Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ).ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ರೆಂಡರ್ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.
ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ.ಮಾನವನ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಸೀಮಿತ ಲಭ್ಯತೆಯು ಹೃದಯ ಔಷಧ ಪರಿಣಾಮಗಳ ತಪ್ಪಾದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.ಇಲ್ಲಿ, ನಾವು ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಮಾದರಿಯನ್ನು (CTCM) ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಅದು ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಆಗಿ ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೊಲಿಕ್ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ, ಈ ವಿಧಾನವು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ಸುಧಾರಿಸಿತು, ಆದರೆ ಅವುಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ನಂತರ, ನಮ್ಮ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ 100 nM ಟ್ರೈಯೊಡೋಥೈರೋನೈನ್ (T3) ಮತ್ತು 1 μM ಡೆಕ್ಸಾಮೆಥಾಸೊನ್ (ಡೆಕ್ಸ್) ಸೇರ್ಪಡೆಯು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ವಿಭಾಗಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ.T3/Dex ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ, CTCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳು, ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಂತೆಯೇ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ಅತಿಯಾದ ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ CTCM ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕೆ ಪುರಾವೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, CTCM ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಮಾದರಿ ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಔಷಧ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.
ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಸಂಶೋಧನೆಯ ಮೊದಲು, ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಟ್ರೊ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಅಂತಹ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಬದಲಾದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆ, ಹೃದಯ ಬಡಿತ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬೇಕು.ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮಾನವನ ಹೃದಯದಲ್ಲಿ ಔಷಧಿಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುವಲ್ಲಿ ಸೀಮಿತ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೃದಯ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರದ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ವೇದಿಕೆಯಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ1,2.ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಐಡಿಯಲ್ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಮಾದರಿ (CTCM) ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿವಿಧ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮತ್ತು ಔಷಧೀಯ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಮಾದರಿಯಾಗಿದೆ.ಅಂತಹ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯು ಹೃದಯ ವೈಫಲ್ಯಕ್ಕೆ ಹೊಸ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ 4,5 ಮತ್ತು ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಿಂದ ನಿರ್ಗಮಿಸಲು ಪ್ರಮುಖ ಕಾರಣವಾಗಿ ಡ್ರಗ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.
ಕಳೆದ ದಶಕದಲ್ಲಿ, ಎಂಟು ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ಔಷಧಗಳನ್ನು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಬಳಕೆಯಿಂದ ಹಿಂತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಕ್ಯೂಟಿ ಮಧ್ಯಂತರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಕುಹರದ ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ ಮತ್ತು ಹಠಾತ್ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಪೂರ್ವಭಾವಿ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳ ಅಗತ್ಯತೆ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿದೆ.ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಮಾನವ-ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್-ಡೆರೈವ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳ (hiPS-CM) ಇತ್ತೀಚಿನ ಬಳಕೆಯು ಈ ಸಮಸ್ಯೆಗೆ ಭಾಗಶಃ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೈಪಿಎಸ್-ಸಿಎಮ್‌ಗಳ ಅಪಕ್ವವಾದ ಸ್ವಭಾವ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಬಹುಕೋಶೀಯ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯ ಕೊರತೆಯು ಈ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಮುಖ ಮಿತಿಗಳಾಗಿವೆ.ಸ್ವಯಂಪ್ರೇರಿತ ಸಂಕೋಚನಗಳು ಪ್ರಾರಂಭವಾದ ಸ್ವಲ್ಪ ಸಮಯದ ನಂತರ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಮತ್ತು ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಕ್ರಮೇಣ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಆರಂಭಿಕ hiPS-CM ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ನಿವಾರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ hiPS-CM ಮೈಕ್ರೋಟಿಶ್ಯೂಗಳು ವಯಸ್ಕ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂನ ಪ್ರೌಢ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಗುತ್ತಿಗೆ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಮಾನವನ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವು ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳು, ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಟ್ರೋಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಂದ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಪರ್ಕ ಹೊಂದಿದೆ.ವಯಸ್ಕ ಸಸ್ತನಿಗಳ ಹೃದಯದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್ ಅಲ್ಲದ 11,12,13 ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಈ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರಮುಖ ತಡೆಗೋಡೆಯಾಗಿದೆ.ಈ ಪ್ರಮುಖ ಮಿತಿಗಳು ಶಾರೀರಿಕ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಖಂಡ ಹೃದಯ ಸ್ನಾಯುವಿನ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಬೆಳೆಸುವ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವ ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು ಒತ್ತಿಹೇಳುತ್ತವೆ.
ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ತೆಳುವಾದ (300 µm) ವಿಭಾಗಗಳು ಅಖಂಡ ಮಾನವ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂನ ಭರವಸೆಯ ಮಾದರಿ ಎಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದೆ.ಈ ವಿಧಾನವು ಮಾನವನ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಂತೆಯೇ ಸಂಪೂರ್ಣ 3D ಬಹುಕೋಶೀಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, 2019 ರವರೆಗೆ, ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಬಳಕೆಯು ಕಡಿಮೆ (24 ಗಂ) ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯಿಂದ ಸೀಮಿತವಾಗಿತ್ತು.ಇದು ಭೌತಿಕ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಕೊರತೆ, ಗಾಳಿ-ದ್ರವ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಅಗತ್ಯಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸದ ಸರಳ ಮಾಧ್ಯಮದ ಬಳಕೆ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಿಂದಾಗಿ.2019 ರಲ್ಲಿ, ಹಲವಾರು ಸಂಶೋಧನಾ ಗುಂಪುಗಳು ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಕಲ್ಚರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಜೀವನವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು, ಹೃದಯದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಹೃದಯ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದರು.ಎರಡು ಸೊಗಸಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು 17 ಮತ್ತು 18 ಯುನಿಯಾಕ್ಸಿಯಲ್ ಮೆಕ್ಯಾನಿಕಲ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಮೂರು-ಆಯಾಮದ ಭೌತಿಕ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು ಐಸೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕರ್ಷಕ ಶಕ್ತಿಗಳು 17 ಅಥವಾ ರೇಖೀಯ ಆಕ್ಸೋಟೋನಿಕ್ ಲೋಡಿಂಗ್ 18 ನೊಂದಿಗೆ ಲೋಡ್ ಆಗಿವೆ.ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯ ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಅನೇಕ ಹೃದಯ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ನಿಗ್ರಹ ಅಥವಾ ಅಸಹಜ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಪಿಟೌಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.19 ಫೋರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡ್ಯೂಸರ್ ಫೀಡ್‌ಬ್ಯಾಕ್ ಮತ್ತು ಟೆನ್ಶನ್ ಡ್ರೈವ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸೈಕಲ್ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕಾಗಿ ಡೈನಾಮಿಕ್ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಕಲ್ಚರ್ ಬಾತ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದೆ.ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ವಿಟ್ರೊ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸೈಕಲ್ ಮಾಡೆಲಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ವಿಧಾನದ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಥ್ರೋಪುಟ್ ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ನಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸರಳೀಕೃತ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದೆ ಮತ್ತು 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ 20,21 ರವರೆಗೆ ಪೋರ್ಸಿನ್ ಮತ್ತು ಮಾನವ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದೆ.
ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ಹೃದಯದ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮೂರು-ಆಯಾಮದ ಹೃದಯ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಪಾಥೋಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಡಿಸ್ಟೆನ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಮರುಸಂಗ್ರಹಿಸಲು ಹಾಸ್ಯದ ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪೋರ್ಸಿನ್ ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಾವು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು (CTCM) ವಿವರಿಸುತ್ತೇವೆ.ಈ CTCM ಪೂರ್ವ-ವೈದ್ಯಕೀಯ ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಸಸ್ತನಿಗಳ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ/ಪಾಥೋಫಿಸಿಯಾಲಜಿಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ, ಮಿಡ್-ಥ್ರೋಪುಟ್ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಿ-ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಡ್ರಗ್ ಪ್ರಿಡಿಕ್ಷನ್‌ನ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಹಿಂದೆಂದೂ ಸಾಧಿಸದ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು.
ವಿಟ್ರೊ 22,23,24 ರಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಲ್ಲಿ ಹಿಮೋಡೈನಮಿಕ್ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಸಂಕೇತಗಳು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ.ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ಶಾರೀರಿಕ ಆವರ್ತನಗಳಲ್ಲಿ (1.2 Hz, 72 ಬೀಟ್ಸ್ ಪ್ರತಿ ನಿಮಿಷ) ವಿದ್ಯುತ್ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಉತ್ತೇಜನವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ವಯಸ್ಕ ಹೃದಯದ ಪರಿಸರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ CTCM (ಚಿತ್ರ 1a) ಅನ್ನು ನಾವು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅತಿಯಾದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ಅಂಗಾಂಶದ ಗಾತ್ರವನ್ನು 25% ಹೆಚ್ಚಿಸಲು 3D ಮುದ್ರಣ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು (Fig. 1b).C-PACE ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕಲ್ ಪೇಸಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲು ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಿಸ್ಟೋಲ್‌ಗೆ ಮೊದಲು 100 ms ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ಸಮಯ ನಿಗದಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಒಂದು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (LB ಇಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್, ಜರ್ಮನಿ) ಅನ್ನು ಆವರ್ತಕವಾಗಿ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಲು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಮೇಲಿನ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಒತ್ತಡದ ಸಂಜ್ಞಾಪರಿವರ್ತಕದ ಮೂಲಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಬಾಹ್ಯ ಏರ್ ಲೈನ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕ ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಒತ್ತಡ (± 1 mmHg) ಮತ್ತು ಸಮಯವನ್ನು (± 1 ms) (Fig. 1c) ನಿಖರವಾಗಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸಿತು.
ಸಾಧನದ ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್ ಒಳಗೆ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವ 7 ಎಂಎಂ ಬೆಂಬಲ ರಿಂಗ್‌ಗೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಲಗತ್ತಿಸಿ.ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್ ಅನ್ನು ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯಿಂದ ತೆಳುವಾದ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸೋರಿಕೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಪ್ರತಿ ಚೇಂಬರ್ ನಡುವೆ ಗ್ಯಾಸ್ಕೆಟ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ.ಸಾಧನದ ಮುಚ್ಚಳವು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.b ದೊಡ್ಡ ಅಂಗಾಂಶ ಸಾಧನದ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯ, ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಉಂಗುರ ಮತ್ತು ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರ.ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು (ಕಂದು) ಸಾಧನದ ಹೊರ ಅಂಚಿನಲ್ಲಿರುವ ತೋಡು ಇರಿಸಲಾಗಿರುವ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಉಂಗುರದೊಂದಿಗೆ ಗಾತ್ರದ ಸಾಧನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ, ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಭಾಗದ ಮೇಲೆ ಅಂಗಾಂಶ ಅಕ್ರಿಲಿಕ್ ಅಂಟುಗಳಿಂದ ಲೇಪಿತವಾದ ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಇರಿಸಿ.c ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (PPD) ನಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುವ ಏರ್ ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡದ ಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯವನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಗ್ರಾಫ್.ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲು ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್‌ನಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವು ನಿಗದಿತ ಮಿತಿಯನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ, ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಲು ಪಲ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು C-PACE-EM ಗೆ ಕಳುಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.d ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ ಶೆಲ್ಫ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿರುವ ನಾಲ್ಕು CTCMಗಳ ಚಿತ್ರ.ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಮೂಲಕ ನಾಲ್ಕು ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಒಂದು PPD ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್‌ನಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲು ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಹೆಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಕವಾಟಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಾಧನವು ಆರು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.
