Spas ji bo serdana Nature.com. Hûn guhertoyek gerokê bi piştgiriya CSS-ê ya sînorkirî bikar tînin. Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê di Internet Explorer-ê de neçalak bikin). Wekî din, ji bo misogerkirina piştgiriya domdar, em malperê bê şêwaz û JavaScript nîşan didin.
Karûselek ji sê slaytan di carekê de nîşan dide. Bişkokên Berê û Paşê bikar bînin da ku hûn di carekê de di nav sê slaytan de bigerin, an jî bişkokên slaytê yên li dawiyê bikar bînin da ku hûn di carekê de di nav sê slaytan de bigerin.
Perçeyên silîkaya poroz bi rêbaza sol-jel bi hin guhertinan hatin amadekirin da ku perçeyên bi porên fireh werin bidestxistin. Ev perçe bi rêya polîmerîzasyona veguheztina zincîra berevajî (RAFT) bi N-fenîlmaleîmîd-metîlvînîl îzosîyanat (PMI) û stîrenê hatin derivatîzekirin da ku polîamîdên navberkirî yên N-fenîlmaleîmîd çêbikin. Qonaxa sabît a stîrenê (PMP). Stûnên pola yên zengarnegir ên teng (100 × 1.8 mm diametera hundurîn) bi pakkirina şilekê hatin pak kirin. Performansa kromatografîk a stûna PMP hate nirxandin da ku tevliheviyek peptîdên sentetîk ên ji pênc peptîdan (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu asîda amînî enkefalîn) û hîdrolîzata trîptîk a albûmîna seruma mirovan (HAS) veqetîne. Di bin şert û mercên elûsyonê yên çêtirîn de, hejmara teorîk a plakayan bi tevliheviyek peptîdan gihîşt 280,000 plaka/sq.m. Dema ku performansa veqetandinê ya stûna pêşkeftî bi stûna bazirganî ya Ascentis Express RP-Amide re tê berawirdkirin, hate dîtin ku karîgeriya veqetandinê ya stûna PMP ji hêla karîgeriya veqetandinê û çareseriyê ve ji stûna bazirganî bilindtir bû.
Pîşesaziya biyofarmasotîkê di salên dawî de bûye bazarek gerdûnî ya berfireh û para wê di bazarê de zêde bûye. Bi mezinbûna teqîner a pîşesaziya biyofarmasotîkê1,2,3 re hewcedariyek mezin ji bo analîza peptîd û proteînê heye. Ji bilî peptîda hedef, di dema senteza peptîdê de gelek qirêjî çêdibin, ji ber vê yekê paqijkirina kromatografîk ji bo bidestxistina paqijiya xwestî ya peptîdê hewce ye. Analîz û taybetmendiya proteînên di şilavên laş, tevn û hucreyan de karekî pir dijwar e ji ber hejmareke mezin a cureyên potansiyel ên tespîtkirinê yên di nimûneyek yekane de hene. Her çend spektrometriya girseyî amûrek bi bandor e ji bo rêzkirina peptîd û proteînan, heke nimûneyên weha rasterast werin danîn nav spektrometreya girseyî, veqetandin dê ne têrker be. Ev pirsgirêk dikare bi pêkanîna kromatografiya şile (LC) berî analîza MS were çareser kirin, ku dê mîqdara analîtên ku di demek diyarkirî de dikevin spektrometreya girseyî kêm bike4,5,6. Wekî din, analît dikarin di dema veqetandina qonaxa şile de di herêmek teng de kom bibin, bi vî rengî van analîtan kom bikin û hesasiyeta tespîtkirina MS zêde bikin. Kromatografiya şile (LC) di deh salên dawî de bi girîngî pêş ketiye û bûye rêbazek berfireh ji bo analîza proteomîk7,8,9,10.
Kromatografiya şileya qonaxa berevajî (RP-LC) bi berfirehî ji bo paqijkirin û veqetandina tevliheviyên peptîdan bi karanîna silîkaya oktadesîlî ya guherandî (ODS) wekî qonaxa sabît tê bikar anîn11,12,13. Lêbelê, ji ber avahiya wan a tevlihev û xwezaya wan a amfoterîk,14,15 qonaxên sabît ên RP nikarin veqetandinek têrker a peptîd û proteînan peyda bikin. Ji ber vê yekê, analîza peptîd û proteînan bi perçeyên polar û ne-polar hewceyê qonaxên sabît ên bi taybetî hatine sêwirandin dike da ku van analîtan têkilî daynin û biparêzin16. Kromatografiya tevlihev, ku têkiliyên pirmodal pêşkêşî dike, dikare ji bo veqetandina peptîd, proteîn û tevliheviyên din ên tevlihev alternatîfek ji bo RP-LC be. Çend qonaxên sabît ên celebê tevlihev hatin amadekirin û stûnên ku bi van qonaxên sabît dagirtî bûn ji bo veqetandina peptîd û proteînan hatin bikar anîn17,18,19,20,21. Ji ber hebûna komên polar û nepolar, qonaxên stasyonar ên moda tevlihev (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, interkalasyona polar/RPLC) ji bo veqetandina peptîd û proteînan guncaw in22,23,24,25,26,27,28. , qonaxên stasyonar ên interkalasyonên polar ên bi komên polar ên bi kovalent ve girêdayî şiyanên veqetandinê yên baş û hilbijarbûna bêhempa ji bo analîtên polar û nepolar nîşan didin ji ber ku veqetandin bi têkiliya di navbera analît û qonaxa stasyonar de ve girêdayî ye. Têkiliyên pirmodal 29,30,31,32. Di demên dawî de, Zhang et al. 30 qonaxên stasyonar ên polîamîn ên bi behenîl-qediyan bi dest xistin û hîdrokarbon, antîdepresan, flavonoîd, nukleozîd, estrogen û hin analîtên din bi serkeftî ji hev veqetandin. Materyalê stasyonar ê polar ê bicîhkirî hem komên polar û hem jî nepolar hene, ji ber vê yekê ew dikare were bikar anîn da ku peptîd û proteînan di nav beşên hîdrofobîk û hîdrofîlîk de ji hev veqetîne. Stûnên rêza polar (mînak, stûnên C18 bi amîd rêz) bi navê bazirganî stûnên Ascentis Express RP-Amide hene, lê ev stûn tenê ji bo analîza amîn 33 hatine bikar anîn.
