ຂໍ​ຂອບ​ໃຈ​ທ່ານ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ຢ້ຽມ​ຢາມ Nature.com​. ທ່ານກໍາລັງໃຊ້ເວີຊັນຂອງຕົວທ່ອງເວັບທີ່ມີການສະຫນັບສະຫນູນ CSS ຈໍາກັດ. ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ບຣາວເຊີທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດການນຳໃຊ້ໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ນອກຈາກນັ້ນ, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະຫນັບສະຫນູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາສະແດງເວັບໄຊທ໌ທີ່ບໍ່ມີຮູບແບບແລະ JavaScript.
ສະແດງຮູບວົງມົນຂອງສາມສະໄລ້ພ້ອມກັນ. ໃຊ້ປຸ່ມກ່ອນໜ້າ ແລະປຸ່ມຕໍ່ໄປເພື່ອເລື່ອນຜ່ານສາມສະໄລ້ຕໍ່ຄັ້ງ, ຫຼືໃຊ້ປຸ່ມເລື່ອນຢູ່ທ້າຍເພື່ອເລື່ອນຜ່ານສາມສະໄລ້ຕໍ່ຄັ້ງ.
ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີຮູຂຸມຂົນຖືກກະກຽມໂດຍວິທີການ sol-gel ດ້ວຍການດັດແປງບາງຢ່າງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ອະນຸພາກທີ່ມີຮູຂຸມຂົນກວ້າງ. ອະນຸພາກເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກແຍກອອກດ້ວຍ N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) ແລະ styrene ໂດຍຜ່ານສາຍຕ່ອງໂສ້ການແຜ່ກະຈາຍຂອງ reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polymerization ເພື່ອຜະລິດ N-phenylmaleimide intercalated polyamides. Styrene (PMP) ໄລຍະ stationary. ຖັນສະແຕນເລດທີ່ເຈາະແຄບ (ເສັ້ນຜ່າກາງພາຍໃນ 100 × 1.8 ມມ) ໄດ້ຖືກບັນຈຸດ້ວຍການຫຸ້ມຫໍ່ slurry. ການປະຕິບັດ chromatographic ຂອງຖັນ PMP ໄດ້ຖືກປະເມີນເພື່ອແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ສັງເຄາະປະກອບດ້ວຍຫ້າ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) ແລະ tryptic hydrolyzate albumin ຂອງມະນຸດ. ພາຍ​ໃຕ້​ເງື່ອນ​ໄຂ​ທີ່​ດີ​ທີ່​ສຸດ elution , ຈໍາ​ນວນ​ທາງ​ທິດ​ສະ​ດີ​ຂອງ​ແຜ່ນ​ທີ່​ມີ​ປະ​ສົມ​ຂອງ peptides ໄດ້​ບັນ​ລຸ 280,000 ແຜ່ນ / sq.m. ການປຽບທຽບການປະຕິບັດການແຍກຕົວຂອງຖັນທີ່ພັດທະນາກັບຄໍລໍາ Ascentis Express RP-Amide ການຄ້າ, ມັນສັງເກດເຫັນວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ແມ່ນດີກວ່າຖັນການຄ້າໃນແງ່ຂອງປະສິດທິພາບການແຍກແລະການແກ້ໄຂ.
ອຸດສາຫະກໍາຢາຊີວະພາບໄດ້ກາຍເປັນຕະຫຼາດໂລກທີ່ມີການຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນໂດຍມີສ່ວນແບ່ງຕະຫຼາດເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້. ກັບການຂະຫຍາຍຕົວລະເບີດຂອງອຸດສາຫະກໍາ biopharmaceutical1,2,3 ມີຄວາມຕ້ອງການທີ່ຍິ່ງໃຫຍ່ສໍາລັບການວິເຄາະ peptide ແລະທາດໂປຼຕີນ. ນອກເຫນືອໄປຈາກ peptide ເປົ້າຫມາຍ, impurities ຕ່າງໆໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໃນລະຫວ່າງການສັງເຄາະ peptide, ສະນັ້ນການຊໍາລະ chromatographic ແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມບໍລິສຸດທີ່ຕ້ອງການຂອງ peptide. ການວິເຄາະແລະລັກສະນະຂອງທາດໂປຼຕີນໃນນ້ໍາໃນຮ່າງກາຍ, ເນື້ອເຍື່ອ, ແລະຈຸລັງແມ່ນເປັນວຽກທີ່ທ້າທາຍທີ່ສຸດເນື່ອງຈາກມີຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງຊະນິດທີ່ສາມາດກວດພົບໄດ້ຢູ່ໃນຕົວຢ່າງດຽວ. ເຖິງແມ່ນວ່າ spectrometry ມະຫາຊົນເປັນເຄື່ອງມືປະສິດທິພາບສໍາລັບການ sequencing peptides ແລະທາດໂປຼຕີນ, ຖ້າຫາກວ່າຕົວຢ່າງດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກນໍາສະເຫນີໂດຍກົງເຂົ້າໄປໃນ spectrometer ມະຫາຊົນ, ການແຍກຈະບໍ່ເປັນທີ່ພໍໃຈ. ບັນຫານີ້ສາມາດແກ້ໄຂໄດ້ໂດຍການປະຕິບັດການ chromatography ແຫຼວ (LC) ກ່ອນການວິເຄາະ MS, ເຊິ່ງຈະຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນການວິເຄາະທີ່ເຂົ້າມາໃນ spectrometer ມະຫາຊົນໃນເວລາທີ່ກໍານົດ 4,5,6. ນອກຈາກນັ້ນ, ການວິເຄາະສາມາດສຸມໃສ່ພາກພື້ນແຄບໃນລະຫວ່າງການແຍກໄລຍະຂອງແຫຼວ, ດັ່ງນັ້ນການສຸມໃສ່ການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ແລະເພີ່ມຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງການກວດຫາ MS. Liquid chromatography (LC) ໄດ້ກ້າວຫນ້າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນທົດສະວັດທີ່ຜ່ານມາແລະໄດ້ກາຍເປັນວິທີການນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບການວິເຄາະ proteomic7,8,9,10.