ಒಂದೇ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ನಾವು 4 CTCM ಸಾಧನಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ 6 ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಹಿಡಿದಿಟ್ಟುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ (Fig. 1d).CTCM ನಲ್ಲಿ, ಗಾಳಿಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿನ ಗಾಳಿಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ದ್ರವ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಿಂಕ್ರೊನಸ್ ಒತ್ತಡಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2a ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಲನಚಿತ್ರ 1).80 mm Hg ನಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ.ಕಲೆ.25% (Fig. 2b) ಮೂಲಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುವುದನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಈ ಶೇಕಡಾವಾರು ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗದ ಸಂಕೋಚನಕ್ಕೆ 2.2-2.3 µm ನ ಶಾರೀರಿಕ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ17,19,25.ಅಂಗಾಂಶದ ಚಲನೆಯನ್ನು ಕಸ್ಟಮ್ ಕ್ಯಾಮೆರಾ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 1).ಅಂಗಾಂಶದ ಚಲನೆಯ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು ವೇಗ (Fig. 2c, d) ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ (Fig. 2b) ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹಿಗ್ಗಿಸಲು ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ.ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವೇಗವು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ (Fig. 2f).ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಕೋಚನದ ಮೇಲೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು, ನಾವು ಶೇಡಿಂಗ್ ಅಲ್ಗಾರಿದಮ್ (ಸಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿ ಫಿಗ್. 2 ಎ, ಬಿ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಕ್ರಿಯ ವಿರೂಪತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ವಿರೂಪಗಳ ನಡುವೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು.ಹೃದಯದ ಅದೇ ವಿಭಾಗ (Fig. 2f).ಕಟ್ (R6-9) ನ ಚಲಿಸಬಲ್ಲ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ, ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ 20% ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಂಕೋಚನ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಗಾಳಿಯ ಕೊಠಡಿಯ ಒತ್ತಡ, ದ್ರವ ಕೊಠಡಿಯ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ಮಾಪನಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಕುರುಹುಗಳು ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವು ದ್ರವದ ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ಲೈಸ್ನ ಅನುಗುಣವಾದ ಚಲನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಬಿ ಶೇಕಡಾವಾರು ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯ (ನೀಲಿ) ಶೇಕಡಾವಾರು ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ (ಕಿತ್ತಳೆ) ಅನುಗುಣವಾದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಕುರುಹುಗಳು.c ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ಅಳತೆಯ ಚಲನೆಯು ಚಲನೆಯ ಅಳತೆ ವೇಗಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ.(ಡಿ) ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಆವರ್ತಕ ಚಲನೆಯ (ನೀಲಿ ರೇಖೆ) ಮತ್ತು ವೇಗದ (ಕಿತ್ತಳೆ ಚುಕ್ಕೆಗಳ ರೇಖೆ) ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಪಥಗಳು.ಇ ಸೈಕಲ್ ಸಮಯದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಸಂಕೋಚನ ಸಮಯ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು), ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆ (n = 25 ).ಚೂರುಗಳು)/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಗುಂಪು), ಗರಿಷ್ಠ ಸಂಕೋಚನ ವೇಗ (n = 24(D0), 25(D12) ಚೂರುಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಗುಂಪು) ಮತ್ತು ಗರಿಷ್ಠ ವಿಶ್ರಾಂತಿ ದರ (n=24(D0), 25(D12) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು).ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಯಾವುದೇ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ.f (ಕೆಂಪು) ಮತ್ತು (ನೀಲಿ) ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ ಇಲ್ಲದೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಕುರುಹುಗಳು, ಅದೇ ವಿಭಾಗದಿಂದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಹತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಪ್ರದೇಶಗಳು.ಕೆಳಗಿನ ಫಲಕಗಳು ವಿವಿಧ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ಹತ್ತು ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿನ ಶೇಕಡಾವಾರು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. (ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ n = 8 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ n = 8 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; **p<0,0001, **,p *<001, **5<00). (ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ n = 8 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） (n = 8 срезов/grouppu, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಟ್ಯಾಟಿಕ್ ಬಯೋಮಿಮೆಟಿಕ್ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಕಲ್ಚರ್ ಸಿಸ್ಟಂನಲ್ಲಿ [20, 21], ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಮ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಾವು 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, 10 ದಿನಗಳ ನಂತರ, ಈ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಕುಸಿಯಿತು.ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಥಿರ ಬಯೋಮಿಮೆಟಿಕ್ ಕಲ್ಚರ್ ಸಿಸ್ಟಂ 20, 21 ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ನಾವು ಉಲ್ಲೇಖಿಸುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು ನಾವು ನಮ್ಮ ಈ ಹಿಂದೆ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಿದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು MC ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ಏಕಕಾಲಿಕ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ (CTCM) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುತ್ತೇವೆ.ಎಂದು ಕರೆದರು .ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಅಂಗಾಂಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ ಇಲ್ಲದೆ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 3a, b).ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, STCM ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಭೌತಿಕ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪರಿಚಯದೊಂದಿಗೆ, 12-ದಿನದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯು MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ Ctrl ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ (Fig. 1).3a).ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು ಸಿಮ್ಯುಲೇಶನ್ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಿದಂತೆ ಎರಡು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾಗಿ ಇರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಟ್ರೋಪೋನಿನ್ ಟಿ ಮತ್ತು ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ರ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನವು ಅದೇ ದಿನದ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಿಗಿಂತ 12 ನೇ ದಿನದಂದು MC ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಏಕರೂಪದ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು Z-ಡಿಸ್ಕ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ (Fig. 3b).ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ನಾವು ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (AI) ಚೌಕಟ್ಟನ್ನು ಬಳಸುತ್ತೇವೆ, ಇದು ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಕನೆಕ್ಸಿನ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ 43 ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ಚಿತ್ರ-ಆಧಾರಿತ ಆಳವಾದ ಕಲಿಕೆಯ ಪೈಪ್‌ಲೈನ್, ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ಬಲದ ದೃಷ್ಟಿಯಿಂದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ವಿಧಾನವು ಕನ್ವಲ್ಯೂಷನಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ (CNN) ಮತ್ತು ಆಳವಾದ ಕಲಿಕೆಯ ಚೌಕಟ್ಟನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಮತ್ತು ಪಕ್ಷಪಾತವಿಲ್ಲದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುತ್ತದೆ.26. ಸ್ಥಿರ ನಿಯಂತ್ರಣ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ MC ಅಂಗಾಂಶವು ದಿನ 0 ಕ್ಕೆ ಸುಧಾರಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ 12 ನೇ ದಿನದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ನ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು (Fig. 3c).CTCM ದಿನ 12 ರಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಂತೆಯೇ ಒಂದು ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ, ಇದು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಲಿಲ್ಲ.
ಒಂದು ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ (D0) ಅಥವಾ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಕಲ್ಚರ್‌ನ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 Ctrl) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 # ಗ್ರೂಪ್ ಒಂದು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ pVA/# ಎಮ್‌ಸಿ) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p <0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಒಂದು ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ (D0) ಅಥವಾ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಕಲ್ಚರ್‌ನ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 Ctrl) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl ), 12 (D12 Ctrl ), 12 (D12 Ctrl ; 12 (D12 # ಗ್ರೂಪ್, ಎಮ್‌ಸಿ) ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p <0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ MTT ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ (D0) ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (D0) ಅಥವಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿ (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ) (n = 18 (D0), 15 (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ).####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p <0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心 凇喰鲜心脏善新鲜心脏凿與)养12 天的MTT 活力的量化), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测的，#0.D0,#0.0.D0与D12 Ctrl 相比,**p <0.01)。 a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心琇席新鲜心茇席新鲜心臥帥)的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p <0.0001,与D12 Ctrl 相。,**p比,)ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ ಸ್ಥಾಯೀ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ)) 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, **p <0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).b Troponin-T (ಹಸಿರು), ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (ಕೆಂಪು) ಮತ್ತು DAPI (ನೀಲಿ) ಹೊಸದಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ ಸ್ಥಾಯೀ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಅಥವಾ CTCM ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (MC) 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ) ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಚಿತ್ರಗಳ (ಖಾಲಿ ಪ್ರಮಾಣ = 100) ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು. ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p <0.0001 D0 ಮತ್ತು **prl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 0.0001 ರಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p <0.0001 ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0 ಮತ್ತು ****p ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0 ಮತ್ತು ****p2. ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯಾ ಆಸ್ಸೆಂಕಾ ರಚನೆ ಎಸೊವ್/ಗ್ರೂಪ್ ಆಫ್ ರಾಝ್ನಿಶ್ ಸ್ವಿನಿ, ಪ್ರೊವೊಡಿಟ್ಸ್ ಒಡ್ನೊಫ್ಯಾಕ್ಟೋರ್ನಿ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ D12 Ctrl). ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p <0.0001 vs. D0 ಮತ್ತು *****p <0 ಮತ್ತು *****p ನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ C.0.02.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಪ್ರತಿಯೊಂದು ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು, ಒನ್-ವೇ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ, <#0#000 ಪರೀಕ್ಷೆ;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಪ್ರತಿಯೊಂದು ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ, <0#.0D0 ಪರೀಕ್ಷೆ;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 ಆಸ್ಕುಸ್ಟ್ವೆನ್ ಇಂಟೆಲೆಕ್ಟ್ ಡ್ಲೈ ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನೊಯ್ ಒಸ್ಸೆಂಕಿ ಸ್ಟ್ರಕ್ಟೂರ್ನೊಯ್ ಸೆಲೊಸ್ಟ್ನೋಸ್ಟಿ ಸೆರ್ಡೆಚ್ನೊಯ್ ಟ್ಕಾನಿ (20ಡಿ 7ಡಿಡಿ) срезов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA 12 Ctrl). ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಗುಂಪು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ; ####p<0.0001 vs .D000 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 0.0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 0.000. ಸಿ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಮಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (n = 10 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ, ಒಂದು-ವೇ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ, D1 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D000 ಗೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲಕ್ಕೆ) trl). ಸಿ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಮಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (n = 10 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ, D0#0 p <0 1 0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ; ## <0# p <1 0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D000 ಗೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲಕ್ಕೆ). Ctrl). ಸಿ ಮಸ್ಸೋನಾ (ಮಾಸ್ಸೋನಾ 01 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). ಸಿ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಮಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಅನ್‌ಕೋಟೆಡ್ ಸ್ಕೇಲ್ = 500 µm) (n = 10 ವಿಭಾಗಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; D0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0 .001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ. l). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸=05个切片/组,每组来自不同的猪,进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比,001 与D0 相比,001p <0001 与D0 C 用 ಮ್ಯಾಸನ್ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代 表性 （左 左） 量化 （右度 = 500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 , 进行 单向 单向 ಅನೋವಾ <#D000.00比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 ಸಿ ಮಸ್ಸೋನ (ಚಿಸ್ತಯಾ ಸ್ಕಲಾ = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 ಶ್ರೇಣಿ/ಗ್ರುಪ್ಪ, ಡ್ರೂಗೋಯ್ ಸ್ವಿನಿಯಿಂದ ಕಝಡ್, ಪ್ರೊಟೆಸ್ಟಿರೋವಾನೋಸ್ сперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಮಾಣ (ಬಲ) ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಖಾಲಿ = 500 µm) (n = 10 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಯಿಂದ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ, ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, D1 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0 0 p <0 0. Ctrl).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ ಸಣ್ಣ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಗೊಂದಲಮಯ ಅಂಶಗಳಿಂದಾಗಿ ನಮ್ಮ ಸ್ಥಿರ ನಿಯಂತ್ರಣ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 20,21 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳಿಗಾಗಿ ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಡೆಕ್ಸಮೆಥಾಸೊನ್ (ಡೆಕ್ಸ್), ಟ್ರೈಯೋಡೋಥೈರೋನೈನ್ (T3), ಮತ್ತು SB431542 (SB) ಅನ್ನು ಈ ಪರದೆಗಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದ, ಟಿ-ಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ವಹನ ವೇಗವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳ ಪಕ್ವತೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಈ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಹೈಪಿಎಸ್‌ಸಿ-ಸಿಎಮ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಡೆಕ್ಸ್ (ಗ್ಲುಕೊಕಾರ್ಟಿಕಾಯ್ಡ್) ಮತ್ತು SB ಎರಡೂ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ29,30.ಆದ್ದರಿಂದ, ಒಂದು ಅಥವಾ ಈ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಆರಂಭಿಕ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ, ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ (1 μM Dex27, 100 nM T327, ಮತ್ತು 2.5 μM SB31) ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿ ಸಂಯುಕ್ತದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಲಾಗಿದೆ.12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ, T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್‌ನ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾದ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ ಫೈಬ್ರಸ್ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರಗಳು 4 ಮತ್ತು 5).ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, T3 ಮತ್ತು Dex ನ ಈ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಡಬಲ್ ಅಥವಾ ಡಬಲ್ ಬಳಕೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹಾನಿಕಾರಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 6a,b).
