សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។ កំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រ CSS ។ សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ក្នុងពេលនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្របន្ត យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
មានតម្រូវការសម្រាប់ប្រព័ន្ធ vitro ដែលអាចទុកចិត្តបានដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃបេះដូងសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំ។ ភាពអាចរកបាននៅកម្រិតនៃប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សបាននាំឱ្យមានការបកស្រាយមិនត្រឹមត្រូវនៃឥទ្ធិពលថ្នាំបេះដូង។ នៅទីនេះ យើងបានបង្កើតគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដែលរំញោចផ្នែកបេះដូងដោយអេឡិចត្រូមេកានិច និងឆ្លងកាត់ការលាតសន្ធឹងផ្នែកសរីរវិទ្យាក្នុងដំណាក់កាលស៊ីស្តូលិក និងឌីស្តូលីកនៃវដ្តបេះដូង។ បន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ វិធីសាស្រ្តនេះបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងមួយផ្នែកនូវលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូង ប៉ុន្តែមិនបានរក្សាបានពេញលេញនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធរបស់ពួកគេ។ ដូច្នេះបន្ទាប់ពីការពិនិត្យម៉ូលេគុលតូច យើងបានរកឃើញថាការបន្ថែម 100 nM triiodothyronine (T3) និង 1 μM dexamethasone (Dex) ទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុករបស់យើងបានរក្សារចនាសម្ព័ន្ធមីក្រូនៃផ្នែករយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ រួមផ្សំជាមួយនឹងការព្យាបាល T3/Dex ប្រព័ន្ធ CTCM បានរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិក លទ្ធភាពជោគជ័យ សកម្មភាពមេតាបូលីស និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធក្នុងកម្រិតដូចគ្នាជាមួយនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះទៀត ការលាតសន្ធឹងលើសលប់នៃជាលិកាបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ធ្វើឱ្យមានសញ្ញានៃបេះដូង hypertrophic ដែលផ្តល់ភស្តុតាងសម្រាប់សមត្ថភាពរបស់ CTCM ដើម្បីធ្វើត្រាប់តាមលក្ខខណ្ឌ hypertrophic ដែលបណ្តាលមកពីការលាតសន្ធឹងនៃបេះដូង។ សរុបសេចក្តីមក CTCM អាចយកគំរូតាមសរីរវិទ្យា និងរោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងក្នុងវប្បធម៌ក្នុងរយៈពេលយូរ ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការពិនិត្យថ្នាំដែលអាចទុកចិត្តបាន។
មុននឹងធ្វើការស្រាវជ្រាវផ្នែកព្យាបាល ប្រព័ន្ធ vitro ដែលអាចជឿទុកចិត្តបានគឺត្រូវការជាចាំបាច់ ដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃបេះដូងមនុស្សបានត្រឹមត្រូវ។ ប្រព័ន្ធបែបនេះគួរតែធ្វើត្រាប់តាមការផ្លាស់ប្តូរផ្នែកមេកានិច ចង្វាក់បេះដូង និងលក្ខណៈសម្បត្តិ electrophysiological ។ គំរូសត្វត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅជាវេទិកាពិនិត្យសម្រាប់សរីរវិទ្យាបេះដូង ជាមួយនឹងភាពជឿជាក់មានកម្រិតក្នុងការឆ្លុះបញ្ចាំងពីឥទ្ធិពលនៃថ្នាំក្នុងបេះដូងមនុស្ស1,2។ ទីបំផុត គំរូពិសោធន៍វប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងល្អបំផុត (CTCM) គឺជាគំរូដែលមានលក្ខណៈរសើបខ្លាំង និងជាក់លាក់សម្រាប់អន្តរាគមន៍ព្យាបាល និងឱសថសាស្ត្រផ្សេងៗ ដោយបង្កើតឡើងវិញនូវសរីរវិទ្យា និងរោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងមនុស្សយ៉ាងត្រឹមត្រូវ 3. អវត្ដមាននៃប្រព័ន្ធបែបនេះកំណត់ការរកឃើញនៃការព្យាបាលថ្មីសម្រាប់ជំងឺខ្សោយបេះដូង 4,5 និងបាននាំឱ្យមានការពុលថ្នាំ cardiotoxic ជាហេតុផលចម្បងសម្រាប់ការចាកចេញពីទីផ្សារ6 ។
ក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ថ្នាំដែលមិនមែនជាសរសៃឈាមបេះដូងចំនួនប្រាំបីត្រូវបានដកចេញពីការប្រើប្រាស់គ្លីនិក ព្រោះវាបណ្តាលឱ្យមានការអូសបន្លាយចន្លោះ QT ដែលនាំឱ្យស្ទះសរសៃឈាមបេះដូង និងការស្លាប់ភ្លាមៗ7. ដូច្នេះហើយ វាមានតម្រូវការកើនឡើងសម្រាប់យុទ្ធសាស្រ្តពិនិត្យព្យាបាលមុនដែលអាចជឿទុកចិត្តបាន ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាព និងជាតិពុលនៃសរសៃឈាមបេះដូង។ ការប្រើប្រាស់ថ្មីៗនេះនៃកោសិកាដើម pluripotent ដែលបង្កឡើងដោយកោសិកា cardiomyocytes (hiPS-CM) ក្នុងការពិនិត្យថ្នាំ និងការធ្វើតេស្តជាតិពុលផ្តល់នូវដំណោះស្រាយមួយផ្នែកចំពោះបញ្ហានេះ។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ធម្មជាតិមិនទាន់ពេញវ័យនៃ hiPS-CMs និងកង្វះនៃភាពស្មុគស្មាញពហុកោសិកានៃជាលិកាបេះដូងគឺជាដែនកំណត់សំខាន់នៃវិធីសាស្ត្រនេះ។ ការសិក្សាថ្មីៗបានបង្ហាញថាដែនកំណត់នេះអាចត្រូវបានយកឈ្នះដោយផ្នែកដោយប្រើ hiPS-CM ដំបូងដើម្បីបង្កើតអ៊ីដ្រូហ្សែលជាលិកាបេះដូងភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការចាប់ផ្តើមនៃការកន្ត្រាក់ដោយឯកឯងនិងបង្កើនការរំញោចអគ្គិសនីបន្តិចម្តង ៗ តាមពេលវេលា។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ microtissues hiPS-CM ទាំងនេះខ្វះលក្ខណៈសម្បត្តិ electrophysiological និង contractile នៃ myocardium មនុស្សពេញវ័យ។ លើសពីនេះ ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សមានរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគ្រស្មាញជាងមុន ដោយមានល្បាយចម្រុះនៃប្រភេទកោសិកាផ្សេងៗគ្នា រួមទាំងកោសិកា endothelial ណឺរ៉ូន និង stromal fibroblasts ដែលភ្ជាប់គ្នាទៅវិញទៅមកដោយសំណុំជាក់លាក់នៃប្រូតេអ៊ីនម៉ាទ្រីស extracellular ។ ភាពខុសប្លែកគ្នានៃចំនួនប្រជាជនមិនមែន cardiomyocyte 11,12,13 នៅក្នុងបេះដូងថនិកសត្វពេញវ័យគឺជាឧបសគ្គចម្បងក្នុងការធ្វើគំរូជាលិកាបេះដូងដោយប្រើប្រភេទកោសិកានីមួយៗ។ ដែនកំណត់សំខាន់ៗទាំងនេះសង្កត់ធ្ងន់លើសារៈសំខាន់នៃការបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការដាំដុះជាលិកា myocardial ដដែលក្រោមលក្ខខណ្ឌសរីរវិទ្យានិងរោគសាស្ត្រ។
ផ្នែកស្តើង (300 μm) នៃបេះដូងមនុស្សបានបង្ហាញឱ្យឃើញថាជាគំរូដ៏ជោគជ័យនៃ myocardium របស់មនុស្សនៅដដែល។ វិធីសាស្រ្តនេះផ្តល់នូវការចូលទៅកាន់ប្រព័ន្ធពហុកោសិកា 3D ពេញលេញស្រដៀងទៅនឹងជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្ស។ ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រហូតដល់ឆ្នាំ 2019 ការប្រើប្រាស់ផ្នែកបេះដូងដែលមានវប្បធម៌ត្រូវបានកំណត់ដោយការរស់រានមានជីវិតនៃវប្បធម៌រយៈពេលខ្លី (24 ម៉ោង)។ នេះគឺដោយសារតែកត្តាមួយចំនួន រួមទាំងការខ្វះខាតផ្នែករាងកាយ-មេកានិច ចំណុចប្រទាក់រាវនៃខ្យល់ និងការប្រើប្រាស់ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយសាមញ្ញដែលមិនគាំទ្រតម្រូវការនៃជាលិកាបេះដូង។ ក្នុងឆ្នាំ 2019 ក្រុមស្រាវជ្រាវជាច្រើនបានបង្ហាញថាការបញ្ចូលកត្តាមេកានិចទៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងអាចពន្យារអាយុជីវិត ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការបញ្ចេញមតិបេះដូង និងធ្វើត្រាប់តាមរោគសាស្ត្របេះដូង។ ការសិក្សាឆើតឆាយពីរ 17 និង 18 បង្ហាញថាការផ្ទុកមេកានិច uniaxial មានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើ phenotype បេះដូងអំឡុងពេលវប្បធម៌។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សាទាំងនេះមិនបានប្រើការផ្ទុករូបវិទ្យា-មេកានិចបីវិមាត្រថាមវន្តនៃវដ្តបេះដូងនោះទេ ដោយសារផ្នែកបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំង tensile isometric 17 ឬ linear auxotonic loading 18 ។ វិធីសាស្រ្តនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកាទាំងនេះបានបណ្តាលឱ្យមានការគៀបសង្កត់នៃហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការកើនឡើងនៃហ្សែនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការឆ្លើយតបនឹងការលាតសន្ធឹងមិនធម្មតា។ គួរកត់សម្គាល់ថា Pitoulis et al ។ 19 បានបង្កើតការងូតទឹកវប្បធម៌ស្លាយបេះដូងថាមវន្តសម្រាប់ការកសាងវដ្តបេះដូងឡើងវិញដោយប្រើមតិត្រឡប់របស់ឧបករណ៍បំប្លែងកម្លាំង និងជំរុញភាពតានតឹង។ ទោះបីជាប្រព័ន្ធនេះអនុញ្ញាតឱ្យមានភាពត្រឹមត្រូវជាងមុននៅក្នុងគំរូនៃវដ្តបេះដូងនៅក្នុង vitro ក៏ដោយ ភាពស្មុគស្មាញ និងកម្រិតទាបនៃវិធីសាស្ត្រកំណត់ការអនុវត្តប្រព័ន្ធនេះ។ ថ្មីៗនេះ មន្ទីរពិសោធន៍របស់យើងបានបង្កើតប្រព័ន្ធវប្បធម៌សាមញ្ញមួយ ដោយប្រើការភ្ញោចអគ្គិសនី និងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលប្រសើរឡើង ដើម្បីរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកនៃ porcine និងជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សរហូតដល់ 6 ថ្ងៃ 20,21 ។
នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងពណ៌នាអំពីគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដោយប្រើផ្នែកនៃបេះដូង porcine ដែលរួមបញ្ចូលសញ្ញាកំប្លែងដើម្បីរំលឹកឡើងវិញនូវសរីរវិទ្យាបេះដូងបីវិមាត្រ និងការរីករាលដាលនៃរោគសាស្ត្រអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង។ CTCM នេះអាចបង្កើនភាពត្រឹមត្រូវនៃការទស្សន៍ទាយថ្នាំមុនគ្លីនិកដល់កម្រិតដែលមិនធ្លាប់មានពីមុនមក ដោយផ្តល់នូវប្រព័ន្ធបេះដូងពាក់កណ្តាលឆ្លងកាត់ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ដែលធ្វើត្រាប់តាមសរីរវិទ្យា/រោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងថនិកសត្វសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំមុនគ្លីនិក។
សញ្ញាមេកានិច Hemodynamic ដើរតួយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរក្សាមុខងារ cardiomyocyte នៅក្នុង vitro 22,23,24 ។ នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងបានបង្កើត CTCM (រូបភាពទី 1a) ដែលអាចធ្វើត្រាប់តាមបរិយាកាសបេះដូងមនុស្សពេញវ័យ ដោយជំរុញទាំងការរំញោចអគ្គិសនី និងមេកានិចនៅប្រេកង់សរីរវិទ្យា (1.2 Hz, 72 ដងក្នុងមួយនាទី)។ ដើម្បីជៀសវាងការលាតសន្ធឹងជាលិកាច្រើនពេកក្នុងអំឡុងពេល diastole ឧបករណ៍បោះពុម្ព 3D ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្កើនទំហំជាលិកា 25% (រូបភាព 1b) ។ ល្បឿនអគ្គិសនីដែលបង្កឡើងដោយប្រព័ន្ធ C-PACE ត្រូវបានកំណត់ពេលដើម្បីចាប់ផ្តើម 100 ms មុនពេល systole ដោយប្រើប្រព័ន្ធទទួលទិន្នន័យដើម្បីបង្កើតវដ្តបេះដូងឡើងវិញយ៉ាងពេញលេញ។ ប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាប្រើឧបករណ៍រំញោចខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (LB Engineering, Germany) ដើម្បីពង្រីកភ្នាសស៊ីលីកុនដែលអាចបត់បែនបានតាមរង្វង់ ដើម្បីបង្កឱ្យមានការពង្រីកផ្នែកបេះដូងនៅក្នុងបន្ទប់ខាងលើ។ ប្រព័ន្ធនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងខ្សែខ្យល់ខាងក្រៅតាមរយៈឧបករណ៍ប្តូរសម្ពាធដែលធ្វើឱ្យវាអាចលៃតម្រូវសម្ពាធបានត្រឹមត្រូវ (± 1 mmHg) និងពេលវេលា (± 1 ms) (រូបភាព 1c) ។
a ភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងក្រវ៉ាត់ជំនួយ 7 មីលីម៉ែត្រ ដែលបង្ហាញជាពណ៌ខៀវ នៅខាងក្នុងបន្ទប់វប្បធម៌របស់ឧបករណ៍។ អង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៌ត្រូវបានបំបែកចេញពីបន្ទប់ខ្យល់ដោយភ្នាសស៊ីលីកុនដែលអាចបត់បែនបានស្តើង។ ដាក់ ​​gasket រវាងបន្ទប់នីមួយៗដើម្បីការពារការលេចធ្លាយ។ គម្របឧបករណ៍មានអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីតដែលផ្តល់ការរំញោចអគ្គិសនី។ b តំណាងគ្រោងការណ៍នៃឧបករណ៍ជាលិកាធំ ចិញ្ចៀនណែនាំ និងចិញ្ចៀនជំនួយ។ ផ្នែកជាលិកា (ពណ៌ត្នោត) ត្រូវបានដាក់នៅលើឧបករណ៍ដែលមានទំហំធំជាមួយនឹងចិញ្ចៀនណែនាំដែលដាក់នៅក្នុងចង្អូរនៅគែមខាងក្រៅនៃឧបករណ៍។ ដោយប្រើមគ្គុទ្ទេសក៍ សូមដាក់ក្រវ៉ាត់ជំនួយដោយប្រុងប្រយ័ត្នដែលស្រោបដោយសារធាតុស្អិត acrylic លើផ្នែកនៃជាលិកាបេះដូង។ c ក្រាហ្វបង្ហាញពីពេលវេលានៃការភ្ញោចអគ្គិសនីជាមុខងារនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ដែលគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បំប្លែងខ្យល់តាមកម្មវិធី (PPD)។ ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើសមកាលកម្មរំញោចអគ្គិសនីដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធ។ នៅពេលដែលសម្ពាធនៅក្នុងអង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៌ឈានដល់កម្រិតកំណត់ សញ្ញាជីពចរត្រូវបានបញ្ជូនទៅ C-PACE-EM ដើម្បីជំរុញការរំញោចអគ្គិសនី។ d រូបភាពនៃ CTCMs ចំនួនបួនដែលដាក់នៅលើធ្នើរ incubator ។ ឧបករណ៍ចំនួនបួនត្រូវបានភ្ជាប់ទៅ PPD មួយតាមរយៈសៀគ្វី pneumatic ហើយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងសន្ទះ hemostatic ដើម្បីត្រួតពិនិត្យសម្ពាធនៅក្នុងសៀគ្វី pneumatic ។ ឧបករណ៍នីមួយៗមានផ្នែកជាលិកាចំនួនប្រាំមួយ។
ដោយប្រើឧបករណ៍បញ្ចេញខ្យល់តែមួយ យើងអាចគ្រប់គ្រងឧបករណ៍ CTCM ចំនួន 4 ដែលឧបករណ៍នីមួយៗអាចផ្ទុកបាន 6 ផ្នែកជាលិកា (រូបភាពទី 1 ឃ) ។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធខ្យល់នៅក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាសម្ពាធសមកាលកម្មនៅក្នុងបន្ទប់អង្គធាតុរាវ និងជំរុញឱ្យមានការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃដុំបេះដូង (រូបភាពទី 2 ក និងភាពយន្តបន្ថែម 1) ។ ការវាយតម្លៃនៃជាលិកាលាតសន្ធឹងនៅ 80 mm Hg ។ សិល្បៈ។ បានបង្ហាញពីការលាតសន្ធឹងនៃផ្នែកជាលិកាដោយ 25% (រូបភាព 2b) ។ ការលាតសន្ធឹងភាគរយនេះត្រូវបានគេបង្ហាញថាត្រូវគ្នាទៅនឹងប្រវែង sarcomere សរីរវិទ្យានៃ 2.2-2.3 µm សម្រាប់ភាពកន្ត្រាក់នៃផ្នែកបេះដូងធម្មតា 17,19,25 ។ ចលនារបស់ជាលិកាត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើការកំណត់កាមេរ៉ាផ្ទាល់ខ្លួន (រូបភាពបន្ថែមទី 1)។ ទំហំ និងល្បឿននៃចលនាជាលិកា (រូបភាព 2c, d) ត្រូវគ្នាទៅនឹងការលាតសន្ធឹងអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង និងពេលវេលាអំឡុងពេល systole និង diastole (រូបភាព 2b) ។ ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងកំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសំរាកលំហែនៅតែថេរសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងវប្បធម៌ (រូបភាព 2f) ។ ដើម្បីវាយតម្លៃឥទ្ធិពលនៃការរំញោចអគ្គិសនីលើការចុះកិច្ចសន្យាអំឡុងពេលវប្បធម៌ យើងបានបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់ការខូចទ្រង់ទ្រាយសកម្មដោយប្រើក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោល (រូបភាពបន្ថែម 2a, ខ) ហើយអាចបែងចែករវាងការខូចទ្រង់ទ្រាយដោយមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនី។ ផ្នែកដូចគ្នានៃបេះដូង (រូបភាព 2f) ។ នៅក្នុងតំបន់ដែលអាចចល័តបាននៃការកាត់ (R6-9) វ៉ុលកំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនីគឺខ្ពស់ជាង 20% បើគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីដែលបង្ហាញពីការរួមចំណែកនៃការរំញោចអគ្គិសនីទៅនឹងមុខងារ contractile ។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធអង្គធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធអង្គធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃបំណែកជាលិកា។ b ដានតំណាងនៃភាគរយ stretch (ពណ៌ខៀវ) នៃផ្នែកជាលិកាដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងភាគរយ stretch (ពណ៌ទឹកក្រូច) ។ c ចលនាវាស់នៃដុំបេះដូងគឺស្របនឹងល្បឿនវាស់នៃចលនា។ (ឃ) គន្លងតំណាងនៃចលនារង្វិល (បន្ទាត់ពណ៌ខៀវ) និងល្បឿន (បន្ទាត់ចំនុចពណ៌ទឹកក្រូច) នៅក្នុងផ្នែកមួយនៃបេះដូង។ e បរិមាណនៃពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ចលនាជាលិកា (n = 25) ។ ចំណិត)/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ល្បឿនស៊ីស្តូលីកកំពូល (n = 24(D0) 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) និងអត្រានៃការសម្រាកខ្ពស់បំផុត (n=24(D0) 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា)។ ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សដែលមានកន្ទុយពីរមិនបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយឡើយ។ f ការវិភាគសំពាធតំណាងដាននៃផ្នែកជាលិកាដែលមាន (ក្រហម) និងដោយគ្មាន (ខៀវ) រំញោចអគ្គិសនី តំបន់ដប់នៃផ្នែកជាលិកាពីផ្នែកដូចគ្នា។ បន្ទះខាងក្រោមបង្ហាញពីបរិមាណនៃភាពខុសគ្នាភាគរយនៃសំពាធនៅក្នុងផ្នែកជាលិកាដោយមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីនៅក្នុងតំបន់ដប់ពីផ្នែកផ្សេងៗគ្នា។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តសិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05) ។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តសិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05) ។ (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01,*5). (n = 8 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05)។ (n = 8 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ស្ទីមបេះដូងជីវមាត្រឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង [20, 21] យើងបានរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យ មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 6 ថ្ងៃដោយអនុវត្តការរំញោចអគ្គិសនី និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពសមាសភាពមធ្យម។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយបន្ទាប់ពីរយៈពេល 10 ថ្ងៃតួលេខទាំងនេះបានធ្លាក់ចុះយ៉ាងខ្លាំង។ យើងនឹងយោងទៅលើផ្នែកដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជីវមាត្រឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង 20, 21 លក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យ (Ctrl) ហើយយើងនឹងប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរពីមុនរបស់យើងជាលក្ខខណ្ឌ MC និងវប្បធម៌ក្រោមការរំញោចមេកានិច និងអគ្គិសនីក្នុងពេលដំណាលគ្នា (CTCM) ។ ហៅ ទីមួយ យើងបានកំណត់ថាការភ្ញោចដោយមេកានិក ដោយមិនមានការភ្ញោចអគ្គិសនីគឺមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាបាននូវលទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកាសម្រាប់រយៈពេល 6 ថ្ងៃ (រូបភាពបន្ថែម 3a, ខ)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ជាមួយនឹងការណែនាំនៃការរំញោចរូបវិទ្យា-មេកានិក និងអគ្គិសនីដោយប្រើ STCM លទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅតែដដែលដូចនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS ប៉ុន្តែមិនស្ថិតនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl ដូចដែលបានបង្ហាញដោយការវិភាគ MTT (រូបភាព 1) ។ ៣ ក) នេះបង្ហាញថាការរំញោចមេកានិច និងការក្លែងធ្វើនៃវដ្តបេះដូងអាចរក្សាផ្នែកជាលិកាឱ្យដំណើរការបានពីរដងដូចដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង។ ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការវាយតម្លៃលើភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកជាលិកាដោយ immunolabeling នៃ cardiac troponin T និង connexin 43 បានបង្ហាញថា connexin 43 expression គឺខ្ពស់ជាងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកា MC នៅថ្ងៃទី 12 ជាងការគ្រប់គ្រងនៅថ្ងៃតែមួយ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ កន្សោម connexin 43 ឯកសណ្ឋាន និងការបង្កើត Z-disc មិនត្រូវបានរក្សាទុកពេញលេញទេ (រូបភាព 3b) ។ យើងប្រើក្របខណ្ឌបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (AI) ដើម្បីកំណត់បរិមាណសុចរិតភាពនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកា 26 ដែលជាបំពង់សិក្សាជ្រៅដែលផ្អែកលើរូបភាពដោយផ្អែកលើ troponin-T និង connexin staining43 ដើម្បីកំណត់បរិមាណដោយស្វ័យប្រវត្តិនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និង fluorescence នៃចំណិតបេះដូងនៅក្នុងលក្ខខណ្ឌនៃកម្លាំងនៃការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម។ វិធីសាស្រ្តនេះប្រើបណ្តាញសរសៃប្រសាទ Convolutional (CNN) និងក្របខណ្ឌសិក្សាស៊ីជម្រៅ ដើម្បីកំណត់បរិមាណភាពជឿជាក់នៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងក្នុងលក្ខណៈស្វ័យប្រវត្តិ និងមិនលំអៀង ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងឯកសារយោង។ 26. ជាលិកា MC បានបង្ហាញភាពស្រដៀងគ្នានៃរចនាសម្ព័ន្ធទៅនឹងថ្ងៃទី 0 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកគ្រប់គ្រងឋិតិវន្ត។ លើសពីនេះ ស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson បានបង្ហាញពីភាគរយទាបជាងយ៉ាងខ្លាំងនៃជំងឺ fibrosis នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យនៅថ្ងៃទី 12 នៃវប្បធម៌ (រូបភាព 3c) ។ ខណៈពេលដែល CTCM បានបង្កើនលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកជាលិកាបេះដូងនៅថ្ងៃទី 12 ដល់កម្រិតស្រដៀងនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ វាមិនធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូងនោះទេ។
ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃទាំងនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីវិធីមួយ # NO# ការធ្វើតេស្តជ្រូក 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ ទាំងនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម # NO# សាកល្បងដោយវិធីផ្សេងគ្នា # ជ្រូក 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូងស្រស់ MTT (D0) ឬវប្បធម៌នៃផ្នែកបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 control) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control)) ), 12 (D12 MC) ជ្រូក/ក្រុមមួយគឺខុសគ្នាពីការធ្វើតេស្តមួយ។####p < 0,0001 по сравнению с D0 និង **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl)) 中新鲜心脏切片(D0)或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行OV单向AN︎相比, ####p < 0.0001, 与D12 Ctrl 相比, ** p < 0.01) ។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl)) 中新鲜心脪切片(楐匇) (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (ការគ្រប់គ្រង D12) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control)) , 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកមួយផ្លូវ NOVA####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0, **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។b Troponin-T (ពណ៌បៃតង), connexin 43 (ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលដាច់ដោយឡែកថ្មីៗ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬលក្ខខណ្ឌ CTCM (MC) រយៈពេល 12 ថ្ងៃ) នៃរូបភាព immunofluorescence តំណាង (មាត្រដ្ឋានទទេ = 100 µm) ។ បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង ****p < 0.01201 ធៀបនឹង D0.0001) ។ បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ****p < Ctrl) ។ Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0)), 7 (D0), Ctrl срезов/групп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; បញ្ជា (Ctrl) D12 ។ បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយបញ្ញាសិប្បនិមិត្ត (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 ទល់នឹង D0 និង ****p < Ctrl 1) ។人工智能量化心脏组织结构完整性(n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមជ្រូកនីមួយៗ ការធ្វើតេស្ត ANOVA ផ្លូវមួយ;###0D <10 .