Di vê lêkolînê de, qonaxeke sabît a polar a bicihkirî (N-fenîlmaleîmîd, polîstîren a bicihkirî) hate amadekirin û ji bo veqetandina peptîd û parçekirina HSA ya trîptîk hate nirxandin. Stratejiya jêrîn ji bo amadekirina qonaxa sabît hate bikar anîn. Perçeyên silîkaya poroz li gorî prosedurên ku di weşanên me yên berê de hatine vegotin, bi hin guhertinan di nexşeyên amadekirinê 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 de hatin amadekirin. Rêjeyên urea, polîetîlen glîkol (PEG), TMOS û asîda avî-asetîk hatin sererast kirin da ku perçeyên silîkayê bi mezinahiyên porên mezin werin bidestxistin. Ya duyemîn, lîgandek nû ya fenîlmaleîmîd-metîlvînîl îzosîyanat hate sentez kirin û perçeyên silîkaya wê yên derivatîzekirî ji bo amadekirina qonaxên sabît ên polar ên bicihkirî hatin bikar anîn. Qonaxa sabît a bidestxistî li gorî nexşeyek pakkirinê ya çêtirkirî di stûnek pola zengarnegir de (qûtra hundurîn 100 × 1.8 mm) hate pak kirin. Pakkirina stûnê ji hêla lerizîna mekanîkî ve tê alîkar kirin da ku çînek yekreng di nav stûnê de were misoger kirin. Stûna pakkirî ji bo veqetandina tevliheviyek peptîdên ku ji pênc peptîdan (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, peptîda leucîn-enkefalîn) û hîdrolîzatên trîptîk ên albûmîna seruma mirovan (HSA) pêk tên, hate nirxandin. Hat dîtin ku tevliheviya peptîd û helandina trîptîk a HSA bi çareserî û karîgeriya baş ji hev veqetiyan. Karîgeriya veqetandina stûna PMP bi ya stûna Ascentis Express RP-Amîde re hate berhev kirin. Hat dîtin ku peptîd û proteîn li ser stûna PMP xwedî çareseriyek baş û karîgeriya veqetandina bilind in, û karîgeriya veqetandina stûna PMP ji ya stûna Ascentis Express RP-Amîde bilindtir e.
PEG (polîetîlen glîkol), urea, asîda asetîk, trîmetoksîortosîlîkat (TMOS), trîmetîlklorosîlan (TMCS), trîpsîn, albûmîna seruma mirovî (HSA), klorîda amonyûm, urea, heksametîlmetakrîloîlsîlazan (HMDS), klorîda metakrîloîl (MC), stîren, 4-hîdroksî-TEMPO, benzoîl peroksît (BPO), asetonîtrîl (ACN) ji bo HPLC, metanol, 2-propanol û aseton. Şîrketa Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, DYA).
Têkelêk ji urea (8 g), polîetîlen glîkol (8 g) û 8 ml ji 0.01 N asîda asetîk 10 deqîqeyan hate tevlihevkirin, û 24 ml ji TMOS di bin sarbûna bi qeşayê de lê hate zêdekirin. Têkelê reaksiyonê 6 saetan di 40°C de û dû re jî 8 saetan di 120°C de di otoklaveke pola zengarnegir de hate germkirin. Av hate dekantkirin û bermayî 12 saetan di 70°C de hate hişkkirin. Blokên nerm ên hişkkirî bi nermî hatin hûrkirin û di firinekê de 12 saetan di 550°C de hatin kalsînkirin. Sê kom hatin amadekirin û taybetmendîkirin da ku dubarekirina mezinahiya perçeyan, mezinahiya kunan û rûbera wê were ceribandin.
Grûpa polar û qonaxa sabît ji bo zincîrên polîstîrenê. Prosedûra amadekirinê li jêr tê vegotin.
