Кээ бир LC көйгөйлөрүн чечүү темалары эч качан эскирбейт, анткени LC практикасында маселелер бар, атүгүл инструмент технологиясы убакыттын өтүшү менен жакшырып баратат. LC тутумунда көйгөйлөр пайда болуп, эң начар пик формага алып келиши мүмкүн болгон көптөгөн жолдор бар. Чоку формага байланыштуу маселелер келип чыкканда, бул натыйжалардын мүмкүн болгон себептеринин кыскача тизмеси көйгөйлөрдү чечүү тажрыйбабызды жөнөкөйлөтүүгө жардам берет.
Бул "LC Troubleshooting" рубрикасын жазуу жана ай сайын темалар жөнүндө ой жүгүртүү кызыктуу болду, анткени кээ бир темалар эч качан модадан чыкпайт. Хроматография изилдөө чөйрөсүндө кээ бир темалар же идеялар эскирип калат, анткени алар жаңы жана жакшыраак идеялар менен алмаштырылгандыктан, бузулууларды жоюу жаатындагы көйгөйлөрдү жоюу боюнча биринчи макала ушул журналда пайда болгон (ал убакта LC Journal) 1918-жылы кээ бир темалар дагы эле актуалдуу бойдон калууда. бир нече жыл, мен суюк хроматографияга (LC) таасир этүүчү заманбап тенденцияларга бир нече LC Troubleshooting бөлүмдөрүнө басым жасадым (мисалы, басымдын кармалууга тийгизген таасирин түшүнүүбүздүн салыштырмалуу салыштыруусу [2] Жаңы жетишкендиктер) LC натыйжаларын чечмелөө жана заманбап LC инструменттери менен көйгөйлөрдү кантип чечүү керек. жана өлүм” LC мүчүлүштүктөрдү аныктоо темалары — биз колдонуп жаткан системанын жашына карабастан, ар кандай бузулууларды оңдоочу үчүн абдан маанилүү элементтер. Бул сериянын негизги темасы LCGCнын көптөгөн лабораторияларда илинип турган атактуу “LC Troubleshooting Guide” дубал диаграммасына (4) абдан актуалдуу. Бул сериянын үчүнчү бөлүгүндө, мен ар кандай көйгөйлөрдүн пайда болушуна же пайда болушуна байланыштуу маселелерге басым жасоону чечтим. начар чоку формасы! Биз бул маселелердин баарын бир макалада майда-чүйдөсүнө чейин карап чыга албайбыз, андыктан теманын бул биринчи бөлүгүндө мен көбүнчө көргөндөрдүн айрымдарына токтолом. Жаш жана кары LC колдонуучулар бул маанилүү тема боюнча пайдалуу кеңештерди жана эскертүүлөрдү табат деп ишенем.
Мен көйгөйдү аныктоо боюнча суроолорго "баары мүмкүн" деп көбүрөөк жооп берип келе жатам. Бул жооп чечмелениши кыйын болгон байкоолорду карап жатканда оңой сезилиши мүмкүн, бирок мен аны көп учурда ылайыктуу деп эсептейм. Пиктин начар болушунун көптөгөн себептери менен, көйгөй эмне болушу мүмкүн экенин карап жатканда ачык пикирди сактоо жана мүмкүн болуучу себептерге артыкчылык бере билүү маанилүү.
Ар кандай көйгөйлөрдү чечүү көнүгүүлөрүнүн негизги кадамы, бирок менимче, бул чечилиши керек болгон көйгөй бар экенин моюнга алуу. Көйгөй бар экенин моюнга алуу көбүнчө аспап менен болгон окуя теория, эмпирикалык билим жана тажрыйба тарабынан калыптанган биздин күтүүлөрүбүздөн башкача экенин моюнга алуу дегенди билдирет (5). ffy, алдыңкы жээк, калдыктар ж.б.), ошондой эле кеңдикке да. Чыныгы чоку формасына болгон күтүүлөрүбүз жөнөкөй. Теория (6) окуу китебинин күтүүсүн жакшы колдойт, көпчүлүк учурларда хроматографиялык чокулар симметриялуу болушу керек жана 1а-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, Гаусс таралышынын формасына ылайык келиши керек. 1-сүрөттө байкоого боло турган кээ бир башка мүмкүнчүлүктөр көрсөтүлгөн, башкача айтканда, кээ бир нерселер туура эмес болуп кетиши мүмкүн. Бул бөлүмдүн калган бөлүгүндө биз бул форманын түрлөрүнө алып келиши мүмкүн болгон жагдайлардын айрым конкреттүү мисалдарын талкуулоого убакыт бөлөбүз.
