ຂໍ​ຂອບ​ໃຈ​ທ່ານ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ຢ້ຽມ​ຢາມ Nature.com​.ເວີຊັນຂອງຕົວທ່ອງເວັບທີ່ທ່ານກໍາລັງໃຊ້ມີການສະຫນັບສະຫນູນ CSS ຈໍາກັດ.ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ບຣາວເຊີທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດການນຳໃຊ້ໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer).ໃນເວລານີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະຫນັບສະຫນູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບແລະ JavaScript.
ມີຄວາມຈໍາເປັນສໍາລັບລະບົບ vitro ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ທີ່ສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງສະພາບແວດລ້ອມ physiological ຂອງຫົວໃຈສໍາລັບການທົດສອບຢາເສບຕິດ.ການມີທີ່ຈໍາກັດຂອງລະບົບວັດທະນະທໍາເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຂອງມະນຸດໄດ້ເຮັດໃຫ້ການຕີຄວາມບໍ່ຖືກຕ້ອງຂອງຜົນກະທົບຂອງຢາ cardiac.ໃນທີ່ນີ້, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາແບບຈໍາລອງການວັດທະນະທໍາເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (CTCM) ທີ່ກະຕຸ້ນດ້ວຍເຄື່ອງກົນຈັກໄຟຟ້າແລະໄດ້ຮັບການຍືດຍາວທາງດ້ານການ Physiological ໃນໄລຍະ systolic ແລະ diastolic ຂອງວົງຈອນ cardiac.ຫຼັງຈາກ 12 ມື້ຂອງວັດທະນະທໍາ, ວິທີການນີ້ບາງສ່ວນປັບປຸງຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ, ແຕ່ບໍ່ໄດ້ຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເຂົາເຈົ້າ.ດັ່ງນັ້ນ, ຫຼັງຈາກການກວດສອບໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍ, ພວກເຮົາພົບວ່າການເພີ່ມ 100 nM triiodothyronine (T3) ແລະ 1 μM dexamethasone (Dex) ກັບຂະຫນາດກາງຂອງພວກເຮົາໄດ້ຮັກສາໂຄງສ້າງຈຸນລະພາກຂອງພາກສ່ວນສໍາລັບ 12 ມື້.ປະສົມປະສານກັບການປິ່ນປົວ T3 / Dex, ລະບົບ CTCM ຮັກສາຂໍ້ມູນການຖ່າຍທອດ, ຄວາມເປັນໄປໄດ້, ກິດຈະກໍາການເຜົາຜະຫລານອາຫານແລະຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງໃນລະດັບດຽວກັນກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດເປັນເວລາ 12 ມື້.ນອກຈາກນັ້ນ, ການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຫຼາຍເກີນໄປໃນວັດທະນະທໍາເຮັດໃຫ້ເກີດສັນຍານ cardiac hypertrophic, ສະຫນອງຫຼັກຖານສໍາລັບຄວາມສາມາດຂອງ CTCM ເພື່ອ mimic ສະພາບ hypertrophic induced ໂດຍ cardiac stretch.ສະຫລຸບລວມແລ້ວ, CTCM ສາມາດສ້າງແບບຈໍາລອງການ Physiology ແລະ pathophysiology ຂອງຫົວໃຈໃນວັດທະນະທໍາໃນໄລຍະເວລາດົນນານ, ເຮັດໃຫ້ການກວດສອບຢາເສບຕິດທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້.
ກ່ອນທີ່ຈະຄົ້ນຄ້ວາທາງດ້ານການຊ່ວຍ, ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນລະບົບ vitro ແມ່ນມີຄວາມຈໍາເປັນທີ່ສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງສະພາບແວດລ້ອມ physiological ຂອງຫົວໃຈຂອງມະນຸດ.ລະບົບດັ່ງກ່າວຄວນ mimic stretch ກົນຈັກທີ່ມີການປ່ຽນແປງ, ອັດຕາການເຕັ້ນຫົວໃຈ, ແລະຄຸນສົມບັດ electrophysiological.ແບບຈໍາລອງຂອງສັດແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປເປັນແພລະຕະຟອມກວດກາສໍາລັບ physiology cardiac ທີ່ມີຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຈໍາກັດໃນການສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນຜົນກະທົບຂອງຢາເສບຕິດໃນຫົວໃຈຂອງມະນຸດ1,2.ໃນທີ່ສຸດ, Ideal Cardiac Tissue Culture Experimental Model (CTCM) ແມ່ນຕົວແບບທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ ແລະສະເພາະສຳລັບການແຊກແຊງທາງດ້ານການປິ່ນປົວ ແລະຢາຕ່າງໆ, ຜະລິດພັນພືດຢ່າງຖືກຕ້ອງຕາມສະລິຍະວິທະຍາ ແລະພະຍາດທາງເດີນຂອງຫົວໃຈມະນຸດ3.ການຂາດລະບົບດັ່ງກ່າວຈໍາກັດການຄົ້ນພົບການປິ່ນປົວໃຫມ່ສໍາລັບຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງຫົວໃຈ 4,5 ແລະໄດ້ເຮັດໃຫ້ cardiotoxicity ຢາເສບຕິດເປັນເຫດຜົນສໍາຄັນສໍາລັບການອອກຈາກຕະຫຼາດ6.
ໃນໄລຍະທົດສະວັດທີ່ຜ່ານມາ, ແປດຢາທີ່ບໍ່ແມ່ນ cardiovascular ໄດ້ຖືກຖອນອອກຈາກການນໍາໃຊ້ທາງດ້ານການຊ່ວຍເນື່ອງຈາກວ່າພວກເຂົາເຈົ້າເຮັດໃຫ້ QT interval prolongation ນໍາໄປສູ່ການ arrhythmias ventricular ແລະການເສຍຊີວິດຢ່າງກະທັນຫັນ7.ດັ່ງນັ້ນ, ມີຄວາມຈໍາເປັນທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນສໍາລັບຍຸດທະສາດການກວດສອບ preclinical ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ເພື່ອປະເມີນປະສິດທິພາບ cardiovascular ແລະຄວາມເປັນພິດ.ການນໍາໃຊ້ຫຼ້າສຸດຂອງ cardiomyocytes stem cell-derived pluripotent ຂອງມະນຸດ - induced human-induced cardiomyocytes (hiPS-CM) ໃນການກວດຢາເສບຕິດແລະການທົດສອບຄວາມເປັນພິດແມ່ນສະຫນອງການແກ້ໄຂບາງສ່ວນຕໍ່ບັນຫານີ້.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ລັກສະນະທີ່ຍັງອ່ອນຂອງ hiPS-CMs ແລະການຂາດຄວາມສັບສົນຫຼາຍຈຸລັງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈແມ່ນຂໍ້ຈໍາກັດທີ່ສໍາຄັນຂອງວິທີການນີ້.ການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຂໍ້ຈໍາກັດນີ້ສາມາດແກ້ໄຂໄດ້ບາງສ່ວນໂດຍໃຊ້ hiPS-CM ໃນຕອນຕົ້ນເພື່ອສ້າງເປັນ hydrogels ຈຸລັງ cardiac ບໍ່ດົນຫຼັງຈາກການເລີ່ມຕົ້ນຂອງການຫົດຕົວ spontaneous ແລະຄ່ອຍໆເພີ່ມການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໃນໄລຍະເວລາ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, microtissues hiPS-CM ເຫຼົ່ານີ້ຂາດຄຸນສົມບັດ electrophysiological ແລະ contractile ຂອງ myocardium ຜູ້ໃຫຍ່.ນອກຈາກນັ້ນ, ເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຂອງມະນຸດມີໂຄງສ້າງທີ່ສັບສົນຫຼາຍ, ປະກອບດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງຈຸລັງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ລວມທັງຈຸລັງ endothelial, neurons, ແລະ fibroblasts stromal, ເຊິ່ງເຊື່ອມຕໍ່ກັນໂດຍຊຸດສະເພາະຂອງໂປຣຕີນ matrix extracellular.ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງປະຊາກອນທີ່ບໍ່ແມ່ນ cardiomyocyte 11,12,13 ໃນຫົວໃຈຂອງສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມຜູ້ໃຫຍ່ແມ່ນເປັນອຸປະສັກທີ່ສໍາຄັນຕໍ່ການສ້າງແບບຈໍາລອງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໂດຍໃຊ້ຈຸລັງແຕ່ລະປະເພດ.ຂໍ້ຈໍາກັດທີ່ສໍາຄັນເຫຼົ່ານີ້ເນັ້ນຫນັກເຖິງຄວາມສໍາຄັນຂອງການພັດທະນາວິທີການສໍາລັບການປູກຝັງເນື້ອເຍື່ອ myocardial intact ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທາງ physiological ແລະ pathological.
