Acquisitio et distributio nutrimentorum pabulationem insectorum et proprietates historiae vitae integrat. Ad compensandas defectus nutrimentorum specificorum in diversis vitae stadiis, insecta haec nutrimenta per cibum supplementarem obtinere possunt, exempli gratia, secretionibus vertebratorum vescendo in processu qui "lacunae" appellatur. Culex *Anopheles arabiani* malnutritus videtur et, ideo, nutrimenta et ad metabolismum et ad reproductionem requirere. Propositum huius studii erat aestimare utrum agitatio *An. arabiensis* in urinam bovinam ad acquisitionem nutrimentorum proprietates historiae vitae meliorem reddat.
Fac ut tutum sit. *Arabiensis* odore urinae bovinae recentis, 24 horarum, 72 horarum, et 168 horarum natae attracta est, et feminae hospitem quaerentes et sanguinem (48 horis post cibum sanguinis) nutritae in olfactometro tubuli Y mensuratae sunt, et feminae gravidae pro probatione pariendi aestimatae sunt. Deinde analysis chemica et electrophysiologica coniuncta adhibita est ad composita bioactiva in urina bovina in omnibus quattuor classibus aetatis identificanda. Mixturae syntheticae compositorum bioactivorum in experimentis tubuli Y et in agro aestimatae sunt. Ad urinam bovinam et eius principale compositum nitrogenium continens, uream, ut potentiales victus supplementales vectoribus malariae investigandas, parametri pascendi et characteres historiae vitae mensurati sunt. Proportio culicum feminarum et quantitas urinae bovinae et ureae absorptae aestimatae sunt. Post pastionem, feminae pro superviventia, volatu alligato, et reproductione aestimatae sunt.
Sanguinem et alimentum hospitis quaere. In studiis laboratorium et agrorum, Arabes ad odorem naturalem et syntheticum urinae bovinae recentis et vetustae attracti sunt. Feminae gravidae indifferentes erant ad responsa urinae bovinae in locis pariendi. Feminae hospitem quaerentes et sanguinem sugentes active urinam bovinam et uream absorbent et has opes secundum compromissa historiae vitae, pro functione status physiologici ad volatum, superviventiam, vel reproductionem, distribuunt.
Acquisitio et distributio urinae bovinae *Anopheles arabinis* ad meliorem vitae characteristicam. Supplementum urinae bovinae capacitatem vectoris directe afficit, augendo superviventiam diurnam et densitatem vectoris, et indirecte mutando actionem volandi, et ideo in futuris exemplaribus consideranda est.
Acquisitio et distributio nutrimentorum pabulationem insectorum et proprietates historiae vitae integrat [1,2,3]. Insecta cibum eligere et acquirere possunt et pabulationem compensatoriam praestare secundum disponibilitatem cibi et requisita nutrimentorum [1, 3]. Distributio nutrimentorum a processu historiae vitae pendet et ad diversas necessitates qualitatis et quantitatis victus in diversis stadiis vitae insectorum ducere potest [1, 2]. Ad defectus nutrimentorum specificorum compensandos, insecta haec nutrimenta per pabulationem supplementarem, ut in luto, variis excrementis et secretionibus vertebratorum, et cadaveribus, processu qui lacunae appellatur [2], obtinere possunt. Quamquam varietas specierum papilionum et tinearum imprimis describatur, aquae foveae etiam in aliis ordinibus insectorum occurrunt, et attractio ad et pastio ex his generibus opum effectus significativos in valetudinem et alias proprietates historiae vitae habere potest [2, 4, 5, 6], 7]. Culex malariae *Anopheles gambiae* sensu lato (sl) ut adultus 'malnutritus' emergit [8], ita aquatio munus magnum in proprietatibus historiae vitae eius agere potest, sed hoc habitus tam... Longe neglectum est. Usus agitationis ut modus augendae nutrimentorum ingestionem in hoc vehiculo magni momenti attentionem meretur, cum hoc graves consequentias epidemiologicas habere possit.
Consumptio nitrogenii in culicebus Anopheles feminis adultis limitata est propter reservas caloricas ex statu larvali portatas et usum inefficientem farinae sanguinis [9]. Femina Ann.gambiae sl hoc typice compensat supplendo cibo sanguinis supplemento [10, 11], ita plures homines periculo morbi contrahendi exponens et culices periculo praedationis maiori exponens. Aliter, culices cibum supplementum excrementorum vertebratorum uti possunt ad composita nitrogenia acquirenda quae adaptationem et mobilitatem volandi augent, ut ab aliis insectis demonstratum est [2]. Hoc respectu, attractio fortis et distincta unius ex speciebus sororibus intra An. Complexus specierum Gambian sl, Anopheles arabinis, urina bovina recentis et vetusta [12, 13, 14], interest. Anopheles arabinis opportunisticus est in praeferentiis hospitis et notus est se cum bobus consociare et eis vesci. Urina bovina est fons dives in compositis nitrogeniis, cum urea 50-95% nitrogenii totalis in urina recenti repraesentet [15, ...]. 16]. Dum urina bovina senescit, microorganismi his opibus utuntur ad complexitatem compositorum nitrogeniorum intra 24 horas minuendam [15]. Cum rapido incremento ammoniae, coniuncto cum deminutione nitrogenii organici, microorganismi alcalophili (quorum multi composita culicibus toxica producunt) florent [15], qui fortasse Ann. arabiensis femina praefertim ad urinam 24 horas vel minus natam attrahitur [13, 14].
In hoc studio, *An* hospites et *An* sanguine pasti quaesiti sunt. Per primum cyclum gonadotropini, *An* arabiensis aestimatus est pro acquisitione compositorum nitrogeniorum, inter quos urea, per mixturam urinae. Deinde, series experimentorum peracta est ad investigandum quomodo culices feminae hanc potentialem opem nutrimenti ad meliorem superviventiam, reproductionem et ulteriorem pabulationem distribuant. Denique, odor urinae bovinae recentis et vetustae aestimatus est ad determinandum utrum haec indicia certa pro *An* hospite et *An* sanguine pasto praebeant. In investigatione huius potentialis opis nutrimenti, *An* arabiensis correlationes chemicas post differentiam attractivitatis observatam detexit. Mixturae odorum syntheticae compositorum organicorum volatilium (VOCs) in urina vetusta 24 horarum identificatae ulterius sub condicionibus campi aestimatae sunt, eventus sub condicionibus laboratorium obtentos extendentes et effectum odoris urinae bovinae in diversos status physiologicos demonstrantes. Attractionem culicum. Eventus obtenti confirmant *An* arabiensis composita nitrogenia in urina vertebratorum inventa acquirere et distribui ad characteres historiae vitae afficiendos. Hi eventus in contextu potentialium consequentiarum epidemiologicarum et quomodo ad vigilantiam et moderationem vectorum adhiberi possint discutiuntur.
