Merci fir besicht Nature.com.D'Browser Versioun déi Dir benotzt huet limitéiert Ënnerstëtzung fir CSS.Fir déi bescht Erfahrung empfeelen mir Iech en aktualiséierten Browser ze benotzen (oder de Kompatibilitéitsmodus am Internet Explorer auszeschalten).An der Tëschenzäit, fir weider Ënnerstëtzung ze garantéieren, wäerte mir de Site ouni Stiler a JavaScript weisen.
Porous Silica Deelchen sech duerch eng Sol-Gel Method mat e puer Ännerungen virbereet macroporous Deelchen ze kréien. Dës Deelchen goufen derivatized vun reversible Additioun Fragmentatioun Kette Transfermaart (RAFT) Polymeriséierung mat N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanat (PMI) an styrene N-phenylmaleimide ze preparéieren N-phenylmaleimide Phase-Phase-000 Stahl-Stahl-Stahl-000 Stahl intercalation (N-00-000 Statioun) 1,8 mm id) goufen duerch slurry packen gepackt.Evaluated PMP Kolonn Trennung vun engem peptide Mëschung aus fënnef peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) chromatographesch Konditiounen, chromatographesch Konditiounen vun Mënschheet an HA (Us, chromatographesch Konditiounen) optimal (User). Theoretesch Plackezuel vun der Peptidmëschung ass sou héich wéi 280.000 Placke / m². Vergläicht d'Trennungsleistung vun der entwéckelter Kolonn mat der kommerziell Ascentis Express RP-Amide Kolonn, et gouf beobachtet datt d'Trennungsleistung vun der PMP Kolonn superior war wéi d'kommerziell Kolonn wat d'Trennungseffizienz an d'Resolutioun ugeet.
An de leschte Joeren, der biopharmaceutical Industrie huet zu engem erweiderten globale Maart mat enger substantiell Erhéijung vun Maart deelen ginn.Mat dem explosive Wuesstem vun der biopharmaceutical Industrie1,2,3, d'Analyse vun peptides a Proteinen ass héich gewënschte. Nieft der Zil- peptide, verschidde Gëftstoffer sinn generéiert während peptide synthesis, also erfuerdert chromatographic purification vun der gewënschte Kierper vun Proteinen an chromatographic purification vun Otemschwieregkeeten Otemschwieregkeeten Analyse. s an Zellen ass eng extrem usprochsvollen Aufgab wéinst der grousser Zuel vu potenziell detektéierbaren Aarten an enger eenzeger Probe.Obwuel Massespektrometrie en effektiven Tool fir Peptid- a Proteinsequenzéierung ass, wann esou Proben an engem Pass an de Massespektrometer injizéiert ginn, wäert d'Trennung net ideal sinn. zu enger bestëmmter Zäit4,5,6.Ausserdeem, während der Flëssegphase-Trennung, kënnen d'Analyten a schmuele Regiounen fokusséiert ginn, doduerch dës Analyten konzentréieren an d'MS-Detektiounsempfindlechkeet verbesseren.Liquid chromatography (LC) has advanced bedeitend iwwer déi lescht Dekade an ass eng populär Technik an der proteomescher Analyse7,8,9,10 ginn.