N-fenîlmaleîmîd (200 mg) û metîlvînîl îzosîyanat (100 mg) di toluenê bêav de hatin helandin, û dû re 0.1 ml ji 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) li şûşeya reaksiyonê hat zêdekirin da ku kopolimerek fenîlmaleîmîd û metîlvînîl îzosîyanat (PMCP) were bidestxistin. ) Têkel 3 saetan di 60°C de hat germ kirin, hat fîltrekirin û di firinekê de 3 saetan di 40°C de hat zuwa kirin.
Perçeyên silîkaya hişkkirî (2 g) di toluenê hişk (100 ml) de hatin belavkirin, hatin tevlihevkirin û 10 deqîqeyan di firaxeke binî gilover a 500 ml de hatin sonîkkirin. PMCP (10 mg) di toluenê de hat çareserkirin û bi rêya hûniyeke zêdekirinê bi dilop bi dilop li firaxeya reaksiyonê hat zêdekirin. Têkel 8 saetan di 100°C de hat germkirin, hat fîltrekirin, bi asetonê hat şuştin û 3 saetan di 60°C de hat hişkkirin. Piştre, perçeyên silîkaya bi PMCP (100 g) ve girêdayî di toluenê (200 ml) de hatin çareserkirin, û 4-hîdroksî-TEMPO (2 ml) di hebûna 100 μl dîbutîltîn dîlaurat wekî katalîzator lê hat zêdekirin. Têkel 8 saetan di 50°C de hat tevlihevkirin, 3 saetan di 50°C de hat fîltrekirin û hişkkirin.
Stîren (1 ml), benzoîl peroksît BPO (0.5 ml) û perçeyên silîkayê yên bi TEMPO-PMCP (1.5 g) ve girêdayî di toluenê de hatin belavkirin û bi nîtrojenê hatin paqijkirin. Polîmerîzasyona stîrenê di 100°C de 12 saetan hate kirin. Berhema encam bi metanolê hate şuştin û tevahiya şevê di 60°C de hate hişkkirin. Nexşeya giştî ya reaksiyonê di şekilê yekem de tê nîşandan.
Nimûne di 393 K de ji bo 1 demjimêran hatin bêgazkirin heta ku zextek mayî ya kêmtir ji 10–3 Torr hat bidestxistin. Mîqdara N2 ya ku di zexta nisbî P/P0 = 0.99 de hatiye adsorbekirin ji bo destnîşankirina qebareya tevahî ya poran hat bikar anîn. Morfolojiya perçeyên silîkaya paqij û yên bi lîgand ve girêdayî bi karanîna mîkroskopa elektronî ya şopandinê (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japonya) hat lêkolînkirin. Nimûneyên hişk (silîkaya paqij û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî) bi karanîna teypa karbonê li ser çîpên aluminiumê hatin danîn. Zêr bi karanîna amûrek sputterkirina Q150T li ser nimûneyê hat danîn, û qatek Au ya 5 nm stûr li ser nimûneyê hat danîn. Ev karîgeriya pêvajoya voltaja nizm baştir dike û spreykirina sar a nazik peyda dike. Analîza hêmanî bi karanîna analîzkerek pêkhateya hêmanî ya Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 hat kirin. Ji bo bidestxistina belavbûna mezinahiya perçeyan analîzkerek mezinahiya perçeyan a Malvern (Worcestershire, Keyaniya Yekbûyî) Mastersizer 2000 hat bikar anîn. Perçeyên silîkaya bê pêç û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî (her yek 5 mg) di 5 ml îzopropanolê de hatin belavkirin, 10 deqîqeyan hatin sonîkkirin, 5 deqîqeyan hatin tevizandin û li ser kursiya optîkî ya Mastersizer hatin danîn. Analîza termogravîmetrîk bi rêjeya 5°C di deqîqeyê de di navbera germahiyê de ji 30 heta 800°C tê kirin.
Stûnên pola yên zengarnegir ên bi qulika teng ên bi fîbera cam hatine pêçandin bi pîvanên (ID 100 × 1.8 mm) bi rêbaza dagirtina şilavê bi heman prosedurê wekî di referansa 31 de hatin pakkirin. Stûna pola zengarnegir (bi cam pêçandin, ID 100 × 1.8 mm) û dergehek ku tê de 1 µm frît heye bi makîneya pakkirina şilavê (Alltech Deerfield, IL, USA) ve hate girêdan. Bi sekinandina 150 mg ji qonaxa rawestayî di 1.2 ml metanolê de û dayîna wê nav stûnek rezervuarê, rawestandinek ji qonaxa sabît amade bikin. Metanol wekî çareserkera şilavê û çareserkera kontrolê hate bikar anîn. Stûnê bi sepandina rêzeya zextê ya 100 MP ji bo 10 hûrdeman, 80 MP ji bo 15 hûrdeman, û 60 MP ji bo 30 hûrdeman pak bikin. Di pêvajoya pakkirinê de du vibratorên stûna kromatografiya gazê (Alltech, Deerfield, IL, USA) ji bo lerizîna mekanîkî bikar anîn da ku pakkirina stûnê ya yekreng were misoger kirin. Pakkera şilavê bigirin û zextê hêdî hêdî berdin da ku zirarê negihînin têlan. Stûn ji nozula şiliyê hate veqetandin û fîtekek din li ketinê hate girêdan û bi pergala LC ve hate girêdan da ku xebata wê were ceribandin.
