Spas ji bo serdana Nature.com. Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgiriya CSS-ê bi sînor e. Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê di Internet Explorer-ê de neçalak bikin). Di vê navberê de, ji bo ku piştgiriya domdar misoger bikin, em ê malperê bêyî şêwaz û JavaScript-ê nîşan bidin.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) nebatek legumîn e ku ji bo hilberîna xwarinê û başkirina axê tê bikar anîn. Berfirehbûna gerdûnî ya NLL wekî çandiniyek gelek fungên nexweşî kişandiye, di nav de lupine anthracnose, ku dibe sedema nexweşiya anthracnose ya wêranker. Du alel, Lanr1 û AnMan, ku berxwedana zêde didin, di çandina NLL de hatine bikar anîn, lê mekanîzmayên molekulî yên bingehîn nayên zanîn. Di vê lêkolînê de, nîşankerên Lanr1 û AnMan ji bo ceribandina nimûneyên NLL yên Ewropî hatin bikar anîn. Ceribandina vakslêdanê di hawîrdorek kontrolkirî de bandora her du donorên berxwedêr piştrast kir. Profîla îfadeya genê ya cûda li ser xetên nûner ên berxwedêr û hesas hate kirin. Berxwedana anthracnose bi zêde îfadeya termên ontolojiya genê "GO:0006952 Bersiva Parastinê", "GO:0055114 Pêvajoya Redoksê", û "GO:0015979 Fotosentez" ve girêdayî bû. Herwiha, xeta Lanr1(83A:476) piştî derzîkirinê ji nû ve bernamekirina transkrîptomê ya girîng bi lez nîşan da, di heman demê de xetên din di vê bersivê de bi qasî 42 demjimêran derengketin nîşan dan. Bersivên parastinê bi genên TIR-NBS, CC-NBS-LRR û NBS-LRR, 10 proteînên ku di patogenezê de beşdar in, proteînên veguheztina lîpîdan, endoglûkan-1,3-β-glukozîdaz, proteînên dîwarê şaneyê yên dewlemend bi glîsîn, û genên ji rêya reaktîf a oksîjenê ve girêdayî ne. Bersivên zû yên ji bo 83A:476, di nav de tepeserkirina baldar a genên ku bi fotosentezê ve girêdayî ne, bi parastina serketî di qonaxa mezinbûna vegjetatîf a biyolojiya fungî de re hevdem bûn, ku ev yek nîşan dide ku bandorkerek parastinê çalak dike. Reaksiyona Mandeloop hêdî dibe, û her weha kişandina horizontî ya giştî jî.
Lupina pelên teng (NLL, Lupinus angustifolius L.) genimek proteîna bilind e ku ji herêma rojavayê Deryaya Spî derketiye holê1,2. Niha wekî berhemeke xwarinê ji bo heywan û mirovan tê çandin. Her wiha di sîstemên zivirîna çandiniyê de ji ber girêdana nîtrojenê ji hêla bakteriyên sîmbiyotîk ên girêdana nîtrojenê û başbûna giştî ya avahiya axê ve wekî gubreya kesk tê hesibandin. NLL di sedsala dawî de pêvajoyek bilez a kedîkirinê derbas kiriye û hîn jî di bin zexta cotbûnê ya bilind de ye3,4,5,6,7,8,9,10,11,12. Bi çandina berfireh a NLL re, rêzeçiyayên fungî yên patogenîk nişên çandiniyê yên nû pêş xistin û nexweşiyên nû yên ku çandiniyê wêran dikin çêkirin. Ji bo cotkar û xwedîkerên lupinê tiştê herî berbiçav hebûna antraknozê bû, ku ji hêla fungusa nexweşînîk, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve çêbû. Ji bo cotkar û xwedîkerên lupinê tiştê herî berbiçav hebûna antraknozê bû, ku ji hêla fungusa nexweşînîk, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve çêbû. Naibolee примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление antraknoza, вызванного патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ji bo cotkar û xwedîkerên lupinê tiştê herî berbiçav derketina holê ya antraknozê bû ku ji ber fungusa nexweşîn Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 çêbû.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是猱lleumtrich (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是猱lleumtrich (Bondar)嵵Haired. 1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление antraknoza, вызываемого патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Tiştê herî balkêş ji bo cotkar û xwedîkerên lupinê derketina holê ya antraknozê ye ku ji ber fungusa nexweşîn Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 çêdibe.Destpêktirîn raporên nexweşiyê ji Brezîlya û Dewletên Yekbûyî yên Amerîkayê hatin, û nîşanên tîpîk bi rêzê ve di salên 1912 û 1929an de derketin. Lêbelê, piştî nêzîkî 30 salan, patojen wekî Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz hate binavkirin. & Sacc., teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorfa Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld di Morfolojiya Armanckirî de. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.û H. Schrenk. & H.施伦克，. & H.施伦克，.û H. Schlenk,.Fenotîpkirina destpêkê ya nexweşiyan ku di nîvê sedsala 20-an de hatiye kirin, di celebên NLL û lupine zer (L. luteus L.) de hin berxwedan nîşan da, lê hemî celebên lupine spî (L. albus L.) ên ku hatine ceribandin pir hesas bûn15,16. Lêkolînan nîşan dane ku pêşveçûna antraknozê bi zêdebûna barînê (şilbûna hewayê) û germahiyê (di navbera 12-28°C de) ve girêdayî ye, ku dibe sedema binpêkirina berxwedanê di germahiyên bilindtir de17, 18. Bi rastî, dema ku ji bo şînbûna konîdyayê û destpêkirina nexweşiyê hewce bû, di 24°C (4 demjimêran) de çar caran kurttir bû ji 12°C (16 demjimêran) di bin şert û mercên şilbûna bilind de19. Bi vî rengî, germbûna gerdûnî ya berdewam bûye sedema belavbûna antraknozê. Lêbelê, nexweşî li Fransa (1982) û Ukraynayê (1983) wekî pêşengê gefek nêzîk hate dîtin, lê xuya ye ku ji hêla pîşesaziya lupinê ve di wê demê de hate paşguh kirin20,21. Çend sal şûnda, ev nexweşiya wêranker li seranserê cîhanê belav bû û bandor li welatên sereke yên hilberînerên lupinê yên wekî Avusturalya, Polonya û Almanya jî kir22,23,24. Piştî belavbûna antraknozê di nîvê salên 1990-an de, lêkolînek berfireh bû sedema destnîşankirina çend donorên berxwedêr di nimûneyên NLL19 de. Berxwedana NLL ya li hember antraknozê ji hêla du alelên serdest ên cuda ve tê kontrol kirin ku di çavkaniyên cûda yên germplazmê de têne dîtin: Lanr1 di kultîvara Tanjil û Wonga de û AnMan di kultîvarê de. Mandalay 25, 26. Ev alel nîşankerên molekulî yên ku piştgirî didin hilbijartina germplazma berxwedêr di bernameyên çandiniyê de temam dikin25,26,27,28,29,30. Xeta cotbûnê ya berxwedêr 83A:476 ku alela Lanr1 hildigire, bi xeta kovî ya hesas P27255 re hate xaçkirin da ku nifûseke RIL-ê ya ji bo berxwedana antrakonozê veqetandî were bidestxistin, ku ev yek gengaz kir ku cihê Lanr1 bi kromozomê NLL-1131, 32, 33 ve were destnîşankirin. Bi hevrêzkirina nîşankerên nexşeya girêdanê ji cihên berxwedanê yên alîgir ber bi antrakonozê ve bi çarçoveyek genomîk, NLL cihê her sê alelan li ser heman kromozomê (NLL-11) eşkere kir, lê di pozîsyonên cûda de29,34,35. Lêbelê, ji ber hejmara piçûk a RIL-an û dûrbûna genetîkî ya mezin di navbera nîşanker û alelên têkildar de, der barê genên wan ên bingehîn de tu encamên pêbawer nayên derxistin. Ji aliyekî din ve, karanîna genetîka berevajî di lupinan de ji ber potansiyela wan a pir kêm a ji nû ve vejînê dijwar e, ku manîpulekirina genetîkî dijwar dike37.
Pêşveçûna germplazmaya kedîkirî ku alela xwestî di rewşa homozîgot de hildigire, wek 83A:476 (Lanr1) û Mandelup (AnMan), deriyê lêkolîna berxwedana antraknozê li hember hebûna kombînasyonên dijber ên alelan di nifûsên kovî de vekiriye. Îhtîmalên mekanîzmayên molekulî. Bersivên parastinê yên ku ji hêla genotîpên taybetî ve têne çêkirin bidin ber hev. Vê lêkolînê bersiva transkrîptomê ya zû ya NLL ji bo vakslêdana C. lupini nirxand. Pêşî, panelek germplazmaya NLL ya Ewropî ku 215 xêzan dihewîne bi karanîna nîşankerên molekulî yên ku alelên Lanr1 û AnMan nîşan dikin, hate kontrol kirin. Dûv re fenotipkirina antraknozê li ser 50 xetên NLL, ku berê ji bo nîşankerên molekulî hatine hilbijartin, di bin şert û mercên kontrolkirî de hate kirin. Li ser bingeha van ceribandinan, çar xetên ku di berxwedana antraknoz û pêkhateya alelîk a Lanr1/AnMan de ji hev cûda ne, ji bo profîlkirina îfadeya gena parastinê ya cûda bi karanîna du nêzîkatiyên temamker hatin hilbijartin: rêzkirina RNA ya bi rêjeya bilind û hejmartina PCR-ya rast-dem.