Reverse-phase liquid chromatography (RP-LC) ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເພື່ອຊໍາລະລ້າງແລະແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ໂດຍໃຊ້ octadecyl-modified silica (ODS) ເປັນໄລຍະ stationary11,12,13. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເນື່ອງຈາກໂຄງສ້າງທີ່ສັບສົນແລະລັກສະນະ amphoteric, 14,15 RP ໄລຍະ stationary ບໍ່ສາມາດສະຫນອງການແຍກຕ່າງຫາກທີ່ຫນ້າພໍໃຈຂອງ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນ. ດັ່ງນັ້ນ, ການວິເຄາະ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຊິ້ນຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວໂລກຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີໄລຍະ stationary ທີ່ຖືກອອກແບບພິເສດເພື່ອໂຕ້ຕອບແລະຮັກສາການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້16. chromatography ປະສົມ, ເຊິ່ງສະຫນອງການໂຕ້ຕອບ multimodal, ສາມາດເປັນທາງເລືອກຂອງ RP-LC ສໍາລັບການແຍກ peptides, ທາດໂປຼຕີນ, ແລະປະສົມສະລັບສັບຊ້ອນອື່ນໆ. ໄລຍະ stationary ປະສົມຫຼາຍຊະນິດໄດ້ຖືກກະກຽມ ແລະຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍໄລຍະ stationary ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອແຍກ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນ17,18,19,20,21. ເນື່ອງຈາກມີກຸ່ມຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ, ໄລຍະສະຖານີແບບປະສົມ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການແຍກ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນ22,23,24,25,26,27,28. , Polar intercalated ໄລຍະ stationary ກັບກຸ່ມ polar ຜູກມັດ covalently ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມສາມາດໃນການແຍກທີ່ດີແລະການຄັດເລືອກທີ່ເປັນເອກະລັກສໍາລັບການວິເຄາະຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ຂົ້ວເນື່ອງຈາກວ່າການແຍກແມ່ນຂຶ້ນກັບການໂຕ້ຕອບລະຫວ່າງການວິເຄາະແລະໄລຍະ stationary ປະຕິສໍາພັນ Multimodal 29,30,31,32. ບໍ່ດົນມານີ້, Zhang et al. 30 ໄດ້ຮັບ behenyl-terminated ໄລຍະ stationary ຂອງ polyamines ແລະສົບຜົນສໍາເລັດແຍກ hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ແລະບາງການວິເຄາະອື່ນໆ. ວັດສະດຸ stationary ຝັງຢູ່ຂົ້ວໂລກມີທັງກຸ່ມຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວ, ສະນັ້ນມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອແຍກ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນເຂົ້າໄປໃນພາກສ່ວນ hydrophobic ແລະ hydrophilic. ຖັນແຖວ Polar (ຕົວຢ່າງ: ຖັນ C18 ກັບ amide inline) ແມ່ນມີຢູ່ໃນຊື່ການຄ້າຂອງຖັນ Ascentis Express RP-Amide, ແຕ່ຖັນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ພຽງແຕ່ສໍາລັບການວິເຄາະຂອງ amine 33.
ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ໄລຍະການຝັງຕົວຂອງຂົ້ວໂລກ (N-phenylmaleimide, ຝັງ polystyrene) ໄດ້ຖືກກະກຽມແລະການປະເມີນສໍາລັບການແຍກ peptide ແລະການແຍກ HSA tryptic. ຍຸດທະສາດຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກະກຽມໄລຍະ stationary. particles silica porous ໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນສິ່ງພິມທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, ມີການປ່ຽນແປງບາງຢ່າງໃນແຜນການກະກຽມ 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. ອັດຕາສ່ວນຂອງ urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ແລະອາຊິດ aqueous-acetic ໄດ້ຖືກປັບຂະຫນາດຂອງ particleica. ອັນທີສອງ, phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ligand ຊະນິດໃຫມ່ໄດ້ຖືກສັງເຄາະແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມາຈາກມັນໄດ້ຖືກໃຊ້ເພື່ອກະກຽມໄລຍະສະຖານີທີ່ຝັງຢູ່ຂົ້ວໂລກ. ໄລຍະ stationary ທີ່ໄດ້ຮັບໄດ້ຖືກບັນຈຸເຂົ້າໄປໃນຖັນສະແຕນເລດ (ເສັ້ນຜ່າກາງພາຍໃນ 100 × 1.8 ມມ) ອີງຕາມໂຄງການການຫຸ້ມຫໍ່ທີ່ດີທີ່ສຸດ. ການຫຸ້ມຫໍ່ຂອງຖັນແມ່ນການຊ່ວຍເຫຼືອໂດຍການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກເພື່ອຮັບປະກັນຊັ້ນເປັນເອກະພາບພາຍໃນຖັນ. ຖັນບັນຈຸໄດ້ຖືກປະເມີນສໍາລັບການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ປະກອບດ້ວຍຫ້າ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). ແລະ tryptic hydrolysates ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດ (HSA). ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າປະສົມ peptide ແລະ HSA tryptic digest ແຍກອອກດ້ວຍຄວາມລະອຽດແລະປະສິດທິພາບທີ່ດີ. ປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ໄດ້ຖືກປຽບທຽບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide. ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນມີຄວາມລະອຽດທີ່ດີແລະປະສິດທິພາບການແຍກສູງຢູ່ໃນຖັນ PMP, ແລະປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ແມ່ນສູງກວ່າຖັນ Ascentis Express RP-Amide.
PEG (polyethylene glycol), urea, acetic acid, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, human serum albumin (HSA), ammonium chloride, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl PO chloride, T-4yl, MCyl peroxide (BPO), acetonitrile (ACN) ສໍາລັບ HPLC, methanol, 2-propanol ແລະ acetone. ບໍລິສັດ Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA).
ທາດປະສົມຂອງ urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) ແລະ 8 ml ຂອງ 0.01 N. ອາຊິດອາຊິດ acetic ໄດ້ຖືກ stirred ສໍາລັບ 10 ນາທີ, ແລະ 24 ມລຂອງ TMOS ໄດ້ຖືກຕື່ມໃສ່ມັນພາຍໃຕ້ຄວາມເຢັນຂອງກ້ອນ. ປະສົມປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ຮ້ອນຢູ່ທີ່ 40 ° C ເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຢູ່ທີ່ 120 ° C ສໍາລັບ 8 ຊົ່ວໂມງໃນເຕົາອົບສະແຕນເລດ. ນ້ໍາໄດ້ຖືກ decanted ແລະສ່ວນທີ່ເຫຼືອໄດ້ຖືກຕາກໃຫ້ແຫ້ງຢູ່ທີ່ 70 ° C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ທ່ອນໄມ້ອ່ອນທີ່ແຫ້ງແລ້ວຖືກນຳມາຕຳໃຫ້ກ້ຽງ ແລະ ອົບໃນເຕົາອົບທີ່ອຸນຫະພູມ 550 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ສາມຊຸດໄດ້ຖືກກະກຽມແລະມີລັກສະນະເພື່ອທົດສອບການແຜ່ພັນຂອງຂະຫນາດອະນຸພາກ, ຂະຫນາດ pore ແລະພື້ນທີ່ຫນ້າດິນ.
ກຸ່ມ Polar ແລະໄລຍະ stationary ສໍາລັບຕ່ອງໂສ້ polystyrene. ຂັ້ນຕອນການກະກຽມແມ່ນໄດ້ອະທິບາຍຂ້າງລຸ່ມນີ້.
