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작사 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 카타니아 대학교 임상실험의학과, 카타니아 , 95123, Italy;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico "G.Rodolico – San Marco", Catania , 95123, Italy;3 의료 종양학, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, 카타니아, 95123, 이탈리아;4 의료 유전학, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy;5 의학 유전학, ASP, Syracuse, 96100, 이탈리아;6 이탈리아 카타니아 95123 의료 유전학 카타니아 대학교 생의학 및 생명공학과;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italy 커뮤니케이션: Stefania Stella, 전화 +39 095 378 1946, 이메일[이메일 보호];[email protected] 목적: BRCA1 및 BRCA2의 생식계열 돌연변이 및 확립된 유방암(BC), 난소(OC) 및 기타 암의 평생 위험과 관련이 있습니다. BRCA 유전자에 대한 테스트는 개인 위험을 평가하고 건강한 보인자에서 예방 방법을 찾고 암 환자의 맞춤형 치료법을 찾는 데 중요합니다. BRCA1 및 BRCA2 변형의 유병률은 지역에 따라 크게 다르며 시칠리아 가족의 BRCA 병원성 변이에 대한 데이터가 있지만 연구는 특히 인구를 대상으로 합니다. 연구의 목적은 동부 시칠리아의 BC 환자 코호트에서 BRCA 병원성 생식계열 변이의 발생률과 분포를 조사하고 차세대 시퀀싱을 사용하여 특정 BC 형질과의 연관성을 평가하는 것이었습니다. 변이의 존재는 종양 등급 및 증식 지수와 관련이 있었습니다. 결과: 전반적으로, 35명의 환자(9%)가 BRCA 병원성 변이를 가지고 있었고, BRCA1에서 17명(49%), BR에서 18명(51%)이 있었습니다. CA2.BRCA1 변이는 3중 음성 BC 환자에서 흔히 발생하는 반면, BRCA2 돌연변이는 내강 BC 환자에서 더 흔합니다. 비보유자와 비교하여 BRCA1 변이를 가진 피험자는 종양 등급과 증식 지수가 상당히 높았습니다. 결론: 우리의 연구 결과는 시칠리아 동부 BC 환자의 BRCA 돌연변이 상태에 대한 개요를 제공하고 유전성 BC 환자를 식별하는 데 NGS 분석의 역할을 확인합니다. 전반적으로 이러한 데이터는 적절한 예방 및 치료를 위한 BRCA 스크리닝을 지원하는 이전 증거와 일치합니다. 돌연변이 보유자의 암.
유방암(BC)은 전 세계적으로 가장 흔한 악성 종양이며 여성에게 가장 치명적인 암입니다.1 BC 예후와 임상 행동을 결정하는 생물학적 특징은 광범위하게 연구되었으며 시간이 지남에 따라 부분적으로 밝혀졌습니다. 사실 BC를 여러 분자 하위 유형으로 분류하는 데 현재 여러 대리 마커가 사용됩니다. 이들은 에스트로겐(ER) 및/또는 프로게스테론 수용체(PgR), 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2) 증폭, 증식 지수 Ki-67 및 종양 등급( G).2 이러한 변수의 조합은 다음 BC 범주를 확인했습니다. 1) ER 및/또는 PgR 발현을 나타내는 Luminal 종양은 BC의 75%를 차지했습니다. 이 종양은 Ki-67이 20% 미만이고 HER2 음성인 경우 Luminal A로, Ki-67이 20% 이상이고 증식 지수에 관계없이 HER2 증폭이 있는 경우 Luminal B로 더 나뉩니다.2) ER 및 PgR 음성이지만 HER2 증폭을 보이는 HER2+ 종양. 이 그룹은 모든 유방 종양의 10%를 차지합니다.3) ER과 PgR 발현 및 HER2 증폭이 없는 삼중음성유방암(TNBC)은 유방암의 약 15%를 차지한다.2-4
