Spas dikim ji bo seredana Nature.com. Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin ji bo CSS-ê piştgiriyek sînordar heye. Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî moda lihevhatinê ya di Internet Explorer-ê de qut bikin).
Parçeyên silica yên poroz bi rêbaza sol-gelê bi hin guhertinan ve hatin amadekirin da ku pariyên makropor bidest bixin. Ev zêran bi veguheztina zincîra perçebûnê ya lêvegera paşverû (RAFT) bi polîmerîzasyona bi N-fenîlmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) û stirenê hatin derivatîzekirin da ku N-phenylvinylisocyanate (PMI) û stîren amade bikin. stûnên pola yên kêmtir (100 × 1,8 mm id) bi pakkirina slurry hatin pak kirin. Veqetandina stûna PMP ya tevliheviya peptîdê ya ku ji pênc peptîd pêk tê (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Gly-Ser-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arglin) û performansa serpêhatî ya mirovî. albumîn (HAS). Di bin şert û mercên şuştinê yên çêtirîn de, jimara plakaya teorîkî ya tevliheviya peptîdê bi qasî 280,000 lewheyên/m² ye. Dema ku performansa veqetandinê ya stûna pêşkeftî bi stûna bazirganî ya Ascentis Express RP-Amide re bidin ber hev, hate dîtin ku performansa veqetandinê ya stûna PMP ji hêla veqetandina stûna vesazkirinê ve di warê veqetandina stûna bazirganî de çêtir bû.
Di salên dawî de, pîşesaziya biyodermaceutîkî bi zêdebûnek berbiçav di para bazarê de bûye bazarek gerdûnî ya berfireh. Bi mezinbûna teqemenî ya pîşesaziya biyoderman1,2,3, analîzkirina peptîd û proteînan pir tê xwestin. Ji bilî peptîdê armanc, di dema senteza peptîdê de çend nepakî têne hilberandin, ji ber vê yekê pêdivî ye ku ji bo vekolînek peptîdê paqijkirina paqijkirina peptîd û proteînan were xwestin. proteînên di şilavên laş, tevn û şaneyan de ji ber hejmareke mezin ji cureyên potansiyel ên di nimûneyek yekane de karekî pir dijwar e. Her çend spektrometrîya girseyî ji bo rêzgirtina peptîd û proteînan amûrek bi bandor e jî, heke nimûneyên weha bi yek gavê di spektrometera girseyî de werin derzî kirin, veqetandin dê ne îdeal be. analîzên ku di demek diyarkirî de dikevin spektrometera girseyê4,5,6. Ji bilî vê, di dema veqetandina qonaxa şil de, analît dikarin li herêmên teng werin balkişandin, bi vî rengî van analîtan berhev bikin û hesasiyeta vedîtina MS çêtir bikin. Kromatografiya şil (LC) di deh salên borî de pir pêş ketiye û bûye teknîkek analîzîkî ya populer7,08,9.