Кээде хроматограммада чокулар такыр эле байкалбайт, алар элюталанат. Жогорудагы дубал диаграммасы чокунун жоктугу (үлгү иш жүзүндө детектордун реакциясы ызы-чуунун үстүнөн көрүү үчүн жетиштүү концентрацияда максаттуу аналитти камтыйт деп ойлосок) адатта аспаптын кээ бир көйгөйлөрүнө же туура эмес мобилдик фаза шарттарына (эгер байкалган болсо) байланыштуу экенин көрсөтүп турат.чокулары, адатта өтө “алсыз”).
Жогоруда айтылгандай, көңүл буруп, аны оңдоого аракет кылуудан мурун канчалык чоку кеңейишине чыдаш керек деген суроо, мен келечектеги макалада талкуулай турган татаал тема. Менин тажрыйбам боюнча, чокулардын чокусунун кеңейиши көбүнчө чокусунун формасынын олуттуу өзгөрүшү менен коштолот жана чокусунун чокусу чокусуна чейинки же бөлүнүүгө караганда кеңири таралган. :
Бул маселелердин ар бири LC көйгөйүн чечүүнүн мурунку сандарында кеңири талкууланган жана бул темаларга кызыккан окурмандар бул маселелердин түпкү себептери жана мүмкүн болуучу чечимдери жөнүндө маалымат алуу үчүн бул мурунку макалаларга кайрыла алышат.Кененирээк маалымат.
Чокусу, эң чокусу жана бөлүнүшү химиялык же физикалык кубулуштардан улам келип чыгышы мүмкүн жана бул көйгөйлөрдүн потенциалдуу чечимдеринин тизмеси химиялык же физикалык көйгөй менен күрөшүп жатканыбызга жараша ар түрдүү болот. Көбүнчө, хроматограммадагы ар кандай чокуларды салыштыруу менен, сиз эң маанилүү көрсөтмөлөрдү таба аласыз. Эгерде бир же бир нече чокуга гана таасир этсе, бирок калгандары жакшы көрүнсө, себеби, кыязы, химиялык.
Пик калдыктарынын химиялык себептерин бул жерде кыскача талкуулоо үчүн өтө татаал. Кызыккан окурман тереңирээк талкуулоо үчүн “LC Troubleshooting” журналынын жакында чыккан санына кайрылат (10). Бирок, аракет кылуу оңой нерсе – инъекцияланган аналитикалык заттын массасын азайтуу жана чокусунун формасы жакшырарын көрүү. кичинекей талдануучу массаларды же хроматографиялык шарттарды инъекциядан чоңураак массалар менен да жакшы пик формаларын алуу үчүн өзгөртүү керек.
Чокусу калдыктарды сактоонун көптөгөн потенциалдуу физикалык себептери да бар. Мүмкүнчүлүктөрдү деталдуу талкуулоого кызыккан окурмандар “LC Troubleshooting” (11) журналынын дагы бир акыркы санына кайрылышат. Чокусу калдыктардын көп таралган физикалык себептеринин бири инжектор менен детектордун (12) ортосундагы чекиттеги начар байланыш болуп саналат. Мурда биз колдонбогон инъекциялык клапанды орнотуп, дат баспас болоттон жасалган капиллярга куюлган феррулдуу кичинекей көлөмдөгү инъекциялык укурук орноттук. Бир нече каталарды оңдоо эксперименттеринен кийин биз инъекциялык клапандын статорундагы порттун тереңдиги биз көнүп калгандан бир топ терең экенин түшүндүк, натыйжада биз түтүктүн түбүндө чоң өлчөмдүү көлөм пайда болду. порттун түбүндөгү өлүк көлөмдү жок кылуу үчүн феррулду тийиштүү абалга келтириңиз.
