Some LC troubleshooting topics are never out of date, as there are issues in LC Practice, even as instrument technology improves over time.There gi vill Manéiere wéi Problemer an engem LC System entstinn an aarmséileg Peak Form.Wann Problemer am Zesummenhang mat Héichpunkt Form entstinn, eng kuerz Lëscht vun méiglech Ursaachen fir dës Resultater hëlleft eis troubleshooting Erfahrung vereinfachen.
Et war Spaass beim Schreiwen vun dëser Kolonn "LC Troubleshooting" an all Mount iwwer Themen nodenken, well verschidden Themen ni aus dem Stil goen.Während am Beräich vun der Chromatographiefuerschung bestëmmten Themen oder Iddien obsolet ginn, well se duerch méi nei a besser Iddien ersat ginn, am Beräich vun der Troubleshooting, zënter dem éischten Troubleshooting-Journal koumen den 1. 983(1).An de leschte Joren hunn ech e puer LC Troubleshooting Sektiounen op zäitgenëssesch Trends konzentréiert, déi Liquid Chromatography (LC) beaflossen (zum Beispill, de relativen Verglach vun eisem Verständnis vun der Effet vum Drock op d'Retentioun [2] New Advances) Our interpretation of LC results and how to troubleshooting with this month 30m, installing, I 2010 , which focused on some of the "life and death" topics of LC troubleshooting - elements that are great for any troubleshooter are essential, egal wéi den Alter vum System mir benotzen.The core topic of this series is highly relevant to the LCGC's famous "LC Troubleshooting Guide" wall chart (4) hanging in many laboratories of this series. bly, the wall chart lists 44 different potential causes of poor peak shape!Mir kënnen net all dës Themen am Detail an engem Artikel berücksichtegen, also an dësem éischten Tranche zum Thema konzentréieren ech mech op e puer vun deenen, déi ech am meeschten gesinn.
Ech beäntweren ëmmer méi Probleemer op Froen mat "alles ass méiglech". Dës Äntwert kann einfach schéngen wann Dir Observatioune berécksiichtegt déi schwéier z'interpretéieren, awer ech fannen et dacks passend. Mat ville méiglechen Ursaachen vun enger schlechter Héichform ass et wichteg en oppene Geescht ze halen wann Dir berécksiichtegt wat de Problem kéint sinn, a fir potenziell Ursaachen ze prioritären fir eis Problembehandlung op déi meescht üblech Punkten ze fokusséieren.
E Schlëssel Schrëtt an all troubleshooting Übung - mee eent, datt ech mengen ass underrated - ass unerkennen datt et e Problem ass, datt geléist muss ginn. Unerkennen datt et e Problem ass, heescht oft unerkennen datt wat mam Tool geschitt ass anescht wéi eis Erwaardungen, déi duerch Theorie, empiresch Wëssen an Erfahrung geformt sinn (5). y, leading edge, tailing, etc.), mä och op d'Breet.Eis Erwaardungen fir déi aktuell Peak Form sinn einfach.Theorie (6) well ënnerstëtzt d'Léierbuch Erwaardung, datt, an de meeschte Fäll, déi chromatographic Peaks solle symmetresch sinn a konform mat der Form vun enger Gaussian Verdeelung, wéi an der Figur 1a gewisen. s an der Figur 1 weisen e puer vun den anere Méiglechkeeten, déi observéiert kënne ginn - an anere Wierder, e puer vun de Weeër kéint falsch goen. Am Rescht vun dëser Installatioun wäerte mir Zäit verbréngen fir e puer spezifesch Beispiller vu Situatiounen ze diskutéieren, déi zu dëse Formtypen féieren.
Heiansdo Peaks sinn guer net am chromatogram observéiert wou se erwaart ginn elued.Den uewendriwwer Mauer Diagramm weist datt d'Feele vun engem Biergspëtzten (ugeholl datt d'Probe tatsächlech den Zilanalyt bei enger Konzentratioun enthält, déi d'Detektorreaktioun genuch maache soll fir et iwwer dem Kaméidi ze gesinn) ass normalerweis mat engem Instrumentprobleem oder falschen mobilen Phasebedingunge verbonnen (wann observéiert bei allen Konditiounen).Peaks, normalerweis ze "schwaach"). Eng kuerz Lëscht vu potenzielle Problemer a Léisungen an dëser Kategorie fannt Dir an der Tabell I.
