ຂໍຂອບໃຈສຳລັບການເຂົ້າເບິ່ງ Nature.com. ເວີຊັນຂອງບຣາວເຊີທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ມີການຮອງຮັບ CSS. ສໍາລັບປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະໜັບສະໜູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ແລະ JavaScript.
gene vectors ສໍາລັບການປິ່ນປົວພະຍາດປອດ cystic fibrosis ຄວນກໍານົດເປົ້າຫມາຍຂອງທໍ່ທາງເດີນຫາຍໃຈເນື່ອງຈາກວ່າ peripheral transduction ປອດບໍ່ໄດ້ໃຫ້ຜົນປະໂຫຍດດ້ານການປິ່ນປົວ. ປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດເຊື້ອໄວຣັສແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບ vector residence time. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ນ້ໍາການຈັດສົ່ງເຊັ່ນ: gene carriers ກະຈາຍຕາມທໍາມະຊາດເຂົ້າໄປໃນ alveoli ໃນລະຫວ່າງການດົນໃຈ, ແລະການປິ່ນປົວແມ່ນໄວຂອງ particles ລ້າງອອກ. ເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງ gene carriers ຢູ່ໃນເສັ້ນທາງເດີນຫາຍໃຈແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນແຕ່ຍາກທີ່ຈະບັນລຸໄດ້.Gene carrier-conjugated particles ແມ່ເຫຼັກທີ່ສາມາດມຸ້ງໄປຫາຫນ້າດິນຂອງ airways ສາມາດປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍຂອງພາກພື້ນໄດ້. ເນື່ອງຈາກສິ່ງທ້າທາຍຂອງ in vivo visualization, ພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະຫນາດນ້ອຍດັ່ງກ່າວຢູ່ໃນຫນ້າດິນຂອງ airway ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ນໍາໃຊ້ເພື່ອແນໃສ່ການ synchrize ສາຍຕານີ້ແມ່ນຄວາມເຂົ້າໃຈທີ່ບໍ່ດີ. the in vivo motion of a series of magnetic particles in the trachea of ​​anesthetized rats to check the dynamics and patterns of individual and bulk particle behavior in vivo.We then also assessed that the deliver of a magnetic particles lentiviral in the trachea of ​​a magnetic field will increase the transduction efficiency in the rat otray magnetic trache. particles in stationary and moving fields in vitro and in vivo. Particles ບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄດ້ງ່າຍຕາມພື້ນຜິວຂອງທໍ່ຫາຍໃຈທີ່ມີແມ່ເຫຼັກ, ແຕ່ໃນລະຫວ່າງການຂົນສົ່ງ, ເງິນຝາກໄດ້ຖືກສຸມໃສ່ໃນພາກສະຫນາມຂອງທັດສະນະຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດ. ປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດຍັງເພີ່ມຂຶ້ນ 6 ເທົ່າເມື່ອອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ໄດ້ຖືກສົ່ງໃນທີ່ປະທັບຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແມ່ເຫຼັກແລະຜົນການເຊື່ອມສານສະນະແມ່ເຫຼັກ. ອາດຈະເປັນວິທີການທີ່ມີຄຸນຄ່າເພື່ອປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍຂອງ gene vector ແລະເພີ່ມລະດັບ transduction ໃນການດໍາເນີນການທາງອາກາດໃນ vivo.
cystic fibrosis (CF) ແມ່ນເກີດມາຈາກການປ່ຽນແປງໃນ gene ດຽວເອີ້ນວ່າ CF transmembrane conductance regulator (CFTR).ທາດໂປຼຕີນຈາກ CFTR ເປັນຊ່ອງທາງ ion ທີ່ມີຢູ່ໃນຈຸລັງ epithelial ຈໍານວນຫຼາຍໃນທົ່ວຮ່າງກາຍ, ລວມທັງທໍ່ທາງເດີນອາກາດ, ເປັນສະຖານທີ່ສໍາຄັນຂອງ CF pathogenesis ຄວາມເລິກຂອງ CFTR ນໍາໄປສູ່ການຂົນສົ່ງນ້ໍາຜິດປົກກະຕິ, ຜິວຫນ້າຂອງອາກາດ dehydrating. layer.This ຍັງເຮັດໃຫ້ຄວາມສາມາດຂອງລະບົບການຂົນສົ່ງ mucociliary (MCT) ລ້າງອະນຸພາກ inhaled ແລະເຊື້ອພະຍາດອອກຈາກເສັ້ນທາງເດີນຫາຍໃຈ. ເປົ້າຫມາຍຂອງພວກເຮົາແມ່ນການພັດທະນາການປິ່ນປົວດ້ວຍ gene lentiviral (LV) ເພື່ອສົ່ງສໍາເນົາທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ CFTR gene ແລະປັບປຸງສຸຂະພາບຂອງ ASL, MCT, ແລະປອດເຫຼົ່ານີ້, ແລະສືບຕໍ່ພັດທະນາ technologies ໃຫມ່ຂອງ paravometers.
LV vectors ແມ່ນຫນຶ່ງໃນຜູ້ສະຫມັກຊັ້ນນໍາສໍາລັບ CF airway gene therapy, ຕົ້ນຕໍແມ່ນຍ້ອນວ່າພວກເຂົາສາມາດປະສົມປະສານ gene ການປິ່ນປົວເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ basal ທາງອາກາດຢ່າງຖາວອນ (ຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງ airway). ອັນນີ້ເປັນສິ່ງສໍາຄັນເພາະວ່າພວກເຂົາສາມາດຟື້ນຟູຄວາມຊຸ່ມຊື່ນປົກກະຕິແລະການລ້າງຂີ້ກະເທີ່ໂດຍການຈໍາແນກເຂົ້າໄປໃນ gene-ແກ້ໄຂ CF-ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຈຸລັງທາງເດີນຫາຍໃຈຂອງ vectors ໂດຍກົງ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ V. ທາງອາກາດ, ຍ້ອນວ່ານີ້ແມ່ນບ່ອນທີ່ພະຍາດປອດ CF ເລີ່ມຕົ້ນ. ການສົ່ງ vector ເຂົ້າໄປໃນປອດທີ່ເລິກກວ່າອາດຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ alveolar transduction, ແຕ່ນີ້ບໍ່ມີຜົນປະໂຫຍດດ້ານການປິ່ນປົວໃນ CF. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ນ້ໍາເຊັ່ນ gene carriers ຕາມທໍາມະຊາດເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ alveoli ຕາມການດົນໃຈຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງ 3,4 ແລະອະນຸພາກການປິ່ນປົວໂດຍກົງແມ່ນ CTL ຢ່າງໄວວາ. ໄລຍະເວລາທີ່ vector ຍັງຄົງຢູ່ຖັດຈາກຈຸລັງເປົ້າຫມາຍເພື່ອໃຫ້ການດູດຊືມຂອງເຊນ - "ເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສ"5 - ເຊິ່ງຫຼຸດລົງໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍໂດຍການໄຫຼວຽນຂອງອາກາດໃນພາກພື້ນທົ່ວໄປເຊັ່ນດຽວກັນກັບການຈັບຕົວຂອງເຍື່ອເມືອກທີ່ປະສານງານແລະ MCT. ສໍາລັບ CF, ຄວາມສາມາດໃນການຍືດເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງ LV ພາຍໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈແມ່ນສໍາຄັນເພື່ອບັນລຸລະດັບການຖ່າຍທອດໃນລະດັບສູງໃນພາກພື້ນນີ້, ແຕ່ມາຮອດປັດຈຸບັນແມ່ນສິ່ງທ້າທາຍ.
ເພື່ອເອົາຊະນະອຸປະສັກນີ້, ພວກເຮົາແນະນໍາວ່າອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ LV (MPs) ອາດຈະຊ່ວຍໃນສອງວິທີເສີມ. ທໍາອິດ, ພວກມັນສາມາດຖືກນໍາທາງສະນະແມ່ເຫຼັກໄປສູ່ຫນ້າດິນຂອງທໍ່ຫາຍໃຈເພື່ອປັບປຸງການກໍານົດເປົ້າຫມາຍແລະຊ່ວຍໃຫ້ອະນຸພາກຂອງເຊື້ອສາຍການບິນຢູ່ໃນພາກພື້ນທີ່ຕ້ອງການ; ແລະ ASL) ເພື່ອຍ້າຍໄປສູ່ຊັ້ນເຊນ 6.MPs ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຍານພາຫະນະການສົ່ງຢາເສບຕິດເປົ້າຫມາຍໃນເວລາທີ່ພວກເຂົາຜູກມັດກັບພູມຕ້ານທານ, ຢາເຄມີບໍາບັດ, ຫຼືໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍອື່ນໆທີ່ຕິດກັບເຍື່ອຫຸ້ມເຊນຫຼືຜູກມັດກັບ receptors ພື້ນຜິວຂອງເຊນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງແລະສະສົມຢູ່ສະຖານທີ່ tumor ໃນທີ່ປະທັບຂອງໄຟຟ້າສະຖິດ. ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສໍາລັບການປິ່ນປົວມະເຮັງ 7. ເຕັກນິກອື່ນໆ "hyperthermal" ມີຈຸດປະສົງເພື່ອເຮັດໃຫ້ MPs ຮ້ອນຂຶ້ນໃນເວລາທີ່ເຂົາເຈົ້າສໍາຜັດກັບ oscillating ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ດັ່ງນັ້ນການທໍາລາຍຈຸລັງ tumor. ຫຼັກການຂອງການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກ, ໃນສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວແທນການຖ່າຍທອດເພື່ອເສີມຂະຫຍາຍການຖ່າຍທອດ DNA ກັບຈຸລັງ, ຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປໃນ vitro ໂດຍໃຊ້ vector ຍາກຂອງເຊນ transfection ຂອງເຊນ. ເສັ້ນ.ປະສິດທິຜົນຂອງ LV magnetotransfection ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ດ້ວຍການຈັດສົ່ງ LV-MPs ໃນ vitro ໄປຫາເສັ້ນຈຸລັງ epithelial bronchial ຂອງມະນຸດໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສະຖິດ, ເພີ່ມປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດໂດຍ 186-ເທົ່າເມື່ອທຽບກັບ LV vector ດຽວ.LV-MP ຍັງຖືກນໍາໃຊ້ກັບຕົວແບບ in vitro CF, ບ່ອນທີ່ transfection ແມ່ເຫຼັກໃນສ່ວນຕິດຕໍ່ທາງອາກາດ 2 ເທົ່າຂອງ LVquid transfection. CF sputum10.ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ໃນ vivo magnetotransfection ຂອງອະໄວຍະວະໄດ້ຮັບຄວາມສົນໃຈຂ້ອນຂ້າງຫນ້ອຍແລະພຽງແຕ່ໄດ້ຮັບການປະເມີນໃນສັດຈໍານວນຫນ້ອຍທີ່ສຶກສາ11,12,13,14,15, ໂດຍສະເພາະໃນປອດ16,17.Nonetheless, ໂອກາດສໍາລັບການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກໃນການປິ່ນປົວດ້ວຍປອດ CF ແມ່ນຈະແຈ້ງ. ການສຶກສາຫຼັກຖານຂອງແນວຄວາມຄິດຂອງການຈັດສົ່ງ pulmonary nanoparticle ແມ່ເຫຼັກປະສິດທິພາບຈະເປີດທາງສໍາລັບຍຸດທະສາດການຫາຍໃຈ CFTR ໃນອະນາຄົດເພື່ອປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບທາງດ້ານການຊ່ວຍໃນຄົນເຈັບ CF”6.
ພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະໜາດນ້ອຍຢູ່ໜ້າທາງເດີນຫາຍໃຈໃນທີ່ປະທັບຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ນຳໃຊ້ແມ່ນຍາກທີ່ຈະເບິ່ງເຫັນ ແລະ ສຶກສາ, ແລະດັ່ງນັ້ນຈິ່ງເຂົ້າໃຈໄດ້ບໍ່ດີ. ໃນການສຶກສາອື່ນໆ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາວິທີການວັດແທກ X-ray ໄລຍະກົງກັນຂ້າມຂອງ synchrotron-based (PB-PCXI) ເພື່ອວັດແທກຄວາມເລິກທີ່ບໍ່ມີການເບິ່ງເຫັນ ແລະ ປະລິມານການວັດແທກພຶດຕິກຳຂອງໜ້າດິນ 199 ໂດຍກົງໃນ vivo ແລະ MCT. hydration ແລະໃຊ້ເປັນຕົວຊີ້ວັດເບື້ອງຕົ້ນຂອງປະສິດທິພາບການປິ່ນປົວ. ນອກຈາກນັ້ນ, ວິທີການປະເມີນຜົນ MCT ຂອງພວກເຮົາໃຊ້ particles ເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 10–35 µm ປະກອບດ້ວຍ alumina ຫຼືແກ້ວດັດຊະນີ refractive ສູງເປັນເຄື່ອງຫມາຍ MCT ສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ PB-PCXI21. ທັງສອງເຕັກນິກແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການເບິ່ງເຫັນຂອງປະເພດ particles, ລວມທັງ MP.
ເນື່ອງຈາກຄວາມລະອຽດທາງກວ້າງຂອງພື້ນທີ່ແລະທາງໂລກສູງ, ເຕັກນິກການວິເຄາະ ASL ແລະ MCT ທີ່ອີງໃສ່ PB-PCXI ຂອງພວກເຮົາແມ່ນເຫມາະສົມດີສໍາລັບການກວດສອບນະໂຍບາຍດ້ານແລະຮູບແບບຂອງພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກດຽວແລະຫຼາຍໃນ vivo ເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາເຂົ້າໃຈແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບເຕັກນິກການຈັດສົ່ງ gene MP. ວິທີທີ່ພວກເຮົາໃຊ້ຢູ່ທີ່ນີ້ແມ່ນມາຈາກການສຶກສາຂອງພວກເຮົາໂດຍໃຊ້ vector SPring-8 be BLized 2 am line 2 ຂອງພວກເຮົາ. ການໃຫ້ປະລິມານຢາເຂົ້າໄປໃນທໍ່ທາງເດີນຫາຍໃຈທາງດັງ ແລະປອດຂອງໜູ ເພື່ອຊ່ວຍອະທິບາຍຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງ gene ທີ່ບໍ່ເປັນເອກະພາບຂອງພວກເຮົາທີ່ສັງເກດເຫັນໃນການສຶກສາສັດ gene carrier dose ຂອງພວກເຮົາ 3,4 .
ຈຸດປະສົງຂອງການສຶກສານີ້ແມ່ນເພື່ອນໍາໃຊ້ synchrotron PB-PCXI ເພື່ອເບິ່ງພາບການເຄື່ອນໄຫວໃນ vivo ຂອງ MPs ຊຸດໃນ trachea ຂອງຫນູທີ່ມີຊີວິດຢູ່. ການສຶກສາຮູບພາບ PB-PCXI ເຫຼົ່ານີ້ຖືກອອກແບບມາເພື່ອທົດສອບຂອບເຂດຂອງ MPs, ຄວາມແຂງແຮງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະສະຖານທີ່ເພື່ອກໍານົດຜົນກະທົບຂອງການເຄື່ອນໄຫວ MP. ພວກເຮົາສົມມຸດຕິຖານວ່າ MPs ທີ່ຢູ່ພາຍນອກຈະໃຊ້ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ. ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ຍັງອະນຸຍາດໃຫ້ພວກເຮົາກໍານົດການກໍານົດຄ່າແມ່ເຫຼັກທີ່ເພີ່ມຈໍານວນອະນຸພາກທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນ trachea ຫຼັງຈາກ deposition. ໃນຊຸດທີສອງຂອງການສຶກສາ, ພວກເຮົາໄດ້ຊອກຫາການນໍາໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ເຫມາະສົມນີ້ເພື່ອສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຮູບແບບການຖ່າຍທອດທີ່ເກີດຈາກການຈັດສົ່ງ vivo ຂອງ LV-MPs ໄປສູ່ເສັ້ນທາງຫາຍໃຈຂອງຫນູ, ອີງຕາມການສົມມຸດຕິຖານຂອງ LV-V. ປັບປຸງປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດ LV.
ການສຶກສາກ່ຽວກັບສັດທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມພິທີການອະນຸມັດໂດຍມະຫາວິທະຍາໄລ Adelaide (M-2019-060 ແລະ M-2020-022) ແລະຄະນະກໍາມະຈັນຍາບັນສັດ SPring-8 Synchrotron. ການທົດລອງໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງ ARRIVE.
ການຖ່າຍພາບ X-ray ທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ BL20XU beamline ທີ່ SPring-8 synchrotron ໃນປະເທດຍີ່ປຸ່ນ, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ຄ້າຍຄືກັບທີ່ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ 21,22. ໂດຍຫຍໍ້, ກ່ອງທົດລອງຕັ້ງຢູ່ 245 m ຈາກວົງແຫວນການເກັບຮັກສາ synchrotron.A ໄລຍະຫ່າງຂອງເຄື່ອງກວດຫາຕົວຢ່າງຂອງ 0.6 maging maging.m30 ສໍາລັບການສຶກສາ particles ແລະ particles. ສ້າງຜົນກະທົບທາງກົງກັນຂ້າມຂອງໄລຍະ. ພະລັງງານແສງ monochromatic ຂອງ 25 keV ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້. ຮູບພາບຕ່າງໆໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງແປງ X-ray ຄວາມລະອຽດສູງ (SPring-8 BM3) ສົມທົບກັບເຄື່ອງກວດຈັບ sCMOS. ຕົວແປງສັນຍານຈະປ່ຽນແສງ X-rays ເປັນແສງທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງ scintillator ຫນາ 10 µm (Gd3O1CMOS), ເຊັນເຊີໂດຍກົງກັບ 10 µm (Gd3Al2CMOS), ເຊັນເຊີໂດຍກົງກັບ 10 µm. ຈຸດປະສົງກ້ອງຈຸລະທັດ 10 (NA 0.3).ເຄື່ອງກວດຈັບ sCMOS ແມ່ນ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) ທີ່ມີຂະໜາດອາເຣ 2048 × 2048 ພິກເຊລ ແລະ ຂະໜາດ pixels ດິບ 6.5 × 6.5 µm. ການຕັ້ງຄ່ານີ້ໃຫ້ຜົນປະສິດທິພາບຂອງພື້ນທີ່ສະແດງພາບ isotropic × 1.0 ມມ ປະມານ 1 µm. 1.1 mm.ຄວາມຍາວຂອງ exposure 100 ms ໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອຂະຫຍາຍອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສຽງລົບກວນສູງສຸດຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກພາຍໃນ ແລະ ພາຍນອກທໍ່ຫາຍໃຈ ໃນຂະນະທີ່ຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປະດິດການເຄື່ອນໄຫວທີ່ເກີດຈາກການຫາຍໃຈ. ສໍາລັບການສຶກສາ vivo, ມີການວາງ shutter X-ray ໄວຢູ່ໃນເສັ້ນທາງ X-ray ເພື່ອຈໍາກັດປະລິມານການແຜ່ກະຈາຍຂອງຮັງສີໂດຍການສະກັດ X-ray ລະຫວ່າງ beam.