相比, ****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比) ។人工智能量化心脏组织结构完整性(n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមជ្រូកនីមួយៗ ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ;###0.0 <10与D0相比, ****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比). Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7D) CTRL (10) срезов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; បញ្ជា (Ctrl) ។ បញ្ញាសិប្បនិមិត្ត ដើម្បីកំណត់បរិមាណភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូង (n=7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមនីមួយៗនៃជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p<0.0001 ទល់នឹង .D0 សម្រាប់ការប្រៀបធៀប ****p < 10 ។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋានទទេ = 500 µm) (n = 10 slices/group នីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0. និង Ctrl) ។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋានទទេ = 500 µm) (n = 10 ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង 10 ***) ។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенныхрорим Массона (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется < одностйте ; 0,0001 по сравнению с D0 និង ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ខាងស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋាន uncoated = 500 µm) (n = 10 sections/groups from different pigs, one-way ANOVA tested) #### p < 0 .0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 ។ c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度= 500 µm) (n = 500 µm)个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p 1 減 0.0) C用 masson 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度裸尺度尸度尸度500 µm) (n = 10个切片组每组来自不同猪，进行单向单向 Anova 测试；###.00 <1.相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比) ។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашеннырох т Массона (чистая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью дисперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 បញ្ជា)។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (ទទេ = 500 µm) (n = 10 ផ្នែក/ក្រុម ដែលនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងគ្នា សាកល្បងដោយការវិភាគមួយផ្លូវនៃការប្រែប្រួល ;### # p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0.របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
យើងបានសន្មត់ថាដោយការបន្ថែមម៉ូលេគុលតូចៗទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ ភាពសុចរិតនៃ cardiomyocyte អាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង ហើយការអភិវឌ្ឍសរសៃអំបោះត្រូវបានកាត់បន្ថយក្នុងអំឡុងពេលវប្បធម៌ CTCM ។ ដូច្នេះហើយ យើងបានពិនិត្យរកម៉ូលេគុលតូចៗដោយប្រើវប្បធម៌គ្រប់គ្រងឋិតិវន្តរបស់យើង 20,21 ដោយសារកត្តាមួយចំនួនតូច។ Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3) និង SB431542 (SB) ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់អេក្រង់នេះ។ ម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះពីមុនត្រូវបានប្រើប្រាស់នៅក្នុងវប្បធម៌ hiPSC-CM ដើម្បីជំរុញភាពចាស់ទុំនៃ cardiomyocytes ដោយបង្កើនប្រវែង sarcomere, T-tubules និងល្បឿន conduction។ លើសពីនេះ ទាំង Dex (a glucocorticoid) និង SB ត្រូវបានគេដឹងថាអាចទប់ស្កាត់ការរលាក 29,30 ។ ដូច្នេះហើយ យើងបានសាកល្បងថាតើការដាក់បញ្ចូលមួយ ឬការរួមបញ្ចូលគ្នានៃម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះនឹងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូង។ សម្រាប់ការពិនិត្យដំបូង កម្រិតថ្នាំនៃសមាសធាតុនីមួយៗត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើការប្រមូលផ្តុំដែលប្រើជាទូទៅនៅក្នុងគំរូវប្បធម៌កោសិកា (1 μM Dex27, 100 nM T327 និង 2.5 μM SB31) ។ បន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ T3 និង Dex បណ្តាលឱ្យមានភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ cardiomyocyte ដ៏ល្អប្រសើរ និងការកែទម្រង់សរសៃតិចតួចបំផុត (រូបភាពបន្ថែម 4 និង 5) ។ លើសពីនេះ ការប្រើប្រាស់កំហាប់ T3 និង Dex ទ្វេដង ឬទ្វេដងនៃ T3 និង Dex បានបង្កើតផលអាក្រក់បើប្រៀបធៀបទៅនឹងកំហាប់ធម្មតា (រូបភាពបន្ថែម 6a, ខ) ។
បន្ទាប់ពីការពិនិត្យដំបូង យើងបានធ្វើការប្រៀបធៀបពីក្បាលទៅក្បាលនៃលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ចំនួន 4 (រូបភាពទី 4a): បញ្ជា(Ctrl)៖ ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានពិពណ៌នានៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្តដែលបានពិពណ៌នាពីមុនរបស់យើងដោយប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើររបស់យើង។ 20.21 TD: T3 និង Ctrl s បានបន្ថែម Dex នៅថ្ងៃពុធ; MC: ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង CTCM ដោយប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរពីមុនរបស់យើង; និង MT: CTCM ជាមួយ T3 និង Dex ត្រូវបានបន្ថែមទៅឧបករណ៍ផ្ទុក។ បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ លទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកា MS និង MT នៅតែដូចគ្នានឹងជាលិកាស្រស់ដែលត្រូវបានវាយតម្លៃដោយ MTT assay (រូបភាព 4b) ។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅនឹងវប្បធម៌ឆ្លងកាត់ (TD) មិនបាននាំមកនូវភាពប្រសើរឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ទេបើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ Ctrl ដែលបង្ហាញពីតួនាទីសំខាន់នៃការរំញោចមេកានិចក្នុងការរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូង។
ដ្យាក្រាមរចនាពិសោធន៍ដែលពិពណ៌នាអំពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ចំនួនបួនដែលប្រើដើម្បីវាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃការរំញោចមេកានិច និងការបន្ថែម T3/Dex នៅលើមធ្យមសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម NO### ត្រូវបានអនុវត្តដោយវិធីផ្សេងគ្នា។ 0.0001, ###p < 0.001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម NO### ត្រូវបានអនុវត្តដោយវិធីផ្សេងគ្នា។ 0.0001, ###p < 0.001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 ctrl)។ b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивир ова ни культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 TD), D1 Ctrl និង D1 MC) срезов/группу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ប្រើ сравнению ជាមួយ D12 Ctrl) ។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យនៅ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (ការគ្រប់គ្រង, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MT), 12 (D12 ឡើង MC ពីផ្នែកផ្សេងគ្នា) ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ទល់នឹង D0 និង **p < 0.01 ដោយប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b 条形图显示所有4种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0) 、 15 (D12 D1 Ctrl 2、D) MT), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001,###p < 0.001*曯 0.001 与D0与D12控制)។b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свижижим (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA<1,#0# по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (ការគ្រប់គ្រង, TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុម ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវមួយ<0.##0##0.#0##0. ទល់នឹង D0, **p<0.01 ទល់នឹងការគ្រប់គ្រង D12)។ c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 slices/groups from different pigs, one-way ANOVA test is performed; ###p < 0.001, បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl. <0) ។ c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 slices/groups from different pigs, one-way ANOVA test is performed; ###p < 0.001, បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl. <0) ។ c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во 4 культивирования во 4 культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группуы отнезов/группуы) односторонний Выполняется тест ANOVA; c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករក្នុងរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោយការដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (control, TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត ; ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl ***p 1) ។ c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比，培养后12天的葡萄糖通量定量（n=6片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，縎D Ctrl D12 相比) ។ C 条形图显示所有 4种条件（（ctrl、td、mc和 mt）新鲜心脏切片切矉切片君吸12天的通量定量（n=6片/组，来自猪，，，，，，，，，，，猪猪单向执行ANOVA<#0.#0相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比) ។ c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивиляния культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/груйспа, срезов/групра, односторонний Были проведены тесты ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (конт) ។ c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករនៅរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោយការដាំដុះសម្រាប់លក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (control, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ឯកតោភាគីត្រូវបានធ្វើតេស្ត ANOVA ត្រូវបានអនុវត្ត ###p < 0.0012p ធៀបនឹង D ធៀបនឹង 0.0012p ។ (ការគ្រប់គ្រង) ។d ការវិភាគសំពាធនៃបំណែកនៃស្រស់ (ពណ៌ខៀវ) ថ្ងៃទី 12 MC (ពណ៌បៃតង) និងថ្ងៃទី 12 MT (ក្រហម) ជាលិកានៅចំនុចផ្នែកជាលិកាចំនួនដប់ (n = 4 slices/group, one-way ANOVA test; មិនមានភាពខុសគ្នាខ្លាំងរវាងក្រុម)។ e គម្រោង Volcano បង្ហាញហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (MT) រយៈពេល 10-12 ថ្ងៃ។ f ផែនទីកំដៅនៃហ្សែន sarcomere សម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នីមួយៗ។ របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