*Anopheles arabicans* (stirps Dongola) ad 25 ± 2°C, 65 ± 5% RH, et cyclum lucis:tenebrae 12:12 horarum conservati sunt. Larvae in alveolis plasticis (20 cm × 18 cm × 7 cm) aqua destillata repletis et cibo piscium Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE) nutritae sunt. Pupae in poculis 30 ml (Nolato Hertila, Åstorp, SE) collectae, deinde in caveas Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) translatae sunt ut adultorum emergere liceret. Adultis solutio saccharosa 10% ad libitum usque ad 4 dies post emergerem (dpe) praebita est, quo tempore feminis hospitem quaerentibus victus statim ante experimentum oblatus est, vel per noctem aqua destillata ante experimentum, ut infra describitur, inediae sunt. Feminae ad experimenta in tubis volatus adhibitae tantum per 4-6 dies inediae sunt. horas cum aqua ad libitum. Ad culices sanguinem sugentes ad subsequentes bioexperimenta praeparandos, quattuor feminae dpe sanguine ovino defibrotico (Håtunalab, Bro, SE) per systema membranae pascendi (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK) praebito sunt. Feminae plene congestae deinde in caveas singulas translatae sunt et cibus directe, ut infra describitur, vel 10% saccharosum ad libitum per 3 dies ante experimenta infra descripta, eis praebitum est. Feminae posteriores ad bioexperimenta tuborum volatus adhibitae et in laboratorium translatae sunt, et deinde aquam destillatam ad libitum per 4-6 horas ante experimentum acceperunt.
Ad quantificandam urinae et ureae consumptionem in feminis adultis *An.Arab*, probationes pascendi adhibitae sunt. Feminae hospitem quaerentes et sanguine pascentes victus 1% urinae bovinae recentis et vetustae dilutae, varias ureae concentrationes, et duo exemplaria (10% saccharosa et aqua) per 48 horas praebitus est. Praeterea, color cibarius (1 mg ml-1 xyleni cyanidi FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) victui additus est et in matrice 4 × 4 in tubis microcentrifugis 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figura 1A) suppeditatus est. Ad marginem imple (~300 µl). Ad certamen inter culices et potentialia effectus coloris tincturae vitandos, 10 culices in magna patella Petri (12 cm diametro et 6 cm altitudine; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figura 1A) in tenebris completis ad 25 ± 2 cm °C et 65 ± 5% ... (vel ...) ... humiditas relativa. Haec experimenta quinquies ad decies repetita sunt. Post expositionem ad victum, culices ad -20°C positi sunt donec ulteriorem analysin facerent.
Quaerite urinam bovinam et uream ab hospite et femina Anopheles arabianus sanguinem sugens absorptas. In experimento pascendi (A), culices feminae victus ex urina bovina recenti et vetusta, variis ureae concentrationibus, saccharosi (10%), et aqua destillata (H2O) constabat. Feminae hospitem quaerentes (B) et sanguine pascentes (C) plus saccharosi quam ulla alia victus probata absorbuerunt. Nota feminas hospitem quaerentes urinam bovinam 72 horarum minus quam urinam bovinam 168 horarum (B) absorbuisse. Medium nitrogenii contentum totale (± deviatio standardis) urinae in insertione repraesentatur. Feminae hospitem quaerentes (D, F) et sanguinem sugentes (E, G) uream modo dosi dependente absorbent. Volumina media inhalata (D, E) cum nominibus litterarum diversis inter se significanter differebant (ANOVA unidirectionalis utens analysi post hoc Tukey; p < 0.05). Vectes erroris errorem standardis mediae (BE) repraesentant. Linea recta punctata lineam regressionis log-linearis repraesentat. (F, G)
Ad cibum absorptum liberandum, culices singuli in tubulos microcentrifugae 1.5 ml continentes 230 µl aquae destillatae positi sunt, et textus utens pistillo disposable et motore sine filo (VWR International, Lund, SE) disruptus est, deinde centrifugatio ad 10 krpm per 10 min. Supernatans (200 µl) in microplacam 96 puteorum (Sigma-Aldrich) translatum est, et absorptio (λ620) utens lectore microplacarum spectrophotometro fundato (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm determinata est. Aliter, culices in 1 ml aquae destillatae contusi sunt, cuius 900 µl in cuvetam ad analysin spectrophotometricam (λ620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE) translati sunt. Ad consumptionem alimentariam quantificandam, curva norma per dilutionem serialem praeparata est ad producendum 0.2 µl ad 2.4 µl 1 mg... ml-1 xyleni cyanidi. Deinde, densitas optica concentrationum tincturae notarum adhibita est ad determinandam quantitatem cibi quam quisque culicem ingessit.
Data voluminis per analysin variantiae unidirectionalem (ANOVA) deinde per comparationes binarias post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007) analysata sunt. Analyses regressionis linearis ingestionem ureae concentratione dependentem descripserunt et responsa inter culices hospitem quaerentes et sanguinem sugentes comparaverunt (GraphPad Prism v8.0.0 pro Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Circiter viginti µl exemplorum urinae ex singulis aetatibus in Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ligati et in capsulis stanneis (8 mm × 5 mm) inclusi sunt. Capsulae in cameram combustionis analysatoris CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) insertae sunt ad nitrogenii contentum in urina recenti et vetusta determinandum secundum protocollum fabricatoris. Nitrogenium totale (g N l-1) quantificatum est secundum concentrationes ureae notas, quae ut norma adhibitae sunt.