Kromatografiya şil a qonaxa berevajîkirî (RP-LC) bi berfirehî ji bo paqijkirin û veqetandina têkelên peptîdê bi karanîna silica oktadecîl-guhertî (ODS) wekî qonaxa rawestayî tê bikar anîn. Lêbelê, qonaxên rawestî yên RP veqetandina têrker a peptîdên wan, refah5 û proteînên taybetî yên peptîd, refên wan ên taybet û amph1 peyda nakin. qonaxên rawestayî yên sêwirandî ji bo analîzkirina peptîd û proteînên bi hêmanên polar û ne-polar hewce ne da ku bi van analîtan re têkilî daynin û bihêlin16. Kromatografiya moda tevlihev, ku danûstendinên pirmodal peyda dike, dikare bibe alternatîfek RP-LC ji bo veqetandina peptîd, proteîn, û tevliheviyên din. û veqetandina proteînan17,18,19,20,21. Qonaxên rawestayî yên bi moda tevlihev (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, navberhevkirina polar/RPLC) ji bo veqetandina peptîd û proteînan minasib in ji ber hebûna herdu komên polar û yên ne-polar22,23,24,25,25,26,27, qonaxên polar û bi qereqolên polar. Komên lar ji bo analîzên polar û ne-polar hêza veqetandinê ya baş û hilbijartiyek bêhempa nîşan didin, ji ber ku veqetandin bi têkiliya di navbera analît û qonaxa rawestayî ve girêdayî ye.Têkiliyên pirzimanî 29, 30, 31, 32. Di demên dawî de, Zhang et al.30 qonaxeke rawestayî ya polîamîn a bi dodecyl qedandî amade kir û hîdrokarbon, antîdepresant, flavonoîd, nukleosîd, estrojen û çend analîzên din bi serkeftî ji hev veqetand. Navbera polar hem komên polar û hem jî yên nepolar heye, lewra dikare were bikar anîn ji bo veqetandina peptîd û proteînên ku hem hîdrofobîk û hem jî stûnên hîdrofobîk ên bi stûnê ve girêdayî ne. stûnên ed C18) di bin navê bazirganiyê de stûnên Ascentis Express RP-Amide hene, lê ev stûn tenê ji bo analîzkirina amine 33 têne bikar anîn.
Di lêkolîna heyî de, qonaxeke rawestayî ya polar (N-phenylmaleimide-polystyrene embedded) hate amade kirin û ji bo veqetandina peptîd û trîpsîn digestên HSA hate nirxandin. Qonaxa rawestayî bi stratejiya jêrîn hate amade kirin. Parçeyên silica yên porez li gorî prosedûra ku di weşana meya berê de hatî amadekirin hatine amadekirin. G), TMOS, asîda acetîk a avê hate sererast kirin da ku pariyên silica yên bi mezinahiya pora mezin amade bike. Ya duyemîn, lîgandek nû, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, hate sentez kirin û ji bo ku pariyên silica derxînin ji bo amadekirina qonaxek rawestayî ya polar a bicîbûyî hate bikar anîn. nexşeya pakkirinê. Ji bo ku nivînek homojen di hundurê stûnê de çêbibe, bi lerzînek mekanîkî piştgirîya pakkirina stûnê tê kirin. Veqetandina stûna pakkirî ya tevliheviyên peptîd ên ku ji pênc peptîd pêk tên binirxînin;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) û Trypsin digesta albûmîna seruma mirovî (HAS). Tevliheviya peptîd û digestiya trîpsînê ya HSA hate dîtin ku bi vebirrînek baş û bikêrhatina stûnê ya ku RPA-ya baş a performansa RPA-yê veqetandî bû. stûn. Hem peptîd û hem jî proteîn li ser stûna PMP, ku ji stûna Ascentis Express RP-Amide bi bandortir bû, hate dîtin ku baş têne çareser kirin û bikêrhatî ne.
PEG (Polîetîlen Glîkol), Urea, Asîda Asît, Trîmetoksî Ortosîlîkat (TMOS), Trîmetîl Chlorosilane (TMCS), Trîpsîn, Albûmîna Seruma Mirovan (HSA), Klorîd Amonyum, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Stêrkîl-Hlorîd (MCS) BPO), HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, û Acetone Ji Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) Kirîn.
Tevlihevek ji urea (8 g), polîetîlen glîkol (8 g) û 8 ml asîda acetîk a 0,01 N 10 hûrdeman hat rijandin, û dûv re 24 ml TMOS di bin şert û mercên qeşayê de lê zêde kirin. Tevra reaksiyonê 6 saetan li 40 °C hate germ kirin û dûv re di 120 °C de ji bo 8 saetan maddeya bêserûber di nav pola de hate germ kirin. 12 saetan di 70°C de hat zuwakirin. Girseya nerm a hişk di firneyekê de hat zemkirin û 12 saetan di 550°C de hat kalsînkirin.