ការពឹងផ្អែកលើមេតាបូលីសលើការផ្លាស់ប្តូរពីការកត់សុីអាស៊ីតខ្លាញ់ទៅជា glycolysis គឺជាសញ្ញាសម្គាល់នៃការបែងចែក cardiomyocyte dedifferentiation ។ cardiomyocytes មិនទាន់ពេញវ័យប្រើប្រាស់ជាចម្បងនូវជាតិស្ករសម្រាប់ការផលិត ATP និងមាន mitochondria hypoplastic ជាមួយនឹង cristae 5,32 មួយចំនួន។ ការវិភាគការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបានបង្ហាញថានៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MC និង MT ការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសគឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងជាលិកាថ្ងៃ 0 (រូបភាពទី 4 គ) ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយសំណាក Ctrl បានបង្ហាញពីការកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៃការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបើប្រៀបធៀបទៅនឹងជាលិកាស្រស់។ នេះបង្ហាញថាការបញ្ចូលគ្នានៃ CTCM និង T3/Dex បង្កើនលទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកា និងរក្សា phenotype មេតាបូលីសនៃផ្នែកបេះដូងដែលមានវប្បធម៌រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះ ការវិភាគសំពាធបានបង្ហាញថាកម្រិតសំពាធនៅតែដដែលដូចក្នុងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT និង MS (រូបភាពទី 4 ឃ)។
ដើម្បីវិភាគផលប៉ះពាល់ទាំងមូលនៃ CTCM និង T3/Dex លើទិដ្ឋភាពប្រតិចារិកសកលនៃជាលិការបេះដូង យើងបានអនុវត្ត RNAseq លើផ្នែកបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ផ្សេងគ្នាទាំងបួន (ទិន្នន័យបន្ថែម 1)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ផ្នែក MT បានបង្ហាញពីភាពស្រដៀងគ្នានៃប្រតិចារិកខ្ពស់ទៅនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ ដោយមានតែ 16 ប៉ុណ្ណោះដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលក្នុងចំណោម 13,642 ហ្សែន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដូចដែលយើងបានបង្ហាញមុននេះ បន្ទះ Ctrl បង្ហាញ 1229 ហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលបន្ទាប់ពី 10-12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ (រូបភាព 4e) ។ ទិន្នន័យទាំងនេះត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយ qRT-PCR នៃហ្សែនបេះដូង និង fibroblast (រូបភាពបន្ថែម 7a-c)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ផ្នែក Ctrl បានបង្ហាញពីការថយចុះនៃហ្សែននៃវដ្តបេះដូង និងកោសិកា និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃកម្មវិធីហ្សែនរលាក។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ភាពខុសគ្នាដែលជាធម្មតាកើតឡើងបន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេលវែងត្រូវបានកាត់បន្ថយទាំងស្រុងនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (រូបភាពបន្ថែម 8a, ខ)។ ការសិក្សាដោយប្រុងប្រយ័ត្ននៃហ្សែន sarcomere បានបង្ហាញថាមានតែនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT គឺហ្សែនដែលអ៊ិនកូដ sarcomere (រូបភាព 4f) និងឆានែលអ៊ីយ៉ុង (រូបភាពបន្ថែម 9) ត្រូវបានបម្រុងទុក ការពារពួកវាពីការបង្ក្រាបក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl, TD និង MC ។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ជាមួយនឹងការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិក និងកំប្លែង (T3/Dex) ប្រតិចារិកនៃដុំបេះដូងអាចនៅតែស្រដៀងនឹងដុំបេះដូងស្រស់ៗបន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌។
ការរកឃើញប្រតិចារិកទាំងនេះត្រូវបានគាំទ្រដោយការពិតដែលថាភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃ cardiomyocytes នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកយ៉ាងល្អបំផុតក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ ដូចដែលបានបង្ហាញដោយ connexin 43 នៅដដែល និងបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម (រូបភាព 5a) ។ លើសពីនេះទៀត ដុំសាច់នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងបើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl និងស្រដៀងទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (រូបភាព 5b)។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថាការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិក និងការព្យាបាល T3/Dex មានប្រសិទ្ធភាពរក្សារចនាសម្ព័ន្ធបេះដូងនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌។
រូបភាព immunofluorescence តំណាងនៃ troponin-T (បៃតង) connexin 43 (ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលដាច់ថ្មីៗ (D0) ឬដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ផ្នែកបេះដូងទាំងបួន (របារមាត្រដ្ឋាន = 100 µm) ។ ) បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 < ធៀបនឹង D0.0*0. ទៅ D12 Ctrl) ។ បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 < ធៀបនឹង D0.0*0. ទៅ D12 Ctrl) ។ Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта D0 (n = 7) D12 MC និង D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) ។ បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *0p. * 0.*** បញ្ជា (Ctrl) D12 ។对不同猪的心脏组织结构完整性(n = 7(D0 和D12 Ctrl)), 5 (D12 TD、D12 MC 和D12 MT)切片/组)进行人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 戈 0.05* 相Ctrl D12 相比) ។对不同猪的心脏结构完整性（n=7（d0和d12 ctrl）（5（d12 td、d12 mc和 d12 mt）巺茽）州进行单向单向单向测试； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.000 )បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៅក្នុងជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ផ្នែក/ក្រុម) ជាមួយនឹងការធ្វើតេស្ត ANOVA ផ្លូវមួយ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 និង *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ #### p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), 9 (D12 MT)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តមួយផ្លូវ #0#0 NOVA ទៅ D0 និង ***p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), 9 (D12 MT)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តមួយផ្លូវ #0#0 NOVA ទៅ D0 និង ***p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным клсет (масштабная линейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 និង ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា អនុវត្តវិធីមួយ ###.00# ANOp និង ANOp ***p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 ទល់នឹង D12 Ctrl) ។ b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化(比例尺= 500 µm) (n = 10 (D0, 12) MC)，来自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 与D0 相*p < 0.0001 与D0 相0.0001 与D12 Ctrl 相比) ។ b用 masson 三色染料的心脏切片的代表性和量化（比例尺尺尺 = 500 µm) ( d 1 1 0 µm ) td 和 d12 mc) 来自不同的 9个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片切片切片切片切片切片切片切片/组，进行单因素方差分析；###.00<1相比，***p < 0.001，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比)។ b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массята 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA <0 , #пособ ANOVA <0 , #0 сравнению с D0, ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយសារធាតុ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) ផ្នែកពីជ្រូក/ក្រុមផ្សេងៗគ្នា វិធីសាស្ត្រ ANOVA មួយ <#p##0#p; #p.#0#p 0.001 ឬ ****p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
ជាចុងក្រោយ សមត្ថភាពរបស់ CTCM ក្នុងការធ្វើត្រាប់តាមជំងឺលើសឈាមបេះដូងត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការកើនឡើងនៃជាលិកាបេះដូង។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់កំពូលបានកើនឡើងពី 80 mmHg ដល់ 80 mmHg ។ សិល្បៈ។ (ការលាតសន្ធឹងធម្មតា) រហូតដល់ 140 mmHg សិល្បៈ។ (រូបភាពទី 6 ក) ។ នេះត្រូវគ្នាទៅនឹងការកើនឡើង 32% នៃការលាតសន្ធឹង (រូបភាព 6b) ដែលត្រូវបានបង្ហាញពីមុនថាជាភាគរយដែលត្រូវគ្នាដែលត្រូវការសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដើម្បីសម្រេចបានប្រវែង sarcomere ស្រដៀងនឹងអ្វីដែលឃើញនៅក្នុង hypertrophy ។ ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងកំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសំរាកលំហែនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេលប្រាំមួយថ្ងៃនៃវប្បធម៌ (រូបភាព 6c) ។ ជាលិកាបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានទទួលរងនូវការលាតសន្ធឹងធម្មតា (MT (Normal)) ឬស្ថានភាពហួសប្រមាណ (MT (OS)) សម្រាប់រយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃ។ រួចហើយបន្ទាប់ពីរយៈពេលបួនថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៍ សារធាតុ biomarker hypertrophic NT-ProBNP ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងក្នុងកម្រិតមធ្យមក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (OS) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ MT (ធម្មតា) (រូបភាព 7a) ។ លើសពីនេះទៀតបន្ទាប់ពីរយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃនៃការដាំដុះទំហំកោសិកានៅក្នុង MT (OS) (រូបភាព 7b) បានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកនៃបេះដូង MT (ធម្មតា) ។ លើសពីនេះ ការផ្លាស់ប្តូរទីតាំងនុយក្លេអ៊ែរ NFATC4 ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកាដែលលាតសន្ធឹង (រូបភាព 7c) ។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញពីការវិវឌ្ឍន៍នៃការផ្លាស់ប្តូររោគសាស្ត្របន្ទាប់ពីជំងឺលើសសម្ពាធឈាម និងគាំទ្រគំនិតដែលឧបករណ៍ CTCM អាចត្រូវបានប្រើជាវេទិកាមួយដើម្បីសិក្សាពីសញ្ញានៃការឡើងសម្ពាធឈាមដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹង។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធអង្គធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធអង្គធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃបំណែកជាលិកា។ b តំណាងភាគរយនៃការលាតសន្ធឹង និងខ្សែកោងអត្រាលាតសន្ធឹងសម្រាប់ផ្នែកជាលិកាដែលលាតសន្ធឹងធម្មតា (ពណ៌ទឹកក្រូច) និងហួសកម្រិត (ពណ៌ខៀវ) ។ c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 18-19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា)) ទំហំនៃចលនាជាលិកា (n = 14 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) កម្រិតកំពូល 1/systolic ខុសគ្នា ជ្រូក) និងអត្រាបន្ធូរអារម្មណ៍ខ្ពស់បំផុត (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ផ្នែក/ក្រុម) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ការធ្វើតេស្ត t-tailed Student's two-tailed's មិនមានភាពខុសប្លែកគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយដែលបង្ហាញថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងនេះនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេល 6 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ជាមួយនឹង overvoltage ។ របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
