោយ reprogramming the transcriptome (តារាងទី 1) ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ភាពខុសគ្នាសំខាន់ៗត្រូវបានគេសង្កេតឃើញរវាងបន្ទាត់។ដូច្នេះបន្ទាត់ធន់ទ្រាំ 83A: 476 (ផ្ទុកហ្សែន Lanr1) បានបង្ហាញការសរសេរឡើងវិញយ៉ាងសំខាន់នៅចំណុចដំបូង (6 hpi) ជាមួយនឹងការកើនឡើង 31-69 ដងនៃចំនួនហ្សែនឡើង និងចុះក្រោម បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណុចពេលវេលាផ្សេងទៀតនៅពេលនេះ។លើសពីនេះ កំពូលនេះមានរយៈពេលខ្លី ដោយសារការបង្ហាញហ្សែនមួយចំនួននៅតែប្រែប្រួលយ៉ាងខ្លាំងនៅចំណុចទីពីរ (12 hpi)។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ Boregine ដែលបានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់នៃភាពធន់ទ្រាំនៅក្នុងការធ្វើតេស្តពុករលួយនោះ មិនបានឆ្លងកាត់ការធ្វើប្រតិចារិកឡើងវិញដ៏ធំបែបនេះក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍នោះទេ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយចំនួនហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែល (DEG) គឺដូចគ្នាសម្រាប់បូរីហ្គីន និង 83A: 476 នៅ 12 HPI ។ទាំង Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 បានបង្ហាញកម្រិតកំពូល DEG នៅចំណុចចុងក្រោយ (48 l/s) ដែលបង្ហាញពីការពន្យារពេលទាក់ទងក្នុងការឆ្លើយតបផ្នែកការពារ។
ដោយសារតែ 83A:476 បានទទួលការសរសេរឡើងវិញនូវប្រតិចារិកដ៏ធំក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹង C. lupini នៅ 6 HPI បើប្រៀបធៀបទៅនឹងបន្ទាត់ផ្សេងទៀតទាំងអស់នោះ ~ 91% នៃ DEGs ដែលបានសង្កេតនៅពេលនេះ គឺជាពូជពង្សជាក់លាក់ (រូបភាពទី 1)។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ មានការត្រួតស៊ីគ្នាមួយចំនួននៅក្នុងការឆ្លើយតបដំបូងរវាងបន្ទាត់សិក្សា ដូចជា 68.5%, 50.9% និង 52.6% DEG នៅក្នុង Boregine, Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 រៀងគ្នា ត្រួតលើគ្នាជាមួយនឹងចំណុចដែលបានរកឃើញនៅក្នុង 83A: 476 ក្នុងពេលវេលាជាក់លាក់។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ DEGs ទាំងនេះមានត្រឹមតែផ្នែកតូចមួយ (0.97-1.70%) នៃ DEGs ទាំងអស់ដែលបានរកឃើញនាពេលបច្ចុប្បន្នដោយប្រើ 83A:476។លើសពីនេះទៀត 11 DEGs ពីគ្រប់បន្ទាត់ទាំងអស់មានភាពស៊ីសង្វាក់គ្នានៅពេលនេះ (តារាងបន្ថែម S4-S6) រួមទាំងសមាសធាតុទូទៅនៃការឆ្លើយតបការពាររុក្ខជាតិ៖ ប្រូតេអ៊ីនផ្ទេរជាតិខ្លាញ់ (TanjilG_32225) អង់ស៊ីម endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384) ប្រូតេអ៊ីន TanjilG_23384 ពីរប្រភេទ (TanjilG_23384) ប្រូតេអ៊ីន Tanjil28G និង 2-Tanjil2AM _31531) ប្រូតេអ៊ីនជ័រមូលដ្ឋាន (TanjilG_32352) និងប្រូតេអ៊ីនជញ្ជាំងកោសិកាដែលសំបូរទៅដោយ glycine (TanjilG_19701 និង TanjilG_19702)។វាក៏មានការត្រួតស៊ីគ្នាខ្ពស់ផងដែរនៅក្នុងការឆ្លើយតបប្រតិចារិករវាង 83A: 476 និង Boregine នៅ 24 HPI (សរុប 16-38% DEG) និងរវាង Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 នៅ 48 HPI (សរុប 14-20% DEG) ។
ដ្យាក្រាម Venn បង្ហាញពីចំនួនហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែល (DEG) នៅក្នុងបន្ទាត់ lupine ស្លឹកតូចចង្អៀត (NLL) ចាក់បញ្ចូលជាមួយ Colletotrichum lupini (សំពាធ Col-08 ដែលទទួលបានពីវាល lupine នៅ Wierzhenice ប្រទេសប៉ូឡូញ ឆ្នាំ 1999)។ខ្សែ NLL ដែលត្រូវបានវិភាគគឺ: 83A: 476 (ធន់ទ្រាំ, ផ្ទុក Lanr1 allele), Boregine (ធន់ទ្រាំ, ប្រវត្តិហ្សែនមិនស្គាល់), Mandelup (ធន់ទ្រាំល្មម, ផ្ទុក AnMan allele) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះខ្លាំង) ។អក្សរកាត់ hpi តំណាងឱ្យច្រើនម៉ោងបន្ទាប់ពីការចាក់វ៉ាក់សាំង។តម្លៃសូន្យ​ត្រូវ​បាន​យក​ចេញ ដើម្បី​សម្រួល​ក្រាហ្វិក។
សំណុំនៃហ្សែនដែលហួសប្រមាណនៅ 6 hpi ត្រូវបានវិភាគសម្រាប់វត្តមាននៃដែនហ្សែន R (តារាងបន្ថែម S7) ។ការសិក្សានេះបានបង្ហាញពីការបញ្ចូលប្រតិចារិកនៃហ្សែនធន់នឹងជំងឺបុរាណជាមួយនឹងដែន NBS-LRR ត្រឹមតែ 83A:476 ប៉ុណ្ណោះ។សំណុំនេះមានហ្សែន TIR-NBS-LRR មួយ (tanjilg_05042) ហ្សែន CC-NBS-LRR ចំនួនប្រាំ (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, និង tanjilg_2,1616), និង tanjilg_16, និង 16162 បួន NBS-LRRE (tanjilg_16162) ក៏ដូចជា Four NBS-Lrr (tanjilg_16162) និង Four NBS-LRR (TANJILG_16162) ។ហ្សែន​ទាំង​អស់​នេះ​មាន​ដែន Canonical ដែល​បាន​រៀបចំ​តាម​លំដាប់​ដែល​បាន​អភិរក្ស។បន្ថែមពីលើហ្សែនដែន NBS-LRR kinases RLL ជាច្រើនត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មក្នុងល្បឿន 6 hpi ដែលមួយនៅក្នុង Boregine (TanjilG_19877) ពីរនៅ Mandelup (TanjilG_07141 និង TanjilG_19877) និងក្នុងចំនួនប្រជាជន 22660 (TanjilG_19877) និង 2 នាក់។ ៧:៤៧៦ .
ហ្សែនដែលមានការបញ្ចេញមតិផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងខ្លាំងក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការបង្កកំណើតជាមួយ C. lupini (strain Col-08) ត្រូវបានទទួលរងនូវការវិភាគលើហ្សែន Ontology (GO) (តារាងបន្ថែម S8) ។ ពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលត្រូវបានតំណាងញឹកញាប់បំផុតគឺ “GO:0006952 defense response” ដែលបានបង្ហាញខ្លួននៅក្នុងបន្សំ 6 ក្នុងចំណោម 16 (time × line) ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្ពស់ (តម្លៃ P < 0.001) (រូបភាព 2)។ ពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលត្រូវបានតំណាងញឹកញាប់បំផុតគឺ “GO:0006952 defense response” ដែលបានបង្ហាញខ្លួននៅក្នុងបន្សំ 6 ក្នុងចំណោម 16 (time × line) ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្ពស់ (តម្លៃ P < 0.001) (រូបភាព 2)។ Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был « GO: 0006952 зыйрического процесса был « GO: 0006952 зый,вятный в 6 из 16 (время × линия) комбинаций с высокой значимостью (значение P<0,001) (рис. 2). ពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលត្រូវបានតំណាងច្រើនហួសហេតុបំផុតគឺ 'GO:0006952 defense response' ដែលបានបង្ហាញខ្លួននៅក្នុងបន្សំ 6 នៃ 16 (time × lineage) ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្ពស់ (តម្លៃ P < 0.001) (រូបភាព 2)។最常被过度代表的生物过程术语是“GO: 0006952 防御反应”，它出现在16 个有（时闸×琿）高显着性 (P 值< 0.001) (图2) ។ ពាក្យតំណាងនៃដំណើរការជីវសាស្រ្តភាគច្រើនគឺ "GO:0006952 defense response" ដែលបង្ហាញនៅក្នុងបន្សំ 6 ក្នុងចំណោម 16 (时间×线) ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្ពស់ (តម្លៃ P < 0.001) (图2) ។ Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был « GO: 0006952 Defense Response в 6 пляряы » 6 комбинаций (время × линия) с высокой значимостью (значение P<0,001) (рис. 2). ពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលត្រូវបានតំណាងញឹកញាប់បំផុតគឺ 'GO:0006952 Defense Response' ដែលបានលេចឡើងក្នុង 6 ក្នុងចំណោម 16 បន្សំ (ពេលវេលា × បន្ទាត់) ដែលមានសារៈសំខាន់ខ្ពស់ (តម្លៃ P < 0.001) (រូបភាព 2) ។ពាក្យនេះត្រូវបានតំណាងលើសកំណត់នៅចំណុចពេលវេលាពីរនៅក្នុង 83A: 476 និង