Reversed-Phase Liquid Chromatography (RP-LC) ass wäit benotzt fir d'Reinigung an d'Trennung vu Peptidmëschungen mat octadecyl-modifizéierten Silica (ODS) als stationär Phase11,12,13. Wéi och ëmmer, RP stationär Phasen bidden net zefriddestellend Trennung vu Peptiden a Proteinen wéinst hirer komplexer Naturstruktur an Amphire-Phase 14,14,13 Statioune sinn erfuerderlech. peptides and proteins with polar and non-polar moieties analyséieren fir mat dësen Analyten ze interagéieren an ze halen16.Mixed-mode chromatography, which provides multimodal interactions, can be an alternative to RP-LC for the Trennung vu Peptiden, Proteinen, an aner komplex Mëschungen. 9,20,21.Mixed-Modus stationär Phasen (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, Polar Intercalation / RPLC) si gëeegent fir peptide a Protein Trennungen wéinst der Präsenz vun souwuel polar an net-polare Groups22,23,24,25,26,27,28 .Ähnlech Zesummenhang mat der polarer selektionéierter Statioun mat intercalvalente selektionéierte Statioun a gutt polare Statioun polar an net-polar Analyten, well d'Trennung hänkt vun der Interaktioun tëscht Analyt an der stationärer Phase of.Multimodal Interaktiounen 29, 30, 31, 32. Viru kuerzem, Zhang et al.30 preparéiert eng dodecyl-terminated polyamine stationär Phase an erfollegräich getrennt Kuelewaasserstoff, Antidepressiva, flavonoids, nucleosides, estrogens, a puer aner analytes.The polare intercalator huet souwuel polar an net-polare Gruppen, sou kann et benotzt ginn fir peptides a Proteinen ze trennen, datt souwuel hydrophobic an hydrophilic Kolonn-embedties (C1dPolar-Embedies) hunn ) sinn kommerziell verfügbar ënner dem Handelsnumm Ascentis Express RP-Amide Sailen, awer dës Saile ginn nëmme fir d'Analyse vun Amine 33 benotzt.
An der aktueller Etude, war eng polar-agebett stationär Phase (N-phenylmaleimid-agebetter polystyrene) virbereet an évaluéieren fir Trennung vun peptides an trypsin digests vun HSA.The stationär Phase war mat der folgender Strategie virbereet. , Waasser Essigsäure war ugepasst Silica Partikel mat grousser pore Gréisst ze preparéieren. Zweetens, eng nei ligand, phenylmaleimid-methyl vinyl isocyanate, war synthetiséiert a benotzt fir Silica Partikel ze derivatize fir eng polare embedded stationär Phase ze preparéieren. mechanesch Schwéngung fir datt e homogene Bett bannent der Kolonn geformt gëtt.Evaluéieren gepackt Kolonnentrennung vu Peptidmëschungen aus fënnef Peptiden;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) and Trypsin digest of human serum albumin (HAS).The peptide Mix and trypsin digest of HSA were observed to separate with good resolution and efficiency.The Kolonn-Performance vun der PMP-Peptid ass Verglach mat der PMP-Zentral Peptides. a Proteinen goufen op der PMP Kolonn gutt geléist an effizient observéiert, wat méi effizient war wéi d'Ascentis Express RP-Amide Kolonn.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Essigsäure, Trimethoxy Orthosilikat (TMOS), Trimethyl Chlorosilan (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammoniumchlorid, Urea, Hexan Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MCHydroxy, HPLCHydroxy), BenzoMPOHydroxy (HPLC, Styren, 4-TEB) trile (ACN), Methanol, 2-Propanol, an Aceton Kaaft vu Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Eng Mëschung aus urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), an 8 ml vun 0,01 N acetic Seier war fir 10 Minutten gerührt, an dann 24 ml vun TMOS war dobäi ënner äiskal Konditiounen. D'Reaktioun Mëschung war op 40 ° C fir 6 Stonnen erhëtzt an dann op 120 Stonnen an 120 ° C dréchen Stahl Material war dréchen Stahl fir 8 Stonne stainless stainless a stainless. d op 70 ° C fir 12 Stonnen. Déi gedréchent mëll Mass war glat Buedem an engem Uewen an calcined bei 550 ° C fir 12 hours.Three Chargen sech virbereet a charakteriséiert reproducibility an Partikelgréisst, Pore Gréisst an Uewerfläch Beräich.
