Gratias tibi ago quod Nature.com invisisti. Versio navigatri quam uteris limitatam sustentationem CSS habet. Pro optima experientia, commendamus ut navigatro recentiore utaris (vel Modum Compatibilitatis in Internet Explorer deactivare). Interea, ut sustentationem continuam praestemus, situm sine stylis et JavaScript reddemus.
Haemorrhagia immoderata una ex praecipuis causis mortis est. Celeris haemostasis assecuta superviventiam subiecti praestat ut primum auxilium in pugna, accidentibus vehicularibus, et operationibus ad mortem reducendam. Schema compositum fibris nanoporosis firmatum (NFRCS), ex simplici compositione haemostatica pelliculam formante (HFFC) derivatum ut phasis continua, haemostasim incitare et augere potest. Progressus NFRCS in consilio alae libellulae fundatur. Structura alae libellulae constat ex alis transversalibus et longitudinalibus, et membranae alarum inter se connexae sunt ad integritatem microstructurae conservandam. HFFC superficiem fibrae uniformiter pellicula crassitudinis nanometricae tegit et crassitudinem gossypii (Ct) fortuito distributam (phasis dispersa) connectit ad structuram nanoporosam formandam. Combinatio phasium continuarum et dispersarum sumptum producti decies minuit comparatum cum productis commercialiter praesto. NFRCS modificati (tampones vel armillae carpi) in variis applicationibus biomedicis adhiberi possunt. Studia in vivo concluserunt Cp NFRCS elaboratum processum coagulationis in loco applicationis incitare et amplificare. NFRCS, propter structuram suam nanoporosam, microambitum moderari et in gradu cellulari agere potest, quod meliorem curationem vulnerum in exemplo vulneris excisi efficit.
Haemorrhagia immoderata in proelio, intraoperativis et in casibus extremis grave periculum vitae vulneratorum creare potest1. Hae condiciones porro ad augmentum generale resistentiae vascularis periphericae ducunt, quod ad colapsum haemorrhagicum ducit. Mensurae aptae ad haemorrhagiam moderandam per et post chirurgiam potentialiter vitae periculosae habentur2,3. Laesio vasorum magnorum ad ingentem sanguinis iacturam ducit, quae mortalitatem ≤ 50% in proelio et 31% per chirurgiam efficit1. Ingens sanguinis iactura ad diminutionem voluminis corporis ducit, quae output cardiacum minuit. Incrementum resistentiae vascularis periphericae totalis et progressiva microcirculationis laesio ad hypoxiam in organis vitalibus ducunt. Colapsus haemorrhagicus oriri potest si condicio sine interventione efficaci perstat1,4,5. Aliae complicationes includunt progressionem hypothermiae et acidosis metabolicae, necnon perturbationem coagulationis quae processum coagulationis impedit. Colapsus haemorrhagicus gravis cum altiore periculo mortis coniungitur6,7,8. In colapsu gradus III (progressivus), transfusio sanguinis essentialis est ad superviventiam aegroti per morbiditatem et mortalitatem intraoperativam et postoperativam. Ad omnes has condiciones periculosas vitae superandas, scaffold compositum nanoporosum fibris firmatum (NFRCS) elaboravimus, quod minimam polymerorum concentrationem (0.5%) utitur combinatione polymerorum haemostaticorum aquasolubilium.
Fibris roborandis adhibitis, producta sumptibus parcissima excogitari possunt. Fibrae temere dispositae structuram alae libellulae referunt, aequatae striis horizontalibus et verticalibus in alis. Venae transversales et longitudinales alae cum membrana alari communicant (Figura 1). Systema fibrosum cylindricum (NFRCS) ex Ct roborato constat, quasi systema structurae praeditum, meliore robore physico et mechanico (Figura 1). Ob pretium moderatum et artificium, chirurgi malunt fila gossypina (Ct) in operationibus et fasciis adhibere. Ergo, consideratis eius multiplicibus commodis, inter quas > 90% cellulosa crystallina (quae ad augendam actionem haemostaticam confert), Ct ut systema sceletale NFRCS9,10 adhibitum est. Ergo, consideratis eius multiplicibus commodis, inter quas > 90% cellulosa crystallina (quae ad augendam actionem haemostaticam confert), Ct ut systema sceletale NFRCS9,10 adhibitum est. ледовательно, учитывая его многочисленные преимущества, в том числе > 90% кристаллической пеластва (. емостатической активности), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. Quapropter, ob multa commoda, inter quae >90% cellulosa crystallina (quae in aucta activitate haemostatica implicatur), Ct ut systema sceletale NFRCS adhibitum est9,10.> 90% Ct NFRCS9,10> 90%Quapropter, ob multa commoda, inter quae plus quam 90% cellulosa crystallina (quae actionem haemostaticam auget), Ct ut fulcrum pro NFRCS9,10 adhibitum est.Materia Ct superficialiter obducta est (formatio pelliculae nano-crassae observata est) et cum compositione haemostatica pelliculam formanti (HFFC) interconnexa est. HFFC instar matrigel agit, Ct temere collocatum coniungens. Forma elaborata tensionem intra phasem dispersam transmittit (fibras roborans). Difficile est structuras nanoporosas cum bona robore mechanico obtinere minimis concentrationibus polymerorum utens. Praeterea, non facile est formas diversas pro variis applicationibus biomedicis accommodare.