តារាងបរិមាណក្រាហ្វនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ពីបំណែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT normal stretch (Norm) ឬ overstretching (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការលាតសន្ធឹងតាមពីរផ្លូវ ** ANOVA ។ <** ត្រូវបានអនុវត្ត។ តារាងបរិមាណក្រាហ្វនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ពីចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT normal stretch (Norm) ឬ overstretching (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS)) slices/group from different pigs, two-way is បើធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា។ 0** NO.អ៊ីស្តូក្រាមបរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ពីបំណែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm និង D4) ។ MTOS) ចំណិត / ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគកត្តាពីរត្រូវបានអនុវត្ត។**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p < 0.01 ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា) ។ a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓叇的匡MTNorm)、3(D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析； **与渣常。 បរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ធម្មតា (Norm) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ពីភាពខុសគ្នា猪的切片/组，可以双向方方发发动 **ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា ទំ<0.01)។អ៊ីស្តូក្រាម បរិមាណនៃការប្រមូលផ្តុំ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) និង D4 MTOS) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគពីរផ្លូវនៃភាពប្រែប្រួល។**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p < 0.01 ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា) ។ b រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 បំណែកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t-tailed Student ពីរត្រូវបានអនុវត្តធៀបនឹង 10 ។ b រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 បំណែកផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t-tailed Student ពីរគឺត្រូវបានអនុវត្តធៀបនឹង 10 ។ **** ខ. размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разовных свинай, хвостовой t-критерий Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង AZP (ខាងឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 ផ្នែកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយរបស់សិស្សធៀបនឹង t-0***stra ។ b用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性图像（n = 330 MTOS)，来自不同猪的10个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t 检验Ｘ与歋尾学生t 检验Ｘ与歋0.0001) ។ b រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូងប្រឡាក់ដោយ calcarein-T និង WGA (ខាងឆ្វេង) និងទំហំកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ពី 10 បំណែកផ្សេងគ្នា (D6 MTNorm)) Cells/组，两方法有尾学生t ការធ្វើតេស្តដោយភ្ជាប់** ធម្មតា 0.0001) ។ ខ. клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группрой, д Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង AZP (ឆ្វេង) និងបរិមាណនៃទំហំកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ពី 10 ផ្នែកផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) កោសិកា/ក្រុម លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យពីរកន្ទុយរបស់សិស្ស។ ****p <0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងសំពាធធម្មតា)។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 ចំណិតបេះដូង MTOS immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្ទេរ NFATC4 ទៅស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយគឺ 0. *0-5 ។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 បំណែកបេះដូង MTOS immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្ទេរ NFATC4 ទៅស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា , ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយ។ 0. c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 និង 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Тл и NFATC оценка транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , двусторонний t-критерий Стьюдента *p < 0,05) ។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងនៅ 0 និង 6 ថ្ងៃ MTOS, immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្លាស់ប្តូរទីតាំង NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃកោសិកា cavernous (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីសត្វជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) បានធ្វើការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយ។ *p <0.05) ។ c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化(n = 4 (爇 MT)) 、3 (D / 6 (爇 MT))进行双尾学生t 检验；*p < 0.05) ។ c រូបភាពតំណាងនៃ calcanin-T និង NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS បំណែកបេះដូង និង NFATC4 ពី NFATC4 ផ្សេងគ្នា 易位至CM កោសិកា nucleus的quantity化 (n = 4 (D0), 3 (D6 礄礄礄礄))时间双尾学生et 电影；*p < 0.05)។ c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 និង 6 день для иммуномаркировки тропонином-Ти NFATCот4 оценка транслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатыйС; 0,05) ។ c រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូង MTOS នៅថ្ងៃ 0 និង 6 សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 immunolabeling និងបរិមាណនៃការផ្លាស់ប្តូរទីតាំង NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃ CM ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) slices/group, two-tailed t -criterion) សិស្ស។របារកំហុសតំណាងឱ្យ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ការស្រាវជ្រាវសរសៃឈាមបេះដូងបកប្រែតម្រូវឱ្យមានគំរូកោសិកាដែលបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសបេះដូង។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានបង្កើតឡើង និងកំណត់លក្ខណៈដែលអាចជំរុញផ្នែក ultrathin នៃបេះដូង។ ប្រព័ន្ធ CTCM រួមបញ្ចូលទាំងការរំញោចអេឡិចត្រូមេកានិចដែលធ្វើសមកាលកម្មសរីរវិទ្យា និងការបង្កើនសារធាតុរាវ T3 និង Dex ។ នៅពេលដែលផ្នែកបេះដូង porcine ត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងកត្តាទាំងនេះ លទ្ធភាពជោគជ័យ ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ សកម្មភាពមេតាបូលីស និងការបញ្ចេញមតិចម្លងនៅតែដដែលដូចនៅក្នុងជាលិកាបេះដូងស្រស់ បន្ទាប់ពីវប្បធម៌ 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះទៀត ការលាតសន្ធឹងលើសនៃជាលិកាបេះដូងអាចបណ្តាលឱ្យមានការកើនឡើងនៃបេះដូងដែលបណ្តាលមកពី hyperextension ។ សរុបមក លទ្ធផលទាំងនេះគាំទ្រដល់តួនាទីសំខាន់នៃលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌សរីរវិទ្យាក្នុងការរក្សាទម្រង់បេះដូងធម្មតា និងផ្តល់វេទិកាសម្រាប់ការពិនិត្យថ្នាំ។
កត្តាជាច្រើនរួមចំណែកដល់ការបង្កើតបរិយាកាសដ៏ល្អប្រសើរសម្រាប់ដំណើរការ និងការរស់រាននៃ cardiomyocytes ។ កត្តាជាក់ស្តែងបំផុតគឺទាក់ទងទៅនឹង (1) អន្តរកម្មរវាងកោសិកា (2) ការរំញោចដោយមេកានិច (3) កត្តាកំប្លែង និង (4) ស្រទាប់ខាងក្រោមមេតាបូលីស។ អន្តរកម្មនៃកោសិកាសរីរវិទ្យា ទាមទារបណ្តាញបីវិមាត្រស្មុគស្មាញនៃប្រភេទកោសិកាច្រើន ដែលគាំទ្រដោយម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា។ អន្តរកម្មកោសិកាស្មុគ្រស្មាញបែបនេះគឺពិបាកក្នុងការបង្កើតឡើងវិញនៅក្នុង vitro ដោយសហវប្បធម៌នៃប្រភេទកោសិកានីមួយៗ ប៉ុន្តែអាចសម្រេចបានយ៉ាងងាយស្រួលដោយប្រើលក្ខណៈសរីរាង្គនៃផ្នែកបេះដូង។
ការលាតសន្ធឹងមេកានិច និងការរំញោចអគ្គិសនីនៃ cardiomyocytes គឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការថែរក្សា phenotype បេះដូង 33,34,35 ។ ខណៈពេលដែលការរំញោចមេកានិកត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់លក្ខខណ្ឌ hiPSC-CM និងភាពចាស់ទុំ ការសិក្សាដ៏ឆើតឆាយជាច្រើននាពេលថ្មីៗនេះបានព្យាយាមរំញោចមេកានិចនៃដុំបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ដោយប្រើការផ្ទុក uniaxial ។ ការសិក្សាទាំងនេះបង្ហាញថាការផ្ទុកមេកានិច uniaxial 2D មានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើ phenotype នៃបេះដូងអំឡុងពេលវប្បធម៌។ នៅក្នុងការសិក្សាទាំងនេះ ផ្នែកនៃបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំង tensile isometric 17, linear auxotonic loading18 ឬវដ្តនៃបេះដូងត្រូវបានបង្កើតឡើងវិញដោយប្រើមតិត្រឡប់របស់ transducer force និង tension drives ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះប្រើការលាតសន្ធឹងជាលិកា uniaxial ដោយគ្មានការធ្វើឱ្យប្រសើរពីបរិស្ថាន ដែលបណ្តាលឱ្យមានការបង្ក្រាបហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការបញ្ចេញហ្សែនច្រើនពេកដែលទាក់ទងនឹងការឆ្លើយតបនឹងការលាតសន្ធឹងមិនធម្មតា។ CTCM ដែលបានពិពណ៌នានៅទីនេះផ្តល់នូវការរំញោចអេឡិចត្រូម៉ាញេទិក 3D ដែលធ្វើត្រាប់តាមវដ្តនៃបេះដូងធម្មជាតិទាក់ទងនឹងពេលវេលាវដ្ត និងការលាតសន្ធឹងខាងសរីរវិទ្យា (25% stretch, 40% systole, 60% diastole និង 72 ដងក្នុងមួយនាទី) ។ ទោះបីជាការភ្ញោចមេកានិកបីវិមាត្រនេះតែមួយមុខមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាភាពសុចរិតនៃជាលិកាក៏ដោយ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចបែបកំប្លែង និងមេកានិចដោយប្រើ T3/Dex គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីរក្សាឱ្យបានគ្រប់គ្រាន់នូវលទ្ធភាពជោគជ័យ មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃជាលិកា។
កត្តាកំប្លែងដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការកែប្រែទម្រង់បេះដូងមនុស្សពេញវ័យ។ នេះត្រូវបានគូសបញ្ជាក់នៅក្នុងការសិក្សា HiPS-CM ដែល T3 និង Dex ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ ដើម្បីពន្លឿនការលូតលាស់កោសិកា។ T3 អាចមានឥទ្ធិពលលើការដឹកជញ្ជូនអាស៊ីតអាមីណូ ជាតិស្ករ និងកាល់ស្យូមឆ្លងកាត់ភ្នាសកោសិកា 36 ។ លើសពីនេះទៀត T3 លើកកម្ពស់ការបញ្ចេញមតិ MHC-α និងការគ្រប់គ្រងការថយចុះ MHC-β ដែលលើកកម្ពស់ការបង្កើត myofibrils រមួលយ៉ាងលឿននៅក្នុង cardiomyocytes ចាស់ទុំបើប្រៀបធៀបទៅនឹង myofibrils រមួលយឺតនៅក្នុង CM ទារក។ កង្វះ T3 ចំពោះអ្នកជំងឺ hypothyroid បណ្តាលឱ្យបាត់បង់នូវ myofibrillar bands និងកាត់បន្ថយអត្រានៃការវិវត្តនៃសម្លេង 37 ។ Dex ធ្វើសកម្មភាពលើអ្នកទទួល glucocorticoid ហើយត្រូវបានបង្ហាញដើម្បីបង្កើនការកន្ត្រាក់ myocardial នៅក្នុងបេះដូងដែលដាច់ឆ្ងាយ។ 38 ការកែលម្អនេះត្រូវបានគេគិតថាទាក់ទងទៅនឹងឥទ្ធិពលលើការបញ្ចូលកាល់ស្យូមដែលជំរុញដោយប្រាក់បញ្ញើ (SOCE) 39,40 ។ លើសពីនេះទៀត Dex ភ្ជាប់ទៅនឹងអ្នកទទួលរបស់វាដែលបណ្តាលឱ្យមានការឆ្លើយតបយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងកោសិកាដែលរារាំងមុខងារនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំនិងការរលាក 30 ។
លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថាការរំញោចមេកានិចរាងកាយ (MS) បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវដំណើរការវប្បធម៌ទាំងមូលបើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ប៉ុន្តែបានបរាជ័យក្នុងការរក្សាបាននូវលទ្ធភាពជោគជ័យ ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងកន្សោមបេះដូងក្នុងរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅ CTCM (MT) វប្បធម៌ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពជោគជ័យ និងរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិកស្រដៀងគ្នា ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងសកម្មភាពមេតាបូលីសជាមួយនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះទៀត តាមរយៈការគ្រប់គ្រងកម្រិតនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា គំរូ hyperextension-induced cardiac hypertrophy ត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើ STCM ដែលបង្ហាញពីភាពបត់បែននៃប្រព័ន្ធ STCM ។ វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថាទោះបីជាការជួសជុលបេះដូងនិងជំងឺ fibrosis ជាធម្មតាពាក់ព័ន្ធនឹងសរីរាង្គដែលនៅដដែលដែលកោសិកាឈាមរត់អាចផ្តល់នូវ cytokines សមស្របក៏ដូចជា phagocytosis និងកត្តាផ្លាស់ប្តូរផ្សេងទៀតក៏ដោយផ្នែកនៃបេះដូងនៅតែអាចធ្វើត្រាប់តាមដំណើរការ fibrotic ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងនិងរបួស។ ចូលទៅក្នុង myofibroblasts ។ នេះ​ត្រូវ​បាន​គេ​វាយ​តម្លៃ​ពី​មុន​នៅ​ក្នុង​គំរូ​ដុំ​បេះដូង​នេះ។ វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រ CTCM អាចត្រូវបានកែប្រែដោយការផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធ / អំព្លីទីតអគ្គិសនី និងភាពញឹកញាប់ដើម្បីក្លែងធ្វើលក្ខខណ្ឌជាច្រើនដូចជា tachycardia, bradycardia និងការគាំទ្រចលនាឈាមរត់មេកានិច (បេះដូង unloaded មេកានិច) ។ នេះធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធមានដំណើរការមធ្យមសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំ។ សមត្ថភាពរបស់ CTCM ដើម្បីធ្វើគំរូការលើសសម្ពាធឈាមដែលបណ្ដាលមកពីការធ្វើលំហាត់ប្រាណខ្លាំងពេក ត្រួសត្រាយផ្លូវសម្រាប់ការធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធនេះសម្រាប់ការព្យាបាលផ្ទាល់ខ្លួន។ សរុបសេចក្តីមក ការសិក្សាបច្ចុប្បន្នបង្ហាញថា ការអូសបន្លាយដោយមេកានិច និងការរំញោចបែបកំប្លែងគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការថែរក្សាវប្បធម៌នៃផ្នែកជាលិកាបេះដូង។
ទោះបីជាទិន្នន័យដែលបានបង្ហាញនៅទីនេះបង្ហាញថា CTCM គឺជាវេទិកាដ៏ជោគជ័យមួយសម្រាប់ការធ្វើគំរូ myocardium ដដែល ប៉ុន្តែវិធីសាស្ត្រវប្បធម៌នេះមានដែនកំណត់មួយចំនួន។ ដែនកំណត់សំខាន់នៃវប្បធម៌ CTCM គឺថាវាដាក់ភាពតានតឹងផ្នែកមេកានិចជាបន្តនៅលើចំណិត ដែលរារាំងសមត្ថភាពក្នុងការត្រួតពិនិត្យយ៉ាងសកម្មនូវការកន្ត្រាក់បេះដូងអំឡុងពេលវដ្តនីមួយៗ។ លើសពីនេះទៀត ដោយសារតែទំហំតូចនៃផ្នែកបេះដូង (7 ម.ម) សមត្ថភាពក្នុងការវាយតម្លៃមុខងារស៊ីស្តូលិកនៅខាងក្រៅប្រព័ន្ធវប្បធម៌ដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាកម្លាំងបែបប្រពៃណីមានកម្រិត។ នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងយកឈ្នះលើដែនកំណត់នេះដោយផ្នែកដោយការវាយតម្លៃវ៉ុលអុបទិកជាសូចនាករនៃមុខងារ contractile ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការកំណត់នេះនឹងតម្រូវឱ្យមានការងារបន្ថែមទៀត ហើយអាចត្រូវបានដោះស្រាយនៅពេលអនាគត ដោយណែនាំវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យអុបទិកនៃមុខងារនៃដុំបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ ដូចជាការធ្វើផែនទីអុបទិកដោយប្រើជាតិកាល់ស្យូម និងថ្នាំពណ៌ដែលងាយនឹងវ៉ុល។ ដែនកំណត់មួយទៀតនៃ CTCM គឺថាគំរូការងារមិនគ្រប់គ្រងភាពតានតឹងខាងសរីរវិទ្យា (ការផ្ទុកជាមុន និងក្រោយពេលផ្ទុក) ។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធត្រូវបានជំរុញក្នុងទិសដៅផ្ទុយដើម្បីបង្កើតឡើងវិញនូវ 25% physiological stretch នៅក្នុង diastole (ការលាតសន្ធឹងពេញលេញ) និង systole (ប្រវែងនៃការកន្ត្រាក់អំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនី) នៅក្នុងជាលិកាធំណាស់។ ការកំណត់នេះគួរតែត្រូវបានដកចេញនៅក្នុងការរចនា CTCM នាពេលអនាគតដោយសម្ពាធគ្រប់គ្រាន់លើជាលិកាបេះដូងពីភាគីទាំងពីរ និងដោយអនុវត្តទំនាក់ទំនងសម្ពាធ-បរិមាណពិតប្រាកដដែលកើតឡើងនៅក្នុងបន្ទប់នៃបេះដូង។
ការកែទម្រង់ដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតនេះត្រូវបានកំណត់ចំពោះការធ្វើត្រាប់តាមសញ្ញា hypertrophic hyperstretch ។ ដូច្នេះ គំរូនេះអាចជួយក្នុងការសិក្សាអំពីសញ្ញា hypertrophic ដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹង ដោយមិនចាំបាច់មានកត្តាកំប្លែង ឬសរសៃប្រសាទ (ដែលមិនមាននៅក្នុងប្រព័ន្ធនេះ)។ ការសិក្សាបន្ថែមគឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីបង្កើនភាពច្រើននៃ CTCM ជាឧទាហរណ៍ ការបង្រួបបង្រួមជាមួយកោសិកាភាពស៊ាំ ការធ្វើចរាចរកត្តាកំប្លែងក្នុងប្លាស្មា និងការបង្រួបបង្រួមនៅពេលដែលការបង្កាត់ពូជជាមួយកោសិកាសរសៃប្រសាទនឹងធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពនៃគំរូជំងឺជាមួយ CTCM ។
ជ្រូកចំនួនដប់បីត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការសិក្សានេះ។ នីតិវិធីសត្វទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមការណែនាំរបស់ស្ថាប័ន និងត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វរបស់សាកលវិទ្យាល័យ Louisville ។ ក្លោងទ្វារ aortic ត្រូវបានគៀប ហើយបេះដូងត្រូវបានរំខានជាមួយនឹង 1 L នៃ cardioplegia មាប់មគ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH រហូតដល់ 7.4); បេះដូង​ត្រូវ​បាន​រក្សា​ទុក​ក្នុង​ដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់​ទឹកកក​រហូត​ដល់​បញ្ជូន​ទៅ​មន្ទីរ​ពិសោធន៍​លើ​ទឹកកក​ដែល​ជា​ធម្មតា​គឺ <10 នាទី​។ បេះដូង​ត្រូវ​បាន​រក្សា​ទុក​ក្នុង​ដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់​ទឹកកក​រហូត​ដល់​បញ្ជូន​ទៅ​មន្ទីរ​ពិសោធន៍​លើ​ទឹកកក​ដែល​ជា​ធម្មតា​គឺ <10 នាទី​។ сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обаты បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់ទឹកកក រហូតដល់ការដឹកជញ្ជូនទៅកាន់មន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ដែលជាធម្មតាចំណាយពេលតិចជាង 10 នាទី។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។ Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. រក្សាបេះដូងនៅលើទឹកកក cardioplegia រហូតដល់ការដឹកជញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ជាធម្មតា <10 នាទី។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុងកម្មវិធី SolidWorks computer-aided design (CAD) software ។ បន្ទប់វប្បធម៌ បន្ទប់ចែក និងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានធ្វើពីប្លាស្ទិកអាគ្រីលីកច្បាស់លាស់ CNC ។ ចិញ្ចៀនខាងក្រោយមានអង្កត់ផ្ចិត 7mm ធ្វើពីប៉ូលីអេទីឡែនដង់ស៊ីតេខ្ពស់ (HDPE) នៅចំកណ្តាល ហើយមានចង្អូរ o-ring ដើម្បីផ្ទុកស៊ីលីកូន o-ring ដែលប្រើសម្រាប់បិទប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយនៅក្រោម។ ភ្នាសស៊ីលីកាស្តើងបំបែកបន្ទប់វប្បធម៌ពីចានបំបែក។ ភ្នាសស៊ីលីកូនត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនក្រាស់ 0.02 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 35A ។ បន្ទះស៊ីលីកុនខាងក្រោម និងផ្នែកខាងលើត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនក្រាស់ 1/16 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 50A។ វីសដែកអ៊ីណុក 316L និងគ្រាប់ស្លាបត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការតោងប្លុក និងបង្កើតត្រាខ្យល់។
បន្ទះសៀគ្វីបោះពុម្ពពិសេស (PCB) ត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីរួមបញ្ចូលជាមួយប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ។ រន្ធឧបករណ៍ភ្ជាប់ម៉ាស៊ីនស្វីសនៅលើ PCB ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅអេឡិចត្រូតក្រាហ្វិចដោយខ្សែស្ពាន់ស្រោបដោយប្រាក់ និងសំរិទ្ធ 0-60 វីសដែលដោតចូលទៅក្នុងអេឡិចត្រូត។ បន្ទះសៀគ្វីដែលបានបោះពុម្ពត្រូវបានដាក់ក្នុងគម្របម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D ។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បំប្លែងខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (PPD) ដែលបង្កើតសម្ពាធឈាមរត់ដែលបានគ្រប់គ្រងស្រដៀងទៅនឹងវដ្តបេះដូង។ នៅពេលដែលសម្ពាធខាងក្នុងបន្ទប់ខ្យល់កើនឡើង ភ្នាសស៊ីលីកូនអាចបត់បែនបានពង្រីកឡើងលើ ដោយបង្ខំឧបករណ៍ផ្ទុកនៅក្រោមកន្លែងជាលិកា។ បន្ទាប់មកតំបន់នៃជាលិកានឹងត្រូវបានលាតសន្ធឹងដោយការបណ្តេញសារធាតុរាវនេះដោយធ្វើត្រាប់តាមការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃបេះដូងអំឡុងពេល diastole ។ នៅកម្រិតកំពូលនៃការសំរាកលំហែ ការរំញោចអគ្គិសនីត្រូវបានអនុវត្តតាមរយៈអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីត ដែលកាត់បន្ថយសម្ពាធក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ និងបណ្តាលឱ្យមានការកន្ត្រាក់នៃផ្នែកជាលិកា។ នៅខាងក្នុងបំពង់គឺជាសន្ទះ hemostatic ដែលមានឧបករណ៏សម្ពាធដើម្បីរកមើលសម្ពាធនៅក្នុងប្រព័ន្ធខ្យល់។ សម្ពាធដែលចាប់បានដោយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានអនុវត្តទៅឧបករណ៍ប្រមូលទិន្នន័យដែលភ្ជាប់ទៅកុំព្យូទ័រយួរដៃ នេះអនុញ្ញាតឱ្យមានការត្រួតពិនិត្យជាបន្តបន្ទាប់នៃសម្ពាធនៅខាងក្នុងបន្ទប់ឧស្ម័ន។ នៅពេលដែលសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះអតិបរមាត្រូវបានឈានដល់ (ស្តង់ដារ 80 mmHg, 140 mmHg OS) ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានបញ្ជាឱ្យបញ្ជូនសញ្ញាទៅប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ដើម្បីបង្កើតសញ្ញាវ៉ុល biphasic សម្រាប់ 2 ms កំណត់ទៅ 4 V ។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានគេទទួលបាន ហើយលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នៅក្នុងអណ្តូងចំនួន 6 ត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖ ផ្ទេរបេះដូងដែលប្រមូលបានពីធុងផ្ទេរទៅថាសដែលមានជំងឺបេះដូងត្រជាក់ (4°C.)។ ventricle ខាងឆ្វេងត្រូវបានញែកដាច់ពីគ្នាជាមួយនឹង blade មាប់មគនិងកាត់ជាបំណែកនៃ 1-2 cm3 ។ បណ្តុំជាលិកាទាំងនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងជាលិការដោយសារធាតុស្អិត ហើយដាក់ក្នុងអាងងូតទឹកជាលិកា microtome រំញ័រដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode និងបន្តអុកស៊ីសែន (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.447 g), 18 mM (0.447 g), 10 mM ។ HEPES (2.38 ក្រាម), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ដំណោះស្រាយ), 1.8 mM CaCl2 (ដំណោះស្រាយ 1.8 មីលីលីត្រ 1 M) រហូតដល់ 1 L ddH2O) ។ microtome រំញ័រត្រូវបានកំណត់ដើម្បីកាត់បំណែកក្រាស់ 300 µm នៅប្រេកង់ 80 Hz ទំហំរំញ័រផ្ដេក 2 មម និងអត្រាជាមុន 0.03 ម.ម/វិនាទី។ ការងូតទឹកជាលិកាត្រូវបានហ៊ុំព័ទ្ធដោយទឹកកកដើម្បីរក្សាដំណោះស្រាយឱ្យត្រជាក់ ហើយសីតុណ្ហភាពត្រូវបានរក្សានៅ 4 ° C ។ ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាពីការងូត microtome ទៅកាន់បន្ទប់ទឹក incubation ដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode អុកស៊ីហ្សែនជាបន្តបន្ទាប់នៅលើទឹកកករហូតដល់ផ្នែកគ្រប់គ្រាន់ត្រូវបានទទួលសម្រាប់ចានវប្បធម៌មួយ។ សម្រាប់ការឆ្លងរាលដាល ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំនួយ polyurethane ទទឹង 6 ម.ម មាប់មគ ហើយដាក់ក្នុង 6 មីលីលីត្រនៃឧបករណ៍ផ្ទុកដែលប្រសើរឡើង (199 មធ្យម, 1x ITS supplement, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline និង 2X antibiotic-antifungal) ។ ការរំញោចអគ្គិសនី (10 V, ប្រេកង់ 1.2 Hz) ត្រូវបានអនុវត្តទៅផ្នែកជាលិកាតាមរយៈ C-Pace ។ សម្រាប់លក្ខខណ្ឌ TD ស្រស់ T3 និង Dex ត្រូវបានបន្ថែមនៅ 100 nM និង 1 μM នៅការផ្លាស់ប្តូរមធ្យមនីមួយៗ។ ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានឆ្អែតដោយអុកស៊ីសែនមុនពេលជំនួស 3 ដងក្នុងមួយថ្ងៃ។ ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងកន្លែងភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C និង 5% CO2។