Lêkolîna komek germplazmaya NLL (N = 215) bi nîşankerên Lanr1 (Anseq3 û Anseq4) û AnMan (Anseq4) û AnMan (AnManM1) nîşan da ku tenê rêzek (95726, nêzîkî Salamanca-b) alela "berxwedanê" ji bo hemî nîşankeran zêde dike, di heman demê de "Hebûna alelên 'hesas'" rêjeya hemî nîşankeran di 158 (~73.5%) rêzan de dît. Sêzdeh rêzan du alelên "berxwedêr" ên nîşankera Lanr1 hilberandin, û 8 rêzan alelên "berxwedêr" ên nîşankera Lanr1 hilberandin. Alela "berxwedanê" ya nîşankera AnMan (Tabloya Pêvek S1). Du rêz ji bo nîşankera Anseq3 û yek ji bo nîşankera AnManM1 heterozîgot bûn. 42 rêz (19.5%) qonaxên dijberî yên alelên Anseq3 û Anseq4 hilgirtin, ku frekansek bilind a ji nû ve kombînasyonê di navbera van her du cihan de nîşan dide. Fenotîpên antraknozê di bin şert û mercên kontrolkirî de (Tabloya Pêvek S2) guherbariya di berxwedana genotîpên ceribandî de eşkere kir, ku ev yek di giraniya antraknozê de jî diyar bû. Cûdahiyên di puanên navînî de ji 1.8 (berxwedêrek navîn) heta 6.9 (hesas) û cûdahiyên giraniya nebatan ji 0.62 (hesas) heta 4.45 g (berxwedêr) diguherin. Di navbera nirxên ku di du dubarekirinên ceribandinê de hatine dîtin (0.51 ji bo puanên giraniya nexweşiyê, P = 0.00017 û 0.61 ji bo giraniya nebatan, P < 0.0001) û her weha di navbera van her du parametreyan de (-0.59 û -0.77, P < 0.0001) têkiliyek girîng hebû. Di navbera nirxên ku di du dubarekirinên ceribandinê de hatine dîtin (0.51 ji bo puanên giraniya nexweşiyê, P = 0.00017 û 0.61 ji bo giraniya nebatê, P < 0.0001) û her weha di navbera van her du parametreyan de (-0.59 û -0.77, P < 0.0001) têkiliyek girîng hebû. 0,51 ji bo ballovan, P = 0,00017 û 0,61 ji sedî 0,61 û 0,61 ji sedî 0,00017 û 0,61 ji sedî 0,0017 û 0,61 ji sedî 10,01 этими двумя параметри (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001). Di navbera nirxên ku di du dubarekirinên ceribandinê de hatine dîtin (0,51 ji bo puanên giraniya nexweşiyê, P = 0,00017 û 0,61 ji bo giraniya nebatan, P < 0,0001), û her weha di navbera van her du parametreyan de (- 0,59 û -0,77, P < 0,0001) 0,0001) têkiliyek girîng hat dîtin.在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分严0. 0.00017，植物重量为0.61，P < 0.0001）以及这两个参数之间（- 0.59 和- 0.77，001.在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程庈 䆄 踄分为 0,51 ， p = 0,00017 , 植物 为 为 0,61 ， p <0,0001） 以及0,59 和 – 0,59 和 - 0,59-- 0,77,P < 0,0001). Nablyudalasь mezinbûna korrelyaciya navgînên girîng, nivîsbarên di nav her yek ji nû de (nirxandina 0,51, P = 0,00017 û mezinbûna mezin 0,61, P <0,0001, mîqdara 5,0001), и -0,0001) 0,77, P <0,0001. Di navbera nirxên ku di dubareyan de hatine dîtin (puana giraniya nexweşiyê 0.51, P = 0.00017 û giraniya nebatê 0.61, P < 0.0001) û di navbera van her du parametreyan de (-0.59 û -0 .0001) 0.77, P<0.0001, têkiliyek girîng hebû. ).Nîşaneyên tîpîk ên ku di nebatan de hesas têne dîtin ev in: çemandin û zivirîna qurmê ku dişibihe avahiyek "kevana şivan", û dûv re jî birînên oval bi sporozoîtên porteqalî/pembeyî (Wêneya Pêvek 1). Nebatên Awustralyayî yên ku genên Lanr1 (83A:476 û Tanjil) û AnMan (Mandelup) hildigirin, bi nermî berxwedêr in, 0.0331 û 0.0036). Hin xetên ku alelên Lanr1 û/an AnMan ên "berxwedêr" jî hildigirin nîşanên nexweşiyê nîşan didin.
Balkêş e ku çend xetên NLL yên ku ti alelek nîşanker a "berxwedêr" tunebûn, astek bilind a berxwedana antraknoz nîşan dan (berawirdî an jî ji genotîpên Lanr1 an AnMan bilindtir), wek Boregine (nirxa P < 0.0001 ji bo her du parametreyan), Bojar (nirxa P < 0.0001 ji bo xalê û 0.001 ji bo giraniya nebatê) û Populasyona B-549/79b (nirxa P < 0.0001 ji bo xalê û ne girîng ji bo giraniyê). Balkêş e ku çend xetên NLL yên ku ti alelek nîşanker a "berxwedêr" tunebûn, astek bilind a berxwedana antraknoz nîşan dan (berawirdî an jî ji genotîpên Lanr1 an AnMan bilindtir), wek Boregine (nirxa P < 0.0001 ji bo her du parametreyan), Bojar (nirxa P < 0.0001 ji bo xalê û 0.001 ji bo giraniya nebatê) û Populasyona B-549/79b (nirxa P < 0.0001 ji bo xalê û ne girîng ji bo giraniyê). Naveroka, что несколько линий NLL, kêmasiya wekî "rezistentnogo" nîşaneya allelya, nîşan dide ku antaraknozu (сопоставимый или более высокий, чем для кагентах, чем для Laknr), Boregine (nirxa P <0,0001 ji bo nirxa parametrov), Bojar (nirxa P < 0,0001 ji bo nirx û 0,001 ji bo mezinbûna mezinbûnê) û populerbûna B-549/79b (navdêra P <0,0001 ji bo giraniya zêdebûnê) незначимо для массы). Balkêş e ku çend xetên NLL yên ku ti alelek nîşanker a 'berxwedêr' tunebûn, astek bilind a berxwedanê li hember antraknozê nîşan dan (bi genotîpên Lanr1 an AnMan re berawirdî an jî ji wan bilindtir), wek Boregine (nirxa P < 0,0001 ji bo her du parametreyan ), Bojar (nirxa P < 0,0001 ji bo nirxandinê û 0,001 ji bo giraniya nebatê) û nifûsa B-549/79b (nirxa P < 0,0001 ji bo nirxandinê û ji bo giraniyê ne girîng).有趣的是，一些缺乏任何"抗性"标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭r.或AnMan 基因型相当或更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分为0.0001，植物重量为0.001）和种群B-549/79b（得分P 值< 0.0001，重阾为 Balkêş e ku hin sîstemên NLL ku nîşankerên "antîjenîk" nînin, berxwedanek bilind a horizontî nîşan didin (wekhevî genên Lanr1 an AnMan an jî bilindtir), wek Boregine (her du parametre jî P < 0.0001), Bojar (nirxa P < 0.0001, giraniya nebatê 0.001) û şaneya B-549/79b (nirxa P < 0.0001, giranî ne girîng e). Interesno, что некоторые линии NLL, lisennыe kakih-libo маркерных аллелей «резистентности», nîşan dide vысокие уровни устойчивости к antraknozu (sravnimыe an bêtir, chm li genotipov Lanr1) parametrov <0,0001), Bojar (nirxa P <0,0001, 0,001 mezinbûna mezin) û populerbûna B-549/79b (nirxa P-nîşana <0,0001, масса незначительна). Balkêş e ku hin xetên NLL yên ku ti alelên nîşanker ên 'berxwedanê' tune ne, astên bilind ên berxwedana antraknoz nîşan dan (bi genotîpên Lanr1 an AnMan re berawirdî an jî ji wan bilindtir), wek Boregine (nirxa P ji bo her du parametreyan <0.0001), Bojar (nirxa P < 0.0001, giraniya nebatê 0.001) û nifûsa B-549/79b (nirxa P < 0.0001, giranî ne girîng).Ev diyarde îhtîmala çavkaniyek genetîkî ya nû ya berxwedanê nîşan dide, û nebûna têkiliya di navbera genotîpên nîşanker û fenotipên nexweşiyê de (nirxên P ji ~0.42 heta ~0.98) rave dike. Bi vî awayî, testa Kolmogorov-Smirnov nîşan da ku daneyên li ser berxwedana antraknozê ji bo xalan (nirxên P 0.25 û 0.11) û girseya nebatan (nirxên P 0.47 û 0.55) bi awayekî normal hatine belavkirin, ku ev yek pêşniyar dike ku ez texmîn dikim ku ji Lanr1 û AnMan bêtir alel tê de hene.
Li gorî encamên ceribandina berxwedana antraknoz, 4 xet ji bo analîza transkrîptomê hatin hilbijartin: 83A:476, Boregine, Mandelup, û Populasyona 22660. Ev xet di ceribandinên derzîkirinê de bi rêzkirina RNA-yê ji bo berxwedana antraksê ji nû ve hatin ceribandin, bi şertê ku ew wekî testa berê bin. Nirxên puanan wiha bûn: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) û populasyona 22660 (6.11 ± 1.29).