Wéi uewen erwähnt, ass d'Fro wéi vill Peak-Erweiderung toleréiert sollt ginn, ier Dir opmierksam ass a probéiert et ze fixéieren, ass e komplext Thema dat ech an engem zukünftegen Artikel diskutéieren. Meng Erfahrung ass, datt bedeitend Peak-Erweiderung dacks duerch e wesentleche Changement an der Spëtztform begleet gëtt, an de Peak-Tailing ass méi heefeg wéi Pre-Peak oder Spaltung.
Jiddereng vun dësen Themen ass am Detail an de fréiere Froen vum Troubleshooting LC diskutéiert ginn, a Lieser, déi un dësen Themen interesséiert sinn, kënnen op dës viregt Artikele referenzéieren fir Informatiounen iwwer d'Wurzelursaachen a potenziell Léisunge fir dës Themen.Méi Detailer.
Peak tailing, peak fronting, and splitting can all be caused by Chemical or Physical Phänomener, and the list of potential solutions to these problems variéiert wäit, jee no ob mir mat engem chemeschen oder kierperleche Problem ze dinn hunn. kierperlech.Wann nëmmen een oder e puer Peaks betraff sinn, mä de Rescht gesäit gutt aus, ass d'Ursaach héchstwahrscheinlech chemesch.
Déi chemesch Ursaache vum Peak tailing sinn ze komplex fir hei kuerz ze diskutéieren. Den interesséierte Lieser gëtt op déi rezent Ausgab vun "LC Troubleshooting" bezeechent fir eng méi déif Diskussioun (10). Wéi och ëmmer, eng einfach Saach fir ze probéieren ass d'Mass vun der injizéierter Analyt ze reduzéieren an ze kucken ob d'Spëtzeform verbessert. , oder d'chromatographesch Konditioune musse geännert ginn, sou datt gutt Spëtzeformen och mat gréissere Massen injizéiert kënne ginn.
Et ginn och vill potenziell kierperlech Grënn fir Peak tailing.Lieser interesséiert an enger detailléierter Diskussioun iwwer d'Méiglechkeeten ginn op eng aner rezent Ausgab vun "LC Troubleshooting" (11) bezeechent. One of the more commonphysical causes of peak tailing is a poor connection at a point between the injector and detector (12).An extreme example is shown in Figure 1d a few built a valje. No e puer initialen Troubleshooting Experimenter hu mir gemierkt datt d'Portdéift am Injektiounsventilstator vill méi déif war wéi mir gewinnt waren, wat zu engem groussen doudege Volumen um Enn vun der Tuer geléist gëtt. op déi richteg Positioun fir den doudege Volumen um Enn vum Hafen ze eliminéieren.
Peak Fronte wéi déi an der Figur 1e gewisen kënnen och duerch physesch oder chemesch Problemer verursaacht ginn. Eng gemeinsam physesch Ursaach vum Spëtzekandidat ass datt d'Partikelbett vun der Kolonn net gutt gepackt ass, oder datt d'Partikel iwwer d'Zäit reorganiséiert hunn. Wéi mat Peaktailing verursaacht duerch dëst physesch Phänomen, ass de beschte Wee fir dëst ze fixéieren, d'Spaltform ze ersetzen an weider ze fueren, wat e chemeschen Urspronk nennt. Ënner ideal (linear) Konditiounen, ass d'Quantitéit vun Analyt behalen vun der stationärer Phase (also, der Retention Faktor) linear Zesummenhang mat der Konzentratioun vun der Analyt an der Kolonn. ed.Zousätzlech bestëmmen d'nonlinear Formen d'Form vun chromatographesche Peaks, wat zu Lead- oder Trailerkanten resultéiert.Ass mat Mass iwwerlaascht, déi Peak tailing verursaacht (10), Peak Leading verursaacht duerch nonlinear Retention kann och diagnostizéiert ginn andeems d'injizéiert Analytmass reduzéiert gëtt. iize dëst Verhalen.
Heiansdo beobachte mir wat e "Split" Peak schéngt ze sinn, wéi an der Figur 1f gewisen. Den éischte Schrëtt fir dëse Problem ze léisen ass ze bestëmmen ob d'Spëtztform duerch partiell Co-elutioun ass (dh d'Präsenz vun zwee ënnerscheeden awer enk eluerende Verbindungen). an déi scheinbar "Split" Peaks sinn Zesummenhang mat kierperlech Leeschtung huet näischt mat der Kolonn selwer ze maachen.Oft, déi wichtegst Hiweis zu dëser Decisioun ass, ob all Peaks am chromatogram Split Formen weisen, oder nëmmen een oder zwee. Wann et just een oder zwee ass, ass et wahrscheinlech eng Co-Elutioun Thema;wann all Peaks opgedeelt sinn, ass et wahrscheinlech e kierperlecht Thema, héchstwahrscheinlech mat der Kolonn selwer verbonnen.