MLC-yeke xwerû bi karanîna pompeyeke LC (10AD Shimadzu, Japonya), nimûneyek bi xeleka derzîkirinê ya 50 nL (Valco (USA) C14 W.05), degaserek membranê (Shimadzu DGU-14A), û pencereyeke kapîlar a UV-VIS hate çêkirin. Amûra detektorê (UV-2075) û mîkrokolona enamelkirî. Lûleyên girêdanê yên pir teng û kurt bikar bînin da ku bandora berfirehbûna stûnê ya zêde kêm bikin. Piştî dagirtina stûnê, kapîlarek (50 µm id 365) li derketina girêdana kêmkirinê ya 1/16″ saz bikin û kapîlarek (50 µm) ya girêdana kêmkirinê saz bikin. Berhevkirina daneyan û pêvajoya kromatografiyê bi karanîna nermalava Multichro 2000 têne kirin. Di 254 nm de, vegirtina UV ya analîtên mijarê li 0 hate şopandin. Daneyên kromatografîk bi karanîna OriginPro8 (Northampton, MA) hatin analîz kirin.
Albûmîna seruma mirovî, toza lîyofîlîzekirî, ≥ 96% (elektroforeza jela agarozê) 3 mg bi trîpsîn (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) û 0.2 M bîkarbonata amonyûm (1 ml) re tevlihevkirî. Çareserî 10 deqîqe hate tevlihevkirin û di hemamek avê de li 37°C ji bo 6 demjimêran hate hiştin, dûv re bi 1 ml TFA ya 0.1% hate vemirandin. Çareserî were parzûnkirin û li jêr 4°C de were hilanîn.
Veqetandina tevlîheviyek ji peptîdan û HSA ya digested tryptic li ser stûnek PMP cuda cuda hate nirxandin. Hîdrolîza tryptic a tevlîheviyek ji peptîdan û HSA ya ku ji hêla stûnek PMP ve hatî veqetandin kontrol bikin û encaman bi stûnek Ascentis Express RP-Amid re bidin ber hev. Hejmara plakayên teorîk bi karanîna hevkêşeya jêrîn tê hesibandin:
Wêneyên SEM ên perçeyên silîkaya saf û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî di Şekil 2 de têne nîşandan. Wêneyên SEM ên perçeyên silîkaya saf (A, B) şiklek gilover nîşan didin ku tê de perçe dirêj bûne an jî li gorî lêkolînên me yên berê sîmetrîya wan ne rêkûpêk e. Rûyê perçeyên silîkaya ku bi lîgand (C, D) ve girêdayî ne ji ya perçeyên silîkaya saf nermtir e, ku dibe ku ji ber zincîrên polîstîrenê yên ku rûyê perçeyên silîkayê vedişêrin be.
Mîkrografên elektronî yên skenkirinê yên perçeyên silîkaya saf (A, B) û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî (C, D).
Belavbûna mezinahiya perçeyên perçeyên silîkaya saf û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî di Şekil 2.3(A) de tê nîşandan. Xêzên belavkirina mezinahiya perçeyên qebareyî nîşan dan ku mezinahiya perçeyên silîkayê piştî guhertina kîmyewî zêde bûye (Şekil 3A). Daneyên belavkirina mezinahiya perçeyên silîkayê ji lêkolîna heyî û lêkolîna berê di Tabloya 1(A) de têne berhev kirin. Mezinahiya perçeyên qebareyî d(0.5) ya PMP 3.36 µm bû, li gorî nirxa ad(0.5) ya 3.05 µm di lêkolîna me ya berê de (perçeyên silîkaya bi polîstîrenê ve girêdayî)34. Ji ber guherîna rêjeya PEG, urea, TMOS û asîda asetîk di tevliheviya reaksiyonê de, belavkirina mezinahiya perçeyên vê komê li gorî lêkolîna me ya berê tengtir bû. Mezinahiya perçeyên qonaxa PMP ji ya qonaxa perçeyên silîkaya bi polîstîrenê ve girêdayî ku me berê lêkolîn kiriye hinekî mezintir e. Ev tê vê wateyê ku fonksiyonalîzasyona rûyê perçeyên silîkayê bi stîrenê tenê qatek polîstîren (0.97 µm) li ser rûyê silîkayê rijand, lê di qonaxa PMP de qalindahiya qatê 1.38 µm bû.
Belavbûna mezinahiya perçeyan (A) û belavbûna mezinahiya poran (B) ya perçeyên silîkaya saf û perçeyên silîkaya bi lîgand ve girêdayî.