Bi guheztina rûkalê ya pariyên silica bi lîganda phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ya pêş-sentezkirî, li dûv polîmerîzasyona radîkal a bi stîrenê, pêkhateyek ku di nav koma polar de pêk tê hate amadekirin.Qonaxa stasyonî ji bo kombûn û zincîreyên polîstirenê. Pêvajoya amadekirinê li jêr tê vegotin.
N-fenylmaleimide (200 mg) û methyl vinyl isocyanate (100 mg) di toluene hişk de hatin hilweşandin, û 0.1 mL 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) li flaskeya reaksiyonê hate zêdekirin da ku fenylmaleimide-methyl vinyl, têkelê 6 °C îzocyanate hate fîltrekirin (ji bo 6 saetan PM 6 copoly hate fîltrekirin). 3 saetan di tendûrê de di germahiya 40°C de tê hişk kirin.
Parçeyên silica yên hişkkirî (2 g) di toluenê ya hişk (100 mL) de hatin belav kirin, hatin şilkirin û 10 hûrdeman di fîşekek binî ya 500 mL de bi sonikê hatin hilanîn. PMCP (10 mg) di toluenê de hat helandin û bi rêkûpêk bi kana davêjê ve li fîşa reaksiyonê hate zêdekirin. Tevlîk di 80 °C de hate şûştin û li 80 demjimêran hate şuştin 60°C ji bo 3 saetan. Paşê, pariyên silica yên girêdayî PMCP (100 g) di toluenê (200 ml) de hatin helandin û 4-hîdroksî-TEMPO (2 mL) li ber hebûna 100 μL dîbutiltin dilaurate wekî katalîzator hat zêdekirin. Tevlîhev di 8 d 0 saetan de 3 °C de hate fîltrekirin. .
Stîren (1 mL), benzoyl peroksît BPO (0,5 mL), û pariyên sîlîka yên girêdayî TEMPO-PMCP (1,5 g) di toluenê de hatin belavkirin û bi nîtrojenê hatin paqijkirin. Polîmerîzasyona stîrenê 12 saetan di 100°C de hat kirin. Berhema ku bi şev di 60°C de hat şûştin. me di jimar 1 de tê nîşandan.
Nimûne di 393 K ji bo 1 saetê de hatin degaz kirin da ku zextek mayînde ya kêmtir ji 10-3 Torr were bidestxistin. Mîqdara N2 ya ku di zextek têkildar a P/P0 = 0,99 de hate stendin, ji bo destnîşankirina hêjmara porê ya tevahî hate bikar anîn. Nimûneyên hişkkirî (parçeyên silica yên tazî û bi lîgand ve girêdayî) bi karbona karbonê adhesive li ser stûnek alumînyûmê hatin danîn. Zêrîn bi karbonê Q150T li ser nimûneyan hat rijandin, û tebeqeyek Au ya 5 nm li ser nimûneyan hate danîn. ham, MA, USA) Analîzatora elementê ya Flash EA1112 ji bo analîza hêmanan hate bikar anîn. Analîzatorek Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ji bo belavkirina mezinahiya parçikan hate bikar anîn. Parçeyên silica yên tazî û pariyên silica yên girêdayî bi lîgand (her yek 5 mg) ji bo 1 mL, ji bo 5 mg, ji ​​bo 1 mL, ji bo xropnic5 hate belav kirin. min, û li ser bench optîkî ya Mastersizer danîn. Analîzên Thermogravimetric bi rêjeya 5 °C di deqeyek de li ser germahiya 30 heta 800 °C hate kirin.