Figura diagramma designationis NFRCS secundum structuram alarum libellulae (A) ostendit. Haec imago analogiam comparativam structurae alarum libellulae (venae intersecantes et longitudinales alae inter se conexae sunt) et photomicrographum sectionis transversalis Cp NFRCS (B) ostendit. Repraesentatio schematica NFRCS.
Cellulae haemostaticae non-vinylaceae (NFRCs) elaboratae sunt utens HFFC (polymero haemostatico haemostatico) ut phase continua ad has limitationes superandas. HFFC constat ex variis polymeris haemostaticis pelliculam formantibus, inter quos chitosan (ut polymerum haemostaticum principale) cum methylcellulosa (MC), hydroxypropylmethylcellulosa (HPMC 50 cp) et alcohol polyvinylicus (PVA) (125 kDa) ut polymerum sustentans qui formationem thrombi promovet. Additio polyvinylpyrrolidini K30 (PVP K30) capacitatem absorptionis humoris NFRCS auxit. Polyethylenum glycolum 400 (PEG 400) additum est ad reticulationem polymerorum in mixturis polymerorum iunctorum emendandam. Tres compositiones haemostaticae HFFC diversae (Cm HFFC, Ch HFFC et Cp HFFC), scilicet chitosan cum MC (Cm), chitosan cum HPMC (Ch), et chitosan cum PVA (Cp), ad Ct applicatae sunt. Varia studia characterisationis *in vitro* et *in vivo* actionem haemostaticam et vulnerum sanandi NFRCS confirmaverunt. Materiae compositae ab NFRCS oblatae ad varias formas scaphorum adaptandas adhiberi possunt ut necessitatibus specificis satisfaciant.
Praeterea, NFRCS in fasciam vel volubilem modificari possunt, ut totam aream laesionis extremitatum inferiorum aliarumque partium corporis tegant. Speciatim ad vulnera membrorum bellicorum, forma NFRCS designata in dimidium brachii vel crus integrum mutari potest (Figura Suppletoria S11). NFRCS in carpi fasciam glutino textili transformari potest, quo sanguinationem ex gravibus vulneribus carpi suicidalibus sistere licet. Propositum nostrum principale est NFRCS cum quam minimo polymero evolvere, quod magnae multitudini (infra limen paupertatis) tradi possit et in arca auxilii primi poni possit. Designo simplici, efficax, et oeconomico, NFRCS communitatibus localibus prodest et impulsum globalem habere potest.
Chitosanum (pondus molecularis 80 kDa) et amaranthus a Merck, India, empti sunt. Hydroxypropylmethylcellulosa 50 Cp, polyethylene glycol 400 et methylcellulosa a Loba Chemie Pvt. LLC, Mumbai, empta sunt. Alcohol polyvinylicus (pondus molecularis 125 kDa) (87-90% hydrolysatum) a National Chemicals, Gujarat, emptus est. Polyvinylpyrrolidinum K30 a Molychem, Mumbai, emptum est, penicilli steriles a Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, aqua Milli Q (systemate purificationis aquae Direct-Q3, Merck, India) ut vectore empti sunt.
NFRCS elaboratum est methodo lyophilizationis11,12. Omnes compositiones HFFC (Tabula 1) paratae sunt agitatore mechanico. Para solutionem chitosani 0.5% utens acido acetico 1% in aqua per agitationem continuam ad 800 rpm in agitatore mechanico. Pondus exactum polymeri onusti indicatum in Tabula 1 solutioni chitosani additum est et agitatum est donec solutio polymeri clara obtenta est. PVP K30 et PEG 400 mixturae resultanti addita sunt in quantitatibus indicatis in Tabula 1, et agitatio continuata est donec solutio polymeri clara viscosa obtenta est. Balneum resultans solutionis polymeri per 60 minuta sonicatum est ad bullae aeris inclusae e mixtura polymeri removendas. Ut in Figura Supplementi S1(b) demonstratur, Ct aequaliter distributum est in singulis puteis laminae 6 puteorum (formae) supplementatae cum 5 ml HFFC.
Lamina sex puteorum per 60 minuta sonicata est ut uniformis madefactio et distributio HFFC in reticulo Ct obtineretur. Deinde lamina sex puteorum ad -20°C per 8-12 horas congelatur. Laminae congelantes per 48 horas lyophilizatae sunt ut variae formulationes NFRCS obtinerentur. Eadem ratio adhibita est ad varias formas et structuras producendas, ut tampones vel tampones cylindricos, vel quamlibet aliam formam pro variis applicationibus.
Chitosanum (80 kDa) (3%) accurate ponderatum in acido acetico 1% dissolvitur agitatore magnetico utens. Solutioni chitosani resultanti 1% PEG 400 additum est et per 30 minuta agitatum est. Solutio resultans in vas quadratum vel rectangulare infunditur et ad -80°C per 12 horas congelatur. Exempla congelata per 48 horas lyophilizata sunt ut Cs13 porosum obtineretur.
Chitosani polymeri cum aliis polymeris (NFRCS) elaborati experimentis subiecti sunt, utens spectroscopia infrarubra transformata Fourier (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, Tokyo, Iaponia) ad compatibilitatem chemicam chitosani cum aliis polymeris confirmandam14,15. Spectra FTIR (latitudo amplitudinis spectralis a 400 ad 4000 cm⁻¹) omnium exemplorum probatarum per 32 perscrutationes obtenta sunt.