ພາກສ່ວນບາງໆ (300 µm) ທີ່ມີວັດທະນະທໍາຂອງຫົວໃຈຂອງມະນຸດໄດ້ພິສູດວ່າເປັນຕົວແບບທີ່ດີຂອງ myocardium ຂອງມະນຸດ intact.ວິທີການນີ້ສະຫນອງການເຂົ້າເຖິງລະບົບ multicellular 3D ທີ່ສົມບູນທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຂອງມະນຸດ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຈົນກ່ວາ 2019, ການນໍາໃຊ້ພາກສ່ວນຫົວໃຈວັດທະນະທໍາໄດ້ຖືກຈໍາກັດໂດຍການຢູ່ລອດຂອງວັດທະນະທໍາສັ້ນ (24 ຊົ່ວໂມງ).ນີ້ແມ່ນຍ້ອນປັດໃຈຈໍານວນຫນຶ່ງລວມທັງການຂາດການຍືດຍາວທາງດ້ານຮ່າງກາຍ, ການໂຕ້ຕອບຂອງແຫຼວທາງອາກາດ, ແລະການນໍາໃຊ້ສື່ທີ່ງ່າຍດາຍທີ່ບໍ່ສະຫນັບສະຫນູນຄວາມຕ້ອງການຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ.ໃນປີ 2019, ກຸ່ມຄົ້ນຄ້ວາຫຼາຍກຸ່ມໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການລວມເອົາປັດໃຈກົນຈັກເຂົ້າໃນລະບົບວັດທະນະທໍາເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສາມາດຍືດອາຍຸວັດທະນະທໍາ, ປັບປຸງການສະແດງອອກຂອງຫົວໃຈ, ແລະຈໍາລອງພະຍາດຫົວໃຈ.ສອງການສຶກສາທີ່ສະຫງ່າງາມ 17 ແລະ 18 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການໂຫຼດກົນຈັກ uniaxial ມີຜົນກະທົບທາງບວກຕໍ່ phenotype cardiac ໃນລະຫວ່າງວັດທະນະທໍາ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ໄດ້ນໍາໃຊ້ການໂຫຼດ physico-mechanical ສາມມິຕິລະດັບແບບເຄື່ອນໄຫວຂອງວົງຈອນ cardiac, ເນື່ອງຈາກວ່າພາກສ່ວນຫົວໃຈໄດ້ຖືກໂຫຼດດ້ວຍກໍາລັງແຮງ tensile isometric 17 ຫຼື linear auxotonic loading 18 .ວິທີການເຫຼົ່ານີ້ຂອງ stretching ເນື້ອເຍື່ອສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການສະກັດກັ້ນຫຼາຍຂອງ genes cardiac ຫຼື overexpression ຂອງ genes ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຕອບສະຫນອງ stretch ຜິດປົກກະຕິ.ໂດຍສະເພາະ, Pitoulis et al.19 ໄດ້ພັດທະນາຫ້ອງອາບນໍ້າວັດທະນະທໍາເຄື່ອງຕັດຫົວໃຈແບບເຄື່ອນໄຫວສໍາລັບການສ້າງຮອບວຽນຫົວໃຈຄືນໃໝ່ໂດຍໃຊ້ການສົ່ງຜົນຕອບແທນຂອງຕົວສົ່ງຜົນບັງຄັບໃຊ້ ແລະ ແຮງດັນ.ເຖິງແມ່ນວ່າລະບົບນີ້ອະນຸຍາດໃຫ້ສ້າງແບບຈໍາລອງວົງຈອນຫົວໃຈໃນ vitro ທີ່ຖືກຕ້ອງຫຼາຍຂຶ້ນ, ແຕ່ຄວາມຊັບຊ້ອນແລະການຫຼຸດລົງຂອງວິທີການຈໍາກັດການສະຫມັກຂອງລະບົບນີ້.ຫ້ອງທົດລອງຂອງພວກເຮົາບໍ່ດົນມານີ້ໄດ້ພັດທະນາລະບົບວັດທະນະທໍາທີ່ງ່າຍດາຍໂດຍໃຊ້ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າແລະສື່ທີ່ເຫມາະສົມເພື່ອຮັກສາຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນຂອງ porcine ແລະເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຂອງມະນຸດໄດ້ເຖິງ 6 ມື້ 20,21.
ໃນຫນັງສືໃບລານໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາອະທິບາຍແບບຈໍາລອງການວັດທະນະທໍາເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (CTCM) ໂດຍໃຊ້ພາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈ porcine ທີ່ລວມເອົາ cues humoral ເພື່ອ recapitulate physiology cardiac ສາມມິຕິລະດັບແລະການແຜ່ກະຈາຍ pathophysiological ໃນໄລຍະວົງຈອນ cardiac ໄດ້.CTCM ນີ້ສາມາດເພີ່ມຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການຄາດຄະເນຢາກ່ອນຄລີນິກໃນລະດັບທີ່ບໍ່ເຄີຍບັນລຸໄດ້ໂດຍການສະຫນອງລະບົບ cardiac ທີ່ມີຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນກາງ, ເຊິ່ງ mimics physiology / pathophysiology ຂອງຫົວໃຈ mammalian ສໍາລັບການທົດສອບຢາກ່ອນຄລີນິກ.