Stûnên pola zengarnegir ên teng ên bi pîvan (100 × 1.8 mm id) bi karanîna rêbaza pakkirina şelrê hatin pakkirin, ku heman prosedûra ku di Ref.31.Stûneke pola zengarnegir (bi cam, 100 × 1,8 mm id) bi pêlaveke dergehê ku tê de 1 µm frît tê de bû bi pakkerek slurry (Alltech Deerfield, IL, USA) ve hate girêdan. wek helkara slurry û her weha wekî helwêstê bişaftinê tê bikaranîn. Bi zextên 100 MP ji bo 10 hûrdeman, 80 MP ji bo 15 hûrdeman, û 60 MP ji bo 30 hûrdeman, stûnê bi dû hev tijî bikin. pakker bike û hêdî hêdî zextê berde da ku pêşî li zirara di hundurê stûnê de bigire. Stûnê ji yekîneya pakkirinê ya şûjinê qut bikin û pêlavek din bi ketina hundur û pergala LC ve girêdin da ku performansa wê kontrol bikin.
Pompek LC (10AD Shimadzu, Japonya), înjektorek (Valco (USA) C14 W.05) bi lûleya derzîlêdanê ya 50nL, degazkerê membranê (Shimadzu DGU-14A), pencereya kapîlar a UV-VIS hate çêkirin Dedektorek taybet a μLC (UV-2075) û kêmkirina bandora mîkrokolumê ya pirtirkêmtir û kêmkirina bandora mîkro-narUlinê û kêmkirina bandora mîkrocolum-ê ya zêde hate çêkirin. Berfirehbûna banda stûnê.Piştî pakkirinê, kapîlar (50 μm id 365 û kapîlarên yekbûnê yên kêmkirî (50 μm) li dergeha 1/16″ ya yekîtîya kêmker hatin saz kirin. Komkirina daneyan û pêvajoya kromatografiyê bi karanîna Multichro 2000 ve hate kirin. Ji hêla nermalava 2544V ve hatî vekolîn kirin ji hêla testa 254V ve hate şopandin. inPro8 (Northampton, MA).
Albumîna ji seruma mirovan, toza lîofîlkirî, ≥ 96% (elektroforeza gel agarose) 3 mg bi trîpsîn (1,5 mg), 4,0 M urea (1 ml), û 0,2 M amonyum bîkarbonat (1 ml). Çareserî 10 hûrdeman hat helandin û piştre 10 deqeyan di nav 3 saetan de bi avê ve hate hiştin û piştre bi 3 saetan de 7 mL hat hilanîn. 0,1% TFA. Çareseriyê parzûn bikin û di bin 4 °C de hilînin.
Veqetandina têkelên peptîdê û hevkêşeyên HSA yên trîpsînê ji hev cuda li ser stûnên PMP hatin nirxandin. Veqetandina têkelê peptîd û digestiya trîpsîn a HSA ji hêla stûna PMP ve kontrol bikin û encaman bi stûna Ascentis Express RP-Amide bidin ber hev. Hejmara plakaya teorîkî wiha tê hesibandin:
Wêneyên SEM-ê yên perçeyên silica yên tazî û perçeyên silica-ligand-girêdayî di FIG de têne xuyang kirin.2 .Wêneyên SEM yên pariyên sîlîkayê yên tazî (A, B) nîşan didin ku, berevajî lêkolînên me yên berê, ev kerpîçên gêrîk in ku tê de pirtik dirêjkirî ne an jî hevsengiya wan ne birêkûpêk in. Rûyê pariyên sîlîkayê yên bi lîgand ve girêdayî (C, D) ji ya pariyên silicê yên tazî hêniktir e, dibe ku ji ber rûxara silica ya tazî ya ku li ser silicê çeqilmast be. pirtikan.
Dîmenên mîkroskopa elektronîkî yên pariyên silica yên tazî (A, B) û perçeyên silica yên bi lîgand-girêdayî (C, D) têne şopandin.