이러한 BC 하위 유형 중에서 종양 등급 및 증식 지수는 종양 공격성 및 예후와 직접적이고 독립적으로 관련된 단면적 바이오마커를 나타냅니다.5,6
앞서 언급한 생물학적 특징 외에도 BC 발달로 이어지는 유전적 유전적 변이의 역할은 지난 몇 년 동안 점점 더 중요해졌습니다.7 유방 종양 10개 중 약 1개는 특정 유전자의 생식계열 변이로 인해 유전됩니다.8 180,000명 이상의 여성을 대상으로 한 두 개의 대규모 역학 연구에서 최근 8개 유전자 그룹(예: ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C 및 RAD51D)이 확인되었습니다. 유전성 BC를 주로 담당합니다. 이 유전자 중 BRCA1과 BRCA2(이하 BRCA1/2)는 유방 종양 발생과 가장 강한 상관관계를 보였습니다.9-12 실제로 생식계열 BRCA1/2 돌연변이는 난소, 전립선, 췌장, 결장직장 및 흑색종을 포함한 다른 악성 종양뿐만 아니라 BC의 평생 위험을 크게 증가시킵니다. 13세에서 80세까지 BC의 누적 발생률은 BR이 있는 여성에서 72%입니다. CA1 병원성 변형(PV) 및 BRCA2 PV가 있는 여성의 69%.14
특히, 최근 간행물은 BC 위험이 PV의 유형에 따라 다르다고 제안합니다. 사실, 병원성 절단 변이와 비교할 때, 특히 BRCA1 유전자의 눈부신 미스센스 변이는 특히 나이든 여성의 BC 위험 감소와 관련이 있습니다.15
BRCA1 또는 BRCA2 PV의 존재는 다양한 생물학적 및 임상병리학적 특징과 관련이 있습니다.16,17 BRCA1 관련 BC는 임상적으로 공격적이고 잘 분화되지 않으며 고도로 증식하는 경향이 있습니다. 이러한 종양은 일반적으로 3중 음성이며 조기에 발병합니다. BRCA2 돌연변이 환자에서 발생하는 종양은 일반적으로 중등도에서 잘 분화된 등급과 다양한 증식 지수를 나타냅니다. 이러한 종양은 내강 B에서 더 흔하며 일반적으로 노인에서 발생합니다. 16-18 특히, BRCA1 및 BRCA2의 돌연변이는 백금염 및 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제 억제제(PARPi)와 같은 표적 약물을 포함한 특정 치료에 대한 민감도를 증가시킵니다.19,20
지난 몇 년 동안 임상에서 NGS(Next-generation sequencing)를 구현함으로써 BRCA1/2를 포함하여 암 감수성 증후군에 대한 분자 테스트를 받는 BC 환자의 수가 증가했습니다.21 동시에 BRCA1/2 테스트에 합당한 개인을 더 잘 식별하기 위해 가족력, 인구 통계 및 임상병리학적 특성에 관한 정확한 기준을 기반으로 정의합니다.22,23 이러한 맥락에서 특정 모집단의 BRCA1/2 스크리닝에 대한 증거가 축적되고 있으며 지리적 차이를 강조합니다. 지역.24–27 서부 시칠리아의 BC 코호트에 대한 보고가 있지만 동부 시칠리아 인구의 BRCA1/2 선별 검사에 대한 데이터는 더 적습니다.28,29
우리는 동부 시칠리아의 BC 환자에서 생식선 BRCA1/2 스크리닝의 결과를 설명하고 BRCA1 또는 BRCA2 돌연변이의 존재와 이들 종양의 주요 임상병리학적 특징을 더 연관시킵니다.
2017년 1월부터 2021년 3월까지 총 455명의 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암 또는 전립선암 환자가 BRCA/2 유전자 검사를 위해 당사 분자진단 실험실로 의뢰되었습니다. 이 연구는 헬싱키 선언에 따라 수행되었으며, 모든 참가자는 분자 분석.
BC의 조직학적 및 생물학적 특성(ER, PgR, HER2 상태, Ki-67 및 등급)은 공격적인 종양 요소만을 고려하여 코어 생검 또는 수술 샘플에서 평가되었습니다. 이러한 특성을 기반으로 BC는 내강 A(ER+ 및/또는 PgR+, HER2-, Ki-67<20%), 내강 B(ER+ 및/또는 PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), 내강 B-HER2+로 분류되었습니다. (ER 및/또는 PgR+, HER2+), HER2+(ER 및 PgR-, HER2+) 또는 삼중 음성(ER 및 PgR-, HER2-).
BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 상태를 평가하기 전에 종양 전문의, 유전학자 및 심리학자를 포함한 다학제 팀이 BRCA1 및/또는 BRCA1의 존재를 확인하기 위해 각 환자에 대해 종양 유전학 상담을 실시했습니다.또는 BRCA2 유전자에서 PV 위험이 높은 개인. 환자 선택은 이탈리아 의학 종양학회(AIOM) 지침 및 현지 시칠리아 권장 사항에 따라 수행되었습니다.30,31 이러한 기준에는 다음이 포함됩니다.(ii) BC를 가진 남성;(iii) BC와 OC를 가진 사람들;(iv) BC < 36세, TNBC < 60세 또는 양측 BC < 50세인 여성;(v) BC < 50년의 개인 병력 및 적어도 한 명의 직계 친척: (a) BC < 50년;(b) 모든 연령의 비점액성 및 비경계성 OC;(c) 양측 BC;(d) 수컷 BC;(e) 췌장암;(f) 전립선암;(vi) 서로 1차 친척인 친척(그녀가 1차 친척인 친척 포함)에 대해 2개 이상의 BC > 50년 개인 병력 및 BC, OC 또는 췌장암 가족력;(vii) OC 및 최소 1명의 직계 가족의 개인 병력: (a) BC <50년;(나) NOC;(c) 양측 BC;(d) 수컷 BC;(vii) 고급 장액성 OC가 있는 암컷.
각 환자로부터 20 mL의 말초 혈액 샘플을 채취하여 EDTA 튜브(BD Biosciences)에 수집했습니다. 제조업체의 지침에 따라 QIAsymphony DSP DNA Midi 키트 분리 키트(QIAGEN, Hilden, Italy)를 사용하여 0.7 mL 전혈 샘플에서 게놈 DNA를 분리하고 Qubit® 3.0 Fluorometer(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)를 통과시켜 정량화를 수행합니다.대상 농축 및 라이브러리 준비는 제조업체의 지침에 따라 자동화된 라이브러리 준비를 위해 Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 키트에 로드할 준비가 된 Oncomine™ BRCA Research Assay Chef에 의해 수행됩니다. 이 키트는 모든 BRCA1(NM_007300.3) 및 BRCA2(NM_000059.3) 유전자를 연구하는 데 사용할 수 있는 2개의 다중 PCR 프라이머 풀로 구성됩니다. 0 ng) 라이브러리 준비를 위해 바코드 플레이트에 추가하고 모든 시약과 소모품을 Ion Chef™ 기기에 로드했습니다. 그런 다음 자동 라이브러리 준비 및 바코드 샘플 라이브러리 풀링을 Ion Chef™ 기기에서 수행했습니다. 준비된 라이브러리의 수는 제조업체의 지침에 따라 Qubit® 3.0 Fluorometer(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)로 평가했습니다. 마지막으로 라이브러리는 Ion Chef™ 라이브러리 샘플 튜브(바코드 d 튜브) Ion Chef™ 기기에 로드했습니다. Ion 510 칩(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 Ion Torrent S5(Thermo Fisher Scientific) 기기(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 시퀀싱을 수행했습니다. 데이터 분석은 Amplicon Suite(SmartSeq srl) 및 Ion Reporter 소프트웨어로 수행했습니다.
모든 변종 명명법은 온라인(HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen)에서 제공되는 Human Genome Variation Consortium의 현재 지침을 따랐습니다. BRCA1/2 변이체의 임상적 중요성은 International Consortium ENIGMA(Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/)의 분류를 사용하고 ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinV와 같은 다양한 데이터베이스를 참조하여 정의했습니다. ar, IARC_LOVD 및 UMD. 분류에는 양성(범주 I), 가능성이 있는 양성(범주 II), 불확실한 의미의 변형(VUS, 범주 III), 병원성 가능성(범주 IV) 및 병원성(범주 V)의 5가지 위험 범주가 포함됩니다. VarSome은 또한 30개의 데이터베이스에 액세스할 수 있는 유용한 도구인 단백질 구조 및 기능에 대한 돌연변이의 영향을 분석했습니다.32
각 VUS에 잠재적인 임상적 중요성을 할당하기 위해 다음과 같은 전산 단백질 예측 알고리즘이 사용되었습니다. 클래스 1과 2로 분류된 것은 야생형으로 간주되었습니다.
