Spas ji bo serdana Nature.com.Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgirîya CSS-ê sînordar e.Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê ya di Internet Explorer de neçalak bikin).Di vê navberê de, ji bo misogerkirina piştgirîya domdar, em ê malperê bê şêwaz û JavaScript pêşkêş bikin.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) giyayek legumîn e ku ji bo hilberîna xwarinê û başkirina axê tê bikar anîn.Berfirehbûna gerdûnî ya NLL wekî çandinî gelek fungî pathogenîk kişandiye, di nav de lupine anthracnose, ku dibe sedema nexweşiya anthracnose ya wêranker.Du alel, Lanr1 û AnMan, ku berxwedanek zêde didin, di mezinbûna NLL de hatine bikar anîn, lê mekanîzmayên molekulê yên bingehîn nenas dimînin.Di vê lêkolînê de, nîşankerên Lanr1 û AnMan hatin bikar anîn da ku nimûneyên NLL yên Ewropî nîşan bidin.Ceribandina vakslêdanê di hawîrdorek kontrolkirî de bandora her du berxwedêrên berxwedêr piştrast kir.Profîlkirina îfadeya genê ya cihêreng li ser xetên berxwedêr û hesas ên temsîlî hate kirin.Berxwedana Anthracnose bi zêde îfadekirina termên ontolojiya genê "GO: 0006952 Bersiva Parastinê", "GO: 0055114 Pêvajoya Redox", û "GO: 0015979 Photosynthesis" ve girêdayî bû.Digel vê yekê, xeta Lanr1 (83A: 476) piştî derzîlêdanê bi lez bernamesazkirina transkriptomeya girîng nîşan da, dema ku xetên din di vê bersivê de bi qasî 42 demjimêran dereng nîşan dan.Bersivên parastinê bi genên TIR-NBS, CC-NBS-LRR û NBS-LRR, 10 proteînên ku di pathogenesisê de têkildar in, proteînên veguheztina lîpîdê, endoglucan-1,3-β-glucosidase, proteînên dîwarê hucreyê yên dewlemend-glycine, û genên ji riya reaktîf a oksîjenê ve girêdayî ne.Bersivên destpêkê yên 83A: 476, tevî tepeserkirina baldar a genên ku bi fotosentezê ve girêdayî ne, bi parastina serfiraz re di qonaxa mezinbûna nebatî ya biyolojiya fungal de hevûdu bûn, ku pêşniyar dike ku bandorker berevaniyê dike.Reaksiyona Mandeloop sist dibe, her wekî kêşana horizontî ya tevayî.
Lûpina pelên teng (NLL, Lupinus angustifolius L.) genimek bi proteînek bilind e ku ji herêma rojavayê Deryaya Spî ye1,2.Niha ji bo heywan û mirovan wekî çandiniya xwarinê tê çandin.Di pergalên zivirîna çandiniyê de ji ber rastkirina nîtrojenê ji hêla bakteriyên sabîtkirina nîtrojenê ya simbiotîk û bi tevayî başkirina avahiya axê ve di pergalên zivirîna çandiniyê de zibilê kesk jî tê hesibandin.NLL di sedsala paşîn de pêvajoyek bilez a xwemalîbûnê derbas kiriye û hîn jî di bin zexta mezinbûnê de ye3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.Bi çandiniya berbelav a NLL re, li pey fustanên pathogenîk niçikên çandiniyê yên nû pêş xistin û bûn sedema nexweşiyên nû yên ku çandiniyê hilweşînin. Ya herî balkêş ji bo cotkar û cotkarên lupine xuyangiya anthracnose bû, ku ji hêla fungusê pathogenîk, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve hatî çêkirin. Ya herî balkêş ji bo cotkar û cotkarên lupine xuyangiya anthracnose bû, ku ji hêla fungusê pathogenîk, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve hatî çêkirin. Naibolee примечательным для фермеров и селекционеров люпина было появление antraknoza, вызванного патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ya herî balkêş ji cotkar û cotkarên lupînê re derketina anthracnose bû ku ji hêla fungusê pathogenîk Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve hatî çêkirin.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，的出现，它是猎umletorich) , Feiler & Hagedorn13 引起的.对于羽扇豆农民和饲养者来说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是矎umlletorich) Porê. 1 Наиболее поразительным для фермеров и селекционеров люпина является появление antraknoza, вызываемого патогенным грибком Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ya herî balkêş ji cotkar û cotkarên lupînê re derketina anthracnozê ye ku ji hêla fungusê pathogenîk Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 ve hatî çêkirin.Raporên pêşîn ên nexweşiyê ji Brezîlya û Dewletên Yekbûyî hatin, digel ku nîşanên tîpîk bi rêzê di 1912 û 1929 de xuya dibin.Lêbelê, piştî nêzîkî 30 salan, pathogen wekî Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz hate destnîşankirin. & Sacc., teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorfê Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.，有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld di Morfolojiya Targeted de. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.û H. Schrenk. & H.施伦克，. & H.施伦克，.û H. Schlenk,.Fenotîpkirina nexweşiyê ya pêşîn a ku di nîvê sedsala 20-an de hatî çêkirin, hin berxwedan di pêvekên NLL û lupina zer (L. luteus L.) de nîşan da, lê hemî tevheviyên lupina spî (L. albus L.) ku hatine ceribandin pir hesas bûn15,16.Lêkolînan destnîşan kir ku pêşveçûna anthracnose bi zêdebûna baranê (nermiya hewayê) û germahiyê (di navbera 12-28 ° C de) ve girêdayî ye, ku dibe sedema binpêkirina berxwedanê di germahiyên bilind de 17, 18. Bi rastî, dema ku ji bo şînbûna konidia û destpêkirina nexweşiyê hewce dike, di bin germahiya 24 °C de (1 saetan de 1 mi (1 saetan de 1 °C ji 1.2 saetan) çar caran kurttir bû.Lêbelê, ev nexweşî li Fransa (1982) û Ukrayna (1983) wekî xeterek xeternak hate dîtin, lê xuya ye ku di wê demê de ji hêla pîşesaziya lupine ve hate paşguh kirin20,21.Çend sal şûnda, ev nexweşiya wêranker li seranserê cîhanê belav bû û bandor li welatên mezin ên hilberîner ên lupinê yên wekî Avusturalya, Polonya û Almanya jî kir22,23,24.Piştî derketinek anthracnose di nîvê salên 1990-an de, vekolînek berfereh di nimûneyên NLL19 de nasîna gelek donên berxwedêr encam da.Berxwedana NLL ya li hember anthracnose ji hêla du alelên serdest ên cihêreng ên ku di çavkaniyên cihêreng ên germplazmayê de têne dîtin ve tê kontrol kirin: Lanr1 di çand Tanjil û Wonga de û AnMan di kulîlkê de.Mandalay 25, 26. Ev alel nîşangirên molekulî yên ku piştgirî didin hilbijartina germplazmaya berxwedêr di bernameyên çandiniyê de temam dikin25,26,27,28,29,30.Lêbelê, ji ber hejmarek piçûk a RIL û dûrbûna genetîkî ya mezin a di navbera nîşanker û alelên têkildar de, di derheqê genên wan ên bingehîn de encamên pêbawer nayên derxistin.Ji hêla din ve, karanîna genetîka berevajî di lupinan de ji ber potansiyela nûjenkirina wan a pir kêm, ku manîpulasyona genetîkî giran dike37, dijwar e.
Pêşkeftina germplazma kedîkirî ya ku di rewşa homozîgot de alelê xwestî hildigire, wek 83A:476 (Lanr1) û Mandelup (AnMan), derî li lêkolîna berxwedana anthracnose li ber hebûna tevliheviyên dijber ên allelan di nifûsa çolê de vekiriye.Derfetên mekanîzmayên molekulî.Bersivên parastinê yên ku ji hêla genotipên taybetî ve têne hilberandin berhev bikin.Vê lêkolînê bersiva destpêkê ya transkrîptoma NLL ya ji bo vakslêdana C. lupini nirxand.Li ser bingeha van ceribandinan, çar xêzên ku di berxwedana anthracnose û pêkhateya alelîkî ya Lanr1/AnMan de ji hev cûda ne ji bo profîlkirina îfadeya genê ya berevaniya cihêreng bi karanîna du nêzîkatiyên temamker hatine hilbijartin: Rêzkirina RNA-ya bilind-rêveber û pîvana PCR-ya rast-dem.