សម្រាប់វប្បធម៌ CTCM ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានដាក់នៅលើម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D ដែលផលិតដោយខ្លួនឯងនៅក្នុងចាន Petri ដែលមានដំណោះស្រាយរបស់ Tyrode ដែលបានកែប្រែ។ ឧបករណ៍នេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីបង្កើនទំហំនៃចំណិតនៃបេះដូងដោយ 25% នៃផ្ទៃនៃរង្វង់ជំនួយ។ នេះត្រូវបានធ្វើដូច្នេះថាផ្នែកនៃបេះដូងមិនលាតសន្ធឹងបន្ទាប់ពីត្រូវបានផ្ទេរពីដំណោះស្រាយរបស់ Tyrode ទៅឧបករណ៍ផ្ទុកនិងអំឡុងពេល diastole ។ ដោយប្រើកាវ histoacrylic ផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 300 µm ត្រូវបានជួសជុលនៅលើក្រវ៉ាត់ជំនួយដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 7 មីលីម៉ែត្រ។ បន្ទាប់ពីភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងក្រវ៉ាត់ជំនួយហើយ កាត់ផ្នែកជាលិកាដែលលើស ហើយដាក់ផ្នែកជាលិកាភ្ជាប់វិញទៅក្នុងអាងងូតទឹកនៃដំណោះស្រាយ Tyrode នៅលើទឹកកក (4°C) រហូតដល់ផ្នែកគ្រប់គ្រាន់ត្រូវបានរៀបចំសម្រាប់ឧបករណ៍មួយ។ ពេលវេលាដំណើរការសរុបសម្រាប់ឧបករណ៍ទាំងអស់មិនគួរលើសពី 2 ម៉ោង។ បន្ទាប់ពីផ្នែកជាលិកាចំនួន 6 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងចិញ្ចៀនជំនួយរបស់ពួកគេ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានផ្គុំ។ អង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៍ CTCM ត្រូវបានបំពេញជាមុនជាមួយនឹងឧបករណ៍ផ្ទុកមុនអុកស៊ីហ្សែន 21 មីលីលីត្រ។ ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាទៅបន្ទប់វប្បធម៌ ហើយយកពពុះខ្យល់ចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្នដោយប្រើបំពង់។ បនា្ទាប់មក ផ្ន្រកជាលិកាត្រូវបានដឹកនាំទៅក្នុងរន្ធ ហើយចុចថ្នមៗចូលកន្លែង។ ជាចុងក្រោយ ដាក់គម្របអេឡិចត្រូតនៅលើឧបករណ៍ ហើយផ្ទេរឧបករណ៍ទៅកន្លែងភ្ញាស់។ បន្ទាប់មកភ្ជាប់ CTCM ទៅនឹងបំពង់ខ្យល់ និងប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ។ សន្ទះបិទបើកខ្យល់បើក ហើយសន្ទះខ្យល់បើក CTCM ។ ប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដើម្បីផ្តល់ 4 V នៅ 1.2 Hz ក្នុងអំឡុងពេល biphasic pacing សម្រាប់ 2 ms ។ ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរពីរដងក្នុងមួយថ្ងៃហើយអេឡិចត្រូតត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរម្តងក្នុងមួយថ្ងៃដើម្បីជៀសវាងការប្រមូលផ្តុំក្រាហ្វិចនៅលើអេឡិចត្រូត។ បើចាំបាច់ ផ្នែកជាលិកាអាចត្រូវបានយកចេញពីអណ្តូងវប្បធម៌របស់ពួកគេ ដើម្បីបណ្តេញពពុះខ្យល់ដែលអាចធ្លាក់នៅក្រោមពួកវា។ សម្រាប់លក្ខខណ្ឌនៃការព្យាបាល MT T3/Dex ត្រូវបានបន្ថែមថ្មីជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរមធ្យមនីមួយៗជាមួយនឹង 100 nM T3 និង 1 μM Dex ។ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង incubator នៅ 37 ° C និង 5% CO2 ។
ដើម្បីទទួលបានគន្លងដែលលាតសន្ធឹងនៃដុំបេះដូង ប្រព័ន្ធកាមេរ៉ាពិសេសមួយត្រូវបានបង្កើតឡើង។ កាមេរ៉ា SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ត្រូវ​បាន​ប្រើ​ជាមួយ​នឹង Navitar Zoom 7000 18-108mm macro lens (Navitar, San Francisco, CA)។ ការមើលឃើញត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់បន្ទាប់ពីការជំនួសឧបករណ៍ផ្ទុកជាមួយឧបករណ៍ផ្ទុកស្រស់។ កាមេរ៉ាត្រូវបានដាក់នៅមុំ 51° ហើយវីដេអូត្រូវបានថតក្នុងល្បឿន 30 ហ្វ្រេមក្នុងមួយវិនាទី។ ជាដំបូង កម្មវិធីប្រភពបើកចំហ (MUSCLEMOTION43) ត្រូវបានប្រើជាមួយ Image-J ដើម្បីកំណត់បរិមាណចលនានៃដុំបេះដូង។ របាំងនេះត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើប្រាស់ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ដើម្បីកំណត់តំបន់ដែលចាប់អារម្មណ៍សម្រាប់វាយដុំបេះដូង ដើម្បីជៀសវាងសំលេងរំខាន។ របាំងដែលបែងចែកដោយដៃត្រូវបានអនុវត្តចំពោះរូបភាពទាំងអស់នៅក្នុងលំដាប់ស៊ុមមួយ ហើយបន្ទាប់មកបញ្ជូនទៅកម្មវិធីជំនួយ MUSCLEMOTION ។ Muscle Motion ប្រើអាំងតង់ស៊ីតេមធ្យមនៃភីកសែលក្នុងស៊ុមនីមួយៗ ដើម្បីកំណត់បរិមាណចលនារបស់វាទាក់ទងទៅនឹងស៊ុមយោង។ ទិន្នន័យត្រូវបានកត់ត្រា ត្រង និងប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណនៃវដ្តរដូវ និងវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងនៃជាលិកាអំឡុងពេលវដ្ដបេះដូង។ វីដេអូដែលបានថតត្រូវបានដំណើរការក្រោយដំណើរការដោយប្រើតម្រងឌីជីថលសូន្យដំណាក់កាលដំបូង។ ដើម្បីកំណត់បរិមាណនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា (ពីកំពូលទៅកំពូល) ការវិភាគពីកំពូលទៅកំពូលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីបែងចែករវាងកំពូល និង troughs នៅក្នុងសញ្ញាដែលបានកត់ត្រា។ លើសពីនេះទៀត detrending ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើពហុនាមលំដាប់ទី 6 ដើម្បីលុបបំបាត់ការរសាត់នៃសញ្ញា។ កូដកម្មវិធីត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុង MATLAB ដើម្បីកំណត់ចលនាជាលិកាសកល ពេលវេលាវដ្ត ពេលវេលាសម្រាក និងពេលកន្ត្រាក់ (កូដកម្មវិធីបន្ថែម 44)។
សម្រាប់ការវិភាគសំពាធ ដោយប្រើវីដេអូដូចគ្នាដែលបានបង្កើតសម្រាប់ការវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងមេកានិច ដំបូងយើងតាមដានរូបភាពពីរដែលតំណាងឱ្យកំពូលចលនា (ចំណុចខ្ពស់បំផុត (ខាងលើ) និងទាបបំផុត (ទាបបំផុត) នៃចលនា) យោងតាមកម្មវិធី MUSCLEMOTION ។ បន្ទាប់មកយើងបែងចែកតំបន់ជាលិកា ហើយអនុវត្តទម្រង់នៃក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោលទៅជាលិកាដែលបែងចែក (រូបភាពបន្ថែម 2a)។ ជាលិកាដែលបានបែងចែកបន្ទាប់មកត្រូវបានបែងចែកទៅជាផ្ទៃរងចំនួនដប់ ហើយភាពតានតឹងលើផ្ទៃនីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការដូចខាងក្រោម៖ Strain = (Sup-Sdown)/Sdown ដែល Sup និង Sdown គឺជាចម្ងាយនៃរូបរាងពីស្រមោលផ្នែកខាងលើ និងខាងក្រោមនៃក្រណាត់ រៀងគ្នា (រូបភាពបន្ថែម .2b)។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានជួសជុលក្នុង 4% paraformaldehyde រយៈពេល 48 ម៉ោង។ ជាលិកាថេរត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកក្នុង 10% និង 20% sucrose រយៈពេល 1 ម៉ោងបន្ទាប់មកក្នុង 30% sucrose ពេញមួយយប់។ បន្ទាប់មកផ្នែកទាំងនោះត្រូវបានបង្កប់នៅក្នុងបរិវេណសីតុណ្ហភាពកាត់ល្អបំផុត (សមាសធាតុ OCT) ហើយត្រូវបានបង្កកបន្តិចម្តងៗនៅក្នុងអាងងូតទឹកទឹកកក isopentane/ស្ងួត។ ទុកប្លុកបង្កប់ OCT នៅ -80 °C រហូតដល់ការបំបែក។ ស្លាយត្រូវបានរៀបចំជាផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 8 μm។
ដើម្បីដក OCT ចេញពីផ្នែកបេះដូង កំដៅស្លាយនៅលើប្លុកកំដៅនៅ 95 °C រយៈពេល 5 នាទី។ បន្ថែម 1 មីលីលីត្រ PBS ទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ និង incubate 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ទាប់មក permeate ផ្នែកដោយកំណត់ 0.1% Triton-X ក្នុង PBS រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ ដើម្បីបងា្ករអង្គបដិបក្ខដែលមិនជាក់លាក់ពីការចងទៅនឹងសំណាក បន្ថែម 1 មីលីលីត្រនៃដំណោះស្រាយ BSA 3% ទៅស្លាយនិង incubate សម្រាប់រយៈពេល 1 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បន្ទាប់មក BSA ត្រូវបានដកចេញហើយស្លាយត្រូវបានទឹកនាំទៅជាមួយ PBS ។ សម្គាល់គំរូនីមួយៗដោយខ្មៅដៃ។ អង្គបដិប្រាណបឋម (រំលាយ 1:200 ក្នុង 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) និង troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ត្រូវបានបន្ថែមលើសពី 90 នាទី អង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំ 10% BSA) ប្រឆាំងនឹងកណ្ដុរ Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079) ប្រឆាំងនឹងទន្សាយ Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) សម្រាប់រយៈពេល 90 នាទីបន្ថែម លាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ PBS ដើម្បីបែងចែកគោលដៅស្នាមប្រឡាក់ចេញពីផ្ទៃខាងក្រោយ យើងបានបន្ថែមតែវត្ថុបញ្ជានុយក្លេអ៊ែរ។ ចុងក្រោយគឺអង្គបដិបក្ខ vectashield (មន្ទីរពិសោធន៍វ៉ិចទ័រ) និងបិទភ្ជាប់ជាមួយថ្នាំក្រចក -x ពង្រីក) និងមីក្រូទស្សន៍ Keyence ជាមួយការពង្រីក 40x ។
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) នៅ 5 μg/ml ក្នុង PBS ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ស្នាមប្រឡាក់ WGA ហើយបានអនុវត្តទៅផ្នែកថេររយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយខ្មៅស៊ូដង់ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទី។ បន្ទាប់មកស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយឧបករណ៍ផ្ទុក vectashield ត្រូវបានបន្ថែម។ ស្លាយត្រូវបានគេមើលឃើញនៅលើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ក្នុងកម្រិតពង្រីក 40x ។
OCT ត្រូវបានដកចេញពីគំរូដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងលើ។ បន្ទាប់ពីយក OCT ចេញ សូមជ្រមុជស្លាយនៅក្នុងដំណោះស្រាយរបស់ Bouin ពេញមួយយប់។ បន្ទាប់មក ស្លាយ​ត្រូវ​បាន​លាងជម្រះ​ដោយ​ទឹក​ចម្រោះ​រយៈពេល 1 ម៉ោង ហើយ​បន្ទាប់មក​ដាក់​ក្នុង​ដំណោះស្រាយ Bibrich aloe acid fuchsin រយៈពេល 10 នាទី។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវលាងសម្អាតដោយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយ 5% phosphomolybdenum / phosphotungstic acid 5% រយៈពេល 10 នាទី។ ដោយមិនចាំបាច់លាងជមែះទេ ផ្ទេរស្លាយដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងសូលុយស្យុងពណ៌ខៀវ aniline រយៈពេល 15 នាទី។ បន្ទាប់មកស្លាយត្រូវបានទឹកនាំទៅដោយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយអាស៊ីតអាសេទិក 1% រយៈពេល 2 នាទី។ ស្លាយត្រូវបានស្ងួតនៅក្នុងអេតាណុល 200 N ហើយផ្ទេរទៅ xylene ។ ស្លាយដែលមានស្នាមប្រឡាក់ត្រូវបានគេមើលឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ជាមួយនឹងគោលបំណង 10x ។ ភាគរយនៃតំបន់ Fibrosis ត្រូវបានគណនាដោយប្រើកម្មវិធី Keyence Analyzer ។