ສັນຍານກົນຈັກ hemodynamic ມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການຮັກສາການເຮັດວຽກຂອງ cardiomyocyte ໃນ vitro 22,23,24.ໃນຫນັງສືໃບລານໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາ CTCM (ຮູບ 1a) ທີ່ສາມາດ mimic ສະພາບແວດລ້ອມ cardiac ຂອງຜູ້ໃຫຍ່ໂດຍການກະຕຸ້ນທັງໄຟຟ້າແລະກົນຈັກໃນຄວາມຖີ່ physiological (1.2 Hz, 72 ເທື່ອຕໍ່ນາທີ).ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ stretch ເນື້ອເຍື່ອຫຼາຍເກີນໄປໃນລະຫວ່າງການ diastole, ອຸປະກອນການພິມ 3D ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເພີ່ມຂະຫນາດຂອງເນື້ອເຍື່ອ 25% (ຮູບ 1b).ຈັງຫວະໄຟຟ້າທີ່ກະຕຸ້ນໂດຍລະບົບ C-PACE ແມ່ນກໍານົດເວລາທີ່ຈະເລີ່ມຕົ້ນ 100 ms ກ່ອນ systole ໂດຍໃຊ້ລະບົບການໄດ້ຮັບຂໍ້ມູນເພື່ອຜະລິດຮອບວຽນຂອງຫົວໃຈຢ່າງສົມບູນ.ລະບົບການລ້ຽງເນື້ອເຍື່ອໃຊ້ເຄື່ອງກະຕຸ້ນ pneumatic ທີ່ມີໂຄງການ (LB Engineering, ເຢຍລະມັນ) ເພື່ອຂະຫຍາຍແຜ່ນຊິລິໂຄນທີ່ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນຮອບວຽນເພື່ອເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍຂອງແຜ່ນຫົວໃຈຢູ່ໃນຫ້ອງຊັ້ນເທິງ.ລະບົບໄດ້ຖືກເຊື່ອມຕໍ່ກັບສາຍອາກາດພາຍນອກໂດຍຜ່ານເຄື່ອງສົ່ງຄວາມກົດດັນ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມັນສາມາດປັບຄວາມກົດດັນໄດ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງ (± 1 mmHg) ແລະເວລາ (± 1 ms) (ຮູບ 1c).
a ແນບສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໃສ່ແຫວນຮອງ 7 ມມ, ສະແດງເປັນສີຟ້າ, ພາຍໃນຫ້ອງວັດທະນະທໍາຂອງອຸປະກອນ.ຫ້ອງການວັດທະນະທໍາແມ່ນແຍກອອກຈາກຫ້ອງອາກາດໂດຍເຍື່ອຊິລິໂຄນທີ່ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນບາງໆ.ວາງ gasket ລະຫວ່າງແຕ່ລະຫ້ອງເພື່ອປ້ອງກັນການຮົ່ວໄຫຼ.ຝາປິດຂອງອຸປະກອນປະກອບດ້ວຍ graphite electrodes ທີ່ສະຫນອງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ.b ການສະແດງໂຄງສ້າງຂອງອຸປະກອນເນື້ອເຍື່ອຂະຫນາດໃຫຍ່, ແຫວນຄູ່ມືແລະແຫວນສະຫນັບສະຫນູນ.ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອ (ສີນ້ຳຕານ) ຖືກວາງໃສ່ອຸປະກອນຂະໜາດໃຫຍ່ດ້ວຍແຫວນຄູ່ມືທີ່ວາງໄວ້ໃນຮ່ອງຢູ່ຂອບນອກຂອງອຸປະກອນ.ການນໍາໃຊ້ຄູ່ມື, ລະມັດລະວັງວາງແຫວນສະຫນັບສະຫນູນທີ່ເຄືອບດ້ວຍກາວ acrylic ເນື້ອເຍື່ອໃສ່ສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ.c ເສັ້ນສະແດງເວລາຂອງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າເປັນຫນ້າທີ່ຂອງຄວາມກົດດັນຫ້ອງອາກາດຄວບຄຸມໂດຍ actuator pneumatic programmable (PPD).ອຸປະກອນເກັບຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອ synchronize ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໂດຍໃຊ້ເຊັນເຊີຄວາມກົດດັນ.ເມື່ອຄວາມກົດດັນໃນຫ້ອງວັດທະນະທໍາຮອດເກນທີ່ກໍານົດໄວ້, ສັນຍານກໍາມະຈອນຖືກສົ່ງໄປຫາ C-PACE-EM ເພື່ອກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ.d ຮູບພາບຂອງສີ່ CTCMs ວາງຢູ່ເທິງຊັ້ນ incubator.ສີ່ອຸປະກອນແມ່ນເຊື່ອມຕໍ່ກັບຫນຶ່ງ PPD ຜ່ານວົງຈອນ pneumatic, ແລະເຊັນເຊີຄວາມກົດດັນໄດ້ຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນປ່ຽງ hemostatic ເພື່ອຕິດຕາມກວດກາຄວາມກົດດັນໃນວົງຈອນ pneumatic.ແຕ່ລະອຸປະກອນປະກອບດ້ວຍຫົກພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອ.
ການນໍາໃຊ້ຕົວກະຕຸ້ນ pneumatic ດຽວ, ພວກເຮົາສາມາດຄວບຄຸມ 4 ອຸປະກອນ CTCM, ເຊິ່ງແຕ່ລະຄົນສາມາດຖື 6 ສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອ (ຮູບ 1d).ໃນ CTCM, ຄວາມກົດດັນອາກາດຢູ່ໃນຫ້ອງອາກາດຖືກປ່ຽນເປັນຄວາມກົດດັນ synchronous ຢູ່ໃນຫ້ອງນ້ໍາແລະ induces physiological ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ slice ຫົວໃຈ (ຮູບ 2a ແລະຮູບເງົາເສີມ 1).ການປະເມີນຜົນຂອງເນື້ອເຍື່ອ stretch ຢູ່ 80 mm Hg.ສິນລະປະ.ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອ 25% (ຮູບ 2b).ການຍືດອັດຕາສ່ວນນີ້ໄດ້ຖືກສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າສອດຄ່ອງກັບຄວາມຍາວຂອງ sarcomere physiological ຂອງ 2.2-2.3 µm ສໍາລັບການ contractility ພາກສ່ວນ cardiac ປົກກະຕິ17,19,25.ການ​ເຄື່ອນ​ໄຫວ​ຂອງ​ເນື້ອ​ເຍື່ອ​ໄດ້​ຖືກ​ປະ​ເມີນ​ໂດຍ​ໃຊ້​ການ​ຕັ້ງ​ຄ່າ​ກ້ອງ​ຖ່າຍ​ຮູບ​ທີ່​ກໍາ​ນົດ​ເອງ (ຮູບ​ເພີ່ມ​ເຕີມ 1).ຄວາມກວ້າງຂວາງແລະຄວາມໄວຂອງການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອ (ຮູບ 2c, d) ກົງກັນກັບ stretch ໃນລະຫວ່າງວົງຈອນ cardiac ແລະເວລາໃນລະຫວ່າງ systole ແລະ diastole (ຮູບ 2b).ການຍືດແລະຄວາມໄວຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໃນລະຫວ່າງການຫົດຕົວແລະການຜ່ອນຄາຍຍັງຄົງຄົງທີ່ສໍາລັບ 12 ມື້ໃນວັດທະນະທໍາ (ຮູບ 2f).ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າຕໍ່ການເກີດການຫົດຕົວໃນລະຫວ່າງວັດທະນະທໍາ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາວິທີການກໍານົດຄວາມຜິດປົກກະຕິຢ່າງຫ້າວຫັນໂດຍໃຊ້ວິທີການສ້າງຮົ່ມ (ຕື່ມ Fig. 2a,b) ແລະສາມາດຈໍາແນກລະຫວ່າງຄວາມຜິດປົກກະຕິທີ່ມີແລະບໍ່ມີການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ.ສ່ວນດຽວກັນຂອງຫົວໃຈ (ຮູບ 2f).ໃນເຂດທີ່ສາມາດເຄື່ອນຍ້າຍໄດ້ຂອງການຕັດ (R6-9), ແຮງດັນໄຟຟ້າໃນລະຫວ່າງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າແມ່ນສູງກວ່າ 20% ໃນກໍລະນີທີ່ບໍ່ມີການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງການປະກອບສ່ວນຂອງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໃນການເຮັດວຽກຂອງສັນຍາ.