Absorptio sanguinis (BAR) omnium formulationum aestimata est methodo a Chen et al. 16 descripta cum levibus modificationibus. NFRK evolutae omnium compositionum in furno vacuo ad 105°C per noctem siccabantur ad solventem residuum removendum. 30 mg NFRCS (pondus initiale exempli – W0) et 30 mg Ct (control positivum) in patellis separatis positae sunt, praemixtionem 3.8% natrii citratis continentibus. Intervallis temporis praefinitis, id est 5, 10, 20, 30, 40 et 60 secundis, NFRCS remotae sunt et superficies earum a sanguine non absorpto purgatae sunt, exemplis in Ct per 30 secundas positis. Pondus finale sanguinis ab NFRCS 16 absorpti (W1) in quoque puncto temporis consideratum est. Percentationem BAR calcula utens formula sequenti:
Tempus coagulationis sanguinis (TCS) determinatum est ut Wang et al. 17 rettulerunt. Tempus requisitum ad coagulandum sanguinem integrum (sanguinem murinum praemixtum cum 3.8% natrii citrato) in praesentia NFRCS ut TCS exempli probationis calculatum est. Variae componentes NFRCS (30 mg) in phialas operculis cochleatis 10 ml positae et ad 37°C incubatae sunt. Sanguis (0.5 ml) phialae additus est et 0.3 ml CaCl2 0.2 M additum est ad coagulationem sanguinis activandam. Denique, phiala singulis 15 secundis (usque ad 180°) inverte donec coagulum firmum formetur. TCS exempli aestimatur per numerum inversionum 17,18. Fundamentum in TCS, duae compositiones optimae ex NFRCS Cm, Ch et Cp ad ulteriores studia characterizationis selectae sunt.
Concentratio basis coagulationis (BCT) compositionum Ch NFRCS et Cp NFRCS determinata est methodo a Li et al. descripta adhibita. 19. Ponantur 15 x 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS, et Cs (exemplar positivum) in patellas Petri separatas (37°C). Sanguis continens 3.8% natrii citratis cum 0.2 M CaCl2 in proportione voluminis 10:1 mixtus est ad processum coagulationis sanguinis incipiendum. 20 µl mixturae sanguinis ratti CaCl2 0.2 M superficiei exemplaris applicati et in patella Petri vacua positi sunt. Exemplar erat sanguis in patellas Petri vacuas sine Ct infusus. Intervallis fixis 0, 3, et 5 minutorum, coagulationem siste addendo 10 ml aquae deionizatae (DI) ad exemplar patellam continentem sine perturbatione coaguli. Erythrocyti non coagulati haemolysim subeunt in praesentia aquae deionizatae et haemoglobinum liberant. Haemoglobinum variis temporibus (HA(t)) ad longitudinem undae 540 nm (λmax haemoglobinum) spectrophotometro UV-Vis mensuratum est. Absorptio absoluta haemoglobini (AH(0)) intra 0 min ex 20 µl sanguinis in 10 ml aquae deionizatae ut norma referentialis adsumpta est. Absorptio relativa haemoglobini (RHA) sanguinis coagulati ex ratione HA(t)/HA(0) eadem sanguinis parte utens calculata est.
Adhibito analysatore texturarum (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, USA), proprietates adhaesivae NFRC ad textum laesum determinatae sunt. Patellam cylindricam fundo aperto contra interiorem partem cutis porcinae (sine strato adipis) preme. Exempla (Ch NFRCS et Cp NFRCS) per cannulam in formas cylindricas imposita sunt ut adhaesio ad cutem porcinam crearetur. Post incubationem trium minutorum ad temperaturam ambientem (RT) (25° C.), vis adhaesiva NFRCS ad constantem celeritatem 0.5 mm/sec notata est.
Praecipua obturantium chirurgicorum proprietas est coagulationem sanguinis augere dum sanguinis iacturam minuere. Coagulatio sine iactura in NFRCS methodo antea divulgata cum levibus modificationibus 19 aestimata est. Tubum microcentrifugum (2 ml) (diametro interno 10 mm) cum foramine 8 × 5 mm2 in uno latere tubi centrifugae fac (vulnus apertum repraesentans). NFRCS ad aperturam claudendam et taenia ad margines externos obsignandos adhibetur. Adde 20 µl 0.2 M CaCl2 tubo microcentrifugo continenti praemixtionem natrii citratis 3.8%. Post 10 minuta, tubi microcentrifugae e patellis remoti sunt et augmentum massae patellarum propter effluxum sanguinis ex NFRK (n = 3) determinatum est. Iactura sanguinis Ch NFRCS et Cp NFRCS cum Cs comparata sunt.
Integritas humida NFRCS determinata est secundum methodum a Mishra et Chaudhary21 descriptam cum modificationibus minoribus. NFRCS in lagenam Erlenmeyer 100 ml cum 50 ml aquae pone et per 60 s agita sine operculo. Inspectio visualis et prioritizatio exemplorum pro integritate physica secundum collectionem.
Vis ligationis HFFC ad Ct investigata est methodis antea publicatis cum modificationibus minoribus. Integritas tegumenti superficialis aestimata est exponendo NFRK undis acusticis (stimulo externo) in praesentia aquae milliQ (Ct). NFRCS Ch NFRCS et Cp NFRCS evoluta in poculo aqua repleto posita et sonicata sunt per 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, et 30 minuta respective. Post exsiccationem, differentia percentuale inter pondus initiale et finale NFRCS ad calculandam percentationem iacturae materiae (HFFC) adhibita est. In vitro BCT porro vim ligationis vel iacturam materiarum superficialium confirmavit. Efficacia ligationis HFFC ad Ct coagulationem sanguinis et tegumentum elasticum in superficie Ct22 praebet.