ຜູ້ໃຫ້ບໍລິການ LV ບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສາການຖ່າຍຮູບ SPring-8 PB-PCXI ໃດໆເພາະວ່າຫ້ອງຮູບພາບ BL20XU ບໍ່ໄດ້ຮັບການຢັ້ງຢືນລະດັບ Biosafety Level 2. ແທນທີ່ຈະ, ພວກເຮົາໄດ້ເລືອກ MPs ທີ່ມີຄຸນລັກສະນະທີ່ດີຈາກສອງຜູ້ສະຫນອງການຄ້າ - ກວມເອົາຂະຫນາດ, ວັດສະດຸ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງທາດເຫຼັກ, ແລະເຂົ້າໃຈເຖິງວິທີການ, ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແລະການນໍາໃຊ້ໃນແກ້ວ. ໃນ​ທາງ​ອາ​ກາດ​ທີ່​ມີ​ຊີ​ວິດ​. on the surface.MPs range in size from 0.25 to 18 μm and are made from a variety of material (ເບິ່ງຕາຕະລາງ 1), ແຕ່ອົງປະກອບຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງ, ລວມທັງຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກພາຍໃນ MP, ແມ່ນບໍ່ຮູ້ຈັກ. ອີງຕາມການສຶກສາ MCT ຂອງພວກເຮົາຢ່າງກວ້າງຂວາງ 19, 20, 21, 23, 24μm ຂະຫນາດນ້ອຍ, ພວກເຮົາສາມາດເຫັນໄດ້ວ່າ MP 5 onways. ພື້ນຜິວ, ສໍາລັບການຍົກຕົວຢ່າງໂດຍການຫັກກອບຕິດຕໍ່ກັນເພື່ອເບິ່ງການປັບປຸງການເບິ່ງເຫັນຂອງ MP motion.A ດຽວ 0.25 μm-sized MP ແມ່ນຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າຄວາມລະອຽດຂອງອຸປະກອນການຖ່າຍຮູບ, ແຕ່ PB-PCXI ຄາດວ່າຈະກວດພົບຄວາມຄົມຊັດຂອງປະລິມານຂອງເຂົາເຈົ້າແລະການເຄື່ອນໄຫວຂອງນ້ໍາພື້ນຜິວທີ່ເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກຝາກໄວ້ຫຼັງຈາກ deposition.
ຕົວຢ່າງສໍາລັບແຕ່ລະ MP ໃນຕາຕະລາງ 1 ໄດ້ຖືກກະກຽມໃນ 20 μlແກ້ວ capillaries (Drummond Microcaps, PA, USA) ທີ່ມີເສັ້ນຜ່າກາງພາຍໃນຂອງ 0.63 mm. particles corpuscular ແມ່ນມີຢູ່ໃນນ້ໍາ, ໃນຂະນະທີ່ອະນຸພາກ CombiMag ແມ່ນມີຢູ່ໃນຂອງຜູ້ຜະລິດຂອງນ້ໍາທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງ. ແຕ່ລະທໍ່ແມ່ນເຄິ່ງຫນຶ່ງທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍທາດແຫຼວ (1 approximate μl) ບັນຈຸຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ. ຮູບທີ 1).ຝາອັດປາກມົດລູກແກ້ວຖືກວາງໄວ້ຕາມແນວນອນຢູ່ເທິງກ່ອງຕົວຢ່າງໃນກ່ອງຮູບພາບຕາມລໍາດັບ ແລະວາງຂອບຂອງນໍ້າ.A ເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 19 ມມ (ຍາວ 28 ມມ) ເປືອກແກ້ວ nickel ຫາຍາກ neodymium iron boron (NdFeB) magnet (N35, cat. no. LM1652, Jaycaret) a Electronic magnet of Australia. Tesla ໄດ້ຖືກຕິດກັບຂັ້ນຕອນການແປພາສາແຍກຕ່າງຫາກເພື່ອບັນລຸການປ່ຽນຕໍາແຫນ່ງຂອງມັນຫ່າງໄກສອກຫຼີກໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍຮູບ. ການໄດ້ຮັບຮູບພາບ X-ray ເລີ່ມຕົ້ນເມື່ອແມ່ເຫຼັກຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງປະມານ 30 ມມຂ້າງເທິງຕົວຢ່າງ, ແລະຮູບພາບຕ່າງໆໄດ້ຮັບໃນອັດຕາ 4 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ. ໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍຮູບ, ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກນໍາມາໃກ້ກັບທໍ່ແກ້ວ capillary (ປະມານ 1 ມມ) ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງຕໍາແຫນ່ງຂອງທໍ່ແລະຈາກນັ້ນແປເປັນພາກສະຫນາມ.
ການຕິດຕັ້ງພາບໃນ vitro ທີ່ບັນຈຸຕົວຢ່າງ MP ໃນເສັ້ນກ່າງແກ້ວຢູ່ໃນຂັ້ນຕອນການແປ xy ຕົວຢ່າງ. ເສັ້ນທາງຂອງສາຍແສງ X-ray ແມ່ນໝາຍດ້ວຍເສັ້ນຂີດສີແດງ.
ເມື່ອການເບິ່ງເຫັນ in vitro ຂອງ MPs ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ຊຸດຍ່ອຍຂອງພວກມັນໄດ້ຖືກທົດສອບຢູ່ໃນ vivo ໃນຫນູ albino Wistar ເພດຍິງປ່າທໍາມະຊາດ (~ 12 ອາທິດ, ~ 200 g). 0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicum®, Japan/kg) (Vetorphale®, Meiji Seika) ຫນູຖືກຢາສລົບດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງ Pharma, ຍີ່ປຸ່ນ) ໂດຍການສີດຢາ intraperitoneal. ຫຼັງຈາກຢາສະລົບ, ພວກເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກກະກຽມສໍາລັບການຖ່າຍຮູບໂດຍການເອົາຂົນອ້ອມຮອບ trachea, inserting an endotracheal tube (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) customizing them. ບັນຈຸຖົງຄວາມຮ້ອນເພື່ອຮັກສາອຸນຫະພູມຮ່າງກາຍ 22 .ແຜ່ນຮູບພາບໄດ້ຖືກຕິດຢູ່ກັບຂັ້ນຕອນການແປຕົວຢ່າງໃນກ່ອງຮູບພາບໃນມຸມເລັກນ້ອຍເພື່ອຈັດວາງ trachea ຕາມແນວນອນໃນຮູບ X-ray, ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຮູບ 2a.
(a) ໃນການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍຮູບ vivo ໃນກ່ອງຮູບພາບ SPring-8, ເສັ້ນທາງຂອງສາຍແສງ X-ray ໄດ້ຖືກໝາຍດ້ວຍເສັ້ນຂີດສີແດງ.(b,c) ການຕັ້ງທ້ອງຖີ່ນຂອງແມ່ເຫຼັກຢູ່ trachea ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຈາກໄລຍະໄກໂດຍໃຊ້ກ້ອງຖ່າຍຮູບ IP ສອງດ້ານທີ່ຕິດຢູ່ທາງຂວາງ. ຢູ່ເບື້ອງຊ້າຍຂອງຮູບໜ້າຈໍ, ສາຍສາຍທີ່ຖືເອົາຫົວທໍ່ນັ້ນສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້, ແລະສາມາດເບິ່ງເຫັນທໍ່ສົ່ງໄດ້.
ລະບົບປັ໊ມເຂັມສັກຢາຄວບຄຸມໄລຍະໄກ (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) ໂດຍໃຊ້ syringe ແກ້ວ 100 μl ຖືກເຊື່ອມຕໍ່ກັບທໍ່ PE10 (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) ຜ່ານ 30 Ga needle.Mark the tube ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າ tiping the in the trache tubing when the correcting tube in the trachea. micropump, syringe plunger ໄດ້ຖືກຖອນອອກໃນຂະນະທີ່ປາຍຂອງທໍ່ໄດ້ຖືກ immersed ໃນຕົວຢ່າງ MP ທີ່ຈະສົ່ງ. ທໍ່ສົ່ງທີ່ໂຫຼດໄດ້ຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ endotracheal, ວາງປາຍພາຍໃນສ່ວນທີ່ເຂັ້ມແຂງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ຄາດໄວ້ຂອງພວກເຮົາ. ການໄດ້ຮັບຮູບພາບໄດ້ຖືກຄວບຄຸມໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງກວດຈັບການຫາຍໃຈ, ສັນຍານ respiration ຂອງພວກເຮົາທັງຫມົດ, ໄລຍະເວລາຂອງ respiration ຂອງພວກເຮົາ. ການເປີດ/ປິດ ແລະຮັບພາບຖ່າຍ) ໄດ້ຖືກບັນທຶກໂດຍໃຊ້ Powerlab ແລະ LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. ເມື່ອພາບຖ່າຍເມື່ອຕູ້ປິດເຂົ້າບໍ່ໄດ້, ກ້ອງ IP ສອງຕົວ (Panasonic BB-SC382) ໄດ້ຖືກຕັ້ງໄວ້ຢູ່ທີ່ປະມານ 90° ຕໍ່ກັບກັນແລະກັນ ແລະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຕິດຕາມຕໍາແຫນ່ງຂອງ trachea ການສະກົດຈິດ. ຂ.