Duerch Uewerflächemodifikatioun vu Silicapartikelen mat vir-synthetiséierter Ligand Phenylmaleimid-Methylvinylisocyanat (PCMP) gefollegt vun der radialer Polymeriséierung mat Styrol, gouf eng polare Grupp-enthale Verbindung virbereet.Stationary phase for aggregates and polystyrene chains.Den Virbereedungsprozess gëtt hei ënnen beschriwwen.
N-phenylmaleimid (200 MG) an methyl vinyl isocyanate (100 MG) goufen an dréchen toluene opgeléist, an 0,1 mL vun 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) war zu der Reaktioun flask dobäi phenylmaleimid-methyl vinyl isocyanate Mëschung fir 30 Stonnen ze preparéieren (Dréchent PMCP copolymer op 30 Stonnen). d an engem Ofen bei 40°C fir 3 Stonnen.
Getrocknene Silikapartikelen (2 g) goufen an dréchent Toluen (100 ml) dispergéiert, gerührt a sonicated an enger 500 ml Ronn-Ënnerkolbe fir 10 min.PMCP (10 mg) gouf an Toluen opgeléist an dropwise an d'Reaktiounsfläsch iwwer e Drëps Triichter bäigefüügt. °C fir 3 Stonnen.Duerno goufen PMCP-gebonnen Silikapartikelen (100 g) an Toluen (200 ml) opgeléist a 4-Hydroxy-TEMPO (2 ml) gouf a Präsenz vun 100 µL Dibutyltin-Dilaurat als Katalysator derbäigesat.
Styrene (1 mL), Benzoylperoxid BPO (0,5 mL), an TEMPO-PMCP-befestegt Silicapartikelen (1,5 g) goufen an Toluen verdeelt a mat Stickstoff gespäichert. D'Polymeriséierung vu Styrol gouf fir 12 Stonnen bei 100 ° C duerchgefouert.
D'Echantillon waren op 393 K fir 1 Stonn degased engem Reschtoffall Drock vun manner wéi 10-3 Torr ze kréien. D'Quantitéit vun N2 adsorbed bei engem relativen Drock vun P /P0 = 0,99 war benotzt der total pore Volume ze bestëmmen. ed Silica Partikel) goufen op eng Al Kolonn benotzt Kliewefolie Kuelestoff Tape gesat. Gold war op de Echantillon mat engem Q150T Sputter coater plated, an engem 5 nm Au Layer war op de Echantillon deposéiert. Dëst verbessert Prozess Effizienz benotzt niddereg voltages a stellt feinkorn, kalt sputtering. orcestershire, UK) Mastersizer 2000 Partikelgréisst Analyser gouf benotzt fir d'Partikelgréisst Verdeelung ze kréien. Naked Silica Partikelen a Ligand-gebonnen Silica Partikelen (5 mg all) goufen an 5 mL Isopropanol verdeelt, 10 min sonicated, fir 5 min vortexed, an op der Master-Pergravisator-Bänk vun enger 5 Minuten op der Master-Pergravimetric-Analyse gesat. en Temperaturberäich vun 30 bis 800 °C.
Glasfaarweg Edelstahl schmuel-Bohrsäulen vun Dimensiounen (100 × 1,8 mm ID) goufen mat der Schlammverpackungsmethod gepackt, déi selwecht Prozedur applizéiert, déi am Ref.31.A STAINLESS Stol Kolonn (Glas-Fuerderung, 100 × 1,8 mm id) mat engem Outlet fitting engem 1 µm Frit mat engem slurry packer verbonnen (Alltech Deerfield, IL, USA). Bereet Iech eng stationär Phase slurry vun suspendéieren 150 MG vun stationär Phase vun der Kolonn an d'Léisung Methanol an d'Slurry benotzt methanol an 1.2 Slurry as well d'Slurry benotzt. wéi de propelling Léisungsmëttelbad.Fill the column sequentially by applicationing pressures of 100 MP for 10 minutes, 80 MP for 15 minutes, and 60 MP for 30 minutes.During packing, mechanical violation was applyed with two GC column shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) to ensure uniform packing of the column. d'Schläimverpackungseenheet a verbënnt eng aner Fitting un den Inlet an dem LC System fir seng Leeschtung ze kontrolléieren.