N-phenylmaleimide (200 mg) ແລະ methyl vinyl isocyanate (100 mg) ຖືກລະລາຍໃນ toluene ທີ່ບໍ່ມີນ້ໍາ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ 0.1 ມລຂອງ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ກະພິບປະຕິກິລິຍາເພື່ອໃຫ້ໄດ້ copolymer ຂອງ phenylmaleimide ແລະ CPPM isocyanate. ) ການປະສົມໄດ້ຖືກນໍາໄປໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ 60 ° C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ, ການກັ່ນຕອງແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງໃນເຕົາອົບທີ່ 40 ° C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.
particles silica ແຫ້ງ (2 g) ໄດ້ຖືກກະແຈກກະຈາຍໃນ toluene ແຫ້ງ (100 ml), stirred ແລະ sonicated ສໍາລັບ 10 ນາທີໃນ 500 ml flask ລຸ່ມມົນ. PMCP (10 mg) ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ toluene ແລະເພີ່ມ dropwise ກັບ flask ປະຕິກິລິຍາໂດຍຜ່ານ funnel ເພີ່ມເຕີມ. ທາດປະສົມດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກແຊ່ແຂໍງຢູ່ທີ່ 100 ° C ເປັນເວລາ 8 ຊົ່ວໂມງ, ການກັ່ນຕອງ, ລ້າງດ້ວຍ acetone ແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງຢູ່ທີ່ 60 ° C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ອະນຸພາກ silica ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ PMCP (100 g) ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ toluene (200 ມລ), ແລະ 4-hydroxy-TEMPO (2 ມລ) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ໃນທີ່ນັ້ນໃນທີ່ປະທັບຂອງ 100 μlຂອງ dibutyltin dilaurate ເປັນ catalyst. ປະສົມໄດ້ຖືກ stirred ຢູ່ທີ່ 50 ° C ເປັນເວລາ 8 ຊົ່ວໂມງ, ການກັ່ນຕອງແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງຢູ່ທີ່ 50 ° C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.
Styrene (1 ml), benzoyl peroxide BPO (0.5 ml) ແລະອະນຸພາກ silica ທີ່ຕິດກັບ TEMPO-PMCP (1.5 g) ຖືກກະແຈກກະຈາຍໃນ toluene ແລະ purged ດ້ວຍໄນໂຕຣເຈນ. polymerization ຂອງ styrene ໄດ້ດໍາເນີນຢູ່ທີ່ 100 ° C ສໍາລັບ 12 ຊົ່ວໂມງ. ຜະລິດຕະພັນທີ່ໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍ methanol ແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງຄືນຢູ່ທີ່ 60 ° C. ໂຄງການທົ່ວໄປຂອງຕິກິຣິຍາແມ່ນສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນຮູບ. ຫນຶ່ງ .
ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກ degassed ຢູ່ທີ່ 393 K ສໍາລັບ 1 ຊົ່ວໂມງຈົນກ່ວາຄວາມກົດດັນທີ່ຕົກຄ້າງຕ່ໍາກວ່າ 10-3 Torr ໄດ້ຮັບ. ປະລິມານຂອງ N2 adsorbed ຢູ່ຄວາມກົດດັນພີ່ນ້ອງ P/P0 = 0.99 ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດປະລິມານ pore ທັງຫມົດ. ຮູບຮ່າງຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ບໍລິສຸດ ແລະ ຜູກມັດໄດ້ຖືກກວດກາໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນິກສະແກນ (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan). ຕົວຢ່າງແຫ້ງ (ຊິລິກາບໍລິສຸດແລະອະນຸພາກຊິລິກາຜູກມັດ ligand) ໄດ້ຖືກວາງໄວ້ເທິງແຜ່ນອາລູມິນຽມໂດຍໃຊ້ເທບຄາບອນ. ຄໍາໄດ້ຖືກຝາກໄວ້ໃນຕົວຢ່າງໂດຍໃຊ້ອຸປະກອນ sputtering Q150T, ແລະຊັ້ນ Au ຫນາ 5 nm ຖືກຝາກໄວ້ໃນຕົວຢ່າງ. ນີ້ປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງຂະບວນການແຮງດັນຕ່ໍາແລະສະຫນອງການສີດເຢັນດີ. ການວິເຄາະອົງປະກອບໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ເຄື່ອງວິເຄາະອົງປະກອບອົງປະກອບ. ເຄື່ອງວິເຄາະຂະໜາດອະນຸພາກ Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອໄດ້ຮັບການແຈກຢາຍຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກ. ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ບໍ່ມີການເຄືອບ ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ (5 ມລກ) ໄດ້ຖືກກະແຈກກະຈາຍຢູ່ໃນ 5 ມລຂອງ isopropanol, ແຊ່ນ້ໍາເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ປັ່ນປ່ວນເປັນເວລາ 5 ນາທີ, ແລະວາງໄວ້ເທິງບ່ອນນັ່ງ optical Mastersizer. ການ​ວິ​ເຄາະ Thermogravimetric ແມ່ນ​ປະ​ຕິ​ບັດ​ໃນ​ອັດ​ຕາ​ຂອງ 5 ° C ຕໍ່​ນາ​ທີ​ໃນ​ລະ​ດັບ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຈາກ 30 ຫາ 800 ° C​.
ຖັນສະແຕນເລດທີ່ມີເສັ້ນໄຍແກ້ວເສັ້ນໄຍແຄບທີ່ມີຂະຫນາດ (ID 100 × 1.8 ມມ) ໄດ້ຖືກບັນຈຸໂດຍວິທີການຕື່ມ slurry ປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນດຽວກັນກັບໃນເອກະສານອ້າງອີງ 31. ຖັນສະແຕນເລດ (ເສັ້ນແກ້ວ, ID 100 × 1 .8 ມມ) ແລະເຕົ້າສຽບທີ່ມີ frit 1 µm ໄດ້ເຊື່ອມຕໍ່ກັບເຄື່ອງຫຸ້ມຫໍ່ slurry, USA, IL (A. ການກະກຽມ suspension ຂອງໄລຍະ stationary ໂດຍ suspension 150 mg ຂອງໄລຍະ stationary ໃນ 1.2 ml ຂອງ methanol ແລະໃຫ້ອາຫານມັນເຂົ້າໄປໃນຖັນອ່າງເກັບນ. Methanol ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນສານລະລາຍ slurry ແລະຄວບຄຸມ solvent. ຫຸ້ມຖັນໂດຍການໃຊ້ລໍາດັບຄວາມກົດດັນຂອງ 100 MP ສໍາລັບ 10 ນາທີ, 80 MP ສໍາລັບ 15 ນາທີ, ແລະ 60 MP ສໍາລັບ 30 ນາທີ. ຂະບວນການຫຸ້ມຫໍ່ໄດ້ນໍາໃຊ້ສອງ vibrators ຖັນ chromatography ອາຍແກັສ (Alltech, Deerfield, IL, USA) ສໍາລັບການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກເພື່ອຮັບປະກັນການບັນຈຸຖັນເປັນເອກະພາບ. ປິດເຄື່ອງຫຸ້ມຫໍ່ slurry ແລະປ່ອຍຄວາມກົດດັນຊ້າໆເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍຕໍ່ສາຍເຊືອກ. ຖັນໄດ້ຖືກຕັດການເຊື່ອມຕໍ່ຈາກ nozzle slurry ແລະ fitting ອີກອັນຫນຶ່ງແມ່ນຕິດກັບ inlet ແລະເຊື່ອມຕໍ່ກັບລະບົບ LC ເພື່ອທົດສອບການເຮັດວຽກຂອງມັນ.
A MLC ແບບກໍານົດເອງໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ປັ໊ມ LC (10AD Shimadzu, ຍີ່ປຸ່ນ), ຕົວຢ່າງທີ່ມີ 50 nL ສີດ loop (Valco (USA) C14 W.05), ເຍື່ອ degasser (Shimadzu DGU-14A), ແລະປ່ອງຢ້ຽມ capillary UV-VIS. ອຸປະກອນກວດຈັບ (UV-2075) ແລະ microcolumn enamelled. ໃຊ້ທໍ່ເຊື່ອມຕໍ່ແຄບແລະສັ້ນຫຼາຍເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຂອງການຂະຫຍາຍຖັນເພີ່ມເຕີມ. ຫຼັງຈາກການຕື່ມຖັນ, ຕິດຕັ້ງ capillary (50 µm id 365) ຢູ່ outlet ຂອງ 1/16″ junction ຫຼຸດຜ່ອນແລະຕິດຕັ້ງ capillary (50 µm) ຂອງ junction ຫຼຸດຜ່ອນ. ການເກັບກຳຂໍ້ມູນ ແລະ ການປະມວນຜົນ chromatogram ແມ່ນດຳເນີນໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Multichro 2000. ຢູ່ທີ່ 254 nm, ການດູດຊຶມ UV ຂອງການວິເຄາະວິຊາໄດ້ຖືກຕິດຕາມຢູ່ທີ່ 0. ຂໍ້ມູນ Chromatographic ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ OriginPro8 (Northampton, MA).
human serum albumin, lyophilized powder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ປະສົມກັບ trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 ml) ແລະ 0.2 M ammonium bicarbonate (1 ml). ການແກ້ໄຂໄດ້ຖືກ stirred ສໍາລັບ 10 ນາທີແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອາບນ້ໍາທີ່ 37 ° C ສໍາລັບ 6 h, ຫຼັງຈາກນັ້ນ quenched ດ້ວຍ 1 ml ຂອງ 0.1% TFA. ກັ່ນຕອງການແກ້ໄຂແລະເກັບຮັກສາໄວ້ຕ່ໍາກວ່າ 4 ° C.
ການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ແລະ tryptic digest HSA ໃນຖັນ PMP ໄດ້ຖືກປະເມີນແຍກຕ່າງຫາກ. ກວດເບິ່ງ tryptic hydrolysis ຂອງປະສົມຂອງ peptides ແລະ HSA ແຍກໂດຍຖັນ PMP ແລະປຽບທຽບຜົນໄດ້ຮັບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide. ຈຳນວນຂອງຈານທິດສະດີແມ່ນຄຳນວນໂດຍໃຊ້ສົມຜົນຕໍ່ໄປນີ້:
ຮູບພາບ SEM ຂອງ particles silica ບໍລິສຸດແລະ ligand ຜູກມັດ silica particles ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2. ຮູບພາບ SEM ຂອງ particles silica ບໍລິສຸດ (A, B) ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບຮ່າງ spherical ທີ່ particles ແມ່ນ elongated ຫຼືມີ symmetry ບໍ່ສະຫມໍ່າສະເຫມີເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກ silica ຜູກມັດໂດຍ ligand (C, D) ແມ່ນ smoother ກວ່າອະນຸພາກ silica ບໍລິສຸດ, ຊຶ່ງອາດຈະເປັນຍ້ອນຕ່ອງໂສ້ polystyrene ກວມເອົາພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກ silica ໄດ້.
ການສະແກນເອເລັກໂຕຣນິກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາບໍລິສຸດ (A, B) ແລະອະນຸພາກຊິລິກາຜູກມັດ ligand (C, D).
ການແຈກຢາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາບໍລິສຸດ ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ ligand ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2. 3(A). ເສັ້ນໂຄ້ງການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກ Volumetric ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີ (ຮູບ 3A). ຂໍ້​ມູນ​ການ​ແຜ່​ກະ​ຈາຍ​ຂະ​ຫນາດ​ອະ​ນຸ​ພາກ​ຊິ​ລິ​ກາ​ຈາກ​ການ​ສຶກ​ສາ​ໃນ​ປັດ​ຈຸ​ບັນ​ແລະ​ການ​ສຶກ​ສາ​ທີ່​ຜ່ານ​ມາ​ແມ່ນ​ໄດ້​ປຽບ​ທຽບ​ໃນ​ຕາ​ຕະ​ລາງ 1(A). ຂະໜາດຂອງອະນຸພາກ volumetric d(0.5) ຂອງ PMP ແມ່ນ 3.36 µm, ເມື່ອປຽບທຽບກັບຄ່າ ad(0.5) ຂອງ 3.05 µm ໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ (polystyrene bonded silica particles)34. ເນື່ອງຈາກການປ່ຽນແປງຂອງອັດຕາສ່ວນຂອງ PEG, urea, TMOS ແລະອາຊິດ acetic ໃນປະສົມຕິກິຣິຍາ, ການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດ particle ຂອງ batch ນີ້ແມ່ນແຄບລົງເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ຂະໜາດອະນຸພາກຂອງໄລຍະ PMP ແມ່ນໃຫຍ່ກວ່າໄລຍະອະນຸພາກ silica polystyrene ເລັກນ້ອຍທີ່ພວກເຮົາໄດ້ສຶກສາກ່ອນຫນ້ານີ້. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າການທໍາງານຫນ້າຂອງອະນຸພາກ silica ກັບ styrene ຝາກພຽງແຕ່ຊັ້ນ polystyrene (0.97 µm) ເທິງຫນ້າດິນ silica, ໃນຂະນະທີ່ໃນໄລຍະ PMP ຄວາມຫນາຂອງຊັ້ນແມ່ນ 1.38 µm.
ການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກ (A) ແລະການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດ pore (B) ຂອງ particles silica ບໍລິສຸດແລະ ligand bound particles silica.