Boregine (6 និង 24 hpi) និងនៅពេលតែមួយនៅក្នុង Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 (12 និង 6 hpi រៀងគ្នា) ។នេះគឺជាលទ្ធផលដែលរំពឹងទុក ដោយបញ្ជាក់ពីការឆ្លើយតបប្រឆាំងនឹងផ្សិតនៃខ្សែដែលធន់ទ្រាំ។លើសពីនេះ 83A:476 បានឆ្លើយតបទៅនឹង C. lupini ដោយបង្កើតហ្សែនយ៉ាងឆាប់រហ័សទាក់ទងនឹងការផ្ទុះអុកស៊ីតកម្មដែលតំណាងដោយពាក្យ "GO:0055114 redox process" ដែលបង្ហាញពីការឆ្លើយតបការពារជាក់លាក់ ខណៈពេលដែល Boregine បង្ហាញពីការឆ្លើយតបការពារជាក់លាក់ ដែលទាក់ទងនឹងពាក្យ 'GO'។: 0006950 ការឆ្លើយតបស្ត្រេស”។ចំនួនប្រជាជន 22660 បានធ្វើឱ្យសកម្មការឆ្លើយតបនៃភាពធន់ទ្រាំផ្ដេកដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំដោយបញ្ជាក់ពីចំនួនលើសនៃពាក្យ "GO: 0016104 ដំណើរការនៃ triterpene biosynthesis" និង "GO: 0006722 ដំណើរការនៃការរំលាយអាហារ triterpene" (លក្ខខណ្ឌទាំងពីរជាកម្មសិទ្ធិនៃសំណុំហ្សែនដូចគ្នា) ដោយគិតគូរពីលទ្ធផលនៃការវិភាគ GO នៃស្ថេរភាពនៃប្រតិកម្ម 22660. លើសពីនេះ ប្រតិកម្មដំបូង 83A:476 (6 hpi) និងប្រតិកម្មពន្យាពេល Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 រួមបញ្ចូលពាក្យ GO:0015979 'ការសំយោគរូបថត' និងដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលពាក់ព័ន្ធផ្សេងទៀត។
លក្ខខណ្ឌនៃហ្សែន bioprocess ontology ដែលបានជ្រើសរើសនៅក្នុងចំណារពន្យល់នៃហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលក្នុងអំឡុងពេលការឆ្លើយតប transcriptome នៃ lupine ស្លឹកតូចចង្អៀត (NLL) inoculated ជាមួយ anthrax lupine (Col-08 strain ទទួលបានពីវាល lupine នៅ Wierzhenice ប្រទេសប៉ូឡូញក្នុងឆ្នាំ 1999) គឺជាការបំផ្លើសយ៉ាងខ្លាំង។ខ្សែ NLL ដែលត្រូវបានវិភាគគឺ: 83A: 476 (ធន់ទ្រាំ ផ្ទុក Lanr1 allele ដូចគ្នា) Boregine (ធន់ទ្រាំ ប្រវត្តិហ្សែនមិនស្គាល់) Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម ផ្ទុកសារធាតុ AnMan allele) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ)។
ដោយសារតែការសិក្សានេះមានគោលបំណងកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនដែលរួមចំណែកដល់ការធន់ទ្រាំនឹងជំងឺ anthracnose ហ្សែនដែលបានកំណត់ក្នុងពាក្យ GO “GO: 0006952 Defensive responses” និង “GO: 0055114 Redox processes” ត្រូវបានវិភាគដោយកាត់ផ្តាច់ចាប់តាំងពីមូលដ្ឋានមានន័យថា ≥ 30 ដែលមានយ៉ាងហោចណាស់មួយបន្ទាត់។× ចំណុច​ក្នុង​ពេល​រួម​បញ្ចូល​តម្លៃ​ស្ថិតិ​សំខាន់​នៃ log2 (ការ​ផ្លាស់​ប្តូ​រ​ដង​) ។ចំនួនហ្សែនដែលបំពេញតាមលក្ខណៈវិនិច្ឆ័យទាំងនេះគឺ 65 សម្រាប់ GO:0006952 និង 524 សម្រាប់ GO:0055114។
83A: 476 បង្ហាញពីកំពូល DEG ពីរដែលត្រូវបានកត់សម្គាល់ជាមួយនឹងពាក្យ GO: 0006952 ដែលទីមួយមាន 6 ហ្សែនក្នុងមួយអ៊ីញ (64 ហ្សែន និយតកម្មឡើងលើ និងចុះក្រោម) និងទីពីរនៅ 24 ហ្សែនក្នុងមួយអ៊ីញ (15 ហ្សែន ឡើងតែបទប្បញ្ញត្តិប៉ុណ្ណោះ)។Boregine ក៏បានបង្ហាញផងដែរថា GO:0006952 ឡើងដល់កំពូលនៅចំណុចដូចគ្នា ប៉ុន្តែជាមួយនឹង DEG តិចជាង (11 និង 8) និងការធ្វើឱ្យសកម្មអនុគ្រោះ។Mandeloop បានបង្ហាញពីកំពូលពីរនៃ GO:0006952 នៅ 12 និង 48 HPI ដែលទាំងពីរផ្ទុកហ្សែន 12 (ទីមួយមានហ្សែនសកម្ម និងទីពីរមានហ្សែនទប់ស្កាត់ប៉ុណ្ណោះ) ខណៈពេលដែលប្រជាជន 22660 នៅ 6 HPI (13 ហ្សែន) មានភាពលេចធ្លោនៃការកើនឡើងខ្ពស់បំផុត។បទប្បញ្ញត្តិ។វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថា 96.4% នៃ GO:0006952 DEG នៅក្នុងកំពូលទាំងនេះមានប្រភេទដូចគ្នានៃការឆ្លើយតប (ឡើងលើ ឬចុះក្រោម) ដែលបង្ហាញពីការត្រួតស៊ីគ្នាយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការឆ្លើយតបការពារ ទោះបីជាមានភាពខុសគ្នានៃចំនួនហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធក៏ដោយ។ក្រុមដ៏ធំបំផុតនៃលំដាប់ដែលទាក់ទងនឹងពាក្យ GO:0006952 អ៊ិនកូដប្រូតេអុីនដែលទាក់ទងនឹងសារភាពតានតឹងអត់ឃ្លាន 22 (SAM22-like) ដែលជាកម្មសិទ្ធិរបស់ប្រូតេអ៊ីនដែលមានទំនាក់ទំនងនឹងធាតុបង្កជំងឺ (PR-10) ថ្នាក់ទី 10 និងស្រទាប់ប្រូតេអ៊ីនស្នូល។ប្រូតេអ៊ីនស្រដៀងគ្នា (ដូច MLP) ប្រូតេអ៊ីន (រូបភាពទី 3) ។ក្រុមទាំងពីរមានភាពខុសប្លែកគ្នានៅក្នុងធម្មជាតិនៃការបញ្ចេញមតិ និងទិសដៅនៃការឆ្លើយតប។ហ្សែនដែលបានអ៊ិនកូដប្រូតេអ៊ីនដូច SAM22 បានបង្ហាញពីភាពស៊ីសង្វាក់គ្នា និងសំខាន់នៅដំណាក់កាលដំបូង (6 ឬ 12 hpi) ហើយជាទូទៅមិនឆ្លើយតបនៅចុងបញ្ចប់នៃការពិសោធន៍ (48 hpi) ខណៈពេលដែលប្រូតេអ៊ីនដូច MLP បង្ហាញពីការសម្របសម្រួលនៅ 6 hpi ។hpi ។83A:476 និង Mandelup នៅ 48 hp/in ស្ទើរតែគ្រប់ចំណុចទិន្នន័យផ្សេងទៀតមិនឆ្លើយតប។លើសពីនេះទៀត ភាពខុសគ្នានៃទម្រង់នៃការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែនប្រូតេអ៊ីនដូច SAM22 បានតាមដានភាពប្រែប្រួលនៃភាពធន់ទ្រាំនឹងជំងឺ anthracnose ដោយសារតែបន្ទាត់ដែលធន់ទ្រាំកាន់តែច្រើនមានចំណុចពេលវេលាច្រើនដែលជំរុញហ្សែនទាំងនេះច្រើនជាងហ្សែនដែលងាយរងគ្រោះ។ហ្សែន LlR18A/B-like PR-10 មួយផ្សេងទៀតបានបង្ហាញពីគំរូនៃការបញ្ចេញមតិស្រដៀងគ្នាទៅនឹងហ្សែនប្រូតេអ៊ីនដូច SAM22 ។
សមាសធាតុសំខាន់ៗនៃពាក្យដំណើរការជីវសាស្រ្ត "GO:0006952 Defence Response" និងគំរូនៃការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែនបេក្ខជននៃ Lanr1 និង AnMan alleles ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ។មាត្រដ្ឋាន Log2 តំណាងឱ្យតម្លៃ log2 (ការផ្លាស់ប្តូរផ្នត់) រវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានពី lupine fields, Wizhenica, Poland, 1999) និងការគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) រុក្ខជាតិក្នុងពេលតែមួយ។ខ្សែស្លឹកតូចចង្អៀតខាងក្រោមត្រូវបានវិភាគ៖ 83A:476 (ធន់ទ្រាំ ផ្ទុក Lanr1 allele) បូរីហ្គីន (ធន់ទ្រាំ មិនស្គាល់ប្រវត្តិហ្សែន) Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម ផ្ទុកសារធាតុ AnMan allele) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ)។
លើសពីនេះទៀតទម្រង់កន្សោមនៃហ្សែនបេក្ខជន RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) និង AnMan (TanjilG_12861) ត្រូវបានវាយតម្លៃ (រូបភាពទី 3) ។ហ្សែន TanjilG_05042 បានបង្ហាញពីការឆ្លើយតបយ៉ាងសំខាន់ (ការធ្វើឱ្យសកម្ម) នៅ 83A: 476 នៅចំណុចដំបូង (6 hpi) ខណៈពេលដែល TanjilG_12861 មានសារសំខាន់នៅក្នុង Mandeloop ត្រឹមតែពីរចំណុចប៉ុណ្ណោះ៖ 6 hpi (បទប្បញ្ញត្តិចុះក្រោម) និង 24 hpi (6 hpi) ។ជាមួយ។ )អាចលៃតម្រូវបាន)) ។
ហ្សែនដែលហួសប្រមាណបំផុតនៅក្នុងពាក្យ GO:0055114 "ដំណើរការ redox" គឺជាហ្សែនដែលបំប្លែងសារជាតិប្រូតេអ៊ីន cytochrome P450 និង peroxidase (រូបភាពទី 4)។សម្រាប់សំណាកដែលដាច់ដោយឡែកពី 83A:476 នៅ 6 HPI តម្លៃអតិបរមា ឬអប្បបរមានៃ log2 (ការផ្លាស់ប្តូរផ្នត់) (សម្រាប់ 86.6% នៃហ្សែន) ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញជាទូទៅរវាងរុក្ខជាតិដែលមិនមានសារធាតុចិញ្ចឹម និងការគ្រប់គ្រង ដោយបញ្ជាក់ពីការឆ្លើយតបខ្ពស់នៃប្រភេទហ្សែននេះចំពោះការរួមភេទ។83A: 476 បានបង្ហាញពី GO ដ៏សំខាន់បំផុត: 0055114 DEG នៅ 6 hpi (503 ហ្សែន) ខណៈពេលដែលបន្ទាត់ដែលនៅសល់នៅ 48 hpi (Boregine, 31 genes; Mandelup, 85 genes; និងចំនួនប្រជាជន 22660, 78 genes))។នៅក្នុងហ្សែនភាគច្រើននៃគ្រួសារ GO:0055114 ការឆ្លើយតបពីរប្រភេទចំពោះការចាក់វ៉ាក់សាំង (ការធ្វើឱ្យសកម្ម និងការរារាំង) ត្រូវបានអង្កេត។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍រហូតដល់ 97.6% នៃ DEGs ដែលត្រូវបានកំណត់សម្រាប់ពាក្យ GO: 0055114 នៅក្នុង Mandelupe នៅ 48 hp ការសង្កេតទាំងនេះបានបង្ហាញថាទោះបីជាមានមាត្រដ្ឋានតូចជាង (ឧទាហរណ៍ចំនួននៃហ្សែន redox ដែលផ្លាស់ប្តូរ 85 ធៀបនឹង 503) លំនាំនៃការឆ្លើយតបនឹងការពន្យាពេលនៃ 85 ធៀបនឹង 503 នៃ mandelupe ។ A: 476 ។នៅក្នុង Boregine និងចំនួនប្រជាជន 22660 ការបញ្ចូលគ្នានេះគឺទាបជាងនៅ 51.6% និង 75.6% រៀងគ្នា។