Mezinahiya kunan, qebareya kunan, û rûbera rûyê perçeyên silîka yên ku di vê lêkolînê de hatine bikar anîn di Tabloya 1 (B) de têne nîşandan. Profîlên PSD yên perçeyên silîka yên saf û perçeyên silîka yên bi lîgand ve girêdayî di Şekil 3 (B) de têne nîşandan. Encam bi lêkolîna me ya berê re berawirdî bûn34. Mezinahiya kunan a perçeyên silîka yên saf û yên bi lîgand ve girêdayî bi rêzê ve 310 Å û 241 Å bûn, ku nîşan dide ku piştî guheztina kîmyewî, mezinahiya kunan bi 69 Å kêm bûye, wekî ku di Tabloya 1 (B) de tê nîşandan, û xêza guheztinê di Şekil de tê nîşandan. Rûbera rûyê taybetî ya perçeyên silîka di lêkolîna heyî de 116 m2/g e, ku bi lêkolîna me ya berê (124 m2/g) re berawirdî ye. Wekî ku di Tabloya 1 (B) de tê nîşandan, rûbera rûyê (m2/g) ya perçeyên silîka piştî guheztina kîmyewî jî ji 116 m2/g daket 105 m2/g.
Encamên analîza hêmanî ya qonaxa sabît di Tabloya 2 de têne pêşkêş kirin. Naveroka karbonê ya qonaxa sabît a heyî %6.35 e, ku ji lêkolîna me ya berê kêmtir e (parçeyên silîkayê yên bi polîstîrenê ve girêdayî, bi rêzê %7.9335 û %10.21) 42. Naveroka karbonê ya qonaxa sabît a heyî li jêr e, ji ber ku hin lîgandên polar ên wekî fenîlmaleîmîd metîl vînîl îzosîyanat (PCMP) û 4-hîdroksî-TEMPO ji bilî stîrenê di amadekirina SP de hatine bikar anîn. Rêjeya giraniya nîtrojenê di qonaxa sabît a heyî de %2.21 e li gorî %0.1735 û %0.85 di lêkolînên berê de 42. Ev tê vê wateyê ku qonaxa sabît a heyî ji ber fenîlmaleîmîdê xwedî rêjeyek giraniya nîtrojenê ya bilind e. Bi heman awayî, berhemên (4) û (5) xwedî rêjeya karbonê ya 2.7% û 2.9% ne, lê berhema dawî (6) xwedî rêjeya karbonê ya 6.35% ye, wekî ku di Tabloya 2-an de tê nîşandan. Analîza termogravîmetrîk (TGA) li ser qonaxa sabît a PMP-ê ji bo ceribandina kêmbûna giraniyê hate bikar anîn, û xêza TGA di Wêne 4-an de tê nîşandan. Xêza TGA kêmbûna giraniyê ya 8.6% nîşan dide, ku bi rêjeya karbonê (6.35%) re lihevhatî ye, ji ber ku lîgand ne tenê C, lê di heman demê de N, O û H jî dihewînin.
Lîgandê fenîlmaleîmîd-metîlvînîl îzosîyanat ji bo guhertina rûyê perçeyên silîkayê ji ber komên wê yên fenîlmaleîmîd û vînîlîzosîyanat ên polar hat hilbijartin. Komên vînîl îzosîyanat dikarin bi polîmerîzasyona radîkal a zindî bi stîrenê re reaksiyonê zêdetir bikin. Sedema duyemîn ew e ku komek were danîn ku têkiliyên nerm bi analîtê re hebin û têkiliyên elektrostatîk ên bihêz di navbera analît û qonaxa sabît de tune bin, ji ber ku beşa fenîlmaleîmîd di pH-ya normal de barek virtual tune. Polarîteya qonaxa sabît dikare bi mîqdara çêtirîn a stîrenê û dema reaksiyonê ya polîmerîzasyona radîkal a azad were kontrol kirin. Gava dawîn a reaksiyonê (polîmerîzasyona radîkal a azad) krîtîk e ji ber ku ew polarîteya qonaxa sabît diguherîne. Analîza hêmanî hate kirin da ku naveroka karbonê di van qonaxên sabît de were kontrol kirin. Hat dîtin ku zêdekirina mîqdara stîrenê û dema reaksiyonê naveroka karbonê ya qonaxa sabît zêde dike û berevajî vê. SP-yên ku bi konsantrasyonên cûda yên stîrenê hatine amadekirin barên karbonê yên cûda hene. Bi heman awayî, ev qonaxên sabît li ser stûnên pola yên zengarnegir hatin danîn û taybetmendiyên wan ên kromatografîk (bijarte, çareserî, nirxa N, hwd.) hatin kontrol kirin. Li ser bingeha van ceribandinan, pêkhateyek çêtirînkirî ji bo amadekirina qonaxa sabît a PMP hate hilbijartin da ku polarîteya kontrolkirî û ragirtina baş a analîtê peyda bike.