Eng LC Pompel (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) mat 50nL Sprëtz Schleifen, Membran degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary Fënster war gebaut Special µLC Apparat Detektor (UV-2075) an verbannen d'Kuerze vun der Mikrocolumns-Linn Effekt an der kuerzer Kolonn-Kierzunge. Band Breet.No Verpakung, capillaries (50 μm id 365 an reduzéieren Gewerkschaft capillaries (50 μm) goufen um 1/16" Outlet vun der reduzéieren Gewerkschaft installéiert. Datesammlung an chromatographic Veraarbechtung goufen benotzt Multichro 2000 Software gemaach. (Northampton, MA).
Albumin aus Mënsch serum, lyophilized Pudder, ≥ 96% (Agarose gel electrophoresis) 3 MG gemëscht mat Trypsin (1,5 MG), 4,0 M urea (1 mL), an 0,2 M ammonium bicarbonate (1 mL). D'Léisung war fir 10 Minutten gerührt an gehaalen an engem Waasser Bad fir 1 quench 7 Stonnen, dann an engem Waasserbad vun 1 quench 7 Stonnen. TFA.Filter d'Léisung a späichert ënner 4 °C.
Trennung vun peptide Mëschungen an HSA trypsin digests sech getrennt op PMP columns évaluéieren.Check d'Trennung vun der peptide Mëschung an trypsin digest vun HSA vun der PMP Kolonn a vergläichen d'Resultater zu der Ascentis Express RP-Amide Kolonn.The theoretesch Placke Zuel gëtt wéi follegt berechent:
SEM Biller vu bloe Silikapartikelen a ligand-gebonne Silicapartikelen ginn an der Fig.2 .SEM Biller vun bloe Silica Partikelen (A, B) weisen, datt, am Géigesaz zu eise fréiere Studien, dës Partikele kugelfërmeg sinn, an deenen d'Partikele verlängert sinn oder onregelméisseg Symmetrie hunn.
Scannen Elektronenmikroskopbilder vu bloe Silikapartikelen (A, B) a Ligand-gebonnen Silikapartikelen (C, D).
D'Partikelgréisst Verdeelunge vu bloe Silica-Partikelen a Ligand-gebonnen Silica-Partikel ginn an der Figur 3 (A) gewisen. Volumen-baséiert Partikelgréisst Verdeelungskurven weisen datt d'Gréisst vun de Silicapartikelen no der chemescher Modifikatioun erhéicht ginn (Fig. 3A). 3,36 μm, am Verglach zu eiser viregter Etude mat ad (0,5) Wäert vun 3,05 μm (polystyrene-gebonnen Silica Partikel) 34. Dës Partie hat eng méi schmuel Partikelgréisst Verdeelung am Verglach zu eiser viregter Etude wéinst de variéieren Verhältnisser vun PEG, urea, TMOS, an acetic Seier an der Reaktioun vun der grousser Partikel-Partikel Phase vun der grousser Silica-Partikel Phase an der Reaktioun liicht gebonne polystyren. Phase, déi mir virdru studéiert hunn.Dëst bedeit datt d'Uewerflächefunktionaliséierung vu Silicapartikelen mat Styrol nëmmen eng Polystyrolschicht (0,97 µm) op der Silica-Uewerfläch deposéiert huet, wärend an der PMP-Phase d'Schichtdicke 1,38 µm war.
Partikelgréisst Verdeelung (A) a Pore Gréisst Verdeelung (B) vu bloe Silikapartikelen a Ligandgebonnen Silikapartikelen.