គំរូនៃការបញ្ចេញមតិនៃធាតុផ្សំសំខាន់ៗនៃពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្ត "GO:0055114 Redox process" ត្រូវបានបង្ហាញ។មាត្រដ្ឋាន Log2 តំណាងឱ្យតម្លៃ log2 (ការផ្លាស់ប្តូរផ្នត់) រវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានពី lupine fields, Wizhenica, Poland, 1999) និងការគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) រុក្ខជាតិក្នុងពេលតែមួយ។ខ្សែស្លឹកតូចចង្អៀតខាងក្រោមត្រូវបានវិភាគ៖ 83A:476 (ធន់ទ្រាំ ផ្ទុក Lanr1 allele) បូរីហ្គីន (ធន់ទ្រាំ មិនស្គាល់ប្រវត្តិហ្សែន) Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម ផ្ទុកសារធាតុ AnMan allele) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ)។
83A: 476 ការឆ្លើយតបតាមប្រតិចារិកចំពោះការ inoculation ជាមួយ C. lupini (strain Col-08) ក៏រួមបញ្ចូលផងដែរនូវការសំរបសំរួលនៃហ្សែនដោយស្ងៀមស្ងាត់ដែលត្រូវបានសន្មតថាជាពាក្យ GO:0015979 "ការសំយោគរូបភាព" និងដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលពាក់ព័ន្ធផ្សេងទៀត (រូបភាពទី 5)។សំណុំ GO:0015979 DEG នេះមានហ្សែន 105 ដែលត្រូវបានសង្កត់យ៉ាងខ្លាំងនៅ 6 hpi នៅ 83A: 476 ។នៅក្នុងសំណុំរងនេះ ហ្សែន 37 ក៏ត្រូវបានកាត់បន្ថយផងដែរនៅក្នុង Mandelup នៅ 48 HPI និង 35 ក្នុងពេលតែមួយនៅក្នុងចំនួនប្រជាជន 22660 រួមទាំង 19 DEGs ទូទៅចំពោះហ្សែនទាំងពីរ។គ្មាន DEGs ទាក់ទងនឹងពាក្យ GO: 0015979 ត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងការរួមបញ្ចូលគ្នាណាមួយ (បន្ទាត់ x ពេលវេលា) ។
គំរូនៃការបញ្ចេញមតិនៃធាតុផ្សំសំខាន់ៗនៃពាក្យនៃដំណើរការជីវសាស្រ្ត "GO:0015979 Photosynthesis" ត្រូវបានបង្ហាញ។មាត្រដ្ឋាន Log2 តំណាងឱ្យតម្លៃ log2 (ការផ្លាស់ប្តូរផ្នត់) រវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានពី lupine fields, Wizhenica, Poland, 1999) និងការគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) រុក្ខជាតិក្នុងពេលតែមួយ។ខ្សែស្លឹកតូចចង្អៀតខាងក្រោមត្រូវបានវិភាគ៖ 83A:476 (ធន់ទ្រាំ ផ្ទុក Lanr1 allele) បូរីហ្គីន (ធន់ទ្រាំ មិនស្គាល់ប្រវត្តិហ្សែន) Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម ផ្ទុកសារធាតុ AnMan allele) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ)។
ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលនៃការវិភាគការបញ្ចេញមតិឌីផេរ៉ង់ស្យែល និងសន្មតថាជាប់ពាក់ព័ន្ធក្នុងការឆ្លើយតបការពារប្រឆាំងនឹងផ្សិតបង្កជំងឺ សំណុំនៃហ្សែនចំនួនប្រាំពីរនេះត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់បរិមាណនៃទម្រង់កន្សោមដោយ PCR ពេលវេលាពិត (តារាងបន្ថែម S9) ។
ហ្សែនប្រូតេអ៊ីនដាក់ TanjilG_10657 ត្រូវបានជំរុញយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងបន្ទាត់ដែលបានសិក្សាទាំងអស់ និងចំណុចពេលវេលាធៀបនឹងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង (ធ្វើត្រាប់តាម) (តារាងបន្ថែម S10, S11)។លើសពីនេះទៀត ទម្រង់កន្សោមរបស់ TanjilG_10657 បានបង្ហាញពីនិន្នាការកើនឡើងក្នុងអំឡុងពេលនៃការពិសោធន៍សម្រាប់បន្ទាត់ទាំងអស់។ចំនួនប្រជាជន 22660 បានបង្ហាញពីភាពប្រែប្រួលខ្ពស់បំផុតនៃ TanjilG_10657 ចំពោះ inoculation ជាមួយនឹងការធ្វើឱ្យសកម្ម 114 ដង និងកម្រិតការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងខ្ពស់បំផុត (4.4 ± 0.4) នៅ 24 HPI (រូបភាព 6a) ។ហ្សែនប្រូតេអ៊ីន PR10 LlR18A TanjilG_27015 ក៏បានបង្ហាញពីការធ្វើឱ្យសកម្មនៅទូទាំងបន្ទាត់ និងពេលវេលាទាំងអស់ ដោយមានអត្ថន័យស្ថិតិនៅចំណុចទិន្នន័យភាគច្រើន (រូបភាព 6b)។ស្រដៀងគ្នាទៅនឹង TanjilG_10657 កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងខ្ពស់បំផុតនៃ TanjilG_27015 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងចំនួនប្រជាជន 22660 ដែលត្រូវបានចាក់បញ្ចូលក្នុងកម្រិត 24 HPI (19.5 ± 2.4)។ហ្សែន endochitinase អាស៊ីត TanjilG_04706 ត្រូវបានគ្រប់គ្រងយ៉ាងសំខាន់នៅគ្រប់បន្ទាត់ និងគ្រប់ពេលវេលា លើកលែងតែបូរីហ្គីន 6 ហីភី (រូបភាព 6 គ)។វាត្រូវបានជំរុញយ៉ាងខ្លាំងនៅចំណុចដំបូង (6 HPI) នៅ 83A: 476 (ដោយ 10.5 ដង) និងកើនឡើងក្នុងកម្រិតមធ្យមនៅក្នុងបន្ទាត់ផ្សេងទៀត (ដោយ 6.6-7.5 ដង) ។ក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ការបញ្ចេញមតិរបស់ TanjilG_04706 នៅតែមានកម្រិតស្រដៀងគ្នានៅក្នុង 83A:476 និង Boregine ខណៈពេលដែលនៅក្នុង Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 វាបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំង ដោយឈានដល់តម្លៃខ្ពស់ទាក់ទងគ្នា (5.9 ± 1.5 និង 6.2 ± 1.5 រៀងគ្នា) ។ហ្សែនដូច endoglucan-1,3-β-glucosidase TanjilG_23384 បានបង្ហាញពីការធ្វើឱ្យសកម្មខ្ពស់នៅចំណុចពីរដំបូង (6 និង 12 hpi) នៅគ្រប់បន្ទាត់ទាំងអស់ លើកលែងតែចំនួនប្រជាជន 22660 (រូបភាព 6d)។កម្រិតការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងខ្ពស់បំផុតនៃ TanjilG_23384 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅចំណុចលើកទីពីរ (12 hpi) នៅក្នុង Mandelup (2.7 ± 0.3) និង 83A: 476 (1.5 ± 0.1) ។នៅ 24 HPI កន្សោម TanjilG_23384 មានកម្រិតទាបនៅក្នុងបន្ទាត់ដែលបានសិក្សាទាំងអស់ (ពី 0.04 ± 0.009 ដល់ 0.44 ± 0.12) ។
ទម្រង់កន្សោមនៃហ្សែនដែលបានជ្រើសរើស (ag) បង្ហាញដោយ PCR បរិមាណ។លេខ 6, 12 និង 24 តំណាងឱ្យម៉ោងបន្ទាប់ពីការចាក់វ៉ាក់សាំង។ហ្សែន LanDExH7 និង LanTUB6 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតា ហើយ LanTUB6 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការក្រិតតាមខ្នាតអន្តរស៊េរី។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតស្តង់ដារដោយផ្អែកលើការចម្លងជីវសាស្ត្រចំនួនបី ដែលនីមួយៗជាមធ្យមនៃការចម្លងបច្ចេកទេសចំនួនបី។ សារៈសំខាន់ស្ថិតិនៃភាពខុសគ្នានៃកម្រិតការបញ្ចេញមតិរវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានក្នុងឆ្នាំ 1999 ពីវាល lupine នៅ Wierzenica ប្រទេសប៉ូឡូញ) និងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង (mock-inoculated) ត្រូវបានសម្គាល់ខាងលើចំណុចទិន្នន័យ (*P តម្លៃ < 0.05, ** តម្លៃ P ≤ 0.0) ។ សារៈសំខាន់ស្ថិតិនៃភាពខុសគ្នានៃកម្រិតការបញ្ចេញមតិរវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានក្នុងឆ្នាំ 1999 ពីវាល lupine នៅ Wierzenica ប្រទេសប៉ូឡូញ) និងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង (mock-inoculated) ត្រូវបានសម្គាល់ខាងលើចំណុចទិន្នន័យ (*P តម្លៃ < 