ຂະຫນາດຂອງຮູຂຸມຂົນ, ປະລິມານຂອງຮູຂຸມຂົນ, ແລະພື້ນທີ່ຫນ້າດິນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1 (B). ໂປຣໄຟລ໌ PSD ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາບໍລິສຸດ ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ ligand ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ. 3(ຂ). ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ34. ຂະຫນາດ pore ຂອງ particles silica ບໍລິສຸດແລະ ligand-ຜູກມັດແມ່ນ 310 Å ແລະ 241 Å ຕາມລໍາດັບ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຫຼັງຈາກການປ່ຽນແປງທາງເຄມີ, ຂະຫນາດ pore ຫຼຸດລົງໂດຍ 69 Å, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1 (B), ແລະເສັ້ນໂຄ້ງ shift ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ. ພື້ນທີ່ສະເພາະຂອງ silica particles ຂອງພວກເຮົາແມ່ນ 2 / 16 ການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ. ການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ (124 m2 / g). ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1(B), ພື້ນທີ່ຫນ້າດິນ (m2/g) ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີຍັງຫຼຸດລົງຈາກ 116 m2 / g ເປັນ 105 m2 / g.
ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການວິເຄາະອົງປະກອບຂອງໄລຍະ stationary ແມ່ນນໍາສະເຫນີຢູ່ໃນຕາຕະລາງ. 2. ເນື້ອໃນຄາບອນຂອງໄລຍະ stationary ໃນປັດຈຸບັນແມ່ນ 6.35%, ເຊິ່ງຕ່ໍາກວ່າໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ (ອະນຸພາກ silica ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ polystyrene, 7.93% 35 ແລະ 10.21%, ຕາມລໍາດັບ) 42. ເນື້ອໃນຂອງຄາບອນຂອງໄລຍະ stationary ໃນປັດຈຸບັນຂ້າງລຸ່ມນີ້, ນັບຕັ້ງແຕ່ບາງຂົ້ວໂລກເຊັ່ນ: phenylmaleimide methyanocyte-PC (POMP) ມີ hydroxy phenylmaleimide ແລະ POMP. ໃຊ້ນອກເຫນືອໄປຈາກ styrene ໃນການກະກຽມ SP. ອັດຕາສ່ວນນ້ໍາຫນັກຂອງໄນໂຕຣເຈນໃນໄລຍະສະຖານີໃນປະຈຸບັນແມ່ນ 2.21% ເມື່ອທຽບກັບ 0.1735 ແລະ 0.85% ໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ42. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າໄລຍະ stationary ໃນປັດຈຸບັນມີອັດຕາສ່ວນນ້ໍາສູງຂອງໄນໂຕຣເຈນເນື່ອງຈາກ phenylmaleimide. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ຜະລິດຕະພັນ (4) ແລະ (5) ມີເນື້ອໃນຄາບອນຂອງ 2.7% ແລະ 2.9%, ຕາມລໍາດັບ, ໃນຂະນະທີ່ຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍ (6) ມີເນື້ອໃນຄາບອນຂອງ 6.35%, ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຕາຕະລາງ 2. ການວິເຄາະ Thermogravimetric (TGA) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນໄລຍະ stationary ຂອງ PMP ເພື່ອທົດສອບການສູນເສຍນ້ໍາຫນັກ, ແລະເສັ້ນໂຄ້ງ TGA ສະແດງໃຫ້ເຫັນ 4. ນ້ໍາຫນັກຂອງ TGAs ຈໍານວນ 8. ແມ່ນຢູ່ໃນຂໍ້ຕົກລົງທີ່ດີກັບເນື້ອໃນຄາບອນ (6.35%), ເນື່ອງຈາກວ່າ ligands ບໍ່ພຽງແຕ່ປະກອບດ້ວຍ C, ແຕ່ຍັງ N, O ແລະ H.
ທາດ ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອດັດແປງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເນື່ອງຈາກວ່າກຸ່ມ phenylmaleimide ແລະ vinylisocyanate ຂົ້ວໂລກ. ກຸ່ມ vinyl isocyanate ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບ styrene ຕື່ມອີກໂດຍການໃຊ້ polymerization ຮາກ. ເຫດຜົນທີສອງແມ່ນການໃສ່ກຸ່ມທີ່ມີການໂຕ້ຕອບປານກາງກັບການວິເຄາະແລະບໍ່ມີປະຕິສໍາພັນ electrostatic ທີ່ເຂັ້ມແຂງລະຫວ່າງ analyte ແລະໄລຍະ stationary, ເນື່ອງຈາກວ່າ phenylmaleimide moiety ບໍ່ມີຄ່າ virtual ຢູ່ທີ່ pH ປົກກະຕິ. Polarity ຂອງໄລຍະ stationary ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ໂດຍປະລິມານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ styrene ແລະເວລາຕິກິຣິຍາຂອງໂພລິເມີຮາກຟຣີ. ຂັ້ນ​ຕອນ​ສຸດ​ທ້າຍ​ຂອງ​ການ​ຕິ​ກິ​ຣິ​ຍາ (ໂພ​ລິ​ເມີ​ເຄ​ຟຣີ​) ແມ່ນ​ສໍາ​ຄັນ​ທີ່​ມັນ​ມີ​ການ​ປ່ຽນ​ແປງ polarity ຂອງ​ໄລ​ຍະ stationary ໄດ້​. ການ​ວິ​ເຄາະ​ອົງ​ປະ​ກອບ​ໄດ້​ປະ​ຕິ​ບັດ​ເພື່ອ​ກວດ​ກາ​ເບິ່ງ​ເນື້ອ​ໃນ​ຄາ​ບອນ​ໃນ​ໄລ​ຍະ stationary ເຫຼົ່າ​ນີ້​. ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າການເພີ່ມປະລິມານຂອງ styrene ແລະເວລາຕິກິຣິຍາເພີ່ມປະລິມານຄາບອນຂອງໄລຍະ stationary ແລະໃນທາງກັບກັນ. SPs ທີ່ກະກຽມດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ styrene ທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີການໂຫຼດກາກບອນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ໄລຍະ stationary ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກຈັດໃສ່ໃນຖັນສະແຕນເລດແລະລັກສະນະ chromatographic ຂອງເຂົາເຈົ້າ (ການຄັດເລືອກ, ຄວາມລະອຽດ, ຄ່າ N, ແລະອື່ນໆ) ໄດ້ຖືກກວດສອບ. ອີງຕາມການທົດລອງເຫຼົ່ານີ້, ອົງປະກອບທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການກະກຽມໄລຍະສະຖານີ PMP ໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອໃຫ້ມີຂົ້ວຄວບຄຸມແລະການຮັກສາການວິເຄາະທີ່ດີ.