Split Peaks am Zesummenhang mat de physikaleschen Eegeschafte vun der Kolonn selwer sinn normalerweis wéinst deelweis blockéiert Inlet oder Outlet Frits, oder Reorganisatioun vun Partikelen an der Kolonn, déi mobil Phase méi séier wéi d'mobil Phase an bestëmmte Beräicher vun der Kolonn Kanal Formatioun ze Flux .an anere Regiounen (11). Deelweis verstoppt Frit kann heiansdo geläscht ginn vun der Kolonn ëmgedréint;allerdéngs menger Erfahrung ass dat meeschtens eng kuerzfristeg wéi eng laangfristeg Léisung.Dëst ass dacks fatal mat modernen Säulen, wann d'Partikelen an der Kolonn rekombinéieren.Op dësem Punkt ass et am beschten d'Kolonn ze ersetzen a weiderzemaachen.
Den Héichpunkt an der Figur 1g, och vun enger rezenter Instanz a mengem eegene Labo, weist normalerweis datt d'Signal sou héich ass datt et den héije Enn vum Äntwertbereich erreecht huet. Kaméidiquellen, wéi Sträiflicht an "Däischterstroum", mécht d'Signal ganz "fuzzy" an der Erscheinung an onofhängeg vun der Analytkonzentratioun.Wann dat passéiert, kann de Problem dacks einfach geléist ginn andeems d'Injektiounsvolumen vum Analyt reduzéiert ginn - d'Injektiounsvolumen reduzéieren, d'Probe verdünnt oder béid.
An der Chromapagographie Schoul benotze mir den Detektor Signal (dh d'Y-Achs an der Chromatog) als Indikator fir eng chronesch Absorzéierung ze gesinn. Vis).
An dësem Fall bedeit en negativen Héichpunkt einfach datt d'Moleküle, déi aus der Kolonn eluéieren, manner Liicht absorbéieren wéi déi mobil Phase selwer direkt virun an no der Peak. Dëst kann zum Beispill optrieden wann Dir relativ niddereg Detektiounswellelängten benotzt (<230 nm) a mobil Phaseadditive, déi de gréissten Deel vum Liicht op dëse Wellelängten absorbéieren. s fir eng Kalibrierungskurve virzebereeden an genee quantitativ Informatioun ze kréien, sou datt et kee fundamentale Grond ass fir se per se ze vermeiden (dës Method gëtt heiansdo als "indirekt UV-Detektioun" bezeechent) (13). Awer wa mir wierklech negativ Peaks ganz vermeide wëllen, am Fall vun Absorptiounserkennung, ass déi bescht Léisung eng aner Detektiounswellelängt ze benotzen, sou datt d'Analytphase manner absorbéiert wéi d'Analytphase absorbéiert oder d'Mobile vun der mobiler Zesummesetzung méi absorbéiert wéi d'Analytphase absorbéiert. .
Negativ Peaks kënnen och optrieden wann Dir Refraktiounsindex (RI) Detektioun benotzt, wann de Refraktiounsindex vun anere Komponenten wéi den Analyt an der Probe, wéi zum Beispill d'Léisungsmëttelmatrix, anescht ass wéi de Refraktiounsindex vun der mobiler Phase. mobil Phase.
Am drëtten Deel op der Basis Thema vun LC troubleshooting, Ech diskutéiert Situatiounen an deem d'observéiert Héichpunkt Form vun der erwaart oder normal Biergspëtzten Form ënnerscheet. am Detail e puer vun de Grënn, déi ech am meeschten gesinn.Dës Detailer kennen ze kennen gëtt eng gutt Plaz fir d'Problembehandlung unzefänken, awer erfaasst net all Méiglechkeeten.Lieser, déi un enger méi detailléierter Lëscht vun Ursaachen a Léisunge interesséiert sinn, kënnen op d'LCGC "LC Troubleshooting Guide" Wanddiagramm bezéien.
(4) LCGC "LC Troubleshooting Guide" Wanddiagramm.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), S. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF, Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016). https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.
Post Zäit: Jul-04-2022