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다공성 실리카 입자는 매크로다공성 입자를 얻기 위해 약간의 변형을 가한 졸-겔 방법으로 제조되었습니다. 이러한 입자는 N-페닐말레이미드-메틸비닐이소시아네이트(PMI) 및 스티렌과의 가역적 첨가 단편화 사슬 전달(RAFT) 중합에 의해 유도체화되어 폴리스티렌(PMP) 고정상의 N-페닐말레이미드 층간삽입을 제조했습니다. 좁은 구경의 스테인리스 스틸 컬럼(100 x 1.8 mm id)을 슬러리 패킹으로 패킹했습니다. 평가됨 5가지 펩타이드(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) 크로마토그래피 성능)으로 구성된 펩타이드 혼합물의 PMP 컬럼 분리 및 인간 혈청 알부민(HAS)의 트립신 소화. 최적의 용출 조건에서 펩타이드 혼합물의 이론적 플레이트 수는 280,000 플레이트/m²로 높습니다. 상용 Ascentis Express RP-Amide 컬럼으로 개발한 컬럼은 PMP 컬럼이 상용 컬럼보다 분리 효율과 분해능 면에서 우수한 분리 성능을 보이는 것을 관찰하였다.
최근 몇 년 동안 바이오 제약 산업은 시장 점유율이 크게 증가하면서 확장되는 글로벌 시장이 되었습니다. 바이오 제약 산업1,2,3의 폭발적인 성장으로 펩티드 및 단백질 분석이 매우 요구되고 있습니다. 펩티드 합성 과정에서 표적 펩티드 외에도 여러 불순물이 생성되기 때문에 원하는 순도의 펩티드를 얻기 위해서는 크로마토그래피 정제가 필요합니다. 체액, 조직 및 세포의 단백질 분석 및 특성화는 단일 샘플에서 잠재적으로 검출 가능한 많은 종으로 인해 매우 어려운 작업입니다. 질량 분석법은 펩타이드 및 단백질 시퀀싱에 효과적인 도구이지만 이러한 샘플을 한 번에 질량 분석기에 주입하면 분리가 이상적이지 않습니다. 이 문제는 MS 분석 전에 액체 크로마토그래피(LC) 분리를 구현하여 완화할 수 있으며, 이는 주어진 시간에 질량 분석기에 들어가는 분석 물질의 수를 줄입니다4,5,6. (LC)는 지난 10년 동안 크게 발전했으며 proteomic analysis7,8,9,10에서 널리 사용되는 기술이 되었습니다.
역상 액체 크로마토그래피(RP-LC)는 고정상으로 옥타데실 변형 실리카(ODS)를 사용하는 펩타이드 혼합물의 정제 및 분리에 널리 사용됩니다11,12,13. 그러나 RP 고정상은 복잡한 구조와 양친매성 특성으로 인해 펩타이드와 단백질의 만족스러운 분리를 제공하지 못합니다 14,15. 따라서 극성 및 비극성 부분이 있는 펩타이드 및 단백질을 분석하고 이러한 분석을 유지하기 위해 특별히 설계된 고정상이 필요합니다. tes16.다중 상호 작용을 제공하는 혼합 모드 크로마토그래피는 펩타이드, 단백질 및 기타 복잡한 혼합물의 분리를 위한 RP-LC의 대안이 될 수 있습니다.여러 가지 혼합 모드 고정상이 준비되었으며 이러한 상으로 채워진 컬럼은 펩타이드 및 단백질 분리에 사용되었습니다17,18,19,20,21.혼합 모드 고정상(WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC)은 펩타이드 및 극성 그룹과 비극성 그룹 모두의 존재로 인한 단백질 분리22,23,24,25,26,27,28 유사하게, 공유 결합된 극성 그룹이 있는 극성 인터칼레이팅 고정상은 분리가 분석물과 고정상 사이의 상호작용에 의존하기 때문에 극성 및 비극성 분석물에 대해 우수한 분리력과 고유한 선택성을 나타냅니다.다중 모드 상호 작용 29, 30, 31, 32. 최근 Zhang et al.30은 도데실 말단 폴리아민 고정상을 준비하고 탄화수소, 항우울제, 플라보노이드, 뉴클레오사이드, 에스트로겐 및 기타 여러 분석물을 성공적으로 분리했습니다. 극성 인터칼레이터는 극성 및 비극성 그룹을 모두 가지고 있으므로 소수성 부분과 친수성 부분을 모두 가진 펩티드와 단백질을 분리하는 데 사용할 수 있습니다. 극성 내장 컬럼(예: 아미드 내장 C18 컬럼)은 Ascentis라는 상표명으로 시판 중입니다. Express RP-Amide 컬럼이지만 이 컬럼은 아민 33 분석에만 사용됩니다.