D'Poregréisst, de Porevolumen an d'Uewerfläch vun de Silicapartikelen vun der aktueller Studie ginn an der Tabell 1(B) uginn. D'PSD-Profiler vu bloe Silica-Partikel a ligand-gebonne Silica-Partikel ginn an der Figur 3(B) gewisen. D'Resultater si vergläichbar mat eiser fréierer Etude. 69 no der chemescher Modifikatioun, wéi an der Tabell 1(B) gewisen, an d'Verännerung vun der Kurve ass an der Fig. fäeg 1(B), ass d'Uewerfläch (m2/g) vun de Silicapartikelen och vun 116 m2/g op 105 m2/g no chemescher Modifikatioun erofgaang.
D'Resultater vun der elementarer Analyse vun der stationärer Phase sinn an der Tabell 2. D'Kuelestoffbelaaschtung vun der aktueller stationärer Phase ass 6,35%, wat méi niddereg ass wéi de Kuelestoffbelaaschtung vun eiser viregter Studie (polystyrol gebonnen Silicapartikelen, 7,93%35 respektiv 10,21%) 42. phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) and 4-hydroxy-TEMPO were used.Den Stickstoffgewiichtprozent vun der aktueller stationärer Phase ass 2,21%, am Verglach zu 0,1735 respektiv 0,85% Stickstoff a fréiere Studien. s vun Produiten (4) an (5) waren 2,7% an 2,9%, respektiv, iwwerdeems de Kuelestoff Belaaschtung vun der Finale Produit (6) war 6,35%, wéi an Table 2. D'Gewiicht Verloscht war mat PMP stationär Phase iwwerpréift, an der TGA Curve ass an der Figur gewisen 4.The TGA Curve weist e Gewiichtsverloscht vun 8 an 6%, well d'Loading nëmmen 3% ass, well de Kuelestoff net gutt ass. awer och N, O, an H.
D'phenylmaleimide-methylvinylisocyanat ligand war fir Uewerfläch Modifikatioun vun Silica Deelchen gewielt well et polare phenylmaleimid Gruppen an vinylisocyanat Gruppen huet. ylmaleimid moiety has no virtual charge at normal pH.The polarity of the stationary phase can be controlled by the optimal mount of styrene and the reaction time of free radikal polymerization.The last step of the reaction (free-radical polymerization) is critical and can change the polarity of the stationary phase.Elemental analysis was performed to check the carbon loading of these stationary phases and viIt war Erhéijung vun der Belaaschtung vun de stationäre Phasen vun der Styreen-Statioun an d'Erhéijung vun de Kuelestoff-Statiounsphase. versa.SPs preparéiert mat verschiddene Konzentratioune vun Styrene hu verschidde Kuelestoff charges.Agay, lued dës stationär Phasen an STAINLESS Stol Sailen a kontrolléieren hir chromatographic Leeschtung (Selektivitéit, Resolutioun, N Wäert, etc.). Baséierend op dësen Experimenter, eng optimiséiert Formuléierung war ausgewielt der PMP stationär Phase ze preparéieren kontrolléiert haten Polaritéit a gutt analyte Retention ze garantéieren.
Fënnef Peptidmëschungen (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) goufen och mat enger PMP Kolonn mat enger mobiler Phase bewäert;60/40 (v/v) Acetonitril/Waasser (0,1% TFA) bei enger Flowrate vun 80 μL/min. Ënner optimalen Elutiounsbedéngungen ass déi theoretesch Placknummer (N) pro Kolonn (100 × 1,8 mm ID) 20.000 ± 100 (200.000 m² T-Placke fir d'MP-Wäert vun dräi an d'P-Placken 3,00). Chromatogramme ginn an der Figur 5A gewisen. Schnell Analyse op enger PMP Kolonn bei héijer Flowrate (700 μL /min), fënnef Peptiden goufen innerhalb enger Minutt eluéiert, N Wäerter ware ganz gutt, 13.500 ± 330 pro Kolonn (100 × 1,8 mm ID), entsprécht 5 Plack identesch, 0/035 Plack. (100 × 1,8 mm id) goufen mat dräi verschiddene vill vun PMP stationär Phase gepackt reproducibility z'iwwerpréiwen. D'analyt Konzentratioun fir all Kolonn war opgeholl mat der optimal elution Konditiounen an d'Zuel vun theoretesch Placke N an Retention Zäit déi selwecht Test Mëschung op all column ze trennen. .