ಆರಂಭಿಕ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ನಂತರ, ನಾವು 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ತಲೆಯಿಂದ ತಲೆಗೆ ಹೋಲಿಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 4a): Ctrl: ನಮ್ಮ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಮ್ಮ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು;20.21 TD: T3 ಮತ್ತು Ctrl ಗಳು ಬುಧವಾರ ಡೆಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ;MC: ನಮ್ಮ ಹಿಂದೆ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಿದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು CTCM ನಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು;ಮತ್ತು MT: CTCM ಜೊತೆಗೆ T3 ಮತ್ತು Dex ಅನ್ನು ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ.12 ದಿನಗಳ ಕೃಷಿಯ ನಂತರ, MS ಮತ್ತು MT ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯು MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (Fig. 4b) ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾದ ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ವೆಲ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗೆ (ಟಿಡಿ) T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್‌ನ ಸೇರ್ಪಡೆಯು Ctrl ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಗಮನಾರ್ಹ ಸುಧಾರಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಲಿಲ್ಲ, ಇದು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಮಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3/Dex ಪೂರಕಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ನಾಲ್ಕು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಿನ್ಯಾಸ ರೇಖಾಚಿತ್ರ. b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 # ಗ್ರೂಪ್ ಎಎನ್‌ಒನಿಂದ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ps/ MC, ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ p <0.0001, ###p <0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p <0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 # ಗ್ರೂಪ್ ಎಎನ್‌ಒನಿಂದ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ ps/ MC, ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ p <0.0001, ###p <0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p <0.01 D12 ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಜಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ ಪೋಕಾಝಿವೇಟ್ ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ಯು ಒಸೆಂಕು ಜಿಜ್ನೆಸ್ಪೋಸೊಬ್ನೋಸ್ಟಿ ಚೆರೆಜ್ 12 ನೇ ದಿನದ ಪೋಸ್ಲೆವ್ ಕ್ಯುಲ್ಟಿವಿಸ್ 4 ಕ್ಯುಲ್ಟಿವಿರೋವಾನಿಯ (ಕಾಂಟ್ರೋಲ್, ಟಿಡಿ, ಎಂಸಿ ಮತ್ತು ಎಂಟಿ) ಪೋ ಸ್ರ್ಯಾವ್ನೆನಿಯೂ ಮೂಲಕ ಸ್ವೆಝಿಮಿ ಸೀರ್ಡಾಸ್ (ಡಿ0) (ಎನ್ = 18 (ಡಿ 12 ಸಿಟಿಡಿ), 125 (ಡಿ 12 ಸಿಟಿಡಿ), 12 2 ಎಮ್‌ಸಿ) ಸ್ರೇಝೋವ್/ಗ್ರುಪ್ಪು ಆಟ್ ರಾಸ್ನಿಕ ಸ್ವಿನಿ, ಪ್ರೊವೊಡಿಟ್ಸ್ ಒಡ್ನೋಸ್ಟೋರೋನಿ ಐ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ 1 по сравнению с D12 Ctrl). b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MT), 12 (#D12 ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ವಿವಿಧ ವಿಭಾಗಗಳು / VA, MC ಯಿಂದ) ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC, ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. 0.0001, ###p <0.001 vs. D0 ಮತ್ತು **p <0.01 by D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಬೌ和D12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC)与D12控制).b 4 12 (D12 MC) b ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ, ಪೋಕಸೈವಯಸ್ 4 ನೇ ಯುಸ್ಲೋವಿಯ ಕುಲ್ಟಿವಿರೋವಾನಿಯಾ (ಕಾಂಟ್ರೋಲ್, ಟಿಡಿ, ಎಂಸಿ ಮತ್ತು ಎಂಟಿ) (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), ಯಿಂದ разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторон <##00те, 001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC ಮತ್ತು MT) ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 12 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ<0 ###00p;<0 ##00p; . D0, **p<0.01 ವಿರುದ್ಧ ನಿಯಂತ್ರಣ D12). c ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್ 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಒಂದು-ವೇ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p <0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, l). c ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್ 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಒಂದು-ವೇ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p <0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, l). c ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಮ್ಮ ಪೊಕಾಝಿವೇಟ್ ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನು ಒಸೆಂಕು ಪೋಟೋ ಗ್ಲುಕೋಸಿ ಚೆರೆಜ್ 12 ದಿನ ಪೋಸ್ಲೆವ್ ಕ್ಯುಲ್ಟಿವಿರೋವ್4 ультивирования (ಕಾಂಟ್ರೊಲ್, ಟಿಡಿ, ಎಂಸಿ ಮತ್ತು ಎಂಟಿ) ಪೋ ಸ್ರ್ಯಾವ್ನೆನಿಯು ಮೂಲಕ ಸ್ವೇಜಿಮಿ ಸರ್ಜಾಮಿ ಸೆರ್ಡಾಸ್ (ಡಿ0) (ಎನ್ = 6 ಶ್ರೇಣಿಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು ಅನೋವಾ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ c ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC ಮತ್ತು MT) ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರದ 12 ದಿನಗಳ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = 6 ವಿಭಾಗಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಒಂದು-ವೇ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; ###p <0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D1 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D1 c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 廎切片(D0)糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p <0.001,与D0 <0.001,与D0, 0.120比). C 条形图 显 示 所有 4 种 条件 （ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 凇 示 切片 切 示ಚಿತ್ರ 12与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ, ಪೋಕಸೈವಯಸ್ ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನುಯು ಒಸ್ಸೆಂಕು ಪೋಟೋಕ ಗ್ಲುಕೋಸಿ ಚೆರೆಜ್ 12 ನೇ ಪೋಸ್ಟ್ ಕ್ಯುಲ್ಡ್ 4 вий cultivirovania (ಕಾಂಟ್ರೊಲ್, TD, MC ಮತ್ತು MT) ಪೋ ಸ್ರ್ಯಾವ್ನೆನಿಯು ಮೂಲಕ ಸ್ವೆಜಿಮಿ ಸರ್ಜಾಮಿ ಸರ್ಜಾಮಿ (D0) (n = 6, ಶ್ರೇಣಿಗಳು ಅನೊವಾ c ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC, ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (ನಿಯಂತ್ರಣ).d ತಾಜಾ (ನೀಲಿ), ದಿನ 12 MC (ಹಸಿರು), ಮತ್ತು ದಿನ 12 MT (ಕೆಂಪು) ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಅನಾಲಿಸಿಸ್ ಪ್ಲಾಟ್‌ಗಳು ಹತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗದ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ (n = 4 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕ-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ; ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿಲ್ಲ).ಇ ಜ್ವಾಲಾಮುಖಿ ಕಥಾವಸ್ತುವು 10-12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಅಥವಾ MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (MT) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.f ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಹೀಟ್‌ಮ್ಯಾಪ್ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಕೊಬ್ಬಿನಾಮ್ಲದ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣದಿಂದ ಗ್ಲೈಕೋಲಿಸಿಸ್‌ಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುವುದರ ಮೇಲೆ ಚಯಾಪಚಯ ಅವಲಂಬನೆಯು ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯೇಶನ್‌ನ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ.ಅಪಕ್ವವಾದ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ಎಟಿಪಿ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಕ್ರಿಸ್ಟೇ 5,32 ಜೊತೆಗೆ ಹೈಪೋಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು MC ಮತ್ತು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯು ದಿನ 0 ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 4c) ಹೋಲುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, Ctrl ಮಾದರಿಗಳು ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಇದು CTCM ಮತ್ತು T3/Dex ಸಂಯೋಜನೆಯು ಅಂಗಾಂಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 12-ದಿನಗಳ ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಮೆಟಬಾಲಿಕ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು MT ಮತ್ತು MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 4d) 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಮಟ್ಟವು ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.
ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಭೂದೃಶ್ಯದ ಮೇಲೆ CTCM ಮತ್ತು T3/Dex ನ ಒಟ್ಟಾರೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು, ನಾವು ಎಲ್ಲಾ ನಾಲ್ಕು ವಿಭಿನ್ನ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸ್ಥಿತಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ RNAseq ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಡೇಟಾ 1).ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, MT ವಿಭಾಗಗಳು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ, 13,642 ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕೇವಲ 16 ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಾವು ಮೊದಲೇ ತೋರಿಸಿದಂತೆ, Ctrl ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 10-12 ದಿನಗಳ ನಂತರ 1229 ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ (Fig. 4e).ಈ ಡೇಟಾವನ್ನು qRT-PCR ಹೃದಯ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಜೀನ್‌ಗಳಿಂದ ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 7a-c).ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, Ctrl ವಿಭಾಗಗಳು ಹೃದಯ ಮತ್ತು ಕೋಶ ಚಕ್ರದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವುದನ್ನು ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಜೀನ್ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಈ ಡೇಟಾವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಕೃಷಿಯ ನಂತರ ಸಂಭವಿಸುವ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯೇಶನ್ ಅನ್ನು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 8a,b).ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯ ಅಧ್ಯಯನವು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಸಾರ್ಕೊಮೆರೆ (Fig. 4f) ಮತ್ತು ಅಯಾನ್ ಚಾನಲ್ (ಸಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿ Fig. 9) ಅನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳನ್ನು Ctrl, TD ಮತ್ತು MC ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿಗ್ರಹದಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಶನ್ (T3/Dex) ಸಂಯೋಜನೆಯೊಂದಿಗೆ, ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳ ನಂತರ ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಂತೆಯೇ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಈ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಸಂಶೋಧನೆಗಳು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಅಖಂಡ ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಯ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (Fig. 5a) ಮೂಲಕ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಜೊತೆಗೆ, MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ (Fig. 5b).ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3/Dex ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ರಚನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ (ಹಸಿರು), ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (ಕೆಂಪು), ಮತ್ತು ಡಿಎಪಿಐ (ನೀಲಿ) ನ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಚಿತ್ರಗಳು ಹೊಸದಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಎಲ್ಲಾ ನಾಲ್ಕು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm).) ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p <0.0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ. <0.0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ed ಗೆ D12 Ctrl) ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; #### p <0.0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ. ed ಗೆ D12 Ctrl) ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯಾ ಆಸ್ಸೆಂಕಾ ರಚನೆ 12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ಸ್ರೇಝೋವ್/ಗ್ರುಪ್ಪು ಆಟ್ ರಾಜ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನೇಯ್, ಪ್ರೊವೆಡೆನ್ ಓಡ್ನೋಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ; ### p <0,0001а 5 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗದ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; #### p <0.0001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0.0 ಮತ್ತು <5 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D0 2 Ctrl).ಉದಾಹರಣೆಗೆ人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比，或****p <0.00 相比,或****p <0.00ಉದಾಹರಣೆಗೆ工 向rl 相比).ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು) ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯೊಂದಿಗೆ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು *p <0.05 ಅಥವಾ ****p <0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, 9 (D12 MT) ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು # VA 001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p <0.001, ಅಥವಾ ****p <0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, 9 (D12 MT) ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು # VA 001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p <0.001, ಅಥವಾ ****p <0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಐಸೊಬ್ರಾಜೆನಿಯಾ ಮತ್ತು ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನ ಒಸೆಂಕಾ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸೆರ್ಡಿಸಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ಯಮ್ ಟ್ರಿಮ್ಸ್ನಾಮ್ ಬನಾಯಾ ಲೈನಿಕಾ = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) т ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ಯೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, 9 (D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು. 0 ಮತ್ತು ***p <0.001 ಅಥವಾ ****p <0.0001 ವಿರುದ್ಧ D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比和量化（比例尺= 500 µm（D10D TD 和D12 ಎಂಸಿ 001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 ಬಿ 用 ಮಾಸನ್ 三 色 的 的 切片 切片 的 的 （ . B 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್ ಆಫ್ ರಾಝ್ನಿಚ್ ಸ್ವೀನಿ / ಗ್ರೂಪ್‌ಪಿ, ಒಡಿನ್- <#10000000 ию с D0, ***p <0,001 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ಮ್ಯಾಸನ್ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು/ಗುಂಪುಗಳಿಂದ 9 (D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು <# VA00 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, #0 VA00 <0.001 ಅಥವಾ ****p <0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ CTCM ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.CTCM ನಲ್ಲಿ, ಪೀಕ್ ಏರ್ ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವು 80 mmHg ನಿಂದ 80 mmHg ಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು.ಕಲೆ.(ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ) 140 mmHg ಕಲೆ.(ಚಿತ್ರ 6a).ಇದು ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ 32% ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ (Fig. 6b) ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ಹಿಂದೆ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಅನುಗುಣವಾದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವೇಗವು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಆರು ದಿನಗಳ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ (Fig. 6c).MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಆರು ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ (MT (ಸಾಮಾನ್ಯ)) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ (MT (OS)) ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು.ಈಗಾಗಲೇ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ನಾಲ್ಕು ದಿನಗಳ ನಂತರ, ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಬಯೋಮಾರ್ಕರ್ NT-ProBNP MT (ಸಾಮಾನ್ಯ) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ MT (OS) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 7a) ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಎತ್ತರದಲ್ಲಿದೆ.ಜೊತೆಗೆ, ಆರು ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ, MT ಹೃದಯದ (ಸಾಮಾನ್ಯ) ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ MT (OS) (Fig. 7b) ನಲ್ಲಿನ ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರವು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, NFATC4 ಪರಮಾಣು ಸ್ಥಳಾಂತರವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ (Fig. 7c) ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೈಪರ್ ಡಿಸ್ಟೆನ್ಶನ್ ನಂತರ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರಗತಿಶೀಲ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ವೇದಿಕೆಯಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಎಂಬ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ.
ಗಾಳಿಯ ಕೊಠಡಿಯ ಒತ್ತಡ, ದ್ರವ ಕೊಠಡಿಯ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ಮಾಪನಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಕುರುಹುಗಳು ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವು ದ್ರವದ ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ಲೈಸ್ನ ಅನುಗುಣವಾದ ಚಲನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.b ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ (ಕಿತ್ತಳೆ) ಮತ್ತು ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ (ನೀಲಿ) ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ದರ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳು.c ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಸೈಕಲ್ ಸಮಯವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಸಂಕೋಚನ ಸಮಯ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 18-19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ) ), ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ವೈಶಾಲ್ಯ (n = 14 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ) ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಗರಿಷ್ಠ ವಿಶ್ರಾಂತಿ ದರ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು), ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಯ t-ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಯಾವುದೇ ನಿಯತಾಂಕದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ, ಈ ನಿಯತಾಂಕಗಳು ಅತಿಯಾದ ವೋಲ್ಟೇಜ್‌ನೊಂದಿಗೆ 6 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
MT ನಾರ್ಮಲ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್ ಸ್ಟ್ರೆಚಿಂಗ್ (ಓಎಸ್) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ ಕಲ್ಚರ್ ಮೀಡಿಯಾದಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ಮತ್ತು D4 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು 2- *ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 2- * ANOV ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಂಟಿ ನಾರ್ಮಲ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟೆಚಿಂಗ್ (ಓಎಸ್) ಷರತ್ತುಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಎನ್‌ಟಿ-ಪ್ರೋಬನ್‌ಪಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಎನ್ = 4 (ಡಿ 2 ಎಂಟಿಎನ್‌ಒಆರ್ಎಂ), 3 (ಡಿ 2 ಎಂಟೋಸ್, ಡಿ 4 ಎಂಟಿಎನ್‌ಒಆರ್ಎಂ, ಮತ್ತು ಡಿ 4 ಎಮ್‌ಟಿಒಗಳು) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪು/ಗುಂಪು/ಗುಂಪು ವಿಭಿನ್ನ ಹಿಗ್ಗುಗಳಿಂದ, ಎರಡು-ಪದಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).ಸಾಮಾನ್ಯ MT ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ರೂಢಿ) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ಮತ್ತು D4).MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್.**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಎ = 4 (D2 MTNorm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS ,p <0.01). MT ಸಾಮಾನ್ಯ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (OS) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (n= 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ವಿವಿಧ 猪的切，猪廏喌廏廏/猪廏廇/疌廇/疇/的廏/疇/疇/疇/的切片/疇/疇/疇/的廏/疇/疇/疌廇/疇/疇/疇/疇/疌廇/疇/疌廇/疇/的廏廇/疇 /发动; **ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, p <0.01).ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ಸಾಮಾನ್ಯ MT ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ರೂಢಿ) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ಮತ್ತು D4 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿನ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳು, ಎರಡು-ಮಾರ್ಗದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p <0.01 ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಡಬ್ಲ್ಯೂಜಿಎ (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ <0 t-0p ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಡಬ್ಲ್ಯೂಜಿಎ (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) 10 ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ 369 (ಡಿ6 ಎಮ್‌ಟಿ ನಾರ್ಮ್) ಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು, ಎರಡು- *ಟೇಲ್ಡ್ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ <0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ B ಅಸ್ಮೇರಾ ಕ್ಲೆಟೊಕ್ (ಸ್ಪ್ರವಾ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಕ್ಲೆಟೊಕ್/ಗ್ರುಪ್ಪು iz 10 ರಾಝ್ನಿಕ್ಸ್ ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್ ಮತ್ತು ರ್ಯಾಜನ್,ಸ್ವೀಟ್ ой t-критерий Стьюдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು AZP (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣ (ಬಲ) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಕೋಶಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಯ <0 ವರೆಗೆ 0 ವರೆಗೆ ಹೋಲಿಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. b. ），来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组,两进行有尾学生，与检检ಪು <0.0001). b ಕ್ಯಾಲ್ಕರೆನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಡಬ್ಲ್ಯೂಜಿಎ (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಗಾತ್ರ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 10 ವಿವಿಧ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ (D6 MTNorm)) ಕೋಶಗಳು / 组，两方法有com ಜೊತೆಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಕೋಶಗಳು/组，两方法有com ಜೊತೆಗೆ ಸ್ಟ್ರೆಚಿಂಗ್. 0001) b ರೆಪ್ರೆಜೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸೆರ್ಡಿಸಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ನಿಹ್ ಟ್ರೊಪೊನಿಮ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಆಂಗ್ಟ್ (ಸ್ಲೇವಾ) ಮತ್ತು ಕೋಲ್ವಿಂಗ್ ಕ್ಲೆಟೊಕ್ (ಸ್ಪ್ರಾವ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) iz 10 ರಾಝ್ಲಿಚ್ ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್‌ನಿಂದ ರಾಝಿನ್ ಸ್ವೀನಿ ಕ್ಲಾಟ್‌ಕಿ/ಗ್ರೂಪ್‌ಸ್, юдеntа; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು AZP (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ) ಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ಮಾನದಂಡ;**** p <0.0001 ಸಾಮಾನ್ಯ ಸ್ಟ್ರೈನ್‌ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). c ಟ್ರೊಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ದಿನ 0 ಮತ್ತು ದಿನ 6 MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು CM ಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಗೆ NFATC4 ನ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ . 5 ಸ್ಟಡ್ . 5 ಸ್ಟಡ್ . 5 ನೇ ಗುಂಪು c ಟ್ರೊಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ದಿನ 0 ಮತ್ತು ದಿನ 6 MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು CM ಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಗೆ NFATC4 ನ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು 0 ಸಿ ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಐಸೊಬ್ರಜೆನಿಯ ಸ್ರೆಜೋವ್ ಸರ್ಡಿಸ್ಯಾ 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನ MTOS, ಇಮ್ಮುನೊಮೆಚೆನಿಕ್ಸ್ ಟ್ರೊಪೊನಿಫಾ-ಟ್ಸಿ4, ಇಂಕಾ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಲೊಕಾಸಿಗಳು NFATC4 ಮತ್ತು ಯಾಡ್ರಾ ಕಾವರ್ನೋಜ್ನಿಹ್ ಕ್ಲೆಟಾಕ್ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ರೆಜೋವ್/ಗ್ರೂಪ್ ನಂತರ ರಾಸನಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳು ий t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನಗಳ MTOS ನಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು, ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಗುಹೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ NFATC4 ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ವಿಭಿನ್ನ-ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಮಾಡಿದ ಎರಡು-ಹಂದಿಗಳು-ಗುಂಪು*ಪು <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生 0.0 c ಕ್ಯಾಲ್ಕನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲಿಂಗ್ 第0天和第6天MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು, ಮತ್ತು NFATC4 ವಿಭಿನ್ನ NFATC4 易位至CM ಸೆಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಿಂದ 的quantity化的quantity化 (n = 4 (D0 TO),间双尾学生et 电影；*p <0.05). c ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯ ಸ್ರೆಜೋವ್ ಸರ್ಡಿಶಾ MTOS ನಲ್ಲಿ 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನದಲ್ಲಿ ಇಮ್ಮುನೊಮಾರ್ಕಿರೋವ್ಕಿ ಟ್ರೋಪೋನಿಕ್ಸ್ ನ್ಯಾಫಾಟಿಕ್ಸ್-4 ಸೆಂಕಾ ಟ್ರ್ಯಾನ್ಸ್‌ಲೋಕಾಸಿಗಳು NFATC4 ಯಡ್ರಾ ಸಿಎಮ್‌ನಿಂದ ರಾಝ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನೇಯ್ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಶ್ರೇಣಿ/ಗ್ರುಪ್ಪಾ, два- хвостактый ,05). c ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, 0, ಟೂ-ಟೇಲ್ಡ್ * 0) ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು NFATC4 ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು NFATC4 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಲೋಕೇಶನ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ದಿನ 0 ಮತ್ತು 6 ರಲ್ಲಿ MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಭಾಷಾಂತರ ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಹೃದಯದ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮಾದರಿಗಳ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಹೃದಯದ ಅಲ್ಟ್ರಾಥಿನ್ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ.CTCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಶಾರೀರಿಕವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್ ದ್ರವದ ಪುಷ್ಟೀಕರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಪೊರ್ಸಿನ್ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು ಈ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡಾಗ, ಅವುಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ, ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗಳು 12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತವೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ಅತಿಯಾದ ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಹೈಪರ್ ಎಕ್ಸ್ಟೆನ್ಶನ್ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೃದಯದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಔಷಧಿ ತಪಾಸಣೆಗೆ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ.
ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆ ಮತ್ತು ಉಳಿವಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ವಾತಾವರಣವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಲು ಅನೇಕ ಅಂಶಗಳು ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತವೆ.ಈ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಅಂಶಗಳು (1) ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂವಹನಗಳು, (2) ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆ, (3) ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಂಶಗಳು ಮತ್ತು (4) ಮೆಟಾಬಾಲಿಕ್ ತಲಾಧಾರಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ.ಶಾರೀರಿಕ ಕೋಶದಿಂದ ಜೀವಕೋಶದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ನಿಂದ ಬೆಂಬಲಿತವಾದ ಬಹು ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಸಂಕೀರ್ಣ ಮೂರು-ಆಯಾಮದ ಜಾಲಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.ಅಂತಹ ಸಂಕೀರ್ಣ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಮೂಲಕ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಮರುನಿರ್ಮಾಣ ಮಾಡುವುದು ಕಷ್ಟ, ಆದರೆ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಆರ್ಗನೋಟೈಪಿಕ್ ಸ್ವಭಾವವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸುಲಭವಾಗಿ ಸಾಧಿಸಬಹುದು.
ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ 33,34,35 ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಹೈಪಿಎಸ್‌ಸಿ-ಸಿಎಮ್ ಕಂಡೀಷನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಪಕ್ವತೆಗೆ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದ್ದರೂ, ಹಲವಾರು ಸೊಗಸಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿವೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳು 2D ಯುನಿಯಾಕ್ಸಿಯಲ್ ಮೆಕ್ಯಾನಿಕಲ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಐಸೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕರ್ಷಕ ಶಕ್ತಿಗಳು 17, ರೇಖೀಯ ಆಕ್ಸೋಟೋನಿಕ್ ಲೋಡಿಂಗ್ 18, ಅಥವಾ ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಬಲ ಸಂಜ್ಞಾಪರಿವರ್ತಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಟೆನ್ಷನ್ ಡ್ರೈವ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮರುಸೃಷ್ಟಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಪರಿಸರದ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ ಇಲ್ಲದೆ ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅನೇಕ ಹೃದಯ ವಂಶವಾಹಿಗಳ ನಿಗ್ರಹ ಅಥವಾ ಅಸಹಜ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ.ಇಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದ CTCM 3D ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸೈಕಲ್ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಶಾರೀರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸುತ್ತದೆ (25% ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ, 40% ಸಂಕೋಚನ, 60% ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್, ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 72 ಬೀಟ್ಸ್).ಅಂಗಾಂಶದ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಈ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಅಂಗಾಂಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸಮರ್ಪಕವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲು T3/Dex ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹಾಸ್ಯ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.
ವಯಸ್ಕ ಹೃದಯದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ಹಾಸ್ಯದ ಅಂಶಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ.ಜೀವಕೋಶದ ಪಕ್ವತೆಯನ್ನು ವೇಗಗೊಳಿಸಲು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ T3 ಮತ್ತು Dex ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾದ HiPS-CM ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಇದನ್ನು ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.T3 ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಗಳಾದ್ಯಂತ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು, ಸಕ್ಕರೆಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಸಾಗಣೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರಬಹುದು36.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, T3 MHC-α ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು MHC-β ಡೌನ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಶನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಭ್ರೂಣದ CM ನಲ್ಲಿ ನಿಧಾನವಾದ ಟ್ವಿಚ್ ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರೌಢ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವೇಗದ ಟ್ವಿಚ್ ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್‌ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ.ಹೈಪೋಥೈರಾಯ್ಡ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ T3 ಕೊರತೆಯು ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್ಲರ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳ ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟೋನ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಡೆಕ್ಸ್ ಗ್ಲುಕೊಕಾರ್ಟಿಕಾಯ್ಡ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಪರ್ಫ್ಯೂಸ್ಡ್ ಹೃದಯಗಳಲ್ಲಿ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಲ್ ಸಂಕೋಚನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ;38 ಈ ಸುಧಾರಣೆಯು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಠೇವಣಿ-ಚಾಲಿತ ಪ್ರವೇಶ (SOCE) 39,40 ಮೇಲಿನ ಪರಿಣಾಮಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಡೆಕ್ಸ್ ತನ್ನ ಗ್ರಾಹಕಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ವಿಶಾಲವಾದ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.
Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಭೌತಿಕ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯು (MS) ಒಟ್ಟಾರೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ವಿಫಲವಾಗಿದೆ.Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, CTCM (MT) ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗೆ T3 ಮತ್ತು Dex ನ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿತು ಮತ್ತು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳು, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ, STCM ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೈಪರ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು STCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಬಹುಮುಖತೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ.ಹೃದಯದ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಖಂಡ ಅಂಗಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದ್ದರೂ, ಅದರ ಪರಿಚಲನೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸೂಕ್ತವಾದ ಸೈಟೊಕಿನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫಾಗೊಸೈಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಮರುರೂಪಿಸುವ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು, ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳು ಇನ್ನೂ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಆಘಾತಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಫೈಬ್ರೊಟಿಕ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬಲ್ಲವು ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕು.ಮೈಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಾಗಿ.ಈ ಹಿಂದೆ ಈ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.CTCM ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಒತ್ತಡ/ವಿದ್ಯುತ್ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು ಆವರ್ತನವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಟ್ಯಾಕಿಕಾರ್ಡಿಯಾ, ಬ್ರಾಡಿಕಾರ್ಡಿಯಾ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ರಕ್ತಪರಿಚಲನೆಯ ಬೆಂಬಲ (ಯಾಂತ್ರಿಕ ಅನ್‌ಲೋಡ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ) ನಂತಹ ಅನೇಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕು.ಇದು ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಮಧ್ಯಮ ಥ್ರೋಪುಟ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.CTCM ಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಅತಿಯಾದ ಪರಿಶ್ರಮ-ಪ್ರೇರಿತ ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ವೈಯಕ್ತಿಕಗೊಳಿಸಿದ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ದಾರಿ ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ.ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನವು ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಹಾಸ್ಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಇಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಡೇಟಾವು CTCM ಅಖಂಡ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂ ಅನ್ನು ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ ಮಾಡಲು ಬಹಳ ಭರವಸೆಯ ವೇದಿಕೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಈ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವಿಧಾನವು ಕೆಲವು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಮುಖ್ಯ ಮಿತಿಯೆಂದರೆ ಅದು ಚೂರುಗಳ ಮೇಲೆ ನಿರಂತರ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಒತ್ತಡಗಳನ್ನು ಹೇರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್ ಸಂಕೋಚನಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.ಜೊತೆಗೆ, ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ (7 ಮಿಮೀ) ಸಣ್ಣ ಗಾತ್ರದ ಕಾರಣ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಬಲ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಹೊರಗೆ ಸಂಕೋಚನದ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ಸಂಕೋಚನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಅನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ನಾವು ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ನಿವಾರಿಸುತ್ತೇವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಮಿತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕೆಲಸದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಭವಿಷ್ಯದಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಮತ್ತು ವೋಲ್ಟೇಜ್-ಸೆನ್ಸಿಟಿವ್ ಡೈಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್‌ನಂತಹ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯದ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಗೆ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು.CTCM ನ ಮತ್ತೊಂದು ಮಿತಿಯೆಂದರೆ, ಕೆಲಸದ ಮಾದರಿಯು ಶಾರೀರಿಕ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕುಶಲತೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸುವುದಿಲ್ಲ (ಪೂರ್ವಲೋಡ್ ಮತ್ತು ಆಫ್ಟರ್‌ಲೋಡ್).CTCM ನಲ್ಲಿ, ಅತಿ ದೊಡ್ಡ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ (ಫುಲ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್) ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಟೋಲ್ (ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಕೋಚನದ ಉದ್ದ) 25% ಶಾರೀರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲು ವಿರುದ್ಧ ದಿಕ್ಕುಗಳಲ್ಲಿ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲಾಯಿತು.ಭವಿಷ್ಯದ CTCM ವಿನ್ಯಾಸಗಳಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ಬದಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ಮೇಲೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಒತ್ತಡದಿಂದ ಮತ್ತು ಹೃದಯದ ಕೋಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುವ ನಿಖರವಾದ ಒತ್ತಡ-ಪರಿಮಾಣದ ಸಂಬಂಧಗಳನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು.