Sanger 시퀀싱으로 각 병원성 변이체의 존재를 확인하였다. 간단히 말해서, BRCA1 및 BRCA2 유전자 참조 서열(각각 NG_005905.2, NM_007294.3 및 NG_012772.3, NM_000059.3)을 사용하여 검출된 각 변이체에 대한 특정 프라이머 쌍을 설계하였다. 따라서 표적 PCR을 수행한 후 Sanger 시퀀싱을 수행하였다.
BRCA1/2 유전자에 대해 음성으로 테스트된 환자는 대규모 게놈 재배열(LGR)의 존재를 평가하기 위해 제조업체의 지침에 따라 MLPA(Multiplex ligation-dependent probe amplification)로 테스트되었습니다. 간단히 말해서, DNA 샘플은 변성되고 최대 60개의 BRCA1 및 BRCA2 유전자 특이적 프로브가 사용되며 각각 약 60뉴클레오티드 길이의 특정 DNA 서열을 검출합니다. 그런 다음 고유한 세트의 PCR 앰플리콘으로 구성된 프로브 증폭 제품을 분석했습니다. 적절한 배치별 Cofalyser 테이블(www.mrcholland.com)과 함께 모세관 전기영동 및 Cofalyser.Net 소프트웨어에 의해.
선별된 임상병리학적 변수(조직학적 등급 및 Ki-67% 증식 지수)는 BRCA1/2 PV의 존재와 연관되었으며, 이는 p-값 < 0.05를 유의하다고 가정하는 Fisher's exact test를 사용하여 Prism 소프트웨어 v. 8.4를 사용하여 계산되었습니다.
2017년 1월부터 2021년 3월 사이에 455명의 환자가 생식계열 BRCA1/2 돌연변이에 대해 스크리닝되었습니다. 변이 테스트는 폴리클리니코 병원의 실험 종양학 및 혈액학 센터에서 수행되었습니다. 카타니아의 올리코 – 산 마르코” 전체, 389명의 환자 유방암, 37명의 난소암, 16명의 췌장암, 8명의 전립선암 및 5명의 흑색종이 있었다.암 유형 및 분석 결과에 따른 환자 분포는 그림 1과 같습니다.
그림 1은 연구의 개요를 보여주는 흐름도를 보여줍니다. 유방, 흑색종, 췌장, 전립선 또는 난소 종양이 있는 환자는 BRCA1 및 BRCA2 유전자의 돌연변이에 대해 테스트되었습니다.
약어: PV, 병원성 변종;VUS, 불확실한 의미의 변형;WT, 야생형 BRCA1/2 서열.
우리는 선택적으로 유방암 코호트에 대한 연구에 집중했습니다. 환자의 평균 연령은 49세(23-89세 범위)였으며 주로 여성이었습니다(n=376, 또는 97%).
이 피험자 중 64명(17%)이 BRCA1/2 돌연변이를 가지고 있었고 모두 여성이었습니다. 35명(9%)은 PV를, 29명(7.5%)은 VUS를 가졌습니다. 35개의 병원성 변이 중 17개(48.6%)는 BRCA1에서, 18개(51.4%)는 BRCA2에서 발생했으며, 5개의 VUS는 BRCA1(17.2%)에서, 24개(82.8%)는 BRCA에서 발생했습니다. 2(그림 1 및 2). LGR은 MLPA 분석에 존재하지 않았습니다.
그림 2. 389명의 유방암 환자에서 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 분석.(A) 389명의 유방암 환자에서 병원성 변이체(PV)(빨간색), 불확실한 의미 변이체(VUS)(주황색) 및 WT(파란색)의 분포;(B) 389명의 유방암 환자 35명(9%)이 BRCA1/2 병원성 변이체(PV)를 가지고 있었습니다. 그 중 17명(48.6%)은 BRCA1 PV 보인자(진한 빨간색)였고 18명(51.4%)은 BRCA2 보인자(연한 빨간색)였습니다.(C) 389명 중 29명(7.5%)이 VUS, 5명(17.2%) BRCA1 유전자(진한 주황색) 및 24명(82.8%) BRCA2 유전자(연한 주황색)를 보유했습니다.
약어: PV, 병원성 변종;VUS, 불확실한 의미의 변형;WT, 야생형 BRCA1/2 서열.