0.05, ** តម្លៃ P ≤ 0.0) ។ Статистическая значимость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм 9 в гл. 08 я люпина в Верженице, Польша) និង контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена начаче тончнеми (0* да знеча, 0** ние P ≤ 0,01, ***значение P ≤ 0,001)។ ភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់តាមស្ថិតិក្នុងកម្រិតការបញ្ចេញមតិរវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានក្នុងឆ្នាំ 1999 ពីវាល lupine ក្នុង Wierzhenice ប្រទេសប៉ូឡូញ) និងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) ត្រូវបានកត់សម្គាល់ខាងលើចំណុចទិន្នន័យ (*P value < 0.05, **P-value ≤ 0.01) ។接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植龼得和对照（模拟接种）植徼得统计学显着性标记在数据点上方 (*P值< 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001) ។接种(colletotrichum lupini, color-08株, 1999年波兰波兰 wierzenica的羽扇获得)和对照（接种幼植平植的统计学显着性标记数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001)។ Статистически значимые различия в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамнпличойси, Col-08, в Верженице, Польша, ក្នុងឆ្នាំ 1999 г.) និង контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены <нд точакаи 0 (0) -значение ≤ 0,01, ***P-значение ≤ 0,001)។ ភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់តាមស្ថិតិក្នុងកម្រិតការបញ្ចេញមតិរវាង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ទទួលបានពីវាល lupine នៅ Verzhenice ប្រទេសប៉ូឡូញក្នុងឆ្នាំ 1999) និងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) ត្រូវបានកត់សម្គាល់ខាងលើចំណុចទិន្នន័យ (*P តម្លៃ < 0.05 , **P-value ≤ 0.01,**P-value ≤ 0.01.បន្ទាត់ NLL ដែលត្រូវបានវិភាគគឺ: 83A: 476 (ធន់ទ្រាំ, ផ្ទុក Lanr1 allele ដូចគ្នា), Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម, ផ្ទុក homozygous AnMan allele), Boregine (ធន់ទ្រាំ, ប្រវត្តិហ្សែនមិនស្គាល់) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ) ។
ហ្សែនបេក្ខជន TanjilG_05042 នៅទីតាំង Lanr1 បានបង្ហាញពីគំរូនៃការបញ្ចេញមតិខុសគ្នាយ៉ាងខ្លាំងពីទម្រង់ដែលទទួលបានពីការសិក្សា RNA-seq (រូបភាព 6e) ។ការធ្វើឱ្យសកម្មយ៉ាងសំខាន់នៃហ្សែននេះត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុង Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 (រហូតដល់ 39.7 និង 11.7 ដងរៀងគ្នា) ដែលបណ្តាលឱ្យមានកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិខ្ពស់ (រហូតដល់ 1.4 ± 0.14 និង 7.2 ± 1.3 រៀងគ្នា) ។83A:476 ក៏បានបង្ហាញពីការកែប្រែមួយចំនួននៃហ្សែន TanjilG_05042 (រហូតដល់ 3.8 ដង) ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងដែលសម្រេចបាន (0.044 ± 0.002) គឺទាបជាង 30 ដងច្រើនជាងអ្វីដែលបានសង្កេតនៅក្នុង Mandelup និងប្រជាជន 22660 ។ការវិភាគដោយ qPCR បានបង្ហាញពីភាពខុសប្លែកគ្នាយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិរវាងប្រភេទហ្សែននៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់ដែលបានចាក់ថ្នាំបង្ការ (គ្រប់គ្រង) ដោយឈានដល់ភាពខុសគ្នា 58 ដងរវាងចំនួនប្រជាជន 22660 និង 83A:476 ក៏ដូចជារវាងប្រជាជន 22660 និង 22660។ ភាពខុសគ្នាពីរដងត្រូវបានសម្រេចរវាង Mandal.upine និង
ហ្សែនបេក្ខជននៅឯទីតាំង AnMan, TanjilG_12861, ត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការចាក់វ៉ាក់សាំងនៅក្នុង 83A:476 ហើយ Mandelup គឺអព្យាក្រឹតនៅក្នុងចំនួនប្រជាជន 22660 ហើយត្រូវបានកាត់បន្ថយនៅក្នុង Boregine (រូបភាព 6f) ។កន្សោមដែលទាក់ទងនៃហ្សែន TanjilG_12861 គឺខ្ពស់បំផុតនៅក្នុង 83A: 476 (0.14 ± 0.01) ។ហ្សែនប្រូតេអ៊ីនឆក់កំដៅ 17.4 kDa class I TanjilG_05080 HSP17.4 បានបង្ហាញពីកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងទាបជាងនៅក្នុងប្រភេទដែលបានសិក្សាទាំងអស់ និងចំណុចពេលវេលា (រូបភាព 6g)។តម្លៃខ្ពស់បំផុតត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅ 24 HPI ក្នុងចំនួនប្រជាជន 22660 (0.14 ± 0.02 ការកើនឡើងប្រាំបីដងក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការចាក់វ៉ាក់សាំង) ។
ការប្រៀបធៀបទម្រង់នៃការបញ្ចេញហ្សែន (រូបភាពទី 7) បង្ហាញពីទំនាក់ទំនងខ្ពស់រវាង TanjilG_10657 និងហ្សែនចំនួនបួនផ្សេងទៀត៖ TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.7060) និង។លទ្ធផល​បែបនេះ​អាច​បង្ហាញ​ពី​ការ​សហការ​គ្នា​នៃ​ហ្សែន​ទាំងនេះ​ក្នុង​កំឡុង​ពេល​ការ​ឆ្លើយតប​ផ្នែក​ការពារ។ហ្សែន TanjilG_12861 និង TanjilG_23384 បានបង្ហាញពីទម្រង់នៃការបញ្ចេញមតិខុសៗគ្នា ជាមួយនឹងតម្លៃមេគុណទំនាក់ទំនង Pearson ទាប (ពី 0.08 ទៅ 0.43 និង -0.19 ទៅ 0.28 រៀងគ្នា) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងហ្សែនផ្សេងទៀត។
ទំនាក់ទំនងរវាងទម្រង់កន្សោមហ្សែនត្រូវបានរកឃើញដោយប្រើ PCR បរិមាណ។បន្ទាត់ lupine តូចចង្អៀតខាងក្រោមត្រូវបានវិភាគ៖ 83A: 476 (ធន់ទ្រាំ, ផ្ទុក Lanr1 allele), Mandelup (ធន់នឹងមធ្យម, ផ្ទុក homozygous AnMan allele), Boregine (ធន់ទ្រាំ, ប្រវត្តិហ្សែនមិនស្គាល់) និងចំនួនប្រជាជន 22660 (ងាយរងគ្រោះ) ។ពិន្ទុពេលវេលាចំនួនបីត្រូវបានគណនា (6, 12 និង 24 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការ inoculation) រួមទាំង inoculated (Colletotrichum lupini, strain Col-08 ដែលទទួលបានពីវាល lupine នៅ Wierzhenice ប្រទេសប៉ូឡូញក្នុងឆ្នាំ 1999) និងការគ្រប់គ្រង (sham-inoculated) រុក្ខជាតិ។មាត្រដ្ឋានបង្ហាញពីតម្លៃនៃមេគុណទំនាក់ទំនង Pearson ។
ដោយផ្អែកលើទិន្នន័យដែលទទួលបាននៅកម្លាំង 6 សេះក្នុងមួយអ៊ីញ WGCNA ត្រូវបានអនុវត្តនៅលើ 9981 DEG ដែលបានកំណត់ដោយការប្រៀបធៀបរុក្ខជាតិដែលមិនមានជាតិគីមី និងគ្រប់គ្រងដើម្បីផ្តោតលើការឆ្លើយតបការពារដំបូង (តារាងបន្ថែម S12) ។ម៉ូឌុលហ្សែនចំនួន 22 (ចង្កោម) ត្រូវបានរកឃើញជាមួយនឹងទម្រង់បញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងគ្នា (វិជ្ជមាន ឬអវិជ្ជមាន) រវាងប្រភេទហ្សែន និងវ៉ារ្យ៉ង់ពិសោធន៍។ ជាមធ្យម កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនបានធ្លាក់ចុះនៅក្នុងលំដាប់ 83A: 476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (ទោះជាយ៉ាងណានៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់ទាំងពីរនេះ និន្នាការនេះគឺខ្លាំងជាងនៅក្នុងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង)។ ជាមធ្យម កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនបានធ្លាក់ចុះនៅក្នុងលំដាប់ 83A: 476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (ទោះជាយ៉ាងណានៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់ទាំងពីរនេះ និន្នាការនេះគឺខ្លាំងជាងនៅក្នុងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង)។ В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (в обоих вариантах , о днентах , о днентах , однентах , о днентах , сильнее у контрольных растений). ជាមធ្យម កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនបានថយចុះនៅក្នុងលំដាប់ 83A: 476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (ទោះជាយ៉ាងណានៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់ទាំងពីរនេះ និន្នាការនេះគឺខ្លាំងជាងនៅក្នុងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង)។平均而言，基因表达水平按83A: 476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 的顺序下降（然而在，两种变佘下降（然而在，两种变位姓两，然而在，两种变䍽姓两，然而在，两种变䍽姯物中更强)។平均而言，基因水平按按 83a: 476> mandelup> boregine> ចំនួនប្រជាជន 22660 的顺序下降（，在种更渭迧） ………………………………..