Vebijêrkek komek germplazma NLL (N = 215) bi nîşankerên Lanr1 (Anseq3 û Anseq4) û AnMan (Anseq4) û AnMan (AnManM1) nîşan da ku tenê yek rêz (95726, li nêzî Salamanca-b) "berxwedana" nîşana "hemûyan" nîşana "berxwedana" hemî nîşanan zêde dike. di 158 (~ 73,5%) rêzan de.Sêzdeh rêzan du alelên "berxwedêr" ên nîşana Lanr1, û 8 rêzan jî alelên "berxwedêr" ên Lanr1 çêkirin.nîşanker.Alelela "berxwedanê" ya nîşana AnMan (Tabloya Pêvek S1).Fenotîpên Anthracnose di bin şert û mercên kontrolkirî de (Tabloya Pêvek S2) di berxwedana jenotîpên ceribandî de cihêrengiyek eşkere kir, ku di giraniya anthracnose de xuya bû.Cûdahî di pûanên navîn de ji 1.8 (bi nermî berxwedêr) heya 6.9 (heydar) û cûdahiyên giraniya nebatan ji 0.62 (hesyar) heya 4.45 g (berxwedêr) diguhere. Têkiliyek girîng di navbera nirxên ku di du dubareyên ceribandinê de hatine dîtin (0,51 ji bo pîvanên giraniya nexweşiyê, P = 0,00017 û 0,61 ji bo giraniya nebatê, P <0,0001) û her weha di navbera van her du pîvanan de (- 0,59 û - 0,77, P <0,000) de heye. Têkiliyek girîng di navbera nirxên ku di du dubareyên ceribandinê de hatine dîtin (0,51 ji bo pîvanên giraniya nexweşiyê, P = 0,00017 û 0,61 ji bo giraniya nebatê, P <0,0001) û her weha di navbera van her du parameteran de (- 0,59 û - 0,77, P <0,0). 0,51 ji bo ballovan, P = 0,00017 û 0,61 ji sedî 0,61 û 0,61 ji sedî 10,00,00,00,00:00 умя параметри (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001). Têkiliyek girîng di navbera nirxên ku di du dubareyên ceribandinê de hatine dîtin (0,51 ji bo pîvanên giraniya nexweşiyê, P = 0,00017 û 0,61 ji bo giraniya nebatê, P <0,0001), û her weha di navbera van her du pîvanan de (- 0,59 û -0,77, P <1)0,0).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评程度评分0，0，0，0P.10，0.物重量为0,61，P < 0,0001）以及这两个参数之间（- 0,59 和- 0,77，P < 0,0001)。在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程庈 䆄 分 踄 分 0. 1 ， p = 0.00017 ， 植物 为 为 0.61 ， p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（（0（0（（（（0（（（（（0（（（（（（（（和– 0,59 和- 0,77, P < 0,0001). Nablyudalasь mezinbûna korrelyaciya di navbera jimareyîyan de, nablyudaemыmi di her yek ji nû de (nirxandina 0,51, P = 0,00017 û mezinbûna mezin 0,61, P <0,0001, P <0,0001, pîvaz - 0,0001), 001) 0,77, P <0,0001. Têkiliyek girîng di navbera nirxên ku di ducarî de têne dîtin (pîvana giraniya nexweşiyê 0.51, P = 0.00017 û giraniya nebatê 0.61, P <0.0001) û di navbera van her du pîvanan de (-0.59 û -0.0001) 0.77, P<0.00 hebû. ).Nîşaneyên tîpîk ên ku di nebatên hestiyar de têne dîtin di nav wan de kilbûn û zivirîna stûnê ku dişibihe avahiyeke "kevana şivanan" e, li dûv wê birînên ovale yên bi sporozoitên porteqalî/pembeyî hene (Hêjmara Pêvek. 1).
Balkêş e, çend xetên NLL yên ku tu alelek nîşankerê "berxwedêr" tune ne, astek bilind a berxwedana anthracnose (ji bo genotipên Lanr1 an AnMan berawirdî an bilindtir), wek Boregine (nirxa P < 0,0001 ji bo her du pîvanan), Bojar (nirxa P < 0,0001 û giraniya B401 ji bo puan û 0, nirxa P < 0,0001 û nirxa B401 ji bo pûan û 0, nirxa P<01/9) nîşan didin. .0001 ji bo pûan û ne girîng ji bo giraniyê). Balkêş e, çend xetên NLL yên ku tu alelek nîşankerê "berxwedêr" tune ne, astek bilind a berxwedana anthracnose (ji bo genotipên Lanr1 an AnMan berawirdî an bilindtir), wek Boregine (nirxa P < 0,0001 ji bo her du pîvanan), Bojar (nirxa P < 0,0001 û giraniya B401 ji bo puan û 0, nirxa P < 0,0001 û nirxa B401 ji bo pûan û 0, nirxa P<01/9) nîşan didin. .0001 ji bo pûan û ne girîng ji bo giraniyê). Interesno, что несколько liniй NLL, lishennыh какоgo-libo «resistentnogo» markernogo allelya, nîşan dide vысокий уровень устойчивости к antraknozu (сопоставимый или более высокий, чем длья млякня), P <0,0001 ji bo parametrovan), Bojar (nîjana P < 0,0001 ji bo nirxa zêde û 0,001 ji bo mezinbûna zêde) û populerbûna B-549/79b (navdêra P <0,0001 ji bo nirxa zêde ne girîng). Balkêş e ku hin pergalên NLL yên ku xwedan nîşankerên "antîjenîk" nînin, berxwedana bilind a horîzontal nîşan didin (wekhev bi genên Lanr1 an AnMan an mezintir), wek Boregine (her du pîvan P <0.0001), Bojar (nirxa P <0.0001, giraniya nebatê 0.001) û giraniya nebatê 0.001) û giraniya nebatê 7b009 (nirxa girîng a 7b0, nirxa B-509) Interesno, что некоторые линии NLL, lisennыe kakih-libo markernыh alleley «резистентности», nîşan dide ku ev yek antrankozû (sravnimыe an bêtir, her ku di genotipov Lanr1), parah (AnM) ров <0,0001), Bojar (nirxa P <0,0001, mezinbûna zêde 0,001) û populerbûna B-549/79b (nirxa P-nîşan <0,0001, масса незначительна). Balkêş e, hin xetên NLL yên ku tu alelên nîşanker ên 'berxwedanê' tune ne, astên bilind ên berxwedana anthracnose nîşan didin (hevber an ji genotîpên Lanr1 an AnMan bilindtir), wek Boregine (nirxa P ji bo her du parametreyan <0,0001), Bojar (P-nirx < 0,00001 < 0,000-value < 0,00001, giraniya nebatê < 9001, B94, giraniya nebatê 7,000, 0,0001, nirxa P < 0,0001, giraniya nebatê 7-0001, giraniya nebatê 0,0001, nirxa P <0,0001, giraniya nebatê 0,0001, nirxa P 9/0001, giraniya nebatê, 0,0001, nirxa P <0,0001, giraniya nebatê) .0001, giranî ne girîng e).Ev diyarde îhtîmala çavkaniyek genetîkî ya nû ya berxwedanê destnîşan dike, kêmbûna têkiliyek di navbera genotipên nîşanker û fenotîpên nexweşiyê de rave dike (nirxên P ji ~ 0,42 heta 0,98 ~).Bi vî rengî, testa Kolmogorov-Smirnov destnîşan kir ku daneyên li ser berxwedana anthracnose bi gelemperî ji bo pûanan (P-nirxên 0,25 û 0,11) û girseya nebatê (P-nirxên 0,47 û 0,55) têne belav kirin, û pêşniyar dike ku ez hîpotez dikim ku ji Lanr1 û AnMan bêtir alel tevlê dibin.
Li ser bingeha encamên vekolîna berxwedana anthracnose, 4 rêz ji bo analîza transkrîptomê hatin hilbijartin: 83A: 476, Boregine, Mandelup, and Population 22660. Ev xet ji bo berxwedana antraksê di ceribandinên derzîlêdanê de bi rêzgirtina RNA ve hatin ceribandin, bi şertê ku ew di ceribandina berê de heman bin.Nirxên xalan wiha bûn: Boregin (1,71 ± 1,39), 83A: 476 (2,09 ± 1,38), Mandelup (3,82 ± 1,42) û nifûsa 22660 (6,11 ± 1,29).
Protokola Illumina NovaSeq 6000 bi navînî 40,5 cotên Mread ji her nimûneyê (29,7 heta 54,4 Mreads) bi dest xist (Tabloya Pêvek S3).Pûanên hevrêziyê di rêza referansê de ji %75,5 heya 88,6%.Têkiliya navînî ya daneyên hejmartina xwendinê di navbera guhertoyên ceribandinê de di navbera dubareyên biyolojîkî de ji 0.812 heta 0.997 (navgînî 0.959) bû. Ji 35 170 vekolînên genovên 2917 ne ekspressiy e, û ji 4785 genov ekspresirovalisь li ser ne girîngên rojê (bazirganiya navîn <5). 35,170 Ji 35 170 vekolînên genov 2917 ne ekspressirovaliz bûn, û ji 4785 genov nehatine binavkirin (navdêra navîn <5). Ji 35,170 genên ku hatine analîz kirin, 2917 nehatine îfade kirin û 4785 genên mayî xwedan îfadeya neguhêz bûne (navgîniya bingehîn <5).Ji ber vê yekê, hejmara genên ku hatine eşkere kirin (navgîniya bingehîn ≥ 5) di dema ceribandinê de 27,468 (78.1%) bû (Tabloya Pêvek S4).
Ji gava yekem de, hemî xetên NLL bersivê didin derzîlêdana C. lupini (çenga Col-08) bi ji nû ve programkirina transkriptomeyê (Table 1), lêbelê, cûdahiyên girîng di navbera rêzan de hatin dîtin.Bi vî rengî, xeta berxwedanê 83A: 476 (genê Lanr1 hildigire) di xala yekem a carê (6 hpi) de ji nû ve bernamesazkirina transkrîptomê ya girîng bi 31-69 qat zêdebûnek di hejmara genên veqetandî yên jor û jêr de li gorî xalên demên din ên di vê demê de nîşan da.Wekî din, ev lûtke demek kurt bû, ji ber ku vegotina tenê çend genan di dema duyemîn de (12 hpi) bi girîngî hate guheztin.Balkêş e, Boregine, ku di ceribandina graftê de jî astek bilind a berxwedanê nîşan da, di dema ceribandinê de ji nûvebernamekirina transkrîpsiyonê ya wusa mezin derbas nebû.Lêbelê, hejmara genên bi rengek cûda (DEG) ji bo Boregine û 83A: 476 di 12 HPI de yek bû.Hem Mandelup û hem jî nifûsa 22660 lûtkeyên DEG-ê di dema paşîn de (48 l / s) nîşan dan, ku di bersivên parastinê de derengmayînek têkildar destnîşan dike.