우리는 다음으로 BRCA1/2 PV 환자에서 BC 분자 아형의 유병률을 조사했습니다. 분포에는 내강 A 2명(5.7%), 내강 B 15명(42.9%), 내강 B-HER2+ 3명(8.6%), HER2+ 2명(5.7%) 및 TNBC 환자 13명(37.1%)이 포함되었습니다. 2명(11.8%)은 HER2+ 질환이 있었고 10명(58.8%)은 TNBC가 있었습니다. BRCA1 돌연변이가 없는 종양은 내강 A 또는 내강 B-HER2+였습니다(그림 3). BRCA2 양성 하위 그룹에서 10개(55.6%) 종양은 내강 B, 3개(16.7%)는 내강 B-HER2+, 3개(16.7%) TNBC 및 2개(1 1.1%)는 내강 A(그림 3)였습니다. 이 그룹에는 HER2+ 종양이 없었습니다. 따라서 BRCA1 돌연변이는 TNBC 환자에서 널리 퍼져 있는 반면, BRCA2 변경은 내강 B 개체에서 우세합니다.
그림 3 BRCA1 및 BRCA2에 병원성 변이가 있는 환자의 유방암 아형 유병률. 유방암 환자의 분자 아형 중 BRCA1-(진한 빨간색) 및 BRCA2-(연한 빨간색) PV의 분포를 보여주는 히스토그램. 각 상자에 보고된 숫자는 각 유방암 아형에 대한 BRCA1 및 BRCA2 PV 환자의 백분율을 나타냅니다.
약어: PV, 병원성 변종;HER2+, 인간 표피 성장 인자 수용체 2 양성;TNBC, 삼중 음성 유방암.
그 후, BRCA1 및 BRCA2 PV의 유형 및 유전자 위치를 평가했습니다. BRCA1 PV에서 7개의 단일 뉴클레오티드 변이(SNV), 6개의 결실, 3개의 중복 및 1개의 삽입을 관찰했습니다. 단 하나의 돌연변이(c.5522delG)만이 새로운 발견을 나타냅니다. 두 대상에서 검출된 가장 일반적인 BRCA1 PV는 c.5035_5039delCTAAT였습니다. 이 변경은 BRCA에서 5개의 뉴클레오티드(CTAAT)의 결실을 포함합니다. 1 엑손 15, 코돈 1679에서 티로신에 의한 아미노산 류신의 치환을 초래하고, 예측된 대체 정지 코돈을 갖는 번역 프레임이동으로 인해 조기 단백질 절단을 초래합니다. 다른 모든 변화는 단 한 가지 경우에서만 검출됩니다. 특히, 보고된 PV 중 하나는 스플라이스 부위 합의 영역(c.4357+1G>T)에 위치했습니다(표 1).
BRCA2 PV와 관련하여 6개의 삭제, 6개의 SNV 및 2개의 복제를 관찰했습니다. 발견된 변경 사항 중 새로운 것은 없습니다. 인구에서 3개의 돌연변이가 재발했으며, c.428dup 및 c.8487+1G>A가 3명의 대상에서 관찰되었으며, c.5851_5854delAGTT가 2개의 경우에서 검색되었습니다. 절단된 비기능성 단백질. c.8487+1G>A 돌연변이는 BRCA2 인트론 19(±1,2)의 인트론 영역에서 발생하며 스플라이싱 컨센서스 서열에 영향을 미쳐 스플라이싱이 변경되어 단백질이 비정상적이거나 부재합니다. CA2 유전자 및 예측된 대체 정지 코돈(p.S1951WfsTer)으로 번역 프레임 이동을 초래합니다. 특히, 이전에 보고된 바와 같이 c.631G>A 및 c.7008-2A>T 변경이 동일한 환자에서 모두 검출되었습니다.34 첫 번째 돌연변이는 BRCA2 엑손 7의 아데노신(A)을 구아닌(G) 함유 뉴클레오티드로 대체하여 코돈 21에서 발린을 이소류신으로 변화시키는 것입니다. 1, 이소류신 아미노산은 매우 유사한 특성을 가진 아미노산입니다. 이 변화는 정상적인 mRNA 스플라이싱에 영향을 미칩니다. 두 번째 변이는 인트론 영역에 위치하며 BRCA2를 암호화하는 유전자의 엑손 13 이전에 이중 A가 티민(T)으로 치환됩니다. c.7008-2A>T 변화는 서로 다른 길이의 다중 전사를 생성할 수 있습니다. 또한 BRCA2 PV 그룹에서 18개 변화 중 4개(22.2%)가 인트론성이었습니다. .