ຮ່ອງຮອຍທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງຄວາມກົດດັນຫ້ອງອາກາດ, ຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງນ້ໍາ, ແລະການວັດແທກການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອຢືນຢັນວ່າຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງການປ່ຽນແປງຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງນ້ໍາ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງເນື້ອເຍື່ອ.b ຮ່ອງຮອຍທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງສ່ວນຮ້ອຍ stretch (ສີຟ້າ) ຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ສອດຄ້ອງກັນກັບສ່ວນຮ້ອຍ stretch (ສີສົ້ມ).c ການ​ເຄື່ອນ​ໄຫວ​ທີ່​ວັດ​ແທກ​ໄດ້​ຂອງ​ການ​ເຄື່ອນ​ໄຫວ​ຂອງ​ແຜ່ນ cardiac ແມ່ນ​ສອດ​ຄ່ອງ​ກັບ​ຄວາມ​ໄວ​ການ​ວັດ​ແທກ​ຂອງ​ການ​ເຄື່ອນ​ໄຫວ​.(d) ເສັ້ນທາງທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງການເຄື່ອນໄຫວຮອບວຽນ (ເສັ້ນສີຟ້າ) ແລະຄວາມໄວ (ເສັ້ນຈຸດສີສົ້ມ) ໃນສ່ວນຂອງຫົວໃຈ.e ຈໍານວນເວລາຂອງວົງຈອນ (n = 19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ເວລາການຫົດຕົວ (n = 19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ), ເວລາພັກຜ່ອນ (n = 19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອ (n = 25).slices)/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), peak systolic velocity (n = 24(D0), 25(D12) slices/groups from different pigs) and peak relaxation rate (n=24(D0), 25(D12) slices/group from different pigs).ການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນສອງຫາງບໍ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນໃນພາລາມິເຕີໃດໆ.f ຕົວແທນການວິເຄາະ strain ຮ່ອງຮອຍຂອງພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີ (ສີແດງ) ແລະບໍ່ມີ (ສີຟ້າ) ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ, ສິບເຂດພາກພື້ນຂອງເນື້ອເຍື່ອຈາກພາກສ່ວນດຽວກັນ.ກະດານລຸ່ມສະແດງໃຫ້ເຫັນການກໍານົດປະລິມານຂອງຄວາມແຕກຕ່າງຂອງເປີເຊັນໃນສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີແລະບໍ່ມີການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໃນສິບພື້ນທີ່ຈາກພາກສ່ວນຕ່າງໆ. (n = 8 ຊິ້ນ/ກຸ່ມຈາກໝູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບນັກຮຽນສອງຫາງແມ່ນປະຕິບັດ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 ຊິ້ນ/ກຸ່ມຈາກໝູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບນັກຮຽນສອງຫາງແມ່ນປະຕິບັດ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01,**p<0,01,. (n = 8 ພາກ/ກຸ່ມຈາກໝູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ t-test ຂອງນັກຮຽນສອງຫາງ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05). （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05). (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 ພາກ/ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນສອງຫາງ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).ແຖບຄວາມຜິດພາດເປັນຕົວແທນຂອງຄ່າສະເລ່ຍ ± ມາດຕະຖານ deviation.
ໃນລະບົບການລ້ຽງແກະຫົວໃຈຊີວະພາບແບບຄົງທີ່ໃນເມື່ອກ່ອນຂອງພວກເຮົາ [20, 21], ພວກເຮົາຮັກສາຄວາມເປັນໄປໄດ້, ຫນ້າທີ່, ແລະຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງຕ່ອນຫົວໃຈເປັນເວລາ 6 ມື້ໂດຍການໃຊ້ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ ແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບອົງປະກອບຂະຫນາດກາງ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຫຼັງຈາກ 10 ມື້, ຕົວເລກເຫຼົ່ານີ້ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ພວກເຮົາຈະອ້າງເຖິງພາກສ່ວນທີ່ວັດທະນະທໍາຢູ່ໃນລະບົບວັດທະນະທໍາຊີວະພາບຄົງທີ່ທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ 20, 21 ເງື່ອນໄຂການຄວບຄຸມ (Ctrl) ແລະພວກເຮົາຈະນໍາໃຊ້ສື່ທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງພວກເຮົາເປັນເງື່ອນໄຂ MC ແລະວັດທະນະທໍາພາຍໃຕ້ການກະຕຸ້ນກົນຈັກແລະໄຟຟ້າພ້ອມໆກັນ (CTCM).ເອີ້ນວ່າ .ຫນ້າທໍາອິດ, ພວກເຮົາໄດ້ກໍານົດວ່າການກະຕຸ້ນດ້ວຍກົນຈັກໂດຍບໍ່ມີການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າແມ່ນບໍ່ພຽງພໍເພື່ອຮັກສາເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີຊີວິດຊີວາເປັນເວລາ 6 ມື້ (ຮູບພາບເສີມ 3a, b).ຫນ້າສົນໃຈ, ດ້ວຍການແນະນໍາທາງກາຍະພາບ - ກົນຈັກແລະການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໂດຍໃຊ້ STCM, ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ 12 ມື້ຍັງຄົງຄືກັນກັບຢູ່ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MS, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ Ctrl, ດັ່ງທີ່ສະແດງໂດຍການວິເຄາະ MTT (ຮູບ 1).3a).ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການກະຕຸ້ນກົນຈັກແລະການຈໍາລອງຂອງວົງຈອນ cardiac ສາມາດເຮັດໃຫ້ພາກສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອເຮັດວຽກໄດ້ສອງເທົ່າເທົ່າກັບການລາຍງານໃນລະບົບວັດທະນະທໍາຄົງທີ່ທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໂດຍ immunolabeling ຂອງ cardiac troponin T ແລະ connexin 43 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການສະແດງອອກຂອງ connexin 43 ແມ່ນສູງກວ່າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນເນື້ອເຍື່ອ MC ໃນມື້ 12 ກ່ວາການຄວບຄຸມໃນມື້ດຽວກັນ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ເອກະພາບ connexin 43 expression ແລະການສ້າງຕັ້ງ Z-disc ບໍ່ໄດ້ຖືກຮັກສາຢ່າງເຕັມສ່ວນ (ຮູບ 3b).ພວກເຮົາໃຊ້ໂຄງຮ່າງການປັນຍາປະດິດ (AI) ເພື່ອປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອ 26, ທໍ່ການຮຽນຮູ້ເລິກທີ່ອີງໃສ່ຮູບພາບໂດຍອີງໃສ່ troponin-T ແລະ connexin staining43 ເພື່ອປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງ ແລະ fluorescence ຂອງຕ່ອນຫົວໃຈໃນແງ່ຂອງຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງທ້ອງຖິ່ນ.ວິທີການນີ້ໃຊ້ Convolutional Neural Network (CNN) ແລະກອບການຮຽນຮູ້ທີ່ເລິກເຊິ່ງເພື່ອປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໃນແບບອັດຕະໂນມັດແລະບໍ່ລໍາອຽງ, ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນເອກະສານອ້າງອີງ.26. ເນື້ອເຍື່ອ MC ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມຄ້າຍຄືກັນຂອງໂຄງສ້າງທີ່ດີຂຶ້ນກັບມື້ 0 ເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຄວບຄຸມສະຖິດ.ນອກຈາກນັ້ນ, ການ staining trichrome ຂອງ Masson ໄດ້ເປີດເຜີຍອັດຕາສ່ວນຕ່ໍາຂອງ fibrosis ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MS ເມື່ອທຽບກັບເງື່ອນໄຂການຄວບຄຸມໃນວັນທີ 12 ຂອງວັດທະນະທໍາ (ຮູບ 3c).ໃນຂະນະທີ່ CTCM ໄດ້ເພີ່ມຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໃນມື້ 12 ໃນລະດັບທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດ, ມັນບໍ່ໄດ້ປັບປຸງຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ.
ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງປະລິມານຂອງ MTT ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງຕ່ອນຫົວໃຈສົດ (D0) ຫຼືວັດທະນະທໍາ slices ຫົວໃຈສໍາລັບ 12 ມື້ບໍ່ວ່າຈະຢູ່ໃນວັດທະນະທໍາຄົງທີ່ (D12 Ctrl) ຫຼືໃນ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) slices/groups / 10VA # ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ NO ການທົດສອບ. ເປັນ D0 ແລະ **p < 0.01 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D12 Ctrl). ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງປະລິມານຂອງ MTT ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງເມັດຫົວໃຈສົດ (D0) ຫຼືວັດທະນະທໍາຕ່ອນຫົວໃຈເປັນເວລາ 12 ມື້ບໍ່ວ່າຈະຢູ່ໃນວັດທະນະທໍາຄົງທີ່ (D12 Ctrl) ຫຼືໃນ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) slices/group #0 NO #0, 10VA # ການທົດສອບຂອງຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ **p < 0.01 ທຽບກັບ D12 Ctrl).histogram ສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານຂອງຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ MTT (D0) ຫຼືວັດທະນະທໍາຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈສໍາລັບ 12 ມື້ໃນວັດທະນະທໍາສະຖິດ (D12 ການຄວບຄຸມ) ຫຼື CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ການຄວບຄຸມ). ) ), 12 (D12 MC) ຫມູ / ກຸ່ມ, ການທົດສອບຫນຶ່ງແມ່ນແຕກຕ່າງກັນ.####p < 0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 ປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ **p < 0.01 ທຽບກັບ D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切版焈切(D0)天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 #0.00比,**p < 0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脪切牸睐匇的10) ) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)histogram ສະແດງໃຫ້ເຫັນການກໍານົດປະລິມານຂອງຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ MTT ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) ຫຼືພາກສ່ວນຫົວໃຈ cultured ສໍາລັບ 12 ມື້ໃນວັດທະນະທໍາ static (D12 ການຄວບຄຸມ) ຫຼື CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control)) , 12 (D12-MC) ພາກ/ກຸ່ມຈາກການທົດສອບ ANOVA ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຫນຶ່ງຫມູ.####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0, **p < 0.01 ທຽບກັບ D12 Ctrl).b Troponin-T (ສີຂຽວ), connexin 43 (ສີແດງ) ແລະ DAPI (ສີຟ້າ) ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ໂດດດ່ຽວສົດໆ (D0) ຫຼືພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ປູກພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂສະຖິດ (Ctrl) ຫຼື CTCM (MC) ສໍາລັບ 12 ມື້) ຂອງຮູບພາບ immunofluorescence ຕົວແທນ (ຂະຫນາດເປົ່າ = 100 µm). ການວິເຄາະທາງປັນຍາທຽມຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC)) ຕ່ອນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບດຽວແມ່ນດໍາເນີນ; ####p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ ****p < 0.01201 ທຽບກັບ D0.0001). ການວັດແທກຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈທຽມ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC)) ຕ່ອນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບດຽວແມ່ນດໍາເນີນ; ####p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ ****p < Ctrl 0.001). Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0) , Ctrl 2 / MC Ctrl 2 руга 7 (D0)), пп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < 0,0001 понерние). ປະລິມານຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໂດຍປັນຍາປະດິດ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບວິທີດຽວ; ####p < 0.0001 ທຽບກັບ D0 ແລະ ****p < Ctrl 1 ທຽບກັບ 0.000).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slices/group ແຕ່ລະຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, one-way ANOVA test;####0D支 <10 * 王00 <0. .0001 与D12 Ctrl 相比).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slices/group ແຕ່ລະຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, one-way ANOVA test;###0D 0*0*縸p0*0*縸p0*0*0 .0001 与D12 Ctrl 相比). Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 Ctrl (D) 10), группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 ທຽບກັບ D0 Для сравнения ****p < 0,0001 по весрния 2. ປັນຍາທຽມເພື່ອປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC)) ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມຂອງແຕ່ລະຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບວິທີດຽວ; ####p<0.0001 vs .D0 ສໍາລັບການປຽບທຽບ D***p Ctrl 10 ທຽບກັບ 0. c ຮູບພາບຕົວແທນ (ຊ້າຍ) ແລະປະລິມານ (ຂວາ) ສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ມີຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (Scale bare = 500 µm) (n = 10 slices/group ແຕ່ລະຄົນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງທາງແມ່ນປະຕິບັດ; ####p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0. c ຮູບພາບຕົວແທນ (ຊ້າຍ) ແລະປະລິມານ (ຂວາ) ສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ມີຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (Scale bare = 500 µm) (n = 10 slices/group ແຕ່ລະຄົນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງວິທີແມ່ນປະຕິບັດ; #### p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0. ແລະ D0. c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашеннырох три а (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонттй, выполняется односторонттй, 01 се односторонтей, 01 се односторонтй, 01 се односторонтй, 01000 нению с D0 ແລະ ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ຮູບພາບຕົວແທນ (ຊ້າຍ) ແລະປະລິມານ (ຂວາ) ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (ຂະຫນາດທີ່ບໍ່ເຄືອບ = 500 µm) (n = 10 ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ທາງດຽວປະຕິບັດ; #### p < 0 .0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0. ແລະ Ctrl 2). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度= 500 µ爇代表性图像）来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比). C用 masson 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度裸尺度尸尺裸 5 m³ （n=10个切片组每组来自不同猪，进行单向单向 Anova 测试；，#### p< 0.0001.***与<0.0001.*** D12 Ctrl 相比). c Репрезентативные изображения (слева) и количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенныроро т на (чистая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощонгонгрисонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгонгононгонгонгоностаристая чистая шкала ализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ຮູບພາບຕົວແທນ (ຊ້າຍ) ແລະປະລິມານ (ຂວາ) ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (ເປົ່າ = 500 µm) (n = 10 ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມ, ແຕ່ລະຄົນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ທົດສອບໂດຍການວິເຄາະທາງດຽວຂອງຄວາມແຕກຕ່າງກັນ ;### # p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0.ແຖບຄວາມຜິດພາດເປັນຕົວແທນຂອງຄ່າສະເລ່ຍ ± ມາດຕະຖານ deviation.