។ В среднем уровни экспрессии генов снижались в ряду 83A:476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (однако в обоих вариант ах ее у контрольных растений) ។ ជាមធ្យម កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនបានថយចុះនៅក្នុងស៊េរី 83A: 476 > Mandelup > Boregine > ចំនួនប្រជាជន 22660 (ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយនៅក្នុងវ៉ារ្យ៉ង់ទាំងពីរ និន្នាការនេះគឺខ្លាំងជាងនៅក្នុងរុក្ខជាតិគ្រប់គ្រង)។ការចាក់ថ្នាំបង្ការបានបណ្តាលឱ្យមានការកើនឡើងនៃការបញ្ចេញហ្សែន ជាពិសេសនៅក្នុងម៉ូឌុល 18, 19, 14, 6 និង 1 (តាមលំដាប់ចុះនៃឥទ្ធិពល) បទប្បញ្ញត្តិអវិជ្ជមាន (ឧទាហរណ៍ ម៉ូឌុល 9 និង 20) ឬជាមួយនឹងឥទ្ធិពលអព្យាក្រឹត (ឧទាហរណ៍ ម៉ូឌុល 11, 22, 8 និង 13)។ការវិភាគការបង្កើនរយៈពេល GO (តារាងបន្ថែម S13) បានបង្ហាញ "GO: 0006952 ការឆ្លើយតបការពារ" សម្រាប់ម៉ូឌុល inoculated (18) ជាមួយនឹងការធ្វើឱ្យសកម្មអតិបរមា រួមទាំងហ្សែនដែលត្រូវបានវិភាគដោយ qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG72_1065) និង TanjilG5 ភាគច្រើនបំផុត ម៉ូឌុលសំយោគរស្មីសំយោគ (៩) ។ឧបករណ៍ប្រមូលផ្តុំម៉ូឌុល 18 (រូបភាពទី 8) ត្រូវបានកំណត់ថាជាហ្សែន TanjilG_26536 ដែលអ៊ិនកូដប្រូតេអ៊ីន LlR18B ដូច PR-10 ហើយឧបករណ៍ប្រមូលផ្តុំម៉ូឌុល 9 ត្រូវបានកំណត់ថាជាហ្សែន TanjilG_28955 ដែលអ៊ិនកូដប្រូតេអ៊ីនប្រព័ន្ធរូបថត II PsbQ ។ហ្សែនធន់ទ្រាំនឹង anthracnose បេក្ខជន Lanr1, TanjilG_05042 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងម៉ូឌុល 22 (រូបភាពទី 9) ហើយត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងពាក្យ “GO:0044260 Cellular macromolecular metabolic processes” និង “GO:0006355 និយតកម្មប្រតិចារិក គំរូ DNA” ។ 0121260 TanjilGហ្សែនបានអ៊ិនកូដកត្តាចម្លងភាពតានតឹងកំដៅ A-4a (HSFA4a) ។
ការវិភាគបណ្តាញថ្លឹងថ្លែងនៃការបញ្ចេញហ្សែននៃម៉ូឌុលជាមួយនឹងពាក្យដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលតំណាងលើស "GO: 0006952 ការឆ្លើយតបការពារ" ។Ligation ត្រូវបានធ្វើឱ្យសាមញ្ញដើម្បីរំលេចហ្សែនទាំងបួនដែលត្រូវបានវិភាគដោយ qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 និង TanjilG_27015) ។
ការវិភាគបណ្តាញថ្លឹងថ្លែងនៃការបញ្ចេញហ្សែននៃម៉ូឌុលជាមួយនឹងពាក្យដំណើរការជីវសាស្រ្តដែលត្រូវបានតំណាងហួសហេតុ "GO: 0006355: បទប្បញ្ញត្តិប្រតិចារិក គំរូ DNA" និងផ្ទុកហ្សែនធន់ទ្រាំ anthracnose បេក្ខជន Lanr1 TanjilG_05042 ។Ligation ត្រូវបានធ្វើឱ្យសាមញ្ញដើម្បីញែកហ្សែន TanjilG_05042 និងហ្សែន TanjilG_01212 កណ្តាល។
ការត្រួតពិនិត្យភាពធន់នឹងជំងឺ Anthracnose ដែលប្រមូលបាននៅក្នុងប្រទេសអូស្ត្រាលី បានបង្ហាញថាភាគច្រើននៃពូជដែលចេញដំបូងគឺងាយរងគ្រោះ។Kalya, Coromup និង Mandelup ត្រូវបានពិពណ៌នាថាមានភាពធន់ទ្រាំល្មម ខណៈពេលដែល Wonga, Tanjil និង 83A:476 ត្រូវបានពិពណ៌នាថាមានភាពធន់ទ្រាំខ្លាំង 26,27,31។មាន allele ធន់ទ្រាំដូចគ្នា, កំណត់ Lanr1, និង Coromup និង Mandelup មាន allele ផ្សេងគ្នា, បានកំណត់ AnMan10, 26, 39, ខណៈពេលដែល Kalya បានឆ្លង allele ផ្សេងគ្នា។, Lanr2.ការពិនិត្យរកមើលភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose នៅប្រទេសអាឡឺម៉ង់បានបណ្តាលឱ្យមានការកំណត់អត្តសញ្ញាណនៃបន្ទាត់ធន់ទ្រាំនឹង Bo7212 ជាមួយនឹងបេក្ខជន allele ផ្សេងពី Lanr1 ដែលបានកំណត់ LanrBo36 ។
ការសិក្សារបស់យើងបានបង្ហាញពីប្រេកង់ទាបបំផុត (ប្រហែល 6%) នៃ Lanr1 allele នៅក្នុង germplasm ដែលបានសាកល្បង។ការសង្កេតនេះគឺស្របជាមួយនឹងលទ្ធផលនៃការពិនិត្យមេរោគអ៊ឺរ៉ុបខាងកើតដោយប្រើសញ្ញាសម្គាល់ Anseq3 និង Anseq4 ដែលបង្ហាញថា Lanr1 allele មានវត្តមានតែពីរបន្ទាត់បេឡារុស្សប៉ុណ្ណោះ។នេះបង្ហាញថា Lanr1 allele មិនទាន់ត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយដោយកម្មវិធីបង្កាត់ពូជក្នុងស្រុកទេ មិនដូចនៅប្រទេសអូស្ត្រាលីទេ ដែលវាជា alleles ដ៏សំខាន់មួយសម្រាប់ការបង្កាត់ពូជដែលមានសញ្ញាសម្គាល់។នេះអាចបណ្តាលមកពីកម្រិតទាបនៃការតស៊ូដែលផ្តល់ដោយ Lanr1 allele នៅក្នុងលក្ខខណ្ឌវាលនៅអឺរ៉ុបបើប្រៀបធៀបទៅនឹងរបាយការណ៍អូស្ត្រាលី។លើសពីនេះ ការសិក្សាអំពីអង់ត្រាក់ណូសនៅតំបន់ដែលមានភ្លៀងធ្លាក់ខ្លាំងក្នុងប្រទេសអូស្ត្រាលី បានបង្ហាញថា ការឆ្លើយតបធន់ទ្រាំដែលសម្របសម្រួលដោយ Lanr1 allele ប្រហែលជាមិនមានប្រសិទ្ធភាពក្នុងលក្ខខណ្ឌអាកាសធាតុដែលអនុគ្រោះដល់ការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃមេរោគឆ្លង។ជាការពិត នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន រោគសញ្ញាមួយចំនួននៃជម្ងឺ anthracnose ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញផងដែរនៅក្នុងប្រភេទហ្សែនដែលផ្ទុកនូវ Lanr1 allele ដែលបង្ហាញថាការតស៊ូអាចនឹងបាត់ទៅវិញក្រោមលក្ខខណ្ឌដ៏ល្អប្រសើរសម្រាប់ការវិវត្តនៃ C. lupini ។លើសពីនេះទៀតការបកស្រាយវិជ្ជមានមិនពិតនៃវត្តមានរបស់សញ្ញាសម្គាល់ Anseq3 និង Anseq4 ដែលមានចម្ងាយប្រហែល 1 សង់ទីម៉ែត្រពីទីតាំង Lanr1 គឺអាចធ្វើទៅបាន 28,30,43 ។
ការសិក្សារបស់យើងបានបង្ហាញថា 83A:476 ដែលផ្ទុក Lanr1 allele ឆ្លើយតបទៅនឹង C. lupini inoculation ជាមួយនឹងការធ្វើប្រតិចារិកទ្រង់ទ្រាយធំឡើងវិញនៅចំណុចពេលវេលាដែលបានវិភាគដំបូង (6 hpi) ខណៈពេលដែលនៅក្នុង Mandelup ផ្ទុក AnMan allele ការឆ្លើយតបប្រតិចារិកត្រូវបានគេសង្កេតឃើញច្រើននៅពេលក្រោយ។(ពី 24 ទៅ 48 hp) ។ការប្រែប្រួលបណ្ដោះអាសន្នទាំងនេះនៅក្នុងការឆ្លើយតបផ្នែកការពារត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃរោគសញ្ញាជំងឺ ដោយបញ្ជាក់ពីសារៈសំខាន់នៃការទទួលស្គាល់មេរោគដំបូងសម្រាប់ការឆ្លើយតបប្រកបដោយជោគជ័យចំពោះភាពធន់។ដើម្បីឆ្លងទៅជាលិការុក្ខជាតិ ស្ពែមអង់ត្រាក់ត្រូវតែឆ្លងកាត់ដំណាក់កាលអភិវឌ្ឍន៍ជាច្រើនលើផ្ទៃមេ រួមទាំងដំណុះ ការបែងចែកកោសិកា និងការបង្កើតអាបស្តូរីយ៉ូម។appendage គឺជារចនាសម្ព័ន្ធឆ្លងដែលភ្ជាប់ទៅនឹងផ្ទៃនៃម៉ាស៊ីន និងសម្របសម្រួលការជ្រៀតចូលទៅក្នុងជាលិកាម៉ាស៊ីន។ដូច្នេះ spores នៃ C. gloeosporioides ក្នុងចំរាញ់ចេញពីសណ្តែកបានបង្ហាញពីការបែងចែកដំបូងនៃស្នូលបន្ទាប់ពី 75-90 នាទីនៃការ incubation ការបង្កើតបំពង់មេជីវិតបន្ទាប់ពី 90-120 នាទី និងការបង្ក្រាបបន្ទាប់ពី 4 ម៉ោង 45 ។Mango C. gloeosporioides បានបង្ហាញពីដំណុះរបស់ conidial ច្រើនជាង 40% បន្ទាប់ពី incubation 3 ម៉ោង និងប្រហែល 20% នៃការបង្កើត appressors បន្ទាប់ពី 4 ម៉ោង។ហ្សែន CAP20 ទាក់ទងនឹងមេរោគនៃ C. gloeosporioides បានបង្ហាញពីសកម្មភាពចម្លងនៅក្នុង conidia ដែលបង្កើតជា epiphyte