Protokola Illumina NovaSeq 6000 bi navînî 40.5 cotên Mread li ser her nimûneyê bi dest xist (29.7 heta 54.4 Mreads) (Tabloya Pêvek S3). Pûanên hevrêziyê di rêza referansê de ji %75.5 heta %88.6 diguhere. Têkiliya navînî ya daneyên hejmartina xwendinê di navbera guhertoyên ceribandinê de di navbera dubarekirinên biyolojîkî de ji 0.812 heta 0.997 diguhere (navînî 0.959). Ji 35,170 genên ku hatine analîzkirin, 2917an de tu îfade nîşan nedan, û 4785 genên din di asteke hindik de hatin îfadekirin (navîniya bingehîn < 5). Ji 35,170 genên ku hatine analîzkirin, 2917an de tu îfade nîşan nedan, û 4785 genên din di asteke hindik de hatin îfadekirin (navîniya bingehîn < 5). Ji 35 170 vekolînên genovên 2917 ne ekspressiy e, û ji 4785 genov ekspresirovalisь li ser ne girîngên rojê (bazirganiya navîn <5). Ji 35,170 genên ku hatine analîzkirin, 2917an tu îfade nîşan nedan, û 4785 genên mayî di asteke hindik de hatin îfadekirin (navîniya bingehîn <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785个基因的表达可以忽略不计（基本平均值< 5）。35,170 Ji 35 170 vekolînên genov 2917 ne ekspressirovaliz bûn, û ji 4785 genov nehatine binavkirin (navdêra navîn <5). Ji 35,170 genên ku hatine analîzkirin, 2917 nehatine îfadekirin û 4785 genên mayî jî îfadeya wan hindik e (navîniya bingehîn <5).Ji ber vê yekê, hejmara genên ku di dema ceribandinê de hatine îfadekirin (navîniya bingehîn ≥ 5) 27,468 (%78.1) bû (Tabloya Pêvek S4).
Ji xala demê ya yekem ve, hemî xetên NLL bi ji nû ve bernamekirina transkrîptomê bersiv dan derzîkirina C. lupini (şaneya Col-08) (Tabloya 1), lêbelê, cûdahiyên girîng di navbera xetên de hatin dîtin. Bi vî awayî, xeta berxwedanê 83A:476 (ku gena Lanr1 hildigire) di xala demê ya yekem de (6 hpi) ji nû ve bernamekirina transkrîptomê ya girîng nîşan da, bi zêdebûna 31-69 qat di hejmara genên jorîn û jêr ên îzolekirî de li gorî xalên demê yên din di vê xala demê de. Wekî din, ev lûtke kurt-temen bû, ji ber ku îfadeya tenê çend genan di xala demê ya duyemîn de (12 hpi) bi girîngî guherî ma. Balkêş e ku Boregine, ku di testa graftê de jî astek bilind a berxwedanê nîşan da, di dema ceribandinê de ji nû ve bernamekirina transkrîpsiyonê ya ewqas mezin derbas nebû. Lêbelê, hejmara genên bi cûdahî îfadekirî (DEG) ji bo Boregine û 83A:476 di 12 HPI de wekhev bû. Hem Mandelup û hem jî nifûsa 22660 di xala demê ya dawî de (48 l/s) lûtkeyên DEG nîşan dan, ku ev yek nîşan dide ku bersivên parastinê derengketinek nisbî heye.
Ji ber ku 83A:476 li gorî hemû xetên din di bersiva C. lupini de bi rêjeya 6 HPI ji nû ve bernamekirina transkrîptomê ya mezin derbas kir, ~%91ê DEG-yên ku di vê demê de hatine dîtin taybetî rêzê bûn (Wêne 1). Lêbelê, di bersivên destpêkê de di navbera xetên lêkolînê de hin hevgirtin hebû, ji ber ku bi rêzê ve 68.5%, 50.9%, û 52.6% DEG li Boregine, Mandelup, û nifûsa 22660, bi yên ku di 83A:476 de di hin xalan de hatine dîtin, hevgirtin pêk anîn. Lêbelê, van DEG-yan tenê beşek piçûk (0.97–1.70%) ji hemû DEG-yên ku niha bi karanîna 83A:476 hatine tespîtkirin pêk tînin. Herwiha, di vê demê de 11 DEG ji hemî rêzan hevgirtî bûn (Tabloyên Pêvek S4-S6), di nav de pêkhateyên hevpar ên bersivên parastina nebatan: proteîna veguhastina lîpîdan (TanjilG_32225), enzîma endoglûkan-1,3-β-glûkozîd (TanjilG_23384), du proteînên ku ji stresê bandor dibin mîna SAM22 (TanjilG_31528 û TanjilG_31531), proteîna lateksê ya bingehîn (TanjilG_32352), û du proteînên dîwarê şaneyê yên avahîsaziyê yên dewlemend bi glîsîn (TanjilG_19701 û TanjilG_19702). Her wiha di bersivên transkrîptomê de di navbera 83A:476 û Boregine de li 24 HPI (bi tevahî 16-38% DEG) û di navbera Mandelup û Population 22660 de li 48 HPI (bi tevahî 14-20% DEG) de hevgirtinek nisbeten zêde hebû.
Diyagrama Venn ku hejmara genên bi awayên cuda îfadekirî (DEG) di xetên lupine yên pel-teng (NLL) de nîşan dide ku bi Colletotrichum lupini (cureya Col-08 ji zeviyên lupine li Wierzhenice, Polonya, 1999) hatine derzîkirin. Xetên NLL yên ku hatine analîzkirin ev in: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nediyar), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan hildigire) û nifûsa 22660 (pir hesas). Kurtenivîsa hpi ji bo demjimêrên piştî derzîkirinê ye. Nirxên sifir hatine rakirin da ku grafîkê hêsan bikin.
Koma genên zêde-derbirî li 6 hpi ji bo hebûna domainên gena R ya kanonîk hate analîzkirin (Tabloya Pêvek S7). Vê lêkolînê tenê li 83A:476 enduksîyona transkrîptomê ya genên berxwedana nexweşiyê yên klasîk bi domainên NBS-LRR eşkere kir. Ev kom ji yek gena TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), pênc genên CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, û tanjilg_16162), û çar NBS-LR, Tanjilg_16162), û çar NBS-LRRE (tanjilg_16162) û her weha çar NBS-Lrr (tanjilg_16162) û çar NBS-LRR (TANJILG_16162) pêk dihat. Hemî van genan domainên kanonîk hene ku di rêzikên parastî de hatine rêzkirin. Ji bilî genên domaina NBS-LRR, çend kînazên RLL di 6 hpi de hatin çalakirin, ango yek li Boregine (TanjilG_19877), du li Mandelup (TanjilG_07141 û TanjilG_19877) û di nifûsa 22660 (TanjilG_09014 û TanjilG_10361) û du li 83A 27:476.
Genên ku di bersiva derzîkirina bi C. lupini (şaneya Col-08) de îfadeya wan bi awayekî girîng guheriye, ji analîza dewlemendkirina Ontolojiya Genan (GO) re derbas bûn (Tabloya Pêvek S8). Terma pêvajoya biyolojîkî ya herî zêde tê temsîlkirin "GO:0006952 bersiva parastinê" bû ku di 6 ji 16 kombînasyonên (dem × rêz) de bi girîngiya bilind (nirxa P < 0.001) xuya bû (Wêne 2). Terma pêvajoya biyolojîkî ya herî zêde tê temsîlkirin "GO:0006952 bersiva parastinê" bû ku di 6 ji 16 kombînasyonên (dem × rêz) de bi girîngiya bilind (nirxa P < 0.001) xuya bû (Wêne 2). Têkiliya pêvajoya biyolojîkî ya "GO: 0006952 ji bo bersivê", ku ji 6 ji 16 (vremya × lîniya) têkeliya bi высокой (0006952) tê bikaranîn. Terma pêvajoya biyolojîkî ya herî zêde tê temsîlkirin 'GO:0006952 bersiva parastinê' bû, ku di 6 ji 16 kombînasyonên (dem × rêz) de bi girîngiya bilind (nirxa P < 0.001) xuya bû (Wêne 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16个（时间×线）组合中的6 个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）。 Terma pêvajoya biyolojîkî ya herî nûner "GO:0006952 bersiva parastinê" ye, ku di 6 ji 16 kombînasyonên (时间×线) de xuya dike, bi girîngiya bilind (nirxa P < 0.001) (图2). Bişkojka "GO: 0006952 Defence Response", kotorыy poyavlyalsya di 6 ji 16 kombinaciy (vremya × liniya) bi vысокой значимость0, (00 P) bi nirxa biyolojîkî (000P) (2.2 P). Terma pêvajoya biyolojîkî ya herî zêde tê temsîlkirin 'GO:0006952 Bersiva Parastinê' bû, ku di 6 ji 16 kombînasyonan de (dem × rêz) bi girîngiya bilind (nirxa P < 0.001) xuya bû (Wêne 2).Ev term di du demên 83A de zêde hate temsîlkirin: 476 û Boregine (6 û 24 hpi) û di demekê de di Mandelup û Populasyona 22660 de (bi rêzê ve 12 û 6 hpi). Ev encamek bendewar e, ku bersiva dijî-fungî ya xetên berxwedêr ronî dike. Wekî din, 83A:476 bi lez û bez genên têkildarî teqîna oksîdatîf a ku bi peyva "GO:0055114 pêvajoya redoks" tê temsîlkirin, bersiv da C. lupini, di heman demê de Boregine bersivên parastinê yên taybetî eşkere kir, ku bi peyva 'GO' ve girêdayî ne. :0006950 Bersiva stresê". Populasyona 22660 bersiva berxwedana horizontî ya ku metabolîtên duyemîn tê de hene çalak kir, ku hejmara zêde ya termên "GO:0016104 Pêvajoya bîyosenteza trîterpenê" û "GO:0006722 Pêvajoya metabolîzma trîterpenê" (her du term jî ji heman koma genan in) ronî dike, dema ku encamên analîza dewlemendkirina terma GO têne hesibandin, aramiya reaksiyona Mandelup di navbera Boregine û Populasyona 22660 de bû. Wekî din, reaksiyona zû 83A:476 (6 hpi) û reaksiyona derengmayî ya Mandelup û Populasyona 22660 terma GO:0015979 'fotosentez' û pêvajoyên biyolojîkî yên din ên têkildar vedihewîne.