Ad effectum victus in superviventiam feminarum hospitem quaerentium et sanguinem sugentium aestimandum, culices singillatim in magnis patellis Petri (12 cm diametro et 6 cm altitudine; Semadeni) cum foramine reticulato in operculo (3 cm diametro) positi sunt. Victus statim post 4 dies in urina (DPE) dabatur, et continebat 1% urinam bovinam recentem et maturatam dilutam, quattuor concentrationes ureae, et duas probationes, 10% saccharosum et aquam. Quisque victus pipetta in tamponem dentalem (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) insertum in syringam 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE) immissus est, embolo remoto, et super patellam Petri positum (figura 1). 1A). Victum tuum quotidie muta. Laboratorium ut supra descriptum est conserva. Culices superstites bis in die numerati sunt, dum culices mortui abiecti sunt donec ultimus culices mortuus est (n = 40 per curationem). Superviventia culicum variis victubus pastorum statistice analysata est utens curvis superviventiae Kaplan-Meyer. et probationes log-rank ad comparandas comparationes distributionis superviventiae inter dietas (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Mola volantis contra culices, secundum Attisano et al. [17] facta, ex tabulis acrylicis pellucidis 5 mm crassis (10 cm lata × 10 cm longa × 10 cm alta) sine tabulis anterioribus et posterioribus (Fig. 3: superius). Apparatus cardinis cum tubo verticali ex columna chromatographiae gasosae (0.25 mm diametri; 7.5 cm longitudinis) facto, cuius extremitates adhaerent acum insecti inter binos magnetes neodymii 9 cm distantes suspensam. Tubus horizontalis ex eadem materia factus (6.5 cm longitudinis) tubum verticalem bisecābat, bracchium vinctum formans, et bracchium quod parvum frustum chartae aluminii, ut signum interrumpens lucem, gerebat.
Feminae, quae per viginti quattuor horas inediae erant, hoc victu per triginta minuta ante coertionem datae sunt. Deinde culices feminae, quae plene pascebantur, singillatim in glacie per duas vel tres minutas anesthetizatae sunt et acubus insectorum cera apum (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) adfixae, deinde bracchiis tuborum horizontalium ligatae. Mola Volans. Revolutiones per volatum per instrumentum datorum specialiter constructum notatae sunt, deinde programmate PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE) conservatae et exhibitae. Mola volantis in conclavi climate moderato collocata est (12 h:12 h, lux: tenebrae, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Ad exemplar actionis volandi visualizandum, tota distantia volata (m) et numerus totus actionum volandi continuarum per horam per spatium 24 horarum computati sunt. Praeterea, media distantia a singulis feminis volata inter curationes comparata est et per ANOVA unidirectionalem et analysin post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) analysata est, ubi media distantia variabilis dependens, dum curatio factor independens, habita est. Accedit quod numerus medius circuituum per incrementum 10 minutorum computatur.
Ad effectum victus in reproductionem ovorum *A. arabiensis* aestimandum, sex feminae (4 dpe) directe in caveas *Bugdorm* (30 cm × 30 cm × 30 cm) post sanguinis collectionem translatae sunt, deinde victu experimentali per 48 horas, ut supra descriptum est, praebitum est. Deinde victus remoti sunt et pocula pariendi (30 ml; *Nolato Hertila*) 20 ml aquae destillatae repleta die tertio per 48 horas, singulis 24 horis mutando, praebita sunt. Quodque regimen victus 20-50 vicibus repetendum est. Ova pro singulis caveis experimentalibus numerata et notata sunt. Subexempla ovorum adhibita sunt ad magnitudinem mediam et variationem longitudinis ovorum singularum (n ≥ 200 per victu) aestimandam, microscopio Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) instructo Camera Leica (DFC) 320 R2 utens. Leica Microsystems Ltd., Germania). Ova reliqua in conclavi climate temperato sub condicionibus normalibus nutriendi per 24 horas servata sunt, et pars larvarum primi stadii nuper emergentium (n ≥ 200 per victum) mensurata est, ut supra descriptum est. Numerus ovorum et magnitudo ovorum et larvarum inter curationes comparata sunt, utens ANOVA unidirectionali et analysi post hoc Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Volatiles spatii capitis ex urina recenti (hora una post collectionem), urina 24 horarum, 72 horarum, et 168 horarum maturatione ex exemplaribus boum Zebu, et Arsi generibus collectis collectae sunt. Commoditatis causa, exempla urinae mane primo collecta sunt dum vaccae adhuc in stabulo erant. Exempla urinae ex decem individuis collecta sunt, et 100-200 ml cuiusque exempli in singulos saccos coquendi polyamidicos (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH et Co., Minden, Germania) in tympanis polyamidicis 3 litrorum cum operculo, in doliis plasticis vinylchloridis, translata sunt. Volatiles spatii capitis ex singulis exemplis urinae bovinae vel directe (recentis) vel post maturationem ad temperaturam ambientem per horas 24, horas 72, et horas 168 collecta sunt, id est, singula exempla urinae singulas aetates repraesentativa erant.
Ad collectionem volatilium in spatio capitis (headspace), systema circuitus clausi adhibitum est ad fluxum gasis carbone activato filtrati (100 ml min-1) per sacculum polyamidicum ad columnam adsorptionis per 2.5 horas circulandum, antlia vacui diaphragmatica (KNF Neuberger, Freiburg, DE) utens. In exemplo, collectio in spatio capitis ex sacculo polyamidico vacuo facta est. Columna adsorptionis ex tubulis Teflon (5.5 cm x 3 mm diametri) continentibus 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) inter obturacula lanae vitreae facta est. Ante usum, columna cum 1 ml n-hexani redistilati (Merck, Darmstadt, DE) et 1 ml pentani (solventis puri 99.0% gradus GC, Sigma Aldrich) perfundebatur. Volatilia adsorpta cum 400 μl pentani eluta sunt. Collectiones in spatio capitis collectae et deinde ad -20°C conservatae sunt donec ad ulteriorem analysin adhiberentur.