Dabeşkirina mezinahiya parçikên pariyên silica yên tazî û pariyên silica yên bi lîgandê ve girêdayî di jimareya 3(A) de têne xuyang kirin. Kûçikên belavkirina mezinahiya parçikê yên li ser bingeha volûmê nîşan didin ku mezinahiya pariyên silica piştî guherîna kîmyewî zêde bûye (Hêjîrê. 3A). (0,5), ya PMP 3,36 μm ye, li gorî lêkolîna meya berê ya bi nirxa ad(0,5) ya 3,05 μm (parçeyên silica yên girêdayî polystyrene) 34. Vê komê li gorî lêkolîna meya berê xwedan dabeşek mezinahiya perçeyê tengtir bû ji ber rêjeyên cihêreng ên PEG, urea, tîra MP ya ku mezinahiya tîrêjê ya reaksiyonê ya pirtirkêmtir e. Qonaxa pariyên silica ne-girêdayî me berê xwendibû. Ev tê vê wateyê ku fonksiyonelkirina rûkalê pariyên silica bi stîrenê tenê qatek polistirenê (0,97 μm) li ser rûyê silica radikir, lê di qonaxa PMP de qalindahiya qatê 1,38 μm bû.
Dabeşkirina mezinahiya parçikan (A) û belavkirina mezinahiya porê (B) ya pariyên silica tazî û perçeyên silica yên girêdayî lîgandê.
Mezinahiya porê, qebareya porê û rûbera pariyên silica yên lêkolîna heyî di Tabloya 1(B) de hatine dayîn. Profîlên PSD yên pariyên silica yên tazî û pariyên silica yên bi lîgand ve girêdayî di jimareya 3(B) de têne destnîşan kirin. Encam bi lêkolîna meya berê re têne berhev kirin. nîşan dide ku mezinahiya porê piştî guherîna kîmyewî 69 kêm dibe, wek ku di tabloya 1(B) de tê xuyang kirin, û guheztina kevroşkê di Fig. 3(B) de tê xuyang kirin. Bi heman awayî, qebareya pora pariyên silica ji 0,67 daket 0,58 cm3/g piştî guherîna kîmyewî. Rûbera taybetî ya ku niha li ser rûbera 1 m ya berê hatî lêkolîn kirin e. lêkolîn (124 m2/g).Wek ku di tabloya 1(B) de tê nîşandan, rûbera (m2/g) pariyên silica jî piştî guherîna kîmyayî ji 116 m2/g daket 105 m2/g.
Encamên analîza elementan a qonaxa rawestayî di Tablo 2 de têne xuyang kirin. Barkirina karbonê ya qonaxa rawestayî ya heyî %6,35 e, ku ji barkirina karbonê ya lêkolîna me ya berê kêmtir e (parçeyên silica yên girêdayî polistirene, bi rêzê 7,93%35 û 10,21%) ne, hin lîgandên polar ên wekî phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) û 4-hydroxy-TEMPO hatine bikar anîn. Ji sedî giraniya nîtrojenê ya qonaxa rawestayî ya heyî %2,21 e, li gorî 0,1735 û 0,85% ji hêla giraniya nîtrojenê ve di lêkolînên berê de, ev tê vê wateyê ku asta nitrojenê ji % nitrojenê ji sedî nitrojen e. Bi heman awayî, barkirina karbonê ya hilberên (4) û (5) bi rêzê 2,7% û 2,9% bûn, dema ku barkirina karbonê ya hilbera dawîn (6)% 6,35 bû, wekî ku di tabloya 2-ê de tê xuyang kirin.Windabûna giraniyê bi qonaxa rawestayî ya PMP ve hatî kontrol kirin, û kêşeya TGA di jimar 4 de tê nîşandan. 35% ji ber ku lîgandan ne tenê C, lê di heman demê de N, O, û H jî hene.