បន្ទាប់ពី incubation 3.5 ម៉ោងក្នុង avocado wax ជាមួយនឹងកំហាប់ខ្ពស់នៃប្រូតេអ៊ីន CAP20 បន្ទាប់ពី 4 ម៉ោង 46 នាទី។ស្រដៀងគ្នានេះដែរ សកម្មភាពនៃហ្សែន biosynthesis melanin នៅក្នុង C. trifolii ត្រូវបានបង្កឡើងក្នុងអំឡុងពេល incubation 2 ម៉ោង អមដោយការបង្កើត appressorium បន្ទាប់ពី 1 ម៉ោង។ការសិក្សាលើជាលិកាស្លឹកបានបង្ហាញថាផ្លែស្ត្របឺរីដែលចាក់ជាមួយ C. acutatum មានការបង្ក្រាបដំបូងនៅកម្រិត 8 hpi ខណៈពេលដែលផ្លែប៉េងប៉ោះដែលចាក់ជាមួយ C. coccodes មានការបង្ក្រាបដំបូងនៅ 4 hpi48,49 ។ភាគច្រើនស្របនឹងខ្នាតពេលវេលានៃ Colletotrichum spp ។ដំណើរការឆ្លង។ការឆ្លើយតបផ្នែកការពារយ៉ាងឆាប់រហ័សចំពោះ 83A:476 បង្ហាញពីការជាប់ពាក់ព័ន្ធនៃហ្សែនធន់ទ្រាំនឹងរុក្ខជាតិ និងភាពស៊ាំដែលបង្កដោយឥទ្ធិពល (ETI) នៅក្នុងបន្ទាត់នេះ ខណៈពេលដែលការឆ្លើយតបយឺតរបស់ Mandelup គាំទ្រដល់សម្មតិកម្មនៃភាពស៊ាំនៃគំរូម៉ូលេគុលដែលពាក់ព័ន្ធ (MTI) 50។ ការឆ្លើយតបដំបូងចំពោះ 83A និង 476ការត្រួតស៊ីគ្នាមួយផ្នែករវាងហ្សែនដែលបានគ្រប់គ្រងឡើងលើ ឬចុះក្រោមក្នុងការឆ្លើយតបយឺតក៏គាំទ្រគំនិតនេះផងដែរ ដោយសារ ETI ជារឿយៗត្រូវបានចាត់ទុកថាជាការឆ្លើយតប MTI ដែលត្រូវបានពន្លឿន និងប្រសើរឡើង ដែលឈានដល់ការស្លាប់កោសិកាដែលបានរៀបចំនៅកន្លែងឆ្លងមេរោគ ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ថាជាការឆក់អាណាហ្វីឡាក់ទិច 51,52 ។
ហ្សែនភាគច្រើនត្រូវបានសន្មតថាជាពាក្យ Gene Ontology GO: 0006952 "ការឆ្លើយតបការពារ" គឺជាពាក្យដូចគ្នាចំនួន 11 នៃសារតមអាហារដែលបណ្ដាលមកពីភាពតានតឹង 22 ប្រូតេអ៊ីន (ស្រដៀងទៅនឹង SAM22) និងប្រូតេអ៊ីន latex សំខាន់ៗចំនួនប្រាំពីរ (MLPs) ។ប្រូតេអ៊ីន 31, 34, 43 និង 423 បានបង្ហាញពីភាពស្រដៀងគ្នានៃលំដាប់។ហ្សែនដូច SAM22 បានបង្ហាញពីសកម្មភាពដ៏សំខាន់ដែលមានរយៈពេលយូរ ដោយបង្ហាញពីការកើនឡើងកម្រិតនៃភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose (83A: 476 និង Boregine) ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ហ្សែនដែលស្រដៀងនឹង MLP ត្រូវបានកាត់បន្ថយតែនៅក្នុងបន្ទាត់ដែលផ្ទុក allele ធន់ទ្រាំបេក្ខជន (83A: 476 / Lanr1 នៅ 6 hpi និង Mandelup / AnMan នៅ 24 hpi) ។គួរកត់សំគាល់ថា ហ្សែនដូច SAM22 ដែលបានកំណត់អត្តសញ្ញាណទាំងអស់មានប្រភពចេញពីចង្កោមហ្សែនដែលមានទំហំប្រហែល 105 kb ខណៈដែលហ្សែនដូច MLP មានប្រភពមកពីតំបន់ដាច់ដោយឡែកនៃហ្សែន។ការធ្វើឱ្យសកម្មដោយសំរបសំរួលនៃហ្សែនដូច SAM22 បែបនេះក៏ត្រូវបានរកឃើញផងដែរនៅក្នុងការសិក្សាពីមុនរបស់យើងអំពីភាពធន់នឹង NLL ចំពោះការ inoculation Diaporthetoxica ដែលបង្ហាញថាពួកវាត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងសមាសធាតុផ្តេកនៃការឆ្លើយតបការពារ។ការសន្និដ្ឋាននេះក៏ត្រូវបានគាំទ្រដោយរបាយការណ៍នៃការឆ្លើយតបជាវិជ្ជមាននៃហ្សែនដូច SAM22 ចំពោះការរងរបួស ឬការព្យាបាលជាមួយនឹងអាស៊ីត salicylic, ភ្នាក់ងារបង្ករោគផ្សិត ឬអ៊ីដ្រូសែន peroxide ។
ហ្សែនដែលស្រដៀងនឹង MLP ត្រូវបានបង្ហាញដើម្បីឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងនៃបាក់តេរី និងបាក់តេរីផ្សេងៗ រួមទាំងការឆ្លងមេរោគបាក់តេរី មេរោគ និងផ្សិតបង្កជំងឺនៅក្នុងប្រភេទរុក្ខជាតិជាច្រើន55។ទិសដៅនៃការឆ្លើយតបទៅនឹងអន្តរកម្មជាក់លាក់រវាងរុក្ខជាតិ និងភ្នាក់ងារបង្កជំងឺមានចាប់ពីការកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំង (ឧ. កំឡុងពេលប៉ះពាល់កប្បាសជាមួយ Verticillium dahliae) ដល់ការថយចុះយ៉ាងខ្លាំង (ពោលគឺបន្ទាប់ពីការឆ្លងដើមឈើផ្លែប៉ោមជាមួយ Alternaria spp.)56,57។ការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃហ្សែន MLP-like 423 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញក្នុងអំឡុងពេលការពារ avocado ទៅនឹងការឆ្លងមេរោគ F. niger និងអំឡុងពេលឆ្លងមេរោគនៃដើមឈើផ្លែប៉ោម Botryosphaeria berengeriana f.cnpiricola និង Alternaria alternata គឺជាប្រភេទផ្លែប៉ោម 58,59 ។លើសពីនេះ ផ្លែប៉ោម calli ដែលបង្ហាញហ្សែន MLP-like 423 ខ្លាំងពេកមានការបញ្ចេញហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងភាពធន់ទាប ហើយងាយនឹងឆ្លងមេរោគផ្សិត 59 ។បន្ទាប់ពី Fusarium oxysporum f ហ្សែន MLP-like 423 ក៏ត្រូវបានបង្ក្រាបផងដែរនៅក្នុងដំណាប់សណ្តែកធម្មតាដែលធន់ទ្រាំ។cnការឆ្លងមេរោគសណ្តែក ៦០.
សមាជិកផ្សេងទៀតនៃគ្រួសារ PR-10 ដែលត្រូវបានសម្គាល់នៅក្នុងការសិក្សា RNA-seq របស់យើងគឺហ្សែន LlR18A និង LlR18B ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការបម្រែបម្រួល ក៏ដូចជាហ្សែនដែលត្រូវបានកែប្រែ (1 ហ្សែន) ឬហ្សែនដែលត្រូវបានកាត់បន្ថយ (3 ហ្សែន) សម្រាប់ប្រូតេអ៊ីនផ្ទេរជាតិខ្លាញ់ DIR1 ។.លើសពីនេះទៀត WGCNA រំលេចហ្សែន LlR18B ជាមជ្ឈមណ្ឌលនៅក្នុងម៉ូឌុលនេះ ដែលងាយនឹងទទួលថ្នាំបង្ការ និងផ្ទុកហ្សែនឆ្លើយតបការពារជាច្រើន។ហ្សែន LlR18A និង LlR18B ត្រូវបានបង្កឡើងនៅក្នុងស្លឹក lupine ពណ៌លឿង ដើម្បីឆ្លើយតបទៅនឹងបាក់តេរីបង្កជំងឺ ក៏ដូចជានៅក្នុងដើម NLL បន្ទាប់ពីការ inoculation របស់ D. toxica ខណៈពេលដែលអង្ករ homologue នៃហ្សែនទាំងនេះ RSOsPR10 ត្រូវបានបង្កឡើងយ៉ាងឆាប់រហ័សដោយការឆ្លងមេរោគផ្សិតដែលសន្មតថាជាប់ពាក់ព័ន្ធនៅក្នុង jasmonic acidpe26 សញ្ញាផ្លូវ IR ។ ប្រូតេអ៊ីនដឹកជញ្ជូន lipid ដែលត្រូវបានទាមទារសម្រាប់ការចាប់ផ្តើមនៃភាពធន់នឹងការទទួលបានជាប្រព័ន្ធ (SAR) ។ជាមួយនឹងការអភិវឌ្ឍនៃប្រតិកម្មការពារ ប្រូតេអ៊ីន DIR1 ត្រូវបានដឹកជញ្ជូនពីការផ្តោតអារម្មណ៍នៃការឆ្លងមេរោគតាមរយៈ phloem ដើម្បីជំរុញ SAR នៅក្នុងសរីរាង្គឆ្ងាយ។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ហ្សែន TanjilG_02313 DIR1 ត្រូវបានជំរុញយ៉ាងខ្លាំងនៅចំណុចដំបូងក្នុងជួរ 84A:476 និងចំនួនប្រជាជន 22660 ប៉ុន្តែភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose បានបង្កើតដោយជោគជ័យតែនៅក្នុងបន្ទាត់ 84A:476 ប៉ុណ្ណោះ។នេះអាចបង្ហាញពីមុខងាររងមួយចំនួននៃហ្សែន DIR1 នៅក្នុង NLL ដោយហេតុថា លក្ខណៈដូចគ្នាទាំងបីដែលនៅសេសសល់បានឆ្លើយតបទៅនឹង inoculation តែនៅក្នុងបន្ទាត់ 83A: 476 នៅ 6 hpi ហើយការឆ្លើយតបនេះត្រូវបានដឹកនាំចុះក្រោម។
នៅក្នុងការសិក្សារបស់យើង សមាសធាតុទូទៅបំផុតដែលត្រូវគ្នានឹងដំណើរការជីវសាស្រ្តហៅថា "GO:0055114 Redox process" គឺប្រូតេអ៊ីន cytochrome P450, peroxidase, linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase និង 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase ។លើសពីនេះទៀត WGCNA របស់យើងកំណត់ HSFA4a homologue ជាមជ្ឈមណ្ឌលផ្ទុកម៉ូឌុលដូចជាបេក្ខជនហ្សែនធន់ទ្រាំ Lanr1 TanjilG_05042 ។HSFA4a គឺជាធាតុផ្សំនៃបទប្បញ្ញត្តិដែលពឹងផ្អែក redox នៃការចម្លងនុយក្លេអ៊ែរនៅក្នុងរុក្ខជាតិ។