Trennung vu Peptidmëschung op PMP Kolonn (B) an Ascentis Express RP-Amide Kolonn (A);mobil Phase 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), PMP Kolonn Dimensiounen (100 × 1,8 mm ID);analytesch D'Elutiounsuerdnung vun de Verbindungen: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) a 5 (Leucin) sauer Enkephalin)).
A PMP Kolonn (100 × 1,8 mm id) war fir Trennung vun tryptic digests vun mënschlech serum albumin an héich performant flësseg chromatography évaluéieren. D'chromatogram zu Dorënner 6 weist, datt d'Prouf gutt getrennt ass an d'Resolutioun ganz gutt ass. Wéi am Chromatogramm (Dorënner 6) gewisen, gouf d'HSA Verdauung an 17 Peaks opgedeelt, entspriechend 17 Peptiden.
A tryptic digest vun HSA (100 × 1,8 mm ID) war op enger PMP Kolonn getrennt;Flowrate (100 µL/min), mobil Phase 60/40 Acetonitril/Waasser mat 0,1% TFA.
wou L d'Kolonnlängt ass, η d'Viskositéit vun der mobiler Phase ass, ΔP de Kolonn-Réckdruck ass, an u ass d'linear Geschwindegkeet vun der mobiler Phase. D'Permeabilitéit vun der PMP-Kolonn war 2,5 × 10-14 m2, d'Flowrate war 25 μL/min, an 60/40 v/v PMP/1 Waasserfäegkeet vun 60/40 v/v ACN/1 Waasser benotzt (mm 0). war ähnlech wéi déi vun eiser fréierer Etude Ref.34.D'Permeabilitéit vun der Kolonn, déi mat iwwerflächlech porösen Partikel gepackt ass, ass: 1,7 × 10-15 fir 1,3 μm Partikelen, 3,1 × 10-15 fir 1,7 μm Partikelen, 5,2 × 10-15 an 2-5 m fir 102 m fir 102 m Partikel. μm Partikel 43. Dofir ass d'Permeabilitéit vun der PMP Phase ähnlech wéi déi vun 5 μm Kär-Schuel Partikelen.
wou Wx d'Gewiicht vun der Kolonn mat Chloroform ass, Wy ass d'Gewiicht vun der Kolonn gepackt mat Methanol, an ρ ass d'Dicht vum Léisungsmëttel.Densities of methanol (ρ = 0,7866) and chloroform (ρ = 1,484).The total porosity of SILICA PARTICLES-C1008s column and s 31 datt mir virdrun studéiert goufen 0,63 an 0,55, respektiv.Dëst heescht, datt d'Präsenz vun urea ligands reduzéiert d'Permeabilitéit vun der stationär Phase. Op der anerer Säit, der total porosity vun der PMP Kolonn (100 × 1,8 mm id) ass 0,60. D'Permeabilitéit vun der PMP Sailen-Parmeabilitéit vunn der C8 Kolonn-gepackt niddereg wéi C8 Kolonn Statioun Aner Phasen sinn d'C18 Liganden als linear Ketten un d'Silicapartikelen befestegt, während an de stationäre Phasen vum Polystyrol-Typ eng relativ déck Polymerschicht ronderëm geformt gëtt.An engem typesche Experiment gëtt d'Kolonnporositéit berechent wéi:
Figure 7A,B weisen d'PMP Kolonn (100 × 1,8 mm ID) an Ascentis Express RP-Amide Kolonn (100 × 1,8 mm ID) mat der selwechter Elutiounsbedéngungen (dh 60/40 ACN /H2O an 0,1% TFA).) vum van Deemter Komplott.Ausgewielten Peptidmëschungen (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) goufen an 20 µL virbereet. D'HETP Wäerter weisen datt d'Trennungseffizienz vun der PMP Kolonn (100 × 1,8 mm id) vill besser ass wéi d'kommerziell verfügbar Ascentis Express RP-Amide Kolonn (100 × 1,8 mm id) am Verglach mat der Erhéijung vun der Nopeschwäert (100 × 1,8 mm id). zu eiser viregter Etude.Déi méi héich Trennungseffizienz vun der PMP Kolonn (100 × 1,8 mm id) am Verglach zu der Ascentis Express RP-Amide Kolonn baséiert op Verbesserungen an der Partikelform, der Gréisst a komplexer Kolonnverpackungsprozeduren, déi an der aktueller Aarbecht34 benotzt ginn.