Homogenitas NFRCS evoluti per BCT exemplorum (30 mg) ex locis generalibus NFRCS temere selectis sumptorum determinata est. Sequere rationem BCT antea dictam ad obsequium NFRCS determinandum. Proximitas inter omnia quinque exempla efficit ut superficiem uniformem tegat et depositionem HFFC in reticulo Ct fiat.
Area contactus sanguinis nominalis (NBCA) sicut antea relatum est cum quibusdam modificationibus determinata est. Sanguinem coagulatum est per compressionem 20 µl sanguinis inter duas superficies Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS et Cs. Post horam unam, duae partes stent separatae sunt et area coagulati manu mensurata est. Valor medius trium repetitionum NBCA NFRCS19 consideratus est.
Analysis Sorptionis Vaporis Dynamicae (DVS) adhibita est ad aestimandam efficaciam NFRCS ad aquam ex ambiente externo vel ex loco laesionis quod coagulationem initiat. DVS absorptionem et iacturam vaporis in exemplo gravimetrice aestimat vel registrat, utens statera ultrasensibili cum resolutione massae ±0.1 µg. Pressio vaporis partialis (humiditas relativa) a regulatore electronico fluxus massae circa exemplum generatur, miscendo gases vectores saturatos et siccos. Secundum normas Pharmacopeae Europaeae, secundum proportionem absorptionis humoris a exemplaribus, exempla in quattuor categorias divisi sunt (0–0.012% p/p− non hygroscopica, 0.2–2% p/p leviter hygroscopica, 2–15% moderate hygroscopica, et > 15% valde hygroscopica)23. Secundum normas Pharmacopeae Europaeae, secundum proportionem absorptionis humoris a exemplaribus, exempla in quattuor categorias divisi sunt (0–0.012% p/p− non hygroscopica, 0.2–2% p/p leviter hygroscopica, 2–15% moderate hygroscopica, et > 15% valde hygroscopica)23.Secundum commendationes Pharmacopoeiae Europaeae, pro ratione absorptionis humoris a exemplaribus, exempla in quattuor categorias divisa sunt (0–0.012% p/p – non hygroscopica, 0.2–2% p/p leviter hygroscopica, 2–quindecim%).% умеренно игроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. (% moderate hygroscopica et > 15% valde hygroscopica)23.4 0-0.012% w/w- 0.2-2% w/w 2-15 % > 15% 23。0-0.012% W/w- 0.2-2% W/w 轻微 2-15% > 15 % 非常吸湿）23。Secundum commendationes Pharmacopoeiae Europaeae, exempla in quattuor classes dividuntur secundum quantitatem humiditatis ab exemplo absorptae (0-0.012% ponderis – non hygroscopica, 0.2-2% ponderis leviter hygroscopica, 2-15% ponderis).% умеренно игроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) XXIII. (% moderate hygroscopicum, > 15% valde hygroscopicum) 23.Efficacia hygroscopica NFCS X NFCS et TsN NFCS in analyzatore DVS TA TGA Q5000 SA determinata est. Per hoc processum, tempus currendi, humiditas relativa (RH), et pondus exempli in tempore reali ad 25°C24 obtenta sunt. Contentum humiditatis per accuratam analysin massae NFRCS calculatur, utens aequatione sequenti:
MC est humiditas NFRCS. m1 – pondus siccum NSAIDs. m2 est massa NFRCS in tempore reali ad datam RH.
Area superficialis totalis aestimata est per experimentum adsorptionis nitrogenii cum nitrogenio liquido postquam exempla ad 25°C per 10 horas (< 7 × 10–3 Torr) evacuata sunt. Area superficialis totalis aestimata est per experimentum adsorptionis nitrogenii cum nitrogenio liquido postquam exempla ad 25°C per 10 horas (< 7 × 10–3 Torr) evacuata sunt. ая площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента по адсорбции азота идким азотом послеотом послеотом послеотом послеотом послеотом посорбции азота идким азотом послеотом при 25 °С в течение 10 (< 7 × 10–3 Торр). Area superficialis totalis aestimata est per experimentum adsorptionis nitrogenii cum nitrogenio liquido postquam exempla evacuata sunt ad 25°C per 10 horas (< 7 × 10–3 Torr).25°C 10 < 7 10-3 Torr）后，使用液氮的氮吸附实验估计总表面积。25°C ая площадь поверхности оценивалась с использованием кспериментов по адсорбции азота идким азоото азоото образцов в течение 10 асов при 25°C (< 7 × 10-3 торр). Area superficialis totalis aestimata est per experimenta adsorptionis nitrogenii cum nitrogenio liquido postquam exempla per decem horas ad 25°C (< 7 x 10-3 torr) evacuata sunt.Area superficialis totalis, volumen pororum et magnitudo pororum NFRCS determinatae sunt instrumento Quantachrome a NOVA 1000e, Austria, per programmata RS 232.
Ex sanguine toto, 5% erythrocytorum (solutio salina ut diluens) parantur. Deinde partem HFFC (0.25 ml) in laminam 96 puteorum et 5% massae erythrocytorum (0.1 ml) transferantur. Mixturam ad 37°C per 40 minuta incubatur. Mixtura erythrocytorum et seri ut exemplar positivum, et mixtura salina et erythrocytorum ut exemplar negativum habita est. Haemagglutinatio secundum scalam Stajitzky determinata est. Scalae propositae sunt hae: + + + + aggregata granulosa densa; + + + pulvini inferiores leves marginibus curvis; + + pulvini inferiores leves marginibus scissis; + anuli rubri angusti circa margines pulvinorum levium; – (negativus) globulus ruber discretus 12 in centro putei inferioris.