ແມ່ເຫຼັກຖືກຕິດຢູ່ກັບຂັ້ນຕອນທີສອງທີ່ສາມາດຕັ້ງຢູ່ຫ່າງໄກສອກຫຼີກຈາກພາຍນອກທີ່ຢູ່ອາໃສຮູບພາບ. ຕໍາແຫນ່ງແມ່ເຫຼັກແລະການຕັ້ງຄ່າຕ່າງໆໄດ້ຖືກທົດສອບ, ລວມທັງ: ຕິດຕັ້ງຢູ່ທີ່ມຸມປະມານ 30 °ຂ້າງເທິງ trachea (ການຕັ້ງຄ່າສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2a ແລະ 3a); ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອສັດ ແລະອີກອັນໜຶ່ງຢູ່ດ້ານລຸ່ມ, ມີເສົາຕັ້ງເພື່ອດຶງດູດ (ຮູບ 3b ); ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອສັດ ແລະອີກອັນໜຶ່ງຂ້າງລຸ່ມ, ດ້ວຍເສົາທີ່ຕັ້ງໄວ້ເພື່ອຂັບໄລ່ (ຮູບ 3c); ແລະແມ່ເຫຼັກຫນຶ່ງຂ້າງເທິງແລະຕັ້ງຂວາງກັບ trachea (ຮູບ 3d). ເມື່ອສັດແລະແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກກໍາຫນົດຄ່າແລະ MP ທີ່ຈະທົດສອບໄດ້ຖືກ loaded ເຂົ້າໄປໃນປັ໊ມ syringe, ສົ່ງຢາ 50 μlໃນອັດຕາ 4 μl / ວິນາທີໃນຂະນະທີ່ໄດ້ຮັບຮູບພາບ. ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຍ້າຍກັບຄືນໄປບ່ອນແລະຕໍ່ໄປຕາມ trachea ຕໍ່ມາ.
ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກສໍາລັບການຖ່າຍຮູບ vivo (a) ແມ່ເຫຼັກດຽວຂ້າງເທິງ trachea ໃນມຸມປະມານ 30 °, (b) ສອງແມ່ເຫຼັກທີ່ກໍານົດໄວ້ເພື່ອດຶງດູດ, (c) ສອງແມ່ເຫຼັກທີ່ຕັ້ງເພື່ອ repel, (d) ແມ່ເຫຼັກອັນດຽວຂ້າງເທິງແລະຕັ້ງຂວາງຢູ່ໃນ trachea. ຜູ້ສັງເກດການໄດ້ເບິ່ງລົງຈາກປາກໄປຫາປອດໂດຍຜ່ານ trachea ໄດ້, ຊ້າຍແລະ exposed ໄດ້. ດ້ານຂວາ.ແມ່ເຫຼັກແມ່ນເຄື່ອນໄປຕາມຄວາມຍາວຂອງທໍ່ຫາຍໃຈ ຫຼືຊ້າຍ ແລະຂວາຂ້າງເທິງ trachea ໃນທິດທາງຂອງ beam X-ray.
ພວກເຮົາຍັງໄດ້ຊອກຫາເພື່ອກໍານົດການເບິ່ງເຫັນແລະພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີການຫາຍໃຈ confounding ແລະການເຄື່ອນໄຫວ cardiac. ດັ່ງນັ້ນ, ໃນຕອນທ້າຍຂອງໄລຍະເວລາການຖ່າຍຮູບ, ສັດໄດ້ຖືກຂ້າຂອງມະນຸດຍ້ອນການ overdose pentobarbital (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mgSim/kg ເວທີການຫາຍໃຈແລະ ip). ການເຕັ້ນຂອງຫົວໃຈຢຸດ, ຂະບວນການຖ່າຍຮູບແມ່ນຊ້ໍາ, ເພີ່ມປະລິມານ MP ເພີ່ມເຕີມຖ້າບໍ່ມີ MP ເຫັນໄດ້ໃນຫນ້າດິນ.
ຮູບພາບທີ່ໄດ້ມາແມ່ນໄດ້ຖືກແກ້ໄຂໃນພື້ນທີ່ຮາບພຽງແລະພາກສະຫນາມຊ້ໍາແລ້ວປະກອບເຂົ້າໄປໃນຮູບເງົາ (20 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ; 15-25 × ຄວາມໄວປົກກະຕິຂຶ້ນຢູ່ກັບອັດຕາການຫາຍໃຈ) ໂດຍໃຊ້ຕົວຂຽນແບບກໍານົດເອງທີ່ຂຽນໃນ MATLAB (R2020a, The Mathworks).
ການສຶກສາການຈັດສົ່ງ vector ຂອງ LV gene ທັງຫມົດໄດ້ຖືກດໍາເນີນຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງສັດວິໄຈທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Adelaide ແລະມີຈຸດປະສົງເພື່ອນໍາໃຊ້ຜົນຂອງການທົດລອງ SPring-8 ເພື່ອປະເມີນວ່າການຈັດສົ່ງ LV-MP ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສາມາດເສີມຂະຫຍາຍການໂອນ gene ໃນ vivo. ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງ MP ແລະສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ສັດສອງກຸ່ມໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ - MP ທີ່ຢູ່ ກຸ່ມອື່ນໄດ້ຮັບ LV ແລະກຸ່ມຄວບຄຸມ. LV-MP ໂດຍບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ.
vectors gene LV ຖືກສ້າງຂື້ນໂດຍໃຊ້ວິທີການທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ 25, 26 .The LacZ vector ສະແດງອອກເຖິງ gene-localized beta-galactosidase ທີ່ມີນິວເຄລຍທີ່ຂັບເຄື່ອນໂດຍຜູ້ສົ່ງເສີມ MPSV constitutive (LV-LacZ), ເຊິ່ງຜະລິດຜະລິດຕະພັນປະຕິກິລິຢາສີຟ້າໃນຈຸລັງ transduced, ສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນຫນ້າຂອງເນື້ອເຍື່ອປອດແລະຈຸລັງຂອງຈຸລັງປະຕິບັດໂດຍຈໍານວນຕົວຄູນ. ຈຸລັງບວກທີ່ມີ hemocytometer ເພື່ອຄິດໄລ່ titer ໃນ TU/ml.Carriers ໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ cryopreserved ຢູ່ທີ່ -80 ° C, thawed ກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້, ແລະຜູກມັດກັບ CombiMag ໂດຍການປະສົມໃນອັດຕາສ່ວນ 1: 1 ແລະ incubating ສຸດກ້ອນຢ່າງຫນ້ອຍ 30 ນາທີກ່ອນການຈັດສົ່ງ.
ໜູ Sprague Dawley ປົກກະຕິ (n = 3/group, ~2-3 ໄດ້ຖືກຢາສລົບໃສ່ພາຍໃນຊ່ອງຄອດດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງ 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) ແລະ 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) ອາຍຸເດືອນ) ip) ແລະບໍ່ຜ່າຕັດດ້ວຍການສີດຢາ 1 ເມັດ. ເນື້ອເຍື່ອທາງເດີນຫາຍໃຈ tracheal ໄດ້ຮັບການຖ່າຍທອດ LV, ມັນຖືກປັບສະພາບໂດຍໃຊ້ໂປໂຕຄອນ perturbation ກົນຈັກທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້າຂອງພວກເຮົາ, ໃນທີ່ພື້ນຜິວ tracheal airway ໄດ້ຖືກ rubbed axially ດ້ວຍກະຕ່າສາຍ (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 Tracheal 28 ການປະຕິບັດທາງດ້ານຊີວະວິທະຍາ ຕູ້ປະມານ 10 ນາທີຫຼັງຈາກການລົບກວນ.
ສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງນີ້ໄດ້ຖືກປັບຕັ້ງໃຫ້ຄ້າຍກັບການສຶກສາການຖ່າຍພາບ X-ray ໃນ vivo, ໂດຍມີແມ່ເຫຼັກດຽວກັນທີ່ຖືໄວ້ຂ້າງເທິງ trachea ໂດຍໃຊ້ clip stent ການກັ່ນ (ຮູບ 4).A ປະລິມານ 50 μl (2 × 25 μl aliquots) ຂອງ LV-MP ໄດ້ຖືກສົ່ງເຂົ້າໄປໃນ trachea ສັດໃນເມື່ອກ່ອນ (n = 3) ທໍ່ກ່ອນ. described.A ຄວບຄຸມກຸ່ມ (n = 3 ສັດ) ໄດ້ຮັບ LV-MPs ດຽວກັນໂດຍບໍ່ມີການນໍາໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ. ຫຼັງຈາກ້ໍາຕົ້ມສໍາເລັດ, cannula ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກທໍ່ ET ແລະສັດໄດ້ຖືກ extubated. ການສະກົດຈິດຍັງຄົງຢູ່ໃນສະຖານທີ່ສໍາລັບ 10 ນາທີ, ຫຼັງຈາກນັ້ນມັນໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກ. Rats ໄດ້ຮັບປະລິມານ subcutaneous ຂອງ meloxicam (Iliversia, 1 ມລ / ກິໂລ) ຂອງອົດສະຕາລີ. ip ສັກຢາ atipamazole hydrochloride 1 mg/kg (Antisedan, Zoetis, Australia).ໜູຖືກຮັກສາໄວ້ໃຫ້ອົບອຸ່ນ ແລະ ຕິດຕາມຈົນກວ່າຈະຫາຍດີຈາກຢາສລົບ.
ອຸປະກອນຈັດສົ່ງ LV-MP ໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ. hub Luer ສີຂີ້ເຖົ່າອ່ອນຂອງທໍ່ ET ສາມາດເຫັນໄດ້ protruding ຈາກປາກແລະປາຍ gel ຂອງ pipette ທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບແມ່ນ inserted ຜ່ານທໍ່ ET ກັບຄວາມເລິກທີ່ຕ້ອງການເຂົ້າໄປໃນ trachea ໄດ້.