현재 연구에서는 HSA의 펩타이드 및 트립신 소화물의 분리를 위해 극성 내장 고정상(N-페닐말레이미드 내장 폴리스티렌)을 준비하고 평가했습니다. 고정상은 다음 전략을 사용하여 준비했습니다. 다공성 실리카 입자는 준비 프로토콜을 일부 수정한 이전 간행물에 제공된 절차에 따라 준비했습니다. 요소, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), TMOS, 물 아세트산의 비율을 조정하여 큰 기공 크기의 실리카 입자를 준비했습니다. 및 페닐말레이미드-메틸 비닐 이소시아네이트를 합성하고 실리카 입자를 유도체화하여 극성 내장 고정상을 제조하는 데 사용했습니다. 생성된 고정상을 최적화된 패킹 방식을 사용하여 스테인리스 스틸 컬럼(100 × 1.8mm id)에 패킹했습니다. 컬럼 패킹은 기계적 진동을 통해 컬럼 내에 균질한 베드가 형성되도록 합니다. 5개의 펩타이드로 구성된 펩타이드 혼합물의 패킹 컬럼 분리를 평가합니다.(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 및 인간 혈청 알부민(HAS)의 트립신 분해물. HSA의 펩타이드 혼합물과 트립신 분해물은 우수한 분해능과 효율로 분리되는 것이 관찰되었습니다. PMP 컬럼의 분리 성능은 Ascentis Express RP-Amide 컬럼의 분리 성능과 비교되었습니다. Ascentis Express RP-Amide 컬럼보다 효율적이었던 PMP 컬럼에서 잘 분리되고 효율적이었습니다.
PEG(폴리에틸렌 글리콜), 요소, 아세트산, 트리메톡시 오르토실리케이트(TMOS), 트리메틸 클로로실란(TMCS), 트립신, 인간 혈청 알부민(HSA), 염화암모늄, 요소, 헥산 메틸디실라잔(HMDS), 메타크릴로일 클로라이드(MC), 스티렌, 4-하이드록시-TEMPO, 벤조일 퍼옥사이드(BPO), HPLC 등급 아세토니트릴(ACN), 메탄올, 2-프로판올 및 아세톤은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다.
요소(8g), 폴리에틸렌 글리콜(8g) 및 0.01N 아세트산 8mL의 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 빙냉 조건에서 TMOS 24mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 스테인레스 오토클레이브에서 40℃에서 6시간 동안, 이어서 120℃에서 8시간 동안 가열하였다. 물을 따라내고 잔류물을 70℃에서 12시간 동안 건조시켰다. 덩어리를 오븐에서 매끄럽게 분쇄하고 550°C에서 12시간 동안 하소했습니다. 3개의 배치를 준비하고 입자 크기, 기공 크기 및 표면적의 재현성을 조사하기 위해 특성화했습니다.
사전 합성된 리간드 페닐말레이미드-메틸비닐이소시아네이트(PCMP)로 실리카 입자의 표면 개질에 이어 스티렌으로 방사상 중합함으로써 극성 그룹 함유 화합물이 제조되었습니다.골재 및 폴리스티렌 사슬을 위한 고정상입니다. 준비 과정은 아래에 설명되어 있습니다.
N-페닐말레이미드(200mg)와 메틸비닐이소시아네이트(100mg)를 건조 톨루엔에 녹이고 0.1mL의 2,2'-아조이소부티로니트릴(AIBN)을 반응 플라스크에 넣어 페닐말레이미드-메틸비닐이소시아네이트 공중합체(PMCP)를 제조했다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 가열한 후 여과하고 오븐에서 40℃에서 3시간 동안 건조시켰다.