ប្រូតេអ៊ីន Cytochrome P450 គឺជា oxidoreductases ដែលបង្កើតប្រតិកម្ម hydroxylation ដែលពឹងផ្អែកលើ NADPH និង/ឬ O2-dependent hydroxylation នៅក្នុងការរំលាយអាហារបឋម និងបន្ទាប់បន្សំ រួមទាំងការបំប្លែងសារជាតិ xenobiotics ក៏ដូចជាអរម៉ូន អាស៊ីតខ្លាញ់ sterols សមាសធាតុជញ្ជាំងកោសិកា biopolymers និង biosynthesis នៃសមាសធាតុការពារ chrome in the 69 plant - ការសិក្សារបស់រុក្ខជាតិ 69 ។ 10.6 log2 (ការផ្លាស់ប្តូរផ្នត់) ដល់ 5.7 ដោយសារតែចំនួនដ៏ច្រើននៃការផ្លាស់ប្តូរដូចគ្នា (37) និងភាពខុសគ្នានៃគំរូនៃការឆ្លើយតបរវាងហ្សែនជាក់លាក់ ដែលឆ្លុះបញ្ចាំងពីការពិនិត្យឡើងវិញកម្រិតខ្ពស់។.ការប្រើតែទិន្នន័យ RNA-seq ដើម្បីបំភ្លឺមុខងារជីវសាស្ត្រនៃហ្សែន NLL នៅក្នុងពពួកប្រូតេអ៊ីនដ៏ធំបែបនេះនឹងមានការប៉ាន់ស្មានខ្ពស់។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយគួរកត់សំគាល់ថាហ្សែន cytochrome P450 មួយចំនួនត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃភាពធន់ទ្រាំទៅនឹងផ្សិតបង្កជំងឺឬបាក់តេរីរួមទាំងការរួមចំណែកដល់ប្រតិកម្មអាលែហ្សី69,70,71។
ប្រភេទ III peroxidases គឺជាអង់ស៊ីមរុក្ខជាតិពហុមុខងារដែលពាក់ព័ន្ធនឹងដំណើរការមេតាបូលីសដ៏ធំទូលាយកំឡុងពេលការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍន៍របស់រុក្ខជាតិ ក៏ដូចជាការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងផ្នែកបរិស្ថានដូចជា ភាពប្រៃ ភាពរាំងស្ងួត អាំងតង់ស៊ីតេពន្លឺខ្ពស់ និងការវាយប្រហារដោយភ្នាក់ងារបង្ករោគ72។Peroxidases ត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងអន្តរកម្មនៃប្រភេទរុក្ខជាតិជាច្រើនជាមួយ Anthracis រួមទាំង Stylosanthes humilis និង C. gloeosporioides, Lens culinaris និង C. truncatum, Phaseolus vulgaris និង C. lindemuthianum, Cucumis sativus និង C. lagenarium73,74,75,76។ការឆ្លើយតបគឺលឿនណាស់ ជួនកាលសូម្បីតែនៅ 4 HPI មុនពេលផ្សិតជ្រាបចូលទៅក្នុងជាលិការុក្ខជាតិ73។ហ្សែន peroxidase ក៏ឆ្លើយតបទៅនឹង D. toxica NLL inoculation ។បន្ថែមពីលើមុខងារធម្មតារបស់ពួកគេក្នុងការគ្រប់គ្រងការផ្ទុះអុកស៊ីតកម្ម ឬលុបបំបាត់ភាពតានតឹងអុកស៊ីតកម្ម peroxidases អាចរំខានដល់ការលូតលាស់នៃមេរោគដោយបង្កើតរបាំងរាងកាយដោយផ្អែកលើការពង្រឹងជញ្ជាំងកោសិកាកំឡុងពេល lignification, subunit ឬការភ្ជាប់គ្នានៃសមាសធាតុជាក់លាក់។មុខងារនេះអាចត្រូវបានកំណត់គុណលក្ខណៈនៅក្នុងស៊ីលីកូទៅនឹងហ្សែន TanjilG_03329 ដែលបំប្លែងកូដសារធាតុ lignin-forming anion peroxidase ដែលត្រូវបានគ្រប់គ្រងយ៉ាងសំខាន់នៅក្នុងការសិក្សារបស់យើងនៅក្នុងជួរធន់ទ្រាំ 83A:476 នៅ 6 HPI ប៉ុន្តែមិនមែននៅក្នុងប្រភេទ និងពេលវេលាផ្សេងទៀតដែលមិនឆ្លើយតបនោះទេ។
9S-/13S-lipoxygenase នៃអាស៊ីត linoleic គឺជាជំហានដំបូងនៅក្នុងផ្លូវអុកស៊ីតកម្មនៃ lipid biosynthesis78 ។ផលិតផលនៃផ្លូវនេះមានមុខងារជាច្រើនក្នុងការការពាររុក្ខជាតិ រួមទាំងការពង្រឹងជញ្ជាំងកោសិកាតាមរយៈការបង្កើតប្រាក់បញ្ញើ callose និង pectin និងបទប្បញ្ញត្តិនៃភាពតានតឹងអុកស៊ីតកម្មតាមរយៈការផលិតអុកស៊ីហ្សែនប្រតិកម្ម79,80,81,82,83។នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន ការបញ្ចេញអាស៊ីត linoleic 9S-/13S-lipoxygenase ត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរគ្រប់ពូជទាំងអស់ ប៉ុន្តែនៅក្នុងប្រជាជនដែលងាយរងគ្រោះ 22660 ការកើនឡើងបានគ្រប់គ្រងនៅចំណុចពេលវេលាផ្សេងៗគ្នា ខណៈពេលដែលនៅក្នុងប្រភេទដែលធន់ទ្រាំនឹង Lanr1 និង AnMan allele វាសង្កត់ធ្ងន់ទៅលើភាពចម្រុះនៃប្រតិកម្មអុកស៊ីតកម្មប្រភេទការពាររវាងស្រទាប់ oxylipinhr ។
ភាពដូចគ្នានៃ 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) ត្រូវបានគ្រប់គ្រងយ៉ាងខ្លាំង (ហ្សែន 9) ឬត្រូវបានកាត់បន្ថយ (ហ្សែន 2) នៅពេលចាក់បញ្ចូលជាមួយ lupine ។ជាមួយនឹងករណីលើកលែងពីរ ការឆ្លើយតបទាំងអស់នេះបានកើតឡើងនៅ 6 hp ។នៅ 83A: 476 ។ប្រតិកម្មអង់ស៊ីមដែលសម្របសម្រួលដោយប្រូតេអ៊ីន ACO គឺជាជំហានកំណត់អត្រាក្នុងការផលិតអេទីឡែន ហើយដូច្នេះត្រូវបានគ្រប់គ្រងយ៉ាងខ្ពស់84។អេទីឡែន គឺជាអ័រម៉ូនរុក្ខជាតិដែលដើរតួនាទីជាច្រើនក្នុងការគ្រប់គ្រងការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិ និងការឆ្លើយតបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌស្ត្រេសនៃអាប៊ីយ៉ូទិក និងជីវគីមី។ការចាប់ផ្តើមនៃការចម្លង ACO និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃផ្លូវសញ្ញាអេទីឡែនត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការបង្កើនភាពធន់របស់ស្រូវទៅនឹងផ្សិត hemibiotrophic oryzae oryzae ដោយធ្វើនិយតកម្មការផលិតប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម និង phytoalexins ។ដំណើរការឆ្លងស្លឹកស្រដៀងគ្នាខ្លាំងណាស់ដែលបានរកឃើញរវាង M. oryzae និង C. lupini88,89 ប្រឆាំងនឹងផ្ទៃខាងក្រោយនៃការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃ ACO homologues នៅក្នុងបន្ទាត់ 83A: 476 ដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងការសិក្សានេះ ផ្លាស់ប្តូរលទ្ធភាពនៃការផ្តល់ភាពធន់ទៅនឹង NLL anthracnose Ethylene ជាជំហានកណ្តាលនៃផ្លូវម៉ូលេគុល។
នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន ការបង្ក្រាបទ្រង់ទ្រាយធំនៃហ្សែនជាច្រើនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការធ្វើរស្មីសំយោគត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅ 6 hpi ក្នុង 83A: 476 និងនៅ 48 hpi នៅ Mandeloop និងប្រជាជន 22660 ។វិសាលភាព និងវឌ្ឍនភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរទាំងនេះគឺសមាមាត្រទៅនឹងកម្រិត។ភាពធន់នឹង Anthracnose ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងការពិសោធន៍នេះ។ថ្មីៗនេះ ការគាបសង្កត់ខ្លាំង និងដំបូងនៃការចម្លងដែលទាក់ទងនឹងការធ្វើរស្មីសំយោគត្រូវបានរាយការណ៍នៅក្នុងគំរូជាច្រើននៃអន្តរកម្មនៃមេរោគរុក្ខជាតិ រួមទាំងបាក់តេរីបង្កជំងឺ និងផ្សិត។Haste (ពី 2 HPI ក្នុងអន្តរកម្មមួយចំនួន) និងការគាបសង្កត់ជាសកលនៃហ្សែនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការធ្វើរស្មីសំយោគក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការឆ្លងអាចបង្កឱ្យមានភាពស៊ាំរបស់រុក្ខជាតិដោយផ្អែកលើការដាក់ពង្រាយប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម និងអន្តរកម្មរបស់ពួកគេជាមួយនឹងផ្លូវអាស៊ីត salicylic ដើម្បីសម្រុះសម្រួលប្រតិកម្មអាលែហ្សី 90,94 ។
សរុបមក យន្តការឆ្លើយតបផ្នែកការពារដែលត្រូវបានស្នើឡើងសម្រាប់ពូជដែលធន់ទ្រាំបំផុត (83A:476) រួមមានការទទួលស្គាល់មេរោគយ៉ាងឆាប់រហ័សដោយហ្សែន R (សន្មតថា TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) និងប្រតិកម្មអាលែហ្សីដែលសម្របសម្រួលដោយអាស៊ីត salicylic និងសញ្ញាអេទីឡែន អមដោយការបង្កើត SAR ជួរវែង។សកម្មភាពត្រូវបានគាំទ្រដោយប្រូតេអ៊ីន DIR-1 ។វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថារយៈពេល biotrophic សម្រាប់ការឆ្លងមេរោគ C. lupini គឺខ្លីណាស់ (ប្រហែល 2 ថ្ងៃ) បន្ទាប់មកដោយការលូតលាស់ necrotic95 ។ការផ្លាស់ប្តូររវាងដំណាក់កាលទាំងនេះអាចត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹង necrosis និងការបង្ហាញនៃប្រូតេអ៊ីន ethylene-inducible ដែលដើរតួជាកេះសម្រាប់ប្រតិកម្មអាល្លែហ្ស៊ីនៅក្នុងរុក្ខជាតិម្ចាស់ផ្ទះ។ដូច្នេះ បង្អួចពេលវេលាសម្រាប់ការចាប់យក C. lupini ដោយជោគជ័យនៅដំណាក់កាល biotrophic គឺតូចចង្អៀតណាស់។reprogramming នៃហ្សែនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹង redox និងការសំយោគរស្មីសំយោគដែលបានសង្កេតនៅក្នុង 83A: 476 នៅ 6 hpi គឺស្របជាមួយនឹងការវិវត្តនៃ hyphae ផ្សិត ហើយបានប្រកាសពីការអភិវឌ្ឍន៍នៃការឆ្លើយតបការពារដោយជោគជ័យនៅដំណាក់កាល biotrophic ។ការឆ្លើយតបរបស់ Mandelup និងចំនួនប្រជាជន 22660 អាចនឹងយឺតពេលក្នុងការចាប់យកផ្សិតមុនពេលប្តូរទៅជាការលូតលាស់ necrotic ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ Mandelup អាចមានប្រសិទ្ធភាពជាងចំនួនប្រជាជន 22660 ពីព្រោះបទប្បញ្ញត្តិរហ័សនៃប្រូតេអ៊ីន PR-10 លើកកម្ពស់ភាពធន់ទ្រាំផ្ដេក។