Termên ontolojiya gena bioprosesê yên ku di şîrovekirina genên bi awayên cuda di dema bersivên transkrîptomê yên lupina pel-teng (NLL) de hatine hilbijartin ku bi lupina antraksê (cureya Col-08 ku di sala 1999an de ji zeviyên lupinê li Wierzhenice, Polonya hatiye bidestxistin) hatine derzîkirin, pir zêde hatine zêdekirin. Xetên NLL yên ku hatine analîzkirin ev bûn: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî ya nediyar), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire) û nifûsa 22660 (hesas).
Ji ber ku armanca vê lêkolînê ew bû ku genên ku beşdarî berxwedana antrakonozê dibin destnîşan bike, genên ku ji bo termên GO "GO: 0006952 Bersivên Parastinê" û "GO: 0055114 Pêvajoyên Redoksê" hatine destnîşankirin, bi qutkirinan hatin analîzkirin ji ber ku navînîya bingehîn ≥ 30 bi herî kêm yek xêz. × xala demê nirxên girîng ên îstatîstîkî yên log2 (guherîna qat) li hev dicivîne. Hejmara genên ku van pîvanan bicîh tînin ji bo GO:0006952 65 û ji bo GO:0055114 524 bû.
83A:476 du lûtkeyên DEG eşkere kirin ku bi peyva GO:0006952 hatine nîşankirin, ya yekem li 6 genan di her înçekê de (64 gen, rêziknameya jor û jêr) û ya duyem li 24 genan di her înçekê de (15 gen, tenê rêziknameya jor). Boregine her wiha nîşan da ku GO:0006952 di heman demê de gihîştiye lûtkeyê, lê bi kêmtir DEG (11 û 8) û aktîvasyona tercîhî. Mandeloop du lûtkeyên GO:0006952 li 12 û 48 HPI nîşan da, her du jî 12 gen hildigirtin (ya yekem bi genên aktîvker, û ya duyem tenê bi genên tepeserker), di heman demê de nifûsa 22660 li 6 HPI (13 gen) serdestiyek mezintir a rêziknameya lûtkeya zêdebûnê hebû. Divê were zanîn ku 96.4% ji GO:0006952 DEG di van lûtkeyan de heman celeb bersiv (jor an jêr) hebû, ku nîşan dide ku hevgirtinek girîng di bersivên parastinê de tevî cûdahiyên di hejmara genên têkildar de heye. Mezintirîn koma rêzikên bi terma GO:0006952 ve girêdayî Starvation Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22-like) kod dike, ku girêdayî proteîna girêdayî patogeneza pola 10 (PR-10) û proteîna core protein lateks (MLP-like) proteîn) e (Wêne 3). Her du kom di cewherê îfadeyê û rêça bersivê de ji hev cuda bûn. Genên ku proteînên mîna SAM22 kod dikin di xalên demê yên destpêkê (6 an 12 hpi) de enduksîyonek domdar û girîng nîşan dan û bi gelemperî di dawiya ceribandinê de (48 hpi) bêbersiv man, di heman demê de proteînên mîna MLP di 6 hpi de koordînasyon nîşan dan. hpi. 83A:476 û Mandelup di 48 hp/in de, hema hema hemî xalên daneyên din bêbersiv man. Wekî din, cûdahiyên di profîlên îfadeyê yên genên proteîna mîna SAM22 de li dû guherbariya çavdêrîkirî di berxwedana antraknozê de çûn, ji ber ku xetên berxwedêrtir xalên demê yên ku van genan bi girîngî teşwîq dikirin ji genên hesastir zêdetir bûn. Geneke din a PR-10 a dişibihe LlR18A/B şêwazek îfadeyê ya pir dişibihe gena proteîna dişibihe SAM22 nîşan da.
Pêkhateyên sereke yên terma pêvajoya biyolojîk "GO:0006952 Bersiva Parastinê" û qalibên îfadeya genên namzed ên alelên Lanr1 û AnMan hatin destnîşankirin. Pîvana Log2 nirxên log2 (guherîna qat) di navbera nebatan de yên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ji zeviyên lupinê, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatan kontrolkirî (bi derzîkirina sexte) di heman demê de temsîl dike. Xetên lupinê yên pel-teng ên jêrîn hatin analîzkirin: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nediyar), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire), û Population 22660 (hesas).
Herwiha, profîlên îfadeya genên namzetên RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) û AnMan (TanjilG_12861) hatin nirxandin (Wêne 3). Gena TanjilG_05042 tenê di xala demê ya yekem de (6 hpi) di 83A:476 de bersivek girîng (çalakkirin) nîşan da, lê TanjilG_12861 tenê di du xalên demê de li Mandeloop girîng bû: 6 hpi (rêziknameya dakêşanê) û 24 hpi (6 hpi). Bi.). verastkirî) ).
Genên herî zêde îfadekirî di terma GO:0055114 "pêvajoya redoks" de genên ku proteînên sîtokrom P450 û peroksîdazê kod dikin bûn (Wêne 4). Ji bo nimûneyên ji 83A:476 di 6 HPI de hatine îzolekirin, nirxên herî zêde an herî kêm log2 (guherîna qat) (ji bo 86.6% genan) bi gelemperî di navbera nebatan de hatine derzîkirin û kontrolê de hatine dîtin, ku bersiva bilind a vê genotîpê ji bo zayenda derzîkirî nîşan dide. 83A:476 GO: 0055114 DEG ya herî girîng di 6 hpi de nîşan da (503 gen), dema ku rêzên mayî di 48 hpi de (Boregine, 31 gen; Mandelup, 85 gen; û Population 22660, 78 gen)). Di piraniya genên malbata GO:0055114 de, du celeb bersivên ji bo derzîkirinê (çalakkirin û astengkirin) hatine dîtin. Balkêş e ku heta %97.6ê DEG-yan ji bo terma GO: 0055114 li Mandelupe bi 48 hp hatine destnîşankirin. Ev çavdêrî nîşan didin ku, tevî pîvana pir piçûktir (ango, hejmara genên redoks ên mutasyonkirî, 85 li hember 503), şêweya bersivên transkrîptom ên derengmayî yên mandeloup ji bo anthracnose dişibihe bersiva zû ya 83A:476. Di Boregine û Populasyona 22660 de, ev hevgirtin bi rêzê ve %51.6 û %75.6 kêmtir e.
Şêweyên derbirîna pêkhateyên sereke yên terma pêvajoya biyolojîk "GO:0055114 pêvajoya Redoksê" hatin eşkerekirin. Pîvana Log2 nirxên log2 (guherîna qat) di navbera nebatan de yên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ji zeviyên lupinê, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatan kontrolkirî (bi derzîkirina sexte) di heman demê de temsîl dike. Xetên lupinê yên pel-teng ên jêrîn hatin analîzkirin: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nediyar), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire), û Populasyona 22660 (hesas).
83A:476 Bersivên transkrîptomîk ên ji bo derzîkirina bi C. lupini (cureya Col-08) her wiha bêdengkirina hevrêzkirî ya genên ku bi terma GO:0015979 "fotosentez" û pêvajoyên din ên biyolojîkî yên têkildar ve girêdayî ne jî dihewîne (WÊNE 5). Ev koma GO:0015979 DEG 105 gen dihewîne ku di 6 hpi de di 83A:476 de bi girîngî hatine tepeserkirin. Di vê binkomê de, 37 gen jî li Mandelup di 48 HPI û 35 de di heman demê de di nifûsa 22660 de kêm bûne, di nav de 19 DEG yên hevpar ji bo her du genotîpan. Di tu kombînasyonê de (xet x dem) tu DEG-yên bi terma GO: 0015979 ve girêdayî bi girîngî nehatine çalak kirin.
Şêweyên derbirîna pêkhateyên sereke yên terma pêvajoya biyolojîk "GO:0015979 Fotosentez" hatin eşkerekirin. Pîvana Log2 nirxên log2 (guherîna qat) di navbera nebatan de yên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ji zeviyên lupinê, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatan kontrolkirî (bi derzîkirina sexte) di heman demê de temsîl dike. Xetên lupinê yên pel-teng ên jêrîn hatin analîzkirin: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nediyar), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire), û Population 22660 (hesas).
Li ser bingeha encamên analîza îfadeya cuda û ku tê texmînkirin ku di bersivên parastinê yên li dijî fungîyên patogen de beşdar e, ev koma heft genan ji bo pîvandina profîlên îfadeyê bi PCR-ya demrast (Tabloya Pêvek S9) hat hilbijartin.
Gena proteîna texmînkirî TanjilG_10657 di hemî rêz û demên lêkolînkirî de li gorî nebatan kontrol (mîmîk) bi girîngî hate çalakkirin (Tabloyên Pêvek S10, S11). Wekî din, profîla îfadeya TanjilG_10657 di dema ceribandinê de ji bo hemî rêzan meyleke zêdebûnê nîşan da. Nifûsa 22660 hesasiyeta herî bilind a TanjilG_10657 ji bo derzîkirinê bi çalakkirina 114-qatî û asta îfadeya nisbî ya herî bilind (4.4 ± 0.4) li 24 HPI nîşan da (Wêne 6a). Gena proteîna PR10 LlR18A TanjilG_27015 jî li seranserê hemî rêz û demên derzîkirinê çalakbûn nîşan da, bi girîngiya îstatîstîkî li piraniya xalên daneyê (Wêne 6b). Mîna TanjilG_10657, asta îfadeya nisbî ya herî bilind a TanjilG_27015 di nifûsa 22660 de li 24 HPI (19.5 ± 2.4) hate dîtin. Gena asîda endokîtînazê TanjilG_04706 di hemû rêzan de û di hemû demên ji bilî Boregine 6 hpi (Wêne 6c) bi awayekî girîng zêde bû. Di dema yekem de (6 HPI) di 83A:476 de bi awayekî xurt hate çalakirin (bi 10.5 caran) û di rêzên din de bi awayekî nerm (bi 6.6-7.5 caran) zêde bû. Di dema ceribandinê de, îfadeya TanjilG_04706 di 83A:476 û Boregine de di astên wekhev de ma, lê di Mandelup û Populasyona 22660 de bi awayekî girîng zêde bû, gihîşt nirxên nisbeten bilind (bi rêzê ve 5.9 ± 1.5 û 6.2 ± 1.5). Gena endoglûkan-1,3-β-glûkozîdaz-mîna TanjilG_23384 di du demên yekem de (6 û 12 hpi) di hemû rêzan de ji bilî populasyona 22660 (Wêne 6d) çalakbûnek bilind nîşan da. Asta herî bilind a derbirîna nisbî ya TanjilG_23384 di xala duyemîn a demê (12 hpi) de di Mandelup (2.7 ± 0.3) û 83A:476 (1.5 ± 0.1) de hat dîtin. Di 24 HPI de, derbirîna TanjilG_23384 di hemî xetên lêkolînkirî de nisbeten kêm bû (ji 0.04 ± 0.009 heta 0.44 ± 0.12).