ຖັນ PMP ຍັງໄດ້ຮັບການປະເມີນສໍາລັບການວິເຄາະຫ້າປະສົມຂອງ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ໂດຍໃຊ້ຄວາມສາມາດຂອງໄລຍະມືຖື. 60/40 (v/v) ACN/ນ້ໍາ (0.1% TFA) ໃນອັດຕາການໄຫຼຂອງ 80 µl/ນາທີ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ elution ທີ່ດີທີ່ສຸດ (200,000 ແຜ່ນ / m), ຈໍານວນຂອງແຜ່ນທິດສະດີ (N) ຕໍ່ຖັນ (100 × 1.8 ມມ) ແມ່ນ 20,000 ± 100. ຄ່າ N ສໍາລັບສາມຖັນ PMP ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 3 ແລະ chromatograms ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 5A. ການວິເຄາະໄວໃນອັດຕາການໄຫຼສູງ (700 µl/ນາທີ) ໃນຖັນ PMP, ຫ້າ peptides eluted ພາຍໃນຫນຶ່ງນາທີ, ມູນຄ່າ N ທີ່ດີເລີດຂອງ 13,500 ± 330 ຕໍ່ຖັນ (100 x 1.8 ເສັ້ນຜ່າກາງ mm), ເທົ່າກັບ 135,000 plates / m (ຮູບ 5B). ສາມຖັນທີ່ມີຂະຫນາດດຽວກັນ (ເສັ້ນຜ່າກາງພາຍໃນ 100 x 1.8 ມມ) ເຕັມໄປດ້ວຍສາມຊຸດທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງໄລຍະສະຖານີ PMP ເພື່ອທົດສອບການສືບພັນ. ການວິເຄາະໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ສໍາລັບແຕ່ລະຄໍລໍາໂດຍການແຍກສ່ວນປະສົມການທົດສອບດຽວກັນໃນແຕ່ລະຖັນໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ elution, ຈໍານວນຂອງແຜ່ນທິດສະດີ N, ແລະເວລາເກັບຮັກສາ. ຂໍ້ມູນການສືບພັນຂອງຖັນ PMP ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 4. ການສືບພັນຂອງຖັນ PMP ກ່ຽວຂ້ອງກັນດີກັບຄ່າ % RSD ຕໍ່າຫຼາຍ ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 3.
ການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptide ໃນຖັນ PMP (B) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (A), ໄລຍະມືຖື 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ຂະໜາດຖັນ PMP (100 x 1.8 mm id), ການວິເຄາະລຳດັບ Elution ຂອງທາດປະສົມ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Tyr), 2-Tyr (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ແລະ 5 (ອາຊິດ leucic enkephalin).
ຖັນ PMP (ເສັ້ນຜ່າສູນກາງພາຍໃນ 100 x 1.8 ມມ) ໄດ້ຖືກປະເມີນສໍາລັບການແຍກທາດ tryptic hydrolyzate ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດໂດຍ HPLC. chromatogram ໃນຮູບທີ 6 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຕົວຢ່າງຖືກແຍກອອກໄດ້ດີດ້ວຍຄວາມລະອຽດທີ່ດີຫຼາຍ. ວິທີແກ້ໄຂ HSA ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ອັດຕາການໄຫຼຂອງ 100 μl / ນາທີ, ໄລຍະມືຖືຂອງ 70/30 acetonitrile / ນ້ໍາແລະ 0.1% TFA. Cleavage ຂອງ HSA ໄດ້ແບ່ງອອກເປັນ 17 ສູງສຸດ, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນ chromatogram (ຮູບ 6), ທີ່ສອດຄ້ອງກັນກັບ 17 peptides. ປະສິດທິພາບການແຍກຕົວຂອງຈຸດສູງສຸດຂອງແຕ່ລະບຸກຄົນຈາກ HSA hydrolyzate ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ແລະຄ່າຕ່າງໆແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 5.
HSA tryptic hydrolysates ຖືກແຍກຢູ່ໃນຖັນ PMP (ເສັ້ນຜ່າສູນກາງພາຍໃນ 100 x 1.8 ມມ), ອັດຕາການໄຫຼ (100 μl/ນາທີ), ໄລຍະມືຖື 60/40 acetonitrile/water, ແລະ 0.1% TFA.
ບ່ອນທີ່ L ແມ່ນຄວາມຍາວຂອງຖັນ, η ແມ່ນຄວາມຫນືດຂອງໄລຍະມືຖື, ΔP ແມ່ນຄວາມກົດດັນດ້ານຫລັງຂອງຖັນ, ແລະ u ແມ່ນຄວາມໄວເສັ້ນຂອງໄລຍະມືຖື. ການ permeability ຂອງຖັນ PMP ແມ່ນ 2.5 × 10-14 m2, ອັດຕາການໄຫຼແມ່ນ 25 µl / min, 60/40 v / v ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້. ACN/ນ້ຳ. ການ permeability ຂອງຖັນ PMP (ID 100 × 1.8 ມມ) ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບການສຶກສາ Ref.34 ທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ການຊຶມເຂົ້າຂອງຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍອະນຸພາກ porous superficially ແມ່ນ 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 ສໍາລັບ particles 5 µm43. ດັ່ງນັ້ນ, ການ permeability ຂອງໄລຍະ PMP ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບການ permeability ຂອງອະນຸພາກແກນ-shell ທີ່ມີຂະຫນາດຂອງ 5 μm.
ບ່ອນທີ່ Wx ແມ່ນມະຫາຊົນຂອງຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍ chloroform, Wy ແມ່ນມະຫາຊົນຂອງຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍເມທານອນ, ແລະ ρ ແມ່ນຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງສານລະລາຍ. ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ methanol (ρ = 0.7866) ແລະ chloroform (ρ = 1.484). porosity ທັງຫມົດຂອງຖັນອະນຸພາກ silica-C18 (100 × 1.8 mm ID)34 ແລະຖັນ C18-urea31 ຂອງພວກເຮົາທີ່ສຶກສາຜ່ານມາແມ່ນ 0.63 ແລະ 0.55, ຕາມລໍາດັບ. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າການມີ urea ligands ຫຼຸດຜ່ອນ permeability ຂອງໄລຍະ stationary ໄດ້. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, porosity ທັງຫມົດຂອງຖັນ PMP (ເສັ້ນຜ່າສູນກາງພາຍໃນ 100 × 1.8 ມມ) ແມ່ນ 0.60. ຖັນ PMP ແມ່ນສາມາດ permeable ໄດ້ຫນ້ອຍກ່ວາຖັນບັນຈຸ C18 ຜູກມັດ silica particles ເນື່ອງຈາກວ່າໃນໄລຍະ stationary ປະເພດ C18 ligands C18 ຕິດກັບ particles silica ໃນລະບົບຕ່ອງໂສ້ linear, ໃນຂະນະທີ່ໃນໄລຍະ stationary ປະເພດ polystyrene ໂພລີເມີທີ່ຂ້ອນຂ້າງຫນາແມ່ນສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນອ້ອມຮອບອະນຸພາກ. layer A. ໃນ​ການ​ທົດ​ລອງ​ປົກ​ກະ​ຕິ​, porosity ຖັນ​ແມ່ນ​ໄດ້​ຖືກ​ຄິດ​ໄລ່​ດັ່ງ​ຕໍ່​ໄປ​ນີ້​:
ໃນຮູບ. 7A, B ສະແດງແຜນວາດ Van Deemter ສໍາລັບຖັນ PMP (id 100 x 1.8 ມມ) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 ມມ) ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ elution ດຽວກັນ, 60/40 ACN/H2O ແລະ 0 .1% TFA 20 µl/min ທັງສອງຖັນຕໍ່ນາທີ 8. ຄ່າ HETP ຕໍາ່ສຸດທີ່ອັດຕາການໄຫຼທີ່ເຫມາະສົມ (80 µl / min) ແມ່ນ 2.6 µm ແລະ 3.9 µm ສໍາລັບຖັນ PMP ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide ຕາມລໍາດັບ. ຄ່າ HETP ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP (100 x 1.8 mm id) ແມ່ນສູງກວ່າຫຼາຍຂອງຖັນ Ascentis Express RP-Amide ທີ່ມີການຄ້າ (100 x 1.8 mm id). ເສັ້ນສະແດງຂອງ van Deemter ໃນຮູບ 7(A) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຫຼຸດລົງຂອງຄ່າ N ແມ່ນບໍ່ສູງຫຼາຍກັບການໄຫຼວຽນເພີ່ມຂຶ້ນເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ປະສິດທິພາບການແຍກທີ່ສູງຂຶ້ນຂອງຖັນ PMP (id 100 × 1.8 ມມ) ເມື່ອທຽບກັບຄໍລໍາ Ascentis Express RP-Amide ແມ່ນອີງໃສ່ຮູບຮ່າງຂອງອະນຸພາກທີ່ປັບປຸງແລະຂະຫນາດແລະຂັ້ນຕອນການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນທີ່ຊັບຊ້ອນທີ່ໃຊ້ໃນການເຮັດວຽກໃນປະຈຸບັນ.