Haemocompatibilitas NFRCS secundum methodum Organizationis Internationalis pro Standardizatione (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27 investigata est. Methodus gravimetrica a Singh et al. descripta. Modificationes minores factae sunt ad formationem thrombi in praesentia vel in superficie NFRCS aestimandam. 500 mg Cs, Ch NFRCS et Cp NFRCS in solutione salina phosphato tamponata (PBS) per 24 horas ad 37°C incubata sunt. Post 24 horas, PBS remotum est et NFRCS cum 2 ml sanguinis continentis 3.8% natrii citratis tractata est. In superficie NFRCS, 0.04 ml 0.1 M CaCl2 exemplaribus incubatis adde. Post 45 minuta, 5 ml aquae destillatae additum est ad coagulationem sistendam. Sanguis coagulatus in superficie NFRC cum solutione formaldehydi 36-38% tractatus est. Coaguli formaldehydo fixati siccati et ponderati sunt. Percentatio thrombosis aestimata est per computandum pondus vitri sine sanguine et exemplo (exemplar negativum) et vitri cum sanguine (exemplar positivum).
Prima confirmatione, exempla microscopio optico visualizata sunt, ut facultas superficiei HFFC, Ct interconnexi, et reticuli Ct poros formandi intellegeretur. Sectiones tenues Ch et Cp ex NFRCS lamina scalpello resecatae sunt. Sectio inde orta in lamella vitrea posita est, lamella obducta, et margines glutino fixa sunt. Lamellae praeparatae microscopio optico inspectae sunt et photographia variis magnificationibus capta sunt.
Depositio polymerorum in retibus Ct visualizata est per microscopiam fluorescentem secundum methodum a Rice et al. descriptam. Compositio HFFC ad formulationem adhibita cum tinctura fluorescente (amarantho) mixta est, et NFRCS (Ch et Cp) secundum methodum antea dictam praeparata sunt. Compositio HFFC ad formulationem adhibita cum tinctura fluorescente (amarantho) mixta est, et NFRCS (Ch et Cp) secundum methodum antea dictam praeparata sunt.Compositio HFFC ad formulationem adhibita cum tinctura fluorescente (amarantho) mixta est et NFRCS (Ch et Cp) secundum methodum antea dictam obtenta est.HFFC NFRCS（Ch & Cp）。HFFC NFRCS（Ch & Cp）。Compositio HFFC in formulatione adhibita cum tinctura fluorescente (Amaranto) mixta est et NFRCS (Ch et Cp) accepit, ut ante dictum est.Ex exemplaribus obtentis, tenues sectiones NFRK excisae, in laminas vitreas positae, et laminis tegentibus tectae sunt. Laminas praeparatas sub microscopio fluorescenti, filtro viridi (310-380 nm) utens, observa. Imagines ad magnificationem 4x captae sunt ad relationes Ct et excessum depositionis polymerorum in reticulo Ct intellegendas.
Topographia superficialis NFRCS Ch et Cp determinata est microscopio vi atomica (AFM) cum cantilever TESP acutissimo in modo tapping: 42 N/m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, Taiwan. Asperitas superficialis determinata est per radicem quadrati medii (RMS) programmate (Scanning Probe Image Processor). Varia loca NFRCS in imaginibus tridimensionalibus depicta sunt ad uniformitatem superficialem inspiciendam. Deviatio standardis puncti pro area data definitur ut asperitas superficialis. Aequatio RMS ad quantificandam asperitatem superficialem NFRCS31 adhibita est.
Studia FESEM peracta sunt utens FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, Tokyo, ad morphologiam superficiei Ch NFRCS et Cp NFRCS intellegendam, quae meliorem BCT quam Cm NFRCS ostenderunt. Studium FESEM peractum est secundum methodum a Zhao et al. descriptam 32 cum levibus modificationibus. NFRCS 20 ad 30 mg Ch NFRCS et Cp NFRCS praemixta sunt cum 20 µl natrii citratis 3.8% cum sanguine ratto praemixti. 20 μl 0.2 M CaCl2 additum est exemplaribus sanguine tractatis ad coagulationem initiandam et exempla ad temperaturam ambientem per 10 minuta incubata sunt. Praeterea, erythrocyti superflui a superficie NFRCS ablutione cum solutione salina remoti sunt.
Exempla subsequentia glutaraldehydo 0.1% tractata sunt, deinde in furno aeris calidi ad 37°C siccata ad humiditatem removendam. Exempla siccata obducta et analysata sunt32. Aliae imagines per analysin obtentae erant formatio coaguli in superficie singularum fibrarum gossypii, depositio polymerorum inter Ct, morphologia erythrocytorum (forma), integritas coaguli, et morphologia erythrocytorum in praesentia NFRCS. Areae NFRCS non tractatae et areae NFRCS Ch et Cp tractatae et cum sanguine incubatae pro ionibus elementalibus (natrio, kalio, nitrogenio, calcio, magnesio, zinco, cupro et selenio)33 perscrutatae sunt. Percentationes ionum elementalium inter exempla tractata et non tractata compara ut accumulationem ionum elementalium per formationem coaguli et homogeneitatem coaguli intelligas.
Crassitudo superficiei tegumenti Cp HFFC in superficie Ct per FESEM determinata est. Sectiones transversales Cp NFRCS e structura excisae et per pulverizationem cathodicam inductae sunt. Exempla tegumenti per pulverizationem cathodicam inde orta per FESEM observata sunt et crassitudo superficiei tegumenti mensurata est [34, 35, 36].