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA) លេខកាតាឡុក V13154 យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិតជាមួយនឹងការកែប្រែមួយចំនួន។ ជាពិសេស កណ្តាប់ដៃវះកាត់ដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 6 ម.ម ត្រូវបានប្រើដើម្បីធានាបាននូវទំហំជាលិកាឯកសណ្ឋានក្នុងអំឡុងពេលការវិភាគ MTT ។ ជាលិកាត្រូវបានផ្សាភ្ជាប់ជាលក្ខណៈបុគ្គលទៅក្នុងអណ្តូងនៃចានអណ្តូង 12 ដែលមានស្រទាប់ខាងក្រោម MTT យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ផ្នែកត្រូវបាន incubated នៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C. សម្រាប់រយៈពេល 3 ម៉ោងហើយជាលិការស់ metabolizes ស្រទាប់ខាងក្រោម MTT ដើម្បីបង្កើតជាសមាសធាតុ formazan ពណ៌ស្វាយ។ ជំនួសដំណោះស្រាយ MTT ជាមួយ 1 មីលីលីត្រ DMSO និង incubate នៅ 37 ° C សម្រាប់រយៈពេល 15 នាទីដើម្បីទាញយក formazan ពណ៌ស្វាយពីផ្នែកបេះដូង។ គំរូត្រូវបានពនឺក្នុងសមាមាត្រ 1:10 នៅក្នុង DMSO នៅក្នុងចានបាតដែលស្អាតចំនួន 96 និងអាំងតង់ស៊ីតេពណ៌ស្វាយដែលត្រូវបានវាស់នៅ 570 nm ដោយប្រើឧបករណ៍អានចាន Cytation (BioTek) ។ ការអានត្រូវបានធ្វើឱ្យធម្មតាទៅនឹងទម្ងន់នៃផ្នែកនីមួយៗនៃបេះដូង។
ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយចំណិតបេះដូងត្រូវបានជំនួសដោយមេឌៀដែលមាន 1 μCi/ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) សម្រាប់ការវិភាគការប្រើប្រាស់គ្លុយកូស ដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។ បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោង បន្ថែម 100 µl នៃមធ្យមទៅក្នុងបំពង់មីក្រូកណ្តាលបើកចំហដែលមាន 100 µl នៃ 0.2 N HCl ។ បន្ទាប់មក បំពង់ត្រូវបានដាក់ក្នុងបំពង់ផ្សែងដែលមាន 500 μlនៃ dH2O ដើម្បីហួត [3H]2O សម្រាប់រយៈពេល 72 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេ។ បន្ទាប់មកយកបំពង់ microcentrifuge ចេញពីបំពង់ scintillation ហើយបន្ថែមសារធាតុរាវ scintillation 10 មីលីលីត្រ។ ការរាប់ស្កែនត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគរាវ Tri-Carb 2900TR (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA)។ បន្ទាប់មកការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសត្រូវបានគណនាដោយគិតគូរពី [5-3H] - សកម្មភាពជាក់លាក់នៃជាតិស្ករ លំនឹងមិនពេញលេញ និងផ្ទៃខាងក្រោយ ការពនលាយនៃ [5-3H] ទៅគ្លុយកូសដែលមិនមានស្លាក និងប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងការស្រមើស្រមៃ។ ទិន្នន័យត្រូវបានធ្វើឱ្យធម្មតាទៅនឹងម៉ាស់នៃផ្នែកនៃបេះដូង។
បន្ទាប់ពីការធ្វើឱ្យដូចគ្នានៃជាលិកានៅក្នុង Trizol RNA ត្រូវបានញែកចេញពីផ្នែកបេះដូងដោយប្រើ Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNAsec លំដាប់លំដោយ និងការវិភាគទិន្នន័យត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖
1 μgនៃ RNA ក្នុងមួយគំរូត្រូវបានប្រើជាសម្ភារៈចាប់ផ្តើមសម្រាប់ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNA ។ បណ្ណាល័យតាមលំដាប់លំដោយត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើ NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit for Illumina (NEB, USA) តាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត ហើយលេខកូដលិបិក្រមត្រូវបានបន្ថែមទៅលំដាប់គុណលក្ខណៈសម្រាប់គំរូនីមួយៗ។ និយាយឱ្យខ្លី mRNA ត្រូវបានបន្សុតចេញពី RNA សរុបដោយប្រើអង្កាំម៉ាញេទិកភ្ជាប់ជាមួយ poly-T oligonucleotides ។ ការបំបែកត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ cations divalent នៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់នៅក្នុង NEBNext First Strand Synthesis Buffer (5X) ។ cDNA strand ដំបូង​ត្រូវ​បាន​សំយោគ​ដោយ​ប្រើ​ថ្នាំ primers hexamer ចៃដន្យ និង M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-)។ បន្ទាប់មក strand cDNA ទីពីរត្រូវបានសំយោគដោយប្រើ DNA polymerase I និង RNase H. ខ្សែដែលនៅសេសសល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាចុងត្រង់ដោយសកម្មភាព exonuclease/polymerase ។ បន្ទាប់​ពី​ការ​បញ្ចូល​ចុង 3′ នៃ​បំណែក DNA អាដាប់ទ័រ NEBNext ដែល​មាន​រចនាសម្ព័ន្ធ​រង្វិលជុំ​សក់​ត្រូវ​បាន​ភ្ជាប់​ជាមួយ​វា ដើម្បី​រៀបចំ​វា​សម្រាប់​ការ​បង្កាត់។ សម្រាប់ការជ្រើសរើសបំណែក cDNA នៃប្រវែងដែលពេញចិត្ត 150-200 bp ។ បំណែកបណ្ណាល័យត្រូវបានសម្អាតដោយប្រើប្រព័ន្ធ AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA)។ បន្ទាប់មក អង់ស៊ីម 3 μl USER (NEB, USA) ដែលមានទំហំជ្រើសរើស cDNA ភ្ជាប់ជាមួយអាដាប់ទ័រ ត្រូវបានប្រើសម្រាប់រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C ហើយបន្ទាប់មក 5 នាទីនៅ 95 ° C មុនពេល PCR ។ បន្ទាប់មក PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Phusion High-Fidelity DNA polymerase, universal PCR primers និង Index (X) primers ។ ជាចុងក្រោយ ផលិតផល PCR ត្រូវបានបន្សុត (ប្រព័ន្ធ AMPure XP) និងគុណភាពបណ្ណាល័យដែលត្រូវបានវាយតម្លៃលើប្រព័ន្ធ Agilent Bioanalyzer 2100។ បន្ទាប់មកបណ្ណាល័យ cDNA ត្រូវបានបន្តបន្ទាប់គ្នាដោយប្រើ Novaseq sequencer ។ ឯកសាររូបភាពដើមពី Illumina ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាការអានឆៅដោយប្រើ CASAVA Base Calling។ ទិន្នន័យឆៅត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទម្រង់ FASTQ(fq) ដែលមានលំដាប់អាន និងគុណភាពមូលដ្ឋានដែលត្រូវគ្នា។ ជ្រើសរើស HISAT2 ដើម្បីផ្គូផ្គងការអានលំដាប់លំដោយដែលបានត្រងទៅហ្សែនយោង Sscrofa11.1 ។ ជាទូទៅ HISAT2 គាំទ្រហ្សែននៃទំហំណាមួយ រួមទាំងហ្សែនធំជាង 4 ពាន់លានមូលដ្ឋាន ហើយតម្លៃលំនាំដើមត្រូវបានកំណត់សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រភាគច្រើន។ ការបំបែកការអានពីទិន្នន័យ RNA Seq អាចត្រូវបានតម្រឹមប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពដោយប្រើ HISAT2 ដែលជាប្រព័ន្ធលឿនបំផុតដែលអាចប្រើបាននាពេលបច្ចុប្បន្ន ជាមួយនឹងភាពត្រឹមត្រូវដូចគ្នា ឬប្រសើរជាងវិធីសាស្ត្រផ្សេងទៀត។
ភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិកឆ្លុះបញ្ចាំងដោយផ្ទាល់នូវកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន។ កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនត្រូវបានវាយតម្លៃដោយភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិក (ចំនួនលំដាប់លំដោយ) ដែលទាក់ទងនឹងហ្សែន ឬ exons ។ ចំនួននៃការអានគឺសមាមាត្រទៅនឹងកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន ប្រវែងហ្សែន និងជម្រៅនៃលំដាប់។ FPKM (បំណែកក្នុងមួយពាន់គូមូលដ្ឋាននៃប្រតិចារិកដែលបានបន្តបន្ទាប់គ្នាក្នុងមួយលានគូមូលដ្ឋាន) ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃ P នៃកន្សោមឌីផេរ៉ង់ស្យែលត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើកញ្ចប់ DESeq2 ។ បន្ទាប់មក យើងបានគណនាអត្រាការរកឃើញមិនពិត (FDR) សម្រាប់តម្លៃ P នីមួយៗដោយប្រើវិធី Benjamini-Hochberg ដោយផ្អែកលើមុខងារ R ដែលភ្ជាប់មកជាមួយ “p.adjust”។
RNA ដែលដាច់ចេញពីផ្នែកបេះដូងត្រូវបានបំប្លែងទៅជា cDNA នៅកំហាប់ 200 ng/μl ដោយប្រើ SuperScript IV Vilo Master mix ពី Thermo (Thermo, cat. no. 11756050)។ Quantitative RT-PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well transparent reaction plate (Thermo, cat. no. 4483319) និង microamp optical adhesive (Thermo, cat. no. 4311971)។ ល្បាយប្រតិកម្មមាន 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat #4444557), 0.5 µl Taqman Primer និង 3.5 µl H2O លាយក្នុងអណ្តូង។ វដ្ត qPCR ស្តង់ដារត្រូវបានដំណើរការ ហើយតម្លៃ CT ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ប្រើប្រាស់ PCR ពេលវេលាពិតប្រាកដ Quantstudio 5 (ម៉ូឌុល 384-well; ផលិតផល # A28135)។ ថ្នាំ primers Taqman ត្រូវ​បាន​ទិញ​ពី Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss068N6) (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), តម្លៃ 8 ACTA22 នៃគំរូទាំងអស់ត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតាទៅនឹងហ្សែនថែរក្សាផ្ទះ GAPDH ។
ការចេញផ្សាយប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយនៃ NT-ProBNP ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើឧបករណ៍ NT-ProBNP (ជ្រូក) (លេខឆ្មា MBS2086979, MyBioSource) យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ដោយសង្ខេប 250 µl នៃគំរូ និងស្តង់ដារនីមួយៗត្រូវបានបន្ថែមក្នុងការស្ទួនទៅអណ្តូងនីមួយៗ។ ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីបន្ថែមសំណាក បន្ថែម 50 µl នៃ Assay Reagent A ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។ អ្រងួនចានថ្នមៗហើយបិទភ្ជាប់ជាមួយ sealant ។ បន្ទាប់មកគ្រាប់ត្រូវបាន incubated នៅ 37 ° C រយៈពេល 1 ម៉ោង។ បន្ទាប់មក​យក​សូលុយស្យុង​មក​លាង​សម្អាត​អណ្តូង ៤ ដង​ជាមួយ​នឹង​ទឹក ៣៥០ µl នៃ​ដំណោះស្រាយ​លាង ១ ដង ដោយ​ញាស់​សូលុយស្យុង​លាង​រយៈពេល ១-២ នាទី​រាល់​ពេល​។ បន្ទាប់មកបន្ថែម 100 μl នៃ Assay Reagent B ក្នុងមួយអណ្តូង ហើយបិទភ្ជាប់ជាមួយ sealant ។ ថេប្លេត​ត្រូវ​បាន​អង្រួន​ថ្នមៗ ហើយ​ដាក់​នៅ​សីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 30 នាទី។ យក​សូលុយស្យុង​មក​លាង​សម្អាត​អណ្តូង​ចំនួន 5 ដង​ជាមួយ​នឹង 350 µl នៃ​ដំណោះ​ស្រាយ 1X ។ បន្ថែមដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម 90 µl ទៅអណ្តូងនីមួយៗ ហើយបិទចាន។ ដាក់ចាននៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេរយៈពេល 10-20 នាទី។ បន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ 50 µl ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។ ចានត្រូវបានវាស់ភ្លាមៗដោយប្រើឧបករណ៍អានចាន Cytation (BioTek) ដែលកំណត់នៅ 450 nm ។
ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។ ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។ Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обяжа 10% изменения параметра с 5% частотой ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% ជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для 10% абсолютного изменения параметров и 5% частоты ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% និងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5% ។ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានជ្រើសរើសដោយចៃដន្យមុនពេលពិសោធន៍។ ការវិភាគទាំងអស់គឺពិការភ្នែក ហើយសំណាកគំរូត្រូវបានឌិកូដបន្ទាប់ពីទិន្នន័យទាំងអស់ត្រូវបានវិភាគ។ កម្មវិធី GraphPad Prism (San Diego, CA) ត្រូវបានប្រើដើម្បីអនុវត្តការវិភាគស្ថិតិទាំងអស់។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ​​ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ​​ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ​​ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ​​ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ការធ្វើតេស្ត t-Two-tailed Student ត្រូវបានអនុវត្តលើទិន្នន័យដោយមានការប្រៀបធៀបតែ 2 ប៉ុណ្ណោះ។ ANOVA ផ្លូវមួយឬពីរផ្លូវត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់សារៈសំខាន់រវាងក្រុមជាច្រើន។ នៅពេលធ្វើតេស្តក្រោយម៉ោងធ្វើការ ការកែតម្រូវរបស់ Tukey ត្រូវបានអនុវត្តក្នុងគណនីសម្រាប់ការប្រៀបធៀបជាច្រើន។ ទិន្នន័យ RNAsec មានការពិចារណាស្ថិតិពិសេសនៅពេលគណនា FDR និង p.adjust ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងផ្នែក Methods ។
សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែមអំពីការរចនាការសិក្សា សូមមើលរបាយការណ៍ស្រាវជ្រាវធម្មជាតិអរូបីដែលភ្ជាប់ទៅអត្ថបទនេះ។