건조된 실리카 입자(2g)를 건조된 톨루엔(100mL)에 분산시키고 500mL 둥근 바닥 플라스크에서 10분 동안 교반 및 초음파 처리했습니다. PMCP(10mg)를 톨루엔에 용해하고 적하 깔대기를 통해 반응 플라스크에 적가했습니다. 혼합물을 100°C에서 8시간 동안 환류하고 여과하고 아세톤으로 세척한 다음 60°C에서 3시간 동안 건조했습니다. 00 g)을 톨루엔(200 ml)에 용해시키고 촉매로서 디부틸주석 디라우레이트 100 μL의 존재 하에 4-히드록시-TEMPO(2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 8시간 동안 교반하고, 여과하고 50℃에서 3시간 동안 건조시켰다.
스티렌(1mL), 벤조일 퍼옥사이드 BPO(0.5mL) 및 TEMPO-PMCP 부착 실리카 입자(1.5g)를 톨루엔에 분산시키고 질소로 퍼징하였다. 스티렌의 중합은 100℃에서 12시간 동안 수행하였다. 생성된 생성물을 메탄올로 세척하고 60℃에서 밤새 건조시켰다. 전체 반응식은 도 1에 나타내었다.
샘플을 393K에서 1시간 동안 탈기하여 10-3 Torr 미만의 잔류 압력을 얻었습니다. P/P0 = 0.99의 상대 압력에서 흡착된 N2의 양을 사용하여 총 기공 부피를 결정했습니다. 베어 및 리간드 결합 실리카 입자의 형태를 주사 전자 현미경(Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan)으로 검사했습니다. 접착성 탄소 테이프를 사용하는 알루미늄 컬럼. Q150T 스퍼터 코터를 사용하여 샘플에 금을 도금하고 5nm Au 층을 샘플에 증착했습니다. 이는 저전압을 사용하여 공정 효율성을 향상시키고 미세 입자, 콜드 스퍼터링을 제공합니다. 원소 분석에는 Thermo Electron(Waltham, MA, USA) Flash EA1112 원소 분석기를 사용했습니다. Malvern(영국 Worcestershire) Mastersizer 2000 입자 크기 분석기를 사용하여 입자 크기를 얻었습니다. Naked silica 입자와 ligand-bonded silica 입자(각각 5 mg)를 5 mL의 이소프로판올에 분산시키고 10분 동안 초음파 처리하고 5분 동안 vortex 처리한 후 Mastersizer의 광학 벤치에 배치했습니다. 열중량 분석은 30~800 °C의 온도 범위에서 분당 5 °C의 속도로 수행했습니다.
치수(100 × 1.8mm id)의 글라스 라이닝 스테인리스 스틸 내경이 좁은 컬럼은 슬러리 패킹 방법을 사용하여 Ref.31. 1μm 프릿을 포함하는 출구 피팅이 있는 스테인리스 스틸 컬럼(유리 라이닝, 100 × 1.8mm id)을 슬러리 패커(Alltech Deerfield, IL, USA)에 연결했습니다. 고정상 150mg을 메탄올 1.2mL에 현탁하여 고정상 슬러리를 준비하고 저장 컬럼으로 보냅니다. 슬러리 용매 및 추진 용매로 메탄올을 사용했습니다. 컬럼을 채웁니다. 100MP에서 10분, 80MP에서 15분, 60MP에서 30분간 순차적으로 압력을 가합니다. 패킹하는 동안 컬럼의 균일한 패킹을 위해 2개의 GC 컬럼 쉐이커(Alltech, Deerfield, IL, USA)로 기계적 진동을 가했습니다. 컬럼 내부의 손상을 방지하기 위해 슬러리 패커를 닫고 천천히 압력을 해제합니다. 성능.
LC 펌프(10AD Shimadzu, 일본), 50nL 주입 루프가 있는 인젝터(Valco(USA) C14 W.05), 멤브레인 탈기 장치(Shimadzu DGU-14A), UV-VIS 모세관 창을 구성했습니다. id 365 및 환원 유니온 모세관(50μm)을 환원 유니온의 1/16" 출구에 설치했습니다. 데이터 수집 및 크로마토그래피 처리는 Multichro 2000 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다. 254nm 분석물의 모니터링은 UV 흡광도에 대해 테스트되었습니다. 크로마토그래피 데이터는 OriginPro8(Northampton, MA)로 분석했습니다.