Stûna PMP ji bo analîzkirina pênc tevliheviyên peptîdan (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) bi karanîna kapasîteya qonaxa mobîl hate nirxandin. 60/40 (v/v) ACN/av (0.1% TFA) bi rêjeya herikîna 80 µl/min. Di bin şert û mercên elûsyonê yên çêtirîn (200,000 plaka/m2), hejmara plakayên teorîk (N) ji bo her stûnê (100 × 1.8 mm) 20,000 ± 100 e. Nirxên N ji bo sê stûnên PMP di Tabloya 3 de û kromatogram di Wêne 5A de têne nîşandan. Analîzek bilez bi rêjeya herikîna bilind (700 µl/min) li ser stûnek PMP, pênc peptîd di nav yek deqîqeyê de hatin elutekirin, nirxa N ya pir baş 13,500 ± 330 ji bo her stûnek (100 x 1.8 mm diameter), wekhevî 135,000 plaka/m2 (Wêne 5B). Sê stûnên bi heman mezinahî (diameter hundurîn 100 x 1.8 mm) bi sê beşên cûda yên qonaxa stasyonar a PMP hatin dagirtin da ku dubarekirinê biceribînin. Analît ji bo her stûnek bi veqetandina heman tevliheviya ceribandinê li ser her stûnek bi karanîna şert û mercên elusyonê yên çêtirîn, hejmara plakayên teorîk N, û dema ragirtinê hatin tomar kirin. Daneyên dubarekirinê ji bo stûnên PMP di Tabloya 4-an de têne nîşandan. Dubarekirina stûna PMP bi nirxên pir kêm ên %RSD re baş têkildar bû wekî ku di Tabloya 3-an de tê nîşandan.
Veqetandina tevliheviyên peptîdê li ser stûnek PMP (B) û stûnek Ascentis Express RP-Amîd (A), qonaxa mobîl 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), pîvanên stûna PMP (100 x 1.8 mm id), analîz Rêza derxistina pêkhateyan: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) û 5 (enkefalîn a asîda leucîk).
Stûnek PMP (bi qûtra hundirîn 100 x 1.8 mm) ji bo veqetandina hîdrolîzata trîptîk a albûmîna seruma mirovan bi HPLC hate nirxandin. Kromatografiya di Wêne 6 de nîşan dide ku nimûne bi çareseriyek pir baş veqetandî ne. Çareseriyên HSA bi karanîna rêjeya herikîna 100 μl/min, qonaxa mobîl a 70/30 asetonîtrîl/av û 0.1% TFA hatin analîzkirin. Parçekirina HSA li 17 lûtkeyan hate dabeş kirin, wekî ku di kromatogramê de (Wêne 6) tê xuyang kirin, ku bi 17 peptîdan re têkildar in. Karîgeriya veqetandina lûtkeyên takekesî ji hîdrolîzata HSA hate hesab kirin û nirx di Tabloya 5 de têne nîşandan.
Hîdrolîzatên trîptîk ên HSA li ser stûnek PMP (qûtreya hundurîn 100 x 1.8 mm), rêjeya herikînê (100 μl/min), qonaxa mobîl 60/40 asetonîtrîl/av, û 0.1% TFA hatin veqetandin.
ku L dirêjahiya stûnê ye, η vîskozîteya qonaxa mobîl e, ΔP zexta paşve ya stûnê ye, û u leza xêzikî ya qonaxa mobîl e. Permeabilîteya stûna PMP 2.5 × 10–14 m2 bû, rêjeya herikînê 25 µl/min bû, 60/40 v/v hate bikar anîn. ACN/av. Permeabilîteya stûna PMP (ID 100 × 1.8 mm) dişibiya ya lêkolîna me ya berê ya Ref.34. Permeabilîteya stûnek ku bi perçeyên rûberî poroz tije ye 1.7×10 .6 µm e, 2.5×10-14 m2 ji bo perçeyên 5 µm43. Ji ber vê yekê, permeabilîteya qonaxa PMP dişibihe permeabilîteya perçeyên navik-qalikê bi mezinahiya 5 μm.
ku Wx girseya stûna bi kloroformê tije ye, Wy girseya stûna bi metanolê tije ye, û ρ dendika çareserkerê ye. Dendika metanolê (ρ = 0.7866) û kloroformê (ρ = 1.484). Porozîteya giştî ya stûna perçeyên silica-C18 (ID 100 × 1.8 mm)34 û stûna me ya berê lêkolînkirî C18-urea31 bi rêzê ve 0.63 û 0.55 bû. Ev tê vê wateyê ku hebûna lîgandên urea permeabilîteya qonaxa sabît kêm dike. Ji hêla din ve, porozîteya giştî ya stûna PMP (qûtreya hundurîn 100 × 1.8 mm) 0.60 e. Stûnên PMP ji stûnên ku bi perçeyên silica yên bi C18 ve girêdayî ne kêmtir permeabil in ji ber ku di qonaxên sabît ên celebê C18 de lîgandên C18 bi perçeyên silica ve di zincîrên xêzikî de têne girêdan, lê di qonaxên sabît ên celebê polîstîren de polîmerek nisbeten stûr li dora perçeyan çêdibe. qata A. Di ceribandinek tîpîk de, porozîteya stûnê wiha tê hesibandin:
Li ser şekil 7A, B nexşeyên Van Deemter ji bo stûnek PMP (id 100 x 1.8 mm) û stûnek Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) di bin heman şert û mercên elûsyonê de, 60/40 ACN/H2O û 0 .1% TFA 20 µl/min heta 800 µl/min li ser her du stûnan nîşan didin. Nirxên herî kêm ên HETP di rêjeya herikîna çêtirîn (80 µl/min) de ji bo stûna PMP û stûna Ascentis Express RP-Amide bi rêzê ve 2.6 µm û 3.9 µm bûn. Nirxên HETP nîşan didin ku karîgeriya veqetandina stûna PMP (id 100 x 1.8 mm) ji ya stûna Ascentis Express RP-Amide ya bazirganî (id 100 x 1.8 mm) pir bilindtir e. Grafîka van Deemter a di Şekil 7(A) de nîşan dide ku kêmbûna nirxa N bi zêdebûna herikînê re li gorî lêkolîna me ya berê ne pir zêde ye. Karîgeriya veqetandina bilindtir a stûna PMP (id 100 × 1.8 mm) li gorî stûna Ascentis Express RP-Amide li ser bingeha şekil û mezinahiya perçeyan a çêtirkirî û prosedûra pakkirina stûnê ya sofîstîke ya ku di xebata heyî de tê bikar anîn34 e.