Profîlên derbirîna genên bijartî (ag) bi PCR-ya hejmarî hatine eşkerekirin. Hejmarên 6, 12 û 24 demjimêrên piştî vakslêdanê temsîl dikin. Genên LanDExH7 û LanTUB6 ji bo normalîzekirinê û LanTUB6 ji bo kalibrkirina navbera rêzan hatin bikar anîn. Xêzên çewtiyê devîasyona standard li ser bingeha sê dubarekirinên biyolojîkî temsîl dikin, ku her yek ji wan navînîya sê dubarekirinên teknîkî ye. Girîngiya îstatîstîkî ya cudahîyên di astên îfadeyê de di navbera nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ku di sala 1999an de ji zeviya lupinê li Wierzenica, Polonya hatiye bidestxistin) û nebatên kontrolê (derzîkirî yên sexte) li jor xalên daneyan hatine nîşankirin (*Nirxa P < 0.05, **Nirxa P ≤ 0.01, ***Nirxa P ≤ 0.001). Girîngiya îstatîstîkî ya cudahîyên di astên îfadeyê de di navbera nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ku di sala 1999an de ji zeviya lupinê li Wierzenica, Polonya hatiye bidestxistin) û nebatên kontrolê (derzîkirî yên sexte) li jor xalên daneyan hatine nîşankirin (*Nirxa P < 0.05, **Nirxa P ≤ 0.01, ***Nirxa P ≤ 0.001). Статистическая значитемость различий в уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, poluchen di 1999 g. со поля люпина в Верженице, Polьша) xalên dannыh (* girîngî P < 0,05, ** girîngî P ≤ 0,01, ***îng P ≤ 0,001). Cudahiyên girîng ên îstatîstîkî di astên îfadeyê de di navbera nebatan de yên ku hatine derzîkirin (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ku di sala 1999an de ji zeviyek lupînê li Wierzhenice, Polonya hatiye bidestxistin) û nebatan kontrolê (ku bi sexteyî hatine derzîkirin) li jor xalên daneyan têne destnîşan kirin (*Nirxa P < 0.05, **Nirxa P ≤ 0.01, ***Nirxa P ≤ 0.001).接种 (Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种）植物之间表达水平差异的统计学显着性标记在敼数0,05, **P 值≤ 0,01, ***P 值≤ 0,001).接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对椥）之间 水平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0,05, **P ≤ 0,01, 。 ≤ 0,01, ***0 P. Статистически, значајно, zêde di nav guheztinên ekspressî yên di navbera ûnokulirovannыmy de (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, poluchennый с полей люпина во Верженице, Polonya, di sala 1999 de, di sala 1999 de) отмечены над точками данных (* nîşana P < 0,05, ** P-nîşana ≤ 0,01, ***P-nirx ≤ 0,001). Cudahiyên girîng ên îstatîstîkî di astên îfadeyê de di navbera nebatan de yên ku bi nexweşiya iltîhaba hatine derzîkirin (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ku di sala 1999an de ji zeviyên lupînê li Verzhenice, Polonya hatiye bidestxistin) û nebatan kontrolê (ku bi nexweşiya iltîhaba sexte hatine derzîkirin) li jor xalên daneyan têne destnîşan kirin (*Nirxa P < 0.05, **Nirxa P ≤ 0.01, ***Nirxa P ≤ 0.001).Xetên NLL yên ku hatine analîzkirin ev in: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî ya nediyar) û nifûsa 22660 (hesas).
Gena namzed TanjilG_05042 li cihê Lanr1 şêweyekî îfadeyê yê pir cuda ji profîlên ku ji lêkolînên RNA-seq hatine bidestxistin nîşan da (Wêne 6e). Çalakbûneke girîng a vê genê di Mandelup û nifûsa 22660 de hate dîtin (heta 39.7 û 11.7 caran, bi rêzê ve), ku di encamê de astên îfadeyê yên nisbeten bilind çêbûn (heta 1.4 ± 0.14 û 7.2 ± 1.3, bi rêzê ve). 83A:476 her wiha hin zêdebûna gena TanjilG_05042 (heta 3.8 qat) eşkere kir, lêbelê, astên îfadeya nisbî yên ku hatine bidestxistin (0.044 ± 0.002) ji yên ku di Mandelup û nifûsa 22660 de hatine dîtin ji 30 qat kêmtir bûn. ku bi qPCR-ê ve hatî analîzkirin, cûdahiyên girîng di asta îfadeyê de di navbera genotîpan de di guhertoyên vakslêdana sexte (kontrol) de nîşan da, ku di navbera nifûsên 22660 û 83A:476, û her weha di navbera nifûsên 22660 û 22660 de gihîşt cûdahiyek 58-qatî. Di navbera Boregine û Mandalup de cûdahiyek du qatî hat bidestxistin.
Gena namzed li cihê AnMan, TanjilG_12861, di bersiva vakslêdanê de di 83A:476 û Mandelup de hate çalak kirin, di nifûsa 22660 de bêalî bû, û di Boregine de kêm bû (Wêne 6f). Derbirîna nisbî ya gena TanjilG_12861 di 83A:476 ya vakslêdankirî de herî zêde bû (0.14±0.01). Gena proteîna şoka germê ya pola I ya 17.4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 di hemî şaneyên lêkolînkirî û xalên demê de astên derbirîna nisbî yên kêmtir nîşan da (Wêne 6g). Nirxa herî bilind di 24 HPI de di nifûsa 22660 de hate dîtin (0.14 ± 0.02, zêdebûnek heşt qat di bersiva vakslêdanê de).
Berawirdkirina profîlên îfadeya genan (Wêne 7) korelasyoneke bilind di navbera TanjilG_10657 û çar genên din de eşkere kir: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80), û TanjilG_04706 (r = 0.79). Encamên weha dikarin hev-rêkûpêkkirina van genan di dema bersivên parastinê de nîşan bidin. Genên TanjilG_12861 û TanjilG_23384 profîlên îfadeyê yên cuda nîşan dan ku nirxên koefîsyentên korelasyona Pearson ên kêmtir (bi rêzê ve ji 0.08 heta 0.43 û -0.19 heta 0.28) li gorî genên din hebûn.
Têkiliyên di navbera profîlên îfadeya genan de bi karanîna PCR-ya hejmarî hatin tespît kirin. Xetên lupinê yên pel-teng ên jêrîn hatin analîz kirin: 83A:476 (berxwedêr, alela Lanr1 ya homozîgot hildigire), Mandelup (bi nermî berxwedêr, alela AnMan ya homozîgot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nediyar), û Populasyona 22660 (hesas). Sê xalên demê hatin hesab kirin (6, 12 û 24 demjimêr piştî derzîkirinê), di nav de nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, cureya Col-08, ku di sala 1999-an de ji zeviyên lupinê li Wierzhenice, Polonya, hatine wergirtin) û kontrol (derzîkirî-sextkirî). Pîvan nirxa koefîsyenta têkiliya Pearson nîşan dide.
Li gorî daneyên ku bi 6 hesp di her înçê de hatine bidestxistin, WGCNA li ser 9981 DEG hate kirin ku bi berawirdkirina nebatên derzîkirî û yên kontrolê ve hatine destnîşankirin da ku li ser bersivên parastinê yên zû bisekinin (Tabloya Pêvek S12). Bîst û du modulên genan (kom) bi profîlên îfadeyê yên têkildar (pozîtîf an neyînî) di navbera genotîpan û guhertoyên ceribandinê de hatin dîtin. Bi navincî, asta derbirîna genan li gorî rêza 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 dadiket (lêbelê, di her du varyantan de, ev meyl di nebatên kontrolê de xurttir bû). Bi navincî, asta derbirîna genan li gorî rêza 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 dadiket (lêbelê, di her du varyantan de, ev meyl di nebatên kontrolê de xurttir bû). Di nîvê rojê de ev ekspressii genov snijalisь во порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Nifûsa 22660 (wekî variantah, jinako, эta tendence была сильнее у контрольных растений). Bi navincî, asta derbirîna genan bi rêza 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 kêm bû (lêbelê, di her du varyantan de, ev meyl di nebatên kontrolê de xurttir bû).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660的顺序下降（然而，在两种变体中，这种趋势在对照植物中更强）。平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> nifûsa 22660 的 顺序 下降 （， 下降 （， 在在 在 植物 中 更）…………………………………….. Di nîvê rojê de ev yek ji nû ve hate ronî kirin di 83A:476 > Mandelup > Boregine > Nifûsa 22660 Bi navînî, asta derbirîna genan di rêzenivîsa 83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 de kêm bû (lêbelê, di her du varyantan de, ev meyl di nebatên kontrolê de xurttir bû).Vakslêdan bû sedema zêdebûna îfadeya genan, nemaze di modulên 18, 19, 14, 6 û 1 (bi rêza bandorê ya daketî), rêziknameya neyînî (mînak modulên 9 û 20) an jî bi bandorên bêalî (mînak modulên 11, 22, 8 û 13). Analîza dewlemendkirina termê GO (Tabloya Pêvek S13) "GO: 0006952 Bersivên parastinê" ji bo modula vakslêdankirî (18) bi aktîvasyona herî zêde eşkere kir, di nav de genên ku bi qPCR-ê hatine analîzkirin (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 û TanjilG_27015), û her weha gelek modulên fotosentezê yên herî tepeserkirî yên Vakslêdanê (9). Konsantrera Modulê 18 (Wêne 8) wekî gena TanjilG_26536 ku proteîna LlR18B ya dişibihe PR-10 kod dike, û konsantrera modulê 9 wekî gena TanjilG_28955 ku proteîna PsbQ ya fotosîstema II kod dike, hat nas kirin. Gena berxwedana antraksnoz Lanr1 a namzed, TanjilG_05042, di modula 22 (Wêne 9) de hat dîtin û bi têgehên "GO:0044260 Pêvajoyên metabolîk ên makromolekuler ên hucreyî" û "GO:0006355 Rêziknameya transkrîpsiyonê, şablonkirina DNA" ve girêdayî ye ku navenda TanjilG_01212 hildigire. Gen faktora transkrîpsiyonê ya stresa germê A-4a (HSFA4a) kod dike.