Responsiones morum An hospitem quaerentibus et sanguinem consumentibus. Extracta volatilia *Headspace* ex urina recenti, 24 horarum, 72 horarum, et 168 horarum collecta, ad extracta volatilia ex culicibus *Arabidopsis* examinata sunt, olfactometro tubo vitreo recto [18] utens. Experimenta peracta sunt per ZT 13-15, tempus culminis activitatis An domum quaerendi. *Arab* [19]. Olfactometrum tubo vitreo (80 cm × 9.5 cm diameter) illuminatum est cum 3 ± 1 lux lucis rubrae desuper. Fluxus aeris carbone filtratus et humidificatus (25 ± 2 °C, 65 ± 2% humiditas relativa) bioexperimentum transiit ad 30 cm s-1. Aer per seriem reticulorum chalybis inoxidabilis transit, fluxum laminarem et structuram pennae uniformem creans. Dispensator tamponis dentalis (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), suspensus ex spira 5 cm in extremo vento versus... olfactometrum, cum mutationibus stimulatoris singulis quinque minutis. Ad analysin, 10 μl cuiusque extracti spatii capitis, diluti 1:10, ut stimulus adhibiti sunt. Aequalis quantitas pentani ut testis adhibita est. Singuli culices hospitem quaerentes vel sanguinem sugentes in singulis caveis liberationis positi sunt 2-3 horis ante initium experimenti. Cavea liberationis in latere ventum versus olfactometrum posita est, et culices per 1 minutum acclimatare permissum est, deinde valvula papilionis caveae aperta est ad liberationem. Attractione ad curationem vel testis analysata est ut proportio culicum qui cum fonte intra 5 minuta a liberatione in contactum venerunt. Quodque extractum volatile spatii capitis et testis saltem 30 vicibus replicati sunt, et ad vitandos effectus unius diei, idem numerus curationum et testium in quoque die experimentali probatus est. Responsiones quaerendae ab hospite et sanguine pasti. Resp. Arabica contra series spatii capitis analysata sunt utens regressione logistica nominali secuta comparationibus binis pro rationibus imparibus (JMP Pro, v14.0.0, Institutum SAS Inc.).
Responsio generationis An. Extracta spatii capitis ex urina bovina recenti et vetusta in caveis Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science) analysata sunt. Pocula plastica (30 mL; Nolato Hertila) 20 mL aquae destillatae repleta substratum generationis praebuerunt et in angulis caveae oppositis, 24 cm inter se distantibus, posita sunt. Pocula curationis cum 10 μl cuiusque extracti spatii capitis dilutione 1:10 adaptata sunt. Aequalis quantitas pentani ad poculum moderatorium adaptandum adhibita est. Pocula curationis et moderatoria inter singula experimenta permutata sunt ad effectus positionis moderandos. Decem feminae sanguine nutritae in caveas experimentales ad ZT 9-11 emissae sunt et ova in poculis 24 horis post numerata sunt. Formula ad indicem generationis computandum est: (numerus ovorum in poculo curationis positorum – numerus ovorum in poculo moderatorio positorum)/(numerus totalis ovorum positorum). Quaeque curatio octies repetita est.
Analysis chromatographica gasosa et detectio formae antennarum electronicarum (GC-EAD) An. arabiensis feminae peracta est sicut antea descriptum est [20]. Breviter, extracta volatilia recentia e spatio capitis separata sunt utens Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) instructum columna HP-5 (30 m × 0.25 mm diametri interni, 0.25 μm crassitudine pelliculae, Agilent Technologies). et urina senescentia. Hydrogenium ut phasis mobilis adhibitum est cum fluxus linearis mediocris 45 cm s⁻¹. Quodque exemplum (2 μl) per 30 secunda in modo sine divisione iniectum est cum temperatura ingressus 225 °C. Temperatura furni GC programmata est a 35 °C (3 minuta tenacitatis) ad 300 °C (10 minuta tenacitatis) ad 10 °C min⁻¹. In divisore effluentis GC, 4 psi nitrogenii addita sunt et divisa 1:1 in cruce voluminis mortui humilis Gerstel 3D/2 (Gerstel, Mülheim, DE) inter detectorem ionizationis flammae et EAD. Capillare effluentis GC pro EAD per lineam translationis Gerstel ODP-2, quae temperaturam furni GC plus 5 °C sequitur, in tubum vitreum (10 cm × 8 mm) transmissum est, ubi cum aere carbonis filtrato et humidificato (1.5 l min⁻¹) mixtum est. Antenna posita est. 0.5 cm ab exitu tubi. Quisque culex unum exemplum repraesentavit, et pro culicibus hospitem quaerentibus, saltem tres exemplorum exempla in exemplaribus urinae cuiusque aetatis peracta sunt.
Identificatio compositorum bioactivorum in collectionibus spatii capitis urinae bovinae recentis et vetustae utens GC et spectrometro massae coniunctis (GC-MS; 6890 GC et 5975 MS; Agilent Technologies) ad responsa antennalia in analysi GC-EAD elicenda, operans in modo ionizationis impactus electronici ad 70 eV. GC instructum erat columna capillari silicae fusae HP-5MS UI-obducta (60 m × 0.25 mm diametro interno, 0.25 μm crassitudine pelliculae) utens helio ut phase mobili cum fluxus lineari medio 35 cm s-1. Exemplum 2 μl iniectum est utens eisdem configurationibus injectoris et temperatura furni ac pro analysi GC-EAD. Composita identificata sunt secundum tempus retentionis (indicem Kovát) et spectra massae comparata cum bibliotheca consuetudinaria et bibliotheca NIST14 (Agilent). Composita identificata confirmata sunt iniectione normarum authenticarum (Lima Addita 1: Tabula S2). Ad quantificationem, heptyl acetas (10 ng, puritas chemica 99.8%, Aldrich) ut norma externa iniecta est.