(A) Nexşeya Van Deemter (LEZA XETERÎ YA HETP li hember leza xêzikî ya qonaxa mobîl) li ser stûneke PMP (ID 100 x 1.8 mm) di 60/40 ACN/H2O de bi 0.1% TFA hatiye bidestxistin. (B) Nexşeya Van Deemter (LEZA XETERÎ YA HETP li hember leza xêzikî ya qonaxa mobîl) li ser stûneke Ascentis Express RP-Amide (ID 100 x 1.8 mm) di 60/40 ACN/H2O de bi 0.1% TFA hatiye bidestxistin.
Qonaxeke sabît a polar a ji polîstîrena navberkirî ji bo veqetandina tevliheviyek ji peptîdên sentetîk û hîdrolîzata trîptîk a albûmîna seruma mirovan (HSA) di kromatografiya şile ya performansa bilind de hate amadekirin û nirxandin. Performansa kromatografîk a stûnên PMP ji bo tevliheviyên peptîd di warê karîgeriya veqetandinê û çareseriyê de pir baş e. Karîgeriya veqetandina baştirkirî ya stûnên PMP ji ber çend sedeman e wekî mezinahiya perçeyên silîka û mezinahiya poran, senteza kontrolkirî ya qonaxên sabît, û materyalên pakkirina stûnên tevlihev. Ji bilî karîgeriya veqetandina bilind, avantajek din a vê qonaxa sabît zexta paşîn a stûnê ya nizm di rêjeyên herikîna bilind de ye. Stûnên PMP pir dubarekirî ne û dikarin ji bo analîzkirina tevliheviyên peptîdan û helandina trîptîk a proteînên cûrbecûr werin bikar anîn. Em niyeta me heye ku vê stûnê ji bo veqetandina pêkhateyên biyoaktîf ji hilberên xwezayî, ekstraktên nebatan derman û kivarkan di kromatografiya şile de bikar bînin. Di pêşerojê de, stûnên PMP dê ji bo veqetandina proteîn û antîkorên monoklonal jî werin nirxandin.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Lêkolîna li ser pergalên veqetandina peptîdê yên kromatografiya qonaxa berevajî beşa I: Pêşxistina protokolekê ji bo taybetmendiya stûnê. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Lêkolîna li ser pergalên veqetandina peptîdê yên kromatografiya qonaxa berevajî beşa I: Pêşxistina protokolekê ji bo taybetmendiya stûnê.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., û Petersson, P. Lêkolîna Sîstemên Veqetandina Peptîdan bi Kromatografiya Qonaxa Berevajî, Beşa I: Pêşxistina Protokolekê ji bo Taybetmendiya Stûnê. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Lêkolîna li ser pergalên veqetandina peptîdê yên kromatografiya qonaxa berevajî beşa I: Pêşxistina protokolekê ji bo taybetmendiyên stûnê. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Lêkolîna li ser pergalên veqetandina peptîdê yên kromatografiya qonaxa berevajî beşa I: Pêşxistina protokolekê ji bo taybetmendiyên stûnê.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., û Petersson, P. Lêkolîna Sîstemên Veqetandina Peptîdan bi Kromatografiya Qonaxa Berevajî, Beşa I: Pêşxistina Protokolekê ji bo Taybetmendiya Stûnê.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)".