Analîza tora girankirî ya hev-îfadekirina genê ya modulên bi termên pêvajoya biyolojîkî yên zêde temsîlkirî "GO: 0006952 Bersivên Parastinê". Lîgasyon ji bo ronîkirina çar genên ku ji hêla qPCR ve hatine analîzkirin (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 û TanjilG_27015) hate hêsankirin.
Analîza tora girankirî ya hev-îfadekirina genê ya modulekê bi termek pêvajoya biyolojîkî ya zêde temsîlkirî "GO: 0006355: Rêziknameya transkrîpsiyonê, şablonkirina DNA" û hilgirtina genek berxwedana antraknoz Lanr1 TanjilG_05042 ya namzet. Girêdan ji bo veqetandina gena TanjilG_05042 û gena navendî ya TanjilG_01212 hate hêsankirin.
Lêkolîna berxwedana antraknozê ya li Awistralyayê hate berhevkirin nîşan da ku piraniya cureyên zû hatine berdan hesas bûn; Kalya, Coromup û Mandelup wekî nerm berxwedêr hatine wesfandin, di heman demê de Wonga, Tanjil û 83A:476 wekî pir berxwedêr hatine wesfandin26,27,31. heman alela berxwedanê hebûn, ku wekî Lanr1 hatiye destnîşankirin, û Coromup û Mandelup alelek cûda hebûn, ku wekî AnMan10, 26, 39 hatiye destnîşankirin, di heman demê de Kalya alelek cûda derbas kir. , Lanr2. Lêkolîna ji bo berxwedana antraknozê li Almanya bû sedema destnîşankirina xeta berxwedanê Bo7212 bi alelek namzet ji bilî Lanr1, ku wekî LanrBo36 hatiye destnîşankirin.
Lêkolîna me frekanseke pir kêm (nêzîkî 6%) ya alela Lanr1 di germplazmaya ceribandî de eşkere kir. Ev çavdêrî bi encamên ceribandina germplazmaya Ewropaya Rojhilat bi karanîna nîşankerên Anseq3 û Anseq4 re lihevhatî ye, ku nîşan da ku alela Lanr1 tenê di du xetên Belarûsî de heye. Ev yek nîşan dide ku alela Lanr1 hîn jî ji hêla bernameyên çandiniyê yên herêmî ve bi berfirehî nayê bikar anîn, berevajî Avusturalya, ku ew yek ji alelên sereke ye ji bo çandiniya bi alîkariya nîşankeran. Ev dibe ku ji ber asta berxwedana kêmtir a ku ji hêla alela Lanr1 ve di şert û mercên zeviyê yên Ewropî de li gorî rapora Avusturalya peyda dibe be. Wekî din, lêkolînên antraknozê li deverên barana zêde li Avusturalya nîşan dane ku bersivên berxwedanê yên ku ji hêla alela Lanr1 ve têne navbeynkar kirin dibe ku di şert û mercên hewayê de ku mezinbûn û pêşkeftina bilez a patojenê guncan dikin ne bandorker bin19,42. Bi rastî, di vê lêkolînê de, hin nîşanên antraknozê di genotîpên ku alela Lanr1 hildigirin de jî hatin dîtin, ku nîşan dide ku berxwedan di bin şert û mercên çêtirîn de ji bo pêşkeftina C. lupini dibe ku winda bibe. Herwiha, şîroveyên erênî yên derewîn ên hebûna nîşankerên Anseq3 û Anseq4, ku bi qasî 1 cM ji cihê Lanr1 dûr in, mimkun in 28,30,43.
Lêkolîna me nîşan da ku 83A:476, ku alela Lanr1 hildigire, di xala demê ya yekem a analîzkirî de (6 hpi) bi ji nû ve bernamekirina transkrîptomê ya di asta mezin de bersiv da derzîkirina C. lupini, lê li Mandelup, ku alela AnMan hildigire, bersivên transkrîptomîk pir derengtir hatin dîtin (ji 24 heta 48 hp). Ev guherînên demkî di bersivên parastinê de bi cûdahiyên di nîşanên nexweşiyê de ve girêdayî ne, ku girîngiya naskirina zû ya patojenê ji bo bersivek serketî ya li hember berxwedanê destnîşan dike. Ji bo vegirtina tevna nebatan, sporên antraks divê li ser rûyê mêvandar di çend qonaxên pêşveçûnê re derbas bibin, di nav de şînbûn, dabeşbûna hucreyê, û avakirina appressoriumek. Pêvek avahiyek enfeksiyonê ye ku bi rûyê mêvandar ve girêdide û ketina nav tevnên mêvandar hêsan dike. Bi vî rengî, sporên C. gloeosporioides di ekstrakta nokê de piştî 75-90 hûrdeman înkubasyonê dabeşbûna yekem a navikê, piştî 90-120 hûrdeman avakirina lûleyek mîkrobê, û piştî 4 demjimêran tepeserkirin nîşan dan 45. C. gloeosporioides a mangoyê piştî 3 saetan înkubasyonê ji %40 zêdetir geşbûna konîdyal û piştî 4 saetan nêzîkî %20 avakirina appresoran nîşan da. Gena CAP20 a C. gloeosporioides a bi virulansê ve girêdayî piştî 3.5 saetan înkubasyonê di mûma rûyê avokadoyê de bi konsantrasyonên bilind ên proteîna CAP20 piştî 4 saet û 46 deqîqeyan çalakiya transkrîpsiyonê di konîdiyên epifît-çêker de nîşan da. Bi heman awayî, çalakiya genên bîyosenteza melanînê di C. trifolii de di dema înkubasyonê ya 2 saetan de hate çalakirin û piştre piştî saetekê avakirina appresoriumek pêk hat. Lêkolînên li ser tevnên pelan nîşan dane ku fêkiyên strawberî yên bi C. acutatum hatine înokulkirin di 8 hpi de tepeserkirina yekem hene, di heman demê de domateyên ku bi C. coccodes hatine înokulkirin di 4 hpi de tepeserkirina yekem hene48,49. bi piranî bi pîvana demê ya pêvajoya enfeksiyonê ya Colletotrichum spp. re lihevhatî ye. Bersivên parastinê yên bilez ji bo 83A:476 pêşniyar dikin ku genên berxwedana nebatan û parêzbendiya bandorker-tevlîhevkirî (ETI) di vê rêzê de beşdar bibin, di heman demê de bersivên dereng ên Mandelup piştgirî didin hîpoteza parêzbendiya mîkro-girêdayî ya şêweya molekulî ya tevlîhevkirî (MTI) 50. Bersivên zû ji bo 83A: 476 û Mandelup. Hevgirtina qismî di navbera genên jor- an jêr-rêkûpêkkirî de di bersiva dereng de jî piştgirî dide vê têgehê, ji ber ku ETI pir caran wekî bersivek MTI ya bilez û zêdekirî tê hesibandin ku di mirina hucreyê ya bernamekirî de li cihê enfeksiyonê digihîje lûtkeyê, ku wekî şoka anafîlaktîk tê zanîn 51,52.
Piraniya genên ku ji bo têgeha zêde temsîlkirî ya Gene Ontology GO:0006952 "Bersiva Parastinê" têne veqetandin, 11 homologên proteîna peyama rojîgirtinê ya ji ber stresê 22 (mîna SAM22) û heft proteînên lateksê yên sereke (MLP) ne. Proteînên mîna lateksê 31, 34, 43 û 423 dişibin hevrêziyê nîşan dan. Genên mîna SAM22 çalakbûnek girîng nîşan dan ku dirêjtir dom kir, û asta berxwedana antraknoz zêde nîşan dan (83A:476 û Boregine). Lêbelê, genên mîna MLP tenê di xetên ku alela berxwedana namzet hildigirin de kêm bûn (83A:476/Lanr1 li 6 hpi û Mandelup/AnMan li 24 hpi). Divê were zanîn ku hemî homologên mîna SAM22 yên hatine destnîşankirin ji komek genan a ku bi qasî 105 kb dirêj dibe derdikevin, lê genên mîna MLP ji herêmên cuda yên genomê derdikevin. Çalakkirina hevrêzkirî ya genên mîna SAM22 di lêkolîna me ya berê ya li ser berxwedana NLL li hember derzîkirina Diaporthetoxica de jî hat dîtin, ku ev yek nîşan dide ku ew di pêkhateyên horizontal ên bersiva parastinê de cih digirin. Ev encam ji hêla raporên bersivek erênî ya genên mîna SAM22 li hember birîndarî an dermankirinê bi asîda salîsîlîk, teşwîqkerên fungî, an hîdrojen peroksîtê ve jî tê piştgirî kirin.