ຫນຶ່ງອາທິດຫຼັງຈາກຂັ້ນຕອນການໃຫ້ຢາ LV-MP, ສັດໄດ້ຖືກຂ້າຕາຍຂອງມະນຸດໂດຍການສູດດົມ CO2 100% ແລະການສະແດງອອກຂອງ LacZ ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການປິ່ນປົວແບບ X-gal ຂອງພວກເຮົາ. ວົງແຫວນ cartilaginous ທີ່ສຸດສາມ caudal ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຄວາມເສຍຫາຍທາງກົນຈັກຫຼືການເກັບຮັກສານ້ໍາຈາກການວາງທໍ່ endotracheal ບໍ່ໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າໃນການວິເຄາະ. ແຕ່ລະຄົນຖືກຕັດອອກແລະ tracheal ຍາວ. ຕິດຕັ້ງຢູ່ໃນຖ້ວຍທີ່ມີຢາງຊິລິໂຄນ (Sylgard, Dow Inc) ໂດຍໃຊ້ເຂັມ Minutien (ເຄື່ອງມືວິທະຍາສາດດີ) ເພື່ອເບິ່ງເຫັນພື້ນຜິວ luminal. ການແຜ່ກະຈາຍແລະຮູບແບບຂອງຈຸລັງ transduced ໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍການຖ່າຍຮູບດ້ານຫນ້າໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon (SMZ1500) ທີ່ມີກ້ອງຖ່າຍຮູບ DigiLite ແລະຊອບແວ TCapture (Tucquire magnifications ຢູ່ທີ່ 20 ປະເທດຈີນ). ການຕັ້ງຄ່າທີ່ສູງທີ່ສຸດສໍາລັບຄວາມກວ້າງເຕັມຂອງ trachea), ກັບຄວາມຍາວທັງຫມົດຂອງ trachea ຮູບພາບຂັ້ນຕອນໂດຍຂັ້ນຕອນ, ຮັບປະກັນການທັບຊ້ອນພຽງພໍລະຫວ່າງແຕ່ລະຮູບພາບເພື່ອອະນຸຍາດໃຫ້ຮູບພາບ "stitching". ຮູບພາບຈາກແຕ່ລະ trachea ໄດ້ຖືກປະກອບເຂົ້າໄປໃນຮູບປະກອບດຽວໂດຍໃຊ້ Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) utiling a motional planar expression. trachea ຈາກສັດແຕ່ລະໂຕໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ສະຄິບ MATLAB ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35 < Hue < 0.58, ຄວາມອີ່ມຕົວ > 0.15, ແລະຄ່າ < 0.7.By tracing the contours of the tissue manually generated. in 10GIos mask. ຮູບພາບເພື່ອກໍານົດພື້ນທີ່ເນື້ອເຍື່ອແລະປ້ອງກັນການກວດພົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຈາກພາຍນອກເນື້ອເຍື່ອ tracheal. ພື້ນທີ່ທີ່ມີຮອຍເປື້ອນຈາກຮູບພາບປະສົມທັງຫມົດຈາກສັດແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກລວບລວມເພື່ອສ້າງພື້ນທີ່ stained ທັງຫມົດສໍາລັບສັດນັ້ນ. ພື້ນທີ່ stained ໄດ້ຖືກແບ່ງອອກດ້ວຍພື້ນທີ່ຫນ້າກາກທັງຫມົດເພື່ອສ້າງພື້ນທີ່ປົກກະຕິ.
ແຕ່ລະ trachea ໄດ້ຖືກຝັງຢູ່ໃນ paraffin ແລະພາກສ່ວນ 5 μmໄດ້ຖືກຕັດ. ພາກສ່ວນຕ່າງໆໄດ້ຖືກຕ້ານກັບສີແດງໄວທີ່ເປັນກາງເປັນເວລາ 5 ນາທີແລະຮູບພາບໄດ້ຖືກໄດ້ມາໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon Eclipse E400, ກ້ອງຖ່າຍຮູບ DS-Fi3 ແລະຊອບແວຈັບອົງປະກອບ NIS (ຮຸ່ນ 5.20.00).
ການວິເຄາະສະຖິຕິທັງຫມົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.). ຄວາມສໍາຄັນທາງສະຖິຕິໄດ້ຖືກກໍານົດໄວ້ທີ່ p ≤ 0.05. Normality ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ Shapiro-Wilk, ແລະຄວາມແຕກຕ່າງຂອງ LacZ staining ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ unpaired t-test.
ຫົກ MPs ທີ່ອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 1 ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ PCXI, ແລະການເບິ່ງເຫັນແມ່ນໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 2. ສອງ polystyrene MPs (MP1 ແລະ MP2; 18 μmແລະ 0.25 μm, ຕາມລໍາດັບ) ບໍ່ໄດ້ສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ PCXI, ແຕ່ຕົວຢ່າງສ່ວນທີ່ເຫຼືອແມ່ນສາມາດລະບຸໄດ້ (MP4) ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນຕົວຢ່າງ 3 ແລະ MP4. (10-15% Fe3O4; 0.25 μm ແລະ 0.9 μm, ຕາມລໍາດັບ) ແມ່ນເຫັນໄດ້ຊັດເຈນ. ເຖິງແມ່ນວ່າມີບາງອະນຸພາກທີ່ນ້ອຍທີ່ສຸດທີ່ທົດສອບ, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) ແມ່ນ pronounced ທີ່ສຸດ. ຄວາມສາມາດຂອງ CombiMag ຈຸດທີ່ MP6 ໄດ້ຖືກກວດພົບທັງຫມົດແມ່ນຍາກທີ່ຈະກວດພົບ. ແມ່ເຫຼັກກັບໄປມາຂະໜານຂະໜານກັບເສັ້ນປະສາດ.ເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍອອກຈາກເສັ້ນປະສາດ, ອະນຸພາກຂະຫຍາຍອອກເປັນສາຍຍາວ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຫຍັບເຂົ້າໃກ້ ແລະ ຄວາມແຂງແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກເພີ່ມຂຶ້ນ, ສາຍອະນຸພາກສັ້ນລົງ ເນື່ອງຈາກອະນຸພາກເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ພື້ນຜິວດ້ານເທິງຂອງເສັ້ນປະສາດ (ເບິ່ງວີດີໂອເສີມຂອງອະນຸພາກ S1: MP4), ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງແມ່ເຫຼັກເພີ່ມຂຶ້ນ. ຖອດອອກຈາກເສັ້ນກ່າງໃບ, ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມຫຼຸດລົງ ແລະ MPs ຈັດລຽງເປັນສາຍຍາວທີ່ຂະຫຍາຍຈາກດ້ານເທິງຂອງເສັ້ນກ່າງໃບ (ເບິ່ງວີດີໂອເສີມ S2:MP4). ຫຼັງຈາກແມ່ເຫຼັກຢຸດເຄື່ອນທີ່, ອະນຸພາກຍັງສືບຕໍ່ເຄື່ອນທີ່ເປັນເວລາສັ້ນໆຫຼັງຈາກເຖິງຈຸດສົມດຸນ. ໃນຂະນະທີ່ MP ເຄື່ອນຍ້າຍໄປຫາ ແລະ ຫ່າງຈາກດ້ານເທິງຂອງອະນຸພາກສະນະແມ່ເຫຼັກ, ເສັ້ນຜ່າສູນກາງຂອງເສັ້ນປະສາດຈະລາກໄປ. ນ້ໍາ.
ການເບິ່ງເຫັນຂອງ MP ພາຍໃຕ້ PCXI ມີຄວາມແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍລະຫວ່າງຕົວຢ່າງ.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ແລະ (d) MP6. ຮູບພາບທັງໝົດທີ່ສະແດງຢູ່ນີ້ແມ່ນຖ່າຍດ້ວຍແມ່ເຫຼັກທີ່ຢູ່ປະມານ 10 ມມ ຢູ່ເທິງເສັ້ນກ່າງໃບ. ວົງມົນໃຫຍ່ທີ່ເຫັນໄດ້ຊັດແມ່ນຟອງອາກາດຕິດຢູ່ໃນເສັ້ນປະສາດ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນຢ່າງຈະແຈ້ງຂອງຂອບສີແດງ ແລະ ສີຂາວຂອງກ່ອງທີ່ມີໄລຍະຕິດຕໍ່ກັນ. magnification.ໃຫ້ສັງເກດວ່າເສັ້ນຜ່າກາງຂອງ schematics ແມ່ເຫຼັກໃນຮູບທັງຫມົດແມ່ນບໍ່ຂະຫນາດແລະປະມານ 100 ເທົ່າຂະຫນາດໃຫຍ່ກ່ວາສະແດງໃຫ້ເຫັນ.