Lîganda phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ji bo guherandina rûbera pariyên silica hate hilbijartin ji ber ku ew xwedî komên phenylmaleimide yên polar û komên vinylisocyanate hene. Komên isocyanate yên vinyl dikarin bi stirenê re bi polîmerîzasyona radîkal a zindî re bertek nîşan bidin. Sedema duyemîn ew e ku hûn komekê têxin navbera stasyonek analîzîkî ya nerm û nerm. , ji ber ku beşa phenylmaleimide di pH-ya normal de xwedan barek virtual nîne. Polarîteya qonaxa rawestayî dikare ji hêla mîqdara optîmal a stirenê û dema reaksiyonê ya polîmerîzasyona radîkala azad ve were kontrol kirin.Gava paşîn a reaksiyonê (polîmerîzasyona radîkal a azad) krîtîk e û dikare polarîteya qonaxa rawestayî biguhezîne. ne û dema reaksiyonê barkirina karbonê ya qonaxa rawestayî zêde kir û berevajî vê yekê. SP-yên ku bi santralên cuda yên stirenê hatine amadekirin, xwedan barkirinên karbonê yên cihê ne. Dîsa, van qonaxên rawestayî di stûnên pola zengarnegir de barkirin û performansa wan a kromatografiyê (hilbijartî, çareserî, nirxa N, hwd.) kontrol bikin.
Pênc tevlihevên peptîdê (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) jî bi karanîna stûnek PMP-ê bi karanîna qonaxek mobîl ve hatin nirxandin;60/40 (v/v) acetonitrile/av (0,1% TFA) bi rêjeya herikîna 80 μL/min. Di bin şert û mercên şuştinê yên çêtirîn de, hejmara plakaya teorîkî (N) ji bo stûnê (100 × 1,8 mm id) 20,000 ± 100 e (200,000 T ji bo stûnan nirxê sê N 3/MPm² dide). kromatogram di jimar 5A de têne xuyang kirin. Analîzek bilez li ser stûnek PMP bi rêjeya herikîna bilind (700 μL/min), pênc peptîd di nav yek hûrdemê de hatin şuştin, nirxên N pir baş bûn, 13,500 ± 330 her stûnek (100 × 1,8 mm id), bi 0h reqema 135-ê re têkildar e. (100 × 1,8 mm id) bi sê lotikên cihêreng ên qonaxa rawestayî ya PMP hatin pakij kirin da ku ji nû ve hilberandinê were kontrol kirin. Giraniya analîtê ji bo her stûnê bi karanîna şert û mercên herî baş ên şuştinê û hejmara plaqên teorîkî N û dema ragirtinê hate tomar kirin da ku heman tevliheviya testê li ser her stûnê veqetîne. Daneyên ji nû ve hilberandinê yên ji bo stûnên PMP-ê wekî stûnên ji nûveberbûna %R-ya pir kêm di Tabloya PMPR-ê de stûnên ji nûvekirina %R-ê de têne xuyang kirin. di tabloya 3 de.
Veqetandina tevliheviya peptîdê li ser stûna PMP (B) û stûna Ascentis Express RP-Amide (A);qonaxa mobîl 60/40 ACN / H2O (TFA 0.1%), pîvanên stûna PMP (100 × 1.8 mm id);analîtîk Rêzkirina helandina pêkhateyan: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) û 5 (leucîn) asîd enkephalin)).
Stûnek PMP (100 × 1,8 mm id) ji bo veqetandina rûkên trîptîk ên albûmîna seruma mirovî di kromatografiya şil a bi performansa bilind de hate nirxandin. Kromatograma di xêza 6 de nîşan dide ku nimûne baş ji hev veqetandî ye û çareserîyek pir baş e. Berhevkirinên HSA bi karanîna rêjeya herikînê ya 100 μlwa1/Trîle% 100 μLTrîle/Tonile/Tonile% 100 μLTr/min .Wekî ku di kromatogramê de tê xuyang kirin (Şikl 6), helandina HSA li 17 lûtkeyan ku li gorî 17 peptîdê ne hatiye dabeş kirin. Bandora veqetandinê ya her lûtkeyê di digestiya HSA de hate hesibandin û nirx di Tabloya 5 de hatine dayîn.