(A) Van Deemter plot (HETP vs. mobile phase linear velocity) ໄດ້ຮັບໃນຖັນ PMP (id 100 x 1.8 mm) ໃນ 60/40 ACN/H2O ກັບ 0.1% TFA. (B) Van Deemter plot (HETP ທຽບກັບຄວາມໄວເສັ້ນເສັ້ນໄລຍະມືຖື) ໄດ້ຮັບໃນຖັນ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ໃນ 60/40 ACN/H2O ກັບ 0.1% TFA.
ໄລຍະສະຖານີຂົ້ວໂລກຂອງ polystyrene intercalated ໄດ້ຖືກກະກຽມແລະການປະເມີນສໍາລັບການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ສັງເຄາະແລະ tryptic hydrolyzate ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດ (HSA) ໃນ chromatography ແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ. ການປະຕິບັດ chromatographic ຂອງຖັນ PMP ສໍາລັບການປະສົມ peptide ແມ່ນດີເລີດໃນແງ່ຂອງປະສິດທິພາບການແຍກແລະຄວາມລະອຽດ. ການປັບປຸງປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ແມ່ນຍ້ອນເຫດຜົນຫຼາຍຢ່າງເຊັ່ນ: ຂະຫນາດອະນຸພາກຊິລິກາແລະຂະຫນາດ pore, ການສັງເຄາະຄວບຄຸມຂອງໄລຍະ stationary, ແລະອຸປະກອນການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນສະລັບສັບຊ້ອນ. ນອກເຫນືອໄປຈາກປະສິດທິພາບການແຍກສູງ, ປະໂຫຍດອີກອັນຫນຶ່ງຂອງໄລຍະ stationary ນີ້ແມ່ນຄວາມກົດດັນຂອງຖັນຕ່ໍາໃນອັດຕາການໄຫຼສູງ. ຖັນ PMP ແມ່ນສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ສູງ ແລະສາມາດໃຊ້ເພື່ອວິເຄາະສ່ວນປະສົມຂອງ peptides ແລະການຍ່ອຍສະຫຼາຍ tryptic ຂອງທາດໂປຼຕີນຕ່າງໆ. ພວກເຮົາຕັ້ງໃຈທີ່ຈະນໍາໃຊ້ຖັນນີ້ສໍາລັບການແຍກທາດປະສົມ bioactive ຈາກຜະລິດຕະພັນທໍາມະຊາດ, ສານສະກັດຈາກພືດຢາແລະເຫັດໃນ chromatography ແຫຼວ. ໃນອະນາຄົດ, ຖັນ PMP ຍັງຈະຖືກປະເມີນສໍາລັບການແຍກທາດໂປຼຕີນແລະພູມຕ້ານທານ monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການສືບສວນກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ peptide ໄລຍະປີ້ນກັບ chromatography ສ່ວນທີ I: ການພັດທະນາອະນຸສັນຍາສໍາລັບລັກສະນະຖັນ. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການສືບສວນກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ peptide chromatography ໄລຍະປີ້ນກັບພາກສ່ວນ I: ການພັດທະນາໂປໂຕຄອນສໍາລັບການກໍານົດລັກສະນະຖັນ.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ແລະ Petersson, P. ການສືບສວນລະບົບການແຍກ Peptide ໂດຍ Reverse-Phase Chromatography, ພາກທີ I: ການພັດທະນາອະນຸສັນຍາສໍາລັບລັກສະນະຖັນ. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການສືບສວນກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ peptide ໄລຍະປີ້ນກັບ chromatography ສ່ວນ I: ການພັດທະນາໂປໂຕຄອນສໍາລັບຄຸນລັກສະນະຂອງຖັນ. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການສືບສວນກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ peptide ໄລຍະປີ້ນກັບ chromatography ສ່ວນ I: ການພັດທະນາໂປໂຕຄອນສໍາລັບຄຸນລັກສະນະຂອງຖັນ.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ແລະ Petersson, P. ການສືບສວນລະບົບການແຍກ Peptide ໂດຍ Reverse-Phase Chromatography, ພາກທີ I: ການພັດທະນາອະນຸສັນຍາສໍາລັບລັກສະນະຖັນ.J.色谱法。 1603, 113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. ວິທີການສ້າງ peptides ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ດີຂຶ້ນສໍາລັບການປິ່ນປົວພະຍາດຕິດຕໍ່. ເຕັກໂນໂລຊີຊີວະພາບ. ຜົນສຳເລັດ 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides ການປິ່ນປົວແບບສັງເຄາະ: ວິທະຍາສາດແລະການຕະຫຼາດ. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. peptides ການປິ່ນປົວແບບສັງເຄາະ: ວິທະຍາສາດແລະການຕະຫຼາດ.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ແລະ Chreschatyski M. peptides ການປິ່ນປົວແບບສັງເຄາະ: ວິທະຍາສາດແລະການຕະຫຼາດ.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ແລະ Khreschatsky M. peptides ການປິ່ນປົວແບບສັງເຄາະ: ວິທະຍາສາດແລະການຕະຫຼາດ. ການ​ຄົ້ນ​ພົບ​ຢາ​ເສບ​ຕິດ​. ມື້​ນີ້ 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced proteomic liquid chromatography.ເບິ່ງ F., Smith RD ແລະ Shen Yu. Advanced chromatography ຂອງແຫຼວ proteomic. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ທາດໂປຼຕີນຂັ້ນສູງ 液相色谱.ເບິ່ງ F., Smith RD ແລະ Shen Yu. Advanced chromatography ຂອງແຫຼວ proteomic.J. Chromatography. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. ຂັ້ນສູງຂອງແຫຼວ chromatography-mass spectrometry ແມ່ນສາມາດສົມທົບການ metabolomics ຢ່າງກວ້າງຂວາງແລະ proteomics. ຮູທະວານ. ຊິມ. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາ. Chesnut, SM & Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາ.Chesnut, SM ແລະ Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາ.Chesnut, SM ແລະ Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາ. J. ວິທະຍາສາດເດືອນກັນຍາ. 30(8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ພື້ນຖານ ແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສຸດສໍາລັບການແຍກໄວ. Wu, N. & Clausen, AM ພື້ນຖານ ແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສຸດສໍາລັບການແຍກໄວ.Wu, N. ແລະ Clausen, AM ພື້ນຖານແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສໍາລັບການແຍກຢ່າງໄວວາ. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面. Wu, N. & Clausen, AM ພື້ນຖານແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສຸດສໍາລັບການແຍກຢ່າງໄວວາ.Wu, N. ແລະ Clausen, AM ພື້ນຖານແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສໍາລັບການແຍກຢ່າງໄວວາ.J. ກັນຍາວິທະຍາສາດ. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ການໃຊ້ chromatography ຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໃນການພັດທະນາຢາ. Wren, SA & Tchelitcheff, P. ການໃຊ້ chromatography ຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໃນການພັດທະນາຢາ.Ren, SA ແລະ Chelischeff, P. ການໃຊ້ chromatography ຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໃນການພັດທະນາຢາ. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ແລະ Chelischeff, P. ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງ chromatography ແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງສຸດໃນການພັດທະນາຢາ.J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. A monolithic macroporous hydrogel ໄດ້ມາຈາກ emulsion ນ້ໍາມັນໃນນ້ໍາທີ່ມີໄລຍະພາຍໃນສູງສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງປະສິດທິພາບຂອງ enterovirus 71. ເຄມີ. ໂຄງການ. ວາລະສານ 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ບົດບາດຂອງ chromatography ແຫຼວໃນ proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ບົດບາດຂອງ chromatography ແຫຼວໃນ proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ແລະ Wilkins, JA ບົດບາດຂອງ chromatography ແຫຼວໃນ proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ແລະ Wilkins, JA ບົດບາດຂອງ chromatography ແຫຼວໃນ proteomics.J. Chromatography. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. ທ່າອ່ຽງໃໝ່ໃນການແຍກທາດໂຄມຕາຂອງແຫຼວໄລຍະປີ້ນກັບຂອງ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນໃນການປິ່ນປົວ: ທິດສະດີ ແລະການນຳໃຊ້. & Guillarme, D. ທ່າອ່ຽງໃໝ່ໃນການແຍກທາດໂຄມຕາຂອງແຫຼວໄລຍະປີ້ນກັບຂອງ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນໃນການປິ່ນປົວ: ທິດສະດີ ແລະການນຳໃຊ້. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной громатой громат фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. ທ່າອ່ຽງໃໝ່ໃນການແຍກແຍະ peptides ບຳບັດ ແລະໂປຣຕີນໂດຍໄລຍະປີ້ນກັບທາດແຫຼວ chromatography: ທິດສະດີ ແລະການນຳໃຊ້. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用. & Guillarme, D.ແລະ Guillarmé, D. ທ່າອ່ຽງໃໝ່ໃນການແຍກທາດເປິບຕີດປິ່ນປົວ ແລະໂປຣຕີນໂດຍໄລຍະປີ້ນກັນຂອງທາດໂຄຣມາໂຕຣ: ທິດສະດີ ແລະການນຳໃຊ້.J. Pharm. ຊີວະວິທະຍາ. ຮູທະວານ. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ການແຍກ peptides ສອງມິຕິລະດັບໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC ທີ່ມີ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນຂະຫນາດແຍກທໍາອິດແລະທີສອງ. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ການແຍກ peptides ສອງມິຕິລະດັບໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC ທີ່ມີ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນຂະຫນາດແຍກທໍາອິດແລະທີສອງ.Gilar M., Olivova P., Dali AE ແລະ Gebler JK ການແຍກ peptides ສອງມິຕິລະດັບໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC ທີ່ມີ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນຂະຫນາດການແຍກທໍາອິດແລະທີສອງ.Gilar M., Olivova P., Dali AE ແລະ Gebler JK ການແຍກສອງມິຕິຂອງ peptides ໂດຍໃຊ້ຄ່າ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນຂະຫນາດການແຍກທໍາອິດແລະທີສອງໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC. J. ວິທະຍາສາດເດືອນກັນຍາ. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. et al. ການສືບສວນການຖ່າຍທອດມວນຊົນແລະລັກສະນະ kinetic ຂອງຖັນ chromatography ປະສິດທິພາບສູງທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍອະນຸພາກ C18 ທີ່ມີ porous ແລະ superficially porous ຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າ 2 µm. J. ວິທະຍາສາດເດືອນກັນຍາ. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. ແນວໂນ້ມທີ່ຜ່ານມາແລະສິ່ງທ້າທາຍໃນການວິເຄາະໃນການໂດດດ່ຽວ, ການກໍານົດ, ແລະການກວດສອບ peptides ຊີວະພາບຂອງພືດ. ຮູທະວານ. ສັດທະວານ. ເຄມີ. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. ພູມສັນຖານ Proteomic ຂອງອານາຈັກຂອງຊີວິດ. ທຳມະຊາດ 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວຂອງ peptides ການປິ່ນປົວໂດຍ chromatography ແຫຼວການກະກຽມ. ໂມເລກຸນ (Basel, ສະວິດເຊີແລນ) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. ໂຄຣມາໂຕຣໂມດແບບປະສົມ ແລະການນຳໃຊ້ຂອງມັນກັບ biopolymer. Yang, Y. & Geng, X. ໂຄຣມາໂຕຣໂມດແບບປະສົມ ແລະການນຳໃຊ້ຂອງມັນກັບ biopolymer.Yang, Yu. ແລະ Geng, X. ຮູບແບບ chromatography ປະສົມແລະການນໍາໃຊ້ຂອງມັນກັບ biopolymer. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用. Yang, Y. & Geng, X. ຮູບແບບ chromatography ປະສົມແລະການນໍາໃຊ້ຂອງມັນໃນ biopolymer.Yang, Yu. ແລະ Gene, X. ຮູບແບບການປະສົມ chromatography ແລະການນໍາໃຊ້ຂອງມັນກັບ biopolymer.J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).