Genên MLP-mîna di gelek cureyên nebatan de li hember stresên cûrbecûr ên abiyotîk û biyotîk, di nav de enfeksiyonên bakterî, vîrusî û fungî yên patogenîk, bersiv didin55. Rêbazên bersivê ji bo hin têkiliyên di navbera nebatan û patogenan de ji zêdebûnek bihêz (ango, di dema dagirkirina pembû bi Verticillium dahliae) heya kêmbûna girîng (ango, piştî enfeksiyona dara sêvê bi Alternaria spp.)56,57 diguhere. Kêmkirina girîng a gena MLP-mîna 423 di dema parastinên avokadoyê de li hember enfeksiyona F. niger û di dema enfeksiyona dara sêvê de Botryosphaeria berengeriana f. cn. piricola û Alternaria alternata patotîpên sêvê ne58,59. Wekî din, kalsiyûmên sêvê yên ku gena MLP-mîna 423 zêde îfade dikin, îfadeya genên têkildarî berxwedanê kêmtir bûn û ji enfeksiyona fungî re bêtir hesas bûn59. Piştî Fusarium oxysporum f, gena MLP-mîna 423 di germplazma fasûlyeya hevpar a berxwedêr de jî hate tepeserkirin. cn. Enfeksiyona fasûlyeyê 60.
Endamên din ên malbata PR-10 ku di lêkolîna me ya RNA-seq de hatine destnîşankirin, genên LlR18A û LlR18B bûn ku di bersiva zêdebûna rêziknameyê de bûn, û her weha gena zêdebûna rêziknameyê (1 gen) an kêmbûna rêziknameyê (3 gen) ji bo proteîna veguhastina lîpîdan DIR1. Wekî din, WGCNA gena LlR18B wekî navendek di vê modulê de destnîşan dike, ku pir hesas e ji bo vakslêdanê û çend genên bersiva parastinê hildigire. Genên LlR18A û LlR18B di pelên lupine yên zer de di bersiva bakteriya patogen de, û her weha di stûnên NLL de piştî vakslêdana D. toxica hatin çalakirin, di heman demê de homologê birincê yê van genan, RSOsPR10, bi lez ji hêla enfeksiyonek fungî ve ku tê texmîn kirin ku di rêça sînyala asîda jasmonîk de beşdar e, hate çalakirin53,61, 62. Gena DIR1 proteînên veguhastina lîpîdan ên ne-taybetî kod dike ku ji bo destpêkirina berxwedana bidestxistî ya sîstemîk (SAR) hewce ne. Bi pêşketina reaksiyonên parastinê re, proteîna DIR1 ji navenda enfeksiyonê bi rêya floemê tê veguhastin da ku SAR di organên dûr de teşwîq bike. Bi balkêşî, gena TanjilG_02313 DIR1 di xala yekem a demê de di rêzên 84A:476 û Populasyona 22660 de bi girîngî hate teşwîqkirin, lê berxwedana antraknoz tenê di rêza 84A:476 de bi serkeftî pêş ket. Ev dibe ku hin subfonksiyonalîzasyona gena DIR1 di NLL de nîşan bide, ji ber ku sê homologên mayî tenê di rêza 83A:476 de bi 6 hpi bersiv dan derzîkirinê, û ev bersiv ber bi jêr ve hate rêve kirin.
Di lêkolîna me de, pêkhateyên herî gelemperî yên ku bi pêvajoya biyolojîkî ya bi navê "prosesa GO:0055114 Redoks" re têkildar in, proteîna sîtokrom P450, peroksîdaz, asîda lînoleîk 9S-/13S-lîpoksîgenaz, û oksîdaza asîda 1-amînosîklopropan-1-karboksîlîk bûn. Wekî din, WGCNA ya me homologa HSFA4a wekî modulên hilgirê navendê yên wekî namzeta gena berxwedanê ya Lanr1 TanjilG_05042 pênase dike. HSFA4a pêkhateyek ji rêziknameya girêdayî redoks a transkrîpsiyona navokî di nebatan de ye.
Proteînên sîtokrom P450 oksîdoredûktaz in ku reaksiyonên hîdroksîlasyonê yên NADPH û/an O2-girêdayî di metabolîzma seretayî û duyemîn de, di nav de metabolîzma ksenobiyotîkan, û her weha hormon, asîdên rûn, sterol, pêkhateyên dîwarê şaneyê, biyopolîmer û biyosenteza pêkhateyên parastinê katalîz dikin 69. Di lêkolîna me de, guherbariya di fonksiyona sîtokrom P450 ya nebatan de ji -10.6 log2 (guherîna qat) ji ber hejmareke mezin a homologên guhertî (37) û cûdahiyên di şêwazên bersivê de di navbera genên taybetî de, ku revîzyonek ber bi jor ve nîşan dide, ji -10.6 log2 (guherîna qat) daket 5.7. Bikaranîna tenê daneyên RNA-seq ji bo ronîkirina fonksiyona biyolojîkî ya texmînkirî ya genên NLL di supermalbatek proteînek wusa mezin de dê pir spekulatîf be. Lêbelê, hêjayî gotinê ye ku hin genên sîtokrom P450 bi berxwedana zêde ya li hember fungî an bakteriyan ve girêdayî ne, di nav de beşdariyek di reaksiyonên alerjîk de 69,70,71.
Peroksîdazên pola III enzîmên nebatan ên pirfonksiyonel in ku di rêzek fireh ji pêvajoyên metabolîk de di dema mezinbûn û pêşveçûna nebatan de, û her weha di bersiva stresên hawîrdorê yên wekî şorbûn, hişkesaliyê, şîdeta ronahiya zêde, û êrîşa patojenan de beşdar in72. Peroksîdaz di têkiliya çend cureyên nebatan bi Anthracis re beşdar in, di nav de Stylosanthes humilis û C. gloeosporioides, Lens culinaris û C. truncatum, Phaseolus vulgaris û C. lindemuthianum, Cucumis sativus û C. lagenarium73,74,75,76. Bersiv pir zû ye, carinan jî di 4 HPI de, berî ku fungî bikeve nav tevnên nebatan73. Gena peroksîdazê her weha bersiva derzîkirina D. toxica NLL da. Ji bilî fonksiyonên wan ên tîpîk ên ji bo rêkxistina teqîna oksîdatîf an jî ji holê rakirina stresa oksîdatîf, peroksîdaz dikarin bi afirandina astengiyên fîzîkî li ser bingeha xurtkirina dîwarê şaneyê di dema lîgnîfîkasyonê, jêr-yekîneyê an girêdana xaçerê ya pêkhateyên taybetî de bi mezinbûna patojenan re mudaxele bikin. Ev fonksiyon dikare bi awayekî in silico bi gena TanjilG_03329 ve were girêdan ku anyonek peroksîdazek lîgnîn-çêker kod dike ku di lêkolîna me de di xeta berxwedêr a 83A:476 de di 6 HPI de bi girîngî zêde bû, lê ne di şaneyên din û xalên demê yên ku bersiv nedan de.
9S-/13S-lîpoksigenaza asîda lînoleîk gava yekem di rêça oksîdatîf a bîyosenteza lîpîdan de ye78. Berhemên vê rêyê di parastina nebatan de gelek fonksiyon hene, di nav de xurtkirina dîwarê şaneyê bi rêya çêbûna depoyên kalos û pektîn, û rêkxistina stresa oksîdatîf bi rêya hilberîna cureyên oksîjenê yên reaktîf79,80,81,82,83. Di vê lêkolînê de, îfadeya asîda lînoleîk 9S-/13S-lîpoksigenaza di hemî şaxan de hate guhertin, lê di nifûsa hesas de 22660, zêdebûn di demên cûda de serdest bû, di heman demê de di şaxên ku Lanr1 û alela AnMan a berxwedêr hildigirin de, ew tekez dike li ser cihêrengiya qata oksîlîpînê di reaksiyonên parastinê yên antraksê di navbera van genotîpan de.
Dema ku homologa 1-amînosîklopropan-1-karboksîlat oksîdaz (ACO) bi lupinê ve hate derzîkirin, bi girîngî zêde bû (9 gen) an jî kêm bû (2 gen). Ji bilî du îstîsnayan, hemî van bersiv di 6 hp de li 83A:476 çêbûn. Reaksiyona enzîmatîk a ku ji hêla proteînên ACO ve tê navbeynkar kirin, gava sînorkirina rêjeyê di hilberîna etîlenê de ye û ji ber vê yekê pir bi rêkûpêk e84. Etîlen hormonek nebatan e ku di rêkxistina pêşkeftina nebatan û bersiva şert û mercên stresê yên abiotîk û biyotîk de gelek rol dilîze. Înduksiyona transkrîpsiyona ACO û çalakkirina rêça sînyala etîlenê di zêdekirina berxwedana birincê de li hember fungusên hemîbiyotrofîk oryzae oryzae bi rêkxistina hilberîna cureyên oksîjenê yên reaktîf û fîtoaleksînan beşdar in. Pêvajoyeke enfeksiyona pelan a pir dişibihe ya ku di navbera M. oryzae û C. lupini88,89 de hatiye dîtin, li hember paşxaneya zêdebûna girîng a homologên ACO di xeta 83A:476 de ku di vê lêkolînê de hatiye ragihandin, îhtîmala dayîna berxwedana li hember NLL anthracnose Ethylene gaveke navendî ya sînyalê di rêyên molekulî de diguherîne.