Tryptic digest of HSA (100 × 1.8 mm id) li ser stûnek PMP hate veqetandin;rêjeya herikînê (100 µL/min), qonaxa mobîl 60/40 acetonitrile/av bi 0,1% TFA.
ku L dirêjahiya stûnê ye, η vîskozîteya qonaxa mobîl e, ΔP tansiyona pişta stûnê ye, û u leza rêzê ya qonaxa mobîl e. Permebûna stûna PMP 2,5 × 10-14 m2, rêjeya herikînê 25 μL/min bû, û 60/40 v/v ACN × 1 mm ACN/1 stûnê bikar anî. dişibihe ya lêkolîna me ya berê Ref.34. Permebûna stûna ku bi keriyên serserî poroz ve hatiye pakkirin ev e: 1,7 × 10-15 ji bo 1,3 μm pariyên, 3,1 × 10-15 ji bo pariyên 1,7 μm, 5,2 × 10-5 μm × 5,2 × 10-5 × 0,2 × 10-5 × 2, pariyên m 43. Ji ber vê yekê, permeabiliya qonaxa PMP dişibihe ya 5 μm pariyên core-şell.
ku Wx giraniya stûna bi kloroformê ye, Wy giraniya stûna bi metanolê ye, û ρ tîrêjiya helwêstê ye.Densiya metanolê (ρ = 0,7866) û kloroformê (ρ = 1,484). Tevahiya porosiîdê ya SILICA 1 × 0 PARTI (1-C 0 8 mm) Stûnên C18-urea 31 yên ku me berê lêkolîn kir, bi rêzê 0,63 û 0,55 bûn. Ev tê vê wateyê ku hebûna lîgandên urea permeability qonaxa rawestayî kêm dike. Ji aliyek din ve, porozîteya tevahî ya stûna PMP (100 × 1,8 mm ID) 0,60 ji stûna PMP-pak a stûnê 0,60 kêmtir e. parçikek ji ber ku di qonaxên rawestayî yên tîpa C18 de lîgandên C18 wekî zincîreyên xêzkirî bi pariyên sîlîkayê ve têne girêdan, lê di qonaxên rawestayî yên bi tîpa polistiren de, li dora wê tebeqeya polîmer a nisbeten stûr çêdibe.Di ceribandinek tîpîk de, porozîteya stûnê wiha tê hesibandin:
Figure 7A,B stûna PMP (100 × 1.8 mm id) û stûna Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) bi karanîna heman şertên şûştinê (ango, 60/40 ACN/H2O û 0.1% TFA) nîşan dide.) ya plana van Deemter.Têkelên peptîdê yên bijartî (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) di 20 µL/Rêjeya herikîna hindiktirîn a her du stûnan de 800 µL/min e. Herî kêm HETPum ji bo rêjeya herikînê 80min e. Stûna RP-Amide bi rêzê ve 2,6 μm û 3,9 μm bûn. Nirxên HETP destnîşan dikin ku karbidestiya veqetandinê ya stûna PMP (100 × 1,8 mm id) ji Ascentis Express RP-Amide ya bazirganî ya peydakirî pir çêtir e (100 × 1,8 nirxa jimareya RP-Amide ya ku ji hêla bazirganî ve tê peyda kirin) (100 × 1,8 nirxa van nirxa 7 mmid kêm dibe). Li gorî lêkolîna meya berê ne girîng e. Karbidestiya veqetandina bilind a stûna PMP (100 × 1,8 mm id) li gorî stûna Ascentis Express RP-Amide, li ser bingeha çêtirkirina şekil, mezinahî, û pêvajoyên pakkirina stûnên tevlihev ên ku di xebata heyî de têne bikar anîn34.
(A) plansaziya van Deemter (HETP beramberî leza xêzika qonaxa mobîl) ku bi stûnek PMP (100 × 1.8 mm id) di 60/40 ACN/H2O de bi 0.1% TFA ve hatî wergirtin. ACN/H2O bi 0,1% TFA.