인간 혈청의 알부민, 동결건조 분말, ≥ 96%(아가로즈 겔 전기영동) 3mg, 트립신(1.5mg), 4.0M 우레아(1mL) 및 0.2M 중탄산암모늄(1mL)과 혼합. 용액을 10분 동안 교반하고 37°C의 수조에서 6시간 동안 유지한 다음, 1mL의 0.1% TFA로 켄칭합니다. 용액을 여과하고 4 °C 이하에서 보관하십시오.
펩티드 혼합물 및 HSA 트립신 소화물의 분리를 PMP 컬럼에서 개별적으로 평가했습니다. PMP 컬럼에 의해 HSA의 펩티드 혼합물 및 트립신 소화물의 분리를 확인하고 그 결과를 Ascentis Express RP-Amide 컬럼과 비교합니다. 이론적 플레이트 번호는 다음과 같이 계산됩니다.
베어 실리카 입자 및 리간드 결합된 실리카 입자의 SEM 이미지가 도 1에 도시되어 있다.2 .실리카 입자(A, B)의 SEM 이미지는 이전 연구와 달리 이 입자가 입자가 길거나 불규칙한 대칭을 갖는 구형임을 보여줍니다. 리간드 결합된 실리카 입자(C, D)의 표면은 실리카 입자의 표면에 폴리스티렌 사슬이 코팅되어 있기 때문에 실리카 입자의 표면보다 부드럽습니다.
베어 실리카 입자(A, B) 및 리간드 결합된 실리카 입자(C, D)의 주사 전자 현미경 이미지.
베어 실리카 입자와 리간드 결합된 실리카 입자의 입자 크기 분포는 그림 3(A)에 나와 있습니다. 부피 기반 입자 크기 분포 곡선은 화학적 변형 후 실리카 입자의 크기가 증가했음을 보여줍니다(그림 3A). 현재 연구와 이전 연구의 실리카 입자의 입자 크기 분포 데이터는 표 1(A)에 비교되어 있습니다. ) 값 3.05μm(폴리스티렌 결합 실리카 입자)34. 이 배치는 반응 혼합물에서 PEG, 우레아, TMOS 및 아세트산의 다양한 비율로 인해 이전 연구에 비해 입자 크기 분포가 더 좁았습니다. PMP 상의 입자 크기는 이전에 연구한 폴리스티렌 결합 실리카 입자 상의 입자 크기보다 약간 큽니다. MP상 층 두께는 1.38㎛였다.
베어 실리카 입자 및 리간드 결합 실리카 입자의 입자 크기 분포(A) 및 기공 크기 분포(B).
현재 연구의 실리카 입자의 기공 크기, 기공 부피 및 표면적은 표 1(B)에 나와 있습니다. 베어 실리카 입자 및 리간드 결합 실리카 입자의 PSD 프로필은 그림 3(B)에 나와 있습니다. 결과는 이전 연구와 비슷합니다. 베어 및 리간드 결합 실리카 입자의 기공 크기는 각각 310 및 241이며, 이는 표 1(B)에 표시된 대로 화학적 변형 후 기공 크기가 69 감소함을 나타냅니다. 곡선의 변화는 도 3(B)에 도시되어 있다. 유사하게, 실리카 입자의 기공 부피는 화학적 변형 후 0.67에서 0.58 cm3/g로 감소하였다. 현재 연구된 실리카 입자의 비표면적은 116 m2/g이며, 이는 이전 연구(124 m2/g)와 유사하다. 표 1(B)에 나타난 바와 같이, 실리카 입자의 표면적(m2/g)도 116 m2에서 감소하였다 /g ~ 105m2/g(화학적 수정 후).
고정상의 원소 분석 결과를 표 2에 나타내었다. 현재 고정상의 탄소 적재량은 6.35%로 이전 연구의 탄소 적재량(폴리스티렌 결합 실리카 입자, 각각 7.93%35 및 10.21%)보다 낮다. 42. 현재 고정상의 탄소 적재량은 낮다. cyanate (PCMP)와 4-hydroxy-TEMPO를 사용하였다. 현재 정지상의 질소 중량%는 이전 연구에서 각각 질소의 0.1735와 0.85 중량%에 비해 2.21%이다. 이는 페닐말레이미드로 인해 현재 정지상의 질소 중량%가 더 높다는 것을 의미한다. 최종 생성물(6)은 표 2와 같이 6.35%였다. 중량 손실은 PMP 고정상으로 확인하였고, TGA 곡선은 도 4에 나타내었다. TGA 곡선은 8.6%의 중량 손실을 나타내며, 이는 리간드가 C뿐만 아니라 N, O 및 H를 포함하고 있기 때문에 탄소 로딩(6.35%)과 잘 일치한다.