Aestimatio efficaciae mixturae odoris syntheticae ex compositis bioactivis in urina recenti et vetusta identificatis ad attrahendum Ans. arabiensis hospitem quaerentem et sanguinem sugentem, eodem olfactometro et protocollo ut supra utentes. Mixturae syntheticae compositionem et proportiones compositorum in extractis volatilibus mixtis spatii capitis urinae recentis, vetustae 24 horarum, 48 horarum, 72 horarum, et 168 horarum imitatae sunt (Figura 5D-G; Lima Addita 1: Tabula S2). Ad analysin, utere 10 μl dilutionis 1:100 mixturae plene syntheticae, cum ratione emissionis generali ab circiter 140-2400 ng h-1 variante, ad aestimandam attractivitatem ad culices hospitem et sanguinem sugentes. Deinde, experimentum perficitur in mixturis completis, in quibus mixturae subtractivae compositorum singularum mixturae completae removentur. Responsa quaerendi ab hospite et Ans. sanguine pastis. Mixturae Arab contra mixturas syntheticas et subtractivas analysatae sunt utens regressione logistica nominali secuta comparationibus binis pro imparibus. rationes (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ad diiudicandum num urina bovina indicium habitationis hospitis pro culice malariae esse posset, urina bovina recens et vetusta, ut supra descriptum est collecta, et aqua in situlas 3 litrorum capacitatis (100 ml) reticulatas et in laqueis escae hospitis posita sunt. (Versio BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Decem laquei 50 m inter se in pascuis positi, 400 m a communitate vici (Silay, Aethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) sine pecore, in locis permanentibus feturae et vicis. Quinque laquei calefacti sunt ad simulandam praesentiam hospitis, dum quinque laquei sine calefactis relicti sunt. Quisque locus curationis singulis noctibus per quinque noctes in summa rotatur. Numerus culicum in laqueis urina diversarum aetatum escatis captus comparatus est utens regressione logistica cum distributione binomiali beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
In vico malariae endemicae prope oppidum Maki, regione Oromiae, Aethiopiae (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figura 6A). Studium inter medium Augustum et medium Septembrem ante annuam aspersionem residualem domesticam, una cum longo tempore pluviali, peractum est. Quinque paria domorum (20–50 m inter se distantia) in finibus vici sita, pro studio selecta sunt (Fig. 6A). Criteria ad domos deligendas adhibita erant: animalia nulla in domo permissa, coctio intra aedes (ligna vel carbones trahendi) nulla permissa (saltem per tempus probationis), et domus cum maximo duobus incolis, in locis non insecticidis dormientibus. Sub rete contra culices tractato. Approbatio ethica a Consilio Revisionis Ethicae Investigationis Institutionalis (IRB/022/2016) Facultatis Scientiarum Naturalium (CNS-IRB), Universitatis Addis Ababa, secundum normas a Declaratione Societatis Medicae Mundi Helsingiensis constitutas, concessa est. Consensus ab unoquoque capite familiae auxilio ministrorum extensionis sanitatis obtentus est. Totus processus ab administrationibus localibus in gradu districtus et custodiae ('kebele') probatur. Designatio experimentalis designationem quadrati Latini 2 × 2 secuta est, in qua mixturae syntheticae et moderamina domibus paribus prima nocte assignata sunt et inter domos proxima nocte experimentali permutata sunt. Hic processus decies repetitus est. Praeterea, ad aestimandam activitatem culicum in domibus selectis, muscipulae CDC positae sunt ut quinque noctes continuas initio, medio et fine experimenti in agro eadem hora diei currerent.
Mixtura synthetica sex composita bioactiva continens in heptano (solvente 97.0% gradus GC, Sigma Aldrich) dissoluta est et ad 140 ng h-1 dispensatore funiculi gossypii [20] emissa. Dispensator funiculi permisit ut omnia composita in proportionibus constantibus per experimentum duodecim horarum emitterentur. Heptanum ut exemplar adhibitum est. Ampulla iuxta punctum ingressus laquei lucis Centrorum pro Morborum Imperio et Praeventione (CDC) suspensa est (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figura 6A). Laquei 0.8 – 1 m supra terram, prope pedem lecti, suspensi sunt, et voluntarius sub rete contra culices non tractato dormivit et inter horas 18:00 et 06:30 operatus est. Culices per sexum et statum physiologicum (non pasti, pasti, semi-gravidi, et gravidi [21]) capti deinde per analysin reactionis concatenationis polymerasis (PCR) examinati sunt ad species morphologice ut A. gambiae sl identificatas identificandas. Membra complexus [23]. In... In studio in agro, captio domorum parium per exemplar logisticum nominale analysata est, ubi attractio variabilis dependens erat et tractatio (mixtura synthetica contra control) effectus fixus erat (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Hic valores χ² et p ex probatione rationis verisimilitudinis referimus.
Aestima utrum tutum sit. *Arabiensis* urinam, principalem fontem nitrogenii, uream, per directam esum obtinere potuit, intra 48 horas ab administratione per 4 dies post (dpe) experimenta esus feminarum hospitem quaerentium et sanguine lactantium (Fig. 1A). Feminae et hospitem quaerentes et sanguinem sugentes significanter plus saccharosi absorbuerunt quam ulla alia victus vel aqua (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 et F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, respective; Fig. 1B,C). Praeterea, feminae hospitem quaerentes minus in urina post 72 horas comederunt comparatum cum urina post 168 horas (Fig. 1B). Cum victu uream continenti oblato, feminae hospitem quaerentes significanter maiorem quantitatem ureae ad 2.69 mM comparatam cum omnibus aliis concentrationibus et aqua absorbuerunt, dum a 10% saccharosi non distinguibile. (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Figura 1D). Hoc responso feminarum sanguine lactarum discrepabat, quae typice significanter plus diaetarum urea continentium quam aquam absorbebant, quamvis significanter minus quam 10% saccharosum (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Figura 1).1E). Praeterea, cum inter duos status physiologicos compararetur, feminae phlebotomizatae plus ureae quam feminae hospitem quaerentes in minimis concentrationibus absorbebant, et hae feminae similes quantitates ureae in altioribus concentrationibus absorbebant (F(1,953) = 78.82, p < 0.0001; Figura 1F, G). Dum consumptio ex diaeta urea continenti valores optimos habere videbatur (Figura 1D,E), feminae in utroque statu physiologico quantitatem ureae absorptae per totum ambitum concentrationum ureae modo log-lineari modulare poterant (Figura...). 1F,G). ).Similiter, culices nitrogenii absorptionem suam temperare videntur per quantitatem urinae absorptae regulandam, cum quantitas nitrogenii in urina in quantitate absorpta reflectatur (Figurae 1B, C et B insertae).