1e-сүрөттө көрсөтүлгөндөй чоку фронттор да физикалык же химиялык көйгөйлөрдөн улам келип чыгышы мүмкүн. Алдыңкы четтин жалпы физикалык себеби колоннадагы бөлүкчөлөрдүн катмарынын жакшы жыйылган эместиги же бөлүкчөлөр убакыттын өтүшү менен кайра уюшулгандыгы болуп саналат. Бул физикалык кубулуштун натыйжасында пайда болгон калдыктардын чокусу сыяктуу, муну оңдоонун эң жакшы жолу - мамычаны алмаштыруу жана биз көбүнчө химиялык сызыктарды баштапкы сызык менен кайталоо. кармалуу шарттары. Идеалдуу (сызыктуу) шарттарда, стационардык фазада кармалып турган аналиттин көлөмү (демек, кармап калуу фактору) колоннадагы анализденүүчү заттын концентрациясына сызыктуу түрдө байланыштуу. Хроматографиялык жактан, бул колонкага куюлган аналиттин массасы көбөйгөн сайын чоку бийиктейт, бирок кеңейбейт. r көбүрөөк масса сайылган сайын. Мындан тышкары, сызыктуу эмес фигуралар хроматографиялык чокулардын формасын аныктайт, натыйжада алдыңкы же арткы четтер пайда болот. Чокусу калдыктарды (10) пайда кылган массалык ашыкча жүктөөдөгүдөй эле, сызыктуу эмес кармалуудан келип чыккан чокусу да инъекцияланган аналиттин массасын азайтуу жолу менен диагностикаланышы мүмкүн. Бул жүрүм-турумду азайтуу үчүн хроматографиялык шарттарды өзгөртүү керек.
Кээде биз 1f-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, "бөлүнгөн" чоку болуп көрүнгөн нерсени байкайбыз. Бул маселени чечүүнүн биринчи кадамы чоку формасынын жарым-жартылай коэлюциядан (б.а. эки башка, бирок тыгыз элюцияланган кошулмалардын болушу) улам келип чыккандыгын аныктоо болуп саналат. Эгерде чындыгында бири-бирине жакын элюцияланган эки башка аналит бар болсо, анда бул алардын тандоосу, резолюциясынын, резолюциясынын, же тиркеменин кайра санынын көбөйүшүнүн маселеси. ent "бөлүнгөн" чокулары физикалык менен байланыштуу. Иштин мамычанын өзү менен эч кандай байланышы жок. Көбүнчө, бул чечимдин эң маанилүү белгиси хроматограммадагы бардык чокулар бөлүнгөн формаларды көрсөтөбү же бир же эки эле. Эгер ал бир же эки болсо, бул, балким, ко-элюция маселеси;эгерде бардык чокулар бөлүнгөн болсо, бул физикалык маселе, кыязы, мамычанын өзүнө байланыштуу.
Колоннанын физикалык касиеттери менен байланышкан Split чокулары, адатта, жарым-жартылай бөгөттөлгөн кириш же чыгуу frits, же колоннадагы бөлүкчөлөрдүн кайра уюштуруу, мобилдик фазага колонна канал түзүүнүн белгилүү бир аймактарында мобилдик фазага караганда тезирээк агып жол .башка аймактарда (11) .Жарым-жартылай тыгылып frit кээде мамычаны тескери аркылуу тазаланышы мүмкүн;бирок, менин тажрыйбам боюнча, бул, адатта, узак мөөнөттүү чечим эмес, кыска мөөнөттүү. Бул бөлүкчөлөр колонканын ичинде кайра биригип калса, заманбап мамычалар менен көбүнчө өлүмгө алып келет. Бул учурда, маманды алмаштырып, улантуу эң жакшы.