Ji ber ku 83A:476 di bersiva C. lupini de di 6 HPI de li gorî hemî xetên din, ji nû ve bernamesazkirina transkriptomeya girseyî derbas bû, ~ 91% ji DEG-ên ku di vê xalê de hatine dîtin ji rêzê-taybetî bûn (Hêjî. 1).Lêbelê, di bersivên destpêkê de di navbera rêzikên lêkolînê de hin hevgirtî hebû, ji ber ku 68.5%, 50.9%, û 52.6% DEG li Boregine, Mandelup, û nifûsa 22660, bi rêzê ve, bi yên ku di 83A: 476 de di hin xalên demê de hatine dîtin re hevgirtî bûn.Lêbelê, van DEG-ê tenê beşek piçûk (0.97-1.70%) ji hemî DEG-ên ku niha bi karanîna 83A: 476 têne vedîtin têne hesibandin.Wekî din, 11 DEG ji hemî rêzan di vê demê de hevgirtî bûn (Tabloyên Pêvek S4-S6), tevî pêkhateyên hevpar ên bersivên parastina nebatan: proteîna veguheztina lîpîdê (TanjilG_32225), enzîma endoglucan-1,3-β-glucoside (TanjilG_23384), du proteînên stres-3anjil8Tanjil2Tanjil2 û S1AMjil2 31531), proteîna latexê ya bingehîn (TanjilG_32352), û du proteînên dîwarê hucreyê yên avahîsaz ên dewlemend ên glycine (TanjilG_19701 û TanjilG_19702).Di heman demê de di bersivên transkrîptomê de di navbera 83A: 476 û Boregine de li 24 HPI (bi tevahî 16-38% DEG) û di navbera Mandelup û Nifûsa 22660 de li 48 HPI (bi tevahî 14-20% DEG) de hevbendiyek pir zêde hebû.
Diyagrama Venn ku di xetên lupina pelên teng (NLL) de ku bi Colletotrichum lupini ve hatî neqişandin (çenga Col-08 ku ji zeviyên lupinê li Wierzhenice, Polonya, 1999, ji zeviyên lupinê hatî wergirtin) hejmara genên bi rengek cûda (DEG) nîşan dide.Xêzên NLL yên ku hatine analîz kirin ev in: 83A: 476 (berxwedêr, ku alelê Lanr1 hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nenas), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê AnMan hildigire) û nifûsa 22660 (pir hesas).Kurteya hpi piştî vakslêdanê bi saetan dimîne.Nirxên sifir hatine rakirin da ku grafiyê hêsan bikin.
Komek genên zêde bi 6 hpi ji bo hebûna domên gena R-ya kanonîkî hate analîz kirin (Tabloya Pêvek S7).Vê lêkolînê tenê di 83A: 476 de vegirtina transkrîptomê ya genên berxwedana nexweşiya klasîk bi domên NBS-LRR eşkere kir.Ev kom ji yek gena TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), pênc genên CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, û tanjilg_16urnj162, û tanjilg_16urnj162), û tanjilg_16urnj162, û Foo2162, û Foo216-R, û CC-NBS-LRR pêk tê. LRRE (tanjilg_16162) û her weha Çar NBS-Lrr (tanjilg_16162) û Çar NBS-LRR (TANJILG_16162).Hemî van genan xwedan domên kanonîkî ne ku di rêzikên parastî de hatine rêz kirin.Ji bilî genên domainê NBS-LRR, çendîn RLL kînaz li 6 hpi hatin çalak kirin, ango yek li Boregine (TanjilG_19877), du li Mandelup (TanjilG_07141 û TanjilG_19877) û di nifûsê de 22660 (Tanjil114 û TanjilG_06) 7:476.
Genên xwedan îfadeya guhêrbar a girîng di berteka derzîlêdanê de bi C. lupini (çenga Col-08) re ketin ber analîza dewlemendkirina Gene Ontolojiya (GO) (Tabloya Pêvek S8). Peyva pêvajoya biyolojîkî ya ku pir caran zêde tê temsîl kirin "GO: 0006952 bersiva parastinê" bû ku di 6 ji 16 (dem × rêz) berhevokên bi girîngî (P nirx < 0,001) de xuya bû (Hêjî. 2). Peyva pêvajoya biyolojîkî ya ku pir caran zêde tê temsîl kirin "GO: 0006952 bersiva parastinê" bû ku di 6 ji 16 (dem × rêz) berhevokên bi girîngî (P nirx < 0,001) de xuya bû (Hêjî. 2). Têkiliya pêvajoya biyolojîkî ya "GO: 0006952 ji bo bersivê", ku ji 6 ji 16 (vremya × lîniya) têkeliya bi высокой (0006952) tê bikaranîn. Peyva pêvajoya biyolojîkî ya ku herî zêde zêde tê temsîl kirin 'GO: 0006952 Bersiva parastinê' bû, ku di 6 ji 16 (dem × rêzik) hevberdanên bi girîngî (P nirx < 0,001) de xuya bû (Hêjî. 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在在16 个（×旻个中，具有高显着性（P 值< 0.001）（图2）. Peyva pêvajoya biyolojîkî ya herî temsîlî "GO: 0006952 bersiva parastinê" ye, ku di 6 ji 16 (时间×线) hevberdanê de, bi girîngiya bilind (P nirx < 0,001) (图2) xuya dike. Bişkojka "GO: 0006952 Defence Response", kotorыy poyavlyalsya di 6 ji 16 kombinaciy (vremya × liniya) bi vысокой значимость0, (00 P) bi nirxa biyolojîkî (000P) (2.2 P). Peyva pêvajoya biyolojîkî ya ku herî zêde tê temsîlkirin 'GO: 0006952 Bersiva Parastinê' bû, ku di 6 ji 16 berhevokan de (dem × rêz) bi girîngiya zêde (P nirx < 0,001) xuya bû (Hêjî. 2).Ev term di du xalên demê de di 83A de zêde hate pêşandan: 476 û Boregine (6 û 24 hpi) û di demekê de li Mandelup û Nifûsa 22660 (bi rêzdarî 12 û 6 hpi).Ev encamek çaverêkirî ye, ku bersiva antîfungal a xetên berxwedêr ronî dike.Wekî din, 83A: 476 bersiv da C. lupini bi lez û bez genên têkildarî teqîna oksîdative ku bi têgîna "GO: 0055114 pêvajoya redox" tê temsîl kirin, bersivek parastinê ya taybetî destnîşan dike, dema ku Boregine bersivên parastinê yên taybetî, yên ku bi têgeha 'GO' ve girêdayî ne, eşkere kir.:0006950 Bersiva stresê”.Nifûsa 22660 bersiva berxwedana horîzontal a ku metabolîtên duyemîn tê de vedihewîne çalak kir, hejmarek zêde têgînên "GO: 0016104 Pêvajoya biosenteza triterpene" û "GO: 0006722 Pêvajoya metabolîzma triterpene" ronî kir (her du têgeh ji heman koma genan re têkildar in. 22660. Wekî din, reaksiyona zû 83A:476 (6 hpi) û reaksiyona derengmayî Mandelup û Nifûsa 22660 têgîna GO:0015979 'fotosentez' û pêvajoyên biyolojîkî yên din ên têkildar hene.
Peyvên ontolojiya genê ya biyoprosesê ku di şîrovekirina genên bi cudahiyê de hatine hilbijartin di dema bersivên transkrîptomê yên lupina pelên teng (NLL) de ku bi lupina antraksê ve hatî neqandin (çenga Col-08 ku ji zeviyên lupinê li Wierzhenice, Polonya, di 1999-an de hatî wergirtin) têne hilbijartin.Xêzên NLL yên ku hatine analîz kirin ev in: 83A: 476 (berxwedêr, ku alelê Lanr1 homozygous hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî ya nenas), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê homozygous AnMan hildigire) û nifûsa 22660 (hestyar).
Ji ber ku vê lêkolînê armanc kir ku genên ku di berxwedana anthracnose de beşdar dibin nas bike, genên ku bi têgînên GO "GO: 0006952 Bersivên Parastinê" û "GO: 0055114 Pêvajoyên Redox" hatine veqetandin ji ber ku wateya bingehîn ≥ 30 bi kêmî ve yek rêzek veqetandî hatine analîz kirin.× xala di demê de ku nirxên girîng ên statîstîkî yên log2 bi hev re dike (guheztina qat).Hejmara genên ku van pîvanan pêk tînin 65 ji bo GO:0006952 û 524 ji bo GO:0055114 bû.