Ad aestimandos effectus urinae et ureae in superviventiam culicum hospitem quaerentium et sanguinem sugentium, feminae urina omnium quattuor aetatum (recens, post 24 horas, 72 horas, et 168 horas post depositionem) datae sunt, et variae concentrationes ureae, necnon aqua destillata et 10% saccharosi, ut exemplar (Figura 2A) praebebant. Haec analysis superviventiae demonstravit victum effectum significantem habuisse in superviventia generali in feminis hospitem quaerentibus (urina: χ² = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ² = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Figura 2B, C) et feminis sanguine pastis (urina: χ² = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ² = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Figura...). 2D,E). In omnibus experimentis, feminae urina, ureae, et aquae pastae significanter inferiores ratas supervivendi habuerunt comparatae feminis saccharosa pastis (Figura 2B-E). Feminae hospitem quaerentes, urina recenti et vetusta pastae, diversas ratas supervivendi exhibuerunt, cum eae quae urinam vetustam 72 horarum (p = 0.016) pastae essent, minimam probabilitatem supervivendi habentes (Figura 2B). Praeterea, feminae hospitem quaerentes, 135 mM ureae pastae, diutius supervixerunt quam aquae in grupo comparationis (p < 0.04) (Figura 2C). Comparatae aquae, feminae urina recenti et urina 24 horarum pastae diutius supervixerunt (p = 0.001 et p = 0.012 respective; Figura 2D), dum feminae urina 72 horarum pastae diutius supervixerunt quam eae quae urinam recentem brevem feminarum et urinam vetustam 24 horarum (p < 0.0001 et p = 0.013 respective; Figura 2D) pastae sunt. Cum 135 mM ureae pastae sunt... urea, feminae sanguine pastae diutius supervixerunt quam omnes aliae ureae et aquae concentrationes (p < 0.013; Figura 2E).
Superviventia feminarum hospitum et sanguinem sugentium *Anopheles arabinis*, quae urina bovina et urea vescebantur. In experimento biologico (A), culices feminae victus ex urina bovina recenti et vetusta, variis ureae concentrationibus, saccharosi (10%) et aqua destillata (H₂O) constabat. Superviventia culicum hospitum quaerentium (B, C) et sanguinem sugentium (D, E) singulis duodecim horis notata est, donec omnes feminae urina (B, D) et urea (C, E) vescerentur, et feminae moderatrices, saccharosi et aqua, mortuae sunt.
Spatium totum et numerus circuituum in experimento molae volatus per spatium 24 horarum determinatus inter culices hospites quaerentes et sanguinem sugentes differebant, qui minorem activitatem volandi in universum ostenderunt (Fig. 3). Culices hospites quaerentes qui urinam recentem et vetustam vel saccharosum et aquam praebuerunt distinctas volandi rationes ostenderunt (Fig. 3), feminis urina recenti vescentibus activioribus aurora, dum ii qui 24 et 168 horas aetatis nutriti sunt. Culices qui urina vescebantur diversas volandi rationes exhibuerunt et praesertim diurni erant. Culices feminae quae saccharosum vel urinam 72 horarum praebuerunt activitatem per spatium 24 horarum ostenderunt, dum feminae quae aquam praebuerunt per medium spatium activiores erant. Culices saccharoso vescentes summos gradus activitatis sero nocte et primo mane ostenderunt, dum ii qui urinam 72 horarum aetatis ingesserunt constantem activitatem per 24 horas experti sunt (Figura 3).
Volatus Anopheles arabinis feminarum, quae sanguinem sugunt et venatores quaerunt, urina bovina et urea vescuntur. In experimento molae volatus, culices feminae urina bovina recenti et vetusta, variis ureae, saccharosi (10%), et aquae destillatae (H2O) concentrationibus vescebantur, bracchiis horizontalibus, libere rotantibus (supra) alligatae sunt. Feminarum hospitem quaerentium (sinistra) et sanguinem sugentium (dextra), distantia totalis et numerus volatus per horam pro singulis victus per spatium 24 horarum notati sunt (obscurus: griseus; clarus: albus). Distantia media et numerus medius volatuum ad dextram graphi activitatis circadianae monstrantur. Vectes errorum errorem standardem mediae repraesentant. Analysis statistica vide textum.
In genere, tota activitas volandi feminarum hospitem quaerentium exemplar simile illi distantiae volandi per spatium 24 horarum secuta est. Distantia volandi media significanter a victu ingesto afficiebatur (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), et feminae hospitem quaerentes 72 horas urinae ingesserunt significanter longiores distantias comparatae cum omnibus aliis victubus (p < 0.0001) volaverunt, et culices saccharo pasti diutius volaverunt quam culices recentes (p = 0.022) et urina 24 horarum matura (p = 0.022) pasti. Contra exemplari activitatis volandi a victu urinae descripto, feminae hospitem quaerentes urea pastae activitatem volandi persistentem per spatium 24 horarum exhibuerunt, culmine in secunda parte phasis obscurae attingentes (Fig. 3). Quamquam exemplaria activitatis similia erant, feminae hospitem quaerentes urea pastae significanter distantiam volandi mediam auxerunt secundum concentrationem absorptam (F(5, 138) = ...). 1310.91, p < 0.0001). Feminae hospitem quaerentes, quae ulla concentratione ureae pascebantur, diutius volaverunt quam feminae sive aquam sive saccharosum pascebantur (p < 0.03).
Volatus culicum sanguinem sugentium stabilis erat et per 24 horas per omnes diaetas continuata, cum activitate urinae aucta per secundam dimidiam partem temporis obscuri tam in feminis aqua pastis quam in feminis recentibus et 24 horis natis pastis (imago 3). Dum diaeta urinae distantiam volandi mediam in feminis sanguine pastis significanter affecit (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), diaeta ureae non affecit (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) cum alia urina et diaeta comparativa (recens, p = 0.0091; 72 horae, p = 0.0022; 168 horae, p = 0.001; saccharosum, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Effectus urinae et ureae in parametros reproductivos in bio-experimentis ovorum deponendi aestimati sunt (Figura 4A) et investigati secundum numerum ovorum a singulis feminis positorum, magnitudinem ovorum, et larvas primi stadis nuper exclusas. Numerus ovorum positorum. Feminae Arabicae urina pastae per victum variabant (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Fig. 4B). Feminae farina urinae 24 horarum et sanguinis pastae ova significanter plura posuerunt quam feminae aliis diaetis urinae pastae, et similes erant illis quae saccharo pastae sunt (Fig. 4B). Similiter, magnitudo ovorum a feminis urina pastis positorum variabat per victum (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), cum feminis urinae 24 horarum et saccharo pastis ova significanter maiora quam feminae aqua pastae parientibus, dum ova feminarum urina 168 horarum pastarum significanter minora erant (Fig. 4C). Praeterea, victus urinae... magnitudinem larvarum significanter affecit (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), larvis significanter maioribus ex ovis a feminis urina pastis 24 et 72 horarum natis depositis emergentibus quam ex ovis larvarum depositis. Feminae aqua pastae et urina pastae 168 horarum natae depositis (Figura 4D).