1g-сүрөттөгү чокусу, ошондой эле менин өзүмдүн лабораториямдагы жакынкы мисалдан, адатта сигнал ушунчалык жогору болгондуктан, ал жооп берүү диапазонунун жогорку чегине жеткенин көрсөтөт. Оптикалык абсорбенция детекторлору үчүн (бул учурда UV-vis), аналиттин концентрациясы өтө жогору болгондо, анализатор детектордун агымынын клеткасы аркылуу өткөн жарыктын көбүн өзүнө сиңирип алат, ал бул жагдайлар аныктала турган сигналдын өтө аз нурун калтырат. ызы-чуунун ар кандай булактары, мисалы, адашкан жарык жана "караңгы агым", сигналды сырткы көрүнүшү боюнча абдан "бүтүлбөгөн" кылып, аналитикалык концентрациядан көз каранды эмес.Мындай болгондо, көйгөйдү көбүнчө аналиттин инъекциясынын көлөмүн азайтуу — инъекциянын көлөмүн азайтуу, үлгүнү суюлтуу же экөө тең оңой чечсе болот.
Хроматография мектебинде биз үлгүдөгү талдануучу заттын концентрациясынын индикатору катары детектор сигналын (б.а. хроматограммадагы у огу) колдонобуз. Демек, нөлдөн төмөн сигналы бар хроматограмманы көрүү кызыктай сезилет, анткени жөнөкөй чечмелөө бул анализдин терс концентрациясын көрсөтөт – бул албетте физикалык жактан мүмкүн эмес.
Бул учурда, терс чокусу колонкадан чыккан молекулалар чокуга чейин жана андан кийин мобилдик фазанын өзүнө караганда азыраак жарыкты сиңирип алгандыгын билдирет. Бул, мисалы, салыштырмалуу төмөн аныктоо толкун узундуктарын (<230 нм) жана ушул толкун узундуктарында жарыктын көпчүлүк бөлүгүн сиңирип алган мобилдик фазалык кошумчаларды колдонууда пайда болушу мүмкүн. Мындай кошумчалар, мисалы, фазалык фазанын өзүнөн азыраак жарыкты сиңирип алат. Калибрлөө ийри сызыгын даярдоо жана так сандык маалыматты алуу үчүн чындыгында терс чокуларды колдонсо болот, ошондуктан аларды болтурбоо үчүн эч кандай негизги себеп жок (бул ыкманы кээде “кыйыр UV аныктоо” деп да аташат) (13). Бирок, эгерде биз чындап эле терс чокулардан таптакыр качууну кааласак, абсорбенцияны аныктоодо, эң жакшы чечим бул – бул сиңирүүчү фазаны көбүрөөк сиңирүү, башкача айтканда, мобилдик фазаны же толкундун башка өзгөрүшүн колдонуу. кыймылдуу фаза, ошондуктан алар аналиттерге караганда жарыкты аз сиңирет.
Терс чокулар сынуу көрсөткүчүн (RI) аныктоону колдонгондо да пайда болушу мүмкүн, эгерде үлгүдөгү талдануучу заттан башка компоненттердин сынуу көрсөткүчү, мисалы, эриткичтин матрицасы, мобилдик фазанын сынуу көрсөткүчүнөн айырмаланат. Бул UV нурун аныктоодо да болот, бирок бул эффект эки учурда тең терс дал келүүлөрдү азайтуу жолу менен начарлашы мүмкүн. матрица мобилдик фазага.
Үчүнчү бөлүктө LC көйгөйлөрүн чечүүнүн негизги темасы, мен байкалган чоку формасы күтүлгөн же кадимки чоку формасынан айырмаланган кырдаалдарды талкууладым. Мындай көйгөйлөрдү эффективдүү оңдоо күтүлгөн чоку формаларды билүүдөн башталат (теорияга же буга чейинки тажрыйбанын негизинде), андыктан бул күтүүлөрдөн четтөөлөр ачык. Мен эң көп көргөн себептерден. Бул деталдарды билүү көйгөйлөрдү аныктоону баштоо үчүн жакшы жерди камсыздайт, бирок бардык мүмкүнчүлүктөрдү камтыбайт. Себептердин жана чечимдердин тереңирээк тизмесине кызыккан окурмандар LCGC “LC Troubleshooting Guide” дубал диаграммасына кайрыла алышат.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" дубал диаграммасы.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Хроматографияда маалыматтарды анализдөө жана сигналдарды иштетүү (Elsevier, New York, NY, 1998), 43-96-беттер.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF and Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.