그런 다음 기능적 도메인과 단백질 결합 영역에서 BRCA1/2 유해 돌연변이를 매핑했습니다(그림 4). BRCA1 유전자에서 PV의 50%는 유방암 클러스터 영역(BCCR)에 위치했으며 돌연변이의 22%는 난소암 클러스터 영역(OCCR)에 위치했습니다(그림 4A). BRCA2 PV에서 변이체의 35.7%는 BCCR 영역에 위치하고 돌연변이의 42.8%는 다음으로 BRCA1 및 BRCA2 단백질 도메인 내에서 PV의 위치를 ​​평가했습니다. BRCA1 단백질의 경우 루프 및 코일 도메인에서 3개의 PV와 BRCT 도메인에서 2개의 돌연변이를 발견했습니다(그림 4A). BRCA2 단백질의 경우 4개의 PV가 BRC 반복 도메인에 매핑되었으며 올리고/올리고당 결합에서 3개의 인트론 및 3개의 엑손 변화가 검출되었습니다. (OB) 및 타워(T) 도메인(그림 4B).
그림 4 BRCA1 및 BRCA2 단백질의 도식적 표현 및 병원성 변이체의 국소화. 이 그림은 유방암 환자에서 BRCA1(A) 및 BRCA2(B) 병원성 변이체의 분포를 보여줍니다. Exonic 돌연변이는 파란색으로 표시되고 인트론 변이체는 주황색으로 표시됩니다. 막대 높이는 사례 수를 나타냅니다. BRCA1 및 BRCA2 단백질 및 해당 기능 도메인이 보고됩니다. LS), 코일드-코일 도메인, SQ/TQ 클러스터 도메인(SCD) 및 BRCA1 C-말단 도메인(BRCT).(B) BRCA2 단백질은 8개의 BRC 반복, 나선형 도메인(헬리컬), 3개의 올리고뉴클레오티드/올리고당 결합(OB) 접힘, 타워 도메인(T) 및 C 측의 NLS를 포함합니다. 유방암 클러스터 영역(BCCR)이라고 하는 영역 및 난소암 클러스터 영역(OCCR)이 하단에 표시됩니다. *정지 코돈을 결정하는 돌연변이를 나타냅니다.
그런 다음 BRCA1/2 PV의 존재와 관련이 있을 수 있는 BC 임상병리학적 특징을 조사했습니다. 181명의 BRCA1/2 음성 환자(비보인자)와 모든 보인자(n = 35)에 대한 완전한 임상 기록이 제공되었습니다. 종양 증식률과 등급 사이에는 상관관계가 있었습니다.
우리는 코호트의 중앙값(25%, 범위 <10-90%)을 기준으로 Ki-67의 분포를 계산했습니다. Ki-67이 25% 미만인 피험자는 "낮은 Ki-67"로 정의된 반면 값이 25% 이상인 개인은 "높은 Ki-67"으로 간주되었습니다. 유의한 Ki-67 차이(p<0.01)가 비-캐리어와 BRCA1 PV 캐리어 간에 발견되었습니다(그림 5A).
그림 5 BRCA1 및 BRCA2 PV가 있거나 없는 유방암 여성의 등급 분포와 Ki-67의 상관관계.(A) 181명의 비보유 BC 환자 대 BRCA1(18) 또는 BRCA2(17) PV 환자의 중간 Ki-67 값을 보여주는 박스플롯. 0.5 미만의 P 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.(B) BC 암 환자를 조직학적 등급 그룹(G2 및 G3)으로 할당하는 것을 나타내는 히스토그램 BRCA1 및 BRCA2 돌연변이 상태(WT 피험자, BRCA1 및 BRCA2 PV 캐리어).