ເນື່ອງຈາກແມ່ເຫຼັກຖືກແປຊ້າຍແລະຂວາຕາມທາງເທິງຂອງ capillary, ມຸມຂອງສາຍ MP ຈະປ່ຽນໃຫ້ສອດຄ່ອງກັບແມ່ເຫຼັກ (ເບິ່ງຮູບທີ່ 6), ດັ່ງນັ້ນການ delineating ສາຍສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ. ສໍາລັບ MP3-5, ຫຼັງຈາກ chord ໄດ້ເຖິງມຸມເກນ, particles ໄດ້ຖືກລາກໄປຕາມພື້ນຜິວດ້ານເທິງຂອງ capillary ໄດ້. ນີ້ມັກຈະເຮັດໃຫ້ເປັນກຸ່ມ MPs ທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດ (ກຸ່ມສະນະແມ່ເຫຼັກທີ່ໃກ້ຊິດ. ວິດີໂອເສີມ S3:MP5).ອັນນີ້ຍັງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນໂດຍສະເພາະເມື່ອຖ່າຍຮູບໃກ້ໆກັບເສັ້ນກ່າງຂອງເສັ້ນປະສາດ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ MPs ລວມຕົວກັນ ແລະ ສຸມຢູ່ໃນສ່ວນຕິດຕໍ່ຂອງອາກາດຂອງແຫຼວ. Particles ໃນ MP6, ເຊິ່ງຍາກທີ່ຈະແນມເຫັນ MP3-5, ບໍ່ໄດ້ຖືກລາກເນື່ອງຈາກແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນໄປຕາມເສັ້ນສາຍເລືອດ, ແຕ່ MP strings ອະນຸພາກຂອງວິດີໂອທີ່ແຕກແຍກອອກຈາກພາກສະຫນາມ. S4:MP6).ໃນບາງກໍລະນີ, ເມື່ອສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ນຳໃຊ້ຖືກຫຼຸດລົງໂດຍການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກໄປໄກຈາກບ່ອນຖ່າຍພາບ, MPs ທີ່ຍັງເຫຼືອຈະຄ່ອຍໆລົງໄປຫາພື້ນຜິວລຸ່ມຂອງທໍ່ດ້ວຍແຮງໂນ້ມຖ່ວງໃນຂະນະທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນສາຍ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S5: MP3).
ມຸມຂອງສະຕຣິງ MP ປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກແປໄປທາງຂວາເທິງເສັ້ນປະສາດ.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ແລະ (d) MP6. ກ່ອງສີແດງປະກອບດ້ວຍການຂະຫຍາຍຄວາມຄົມຊັດ. ກະລຸນາຮັບຊາບວ່າວິດີໂອເສີມແມ່ນໃຫ້ຂໍ້ມູນຍ້ອນວ່າພວກມັນເປີດເຜີຍໂຄງສ້າງອະນຸພາກທີ່ສຳຄັນ ແລະຂໍ້ມູນເຄື່ອນໄຫວທີ່ບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນຮູບສະຖິດເຫຼົ່ານີ້.
ການທົດສອບຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກຊ້າໆໄປມາຕາມ trachea ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການເບິ່ງເຫັນ MP ໃນສະພາບການຂອງການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສັບສົນໃນ vivo. ໃນ vivo ບໍ່ໄດ້ດໍາເນີນການທົດສອບຍ້ອນວ່າລູກປັດ polystyrene (MP1 ແລະ MP2) ບໍ່ເຫັນຢູ່ໃນ capillary. ແຕ່ລະສີ່ MPs ທີ່ຍັງເຫຼືອໄດ້ຖືກທົດສອບໃນ vivo ດ້ວຍແມ່ເຫຼັກຍາວ axis ຂ້າງເທິງ 3 ° configated ມຸມ. (ເບິ່ງຮູບ 2b ແລະ 3a), ເນື່ອງຈາກນີ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ລະບົບຕ່ອງໂສ້ MP ຍາວກວ່າ ແລະມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກວ່າການກຳນົດຄ່າແມ່ເຫຼັກທີ່ຢຸດລົງ.MP3, MP4 ແລະ MP6 ບໍ່ໄດ້ຖືກກວດພົບຢູ່ໃນທໍ່ຫຼອດລົມຂອງສັດທີ່ມີຊີວິດຢູ່ໃດໆ. ເມື່ອຮູບພາບທາງເດີນຫາຍໃຈຂອງໜູຖືກຖ່າຍຫຼັງຈາກສັດຖືກຂ້າຕາຍຢ່າງມະນຸດສະທຳ, ອະນຸພາກຂອງທາດຈະຍັງບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນປະລິມານທີ່ສູງກວ່າ 5 MP. ແລະເປັນພຽງແຕ່ອະນຸພາກທີ່ສັງເກດເຫັນ, ແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປະເມີນແລະລັກສະນະພຶດຕິກໍາ vivo ຂອງ MP.
ການວາງແມ່ເຫຼັກໃສ່ trachea ໃນລະຫວ່າງການສົ່ງ MP ສົ່ງຜົນໃຫ້ MPs ຈໍານວນຫຼາຍ, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນທັງຫມົດ, ກໍາລັງສຸມໃສ່ໃນພາກສະຫນາມຂອງ view. Particles ເຂົ້າໄປໃນ trachea ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນດີທີ່ສຸດໃນສັດທີ່ເສຍສະລະຂອງມະນຸດ. ຮູບທີ່ 7 ແລະວິດີໂອເສີມ S6: MP5 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຈັບແມ່ເຫຼັກຢ່າງໄວວາແລະການຈັດຕໍາແຫນ່ງຂອງອະນຸພາກຢູ່ໃນພື້ນຜິວຂອງ trachea ventral ທີ່ຕ້ອງການຂອງພາກພື້ນ trachea ໄດ້. trachea. ໃນເວລາທີ່ຊອກຫາ distally ຕາມ trachea ຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງ MP, ບາງ MPs ໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃກ້ກັບ carina, ແນະນໍາວ່າຄວາມເຂັ້ມຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກບໍ່ພຽງພໍທີ່ຈະເກັບກໍາແລະຮັກສາ MPs ທັງຫມົດ, ຍ້ອນວ່າເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກສົ່ງຜ່ານພາກພື້ນຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສູງສຸດໃນລະຫວ່າງຂະບວນການຂອງນ້ໍາ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ MP ຫລັງເກີດລູກແມ່ນສູງຂື້ນໃນທົ່ວພາກພື້ນຂອງອາກາດ, ກໍາລັງຂອງ MP ຢູ່ໃນຫຼາຍພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກໄດ້ແນະນໍາ. ສູງສຸດ.
ຮູບພາບຈາກ (a) ກ່ອນ ແລະ (b) ຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງ MP5 ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ຫາຍໃຈຂອງໜູ euthanized ເມື່ອໄວໆມານີ້ດ້ວຍແມ່ເຫຼັກທີ່ຕັ້ງຢູ່ເທິງພື້ນທີ່ຮູບພາບ. ພື້ນທີ່ຮູບພາບແມ່ນຕັ້ງຢູ່ລະຫວ່າງວົງແຫວນກະດູກອ່ອນສອງວົງ. ກ່ອນການຈັດສົ່ງ MP5, ມີນ້ໍາບາງຢູ່ໃນທໍ່ຫາຍໃຈ. ກ່ອງສີແດງປະກອບດ້ວຍການຂະຫຍາຍຄວາມຄົມຊັດຂອງ MP5. ຮູບພາບທີ່ສະແດງຢູ່ໃນວິດີໂອ pp5. ເຫຼົ່ານີ້.
ການແປແມ່ເຫຼັກຕາມ trachea ໃນ vivo ເຮັດໃຫ້ສາຍຕ່ອງໂສ້ MP ປ່ຽນມຸມພາຍໃນພື້ນຜິວທາງເດີນຫາຍໃຈໃນລັກສະນະທີ່ຄ້າຍຄືກັບທີ່ເຫັນໃນເສັ້ນເລືອດແດງ (ເບິ່ງຮູບ 8 ແລະວິດີໂອເສີມ S7:MP5). ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, MPs ບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄປຕາມພື້ນຜິວຂອງທໍ່ຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດຢູ່ໄດ້ຍ້ອນວ່າພວກມັນສາມາດມີ capillaries. ໃນບາງກໍລະນີທີ່ຍາວກວ່າ, ສາຍຕ່ອງໂສ້ MP5 ຈະເຄື່ອນທີ່ທາງຂວາ. ພົບວ່າສາຍອະນຸພາກປະກົດວ່າມີການປ່ຽນແປງຄວາມເລິກຂອງຊັ້ນຂອງນ້ໍາພື້ນຜິວໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຍ້າຍຕາມລວງຍາວຕາມ trachea, ແລະຂະຫຍາຍອອກໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຍ້າຍໂດຍກົງເທິງຫົວແລະສາຍ particle ໄດ້ຖືກ rotated ກັບຕໍາແຫນ່ງຕັ້ງ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S7). : MP5 ຢູ່ທີ່ 0:09, ເບື້ອງຂວາລຸ່ມ).ຮູບແບບການເຄື່ອນໄຫວໄດ້ປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກແປຢູ່ທາງເທິງຂອງທໍ່ຫຼອດລົມທາງຂ້າງ (ຄືໄປທາງຊ້າຍ ຫຼືຂວາຂອງສັດຫຼາຍກວ່າຕາມຄວາມຍາວຂອງທໍ່ຫຼອດລົມ).ອະນຸພາກຍັງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນເມື່ອພວກມັນເຄື່ອນຍ້າຍ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຖອດອອກຈາກທໍ່ຫຼອດລົມ, ເຄັດລັບຂອງອະນຸພາກ 8 MP (Suppary 8 MP). ເລີ່ມແຕ່ເວລາ 0:08).ອັນນີ້ສອດຄ່ອງກັບພຶດຕິກຳຂອງ MP ທີ່ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນແກ້ວແກ້ວ.
ຕົວຢ່າງຮູບທີ່ສະແດງ MP5 ຢູ່ໃນຫຼອດລົມຂອງໜູທີ່ມີຢາສລົບຢູ່.(a) ແມ່ເຫຼັກແມ່ນໃຊ້ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮູບຂ້າງເທິງ ແລະທາງຊ້າຍຂອງທໍ່ຫຼອດລົມ, ຈາກນັ້ນ (b) ຫຼັງຈາກແມ່ເຫຼັກຖືກຍ້າຍໄປເບື້ອງຂວາ. ກ່ອງສີແດງປະກອບດ້ວຍການຂະຫຍາຍຄວາມຄົມຊັດ. ຮູບພາບເຫຼົ່ານີ້ມາຈາກວິດີໂອທີ່ສະແດງໃນວິດີໂອເສີມ S7MP.