Gomez, B. û yên din. Rêbazên ji bo çêkirina peptîdên çalak ên baştirkirî ji bo dermankirina nexweşiyên vegirtî. Biotechnology. Achievements 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptîdên dermanî yên sentetîk: Zanist û bazar. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptîdên dermanî yên sentetîk: Zanist û bazar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J û Chreschatyski M. Peptîdên dermanî yên sentetîk: zanist û bazar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J û Khreschatsky M. Peptîdên dermanî yên sentetîk: zanist û bazar. vedîtina dermanan. Îro 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografiya şileya proteomîk a pêşketî. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografiya şileya proteomîk a pêşketî.Binêre F., Smith RD û Shen Yu. Kromatografiya şileya proteomîk a pêşketî. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Berhevoka proteîna pêşkeftî 液相色谱.Binêre F., Smith RD û Shen Yu. Kromatografiya şileya proteomîk a pêşketî.J. Kromatografi. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. û yên din. Kromatografiya şile-spektrometriya girseyî ya pêşketî dikare metabolomîk û proteomîkên berfireh bi hev re bike yek. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rola UHPLC di pêşkeftina dermanan de. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Rola UHPLC di pêşkeftina dermanan de.Chesnut, SM û Salisbury, JJ Rola UHPLC di pêşkeftina dermanan de.Chesnut, SM û Salisbury, JJ Rola UHPLC di pêşveçûna dermanan de. J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. û Clausen, AM Alîyên bingehîn û pratîkî yên kromatografiya şilava bi zexta ultrabilind ji bo veqetandinên bilez. Wu, N. û Clausen, AM Alîyên bingehîn û pratîkî yên kromatografiya şilava bi zexta ultrabilind ji bo veqetandinên bilez.Wu, N. û Clausen, AM Alîyên bingehîn û pratîkî yên kromatografiya şilava bi zexta bilind ji bo veqetandina bilez. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Alîyên bingehîn û pratîkî yên kromatografiya şilavê ya zexta ultrabilind ji bo veqetandina bilez.Wu, N. û Clausen, AM Alîyên bingehîn û pratîkî yên kromatografiya şilava bi zexta bilind ji bo veqetandina bilez.J. Sep. Science. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Bikaranîna kromatografiya şile ya ultra-performansê di pêşkeftina dermanan de. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Bikaranîna kromatografiya şile ya ultra-performansê di pêşkeftina dermanan de.Ren, SA û Chelischeff, P. Bikaranîna kromatografiya şileya performansa ultra bilind di pêşkeftina dermanan de. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA û Tchelitcheff, P.Ren, SA û Chelischeff, P. Bikaranîna kromatografiya şile ya ultra-performansê di pêşveçûna dermanan de.J. Kromatografi. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. û yên din. Hîdrojeleke makroporoz a monolîtîk ku ji emulsiyoneke rûn-di-avê de bi qonaxek navxweyî ya bilind ji bo paqijkirina bi bandor a enterovirus 71 hatiye wergirtin. Kîmyewî. proje. Kovara 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rola kromatografiya şile di proteomîkê de. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rola kromatografiya şile di proteomîkê de.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. û Wilkins, JA Rola kromatografiya şile di proteomîkê de. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. û Wilkins, JA Rola kromatografiya şile di proteomîkê de.J. Kromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Trendên nû di veqetandinên kromatografiya şile ya qonaxa berevajî ya peptîd û proteînên dermankirinê de: Teorî û serîlêdan. & Guillarme, D. Trendên nû di veqetandinên kromatografiya şile ya qonaxa berevajî ya peptîd û proteînên dermankirinê de: Teorî û serîlêdan. & Guillarme, D. Tendensiyonên nû yên cuda cuda yên tedbîrên dermankirinê û belkov bi alîkarîya jedkostnoy kromatografiya bi обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. Trendên nû di veqetandina peptîd û proteînên dermankirinê de bi kromatografiya şileya qonaxa berevajî: teorî û serîlêdan. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.û Guillarmé, D. Trendên nû di veqetandina peptîd û proteînên dermankirinê de bi kromatografiya şileya qonaxa berevajî: teorî û serîlêdan.J. Pharm. Zanista Biyopizîşkî. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Veqetandina peptîdan a du-alî bi karanîna pergala RP-RP-HPLC bi pH-ya cûda di pîvanên veqetandina yekem û duyem de. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Veqetandina peptîdan a du-alî bi karanîna pergala RP-RP-HPLC bi pH-ya cûda di pîvanên veqetandina yekem û duyem de.Gilar M., Olivova P., Dali AE û Gebler JK Veqetandina peptîdan a du-alî bi karanîna pergala RP-RP-HPLC bi pH-ya cuda di pîvanên veqetandina yekem û duyem de.Gilar M., Olivova P., Dali AE û Gebler JK Veqetandina peptîdan a du-alî bi karanîna nirxên pH-ê yên cuda di pîvanên veqetandina yekem û duyem de bi karanîna pergala RP-RP-HPLC. J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. û yên din. Lêkolîna taybetmendiyên veguhastina girseyî û kînetîk ên stûnên kromatografiya performansa bilind ên ku bi perçeyên C18 yên bi tevahî poroz û rûberî poroz ên ji 2 µm piçûktir hatine pak kirin. J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. û yên din. Trendên dawî û pirsgirêkên analîtîk di veqetandin, destnîşankirin û pejirandina peptîdên biyoaktîf ên nebatan de. anus. Cewher anal. Kîmyewî. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB û yên din. Peyzaja proteomîk a padîşahiya jiyanê. Xweza 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. û yên din. Piştî dermankirina peptîdên dermankirinê bi kromatografiya şileya amadekar. Molecules (Basel, Swîsre) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepandinên wê li ser bîopolîmeran. Yang, Y. & Geng, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepandinên wê li ser bîopolîmeran.Yang, Yu. û Geng, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepandina wê li ser biyopolîmeran. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepandina wê di bîyopolîmeran de.Yang, Yu. û Gene, X. Kromatografiya moda tevlihev û sepandina wê li ser biyopolîmeran.J. Kromatografi. A 1218(49), 8813–8825 (2011).