마찬가지로, 우리는 종양 등급이 BRCA1/2 PV의 존재와 상관관계가 있는지 조사했습니다. G1 BC가 우리 모집단에 없었기 때문에 환자를 두 그룹(G2 또는 G3)으로 나누었습니다. Ki-67 결과와 일치하게 분석 결과 종양 등급과 BRCA1 돌연변이 사이에 통계적으로 유의한 상관관계가 나타났으며 BRCA1 보인자에서 비보인자에 비해 G3 종양의 비율이 더 높았습니다(p<0.005)(그림 5B).
DNA 시퀀싱 기술의 발전으로 암 가족력이 있는 환자에게 중요한 영향을 미치는 BRCA1/2 유전자 검사의 전례 없는 발전이 가능해졌습니다. 현재까지 약 20,000개의 BRCA1/2 변이가 미국 의학 유전학 협회(American Society of Medical Genetics)35 및 ENIGMA 시스템에 따라 식별 및 분류되었습니다.35,36 BRCA1/2 돌연변이 스펙트럼이 지역에 따라 크게 다르다는 것은 잘 알려져 있습니다.37 8%에서 37%로 국가 내 변동성이 크다.38,39 인구가 거의 500만 명에 달하는 시칠리아는 주민 수 기준으로 이탈리아에서 다섯 번째로 큰 지역이다. 시칠리아 서부의 BRCA1/2 분포에 대한 데이터가 있지만 섬의 동부에는 광범위한 증거가 없다.
우리의 연구는 동부 시칠리아의 BC 환자에서 BRCA1/2 PV 발생률에 대한 첫 번째 보고서 중 하나입니다.28 우리는 코호트에서 가장 흔한 질병인 BC에 분석을 집중했습니다.
389명의 BC 환자를 검사했을 때, 9%가 BRCA1/2 PV를 가지고 있었고, BRCA1과 BRCA2 사이에 고르게 분포되었습니다. 이러한 결과는 이전에 이탈리아 인구에서 보고된 것과 일치합니다.28 흥미롭게도, 우리 코호트의 3%(13/389)가 남성이었습니다. 이 비율은 남성 유방암(모든 BC의 1%)에서 예상되는 것보다 높으며,40 BRCA1/2 돌연변이 위험을 기반으로 모집단을 선택한 것을 반영합니다. /2 PV이므로 PALB2, RAD51C 및 D와 같은 덜 일반적인 돌연변이의 존재를 배제하기 위한 추가 분자 분석의 후보였습니다. BRCA2 VUS가 분명한 대상의 7%에서 불확실한 의미의 변이가 검색되었습니다. 심지어 이 결과는 기존 증거와 일치합니다.28,41,42
BRCA1/2 돌연변이 여성에서 BC 분자 아형의 분포를 분석했을 때, 우리는 TNBC와 BRCA1 PV(58.8%), 내강 B BC와 BRCA2 PV(55.6%) 사이의 알려진 연관성을 확인했습니다.16,43 BRCA1 및 BRCA2 PV 보인자의 내강 A 및 HER2+ 종양은 기존 문헌 데이터와 일치합니다.16,43
그런 다음 BRCA1/2 PV의 유형과 위치에 중점을 둡니다. 코호트에서 가장 일반적인 BRCA1 PV는 c.5035_5039delCTAAT였습니다. Incorvaia et al.시칠리아 코호트 에서이 변형을 설명하지 않았으며, 다른 저자들은 그것을 생식선 BRCA1 PV.34로보고했습니다. UPC)는 동부 및 중부 유럽 (폴란드, 체코), 슬로베니아, 오스트리아, 헝가리어, 벨로라이아, 독일), 44,45의 Ashkenazi 유대인에서 일반적으로 발견되었으며, 미국과 아르헨티나에서는 최근 BC를 가진 이탈리아의 이탈리아 환자에서“반복적 인 생식선 변종”으로 정의되었습니다. 그리고 메시나.카타니아의 일부 가족에서 c.3253dupA 변이를 발견했습니다.28 가장 대표적인 BRCA2 PV는 c.428dup, c.5851_5854delAGTT 및 intronic 변이 c.8487+1G>A이며, c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV는 북서부 Sici의 가정에서 관찰되었습니다. ly, 주로 Trapani 및 Palermo 지역에서 발생하는 반면 c.5851_5854delAGTT PV는 시칠리아 북서부의 가정에서 관찰되었습니다.이전에 콜롬비아에서 c.5851_5854delAGTT 변경을 설명했습니다.37 또 다른 BRCA2 PV인 c.631+1G>A는 시칠리아(Agrigento, Siracusa 및 Ragusa)의 BC 및 OC 환자에서 발견되었습니다.28 이러한 BRCA2 uble 돌연변이는 실제로 이탈리아 지역에서 자주 관찰되며 조기 정지 코돈을 도입하여 메신저 RNA 스플라이싱에 영향을 미치고 BRCA2 단백질의 실패를 유발하는 것으로 밝혀졌습니다.47,48