Actio reproductiva Anopheles arabinis feminarum urina bovina et urea vescentium. Feminae culices sanguine pastae cibis ex urina bovina recenti et vetusta, variis ureae concentrationibus, saccharosi (10%), et aqua destillata (H₂O) per 48 horas nutritae sunt, antequam in bioexperimentis collocarentur et substrata ovorum ovipariorum obtinerentur (A). Numerus ovorum (B, E), magnitudo ovorum (C, F) et magnitudo larvarum (D, G) a cibo proviso (urina bovina: BD; urea: EG) significanter affecti sunt. Mediae pro singulis parametris, utens nominibus litterarum diversis mensi, inter se significanter differebant (ANOVA unidirectionalis utens analysi post hoc Tukey; p < 0.05). Vectes errorum errorem standardem mediae repraesentant.
Urea, ut praecipua pars nitrogeniosa urinae, cum feminis sanguine in pastu praebetur, parametros reproductionis in omnibus studiis significanter affecit. Numerus ovorum a feminis urea in pastu post cibum sanguinis positorum, secundum concentrationem ureae (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), feminae concentrationibus ureae inter 134 µM et 1.34 mM in pastu plura ova posuerunt (Figura 4E). Feminae concentrationibus ureae 134 µM vel supra in pastu ova maiora posuerunt quam feminae aqua in pastu (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Figura 4F), et magnitudo larvarum, quamvis similibus concentrationibus ureae in matribus affecta (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001), variabilior erat (Figura 4G).
Attractio generalis ad extracta volatilia urinae bovinae in spatio capitis hospites quaerentia. *Arabiensis* in olfactometro tubi vitrei (Fig. 5A) aestimata aetate urinae significanter affecta est (χ² = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Fig. 5B). Analysis post hoc ostendit odorem urinae vetustae post 24 horas gradus attractionis significanter altiores comparatum cum omnibus aliis curationibus (72 horae: p = 0.0060, 168 horae: p = 0.012, pentanum: p = 0.00070) effecisse, excepto odore urinae recentis (p = 0.13; Figura 5B). Quamquam attractio generalis culicum sanguinem sugentium ad odorem urinae non significanter differt (χ² = 8.78, df = 4, p = 0.067; Fig. 5C), hae feminae significanter attractiores extractis volatilibus in spatio capitis comparatae cum urina 72 horarum vetusta comparatae cum controlibus inventae sunt (p = ... 0.0066; Figura 5C).
Responsiones morum ad odores urinae bovinae naturales et syntheticos in investigatione Anopheles arabiani hospitis et sanguine nutriti. Schema olfactometri tubi vitrei (A). Attractio extractorum volatilium spatii capitis ex urina bovina recenti et vetusta ad culices hospitis (B) et sanguinem sugentes (C). Invenire reactionem tentaculorum Domini An. Extracta spatii capitis ex urina bovina recenti (D), 24 horarum (E), 72 horarum (F), et 168 horarum (G) vetusta isolata monstrantur. Vestigia detectionis antennae electronicae (EAD) mutationes tensionis in responsione ad composita bioactiva in spatio capitis e chromatographo gaseoso eluta et a detectore ionizationis flammae (FID) detecta ostendunt. Scala amplitudinem responsionis (mV) contra tempus retentionis (s) repraesentat. Proprietates et rationes emissionis (µg h-1) compositorum biologice activorum monstrantur. Asteriscus singularis (*) responsionem constantem parvae amplitudinis indicat. Asterisci duplices (**) responsiones non reproducibiles indicant. Invenire hospitem (H) et... *An. arabiensis* sanguinem sugens (I) varias habet attractiones ad mixturas syntheticas odorum urinae bovinae recentis et vetustae. Proportiones mediae culicum ad diversa nomina litterarum attractorum inter se significanter differebant (ANOVA unidirectionalis utens analysi post hoc Tukey; p < 0.05). Vectes errorum errorem scalae standardem repraesentant.
Femina *Ann. arabiensis*, post 72 et 120 horas a sanguine edaci, tempore ovae, nulla praeferentia ostensa est pro extractis volatilibus in urina bovina recenti et matura, comparatis cum pentano in experimentis (χ² = 3.07, p > 0.05; Fasciculus additionalis 1: Fig. S1).
Pro *Ann. arabiensis* femina, analyses GC-EAD et GC-MS octo, sex, tria, et tria composita bioactiva (Figura 5D-G) invenerunt. Quamquam differentiae in numero compositorum quae responsa electrophysiologica elicuerunt observatae sunt, pleraque horum compositorum in singulis extractis volatilibus *headspace* collectis ex urina recenti et vetusta praesentes erant. Ergo, pro singulis extractis, sola composita quae responsum physiologicum ab antennis femineis supra limen producebant in analyses ulteriores inclusa sunt.
Summa volatilium emissionis ratio compositorum bioactivorum in collectione spatii capitis ab 29 µg h⁻¹ in urina recenti ad 242 µg h⁻¹ in urina 168 horarum matura aucta est, praecipue propter p-cresol et m-formaldehydum (augmenta phenoli necnon phenoli). Contra, rationes emissionis aliorum compositorum, ut 2-cyclohexen-1-onum et decanal, cum crescente aetate urinae decreverunt, quod cum observata deminutione intensitatis signi (abundantiae) in chromatogrammate (Fig. 5D)-G pars sinistra) et responsionibus physiologicis ad haec composita (Fig. 5D-G pars dextra) correlatum est.
Summa summarum, mixtura synthetica similem proportionem naturalem compositorum bioactivorum, quae in extractis volatilibus urinae recentis et vetustae reperta sunt (Fig. 5D-G), habuit, nec magnum attractionem in investigatione hospitis (χ² = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) vel culices sanguinem sugentes (χ² = 4.91, df = 4, p = 0.30; Fig. 5I) elicere visa est. Attamen, comparationes post hoc binariae inter curationes demonstraverunt culices hospites quaerentes significanter attractivos fuisse mixturae syntheticae urinae vetustae 24 horarum, comparatis cum pentano in testibus (p = 0.0086; Figura 5H).