ເມື່ອສອງເສົາຖືກຕັ້ງຄ່າໃນທິດທາງເໜືອ-ໃຕ້ ດ້ານເທິງ ແລະລຸ່ມ trachea (ເຊັ່ນ: ການດຶງດູດ; ຮູບ 3b), MP chords ປາກົດຂຶ້ນຍາວກວ່າ ແລະຕັ້ງຢູ່ເທິງຝາຂ້າງຂອງ trachea ແທນທີ່ຈະຢູ່ດ້ານຫຼັງຂອງ trachea (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S9:MP5). ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງ particles ບໍ່ໄດ້ຢູ່ບ່ອນດຽວ. ກວດພົບຫຼັງຈາກການສົ່ງຂອງນ້ໍາໃນເວລາທີ່ອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກຄູ່ຖືກໃຊ້, ເຊິ່ງມັກຈະເກີດຂື້ນໃນເວລາທີ່ອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກດຽວຖືກນໍາໃຊ້. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຫນຶ່ງຖືກຕັ້ງຄ່າເພື່ອ repel ຂົ້ວ (ຮູບ 3c), ຈໍານວນຂອງອະນຸພາກທີ່ເບິ່ງເຫັນໃນພາກສະຫນາມຂອງມຸມເບິ່ງບໍ່ປາກົດວ່າເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການສົ່ງ. ການສະກົດຈິດ, ຕາມລໍາດັບ. ການຕິດຕັ້ງໄດ້ຖືກປ່ຽນເປັນແມ່ເຫຼັກດຽວຂະຫນານກັບທໍ່ຫາຍໃຈແຕ່ຜ່ານທໍ່ຫາຍໃຈຢູ່ທີ່ 90 ອົງສາເພື່ອໃຫ້ເສັ້ນພາກສະຫນາມຂ້າມກໍາແພງ tracheal ເປັນຮູບ orthogonally (ຮູບ 3d), ທິດທາງທີ່ອອກແບບມາເພື່ອກໍານົດວ່າການລວບລວມອະນຸພາກຢູ່ກໍາແພງຂ້າງສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ໃນການຕັ້ງຄ່າການສະກົດຈິດແບບ MP ນີ້ບໍ່ມີ. ການເຄື່ອນໄຫວ.ອີງໃສ່ຜົນໄດ້ຮັບທັງໝົດເຫຼົ່ານີ້, ການກຳນົດຄ່າການກຳນົດທິດທາງ 30 ອົງສາເປັນແມ່ເຫຼັກດຽວ (ຮູບທີ 3a) ໄດ້ຖືກເລືອກໃຫ້ຢູ່ໃນການສຶກສາກ່ຽວກັບຕົວກຳເນີດຂອງ vivo.
ເມື່ອສັດຖືກຮູບພາບຊ້ໍາຊ້ອນທັນທີຫຼັງຈາກການຂ້າມະນຸດ, ການຂາດການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ສັບສົນຫມາຍຄວາມວ່າເສັ້ນອະນຸພາກທີ່ລະອຽດກວ່າແລະສັ້ນກວ່າສາມາດເຫັນໄດ້ໃນພາກສະຫນາມ interchondral ທີ່ຊັດເຈນ, "ສັ່ນສະເທືອນ" ສອດຄ່ອງກັບການເຄື່ອນໄຫວແປຂອງແມ່ເຫຼັກ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຍັງບໍ່ສາມາດເຫັນໄດ້ຊັດເຈນວ່າມີແລະການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກ MP6.
LV-LacZ titer ແມ່ນ 1.8 × 108 TU/ml, ແລະຫຼັງຈາກ 1:1 ປະສົມກັບ CombiMag MP (MP6), ສັດໄດ້ຮັບປະລິມານ tracheal 50 μlຂອງ 9 × 107 TU/ml LV ຍານພາຫະນະ (ເຊັ່ນ: 4.5 × 106 TU/rat). ).ໃນການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້, ແທນທີ່ຈະແປແມ່ເຫຼັກໃນລະຫວ່າງການອອກແຮງງານ, ພວກເຮົາໄດ້ສ້ອມແຊມແມ່ເຫຼັກຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງຫນຶ່ງເພື່ອກໍານົດວ່າ LV transduction (a) ສາມາດໄດ້ຮັບການປັບປຸງເມື່ອທຽບກັບການຈັດສົ່ງ vector ໃນທີ່ບໍ່ມີພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະ (b) ສາມາດໄດ້ຮັບການສຸມໃສ່ຈຸລັງທາງອາກາດ transduced ກັບພາກພື້ນເປົ້າຫມາຍແມ່ເຫຼັກຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈເທິງ.
ການປະກົດຕົວຂອງແມ່ເຫຼັກແລະການນໍາໃຊ້ CombiMag ປະສົມປະສານກັບ vectors LV ບໍ່ໄດ້ປະກົດວ່າມີຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ສຸຂະພາບຂອງສັດ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບມາດຕະຖານການຈັດສົ່ງ vector ຂອງ LV ຂອງພວກເຮົາ protocol. ຮູບພາບດ້ານຫນ້າຂອງພາກພື້ນ tracheal ໄດ້ຮັບການລົບກວນກົນຈັກ (ຕື່ມ Fig. 1) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າມີລະດັບ transduction ສູງຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນກຸ່ມຂອງສັດທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍສະນະແມ່ເຫຼັກ LV.Fi ແມ່ນ LV-9. ປະລິມານການຍ້ອມສີ LacZ ສີຟ້າມີຢູ່ໃນກຸ່ມຄວບຄຸມ (ຮູບ 9b).ປະລິມານຂອງພື້ນທີ່ stained X-Gal ປົກກະຕິສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການບໍລິຫານຂອງ LV-MP ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເຮັດໃຫ້ການປັບປຸງປະມານ 6 ເທົ່າ (ຮູບ 9c).
ຕົວຢ່າງຮູບພາບປະກອບທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຖ່າຍທອດ tracheal ໂດຍ LV-MP (a) ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແລະ (b) ໃນກໍລະນີທີ່ບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ.(c) ການປັບປຸງທີ່ສໍາຄັນທາງສະຖິຕິໃນພື້ນທີ່ transduction LacZ ປົກກະຕິພາຍໃນ trachea ເມື່ອນໍາໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ (*p = 0.029, t-test, n = 3 ຕໍ່ກຸ່ມ).
ພາກສ່ວນທີ່ມີຮອຍດ່າງສີແດງໄວທີ່ເປັນກາງ (ຕົວຢ່າງທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນຮູບການເສີມ 2) ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈຸລັງທີ່ມີສີ LacZ ທີ່ມີຢູ່ໃນຮູບແບບແລະສະຖານທີ່ທີ່ຄ້າຍຄືກັນດັ່ງທີ່ໄດ້ລາຍງານກ່ອນຫນ້ານີ້.
ສິ່ງທ້າທາຍຫຼັກສໍາລັບການປິ່ນປົວ gene ທາງອາກາດຍັງຄົງເປັນທ້ອງຖິ່ນທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ particles carrier ກັບພາກພື້ນທີ່ມີຄວາມສົນໃຈແລະບັນລຸລະດັບສູງຂອງປະສິດທິພາບ transduction ໃນປອດທີ່ເຄື່ອນຍ້າຍໃນທີ່ປະທັບຂອງ airflow ແລະ mucus clearance. ສໍາລັບ LV carriers ອອກແບບມາເພື່ອປິ່ນປົວພະຍາດ CF airway, ການເພີ່ມເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງ particles carrier ພາຍໃນທໍ່ທາງເດີນຫາຍໃຈໄດ້ມີ hithertos. al., ການນໍາໃຊ້ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເພື່ອປັບປຸງ transduction ມີຄວາມໄດ້ປຽບເມື່ອທຽບກັບວິທີການສົ່ງ gene ອື່ນໆເຊັ່ນ: electroporation, ຍ້ອນວ່າມັນສາມາດສົມທົບການງ່າຍດາຍ, ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ, ປະສິດທິພາບ, ການຈັດສົ່ງທ້ອງຖິ່ນ, ປະສິດທິພາບເພີ່ມຂຶ້ນ, ແລະໄລຍະເວລາ incubation ສັ້ນ, ແລະອາດຈະເປັນ carrier ຂະຫນາດນ້ອຍ dose10. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ໃນ vivo deposition ແລະພຶດຕິກໍາຂອງແມ່ເຫຼັກຂອງ particles ອາກາດພາຍນອກມີອິດທິພົນ. ອະທິບາຍ, ແລະຕົວຈິງແລ້ວຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງວິທີການນີ້ໄດ້ຖືກສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນ vivo ເພື່ອເພີ່ມລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດຢູ່.