Micro-CT radiorum X imagines tridimensionales non destructivas altae resolutionis praebet et permittit tibi studium dispositionis structurae internae NFRC. Micro-CT fasciculum radiorum X per specimen transeuntem adhibet ad coefficientem attenuationis linearis localis radiorum X in specimine registrandum, quod adiuvat ad informationem morphologicam obtinendam. Situs internus Ct in Cp NFRCS et Cp NFRCS sanguine tractatis per micro-CT examinatus est ad efficientiam absorptionis et coagulationem sanguinis in praesentia NFRCS intellegendam37,38,39. Structurae tridimensionales speciminum Cp NFRCS sanguine tractatorum et non tractatorum reconstructae sunt utens micro-CT (V|tome|x S240, Phoenix, Germania). Adhibito programmate VG STUDIO-MAX versione 2.2, plures imagines radiographicae ex diversis angulis (idealiter cum opertura 360°) captae sunt ad imagines tridimensionales pro NFRCS evolvendas. Data projectionis collecta in imagines volumetricas tridimensionales reconstructa sunt utens programmate simplici correspondente 3D ScanIP Academic.
Praeterea, ad distributionem coaguli intellegendam, 20 µl sanguinis citrati praemixti et 20 µl CaCl2 0.2 M in NFRCS addita sunt ad coagulationem sanguinis initiandam. Exempla praeparata durescere permittuntur. Superficies NFRC cum glutaraldehydo 0.5% tractata est et in furno aeris calidi ad 30-40°C per 30 min siccata. Coagulum sanguinis in NFRCS formatum perscrutatum, reconstructum est, et imago tridimensionalis coaguli sanguinis visualisata est.
Experimenta antibacterialia in Cp NFRCS (optime comparata cum Ch NFRCS) peracta sunt methodo antea descripta cum modificationibus minoribus. Actio antibacterialis Cp NFRCS et Cp HFFC determinata est tribus diversis microorganismis probationis [S. aureus (bacteria gram-positiva), E. coli (bacteria gram-negativa) et Candida alba (C. albicans)] in agaro in patellis Petri in incubatore crescentibus. Uniformiter 50 ml suspensionis culturae bacterialis dilutae, concentratione 10⁵-10⁶ CFU ml⁻¹, in medium agarum inocula. Medium in patellam Petri infunde et solidificari sine. Putei in superficie laminae agarorum facti sunt ad implendum HFFC (3 putei pro HFFC et 1 pro negativo controllo). Adde 200 µl HFFC tribus puteis et 200 µl PBS pH 7.4 quarto puteo. In altera parte patinae Petri, discum Cp NFRCS 12 mm super agarum solidificatum pone et PBS (pH 7.4) humecta. Tabulae ciprofloxacini, ampicillini et fluconazoli pro exemplaribus Staphylococci aurei, Escherichia coli et Candida albicans habentur. Zonam inhibitionis manualiter metire et imaginem digitalem zonae inhibitionis capere.
Post approbationem ethicam institutionalem, studium apud Collegium Medicum Kasturba Educationis et Investigationis Manipalis, Karnatakae, in India meridionali peractum est. Protocollum experimentale TEG *in vitro* a Commissione Ethica Institutionali Collegii Medici Kasturbae, Manipalis, Karnatakae (IEC: 674/2020) revisum et approbatum est. Subiecta ex donatoribus sanguinis voluntariis (aetatis 18 ad 55) ex banco sanguinis nosocomii conlecta sunt. Praeterea, formula consensus informati a voluntariis obtenta est ad collectionem exemplorum sanguinis. TEG nativus (N-TEG) ​​adhibitus est ad effectum formulae Cp HFFC in sanguine integro praemixto cum natrii citrato investigandum. N-TEG late agnoscitur propter munus suum in resuscitatione in loco curae, quae problemata clinicis creat propter potentialem morae clinicae significantis in eventibus (probationes coagulationis ordinariae). Analysis N-TEG utens sanguine integro peracta est. Consensus informatus et historia medica accurata ab omnibus participantibus obtenta sunt. Studium participes cum complicationibus haemostaticis vel thromboticis, ut graviditate/postpartum vel morbo hepatico, non inclusit. Subiecta medicamenta quae coagulationis cascadem afficiunt accipiebant etiam ex studio exclusi sunt. Examinationes laboratorium fundamentales (haemoglobinum, tempus prothrombini, thromboplastinum activatum et numerus thrombocytorum) in omnibus participibus secundum rationes consuetas peractae sunt. N-TEG viscoelasticitatem coaguli sanguinis, structuram initialem coaguli, interactionem particularum, roborationem coaguli, et lysis coaguli determinat. Analysis N-TEG data graphica et numerica de effectibus collectivis plurium elementorum cellularium et plasmatis praebet. Analysis N-TEG in duobus voluminibus diversis Cp HFFC (10 µl et 50 µl) peracta est. Propterea, 1 ml sanguinis integri cum acido citrico ad 10 μl Cp HFFC additum est. Adde 1 ml (Cp HFFC + sanguis citratus), 340 µl sanguinis mixti ad 20 µl 0.2 M CaCl2 continentis patellam TEG. Deinde, patinae TEG in TEG® 5000, US impositae sunt ad R, K, angulum alpha, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% exemplorum sanguinis in praesentia Cp HFFC41 metiendum.