ພວກເຮົາສົມມຸດຕິຖານວ່າໂດຍການເພີ່ມໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍໃສ່ອຸປະກອນວັດທະນະທໍາ, ຄວາມສົມບູນຂອງ cardiomyocyte ສາມາດໄດ້ຮັບການປັບປຸງແລະການພັດທະນາ fibrosis ຫຼຸດລົງໃນລະຫວ່າງວັດທະນະທໍາ CTCM.ດັ່ງນັ້ນພວກເຮົາຈຶ່ງໄດ້ກວດກາເບິ່ງໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍໂດຍນໍາໃຊ້ວັດທະນະທໍາການຄວບຄຸມ static ຂອງພວກເຮົາ 20,21 ເນື່ອງຈາກຈໍານວນຂະຫນາດນ້ອຍຂອງປັດໃຈ confounding.Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), ແລະ SB431542 (SB) ຖືກເລືອກສໍາລັບຫນ້າຈໍນີ້.ໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນເມື່ອກ່ອນໃນວັດທະນະທໍາ hiPSC-CM ເພື່ອກະຕຸ້ນການເຕີບໃຫຍ່ຂອງ cardiomyocytes ໂດຍການເພີ່ມຄວາມຍາວຂອງ sarcomere, T-tubules, ແລະຄວາມໄວ conduction.ນອກຈາກນັ້ນ, ທັງ Dex (a glucocorticoid) ແລະ SB ແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ຈັກເພື່ອສະກັດກັ້ນການອັກເສບ29,30.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບວ່າການລວມເອົາໂມເລກຸນນ້ອຍໆອັນໃດອັນໜຶ່ງມາລວມເຂົ້າກັນ ຈະຊ່ວຍປັບປຸງຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ.ສໍາລັບການກວດສອບເບື້ອງຕົ້ນ, ປະລິມານຂອງແຕ່ລະສານປະສົມໄດ້ຖືກເລືອກໂດຍອີງໃສ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປໃນແບບຈໍາລອງການລ້ຽງເຊນ (1 μM Dex27, 100 nM T327, ແລະ 2.5 μM SB31).ຫຼັງຈາກ 12 ມື້ຂອງວັດທະນະທໍາ, ການປະສົມປະສານຂອງ T3 ແລະ Dex ສົ່ງຜົນໃຫ້ຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງ cardiomyocyte ທີ່ດີທີ່ສຸດແລະການແກ້ໄຂເສັ້ນໄຍຫນ້ອຍທີ່ສຸດ (ຕົວເລກເສີມ 4 ແລະ 5).ນອກຈາກນັ້ນ, ການນໍາໃຊ້ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນເຫຼົ່ານີ້ສອງເທົ່າຫຼືສອງເທົ່າຂອງ T3 ແລະ Dex ເຮັດໃຫ້ເກີດຜົນລົບເມື່ອປຽບທຽບກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນປົກກະຕິ (ຕື່ມ Fig. 6a,b).
ຫຼັງຈາກການກວດສອບເບື້ອງຕົ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ປະຕິບັດການປຽບທຽບຫົວຕໍ່ຫົວຂອງ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (ຮູບ 4a): Ctrl: ພາກສ່ວນຫົວໃຈວັດທະນະທໍາໃນວັດທະນະທໍາສະຖິດທີ່ໄດ້ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາໂດຍໃຊ້ສື່ທີ່ເຫມາະສົມຂອງພວກເຮົາ;20.21 TD: T3 ແລະ Ctrl s ເພີ່ມ Dex ໃນວັນພຸດ;MC: ພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ສ້າງຂຶ້ນໃນ CTCM ໂດຍໃຊ້ສື່ທີ່ເໝາະສົມກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາ;ແລະ MT: CTCM ກັບ T3 ແລະ Dex ເພີ່ມໃສ່ຂະຫນາດກາງ.ຫຼັງຈາກການປູກຝັງ 12 ມື້, ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງເນື້ອເຍື່ອ MS ແລະ MT ຍັງຄົງຄືກັນກັບໃນເນື້ອເຍື່ອສົດທີ່ຖືກປະເມີນໂດຍ MTT assay (ຮູບ 4b).ຫນ້າສົນໃຈ, ການເພີ່ມ T3 ແລະ Dex ກັບ transwell cultures (TD) ບໍ່ໄດ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການປັບປຸງທີ່ສໍາຄັນເມື່ອທຽບກັບເງື່ອນໄຂ Ctrl, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງບົດບາດສໍາຄັນຂອງການກະຕຸ້ນກົນຈັກໃນການຮັກສາຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ.
ແຜນວາດການອອກແບບແບບທົດລອງທີ່ພັນລະນາເຖິງສີ່ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທີ່ໃຊ້ໃນການປະເມີນຜົນກະທົບຂອງການກະຕຸ້ນກົນຈັກແລະການເສີມ T3/Dex ໃນຂະຫນາດກາງສໍາລັບ 12 ມື້. b ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງປະລິມານຂອງຄວາມເປັນໄປໄດ້ 12 ມື້ຫຼັງວັດທະນະທໍາໃນທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (Ctrl, TD, MC, ແລະ MT) ປຽບທຽບກັບ slices ຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ແລະ D12 MT), 12 (D12 MC) slices/one #0#p A pigs/oneways. 01, ###p < 0.001 ປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ **p < 0.01 ທຽບກັບ D12 Ctrl). b ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງປະລິມານຂອງຄວາມເປັນໄປໄດ້ 12 ມື້ຫຼັງວັດທະນະທໍາໃນທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (Ctrl, TD, MC, ແລະ MT) ປຽບທຽບກັບ slices ຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ແລະ D12 MT), 12 (D12 MC) slices/one #0#p A pigs/oneways. 01, ###p < 0.001 ປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ **p < 0.01 ທຽບກັບ D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивирования во всех 4 условиях культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), 12 (D12 MC) срезов/группу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001, ###p < 0,001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). b ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານການມີຊີວິດຢູ່ທີ່ 12 ມື້ຫຼັງວັດທະນະທໍາໃນທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (ການຄວບຄຸມ, TD, MC, ແລະ MT) ເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ແລະ D12 MT), 12 (D12 MC ຂຶ້ນຈາກພາກສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ # A, # A, # 10) 0001, ###p < 0.001 ທຽບກັບ D0 ແລະ **p < 0.01 ໂດຍປຽບທຽບກັບ D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0))、15 (D12 ， CT 2 匒 15)同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001，###p < 0.001 与D0 相毸，.*1*2。）b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению (дравнению со свижием) 8 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; ###0#0понет, ###0#0перест, ###0#0,0. нию с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b Histogram ສະແດງເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທັງຫມົດ 4 (ການຄວບຄຸມ, TD, MC ແລະ MT) ປຽບທຽບກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ແລະ D12 MT), ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ 12 (D12 MC) ພາກ/ກຸ່ມ, ການທົດສອບ ANOVA ເສັ້ນທາງດຽວ; #0.