Di kromatografiya şil de qonaxeke rawestayî ya polîstirenê ya bi polar hat amade kirin û nirxandin. Ji bo veqetandina tevliheviyên peptîdên sentetîk û pîvazên trîpsînê yên albûmîna seruma mirovan (HAS) di kromatografiya şil de bi performansa bilind. Performansa kromatografiyê ya stûnên PMP-ê yên ji bo têkelên peptîdê di karîgeriya veqetandinê û çareseriyê de pir baş e. ji pariyên silica, senteza kontrolkirî ya qonaxa rawestayî, û pakkirina stûnê ya tevlihev. Ji bilî karbidestiya veqetandinê ya bilind, tansiyona pişta stûnê ya nizm bi rêjeyên herikîna bilind avantajek din a vê qonaxa rawestayî ye. Stûnên PMP ji nû ve hilberandinek baş nîşan didin û dikarin ji bo analîzkirina tevliheviyên peptîd û helandina trîpsîn ên ji pêkhateyên cuda yên sirûştî heta bi proteînên cihêreng bikar bînin. nebat û ekstraktên fungalan di kromatografiya şil de. Di pêşerojê de, stûnên PMP dê ji bo veqetandina proteînan û antîbodîyên monoklonal jî werin nirxandin.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Lêkolîna li ser Pergalên Veqetandina Peptîdê ji hêla Kromatografiya Qonaxa Berepaş ve Part I: Pêşxistina Protokola Taybetmendiya Stûnê.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Peptîdên çalak ên çêtir ên ku ji bo dermankirina nexweşiyên infeksiyonî hatine çêkirin. Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptîdên terapî yên sentetîk: zanist û bazar. vedîtina dermanan.15 (1-2) îro, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.1.2009).2009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografiya Liquid Proteomic Pêşketî.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Kromatografiya şilkî ya pêşkeftî-spektrometrîya girseyî tevlêbûna metabolomîk û proteomics.anus.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019) bi berfirehî armanc dike.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rola UHPLC di pêşkeftina dermanan de.J.Sep. Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aliyên bingehîn û pratîk ên kromatografiya şil a zexta ultrabilind ji bo veqetandinên bilez.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Serîlêdana kromatografiya şil a bi performansa ultra-bilind di pêşkeftina derman de.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Hîdrogelên makropor ên monolîtîk ên ku ji emulsiyonên qonaxa bilind a rûn-ava-avê hatine amadekirin ji bo paqijkirina bikêrhatî ya enteroviruses. Kîmyawî.Brîtanya.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rola kromatografiya şil di proteomîkê de.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Meylên derketinê yên di veqetandina kromatografiya şil a qonaxa berevajî ya peptîd û proteînan de: teorî û serîlêdan.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Veqetandina du-alî ya peptîdan bi karanîna pergalek RP-RP-HPLC bi karanîna nirxên pH yên cihêreng di pîvanên veqetandina yekem û duyemîn de bikar tîne.J.Sep. Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Taybetmendiyên veguheztina girseyê û performansa kînetîk a stûnên kromatografiyê yên bikêrhatî yên ku bi C18 bin-2 μm pirçikên bi tevahî û bi serpêhatî poroz ve hatine vekolîn kirin.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Di veqetandin, naskirin û erêkirina peptîdên biyoaktîf ên nebatan de.
Mueller, JB et al. Pergala proteomîkî ya Padîşahiya jiyanê. Xweza 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Pêvajoya jêrîn a peptîdên dermankirî bi kromatografiya şilavê ya amadekar. Molecule (Basel, Swîsre) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepana wê ji bo biyopolîmeran.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ji bo kromatografiya proteîna tevlihev-mode: prensîb, taybetmendî, û sêwirandin.J.Biotechnology.144 (1), 3-11 (2009).