Protocollum studii *in vivo* a Commissione Ethica Animalium Institutionali (IAEC), Schola Medicinae Kasturba, Instituto Educationis Superioris Manipal, Manipal (IAEC/KMC/69/2020) revisum et approbatum est. Omnia experimenta animalium secundum commendationes Commissionis ad Moderationem et Supervisionem Experimentationum Animalium (CPCSEA) peracta sunt. Omnia studia *NFRCS* *in vivo* (2 × 2 cm2) in muribus Wistar feminis (ponderantibus 200 ad 250 g) peracta sunt. Omnia animalia ad temperaturam 24-26°C acclimatata sunt, animalibus liberum aditum ad cibum et aquam communem *ad libitum* habuisse. Omnia animalia in diversos greges temere divisa sunt, quisque grex ex tribus animalibus constabat. Omnia studia secundum *Animal Studies: Report of In Vivo Experiments* 43 peracta sunt. Ante studium, animalia per administrationem intraperitonealem (ip) mixturae 20-50 mg ketaminae (per 1 kg ponderis corporis) et 2-10 mg xylazinae (per 1 kg ponderis corporis) anesthetizata sunt. Post studium, volumen haemorrhagiae computatum est per differentiam inter pondus initiale et finale exemplorum aestimandam; valor medius ex tribus probationibus obtentus ut volumen haemorrhagiae exempli acceptus est.
Ad potentiam amputationis caudae murinae (NFRCS) moderandam haemorrhagiam in traumate, bello, vel casu viario (exemplar vulneris) intellegendam adhibitum est. Dimidiam partem caudae lamina scalpelli abscindendam et in aere per XV secundas ponendam est ad haemorrhagiam normalem confirmandam. Praeterea, exempla probata in cauda murina posita sunt pressione adhibita (Ct, Cs, Ch NFRCS et Cp NFRCS). Haemorrhagia et PCT pro exemplis probatis relata sunt (n = 3)17,45.
Efficacia moderationis pressionis NFRCS in proelio in exemplo arteriae femoralis superficialis investigata est. Arteria femoralis detecta, trocare 24G pungitur, et intra 15 secunda sanguinem effunditur. Postquam sanguinis profluvium effrenata observatur, specimen examinatum in loco puncturae cum pressione applicata ponitur. Statim post applicationem speciminis examinati, tempus coagulationis notatum est et efficacia haemostatica per proxima 5 minuta observata est. Eadem ratio cum Cs et Ct46 repetita est.
Dowling et al. 47 exemplar laesionis hepatis proposuerunt ad potentiam haemostaticam materiarum haemostaticarum in contextu haemorrhagiae intraoperativae aestimandam. Corticatio basalis hepatis (BCT) pro exemplaribus Ct (exemplar negativum), structura Cs (exemplar positivum), exemplaribus Ch NFRCS, et exemplaribus Cp NFRCS notata est. Vena cava suprahepatica muris per laparotomiam medianam detecta est. Post hoc, pars distalis lobi sinistri forficibus excisa est. Incisionem in hepate lamina scalpelli fac et per aliquot secundas sanguinare sine. Exemplaria Ch NFRCS et Cp NFRCS accurate pensata in superficie laesa sine ulla pressione positiva posita sunt et BCT notata est. Deinde grex testigo (Ct) pressionem adhibuit, deinde Cs 30s47 sine laesione rumpenda.
Experimenta curationis vulnerum in vivo peracta sunt utens exemplo vulneris excisionalis ad proprietates curationis vulnerum NFRCS polymericis fundatis evolutae aestimandas. Exemplaria vulnerum excisionalium selecta et peracta sunt secundum methodos antea divulgatas cum modificationibus minoribus19,32,48. Omnia animalia anesthetizata sunt ut antea descriptum est. Adhibito telo biopsiae (12 mm) incisionem circularem profundam in cute dorsi faciendam. Loca vulnerum praeparata curata sunt cum Cs (controllo positivo), Ct (agnitis gossypium curationem impedire), Ch NFRCS et Cp NFRCS (cohorte experimentali) et controllo negativo sine ullo curatione. Quoque die studii, area vulneris in omnibus muribus mensurata est. Adhibita camera digitali ad imaginem areae vulneris capiendam et novum fasciamentum imponendum. Percentatio clausurae vulneris hac formula mensurata est:
Secundum rationem clausurae vulnerum die duodecimo studii, cutis murina optimi gregis excisa est ((Cp NFRCS) et gregis testigo) et tinctione H&E necnon tinctione trichroma Masson examinata. Secundum rationem clausurae vulnerum die duodecimo studii, cutis murina optimi gregis excisa est ((Cp NFRCS) et gregis testigo) et tinctione H&E necnon tinctione trichroma Masson examinata.Secundum rationem clausurae vulneris die duodecimo studii, cutis murium optimi gregis ((Cp NFRCS) et gregis comparationis) excisa et tinctione haematoxylino-eosino et trichromo Masson examinata est.12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大鼠皮肤，进行H&E染色和Masson三色染色研究。12天的伤口闭合百分比，切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组) H&E染色和眳组）Muri in optimo grege ((Cp NFRCS) et gregibus comparationis) excisi sunt ad tinctionem haematoxylini-eosini et tinctionem trichromaticam Massonianam, secundum percentualem clausurae vulneris die duodecimo studii.Ratio tinctionis adhibita secundum methodos antea descriptas49,50 peracta est. Breviter, post fixationem in formalino 10%, exempla dehydrata sunt utens serie alcoholum graduatorum. Microtomo adhibito, sectiones tenues (5 µm crassitudine) textus excisi obtinentur. Sectiones tenues seriales testium et Cp NFRCS haematoxylino et eosino tractatae sunt ad mutationes histopathologicas investigandas. Tinctura trichroma Masson adhibita est ad formationem fibrillarum collageni detegendam. Resultata obtenta a pathologis caeco iudicio investigata sunt.