83A: 476 du lûtkeyên DEG-ê yên ku bi têgîna GO: 0006952 hatine destnîşan kirin eşkere kir, ya yekem di 6 genan de per inch (64 gen, rêziknameya jor û jêr) û ya duyemîn jî di 24 genan de per inch (15 gen, tenê rêzikname).Boregine her weha destnîşan kir ku GO: 0006952 di heman demê de, lê bi kêmtir DEG (11 û 8) û aktîvkirina bijarte lûtkeyê derket.Mandeloop du lûtkeyên GO: 0006952 li 12 û 48 HPI nîşan da, her du jî 12 genan hildigirin (ya yekem bi genên çalakker, û ya duyemîn bi tenê genên tepeserker), dema ku nifûsa 22660 li 6 HPI (13 gen) xwedî serdestiyek mezin a lûtkeya zêdebûnê ye.rêz.Divê were zanîn ku 96.4% ji GO: 0006952 DEG di van lûtkeyan de heman celeb bersiv (jor an xwarê) hebû, tevî ku cûdahiyên di hejmara genên têkildar de hevgirtinek girîng di bersivên parastinê de destnîşan dike.Koma herî mezin a rêzikên ku bi têgîna GO ve girêdayî ne: 0006952 Proteîna Peyama Têkilî ya Stresê ya Birçîbûnê 22 (mîna SAM22) kod dike, ku ji çîna 10 proteîna bi pathogenesis-girêdayî (PR-10) clade proteîn û proteîna bingehîn latex e.proteîna wekhev (MLP-wek) proteîn (Hêjîrê. 3).Her du kom di xwezaya vegotinê û arastekirina bersivê de ji hev cuda bûn.Genên ku proteînên mîna SAM22-ê kod dikin, di demên destpêkê de (6 an 12 hpi) induksiyonek domdar û girîng nîşan dan û bi gelemperî di dawiya ceribandinê de (48 hpi) bêbersiv bûn, dema ku proteînên mîna MLP-ê di 6 hpi de hevrêziyê nîşan dan.hpi.83A: 476 û Mandelup bi 48 hp / in, hema hema hemî xalên daneyên din bêbersiv bûn.Wekî din, cûdahiyên di profîlên vegotinê yên genên proteîn ên mîna SAM22 de li dû cûdabûna di berxwedana anthracnose de hate dîtin, ji ber ku xêzên berxwedêr zêdetir xalên demê hene ku bi girîngî van genan ji genên pir bikêr çêdikin.Genek din a LlR18A/B-ya PR-10 bi gena proteîna mîna SAM22-ê re şêwazek vegotinê ya pir dişibih nîşan da.
Hêmanên sereke yên peyva pêvajoya biyolojîkî "GO: 0006952 Bersiva Parastinê" û şêwazên vegotina genên berendam ên alelên Lanr1 û AnMan hatin nas kirin.Pîvana Log2 nirxên log2-ê (guhartina qat) di navbera nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku ji zeviyên lupinê hatî wergirtin, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatên kontrolê (şam-vekirî) di heman demê de destnîşan dike.Xêzên lupina pelên teng ên jêrîn hatine analîz kirin: 83A: 476 (berxwedêr, alelê Lanr1 homozygot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nenas), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê AnMan homozygous hilgirtiye), û Nifûsa 22660 (hestyar).
Wekî din, profîlên îfadeya genên berendamê RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) û AnMan (TanjilG_12861) hatin nirxandin (Hêjî. 3).Gena TanjilG_05042 di 83A:476 de tenê di gava yekem de (6 hpi) bersivek girîng (çalakkirin) nîşan da, dema ku TanjilG_12861 li Mandeloop tenê di du xalên demê de girîng bû: 6 hpi (rêveberiya jêrîn) û 24 hpi (6 hpi).Bi.).verastkirin)).
Di peyva GO: 0055114 "pêvajoya redoks" de genên ku herî zêde hatine îfade kirin, genên ku proteînên sîtokroma P450 û peroksîdazê kod dikin bûn (Hêl. 4).Ji bo nimûneyên ji 83A: 476 veqetandî li 6 HPI, nirxên herî zêde an hindiktirîn log2 (guheztina qat bi qat) (ji bo 86.6% ji genan) bi gelemperî di navbera nebatên nebatî û kontrolê de hatin dîtin, ku berteka bilind a vê genotîpê li ser cinsê derzîlêdanê ronî dike.83A:476 GO ya herî girîng nîşan da: 0055114 DEG li 6 hpi (503 gen), dema ku xetên mayî li 48 hpi (Boregine, 31 gen; Mandelup, 85 gen; û Nifûsa 22660, 78 gen)).Di piraniya genên malbata GO: 0055114 de, du celeb bersivên derzîlêdanê (çalakkirin û astengkirin) hatin dîtin.Balkêş e, heta %97.6 ji DEG-yên ku ji bo termê GO hatine nas kirin: 0055114 li Mandelupe bi 48 hp Ev çavdêrî destnîşan dikin ku, tevî pîvanek pir piçûktir (ango, hejmara genên redoxê yên mutated, 85 beramberî 503), şêwaza derengmayîna bersivek transkrîptê ya destpêkê ya ji bo 3 hp. 76.Li Boregine û Nifûsa 22660, ev hevhevbûn bi rêzê ve ji% 51.6 û 75.6% kêmtir e.
Nimûneyên vegotina pêkhateyên sereke yên têgeha pêvajoya biyolojîk "GO: 0055114 Pêvajoya Redox" hatin eşkere kirin.Pîvana Log2 nirxên log2-ê (guhartina qat) di navbera nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku ji zeviyên lupinê hatî wergirtin, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatên kontrolê (şam-vekirî) di heman demê de destnîşan dike.Xêzên lupina pelên teng ên jêrîn hatine analîz kirin: 83A: 476 (berxwedêr, alelê Lanr1 homozygot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nenas), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê AnMan homozygous hilgirtiye), û Nifûsa 22660 (hestyar).
83A:476 Bersivên transkrîptomî yên ji bo derzîlêdana bi C. lupini (çenga Col-08) di heman demê de bêdengkirina hevrêzî ya genên ku bi têgîna GO:0015979 "fotosentez" û pêvajoyên biyolojîkî yên din ên têkildar ve girêdayî ne jî di nav de ne.Di vê GO: 0015979 DEG de 105 gen hene ku di 83A: 476 de di 6 hpi de bi girîngî hatine tepisandin.Di vê binkomê de, 37 gen jî di Mandelup de di 48 HPI de û 35 di heman demê de di nifûsa 22660 de, di nav de 19 DEG-yên ku ji her du genotip re hevpar in, hatine kêm kirin.Tu DEG-ên têkildar bi term GO re tune: 0015979 di her tevliheviyekê de (xêza x-dem) bi girîngî hate çalak kirin.
Nimûneyên vegotina pêkhateyên sereke yên têgeha pêvajoya biyolojîk "GO: 0015979 Photosynthesis" hatin eşkere kirin.Pîvana Log2 nirxên log2-ê (guhartina qat) di navbera nebatên derzîkirî (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku ji zeviyên lupinê hatî wergirtin, Wizhenica, Polonya, 1999) û nebatên kontrolê (şam-vekirî) di heman demê de destnîşan dike.Xêzên lupina pelên teng ên jêrîn hatine analîz kirin: 83A: 476 (berxwedêr, alelê Lanr1 homozygot hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nenas), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê AnMan homozygous hilgirtiye), û Nifûsa 22660 (hestyar).
Li ser bingeha encamên analîza îfadeya cihêreng û tê texmîn kirin ku di bersivên parastinê yên li dijî fungîyên pathogenîk de têkildar e, ev komek ji heft genan ji bo pîvandina profîlên derbirînê ji hêla PCR-ya rast-time (Tabloya Pêvek S9) ve hate hilbijartin.
Gena proteîna gumanbar TanjilG_10657 di hemî xêz û xalên wextê yên lêkolînkirî de li gorî nebatên kontrolê (mînak) (Tabloyên Pêvek S10, S11) bi girîngî hate çêkirin.Wekî din, profîla vegotinê ya TanjilG_10657 di dema ceribandinê de ji bo hemî rêzan meylek zêde nîşan da.Nifûsa 22660 hesasiyeta herî bilind a TanjilG_10657 nîşanî derzîlêdanê bi aktîvkirina 114 qat û asta herî bilind a vegotinê (4.4 ± 0.4) li 24 HPI (Hêjî. 6a) nîşan da.Gena proteîna PR10 LlR18A TanjilG_27015 di heman demê de li seranserê hemî rêz û xalên demê, bi girîngiya statîstîkî li piraniya xalên daneyê çalakbûn nîşan da (Hêjî. 6b).Mîna TanjilG_10657, asta herî bilind a derbirrîna têkildar a TanjilG_27015 di 22660 nifûsa derzîlêdanê de li 24 HPI (19,5 ± 2,4) hate dîtin.Gena endochitinase ya asîdê TanjilG_04706 di hemî rêzan de û di hemî xalên demê de ji bilî Boregine 6 hpi (Hêl. 6c) bi girîngî hate sererast kirin.Ew di gava yekem de (6 HPI) di 83A: 476 de (bi 10,5 carî) bi tundî hate çêkirin û di xetên din de bi nermî zêde bû (bi 6,6-7,5 carî).Di dema ceribandinê de, îfadeya TanjilG_04706 di 83A: 476 û Boregine de di astên wekhev de ma, di heman demê de li Mandelup û Nifûsa 22660 ew bi girîngî zêde bû, gihîştiye nirxên nisbeten bilind (bi rêzdarî 5,9 ± 1,5 û 6,2 ± 1,5).Gena mîna endoglucan-1,3-β-glucosidase TanjilG_23384 di her du xalên dema pêşîn de (6 û 12 hpi) di hemî rêzan de ji bilî nifûsa 22660 çalakbûnek bilind nîşan da (Hêl. 6d).Asta herî bilind a vegotina têkildar a TanjilG_23384 di dema duyemîn de (12 hpi) li Mandelup (2.7 ± 0.3) û 83A: 476 (1.5 ± 0.1) hate dîtin.Di 24 HPI de, îfadeya TanjilG_23384 di hemî xetên lêkolînkirî de bi rêkûpêk kêm bû (ji 0,04 ± 0,009 ber 0,44 ± 0,12).