ETI ដែលត្រូវបានជំរុញដោយហ្សែន Canonical R ហាក់ដូចជាយន្តការទូទៅសម្រាប់ភាពធន់របស់សណ្តែកទៅនឹងជំងឺ anthracnose ។ដូច្នេះនៅក្នុងគំរូ legume Medicago truncatula ភាពធន់ទ្រាំទៅនឹង anthracnose ត្រូវបានផ្តល់ដោយហ្សែន RCT1 ដែលជាសមាជិកនៃថ្នាក់ហ្សែន R រុក្ខជាតិ TIR-NBS-LRR97 ។ហ្សែននេះក៏ផ្តល់ភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose វិសាលគមទូលំទូលាយនៅក្នុង alfalfa នៅពេលផ្ទេរទៅរុក្ខជាតិដែលងាយរងគ្រោះ។នៅក្នុងសណ្តែកធម្មតា (P. vulgaris) ហ្សែនធន់ទ្រាំនឹងជំងឺ anthracnose ច្រើនជាងពីរដប់ត្រូវបានគេកំណត់អត្តសញ្ញាណរហូតមកដល់បច្ចុប្បន្ន។ហ្សែនទាំងនេះមួយចំនួនត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងតំបន់ដែលខ្វះហ្សែន R ណាមួយ ប៉ុន្តែមានហ្សែនផ្សេងទៀតជាច្រើនមានទីតាំងនៅគែមនៃក្រូម៉ូសូមដែលផ្ទុកចង្កោមហ្សែន NBS-LRR រួមទាំង TIR-NBS-LRRs99 ។ការសិក្សា SSR ទូទាំងហ្សែនក៏បានបញ្ជាក់ពីការផ្សារភ្ជាប់នៃហ្សែន NBS-LRR ជាមួយនឹងភាពធន់នឹងជំងឺ anthracnose នៅក្នុងសណ្តែកធម្មតា។ហ្សែន Canonical R ត្រូវបានគេរកឃើញផងដែរនៅក្នុងតំបន់ហ្សែនដែលផ្ទុកទីតាំងធន់ទ្រាំនឹង anthracnose ដ៏សំខាន់នៅក្នុង lupine 101 ពណ៌ស។
ការងាររបស់យើងបង្ហាញថាប្រតិកម្មធន់ទ្រាំភ្លាមៗដែលត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មនៅដំណាក់កាលដំបូងនៃការឆ្លងមេរោគរុក្ខជាតិ (និយមមិនលើសពី 12 hpi) មានប្រសិទ្ធភាពការពារ lupine ដែលមានស្លឹកតូចចង្អៀតពីជំងឺ anthracnose ដែលបណ្តាលមកពីផ្សិតបង្កជំងឺ Collelotrichum lupini ។ដោយប្រើលំដាប់លំដោយខ្ពស់ យើងបានបង្ហាញពីទម្រង់នៃការបញ្ចេញមតិឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃហ្សែនធន់ទ្រាំនឹង anthracnose នៅក្នុងរុក្ខជាតិ NLL ដែលសម្របសម្រួលដោយហ្សែនធន់ទ្រាំ Lanr1 និង AnMan ។ការការពារដោយជោគជ័យពាក់ព័ន្ធនឹងការរចនាយ៉ាងប្រុងប្រយ័ត្ននូវហ្សែនសម្រាប់ប្រូតេអ៊ីនដែលពាក់ព័ន្ធនឹង redox, រស្មីសំយោគ និងការបង្កើតធាតុបង្កជំងឺក្នុងរយៈពេលប៉ុន្មានម៉ោងនៃការទំនាក់ទំនងដំបូងរបស់រុក្ខជាតិជាមួយភ្នាក់ងារបង្ករោគ។ប្រតិកម្មការពារស្រដៀងគ្នា ប៉ុន្តែត្រូវបានពន្យារពេលក្នុងពេលវេលា មានប្រសិទ្ធភាពតិចជាងច្រើនក្នុងការការពាររុក្ខជាតិពីជំងឺ។ភាពធន់នឹងជំងឺ anthrax ដែលសម្របសម្រួលដោយហ្សែន Lanr1 ប្រហាក់ប្រហែលនឹងការឆ្លើយតបរហ័សធម្មតានៃហ្សែន R (ភាពស៊ាំដែលបង្កឡើងដោយឥទ្ធិពល) ខណៈពេលដែលហ្សែន AnMan ទំនងជាផ្តល់នូវការឆ្លើយតបផ្ដេក (ភាពស៊ាំដែលបង្កឡើងដោយគំរូម៉ូលេគុលដែលទាក់ទងនឹងមីក្រុប) ផ្តល់នូវកម្រិតមធ្យមនៃនិរន្តរភាព។
ខ្សែ NLL 215 ដែលប្រើដើម្បីពិនិត្យរកមើលសញ្ញាសម្គាល់ anthracnose មាន 74 ពូជ 60 ខ្សែដែលទទួលបានដោយការឆ្លងកាត់ឬការបង្កាត់ពូជ 5 mutants និង 76 ពូជព្រៃឬដើម។ខ្សែនេះមកពី 17 ប្រទេស ភាគច្រើនមកពីប្រទេសប៉ូឡូញ (58) អេស្ប៉ាញ (47) អាល្លឺម៉ង់ (27) អូស្ត្រាលី (26) រុស្ស៊ី (19) បេឡារុស្ស (7) អ៊ីតាលី (5) និងខ្សែផ្សេងទៀត។មកពី 10 ប្រទេស។ឈុតនេះក៏រួមបញ្ចូលខ្សែដែលធន់នឹងសេចក្តីយោងផងដែរ៖ 83A:476, Tanjil, Wonga ផ្ទុក Lanr1 allele និង Mandelup កាន់ AnMan allele ។ខ្សែទាំងនេះត្រូវបានទទួលពីមូលដ្ឋានទិន្នន័យធនធានហ្សែនរបស់អឺរ៉ុប Lupine ដែលរក្សាដោយ Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo ប្រទេសប៉ូឡូញ (តារាងបន្ថែម S1)។
រុក្ខជាតិត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រង (រយៈពេលថតរូប 16 ម៉ោង សីតុណ្ហភាព 25°C ពេលថ្ងៃ និង 18°C ​​នៅពេលយប់)។ការចម្លងជីវសាស្រ្តចំនួនពីរត្រូវបានវិភាគ។DNA ត្រូវបានញែកចេញពីស្លឹកអាយុបីសប្តាហ៍ដោយប្រើ DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) យោងតាមពិធីការ។គុណភាព និងការប្រមូលផ្តុំនៃ DNA ដាច់ស្រយាលត្រូវបានវាយតម្លៃដោយវិធីសាស្ត្រ spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)។សញ្ញាសម្គាល់ AnManM1 ដែលសម្គាល់ហ្សែនធន់ទ្រាំនឹងជំងឺ anthracnose AnMan (បានមកពី cv. Mandelup) និងសញ្ញាសម្គាល់ Anseq3 និង Anseq4 ដែលនៅខាងមុខហ្សែន Lanr1 (បានមកពី cv. Tanjil) ត្រូវបានវិភាគ 11,26,28។Homozygotes សម្រាប់ allele ដែលធន់ទ្រាំត្រូវបានគេដាក់ពិន្ទុជា "1", ងាយនឹង - ដូចជា "0", និង heterozygotes - ជា 0.5 ។
ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលនៃការពិនិត្យសម្រាប់សញ្ញាសម្គាល់ AnManM1, AnSeq3 និង AnSeq4 និងលទ្ធភាពនៃគ្រាប់ពូជសម្រាប់ការពិសោធន៍តាមដានចុងក្រោយ ខ្សែ 50 NLL ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ phenotyping ធន់នឹង anthracnose ។ការវិភាគត្រូវបានធ្វើឡើងដោយស្ទួននៅក្នុងផ្ទះកញ្ចក់ដែលគ្រប់គ្រងដោយកុំព្យូទ័រដែលមានរយៈពេលថត 14 ម៉ោងជាមួយនឹងជួរសីតុណ្ហភាព 22°C ពេលថ្ងៃ និង 19°C នៅពេលយប់។គ្រាប់ពូជត្រូវបានកោស (កាត់សំបកគ្រាប់ពូជនៅផ្នែកម្ខាងនៃអំប្រ៊ីយ៉ុងដោយកាំបិតមុតស្រួច) មុនពេលសាបព្រួសដើម្បីការពារការជ្រុះគ្រាប់ពូជ ដោយសារសំបកគ្រាប់ពូជរឹងពេក និងធានាឱ្យមានដំណុះឯកសណ្ឋាន។រុក្ខជាតិត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងផើង (11 × 11 × 21 សង់ទីម៉ែត្រ) ជាមួយនឹងដីមាប់មគ (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland) ។Inoculation ត្រូវបានអនុវត្តជាមួយនឹងពូជ Colletotrichum lupini Col-08 ដែលត្រូវបានដាំដុះក្នុងឆ្នាំ 1999 ពីដើមរបស់រុក្ខជាតិ lupine ដែលមានស្លឹកតូចចង្អៀត ដែលដាំដុះនៅក្នុងវាលមួយក្នុង Verzhenitsa មហាប៉ូឡូញ (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E)។ទទួលបានតំបន់មួយ។សារធាតុដាច់ស្រយាលត្រូវបានបង្កាត់ពូជក្នុងកម្រិតមធ្យម SNA នៅសីតុណ្ហភាព 20°C ក្រោមពន្លឺភ្លើងខ្មៅរយៈពេល 21 ថ្ងៃ ដើម្បីបង្កឲ្យមានកំនើត។បួនសប្តាហ៍បន្ទាប់ពីការសាបព្រួសនៅពេលដែលរុក្ខជាតិឈានដល់ដំណាក់កាលស្លឹក 4-6 ការ inoculation ត្រូវបានអនុវត្តដោយការបាញ់ថ្នាំជាមួយការព្យួរនៃ conidia នៅកំហាប់នៃ 0.5 x 106 conidia ក្នុងមួយមីលីលីត្រ។បន្ទាប់ពី inocation រុក្ខជាតិត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទីងងឹតរយៈពេល 24 ម៉ោងនៅសំណើមប្រហែល 98% និងសីតុណ្ហភាព 25 ° C ដើម្បីជួយសម្រួលដល់ដំណុះនៃ conidia និងដំណើរការឆ្លង។បន្ទាប់មករុក្ខជាតិត្រូវបានដាំដុះក្រោមរយៈពេលថត 14 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 22°C ថ្ងៃ/19°C យប់ និងសំណើម 70%។ពិន្ទុនៃជំងឺនេះត្រូវបានធ្វើឡើង 22 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការ inocation ហើយមានចាប់ពី 0 (ភាពស៊ាំ) ដល់ 9 (ងាយរងគ្រោះខ្លាំង) អាស្រ័យលើវត្តមាន ឬអវត្តមាននៃដំបៅ necrotic នៅលើដើម និងស្លឹក។លើសពីនេះទៀតបន្ទាប់ពីការដាក់ពិន្ទុទម្ងន់របស់រុក្ខជាតិត្រូវបានវាស់។ទំនាក់ទំនងរវាង genotypes សញ្ញាសម្គាល់ និង phenotypes ជំងឺត្រូវបានគណនាជាចំណុចទំនាក់ទំនងពីរលំដាប់ (អវត្តមាននៃសញ្ញាសម្គាល់ heterozygous នៅក្នុងសំណុំនៃបន្ទាត់សម្រាប់ការវិភាគនៃ phenotype ធន់ទ្រាំនឹង anthracnose) ។