Stabilitas exemplorum Cp NFRCS ad temperaturam ambientem (25°C ± 2°C/60% RH ± 5%) per duodecim menses51 investigata est. Cp NFRCS (decoloratio superficiei et incrementum microbiale) visualiter inspecta et pro resistentia attritionis plicarum et BCT probata est secundum methodos supra in sectione Materialium et Methodorum delineatas.
Scalabilitas et reproducibilitas Cp NFRCS examinata est per praeparationem Cp NFRCS magnitudinis 15×15 cm². Praeterea, exempla 30 mg (n = 5) ex variis fractionibus Cp NFRCS excisa sunt et BCT exemplorum investigatorum aestimatum est sicut antea in sectione Methodorum descriptum est.
Conati sumus varias formas et structuras evolvere, compositionibus Cp NFRCS ad varia usus biomedicos utentes. Tales formae vel configurationes includunt penicillorum conicorum ad sanguinationem narium, curationes dentales, et penicillorum cylindricorum ad sanguinationem vaginalem.
Omnes datorum copiae exprimuntur ut media ± deviatio standard et analysatae sunt per ANOVA utens Prism 5.03 (GraphPad, San Diego, CA, USA) deinde per probationem comparationum multiplicium Bonferroni (*p<0.05).
Omnes rationes in studiis humanis peractae secundum normas Instituti et Consilii Nationalis Investigationis, necnon Declarationem Helsingiensem anni 1964 eiusque emendationes subsequentes, vel similes normas ethicas, factae sunt. Omnes participes de proprietatibus studii et natura eius voluntaria certiores facti sunt. Data participum, semel collecta, secreta manent. Protocollum experimentale *in vitro* TEG a Commissione Ethica Institutionali Collegii Medici Kasturba, Manipal, Karnataka (IEC: 674/2020) revisum et approbatum est. Voluntarii consensum informatum ad exempla sanguinis colligenda subscripserunt.
Omnes rationes in studiis animalibus adhibitae secundum normas Facultatis Medicinae Kastuba, Instituti Superioris Educationis Manipalensis, Manipalensis (IAEC/KMC/69/2020) peractae sunt. Omnia experimenta animalium designata secundum normas Commissionis ad Moderationem et Supervisionem Experimentorum Animalium (CPCSEA) peracta sunt. Omnes auctores normas ARRIVE sequuntur.
Spectra FTIR omnium NFRCS analysata et cum spectro chitosani in Figura 2A monstrato comparata sunt. Cacumina spectralia characteristica chitosani (notata) ad 3437 cm⁻¹ (extensio OH et NH, imbricatio), 2945 et 2897 cm⁻¹ (extensio CH), 1660 cm⁻¹ (tensio NH₂), 1589 cm⁻¹ (flexio N–H), 1157 cm⁻¹ (extensio pontis O–), 1067 cm⁻¹ (extensio C–O, hydroxyl secundarium), 993 cm⁻¹ (extensio CO, Bo-OH) 52, 53, 54. Tabula Supplementaria S1 valores spectri absorptionis FTIR NFRCS pro chitosano (reporter), chitosano puro, Cm, Ch, et Cp ostendit. Spectra FTIR omnium NFRCS (Cm, Ch et Cp) easdem zonas absorptionis characteristicas ac chitosano puro sine ullis mutationibus significantibus ostenderunt (Figura 2A). Resultata FTIR absentiam interactionum chemicarum vel physicarum inter polymera ad NFRCS evolvendos adhibita confirmaverunt, quod indicat polymera adhibita inertia esse.
In vitro characterizatio Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS et Cs. (A) repraesentat spectra FTIR coniuncta compositionum chitosani et Cm NFRCS, Ch NFRCS et Cp NFRCS sub compressione. (B) a) Ratio absorptionis sanguinis totius Cm, Ch, Cp, et Cg NFRCS (n = 3); Exempla Ct maiorem BAR ostenderunt quia penicillum gossypium maiorem efficientiam absorptionis habet; b) Sanguis post absorptionem sanguinis. Illustratio exempli absorpti. Repraesentatio graphica BCT exempli C (Cp NFRCS optimum BCT habuit (15 s, n = 3)). Data in C, D, E, et G ut media ± deviatio standardis (SD) monstrata sunt, et virgae erroris SD repraesentant, ***p < 0.0001. Data in C, D, E, et G ut media ± deviatio standardis (SD) monstrata sunt, et virgae erroris SD repraesentant, ***p < 0.0001. анные в C, D, E и G представлены как среднее ± стандартное отклонение, а планки погрешностей представляют. отклонение, ***p <0,0001. Data in C, D, E, et G exhibentur ut media ± deviatio standard, et virgae errorum deviationem standard repraesentant, ***p<0.0001. C、D、E. C、D、E. анные в C, D, E и G показаны как среднее начение ± стандартное отклонение, планки погтнешноставляют ноставляют ноставляют ностав предностав предностав предностав предносте плонение планки. отклонение, ***p <0,0001. Data in C, D, E, et G monstrantur ut media ± deviatio standard, virgae errorum deviationem standard repraesentant, ***p<0.0001.