Profîlên derbirînê yên genên hilbijartî (ag) ku ji hêla PCR-ya mîqdar ve têne xuyang kirin.Hejmarên 6, 12 û 24 demjimêrên piştî vakslêdanê nîşan dide.Genên LanDExH7 û LanTUB6 ji bo normalîzekirinê û LanTUB6 ji bo kalibrasyona nav-serîkan hatine bikar anîn.Barên çewtiyê guheztina standard li ser sê dubareyên biyolojîkî temsîl dikin, ku her yek ji wan navgîniya sê dubareyên teknîkî ye. Girîngiya îstatîstîkî ya ciyawaziyên di asta derbirînê de di navbera nebatên derzîlêdanê de (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku di 1999 de ji zeviya lupinê ya li Wierzenica, Polonya hatî wergirtin) û nebatên kontrolê (bi xapandin) li jor xalên daneyê têne nîşankirin (*P nirx <0.05, ** nirxa P 0. Girîngiya îstatîstîkî ya ciyawaziyên di asta derbirînê de di navbera nebatên derzîlêdanê de (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku di 1999 de ji zeviya lupinê ya li Wierzenica, Polonya hatî wergirtin) û nebatên kontrolê (bi xapandin) li jor xalên daneyê têne nîşankirin (*P nirx <0.05, ** nirxa P 0. Статистическая значајнамость различий во уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, poluchen di 1999 g. со поля лупина во Верженице, Польша) и li ser kontrolê х (*girîng P < 0,05, **girîng P ≤ 0,01, ***girîng P ≤ 0,001). Cûdahiyên îstatîstîkî yên girîng di astên derbirînê de di navbera nebatên derzîlêdanê de (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku di sala 1999 de ji zeviyek lupinê li Wierzhenice, Polonya hatî wergirtin) û nebatên kontrolê (teqlîzekirî) li jor xalên daneyê têne destnîşan kirin (*P nirx <0.05, **P-nirx 0.-0 ≤ 0.00).接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模觾漩照（模觾漕水平差异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值< 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 倂0≤ 1.00≥接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对煰） 和 对煰）平 差异 的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0,05, **P ≤ 0,01, ***P ≤ 0,001) Статистически, значајно zêde di nav guheztina ekspressiy de di navbera ûnokulirovannыmy (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, poluchennый с полей люпина во Верженице, Польша, во 1999 г.) nnыh (* nirxa P < 0,05, ** P-nîşana ≤ 0,01, ***P-nirx ≤ 0,001). Cûdahiyên girîng ên îstatîstîkî di astên derbirînê de di navbera nebatên derzîlêdanê de (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku ji zeviyên lupinê li Verzhenice, Polonya, di 1999 de hatî wergirtin) û nebatên kontrolê (teqlîzekirî) li jor xalên daneyê (*P nirx < 0,05 , **P-nirx .≥ 0-0 0,0 ≤).Xêzên NLL yên ku hatine analîz kirin ev in: 83A: 476 (berxwedêr, ku alelela Lanr1 ya homozygot hildigire), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê homozygous AnMan hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî ya nenas) û nifûsa 22660 (hesyar).
Gena berendam TanjilG_05042 li cîhê Lanr1 ji profîlên ku ji lêkolînên RNA-seq hatine wergirtin şêwazek vegotinê ya berbiçav nîşan da (Hêjîrê. 6e).Çalakkirina girîng a vê genê li Mandelup û nifûsa 22660 hate dîtin (bi rêzê heya 39,7 û 11,7 carî), di encamê de astên vegotinê yên nisbeten bilind (bi rêzê heya 1,4 ± 0,14 û 7,2 ± 1,3).83A: 476 di heman demê de hin rêkûpêkkirina gena TanjilG_05042 (heta 3,8 qat) eşkere kir, di heman demê de, astên vegotinê yên ku hatine bidestxistin (0,044 ± 0,002) ji yên ku li Mandelup û nifûsa 22660 hatine dîtin ji 30 qat zêdetir kêmtir bûne.ku ji hêla qPCR ve hatî analîz kirin, cûdahiyên girîng di astên derbirînê de di navbera genotipên di guhertoyên vakslêdankirî (kontrol) de nîşan da, di navbera nifûsa 22660 û 83A:476 de, û her weha di navbera nifûsa 22660 û 22660 de, ferqek 58 qatî digihîje.
Gena berendamê li cihê AnMan, TanjilG_12861, di bersiva vakslêdanê de di 83A:476 û Mandelup de hate çalak kirin, di nifûsa 22660 de bêalî bû, û li Boregine hate birêkûpêk kirin (Hêjîrê. 6f).Vebêja têkildar a gena TanjilG_12861 di 83A-ê de herî zêde bû: 476 (0.14±0.01).Gena proteîna şokê ya germê ya 17,4 kDa TanjilG_05080 HSP17.4 di hemî cûrbecûr û xalên wextê yên lêkolînkirî de astên vegotinê yên nizmtir nîşan da (Hêjî. 6g).Nirxa herî bilind li 24 HPI di nifûsa 22660 de hate dîtin (0.14 ± 0.02, di bersiva vakslêdanê de heşt qat zêdebûnek).
Berawirdkirina profîlên vegotina genê (Hêl. 7) têkiliyek bilind di navbera TanjilG_10657 û çar genên din de derxist holê: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.60 (r = 0.80) ûEncamên weha dibe ku hevrêziya van genan di dema bersivên parastinê de destnîşan bikin.Genên TanjilG_12861 û TanjilG_23384 li gorî genên din profîlên vegotinê yên cihêreng ên bi nirxên hevrêziya Pearson kêmtir nîşan dan (bi rêzê ji 0,08 heta 0,43 û -0,19 heta 0,28).
Têkiliyên di navbera profîlên vegotina genê de bi karanîna PCR-ya jimareyî hatin tespît kirin.Xêzên lupina pelên teng ên jêrîn hatine analîz kirin: 83A: 476 (berxwedêr, ku alelê homozygot Lanr1 hildigire), Mandelup (bi nermî berxwedêr, ku alelê homozygous AnMan hildigire), Boregine (berxwedêr, paşxaneya genetîkî nenas), û Nifûsa 22660 (hestyar).Sê xalên demê hatin hesabkirin (6, 12 û 24 demjimêran piştî derzîlêdanê), di nav wan de nebatên nebatkirî (Colletotrichum lupini, strain Col-08, ku ji zeviyên lupine li Wierzhenice, Polonya, di 1999-an de hatî wergirtin) û nebatên kontrolê (şam-vekirî).Pîvan nirxa hevrêziya Pearson nîşan dide.
Li ser bingeha daneyên ku bi hêza 6 hespê per inchê hatine bidestxistin, WGCNA li ser 9981 DEG-ê hate nas kirin ku bi berhevkirina nebatên îsotî û kontrolê ve balê dikişîne ser bersivên berevaniya zû (Tabloya Pêvek S12).Bîst û du modulên genê (komên) bi profîlên îfadeya pevgirêdayî (erênî an neyînî) di navbera genotip û guhertoyên ceribandinê de hatin dîtin. Bi navînî, astên vegotina genê bi rêza 83A:476> Mandelup> Boregine> Nifûsa 22660 daketibûn (di her du guhertoyan de, lêbelê, ev meyl di nebatên kontrolê de bihêztir bû). Bi navînî, astên vegotina genê bi rêza 83A:476> Mandelup> Boregine> Nifûsa 22660 daketibûn (di her du guhertoyan de, lêbelê, ev meyl di nebatên kontrolê de bihêztir bû). Di nîvê rojê de ev ekspressii genov snijalisь во порядке 83A:476 > Mandelup > Boregine > Nifûsa 22660 (wekî variantah, jinako, эta tendence была сильнее у контрольных растений). Bi navînî, asta vegotina genê di rêza 83A:476> Mandelup> Boregine> Nifûsa 22660 de kêm bû (di her du guhertoyan de, lêbelê, ev meyl di nebatên kontrolê de bihêztir bû).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Population 22660 的顺序下降（然而，在两在对照植物中更强）.平均 而 言 ， 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> nifûsa 22660 的 顺序 下降 （， 下降 （， 在在 植物 中 更）…………………………………….. Di nîvê rojê de ev yek ji nû ve hate ronî kirin di 83A:476 > Mandelup > Boregine > Nifûsa 22660 Bi navînî, asta vegotina genê di rêza 83A: 476 > Mandelup > Boregine > Nifûsa 22660 de kêm bû (lêbelê, di her du guhertoyan de, ev meyl di nebatên kontrolê de bihêztir bû).Vakslêdanê bû sedema bilindkirina vegotina genê, nemaze di modulên 18, 19, 14, 6 û 1 de (bi rêza bandorê ya daketî), rêziknameya neyînî (mînak modulên 9 û 20) an bi bandorên bêalî (mînak modulên 11, 22, 8 û 13).Analîza dewlemendkirina termê GO (Tabloya Pêvek S13) "GO: 0006952 Bersivên Parastinê" ji bo modula derzîlêdanê (18) bi aktîvkirina herî zêde, tevî genên ku ji hêla qPCR ve hatine analîz kirin (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_23384, TanjilG_1060, TanjilG_23384, TanjilG_1065) û herî zêde, modulên fotosentezê yên çapkirî (9).Berhevkarê Modula 18 (Hêl. 8) wekî gena TanjilG_26536 ku proteîna LlR18B-ya mîna PR-10-ê kod dike, û koncentratora modul 9 wekî gena TanjilG_28955 ku proteîna PsbQ ya fotosîstem II kod dike hate nas kirin.Genek berxwedana anthracnose Lanr1, TanjilG_05042, di modula 22-ê de (Hêl. 9) hate dîtin û bi têgînên "GO: 0044260 Pêvajoyên metabolîzma makromolekuler a hucreyî" û "GO: 0006355 Rêziknameya transkripsiyonê, şablonê DNA" ve girêdayî ye.gen faktora veguheztina stresa germê A-4a (HSFA4a) kod dike.