(A) van Deemter Komplott (HETP versus Handy Phase linear Vitesse) kritt mat engem PMP Kolonn (100 × 1,8 mm id) an 60/40 ACN / H2O mat 0,1% TFA. mat 0,1% TFA.
A polar-embedded polystyrene stationär Phase war virbereet an évaluéiert fir Trennung vun syntheteschen peptide Mëschungen an trypsin digests vun mënschlech serum albumin (HAS) an héich performant Flëssegket chromatography. Deelchen, kontrolléiert Synthese vun der stationär Phase, a komplex Kolonn packen. Nieft héich Trennung Effizienz, niddereg Kolonn Réckdrock bei héich Flux Tariffer ass en anere Virdeel vun dëser stationär Phase.PMP Saile weisen gutt reproducibility a kann fir d'Analyse vun peptide Mëschungen an Trypsin Verdauung vun verschidden Proteinen benotzt ginn. , PMP Kolonnen wäert och fir d'Trennung vun Proteinen a monoclonal Antikörper bewäert ginn.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Fuerschung iwwer Peptid Trennung Systemer vun ëmgedréint Phase Chromatography Deel I: Entwécklung vun engem Kolonn Charakteriséierung Protokoll.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Verbesserte aktive Peptiden entworf fir d'Behandlung vun ustiechend Krankheeten.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.Drug Discovery.15 (1-2) haut, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (120.09).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. et al. Fortgeschratt Flëssegchromatographie-Massspektrometrie erméiglecht d'Inkorporatioun vu breet geziilten Metabolomik a Proteomik.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ D'Roll vum UHPLC an der Drogenentwécklung.J.Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamental a praktesch Aspekter vun ultrahigh pressure liquid chromatography for rapid separations.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Application of ultra-high performance liquid chromatography in drug development.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolithic macroporous hydrogels virbereet aus Ueleg-an-Waasser héich intern Phase Emulsiounen fir efficace Offäll vun enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA D'Roll vun Flëssegket chromatography an proteomics.Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Emerging trends in reversed-phase liquid chromatography separations of therapeutic peptides and proteins: theory and applications.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Zweedimensional Trennung vu Peptiden mat engem RP-RP-HPLC System mat verschiddene pH-Wäerter an der éischter an zweeter Trennungsdimensioun.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. D'Mass Transfermaart Charakteristiken an kinetic Leeschtung vun héich-Effizienz chromatographic Saile gepackt mat C18 sub-2 μm voll an iwwerflächlech porous Partikel goufen investigated.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Rezent Trends an analytesch Erausfuerderungen an der Isolatioun, Identifikatioun an Validatioun vun Planz bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-2816-018-018-28.
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Downstream Veraarbechtung vun therapeutesche Peptiden duerch präparative Flëssegchromatographie.Molecule (Basel, Schwäiz) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-Modus Chromatography and its application to biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands for Mixed-Modus Protein chromatography: Prinzip, Charakteriséierung an Design.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).