우리는 또한 단백질 도메인 및 유전자의 추정 OCCR 및 BCCR 영역에서 BRCA1 및 BRCA2 PV를 매핑했습니다. 이 영역은 Rebbeck et al.49 그러나, 생식계열 변이의 위치와 유방암 또는 난소암 위험 간의 연관성에 관한 증거는 여전히 논란의 여지가 있습니다.28,50-52 우리 모집단에서 BRCA1 PV는 주로 BCCR 영역에 위치한 반면 BRCA2 PV는 주로 OCCR 영역에 위치했습니다. 그러나 추정되는 OCCR 및 BCCR 영역과 BC 기능 사이의 연관성을 찾을 수 없었습니다. CA1/2 돌연변이. 단백질 도메인 관점에서 BRCA1 PV는 전체 단백질을 따라 분포하며 BRCA2 변경은 BRC 반복 도메인에서 우선적으로 발견됩니다.
마지막으로, 우리는 BC 임상병리학적 특징을 BRCA1/2 PV와 연관시켰습니다. 포함된 환자 수가 제한되어 있기 때문에 Ki-67과 종양 등급 사이의 유의한 상관관계만 발견했습니다. Ki-67의 평가와 해석은 다소 논란의 여지가 있지만 높은 증식률이 질병 재발 위험 증가 및 생존율 감소와 관련이 있다는 것은 확실합니다. 지금까지 "높은" Ki-67과 "낮은" Ki-67을 구분하는 컷오프는 20%입니다. 그러나 이 임계값은 BRCA에는 적용되지 않습니다. 중앙값 Ki-67 값이 25%인 1/2 돌연변이 환자 모집단. Ki-67 비율이 높은 이러한 추세는 내강 A 종양이 거의 없는 내강 B 및 TNBC 코호트의 유병률로 설명할 수 있습니다. 높은 Ki-67과 등급 및 BRCA1 PV의 존재 사이에 있습니다. 실제로 BRCA1 관련 종양은 TNBC의 전형이며 보다 공격적인 특징을 나타냅니다.16,17
결론적으로, 이 연구는 동부 시칠리아의 BC 코호트에서 BRCA1/2의 돌연변이 상태에 대한 보고서를 제공합니다. 전반적으로 우리의 발견은 BC의 돌연변이 유병률 및 임상병리학적 특징 측면에서 기존의 증거와 일치합니다. 멀티게놈 확장 돌연변이 분석을 사용하는 것과 같이 BRCA1/2 돌연변이 BC 환자의 더 많은 집단에 대한 더 많은 연구는 BRCA1/2보다 뚜렷하고 덜 빈번한 PV의 존재를 평가하는 데 보증됩니다. 유전자 변이로 인해 암 위험이 증가하는 피험자의 수가 증가함에 따라 적절한 관리가 필요합니다.
우리는 환자들이 연구 목적으로 종양 샘플을 익명으로 공개하는 것에 대한 정보에 입각한 동의서에 서명했음을 확인했습니다. 모든 환자는 헬싱키 선언에 따라 서면 정보에 입각한 동의서에 서명했습니다. AOU Policlinico "G.Rodolico – S.Marco"의 정책에 따라 BRCA1/2 분석이 임상 실습에 따라 수행되었고 모든 환자가 서면 정보에 입각한 동의를 했기 때문에 본 연구는 윤리적 검토에서 면제되었습니다. 환자는 또한 연구 목적을 위한 데이터 사용에 동의합니다.
윤리위원회의 요청에 따라 유방암 환자 치료에 도움을 주신 Paolo Vigneri 교수에게 감사드립니다.
Federica Martorana는 Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer의 사례를 보고합니다.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN은 전 세계 185개국에서 36종의 암 발병률과 사망률을 추정합니다.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660