페닐말레이미드-메틸비닐이소시아네이트 리간드는 극성 페닐말레이미드 그룹과 비닐이소시아네이트 그룹을 가지고 있기 때문에 실리카 입자의 표면 개질을 위해 선택되었습니다. 비닐 이소시아네이트 그룹은 리빙 라디칼 중합에 의해 스티렌과 추가로 반응할 수 있습니다. 두 번째 이유는 페닐말레이미드 부분이 정상 pH에서 가상 전하를 가지지 않기 때문에 분석물질과 적당한 상호작용을 하고 분석물질과 고정상 사이에 강한 정전기적 상호작용이 없는 그룹을 삽입하기 위함입니다. 고정상의 극성은 다음과 같을 수 있습니다. 최적의 스티렌 양과 자유 라디칼 중합의 반응 시간에 의해 제어됩니다. 반응의 마지막 단계(자유 라디칼 중합)는 중요하며 고정상의 극성을 변경할 수 있습니다. 이러한 고정상의 탄소 적재량을 확인하기 위해 원소 분석을 수행했습니다. 토그래픽 성능(선택성, 분해능, N 값 등). 이러한 실험을 기반으로 PMP 고정상을 준비하기 위해 최적화된 제형을 선택하여 제어된 극성과 우수한 분석물 보유를 보장했습니다.
5가지 펩타이드 혼합물(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, 류신 엔케팔린)도 이동상을 사용하는 PMP 컬럼을 사용하여 평가했습니다.60/40(v/v) 아세토니트릴/물(0.1% TFA), 유속 80μL/분. 최적의 용출 조건에서 컬럼(100 × 1.8mm id)당 이론적 단수(N)는 20,000 ± 100(200,000 플레이트/m²)입니다. 표 3은 3개의 PMP 컬럼에 대한 N 값을 나타내며 크로마토그램은 다음과 같습니다. 도 5A. 높은 유속(700 μL/min)에서 PMP 컬럼에 대한 빠른 분석, 5개의 펩타이드가 1분 내에 용출되었고, N 값은 컬럼당 13,500 ± 330(100 × 1.8 mm id), 135,000 plate/m에 해당(도 5B). 3개의 동일한 크기 컬럼(100 × 1.8 mm id)으로 패킹됨 PMP 컬럼의 재현성 데이터는 표 4에 나와 있습니다. PMP 컬럼의 재현성은 표 3과 같이 매우 낮은 %RSD 값과 밀접한 관련이 있습니다.
PMP 컬럼(B) 및 Ascentis Express RP-Amide 컬럼(A)에서 펩타이드 혼합물의 분리;이동상 60/40 ACN/H2O(TFA 0.1%), PMP 컬럼 치수(100 × 1.8mm id);분석 화합물의 용출 순서: 1(Gly-Tyr), 2(Gly-Leu-Tyr), 3(Gly-Gly-Tyr-Arg), 4(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) 및 5(류신)산 엔케팔린).
PMP 컬럼(100 × 1.8mm id)은 고성능 액체 크로마토그래피에서 인간 혈청 알부민의 트립신 분해물의 분리에 대해 평가되었습니다. 그림 6의 크로마토그램은 시료가 잘 분리되고 분해능이 매우 우수함을 보여줍니다. 17개의 펩티드에 해당하는 17개의 피크로 분할되었습니다. HSA 다이제스트에서 각 피크의 분리 효율을 계산하고 값을 표 5에 제공합니다.
HSA(100 x 1.8mm id)의 트립신 분해물을 PMP 컬럼에서 분리했습니다.유속(100µL/분), 이동상 60/40 아세토니트릴/물, 0.1% TFA.