#0##. **p<0.01 ທຽບກັບການຄວບຄຸມ D12). c Bar graph ສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານຂອງ glucose flux 12 ມື້ຫຼັງວັດທະນະທໍາໃນທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (Ctrl, TD, MC, ແລະ MT) ເມື່ອທຽບກັບ slices ຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 6 slices/groups ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງວິທີແມ່ນປະຕິບັດ; ###p <0.001, ເມື່ອທຽບກັບ D0 ແລະ Ctrl. *p 10). c Bar graph ສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານຂອງ glucose flux 12 ມື້ຫຼັງວັດທະນະທໍາໃນທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (Ctrl, TD, MC, ແລະ MT) ເມື່ອທຽບກັບ slices ຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 6 slices/groups ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງວິທີແມ່ນປະຕິບັດ; ###p <0.001, ເມື່ອທຽບກັບ D0 ແລະ Ctrl. *p 10). c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования восле культивиховавсья в 4 ания (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разноный с виноный с виноный разнойх , сразный с виноный разнойх , контроль. ся тест ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0 ແລະ ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Histogram ສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານຂອງ glucose flux 12 ມື້ຫຼັງການລ້ຽງສັດພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທັງຫມົດ 4 (ການຄວບຄຸມ, TD, MC ແລະ MT) ເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 6 ພາກ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງວິທີປະຕິບັດ ; ###p < 0.001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0.***p1). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比，培养倏的12央顇= 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比，***p < 0.001 与D12曯 ） C条形图显示所有 4种条件（ctrl、td、mc和 mt）新鲜心脏切片切片切片，君吸天的通量定量（n=6片/组，来自猪，，，，，，，，，，猪猪单向执行ANOVA 测踯 ， 0*** # 猪猪单向执行ANOVA 测踯00*** #10*000*000*000*000*00000 .001 与D12 Ctrl 相比). c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивиляния ирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от равсиныхнорезов/группа, от равсиных проведены тесты ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль). c Histogram ສະແດງໃຫ້ເຫັນປະລິມານຂອງ glucose flux ໃນເວລາ 12 ມື້ຫຼັງຈາກວັດທະນະທໍາສໍາລັບທຸກ 4 ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ (ການຄວບຄຸມ, TD, MC, ແລະ MT) ເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) (n = 6 ພາກສ່ວນ / ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ unilateral Were ANOVA, ###p < 0.0012c ທຽບກັບ D).d ຕາຕະລາງການວິເຄາະສາຍພັນຂອງເນື້ອເຍື່ອສົດ (ສີຟ້າ), ວັນທີ 12 MC (ສີຂຽວ), ແລະມື້ 12 MT (ສີແດງ) ຢູ່ໃນສິບຈຸດສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຂອງພາກພື້ນ (n = 4 slices/group, one-way ANOVA test; ບໍ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງກຸ່ມ).e Volcano plot ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງຂອງ genes ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (D0) ເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈວັດທະນະທໍາພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂສະຖິດ (Ctrl) ຫຼືພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT (MT) ສໍາລັບ 10-12 ມື້.f ແຜນທີ່ຄວາມຮ້ອນຂອງ sarcomere genes ສໍາລັບພາກສ່ວນຫົວໃຈວັດທະນະທໍາພາຍໃຕ້ແຕ່ລະເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາ.ແຖບຄວາມຜິດພາດເປັນຕົວແທນຂອງຄ່າສະເລ່ຍ ± ມາດຕະຖານ deviation.
ການເພິ່ງພາອາໄສການເຜົາຜະຫລານການເຜົາຜະຫລານການປ່ຽນຈາກການຜຸພັງຂອງອາຊິດໄຂມັນໄປສູ່ glycolysis ແມ່ນຈຸດເດັ່ນຂອງ dedifferentiation cardiomyocyte.cardiomyocytes ອ່ອນເພຍຕົ້ນຕໍແມ່ນໃຊ້ glucose ສໍາລັບການຜະລິດ ATP ແລະມີ mitochondria hypoplastic ທີ່ມີ cristae 5,32 ຫນ້ອຍ.ການວິເຄາະການນໍາໃຊ້ glucose ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MC ແລະ MT, ການໃຊ້ glucose ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບເນື້ອເຍື່ອໃນມື້ 0 (ຮູບ 4c).ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຕົວຢ່າງ Ctrl ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການເພີ່ມຂື້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນການນໍາໃຊ້ glucose ເມື່ອທຽບກັບເນື້ອເຍື່ອສົດ.ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການປະສົມປະສານຂອງ CTCM ແລະ T3 / Dex ເສີມຂະຫຍາຍການມີຊີວິດຂອງເນື້ອເຍື່ອແລະຮັກສາ phenotype metabolic ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈວັດທະນະທໍາ 12 ມື້.ນອກຈາກນັ້ນ, ການວິເຄາະຄວາມເມື່ອຍລ້າໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າລະດັບຄວາມເມື່ອຍລ້າຍັງຄົງຄືກັນກັບຢູ່ໃນເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດສໍາລັບ 12 ມື້ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT ແລະ MS (ຮູບ 4d).
ເພື່ອວິເຄາະຜົນກະທົບໂດຍລວມຂອງ CTCM ແລະ T3/Dex ໃນພູມສັນຖານ transcriptional ທົ່ວໂລກຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ, ພວກເຮົາໄດ້ປະຕິບັດ RNAseq ໃນແຜ່ນ cardiac ຈາກທັງຫມົດສີ່ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (ຂໍ້ມູນເສີມ 1).ຫນ້າສົນໃຈ, ພາກສ່ວນ MT ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມຄ້າຍຄືກັນສູງ transcriptional ກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດ, ມີພຽງແຕ່ 16 ຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສະແດງອອກອອກຈາກ 13,642 genes.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ດັ່ງທີ່ພວກເຮົາໄດ້ສະແດງກ່ອນຫນ້ານີ້, ແຜ່ນ Ctrl ສະແດງໃຫ້ເຫັນ 1229 genes ສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼັງຈາກ 10-12 ມື້ໃນວັດທະນະທໍາ (ຮູບ 4e).ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຮັບການຢືນຢັນໂດຍ qRT-PCR ຂອງຫົວໃຈແລະ genes fibroblast (ຕື່ມ Fig. 7a-c).ຫນ້າສົນໃຈ, ພາກສ່ວນ Ctrl ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຫຼຸດລົງຂອງ genes ວົງຈອນ cardiac ແລະ cell ແລະການກະຕຸ້ນຂອງ gene program ອັກເສບ.ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ dedifferentiation, ເຊິ່ງປົກກະຕິເກີດຂຶ້ນຫຼັງຈາກການປູກຝັງໃນໄລຍະຍາວ, ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງຢ່າງສົມບູນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT (ຕື່ມ Fig. 8a,b).ການສຶກສາຢ່າງລະມັດລະວັງກ່ຽວກັບພັນທຸກໍາຂອງ sarcomere ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT ເທົ່ານັ້ນແມ່ນພັນທຸກໍາທີ່ເຂົ້າລະຫັດ sarcomere (ຮູບ 4f) ແລະຊ່ອງທາງ ion (ຮູບພາບເສີມ 9) ຖືກຮັກສາໄວ້, ປົກປ້ອງພວກເຂົາຈາກການສະກັດກັ້ນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ Ctrl, TD, ແລະ MC.ຂໍ້​ມູນ​ເຫຼົ່າ​ນີ້​ສະ​ແດງ​ໃຫ້​ເຫັນ​ວ່າ​ດ້ວຍ​ການ​ປະ​ສົມ​ປະ​ສານ​ຂອງ​ການ​ກະ​ຕຸ້ນ​ກົນ​ຈັກ​ແລະ humoral (T3/Dex), transcriptome ແຜ່ນ​ຫົວ​ໃຈ​ສາ​ມາດ​ຄົງ​ທີ່​ຄ້າຍ​ຄື​ກັບ​ຕ່ອນ​ຫົວ​ໃຈ​ສົດ​ຫຼັງ​ຈາກ 12 ມື້​ໃນ​ວັດ​ທະ​ນະ​ທໍາ​.