ການທົດລອງ in vitro synchrotron PCXI ຂອງພວກເຮົາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພາກທັງຫມົດທີ່ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບ, ຍົກເວັ້ນ polystyrene MP, ເຫັນໄດ້ໃນການຕິດຕັ້ງຮູບພາບທີ່ພວກເຮົາໃຊ້. ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, MPs ປະກອບເປັນສາຍທີ່ມີຄວາມຍາວກ່ຽວຂ້ອງກັບປະເພດອະນຸພາກແລະຄວາມແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ (ເຊັ່ນ: ຄວາມໃກ້ຊິດແລະການເຄື່ອນທີ່ຂອງແມ່ເຫຼັກ). ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1, ແຕ່ລະພາກແມ່ນສັງເກດເຫັນ. ເປັນແມ່ເຫຼັກແລະ inducing ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທ້ອງຖິ່ນຂອງຕົນເອງ. ພາກສະຫນາມແຍກຕ່າງຫາກເຫຼົ່ານີ້ເຮັດໃຫ້ອະນຸພາກທີ່ຄ້າຍຄືກັນອື່ນໆທີ່ຈະລວບລວມແລະເຊື່ອມຕໍ່, ມີການເຄື່ອນທີ່ຄ້າຍຄື string ເປັນກຸ່ມເນື່ອງຈາກກໍາລັງທ້ອງຖິ່ນຈາກທ້ອງຖິ່ນທີ່ດຶງດູດແລະກໍາລັງ repulsive ຂອງອະນຸພາກອື່ນໆ.
ການສະແດງແຜນຜັງ (a,b) particle trains generated in the fluid-filled capillaries and (c,d) air-filled trachea.Note that the capillaries and trachea are not drawn to scale.Panel (a) also contains a description of MP, which contains Fe3O4 particles ຈັດຢູ່ໃນສາຍ.
ໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຍ້າຍໄປຂ້າງເທິງ capillary, ມຸມຂອງສາຍອະນຸພາກໄດ້ບັນລຸເປົ້າຫມາຍທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບ MP3-5 ບັນຈຸ Fe3O4, ຫຼັງຈາກນັ້ນສາຍອະນຸພາກບໍ່ໄດ້ຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງເດີມ, ແຕ່ໄດ້ຍ້າຍຕາມພື້ນຜິວກັບຕໍາແຫນ່ງໃຫມ່. magnet. ຜົນກະທົບນີ້ອາດຈະເກີດຂຶ້ນເນື່ອງຈາກວ່າພື້ນຜິວ capillary ແກ້ວແມ່ນກ້ຽງພຽງພໍທີ່ຈະອະນຸຍາດໃຫ້ການເຄື່ອນໄຫວນີ້ເກີດຂຶ້ນໄດ້ MP6. ອາດຈະເປັນຍ້ອນວ່າອະນຸພາກມີຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າ, ມີການເຄືອບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼືຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງພື້ນຜິວ, ຫຼືນ້ໍາ carrier ເປັນເຈົ້າຂອງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມສາມາດໃນການເຄື່ອນທີ່ຂອງພວກມັນ. ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຮູບພາບຂອງອະນຸພາກ CombiMag ຍັງອ່ອນລົງ, ແນະນໍາວ່າຂອງນ້ໍາແລະອະນຸພາກອາດຈະມີຄວາມຫນາແຫນ້ນຄ້າຍຄືກັນແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງບໍ່ງ່າຍທີ່ຈະຍ້າຍໄປຫາກັນແລະກັນ. Particles ຍັງສາມາດຕິດເກີນໄປ, ຖ້າພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ໄວເກີນໄປ. friction ລະຫວ່າງ particles ໃນນ້ໍາ, ແນະນໍາວ່າບາງທີມັນບໍ່ແປກໃຈວ່າຄວາມແຮງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແລະໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງແມ່ເຫຼັກແລະພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍແມ່ນສໍາຄັນຫຼາຍ. ເອົາຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຍັງແນະນໍາວ່າ, ໃນຂະນະທີ່ແມ່ເຫຼັກສາມາດຈັບ MPs ຫຼາຍທີ່ໄຫຼຜ່ານພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍ, ມັນບໍ່ຫນ້າຈະເປັນໄປໄດ້ວ່າແມ່ເຫຼັກສາມາດອີງໃສ່ເພື່ອຍ້າຍອະນຸພາກ CombiMag ຕາມຫນ້າດິນຂອງ MPV. ນຳໃຊ້ສະໜາມແມ່ເຫຼັກສະຖິດເພື່ອແນໃສ່ພື້ນທີ່ສະເພາະຂອງຕົ້ນໄມ້ທາງເດີນອາກາດ.
ເມື່ອອະນຸພາກຖືກສົ່ງໃນຮ່າງກາຍ, ພວກມັນຍາກທີ່ຈະລະບຸໃນສະພາບຂອງເນື້ອເຍື່ອຮ່າງກາຍເຄື່ອນທີ່ທີ່ສັບສົນ, ແຕ່ຄວາມສາມາດໃນການກວດພົບພວກມັນໄດ້ຖືກປັບປຸງໂດຍການແປແມ່ເຫຼັກຕາມແນວນອນຂ້າງເທິງ trachea ເປັນ "ວິກ" MP strings. ເຖິງແມ່ນວ່າການຖ່າຍພາບສົດຈະເປັນໄປໄດ້, ມັນງ່າຍທີ່ຈະສັງເກດເຫັນການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກເມື່ອສັດໄດ້ຖືກຂ້າຕາຍໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງທີ່ສຸດຂອງແມ່ເຫຼັກນີ້. ພື້ນທີ່, ເຖິງແມ່ນວ່າບາງອະນຸພາກມັກຈະຖືກພົບເຫັນຕື່ມອີກຕາມ trachea. ກົງກັນຂ້າມກັບການສຶກສາໃນ vitro, particles ບໍ່ສາມາດຖືກ dragged ຕາມ trachea ໂດຍການແປແມ່ເຫຼັກໄດ້. ການຄົ້ນພົບນີ້ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບວິທີການ mucus ທີ່ເຄືອບຜິວຂອງ trachea ໄດ້ປົກກະຕິຂະບວນການ particles inhaled, ກັບດັກມັນຢູ່ໃນຂີ້ກະເທີ່ແລະກົນໄກການອະນາໄມຕໍ່ມາ.
ພວກເຮົາສົມມຸດຕິຖານວ່າການໃຊ້ແມ່ເຫຼັກເພື່ອດຶງດູດເອົາຢູ່ຂ້າງເທິງ ແລະລຸ່ມ trachea (ຮູບ 3b) ອາດຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ມີສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ສອດຄ່ອງກັນ, ແທນທີ່ຈະເປັນສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງໃນຈຸດຫນຶ່ງ, ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການແຜ່ກະຈາຍຂອງອະນຸພາກເປັນເອກະພາບຫຼາຍຂຶ້ນ. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ການສຶກສາເບື້ອງຕົ້ນຂອງພວກເຮົາບໍ່ໄດ້ຊອກຫາຫຼັກຖານທີ່ຊັດເຈນເພື່ອສະຫນັບສະຫນູນສົມມຸດຕິຖານນີ້. ຢູ່ໃນພື້ນທີ່ທີ່ມີອະນຸພາກເພີ່ມເຕີມໃນຮູບພາບ. ການຄົ້ນພົບສອງອັນນີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຕິດຕັ້ງແມ່ເຫຼັກຄູ່ບໍ່ໄດ້ປັບປຸງການຄວບຄຸມທ້ອງຖິ່ນຂອງການກໍານົດເປົ້າຫມາຍ MP ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ແລະຜົນໄດ້ຮັບຂອງກໍາລັງແມ່ເຫຼັກທີ່ເຂັ້ມແຂງແມ່ນມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກໃນການຕັ້ງຄ່າ, ເຮັດໃຫ້ວິທີການນີ້ປະຕິບັດໄດ້ຫນ້ອຍລົງ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ທິດທາງຂອງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງແລະຜ່ານ trachea ເຫຼົ່ານີ້ (ຮູບ 3d. ພື້ນທີ່ຂອງ particles) ຍັງບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນ. ການຕັ້ງຄ່າທາງເລືອກອາດຈະບໍ່ປະສົບຜົນສໍາເລັດເພາະວ່າພວກມັນເຮັດໃຫ້ຄວາມແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຕ່ໍາພາຍໃນພື້ນທີ່ເງິນຝາກ. ດັ່ງນັ້ນ, ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກມຸມ 30 ອົງສາດຽວ (ຮູບ 3a) ຖືວ່າເປັນວິທີທີ່ງ່າຍທີ່ສຸດແລະມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດສໍາລັບການທົດສອບ vivo.
ການສຶກສາ LV-MP ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າໃນເວລາທີ່ vectors LV ຖືກລວມເຂົ້າກັບ CombiMag ແລະສົ່ງຫຼັງຈາກການລົບກວນທາງດ້ານຮ່າງກາຍໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ລະດັບ transduction ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນ trachea ເມື່ອທຽບກັບ controls. ອີງຕາມການສຶກສາ synchrotron imaging ແລະຜົນ LacZ, ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກໄດ້ປາກົດຂື້ນສາມາດຮັກສາ LV ພາຍໃນ trachea ເລິກເຂົ້າໄປໃນຈໍານວນ trachea ໄດ້ທັນທີ. ການປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍດັ່ງກ່າວອາດຈະນໍາໄປສູ່ປະສິດທິພາບທີ່ສູງຂຶ້ນໃນຂະນະທີ່ການຫຼຸດຜ່ອນ titers ສົ່ງ, ການຖ່າຍທອດນອກເປົ້າຫມາຍ, ຜົນຂ້າງຄຽງອັກເສບແລະພູມຕ້ານທານ, ແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງຜູ້ໃຫ້ບໍລິການ gene. ທີ່ສໍາຄັນ, ອີງຕາມຜູ້ຜະລິດ, CombiMag ສາມາດໄດ້ຮັບການນໍາໃຊ້ຮ່ວມກັບວິທີການໂອນ gene ອື່ນໆ, ລວມທັງກັບ vectors ໄວຣັສອື່ນໆ (ເຊັ່ນ: AAV) ແລະອາຊິດ nucleic.