여기서 L은 컬럼 길이, η는 이동상의 점도, ΔP는 컬럼 배압, u는 이동상의 선속도입니다. PMP 컬럼의 투과도는 2.5 × 10-14m2, 유속은 25μL/min, 60/40 v/v ACN/water를 사용했습니다. PMP 컬럼의 투과도(100 × 1.8mm id)는 이전 연구 Ref. 34. 표면 다공성 입자로 채워진 컬럼의 투과도는 1.3 μm 입자의 경우 1.7 × 10-15, 1.7 μm 입자의 경우 3.1 × 10-15, 2.6 μm 입자의 경우 5.2 × 10-15 및 2.5 × 10-14 m2입니다. m 코어-쉘 입자.
여기서 Wx는 클로로포름이 채워진 컬럼의 무게, Wy는 메탄올이 채워진 컬럼의 무게, ρ는 용매의 밀도입니다. 메탄올(ρ = 0.7866) 및 클로로포름(ρ = 1.484)의 밀도. 이전에 연구한 SILICA PARTICLES-C18 컬럼(100 × 1.8 mm id) 34 및 C18-Urea 컬럼 31의 총 다공성은 0 이는 요소 리간드의 존재가 고정상의 투과성을 감소시킨다는 것을 의미합니다. 한편, PMP 컬럼(100 × 1.8mm id)의 총 다공성은 0.60입니다. s, 폴리스티렌 유형의 정지상에서는 상대적으로 두꺼운 폴리머 층이 주변에 형성됩니다. 일반적인 실험에서 컬럼 다공성은 다음과 같이 계산됩니다.
그림 7A,B는 동일한 용리 조건(즉, 60/40 ACN/H2O 및 0.1% TFA)을 사용하는 PMP 컬럼(100 × 1.8mm id) 및 Ascentis Express RP-Amide 컬럼(100 × 1.8mm id)을 보여줍니다.) van Deemter 플롯의.선택된 펩타이드 혼합물(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin)은 20µL/두 컬럼에 대한 최소 유속은 800µL/min입니다. PMP 컬럼과 Ascentis Express RP-Amide 컬럼에 대한 최적 유속(80µL/min)에서 최소 HETP 값은 다음과 같습니다. HETP 값은 PMP 컬럼(100 × 1.8 mm id)의 분리 효율이 상용 Ascentis Express RP-Amide 컬럼(100 × 1.8 mm id)보다 훨씬 우수함을 나타냅니다. 그림 7(A)의 van Deemter 플롯은 흐름 증가에 따른 N 값의 감소가 이전 연구에 비해 유의미하지 않음을 보여줍니다. PMP 컬럼(1 00 × 1.8 mm id)는 Ascentis Express RP-Amide 컬럼과 비교하여 입자 모양, 크기 및 현재 작업에서 사용되는 복잡한 컬럼 패킹 절차의 개선을 기반으로 합니다34.
(A) 0.1% TFA가 있는 60/40 ACN/H2O에서 PMP 컬럼(100 × 1.8 mm id)을 사용하여 얻은 van Deemter 플롯(HETP 대 이동상 선속도).(B) 0.1% TFA가 있는 60/40 ACN/H2O에서 Ascentis Express RP-Amide 컬럼(100 × 1.8 mm id)을 사용하여 얻은 van Deemter 플롯(HETP 대 이동상 선속도) FA.
고성능 액체 크로마토그래피에서 인간 혈청 알부민(HAS)의 합성 펩타이드 혼합물 및 트립신 소화물의 분리를 위해 극성 내장된 폴리스티렌 고정상을 준비하고 평가했습니다. 펩타이드 혼합물에 대한 PMP 컬럼의 크로마토그래피 성능은 분리 효율과 분해능이 뛰어납니다. PMP 컬럼의 향상된 분리 성능은 실리카 입자의 입자 크기 및 기공 크기, 고정상의 제어된 합성 및 복잡한 컬럼 패킹과 같은 다양한 이유에 기인합니다. 높은 분리 효율 외에도 높은 유속에서 낮은 컬럼 배압 PMP 컬럼은 우수한 재현성을 나타내며 다양한 단백질의 펩타이드 혼합물 및 트립신 분해 분석에 사용할 수 있습니다. 우리는 이 컬럼을 액체 크로마토그래피에서 천연물, 약용 식물의 생리활성 화합물 및 곰팡이 추출물의 분리에 사용할 계획입니다. 앞으로 PMP 컬럼은 단백질 및 단일클론 항체의 분리에도 평가될 것입니다.
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