ಈ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾದ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್-ಪ್ರೇರಿತ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಯು ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಹೈಪರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ ಸಿಗ್ನಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸಲು ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ಈ ಮಾದರಿಯು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಥವಾ ನರಗಳ ಅಂಶಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ (ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿಲ್ಲ) ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ-ಪ್ರೇರಿತ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಸಹಾಯ ಮಾಡಬಹುದು.CTCM ನ ಬಹುಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಪರಿಚಲನೆ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ನರಕೋಶದ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಡುವಾಗ ಆವಿಷ್ಕಾರವು CTCM ನೊಂದಿಗೆ ರೋಗದ ಮಾದರಿಯ ಸಾಧ್ಯತೆಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಹದಿಮೂರು ಹಂದಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಣಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಮಾರ್ಗಸೂಚಿಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಲೂಯಿಸ್ವಿಲ್ಲೆ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಆರೈಕೆ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ಸಮಿತಿಯಿಂದ ಅನುಮೋದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮಹಾಪಧಮನಿಯ ಕಮಾನು ಕ್ಲ್ಯಾಂಪ್ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟಿತು ಮತ್ತು ಹೃದಯವನ್ನು 1 L ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ಹೆಪಾರಿನ್, pH 7.4 ವರೆಗೆ) ಪರ್ಫ್ಯೂಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ; ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷದ ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಲ್ಯಾಬ್‌ಗೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷದ ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಲ್ಯಾಬ್‌ಗೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಪೋರ್ಟಿರೋವ್ಕಿ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಬೋರಟೋರಿಸ್ ನ ಲುಡು, 10 . ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 ಡೇರ್ಜೈಟ್ ಸೆರ್ಡಾದಲ್ಲಿ ಲೆಡಿಯಾನೋಯ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಗಿ ಡೋ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಪೋರ್ಟಿರೋವ್ಕಿ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಬೋರಾಟೋರಿಯಲ್ಲಿ ಲುಡು, ಒಬಿಚ್ನೋ <10 ನಿಮಿಷಗಳು. ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷ.
CTCM ಸಾಧನವನ್ನು SolidWorks ಕಂಪ್ಯೂಟರ್ ನೆರವಿನ ವಿನ್ಯಾಸ (CAD) ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್‌ಗಳು, ಡಿವೈಡರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಏರ್ ಚೇಂಬರ್‌ಗಳನ್ನು CNC ಕ್ಲಿಯರ್ ಅಕ್ರಿಲಿಕ್ ಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್‌ನಿಂದ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.7mm ವ್ಯಾಸದ ಬ್ಯಾಕ್-ಅಪ್ ರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ (HDPE) ನಿಂದ ಮಾಡಲಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಮುಚ್ಚಲು ಬಳಸುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಓ-ರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲು o-ರಿಂಗ್ ಗ್ರೂವ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ತೆಳುವಾದ ಸಿಲಿಕಾ ಪೊರೆಯು ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಫಲಕದಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಚೇಂಬರ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ.ಸಿಲಿಕಾನ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು 0.02″ ದಪ್ಪ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಶೀಟ್‌ನಿಂದ ಲೇಸರ್ ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 35A ಗಡಸುತನವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಕೆಳಗಿನ ಮತ್ತು ಮೇಲಿನ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಗ್ಯಾಸ್ಕೆಟ್‌ಗಳನ್ನು 1/16″ ದಪ್ಪ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಶೀಟ್‌ನಿಂದ ಲೇಸರ್ ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 50A ಗಡಸುತನವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.316L ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಸ್ಕ್ರೂಗಳು ಮತ್ತು ರೆಕ್ಕೆ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಬ್ಲಾಕ್ ಅನ್ನು ಜೋಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯಾಡದ ಸೀಲ್ ರಚಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಮೀಸಲಾದ ಪ್ರಿಂಟೆಡ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಬೋರ್ಡ್ (PCB) ಅನ್ನು C-PACE-EM ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.PCB ಯಲ್ಲಿನ ಸ್ವಿಸ್ ಮೆಷಿನ್ ಕನೆಕ್ಟರ್ ಸಾಕೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳ್ಳಿ-ಲೇಪಿತ ತಾಮ್ರದ ತಂತಿಗಳು ಮತ್ತು ಕಂಚಿನ 0-60 ತಿರುಪುಮೊಳೆಗಳಿಂದ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳಿಗೆ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳಲ್ಲಿ ತಿರುಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮುದ್ರಿತ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಬೋರ್ಡ್ ಅನ್ನು 3D ಪ್ರಿಂಟರ್ನ ಕವರ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (PPD) ಮೂಲಕ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದಂತೆಯೇ ನಿಯಂತ್ರಿತ ರಕ್ತಪರಿಚಲನೆಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ.ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯೊಳಗಿನ ಒತ್ತಡವು ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ, ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯು ಮೇಲಕ್ಕೆ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂಗಾಂಶದ ಸೈಟ್ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಒತ್ತಾಯಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ದ್ರವದ ಹೊರಹಾಕುವಿಕೆಯಿಂದ ಅಂಗಾಂಶದ ಪ್ರದೇಶವು ವಿಸ್ತರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸುತ್ತದೆ.ವಿಶ್ರಾಂತಿಯ ಉತ್ತುಂಗದಲ್ಲಿ, ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೂಲಕ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಗಾಳಿಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಂಕೋಚನವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪೈಪ್ ಒಳಗೆ ಗಾಳಿಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕದೊಂದಿಗೆ ಹೆಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಕವಾಟವಿದೆ.ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕದಿಂದ ಗ್ರಹಿಸಿದ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಲ್ಯಾಪ್‌ಟಾಪ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಗೊಂಡಿರುವ ಡೇಟಾ ಸಂಗ್ರಾಹಕಕ್ಕೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದು ಗ್ಯಾಸ್ ಚೇಂಬರ್ ಒಳಗೆ ಒತ್ತಡದ ನಿರಂತರ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ.ಗರಿಷ್ಟ ಚೇಂಬರ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ (ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ 80 mmHg, 140 mmHg OS), 2 ms ಗೆ ಬೈಫಾಸಿಕ್ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು C-PACE-EM ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಳುಹಿಸಲು ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ಸಾಧನವನ್ನು ಆದೇಶಿಸಲಾಯಿತು, 4 V ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 6 ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿನ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ: ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಿದ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾವಣೆ ಪಾತ್ರೆಯಿಂದ ಶೀತ (4 ° C.) ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾ ಹೊಂದಿರುವ ಟ್ರೇಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.ಎಡ ಕುಹರವನ್ನು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಬ್ಲೇಡ್ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ 1-2 ಸೆಂ 3 ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಲಾಯಿತು.ಈ ಟಿಶ್ಯೂ ಬ್ಲಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ಅಂಗಾಂಶದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶ ಬೆಂಬಲಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಟೈರೋಡ್‌ನ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕಂಪಿಸುವ ಮೈಕ್ರೊಟೋಮ್ ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಆಮ್ಲಜನಕಯುಕ್ತ (3 g/L 2,3-ಬ್ಯುಟಾನೆಡಿಯೋನ್ ಮೊನೊಕ್ಸಿಮ್ (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.18 gM ಸೆ), 6 mM KCl (0.18 gMse), HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ಪರಿಹಾರ), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M ಪರಿಹಾರ), 1 L ddH2O ವರೆಗೆ).ಕಂಪಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟೋಮ್ ಅನ್ನು 80 Hz ಆವರ್ತನದಲ್ಲಿ 300 µm ದಪ್ಪದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಲು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ, 2 mm ನ ಸಮತಲ ಕಂಪನ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು 0.03 mm/s ಮುಂಗಡ ದರ.ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಂಪಾಗಿರಿಸಲು ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ನಾನವನ್ನು ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯಿಂದ ಸುತ್ತುವರಿದಿದೆ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ.ಒಂದು ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವವರೆಗೆ, ಮೈಕ್ರೊಟೋಮ್ ಸ್ನಾನದಿಂದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಆಮ್ಲಜನಕಯುಕ್ತ ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕಾವು ಸ್ನಾನಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ವೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್‌ಗಳಿಗೆ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಬರಡಾದ 6 ಮಿಮೀ ಅಗಲದ ಪಾಲಿಯುರೆಥೇನ್ ಬೆಂಬಲಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 6 ಮಿಲಿ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿದೆ (199 ಮಧ್ಯಮ, 1x ITS ಪೂರಕ, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ಕ್ಷಾರೀಯ ಮತ್ತು 2X ಆಂಟಿಬಯೋಟಿಕ್-ಆಂಟ್).ಸಿ-ಪೇಸ್ ಮೂಲಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ (10 V, ಆವರ್ತನ 1.2 Hz) ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ.TD ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಮಧ್ಯಮ ಬದಲಾವಣೆಯಲ್ಲಿ ತಾಜಾ T3 ಮತ್ತು Dex ಅನ್ನು 100 nM ಮತ್ತು 1 μM ನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ದಿನಕ್ಕೆ 3 ಬಾರಿ ಬದಲಿಸುವ ಮೊದಲು ಮಾಧ್ಯಮವು ಆಮ್ಲಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಆಗಿದೆ.ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 37 ° C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.
CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗೆ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಟೈರೋಡ್‌ನ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೆಟ್ರಿ ಭಕ್ಷ್ಯದಲ್ಲಿ ಕಸ್ಟಮ್-ನಿರ್ಮಿತ 3D ಪ್ರಿಂಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್ನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲ ರಿಂಗ್ನ ಪ್ರದೇಶದ 25% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಸಾಧನವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಟೈರೋಡ್‌ನ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಮಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ನಂತರ ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳು ಹಿಗ್ಗದಂತೆ ಇದನ್ನು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹಿಸ್ಟೊಆಕ್ರಿಲಿಕ್ ಅಂಟು ಬಳಸಿ, 300 µm ದಪ್ಪವಿರುವ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 7 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದ ಬೆಂಬಲ ರಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲ ರಿಂಗ್‌ಗೆ ಜೋಡಿಸಿದ ನಂತರ, ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಮತ್ತು ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಒಂದು ಸಾಧನಕ್ಕೆ ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸುವವರೆಗೆ ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿ (4 ° C) ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣದ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.ಎಲ್ಲಾ ಸಾಧನಗಳ ಒಟ್ಟು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯವು 2 ಗಂಟೆಗಳ ಮೀರಬಾರದು.6 ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಿದ ನಂತರ, CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ.CTCM ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್ ಅನ್ನು 21 ಮಿಲಿ ಪೂರ್ವ-ಆಮ್ಲಜನಕ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಮೊದಲೇ ತುಂಬಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕೋಣೆಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಯಾವುದೇ ಗಾಳಿಯ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.ನಂತರ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗವನ್ನು ರಂಧ್ರಕ್ಕೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಸ್ಥಳಕ್ಕೆ ಒತ್ತಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಸಾಧನದಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ಕ್ಯಾಪ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಾಧನವನ್ನು ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.ನಂತರ CTCM ಅನ್ನು ಏರ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು C-PACE-EM ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಪಡಿಸಿ.ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ ತೆರೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯ ಕವಾಟವು CTCM ಅನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ.C-PACE-EM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು 2 ms ಗಾಗಿ ಬೈಫಾಸಿಕ್ ಪೇಸಿಂಗ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1.2 Hz ನಲ್ಲಿ 4 V ತಲುಪಿಸಲು ಕಾನ್ಫಿಗರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೇಲೆ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ದಿನಕ್ಕೆ ಎರಡು ಬಾರಿ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ದಿನಕ್ಕೆ ಒಮ್ಮೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು.ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಬಿದ್ದ ಯಾವುದೇ ಗಾಳಿಯ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲು ಅವುಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಬಾವಿಗಳಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.MT ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗಾಗಿ, 100 nM T3 ಮತ್ತು 1 μM ಡೆಕ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿ ಮಧ್ಯಮ ಬದಲಾವಣೆಯೊಂದಿಗೆ T3/Dex ಅನ್ನು ಹೊಸದಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ.CTCM ಸಾಧನಗಳನ್ನು 37 ° C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.
ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ಪಥವನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ವಿಶೇಷ ಕ್ಯಾಮೆರಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.Navitar ಜೂಮ್ 7000 18-108mm ಮ್ಯಾಕ್ರೋ ಲೆನ್ಸ್ (Navitar, San Francisco, CA) ನೊಂದಿಗೆ SLR ಕ್ಯಾಮೆರಾವನ್ನು (ಕ್ಯಾನನ್ ರೆಬೆಲ್ T7i, Canon, Tokyo, Japan) ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬದಲಿಸಿದ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಣವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಕ್ಯಾಮೆರಾವನ್ನು 51° ಕೋನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಸೆಕೆಂಡಿಗೆ 30 ಫ್ರೇಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವೀಡಿಯೊವನ್ನು ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಚಲನೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಇಮೇಜ್-ಜೆ ಜೊತೆಗೆ ಓಪನ್ ಸೋರ್ಸ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (MUSCLEMOTION43) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಶಬ್ದವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳನ್ನು ಹೊಡೆಯಲು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲು MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮುಖವಾಡವನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ.ಹಸ್ತಚಾಲಿತವಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾದ ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಫ್ರೇಮ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಚಿತ್ರಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ MUSCLEMOTION ಪ್ಲಗ್-ಇನ್‌ಗೆ ರವಾನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸ್ನಾಯು ಚಲನೆಯು ಪ್ರತಿ ಫ್ರೇಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಸರಾಸರಿ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಫ್ರೇಮ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಅದರ ಚಲನೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಡೇಟಾವನ್ನು ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಚಕ್ರದ ಸಮಯವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೊದಲ ಕ್ರಮಾಂಕದ ಶೂನ್ಯ-ಹಂತದ ಡಿಜಿಟಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಿದ ವೀಡಿಯೊವನ್ನು ಪೋಸ್ಟ್-ಪ್ರೊಸೆಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು (ಪೀಕ್-ಟು-ಪೀಕ್) ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು, ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಿದ ಸಿಗ್ನಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಶಿಖರಗಳು ಮತ್ತು ತೊಟ್ಟಿಗಳ ನಡುವೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಪೀಕ್-ಟು-ಪೀಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಸಿಗ್ನಲ್ ಡ್ರಿಫ್ಟ್ ಅನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಲು 6 ನೇ ಕ್ರಮದ ಬಹುಪದವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಟ್ರೆಂಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಜಾಗತಿಕ ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆ, ಚಕ್ರದ ಸಮಯ, ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಸಂಕೋಚನದ ಸಮಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು MATLAB ನಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಕೋಡ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಸಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಕೋಡ್ 44).
ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಮೆಕ್ಯಾನಿಕಲ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ ಅಸೆಸ್‌ಮೆಂಟ್‌ಗಾಗಿ ರಚಿಸಲಾದ ಅದೇ ವೀಡಿಯೊಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ನಾವು ಮೊದಲು MUSCLEMOTION ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಪ್ರಕಾರ ಚಲನೆಯ ಶಿಖರಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಎರಡು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು (ಉನ್ನತ (ಮೇಲಿನ) ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ (ಕಡಿಮೆ) ಚಲನೆಯ ಬಿಂದುಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ.ನಂತರ ನಾವು ಅಂಗಾಂಶ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ವಿಭಾಗಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ವಿಭಜಿತ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ (ಅನುಬಂಧ ಚಿತ್ರ 2a) ಛಾಯೆಯ ಅಲ್ಗಾರಿದಮ್ ಅನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತೇವೆ.ವಿಭಜಿತ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ನಂತರ ಹತ್ತು ಉಪಮೇಲ್ಮೈಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಮೇಲ್ಮೈ ಮೇಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸಮೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ: ಸ್ಟ್ರೈನ್ = (Sup-Sdown)/Sdown, ಅಲ್ಲಿ Sup ಮತ್ತು Sdown ಕ್ರಮವಾಗಿ ಬಟ್ಟೆಯ ಮೇಲಿನ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ನೆರಳುಗಳಿಂದ ಆಕಾರದ ಅಂತರಗಳಾಗಿವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ .2b).
ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 4% ಪ್ಯಾರಾಫಾರ್ಮಾಲ್ಡಿಹೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ 48 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ನಿಗದಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸ್ಥಿರವಾದ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು 1 ಗಂಟೆಯವರೆಗೆ 10% ಮತ್ತು 20% ಸುಕ್ರೋಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 30% ಸುಕ್ರೋಸ್‌ನಲ್ಲಿ.ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ನಂತರ ಆಪ್ಟಿಮಮ್ ಕಟಿಂಗ್ ಟೆಂಪರೇಚರ್ ಕಾಂಪೌಂಡ್‌ನಲ್ಲಿ (OCT ಕಾಂಪೌಂಡ್) ಹುದುಗಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಮೇಣ ಐಸೊಪೆಂಟೇನ್/ಡ್ರೈ ಐಸ್ ಬಾತ್‌ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.OCT ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ಬ್ಲಾಕ್‌ಗಳನ್ನು -80 °C ನಲ್ಲಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.8 μm ದಪ್ಪವಿರುವ ವಿಭಾಗಗಳಾಗಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ OCT ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು, 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 °C ನಲ್ಲಿ ಹೀಟಿಂಗ್ ಬ್ಲಾಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ.ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ 1 ಮಿಲಿ PBS ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ, ನಂತರ ಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ PBS ನಲ್ಲಿ 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್-ಎಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸಿ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಮಾದರಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ತಡೆಯಲು, 1 ಮಿಲಿ 3% BSA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.ನಂತರ BSA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪೆನ್ಸಿಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಗುರುತಿಸಿ.ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು (1% BSA ನಲ್ಲಿ 1:200 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ಮತ್ತು ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #MA5-12960) ಮೌಸ್ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ 488 ವಿರುದ್ಧ (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #A16079), ಮೊಲದ ವಿರುದ್ಧ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ 594 (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #T6391) ಹೆಚ್ಚುವರಿ 90 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ PBS ನೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಗುರಿಯ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಹಿನ್ನೆಲೆಯಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು, ನಾವು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಸೆಕೆಂಡರಿ ಆಂಟಿಬಾಡಿಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ. ield (ವೆಕ್ಟರ್ ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರೀಸ್) ಮತ್ತು ನೇಲ್ ಪಾಲಿಷ್‌ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಗಿದೆ -x ವರ್ಧನೆ) ಮತ್ತು 40x ವರ್ಧನೆಯೊಂದಿಗೆ ಕೀಯನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ.
PBS ನಲ್ಲಿ 5 μg/ml ನಲ್ಲಿ WGA-ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೋರ್ 555 (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #W32464) ಅನ್ನು WGA ಸ್ಟೇನಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸ್ಥಿರ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ ಸುಡಾನ್ ಕಪ್ಪು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವೆಕ್ಟಾಶೀಲ್ಡ್ ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಕೀಯನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್‌ನಲ್ಲಿ 40x ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ OCT ಅನ್ನು ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿದೆ.OCT ತೆಗೆದ ನಂತರ, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಬೌಯಿನ್‌ನ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಮುಳುಗಿಸಿ.ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 1 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಬ್ರಿಚ್ ಅಲೋ ಆಸಿಡ್ ಫ್ಯೂಸಿನ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆದು 5% ಫಾಸ್ಫೋಮೊಲಿಬ್ಡಿನಮ್ / 5% ಫಾಸ್ಫೋಟಂಗ್ಸ್ಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ತೊಳೆಯದೆಯೇ, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಅನಿಲೀನ್ ನೀಲಿ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆದು 1% ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 200 N ಎಥೆನಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ ಕ್ಸೈಲೀನ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು.10x ಉದ್ದೇಶದೊಂದಿಗೆ ಕೀಯನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಬಣ್ಣದ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಪ್ರದೇಶದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕೀಯನ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
CyQUANT™ MTT ಸೆಲ್ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜನ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾಡ್, CA), ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ ಸಂಖ್ಯೆ V13154, ಕೆಲವು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಏಕರೂಪದ ಅಂಗಾಂಶದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು 6 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಶಸ್ತ್ರಚಿಕಿತ್ಸಾ ಪಂಚ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು.ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ MTT ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 12-ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಲೇಪಿಸಲಾಗಿದೆ.ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 37° C. ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಂತ ಅಂಗಾಂಶವು MTT ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಮೆಟಾಬೊಲೈಸ್ ಮಾಡಿ ನೇರಳೆ ಫಾರ್ಮಾಜಾನ್ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.MTT ದ್ರಾವಣವನ್ನು 1 ml DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಭಾಗಗಳಿಂದ ನೇರಳೆ ಫಾರ್ಮಾಜಾನ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 °C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.ಮಾದರಿಗಳನ್ನು 1:10 DMSO ನಲ್ಲಿ 96-ವೆಲ್ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಕೆಳಭಾಗದ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸೈಟೇಶನ್ ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಬಯೋಟೆಕ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 570 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾದ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹೃದಯದ ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ತೂಕಕ್ಕೆ ವಾಚನಗೋಷ್ಠಿಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 1 μCi/ml [5-3H]-ಗ್ಲುಕೋಸ್ (ಮೊರವೆಕ್ ಬಯೋಕೆಮಿಕಲ್ಸ್, ಬ್ರೀ, CA, USA) ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು.4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, 0.2 N HCl ನ 100 µl ಹೊಂದಿರುವ ತೆರೆದ ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 100 µl ಮಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ನಂತರ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು 500 μl dH2O ಹೊಂದಿರುವ ಸಿಂಟಿಲೇಶನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ [3H]2O ಅನ್ನು 37 ° C ನಲ್ಲಿ 72 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಆವಿಯಾಗುವಂತೆ ಇರಿಸಲಾಯಿತು.ನಂತರ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಿಂದ ಮೈಕ್ರೊಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 10 ಮಿಲಿ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ದ್ರವವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಟ್ರೈ-ಕಾರ್ಬ್ 2900TR ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು (ಪ್ಯಾಕರ್ಡ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಕಂಪನಿ, ಮೆರಿಡೆನ್, CT, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಿಂಟಿಲೇಶನ್ ಎಣಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.[5-3H]-ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಟುವಟಿಕೆ, ಅಪೂರ್ಣ ಸಮತೋಲನ ಮತ್ತು ಹಿನ್ನೆಲೆ, [5-3H] ಅನ್ನು ಲೇಬಲ್ ಮಾಡದ ಗ್ಲೂಕೋಸ್‌ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಕೌಂಟರ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯನ್ನು ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಮೂಹಕ್ಕೆ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಟ್ರೈಝೋಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶದ ಏಕರೂಪೀಕರಣದ ನಂತರ, ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ Qiagen miRNeasy ಮೈಕ್ರೋ ಕಿಟ್ #210874 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ RNA ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಸೆಕ್ ಲೈಬ್ರರಿ ತಯಾರಿಕೆ, ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಡೇಟಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ:
ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ 1 μg ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಲೈಬ್ರರಿಯ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ತಯಾರಕರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ ಇಲ್ಯುಮಿನಾ (NEB, USA) ಗಾಗಿ NEBNext UltraTM RNA ಲೈಬ್ರರಿ ತಯಾರಿ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅನುಕ್ರಮ ಗ್ರಂಥಾಲಯಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣದ ಅನುಕ್ರಮಗಳಿಗೆ ಸೂಚ್ಯಂಕ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪಾಲಿ-ಟಿ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಎಮ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.NEBNext ಫಸ್ಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್ (5X) ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಡೈವೇಲೆಂಟ್ ಕ್ಯಾಟಯಾನುಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಘಟನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಅನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಹೆಕ್ಸಾಮರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು M-MuLV ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ (RNase H-) ಬಳಸಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು.ಎರಡನೇ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ನಂತರ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ I ಮತ್ತು RNase H ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕಿನ 3′ ಅಂತ್ಯದ ಅಡೆನೈಲೇಶನ್ ನಂತರ, ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್‌ಗೆ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ಲೂಪ್ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ NEBNext ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಲಗತ್ತಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆದ್ಯತೆಯ ಉದ್ದ 150-200 bp ನ cDNA ತುಣುಕುಗಳ ಆಯ್ಕೆಗಾಗಿ.AMPure XP ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಗ್ರಂಥಾಲಯದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು (ಬೆಕ್‌ಮನ್ ಕೌಲ್ಟರ್, ಬೆವರ್ಲಿ, USA).ನಂತರ, 3 μl USER ಕಿಣ್ವವನ್ನು (NEB, USA) ಅಡಾಪ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಗಾತ್ರ-ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ cDNA ಅನ್ನು 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ನಂತರ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ PCR ಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ನಂತರ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಫ್ಯೂಷನ್ ಹೈ-ಫಿಡೆಲಿಟಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಯುನಿವರ್ಸಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಡೆಕ್ಸ್ (ಎಕ್ಸ್) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಅಂತಿಮವಾಗಿ, PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು (AMPure XP ಸಿಸ್ಟಮ್) ಮತ್ತು ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಬಯೋಅನಾಲೈಜರ್ 2100 ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಲೈಬ್ರರಿ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ.cDNA ಲೈಬ್ರರಿಯನ್ನು ನಂತರ ನೊವಾಸೆಕ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸರ್ ಬಳಸಿ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಇಲ್ಯುಮಿನಾದಿಂದ ಕಚ್ಚಾ ಇಮೇಜ್ ಫೈಲ್‌ಗಳನ್ನು CASAVA ಬೇಸ್ ಕಾಲಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ಕಚ್ಚಾ ಓದುವಿಕೆಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗಿದೆ.ಓದುವ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಮೂಲ ಗುಣಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ FASTQ(fq) ಫಾರ್ಮ್ಯಾಟ್ ಫೈಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಚ್ಚಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.Sscrofa11.1 ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಜೀನೋಮ್‌ಗೆ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ರೀಡ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿಸಲು HISAT2 ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, HISAT2 ಯಾವುದೇ ಗಾತ್ರದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ 4 ಶತಕೋಟಿ ಬೇಸ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ದೊಡ್ಡದಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳು ಸೇರಿವೆ ಮತ್ತು ಡೀಫಾಲ್ಟ್ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಯತಾಂಕಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸೆಕ್ ಡೇಟಾದಿಂದ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ ರೀಡ್‌ಗಳನ್ನು HISAT2 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಜೋಡಿಸಬಹುದು, ಇದು ಪ್ರಸ್ತುತ ಲಭ್ಯವಿರುವ ವೇಗವಾದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಾಗಿದೆ, ಯಾವುದೇ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಅದೇ ಅಥವಾ ಉತ್ತಮ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ.
ಪ್ರತಿಲೇಖನಗಳ ಸಮೃದ್ಧಿಯು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ.ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಜೀನೋಮ್ ಅಥವಾ ಎಕ್ಸಾನ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳ (ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಎಣಿಕೆ) ಹೇರಳವಾಗಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ರೀಡ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು, ಜೀನ್ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮ ಆಳಕ್ಕೆ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ.FPKM (ಪ್ರತಿ ಮಿಲಿಯನ್ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಸಾವಿರ ಮೂಲ ಜೋಡಿ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ತುಣುಕುಗಳು) ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು DESeq2 ಪ್ಯಾಕೇಜ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಭಿನ್ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ P-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಾವು ನಂತರ ಬೆಂಜಮಿನಿ-ಹೊಚ್‌ಬರ್ಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರತಿ ಪಿ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ತಪ್ಪು ಪತ್ತೆ ದರವನ್ನು (ಎಫ್‌ಡಿಆರ್) ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ 9 ಅಂತರ್ನಿರ್ಮಿತ R-ಫಂಕ್ಷನ್ "p.adjust" ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿ.
ಥರ್ಮೋ (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ನಂ. 11756050) ನಿಂದ ಸೂಪರ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ IV ವಿಲೋ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ 200 ng/μl ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ cDNA ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು.ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಎಂಡುರಾ ಪ್ಲೇಟ್ ಮೈಕ್ರೋಆಂಪ್ 384-ವೆಲ್ ಪಾರದರ್ಶಕ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಪ್ಲೇಟ್ (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ನಂ. 4483319) ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೊಆಂಪ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಅಂಟು (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ನಂ. 4311971) ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವು 5 µl ತಕ್ಮನ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಅಡ್ವಾನ್ಸ್ಡ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್ # 4444557), 0.5 µl ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು 3.5 µl H2O ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ qPCR ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು CT ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟ್‌ಸ್ಟುಡಿಯೋ 5 ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಉಪಕರಣವನ್ನು (384-ವೆಲ್ ಮಾಡ್ಯೂಲ್; ಉತ್ಪನ್ನ # A28135) ಬಳಸಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಥರ್ಮೋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (S801806) (S80180) 8_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424 ಗೆ ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮೌಲ್ಯದ ಮನೆಗಳು 588424) ಜೀನ್ GAPDH.
NT-ProBNP ಯ ಮಾಧ್ಯಮ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ NT-ProBNP ಕಿಟ್ (ಹಂದಿ) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ 250 μl ಮತ್ತು ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ನಕಲಿನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ತಕ್ಷಣ, ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50 µl ಅಸ್ಸೇ ರೀಜೆಂಟ್ A ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ ಮತ್ತು ಸೀಲಾಂಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಸೀಲ್ ಮಾಡಿ.ನಂತರ ಮಾತ್ರೆಗಳನ್ನು 1 ಗಂಟೆ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು 1X ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣದ 350 µl ನೊಂದಿಗೆ 4 ಬಾರಿ ಬಾವಿಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಿರಿ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ 1-2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ತೊಳೆಯುವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಕಾವು ಮಾಡಿ.ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100 µl ಅಸ್ಸೇ ರೀಜೆಂಟ್ ಬಿ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲಾಂಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸೀಲ್ ಮಾಡಿ.ಟ್ಯಾಬ್ಲೆಟ್ ಅನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 1X ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣದ 350 µl ನೊಂದಿಗೆ 5 ಬಾರಿ ಬಾವಿಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಿರಿ.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 90 µl ತಲಾಧಾರದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ತಟ್ಟೆಯನ್ನು ಮುಚ್ಚಿ.10-20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಿ.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50 µl ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ 450 nm ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿಸಲಾದ Cytation (BioTek) ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ ಬಳಸಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು > 80% ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪಿನ ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ಪವರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು > 80% ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪಿನ ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ಪವರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಅನಾಲಿಸ್ ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ ಬೈಲ್ ವೈಪೋಲ್ನೆನ್ ಡ್ಲ್ಯಾ ವೈಬೋರಾ ರಾಜ್ಮೆರೋವ್ ಗ್ರೂಪ್, ಕೋಟೋರಿ ಒಬೆಸ್ಪೆಚಾಟ್ >80% ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ % 1000 ಐಝ್ಮೆನೆನಿಯಸ್ ಪ್ಯಾರಾಮೆಟ್ರ 5% ಚಾಸ್ಟೋಯ್ ಓಷಿಬಾಕ್ ಟಿಪಾ I. 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ನಿಯತಾಂಕ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು > 80% ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪು ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ಪವರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5 ಬೈಲ್ ಪ್ರೊವೆಡೆನ್ ಅನಾಲಿಸ್ ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ ಡ್ಲಿಯಾ ವೈಬೋರಾ ರಜ್ಮೇರಾ ಗ್ರೂಪ್ಪಿ, ಕೋಟೋರಿ ಒಬೆಸ್ಪೆಚಿಲ್ ಬಿ > 80% ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ %0100 ನೋಗೋ ಇಝ್ಮೆನೆನಿಯಾ ಪ್ಯಾರಾಮೆಟ್ರೋವ್ ಮತ್ತು 5% ಚಾಸ್ಟೋಟ್ ಓಷಿಬಾಕ್ ಟಿಪಾ I. 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಬದಲಾವಣೆ ಮತ್ತು 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು > 80% ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪಿನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ಪವರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಎಲ್ಲಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಸ್ಥಿತಿ ಕುರುಡು ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ನಂತರ ಮಾತ್ರ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಡಿಕೋಡ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ, ಸಿಎ) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.ಎರಡು-ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಕೇವಲ 2 ಹೋಲಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಡೇಟಾದಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಬಹು ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಮಹತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ಅಥವಾ ಎರಡು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, ತುಕಿಯ ತಿದ್ದುಪಡಿಯನ್ನು ಬಹು ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಲು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ.RNAsec ಡೇಟಾವು FDR ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುವಾಗ ವಿಶೇಷ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ಪರಿಗಣನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳ ವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ p.ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮಾಡಿ.
ಅಧ್ಯಯನ ವಿನ್ಯಾಸದ ಕುರಿತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ, ಈ ಲೇಖನಕ್ಕೆ ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಲಾದ ನೇಚರ್ ರಿಸರ್ಚ್ ರಿಪೋರ್ಟ್ ಅಮೂರ್ತವನ್ನು ನೋಡಿ.