Analîzkirina torê ya girankirî ya hev-îfadekirina genê ya modulan bi şertên pêvajoya biyolojîkî yên zêde têne destnîşan kirin "GO: 0006952 Bersivên Parastinê".Ligasyon hate hêsan kirin da ku çar genên ku ji hêla qPCR ve hatine analîz kirin (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 û TanjilG_27015) ronî bike.
Analîza torê ya girankirî ya hev-îfadekirina genê ya modulek bi têgînek pêvajoyek biyolojîkî ya zêde "GO: 0006355: Rêzkirina veguheztinê, şablona DNA" û hilgirtina genek berendamê anthracnose Lanr1 TanjilG_05042.Ligasyon hat hêsan kirin ku gena TanjilG_05042 û gena navendî ya TanjilG_01212 were veqetandin.
Danasîna berxwedana Anthracnose ya ku li Avusturalya hatî berhev kirin destnîşan kir ku piraniya kulpên ku zû hatine berdan hesas in;Kalya, Coromup û Mandelup wekî bi nermî berxwedêr hatine binav kirin, dema ku Wonga, Tanjil û 83A:476 wekî pir berxwedêr26,27,31 hatine binav kirin.heman alelê berxwedanê hebû, Lanr1 destnîşan kir, û Coromup û Mandelup xwedan alelek cûda bûn, AnMan10, 26, 39 destnîşan kirin, dema ku Kalya li ser alelek cûda derbas kir., Lanr2.Vebijêrk ji bo berxwedana anthracnose li Elmanyayê bû sedema nasîna rêzek berxwedêr Bo7212 bi alelek berendam ji bilî Lanr1, bi navê LanrBo36.
Lêkolîna me frekansek pir kêm (nêzîkî 6%) ya alelê Lanr1 di germplasma ceribandinê de eşkere kir.Ev çavdêrî bi encamên vekolandina germplazma Ewropaya Rojhilat bi karanîna nîşankerên Anseq3 û Anseq4 re hevaheng e, ku destnîşan kir ku alele Lanr1 tenê di du xetên Belarusî de heye.Ev destnîşan dike ku alelê Lanr1 hîn ji hêla bernameyên çandiniyê yên herêmî ve bi berfirehî nayê bikar anîn, berevajî Avusturalya, ku ew yek ji alelên sereke ye ji bo mezinbûna bi alîkariya nîşanker.Dibe ku ev ji ber asta kêmtir berxwedanê ya ku ji hêla alele Lanr1 ve di şert û mercên zeviyê Ewropî de li gorî rapora Avusturalya hatî peyda kirin be.Wekî din, lêkolînên anthracnose li deverên barîna zêde yên li Avusturalya destnîşan kirin ku bersivên berxwedanê yên ku ji hêla alelela Lanr1 ve têne navbeyn kirin dibe ku di şert û mercên hewayê yên ku ji mezinbûn û pêşkeftina bilez a pathogenê re ne bandorker bin19,42.Di rastiyê de, di lêkolîna heyî de, hin nîşanên anthracnose di genotipên ku alelê Lanr1 hildigirin jî hatin dîtin, ku pêşniyar dike ku berxwedan di bin şert û mercên çêtirîn de ji bo pêşkeftina C. lupini winda bibe.Wekî din, şîroveyên erênî yên derewîn ên hebûna nîşankerên Anseq3 û Anseq4, ku bi qasî 1 cm ji cihê Lanr1 ne, gengaz in 28,30,43.
Lêkolîna me destnîşan kir ku 83A: 476, ku alelê Lanr1 hildigire, bersivê dide derzîlêdana C. lupini bi veprogramkirina transkrîptomê ya mezin di xala dema yekem a analîzkirî de (6 hpi), dema ku li Mandelup, ku alelê AnMan hildigire, bersivên transkrîptomî pir paşê hatin dîtin.(ji 24 heta 48 hp).Van guheztinên demkî yên di bersivên parastinê de bi cûdahiyên di nîşanên nexweşiyê re têkildar in, girîngiya nasîna zû ya pathogen ji bo bersivek serfiraz a berxwedanê ronî dikin.Ji bo vegirtina tevna nebatê, sporên antraksê divê di çend qonaxên pêşkeftinê de li ser rûbera mêvandar derbas bibin, di nav de germbûn, dabeşbûna hucreyê, û avakirina appressorium.Zêvek avahiyek enfeksiyonê ye ku bi rûyê mazûvan ve tê girêdan û ketina nav tevnên mazûvan hêsan dike.Bi vî rengî, sporên C. gloeosporioides di ekstrakta pea de dabeşbûna yekem a navokê piştî 75-90 hûrdemên înkubasyonê, avakirina boriyek germ piştî 90-120 hûrdeman, û tepeserkirina piştî 4 demjimêran 45 nîşan dan.Mango C. gloeosporioides piştî 3 demjimêrên înkubasyonê ji% 40 zêdetir germbûna konîdîal û piştî 4 demjimêran nêzîkê 20% avakirina appresors nîşan da.Gena CAP20-a-girêdayî virulenceyê ya C. gloeosporioides çalakiya transkrîpsiyonê li konîdyayên epiphyte-çêkirina piştî 3,5 demjimêran inkubasyonê di waxa rûbera avokadoyê de bi giraniya zêde ya proteîna CAP20 piştî 4 demjimêr û 46 hûrdem nîşan da.Bi heman awayî, çalakiya genên biosenteza melanîn a li C. trifolii di dema înkubasyonek 2-saetan de û li dûv 1 demjimêran piştî avakirina appressoriumê hate çêkirin.Lêkolînên li ser tevnên pelan nîşan didin ku strawberên ku bi C. acutatum hatine vedan, pêşî di 8 hpi de têne tepisandin, dema ku tomatoyên ku bi C. coccodes têne neqandin pêşî di 4 hpi48,49 de têne tepisandin.bi piranî bi pîvana demê ya Colletotrichum spp re hevaheng e.pêvajoya infeksiyonê.Bersivên berevaniya bilez ên 83A: 476 di vê xetê de tevlêbûna genên berxwedaniya nebatî û bi bandorker (ETI) pêşniyar dikin, dema ku bersivên derengmayî yên Mandelup piştgirî didin hîpoteza 50-ê ya ku bi nimûneya molekulê ya mîkro-girêdayî (MTI) ve girêdayî ye. Bersivên destpêkê yên 83A: 476 û Mandelup.Lihevhatina qismî ya di navbera genên birêkûpêkkirî an jêrîn de di bersiva dereng de jî vê têgehê piştgirî dike, ji ber ku ETI bi gelemperî wekî bersivek MTI ya bilez û pêşkeftî tête hesibandin ku bi mirina hucreyê ya bernamekirî li cîhê enfeksiyonê, ku wekî şoka anafîlaktîkî tê zanîn 51,52 diqede.
Piraniya genên ku bi têgîna zêde hatî destnîşan kirin Gene Ontology GO: 0006952 "Bersiva Parastinê" 11 homologên proteîna 22 ya peyama rojiyê ya ku ji stresê ve hatî çêkirin (wek SAM22) û heft proteînên latexê yên sereke (MLP) ne.-proteînên mîna 31, 34, 43 û 423 wekheviya rêzan nîşan didin.Genên mîna SAM22 çalakkirinek girîng nîşan dan ku dirêjtir dom kir, asta berxwedana anthracnose zêde kir (83A: 476 û Boregine).Lêbelê, genên mîna MLP-ê tenê di xetên ku alelê berxwedanê yê berendam hildigirin (83A: 476 / Lanr1 li 6 hpi û Mandelup / AnMan li 24 hpi) hatin verast kirin.Pêdivî ye ku were zanîn ku hemî homologên mîna SAM22-ê yên naskirî ji komek genê ya ku bi qasî 105 kb digire, di heman demê de genên mîna MLP-ê ji deverên cihê yên genomê derdikevin.Di lêkolîna meya berê ya berxwedana NLL ya li hember derziya Diaporthetoxica de çalakkirina hevrêzî ya genên mîna SAM22-ê jî hate dîtin, ku pêşniyar dike ku ew di beşên horizontî yên bersiva parastinê de beşdar in.Ev encam di heman demê de ji hêla raporên bersivek erênî ya genên mîna SAM22-ê li ser zirarê an dermankirina bi salicylic acid, inducers fungal, an hydrogen peroxide ve tê piştgirî kirin.