Ad munus singularum partium in mixturis syntheticis urinae 24 horas maturatae aestimandum, sex mixturae subtractivae contra mixturas completas in experimento tubi Y aestimatae sunt, in quo singula composita remota sunt. Pro culicibus hospitem quaerentibus, subtractio singularum compositorum a mixtura completa effectum significantem in responsa behavioralia habuit (χ² = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Lima Addita 1: Figura S2A), omnes mixturae subtractivae attractiores erant quam minores quam plene mixtae. Contra, remotio singularum compositorum a mixtura plene synthetica responsa behavioralia culicium sanguinem sugentium non affecit (χ² = 11.38, df = 6, p = 0.077), excepto decanali, quod ad gradus inferiores comparatos cum mixtura completa Attractionis (p = 0.022; Lima Addita 1: Figura S2B) duxit.
In vico Aethiopiae malaria endemica, efficacia mixturae syntheticae urinae bovinae 24 horarum in attrahendis culices sub condicionibus agri per decem noctes aestimata est (Fig. 6A). Summa 4861 culices capti et identificati sunt, quorum 45.7% erant *Anthropus.gambiae sl*, 18.9% *Anopheles pharoensis* et 35.4% *Culex spp.* (Lima addita 1: Tabula S1). *Anopheles arabinis* est solus membrum complexus speciei *Anthropus.gambiae* per analysin PCR identificatum. Mediocriter, 320 culices per noctem capti sunt, quo tempore laquei cum esca mixta synthetica plures culices ceperunt quam laquei paribus sine mixtura (χ²(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Laquei sine esca positi sunt in singulis quinque noctibus moderatoriis initio, medio et fine experimenti. Similes numeri culices capti sunt in singulis pari... laqueis, indicantes nullam praeiudicium inter domos (χ2(0, 1665) = 9 × 10⁻¹³, ​​p > 0.05) et nullam diminutionem populationis per tempus studii. Comparatis cum laqueis testium, numerus culicum captorum in laqueis continentibus mixturam syntheticam significanter auctus est: hospitem quaerens (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), recens sanguinis esus (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) et graviditas (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Lima addita 1: Tabula S1). Hoc etiam in numero totali culicum captorum reflectitur: hospitem quaerens > sanguinem sugens > gravida > semi-gravida > masculus.
Aestimatio in agro efficaciae mixturae odoris urinae bovinae syntheticae per 24 horas. Experimenta in agro in Aethiopia austro-centrali (tabula geographica), prope oppidum Maki (inserere), peracta sunt, utens laqueo lucis Centrorum pro Morborum Imperio (CDC) (dextra) in domibus paribus, cum designo quadrato Latino (imago aerea) (A). Photolaquei CDC synthetici odore escati feminas Anopheles arabescas (B) capiunt, sed non Anopheles farroes (C), modo diverso, effectu physiologico a statu dependente. Praeterea, hi laquei numerum significanter auctum culicum Culex hospitis ceperunt. (D) Comparatum cum testi. Vectes a sinistra indicem selectionis medium culicum captorum in paribus laqueorum escae odorantis (viridis) et testium (apertis) repraesentant (N = 10), dum vectes a dextra indicem selectionis medium in paribus laqueorum testium (apertis; N = 5) repraesentant. ). Asterisci gradus significationis statisticae indicant (*p = 0.01 et ***p < 0.0001).
Tres species diverse captae sunt in laqueis mixturis syntheticis continentibus. Inquisitione hospitis (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), sanguinis nutritione (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) et graviditate (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134), culicum *.arabiensis* in laqueo captum est, mixturam syntheticam emissam (Fig. 6B), dum quantitas *An* non differebat. *Pharoensis* in diversis statibus physiologicis inventi sunt (Fig. 6C). Pro *Culex*, tantum significans augmentum numeri culicum hospites quaerentium inventus est in laqueis mixtura synthetica inescatis (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Fig. 6D), comparatum cum laqueis testigo.
Laquei escae hospitum, extra hospites potentiales inter loca feturae et communitates rurales in Aethiopia positi, adhibiti sunt ad aestimandum utrum culices malariae odorem urinae bovinae ut indicium habitationis hospitis utantur. Absentibus indiciis hospitis, calore, et cum vel sine praesentia odoris urinae bovinae, nulli culices capti sunt (Lima addita 1: Figura S3). Attamen, praesentibus alta temperatura et odore urinae bovinae, culices malariae feminae attractae et captae sunt, quamvis in numero parvo, independenter ab aetate urinae (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Lima addita 1: Figura S3). Contra, aquae moderamina culices malariae ad altas temperaturas non ceperunt (Lima addita 1: Figura S3).
Culices malariae composita nitrogenia continentia per esum compensatorium urinae bovinae (i.e., lacunarum) acquirunt et distribuunt, ut proprietates vitae augeant, similiter aliis insectis [2, 4, 24, 25, 26]. Urina bovina est fons renovabilis facile praesto, arcte coniunctus cum locis requietis vectorum malariae, ut stabulis et vegetatione alta prope domos rurales et loca pariendi. Culices feminae hoc fons olfactu reperiunt et absorptionem compositorum nitrogeniatorum in urina, inter quae urea, principalis pars nitrogenia in urina, moderari possunt [15, 16]. Secundum statum physiologicum culicis feminae, nutrimenta in urina assignantur ad augendam actionem volandi et superviventiam culicum feminarum hospitem quaerentium, necnon superviventiam et proprietates reproductivas individuorum sanguine nutritorum durante primo cyclo gonadotropico. Ergo, mixtura urinae munus nutritionale grave agit vectoribus malariae qui clausi sunt, sicut adulti malnutriti [8], cum culicibus feminis facultatem praebet acquirendi composita nitrogenia importantia per esum parvi periculi. Haec inventio consequentias epidemiologicas significantes habet, cum feminae augent... expectatio vitae, activitas et productio reproductiva, quae omnia capacitatem vectoris afficiunt. Praeterea, hoc genus actionis scopus futurorum programmatum administrationis vectoris esse potest.