Di vê lêkolînê de, tepeserkirina di asta mezin a gelek genên bi fotosentezê ve girêdayî li 6 hpi di 83A:476 û li 48 hpi di Mandeloop û nifûsa 22660 de hate dîtin. Asta û pêşveçûna van guhertinan bi astê re rêjeyî ye. Di vê ceribandinê de berxwedana antraknozê hate dîtin. Di demên dawî de, tepeserkirina bihêz û zû ya transkrîptên têkildarî fotosentezê di çend modelên têkiliyên nebat-pathogen de, di nav de bakterî û fungî yên patogen, hatiye ragihandin. Lezgînî (ji 2 HPI di hin têkiliyan de) û tepeserkirina gerdûnî ya genên bi fotosentezê ve girêdayî di bersiva enfeksiyonê de dikare li ser bingeha belavkirina cureyên oksîjenê yên reaktîf û têkiliya wan bi rêça asîda salîsîlîk re ji bo navbeynkariya reaksiyonên alerjîk, berevaniya nebatan çalak bike 90,94.
Di encamê de, mekanîzmayên bersiva parastinê yên ku ji bo rêza herî berxwedêr (83A:476) têne pêşniyar kirin, naskirina bilez a patojenê ji hêla gena R ve (guman dibe ku TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) û sînyala asîda salîsîlîk û etîlenê ya bi navbeynkariya bersiva alerjîk, dûv re avakirina çalakiya SAR-a dirêj-menzîl ji hêla proteîna DIR-1 ve tê piştgirî kirin. Divê were zanîn ku serdema biyotrofîk ji bo enfeksiyona C. lupini pir kurt e (nêzîkî 2 rojan), dûv re mezinbûna nekrotîk tê95. Veguhestina di navbera van qonaxan de dibe ku bi nekroz û îfadeya proteînên ku ji hêla etîlenê ve têne çalak kirin ve girêdayî be ku wekî tetikên reaksiyonên hesasiyetê di nebatan mêvandar de tevdigerin. Ji ber vê yekê, pencereya demê ji bo girtina serketî ya C. lupini di qonaxa biyotrofîk de pir teng e. Ji nû ve bernamekirina genên ku bi redoks û fotosentezê ve girêdayî ne ku di 83A:476 de di 6 hpi de têne dîtin, bi pêşveçûna hîfayên fungî re lihevhatî ye û pêşveçûna bersivek parastinê ya serketî di qonaxa biyotrofîk de nîşan dide. Dibe ku bersivên transkrîptomîk ên Mandelup û nifûsa 22660 pir dereng bimînin ku fungus berî ku derbasî mezinbûna nekrotîk bibin bigirin, lêbelê, Mandelup dibe ku ji nifûsa 22660 bibandortir be ji ber ku rêziknameya nisbeten bilez a proteîna PR-10 berxwedana horizontî pêş dixe.
ETI, ku ji hêla gena kanonîk R ve tê ajotin, xuya dike ku mekanîzmayek hevpar e ji bo berxwedana fasûliyê li hember antraknoz. Bi vî awayî, di nîskiya model Medicago truncatula de, berxwedana li hember antraknoz ji hêla gena RCT1 ve tê dayîn, ku endamek ji çîna gena R ya nebata TIR-NBS-LRR97 e. Ev gen di heman demê de dema ku ji nebatan hesas re tê veguheztin, di jongê de berxwedana antraknoz a berfireh dide. Di fasûliya asayî (P. vulgaris) de, heya niha zêdetirî du deh genên berxwedana antraknoz hatine destnîşankirin. Hin ji van genan li herêmên ku genên R yên kanonîk tune ne têne dîtin, lêbelê gelekên din li qiraxên kromozomên ku koma gena NBS-LRR hildigirin, di nav de TIR-NBS-LRRs99, cih digirin. Lêkolîna SSR ya li seranserê genomê jî têkiliya gena NBS-LRR bi berxwedana antraknoz di fasûliya asayî de piştrast kir. Gena R ya kanonîkî her wiha di herêma genomîk de ku cihê berxwedana sereke ya antraknozê di lupine spî 101 de hildigire, hat dîtin.
Xebata me nîşan dide ku reaksiyoneke berxwedana yekser, ku di qonaxeke zû ya enfeksiyona nebatan de tê çalakkirin (tercîh ne derengtir ji 12 hpi), bi bandor lupina pel-teng ji antraknoza ku ji hêla fungusa patogen Collelotrichum lupini ve çêdibe diparêze. Bi karanîna rêzkirina rêjeya bilind, me profîlên îfadeya cûda yên genên berxwedana antraknozê di nebatan NLL de ku ji hêla genên berxwedana Lanr1 û AnMan ve têne navbeynkar kirin nîşan dan. Parastina serketî tê de sêwirandina bi baldarî ya genên ji bo proteînên ku di redoks, fotosentez û patogenezê de beşdar in di nav çend demjimêran de piştî têkiliya yekem a nebatan bi patogenek re heye. Reaksiyonên parastinê yên wekhev, lê di demê de dereng mane, di parastina nebatan ji nexweşiyan de pir kêmtir bi bandor in. Berxwedana antraksê ku ji hêla gena Lanr1 ve tê navbeynkar kirin dişibihe bersiva bilez a tîpîk a gena R (berxwedana bi bandorker ve hatî çalak kirin), lê gena AnMan bi îhtîmaleke mezin bersivek horizontal peyda dike (berxwedana ku ji hêla şêwazek molekulî ya bi mîkrobê ve girêdayî ve hatî çalak kirin), ku astek nerm a domdariyê peyda dike.
215 xetên NLL yên ku ji bo lêkolîna nîşankerên antraknoz hatine bikar anîn ji 74 cure, 60 xetên ku bi rêya xaçkirin an çandinê hatine bidestxistin, 5 mutant, û 76 germplazmayên kovî an resen pêk tên. Xet ji 17 welatan hatine, bi piranî ji Polonya (58), Spanya (47), Almanya (27), Avusturalya (26), Rûsya (19), Belarûs (7), Îtalya (5) û xetên din ji 10 welatan. Set di heman demê de xetên berxwedêr ên referansê jî vedihewîne: 83A:476, Tanjil, Wonga ku alela Lanr1 hildigire, û Mandelup ku alela AnMan hildigire. Xet ji Databasa Çavkaniya Genetîkî ya Lupine ya Ewropî ku ji hêla Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Polonya ve tê domandin hatine wergirtin (Tabloya Pêvek S1).
Nebat di bin şert û mercên kontrolkirî de hatin çandin (fotoperiod 16 saet, germahî 25°C di nava rojê de û 18°C ​​di şevê de). Du dubareyên biyolojîk hatin analîzkirin. DNA li gorî protokolê ji pelên sê hefteyî bi karanîna DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Almanya) hate veqetandin. Kalîte û konsantrasyona DNAya îzolekirî bi rêbazên spektrofotometrîk (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) hate nirxandin. Nîşaneya AnManM1 ku gena berxwedana antraknoz AnMan (ji cv. Mandelup hatî wergirtin) nîşan dike û nîşaneyên Anseq3 û Anseq4 ên ku gena Lanr1 (ji cv. Tanjil hatî wergirtin) li kêleka wan in, hatin analîzkirin 11,26,28. Homozîgotên ji bo alela berxwedêr wekî "1", hesas - wekî "0", û heterozîgot - wekî 0.5 hatin nirxandin.
Li ser bingeha encamên lêkolîna nîşankerên AnManM1, AnSeq3 û AnSeq4 û hebûna tovan ji bo ceribandinên şopandina dawîn, 50 xetên NLL ji bo fenotipkirina berxwedana antraknoz hatin hilbijartin. Analîz di serayek kontrolkirî ya komputerê de bi fotoperiodek 14 demjimêran bi rêjeya germahiyê ya 22°C di rojê de û 19°C di şevê de du caran hate kirin. Tov berî çandinê têne xêzkirin (qalikê tovê li aliyê dijberî yê embriyoyê bi kêrek tûj tê qutkirin) da ku pêşî li bêçalakbûna tovê were girtin ji ber ku qalikê tovê pir hişk e û ji bo misogerkirina geşbûna yekreng. Nebat di kulikan de (11 × 11 × 21 cm) bi axa sterîl (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Varşova, Polonya) hatin çandin. Derzîkirin bi cureya Colletotrichum lupini Col-08, ku di sala 1999an de ji stûnên nebatan lupine yên pel-teng ên ku li zeviyek li Verzhenitsa, Polonyaya Mezin (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ) mezin bûne, hat kirin. Qadek bigirin. Îzolasyon di navgîna SNA de di 20°C de di bin ronahiya reş de ji bo 21 rojan hatin çandin da ku sporulasyonê teşwîq bikin. Çar hefte piştî çandinê, dema ku nebat gihîştin qonaxa 4-6 pelan, derzîkirin bi sprekirina bi rawestandina konîdiya bi rêjeya 0.5 x 106 konîdiya di her ml de hat kirin. Piştî derzîkirinê, nebat ji bo hêsankirina şînbûna konîdiya û pêvajoya enfeksiyonê 24 demjimêran di tariyê de bi şilbûna nêzîkî 98% û germahiya 25°C hatin hiştin. Piştre nebat di bin fotoperiodek 14 demjimêran de di germahiya 22°C roj/19°C şev û rêjeya şilbûnê ya %70 de hatin çandin. Pûana nexweşiyê 22 roj piştî derzîkirinê hat çêkirin û li gorî hebûn an nebûna birînên nekrotîk ên li ser qurm û pelan ji 0 (parastî) heta 9 (pir hesas) diguhere. Wekî din, piştî pîvandinê, giraniya nebatan hat pîvandin. Têkiliyên di navbera genotîpên nîşanker û fenotipên nexweşiyê de wekî korelasyonên xala du-rêzik hatin hesabkirin (tunebûna nîşankerên heterozîgot di koma xetên ji bo analîzkirina fenotipa berxwedana antraknozê de).