Genên mîna MLP-ê hatine destnîşan kirin ku bersivê didin stresên cûda yên abiotîk û biyotîk, di nav de enfeksiyonên fungal ên bakterî, vîrus û pathogenîk ên di gelek celebên nebatan de55.Rêgezên bersivdayînê ji hin danûstendinên di navbera nebat û pathogenan de ji zêdebûnek bi hêz (ango, di dema girtina pembû bi Verticillium dahliae) heya pir kêmbûn (ango, piştî enfeksiyona dara sêvê bi Alternaria spp.)56,57.Di dema parastina avokadoyê de ji bo enfeksiyona F. niger û di dema enfeksiyona dara sêvê de Botryosphaeria berengeriana f de, rêkûpêkek girîng a gena MLP-mîna 423 hatiye dîtin.cn.piricola û Alternaria alternata patotîpên sêvan in58,59.Digel vê yekê, kelûpelên sêvê ku gena 423-mîna MLP-ê zêde derdixin, xwedan îfadeya kêmbûna genên bi berxwedanê bûn û ji enfeksiyona fungalî re bêtir mesul bûn59.Li dû Fusarium oxysporum f, gena MLP-mîna 423 jî di germplazma fasûlî ya hevpar a berxwedêr de hate tepisandin.cn.Enfeksiyona fasûlî 60.
Endamên din ên malbata PR-10-ê ku di lêkolîna meya RNA-seq de hatine nas kirin genên LlR18A û LlR18B bûn ku di bersivê de li ser verastkirinê, û her weha gena verastkirî (1 gene) an jêrîn (3 gen) ji bo proteîna veguheztina lîpîdê DIR1..Wekî din, WGCNA gena LlR18B wekî navendek di vê modulê de ronî dike, ku ji vakslêdanê re pir hesas e û gelek genên bersivê yên parastinê hildigire.Genên LlR18A û LlR18B di pelên lupina zer de di bersivdayîna bakteriyên pathogenîk de, û hem jî di stûnên NLL de piştî derzîlêdana D. toxica hatine çêkirin, dema ku homologa birincê ya van genan, RSOsPR10, bi lez û bez ji hêla enfeksiyonek fungal ve hatî çêkirin, ku tê texmîn kirin ku di rêça asîda 6,61, jas1, enflamasyona çîçek de ye. proteînên veguheztina lîpîd ên netaybet ên ku ji bo destpêkirina berxwedana bidestxistî ya pergalê (SAR) hewce ne.Bi pêşkeftina reaksiyonên parastinê re, proteîna DIR1 ji navenda enfeksiyonê di nav phloemê de tê veguheztin da ku SAR di organên dûr de çêbike.Balkêş e, gena TanjilG_02313 DIR1 di xala yekem de di rêzên 84A:476 û Nifûsa 22660 de bi girîngî hate çêkirin, lê berxwedana anthracnose tenê di rêza 84A:476 de bi serfirazî pêş ket.Ev dibe ku hin subfunctionalîzasyona gena DIR1 di NLL de destnîşan bike, ji ber ku sê homologên mayî tenê di xeta 83A: 476 de di 6 hpi de bersivê didin derzîlêdanê, û ev bersiv ber bi jêr ve hatî rêve kirin.
Di lêkolîna me de, pêkhateyên herî gelemperî yên ku bi pêvajoya biyolojîkî ya bi navê "GO: 0055114 Pêvajoya Redox" re têkildar in proteîna cytochrome P450, peroxidase, asîda linoleic 9S-/13S-lipoxygenase, û oxidase 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid bûn.Wekî din, WGCNA me homologa HSFA4a wekî navendek modulên wekî berendamê genê berxwedana Lanr1 TanjilG_05042 destnîşan dike.HSFA4a pêkhateyek ji rêziknameya redox-girêdayî ya veguheztina navokî ya di nebatan de ye.
Proteînên Cytochrome P450 oksîdoreduktaz in ku di metabolîzma bingehîn û duyemîn de reaksiyonên hîdroksîlasyonê yên NADPH û/an O2-girêdayî katalîz dikin, di nav de metabolîzma xenobiyotîkan, û her weha hormon, asîdên rûn, sterol, hêmanên dîwarê şaneyê, biyopolîmer, û biosenteza nebatan. fonksiyon ji -10.6 log2 (guhartina qat) daket 5.7-ê ji ber hejmareke mezin a homologên guhezbar (37) û cûdahiyên di şêwazên bersivê de di navbera genên taybetî de, ku revîzyonek ber bi jor ve nîşan dide..Bikaranîna tenê daneyên RNA-seq ji bo ronîkirina fonksiyona biyolojîkî ya gumanbar a genên NLL di supermalbatek proteînek wusa mezin de dê pir spekulatîf be.Lêbelê, hêjayî gotinê ye ku hin genên cytochrome P450 bi zêdebûna berxwedana li hember fungî an bakteriyên pathogenîk re têkildar in, di nav de tevkariya reaksiyonên alerjîk69,70,71.
Peroksîdazên sinifa III enzîmên nebatê yên pirfonksîyonel in ku di dema mezinbûn û pêşkeftina nebatan de, û hem jî di bersivdayîna stresên hawîrdorê yên wekî şorbûn, ziwabûn, tîrêjiya ronahiyê ya bilind, û êrîşa pathogenê de tevlê cûrbecûr pêvajoyên metabolîk in72.Peroksîdaz di danûstendina çend cureyên nebatan ên bi Anthracis re têkildar in, di nav de Stylosanthes humilis û C. gloeosporioides, Lens culinaris û C. truncatum, Phaseolus vulgaris û C. lindemuthianum, Cucumis sativus û C. lagenarium73,776.75Bersiv pir bi lez e, carinan di 4 HPI de jî, berî ku fungus bikeve nav tevna nebatê73.Gena peroxidase jî bersiv da derzîlêdana D. toxica NLL.Digel fonksiyonên wan ên tîpîk ên ji bo sererastkirina teqîna oksîdasyonê an ji holê rakirina stresa oksîdasyonê, peroksîdan dikarin bi afirandina astengên laşî yên li ser bingeha xurtkirina dîwarê hucreyê di dema lignification, binî yekîneyek an xaç-girêdana pêkhateyên taybetî de, di mezinbûna pathogenê de asteng bikin.Ev fonksiyon dikare di silîko de ji genê TanjilG_03329 re were veqetandin ku anion peroksîdaza lîgnîn-çêker a gumanbar a ku di lêkolîna me de di rêza berxwedêr a 83A: 476 de li 6 HPI-ê bi girîngî hate sererast kirin kod dike, lê ne di cûrbecûr û xalên dem ên din de ku bersiv nedan.
9S-/13S-lipoxygenaza acîda lînoleîk gava yekem e di riya oksîtîf ​​a biosenteza lîpîdê de78.Berhemên vê rêyê di parastina nebatan de gelek fonksiyon hene, di nav de xurtkirina dîwarê hucreyê bi avakirina depoyên kaloz û pectin, û rêziknameya stresa oksîjenê bi hilberîna celebên oksîjenê reaktîf79,80,81,82,83.Di lêkolîna heyî de, derbirîna linoleic acid 9S-/13S-lipoxygenase di hemî celeban de hate guheztin, lê di nifûsa 22660-a hesas de, verastkirin di demên cihêreng de serdest bû, di heman demê de di celebên ku Lanr1 û alelê AnMan berxwedêr hildigirin, ew balê dikişîne ser cûrbecûrkirina van reaksiyonên jenosîlipîn-ê yên di navbera cûrbecûr reaksiyonên parastinoxox de.
Homologa 1-aminocyclopropane-1-karboksîlate oxidase (ACO) dema ku bi lupinê ve hatî vegirtin bi girîngî hate sererast kirin (9 gen) an jî kêm (2 gen) hate sererast kirin.Ji bilî du îstîsnayan, hemî van bersivan di 6 hp de pêk hatin.li 83A: 476.Reaksiyona enzîmatîk a ku ji hêla proteînên ACO ve tê meşandin di hilberîna etilenê de pêngava rêje-sînordar e û ji ber vê yekê pir tête rêve kirin84.Ethylene hormonek nebatê ye ku di rêkûpêkkirina pêşkeftina nebatan û bersivdana şert û mercên stresa abiotîk û biyotîk de cîhêreng rola dilîze.Veguheztina veguheztina ACO û aktîvkirina rêça nîşana etilenê di zêdekirina berxwedana birincê ya li hember fungusê hemibiotrophic oryzae oryzae bi rêkûpêkkirina hilberîna celebên oksîjena reaktîf û phytoalexins ve têkildar e.Pêvajoyek enfeksiyona pelê ya pir dişibihe ku di navbera M. oryzae û C. lupini88,89 de hatî dîtin, li hember paşperdekirina girîng a homologên ACO di rêza 83A: 476 de ku di vê lêkolînê de hatî ragihandin, îhtîmala peydakirina berxwedanê ji bo NLL anthracnose Ethylene di rêyên molekulî de gavek navendî ya îşaretkirinê diguhezîne.
Di lêkolîna heyî de, tepeserkirina mezin a gelek genên ku bi fotosentezê ve girêdayî ne li 6 hpi di 83A: 476 de û li 48 hpi li Mandeloop û nifûsa 22660 hate dîtin.Rêje û pêşveçûna van guhertinan li gorî astê ye.Di vê ceribandinê de berxwedana Anthracnose hate dîtin.Di van demên dawî de, tepeserkirina xurt û zû ya transkrîptên fotosentezê di gelek modelên danûstendinên nebat-patojen de, di nav de bakterî û fungî yên pathogenîk, hatine ragihandin.Lezgîn (ji 2 HPI di hin danûstendinan de) û tepeserkirina gerdûnî ya genên ku bi fotosentezê re têkildar in di bersivdayîna enfeksiyonê de dikare bêparêziya nebatê li ser bingeha bicîhkirina celebên oksîjenê yên reaktîf û pêwendiya wan bi riya acid salicylic re ji bo navbeynkariya reaksiyonên alerjîk bike 90,94.
Di encamê de, mekanîzmayên bersiva berevaniyê yên ku ji bo rêza herî berxwedêr (83A: 476) têne pêşniyar kirin, naskirina bilez a pathogenê ji hêla gena R ve (dibe ku TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) û îşareta salicilic acid û etilen bi navbeynkariya bersiva alerjîk, li dûv damezrandina SAR-a-rangeya dirêj vedihewîne.çalakî ji hêla proteîna DIR-1 ve tê piştgirî kirin.Divê were zanîn ku heyama biotrofî ya enfeksiyona C. lupini pir kurt e (nêzîkî 2 roj), li dûv wê mezinbûna nekrotîk95.Veguhastina di navbera van qonaxan de dibe ku bi nekroz û bilêvkirina proteînên etilen-çêkirî yên ku di nebatên mêvandar de wekî bertekên reaksiyonên hestiyariyê tevdigerin re têkildar be.Ji ber vê yekê, pencereya demê ji bo girtina serketî ya C. lupini di qonaxa biyotrofî de pir teng e.Ji nû ve bernamekirina genên ku bi redox û fotosentezê ve girêdayî ye ku di 83A: 476 de li 6 hpi têne dîtin bi pêşkeftina hîfeyên fungal re hevaheng e û pêşkeftina bersivek parastinê ya serketî di qonaxa biotrofî de destnîşan dike.Bersivên transkrîptomîkî yên Mandelup û nifûsa 22660 dibe ku pir dereng be ku ji bo girtina fungusê berî veguheztina mezinbûna nekrotîkî, lêbelê, Mandelup dikare ji nifûsa 22660 bi bandortir be ji ber ku rêziknameya bi lez a proteîna PR-10 berxwedana horîzontal pêşve dike.
ETI, ku ji hêla gena R-ya kanonîkî ve tê rêve kirin, ji bo berxwedana fasûlî li hember anthracnose mekanîzmayek hevpar xuya dike.Bi vî rengî, di modela legume Medicago truncatula de, berxwedana li hember anthracnose ji hêla gena RCT1 ve, endamek ji çîna gena R ya nebatê ya TIR-NBS-LRR97, tê peyda kirin.Ev gen di alfalfayê de dema ku ji bo nebatên hestiyar tê veguheztin di heman demê de berxwedana anthracnose ya spektrumek fireh jî peyda dike.Di fasûlîya hevpar (P. vulgaris) de, heta îro ji du deh genên berxwedanê yên anthracnose hatine tespît kirin.Hin ji van genan li herêmên ku genên R-ya kanonîk tune ne, têne dîtin, lê gelekên din li keviya kromozomên ku koma genê NBS-LRR hildigirin, di nav de TIR-NBS-LRRs99 hene.Lêkolîna SSR-a-berfirehiya genomê di heman demê de têkiliya gena NBS-LRR bi berxwedana anthracnose re di fasûlîya hevpar de piştrast kir.Gena R-ya kanonîkî di heman demê de li herêma genomîk ku cihê sereke yê berxwedana anthracnose di lupina spî 101 de hildigire hate dîtin.
Xebata me destnîşan dike ku reaksiyonek berxwedanê ya tavilê, ku di qonaxek destpêkê ya enfeksiyona nebatê de tê çalak kirin (bi tercîhî ne derengtir ji 12 hpi), bi bandor lupina pelên teng ji anthracnozê ku ji hêla fungusa pathogenîk Collelotrichum lupini ve hatî çêkirin diparêze.Bi karanîna rêzgirtina berbi bilind, me profîlên îfadeya cihêreng ên genên berxwedana anthracnose yên di nebatên NLL de ku ji hêla genên berxwedanê yên Lanr1 û AnMan ve têne navbeyn kirin nîşan dan.Parastina serketî bi baldarî sêwirana genên ji bo proteînên ku di redox, fotosentez û pathogenesisê de cih digirin di çend demjimêran de piştî têkiliya yekem a nebatê bi pathogen re têkildar e.Reaksiyonên parastinê yên bi vî rengî, lê di wextê de derengmayîn, di parastina nebatan ji nexweşiyan de pir kêmtir bandor in.Berxwedana anthraxê ya ku ji hêla gena Lanr1 ve hatî navbeynkarîkirin dişibihe bersiva bilez a tîpîk a gena R (bêparastina bi bandorker), dema ku gena AnMan bi îhtîmalek mezin bersivek horizontî peyda dike (berxwedana ku ji hêla nimûneyek molekularî ya mîkrob ve hatî destnîşan kirin), astek nerm a domdariyê peyda dike.
215 xêzên NLL yên ku ji bo nîşankerên anthracnose têne bikar anîn ji 74 cûrbecûr, 60 xetên ku bi derbasbûn an cotbûnê hatine wergirtin, 5 mutant û 76 germplazmayên çolê an orjînal pêk tê.Xet ji 17 welatan hatin, bi giranî ji Polonya (58), Spanya (47), Almanya (27), Avusturalya (26), Rûsya (19), Belarûs (7), Îtalya (5) û xetên din.ji 10 welatan.Set di heman demê de rêzikên berxwedêr ên referansê jî vedihewîne: 83A: 476, Tanjil, Wonga ku alelê Lanr1 hildigire, û Mandelup ku alelê AnMan hildigire.Rêz ji Databasa Çavkaniya Genetîkî ya Lupina Ewropî ya ku ji hêla Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Polonya ve hatî parastin (Tabloya Pêvek S1) hatine wergirtin.
Nebat di bin şert û mercên kontrolkirî de hatin mezin kirin (dema wêneyê 16 saet, germahî 25 ° C bi roj û 18 ° C bi şev).Du dubareyên biyolojîkî hatin analîz kirin.DNA ji pelên sê hefteyî bi karanîna DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Almanya) li gorî protokolê hate veqetandin.Kalîte û giraniya DNAya veqetandî bi rêbazên spektrofotometrik (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) hate nirxandin.Nîşana AnManM1 ku gena berxwedanê ya anthracnose AnMan (ji cv. Mandelup hatî wergirtin) nîşan dide û nîşankerên Anseq3 û Anseq4 li dû gena Lanr1 (ji cv. Tanjil hatî wergirtin) 11,26,28 hatine analîz kirin.Homozîgotên ji bo alelê berxwedêr wekî "1", bi guman - wekî "0" û heterozîgot - wekî 0.5 hatin jimartin.
Li ser bingeha encamên vekolîna nîşankerên AnManM1, AnSeq3 û AnSeq4 û hebûna tovên ji bo ceribandinên paşîn ên paşîn, 50 xetên NLL ji bo fenotîpkirina berxwedana anthracnose hatin hilbijartin.Analîz du ducar li seraxaneyek bi komputerê ve hatî kontrol kirin û bi fotoperiodek 14 demjimêran bi germahiya rojê 22 °C û bi şev jî 19 °C hate kirin.Tov têne xêzkirin (bi lûlek tûj cilê tovê li aliyê berevajî yê embrîyoyê tê jêkirin) ji bo pêşî li razana tov bê girtin ji ber ku tov pir hişk e û ji bo ku yekreng şînbûn were misoger kirin.Nebat di kulikan de (11 × 11 × 21 cm) bi axa sterîl (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Polonya) hatin mezin kirin.Teşhîskirin bi cureya Colletotrichum lupini Col-08, ku di sala 1999-an de ji stûnên nebatên lupin-pelên teng ên ku li zeviyek li Verzhenitsa, Polonya Mezin (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ) mezin bûne, hat kirin.Deverek bistînin.Veqetandin di navgîna SNA ya di 20° C. de di bin ronahiya reş de 21 rojan hatin çandin da ku bibe sporulasyon.Çar hefte piştî çandiniyê, dema ku nebat gihîştin qonaxa 4-6 pelan, însulasyona bi spartina konidiayê bi giraniya 0,5 x 106 konidia di ml de tê kirin.Piştî derzîlêdanê, nebat 24 saetan di tariyê de di nemahiya ji % 98 û germahiya 25 °C de hatin ragirtin da ku geşbûna konîdiyan û pêvajoya enfeksiyonê hêsantir bike.Dûv re nebat di binê fotoperiodek 14 demjimêran de di germahiya rojê 22°C/şev 19°C û nemahiya %70 de hatin mezin kirin.Pûana nexweşiyê 22 roj piştî derzîlêdanê hate çêkirin û li gorî hebûn an tunebûna birînên nekrotîk ên li ser stûn û pelan ji 0 (bêparastî) heya 9 (pir hesas) bû.Wekî din, piştî xalîkirinê, giraniya nebatan hate pîvandin.Têkiliyên di navbera jenotîpên nîşanker û fenotîpên nexweşiyê de wekî pêwendiyên du-serokê hatin hesibandin (nebûna nîşankerên heterozîgot di rêza rêzan de ji bo analîzkirina fenotîpa berxwedana anthracnose).