ການຄົ້ນພົບ transcriptional ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຮັບການສະຫນັບສະຫນູນໂດຍຄວາມຈິງທີ່ວ່າຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງ cardiomyocytes ໃນສ່ວນຂອງຫົວໃຈແມ່ນຖືກຮັກສາໄວ້ທີ່ດີທີ່ສຸດພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT ສໍາລັບ 12 ມື້, ດັ່ງທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນໂດຍ connexin intact ແລະທ້ອງຖິ່ນ 43 (ຮູບ 5a).ນອກຈາກນັ້ນ, fibrosis ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເມື່ອທຽບກັບ Ctrl ແລະຄ້າຍຄືກັນກັບພາກສ່ວນຫົວໃຈສົດ (ຮູບ 5b).ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການປະສົມປະສານຂອງການກະຕຸ້ນກົນຈັກແລະການປິ່ນປົວ T3 / Dex ຮັກສາໂຄງສ້າງຂອງຫົວໃຈໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈໃນວັດທະນະທໍາ.
ຮູບພາບ immunofluorescence ຕົວແທນຂອງ troponin-T (ສີຂຽວ), connexin 43 (ສີແດງ), ແລະ DAPI (ສີຟ້າ) ໃນພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ໂດດດ່ຽວສົດໆ (D0) ຫຼືປູກຝັງເປັນເວລາ 12 ມື້ໃນທຸກສີ່ເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາພາກສ່ວນຫົວໃຈ (ແຖບຂະຫນາດ = 100 µm).). ປະລິມານປັນຍາທຽມຂອງຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (n = 7 (D0 ແລະ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ແລະ D12 MT) ຕ່ອນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບດຽວແມ່ນປະຕິບັດ; ####p < 0.0001 < ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0.020*0. Ctrl). ປະລິມານປັນຍາທຽມຂອງຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈ (n = 7 (D0 ແລະ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ແລະ D12 MT) ຕ່ອນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບວິທີດຽວແມ່ນປະຕິບັດ; #### p < 0.0001 < ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0.020*0. Ctrl). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта D 1 2 MC (n 2) Ctrl 5 D 1 MC (n 2 CT Ctrl 5 и 1 TD 5) и D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнинию , 0***0p*0*0*0p*0*0*0 по сравнению с D12 Ctrl). ປະລິມານຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໂດຍໃຊ້ປັນຍາປະດິດ (n = 7 (D0 ແລະ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ແລະ D12 MT) ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ ANOVA ແບບດຽວປະຕິບັດ; #### p < 0.0001 ເມື່ອປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ Ctrl. 0.*0.*0.对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和D12 MT）切片/组鿡化进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比).对不同猪的心脏结构完整性（n = 7（d0 和 d12 ctrl）（5（d12 td、d12 mc 和 d12 mt）巙人脖巽）对不同猪的心脏。行单向单向单向测试； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与 Ctrl 2 ）ປະລິມານຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໂດຍໃຊ້ປັນຍາປະດິດໃນຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (n = 7 (D0 ແລະ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ແລະ D12 MT) ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມ) ດ້ວຍການທົດສອບ ANOVA ຫນຶ່ງທາງ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p < 0.0001 ປຽບທຽບກັບ D0 ແລະ *p < 0.05 ຫຼື ****p < 0.0001 ທຽບກັບ D12 Ctrl). b ຮູບພາບຕົວແທນແລະປະລິມານສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ມີຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (ແຖບຂະຫນາດ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ແລະ D12 MC), 9 (D12 MT) slices/groups from different pigs, one-way tested #0#00#NOVA; p < 0.001, ຫຼື ****p < 0.0001 ທຽບກັບ D12 Ctrl). b ຮູບພາບຕົວແທນແລະປະລິມານສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ມີຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (ແຖບຂະຫນາດ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ແລະ D12 MC), 9 (D12 MT) slices/groups from different pigs, one-way tested #0#00#NOVA; p < 0.001, ຫຼື ****p < 0.0001 ທຽບກັບ D12 Ctrl). b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным блсаси инейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, вы#нолнятся A 0,0001 по сравнению с D0 ແລະ ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ຮູບພາບທີ່ເປັນຕົວແທນແລະປະລິມານຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍຮອຍເປື້ອນ trichrome ຂອງ Masson (ແຖບຂະຫນາດ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ແລະ D12 MC), 9 (D12 MT) ພາກສ່ວນ/ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ປະຕິບັດຫນຶ່ງທາງ ##00# ANOp ແລະ 1-0. .001 ຫຼື ****p < 0.0001 ທຽບກັບ D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm，n = 10(D0, 1 MC 2, 12)自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 与D0 相渔 <済.0*0.0*1. Ctrl 相比). b用 masson 三色染料的心脏切片的代表性和量化（比例尺尺尺 = 500 µm） (d 1 1 0 µm) (d 1 1 0 µm) .和 d12 mc ) 来自不同的 9个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 爇片 切片 切片 切片 切片 切片切片切片切片切片切片切片/组，进行单因素方差分析；####p< 0.0001*戯 0.***0.*0.*0.*0.*0. 001 与D12 Ctrl 相比). b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных = трихромом Мася0наш (Мася0наш) км) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA; ####0соса разных 0 0,001 ຫຼື ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ຕົວແທນຮູບພາບແລະປະລິມານຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ trichrome ຂອງ Masson (ແຖບຂະຫນາດ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ແລະ D12 MC), 9 (D12 MT) ພາກສ່ວນຈາກຫມູ / ກຸ່ມທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ວິທີການ ANOVA ຫນຶ່ງ * ປຽບທຽບກັບ <10.00. ***p < 0.0001 ທຽບກັບ D12 Ctrl).ແຖບຄວາມຜິດພາດເປັນຕົວແທນຂອງຄ່າສະເລ່ຍ ± ມາດຕະຖານ deviation.
ສຸດທ້າຍ, ຄວາມສາມາດຂອງ CTCM ເພື່ອ mimic hypertrophy cardiac ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍການຂະຫຍາຍເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈເພີ່ມຂຶ້ນ.ໃນ CTCM, ຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງອາກາດສູງສຸດເພີ່ມຂຶ້ນຈາກ 80 mmHg ຫາ 80 mmHg.ສິນລະປະ.(ປົກກະຕິ stretch) ເຖິງ 140 mmHg Art.(ຮູບ 6a).ນີ້ເທົ່າກັບການເພີ່ມຂຶ້ນ 32% ໃນ stretch (ຮູບ 6b), ເຊິ່ງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນກ່ອນຫນ້ານີ້ເປັນ stretch ເປີເຊັນທີ່ສອດຄ້ອງກັນທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບພາກສ່ວນຫົວໃຈເພື່ອບັນລຸຄວາມຍາວ sarcomere ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ເຫັນໃນ hypertrophy.ການຍືດແລະຄວາມໄວຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈໃນລະຫວ່າງການຫົດຕົວແລະການຜ່ອນຄາຍຍັງຄົງຄົງທີ່ໃນລະຫວ່າງຫົກມື້ຂອງວັດທະນະທໍາ (ຮູບ 6c).ເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຈາກເງື່ອນໄຂ MT ໄດ້ຮັບການຍືດຍາວ (MT (Normal)) ຫຼືເງື່ອນໄຂ overstretch (MT (OS)) ເປັນເວລາຫົກມື້.ແລ້ວຫຼັງຈາກສີ່ມື້ໃນວັດທະນະທໍາ, hypertrophic biomarker NT-ProBNP ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຂະຫນາດກາງພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT (OS) ເມື່ອທຽບກັບເງື່ອນໄຂ MT (ປົກກະຕິ) (ຮູບ 7a).ນອກຈາກນັ້ນ, ຫຼັງຈາກຫົກມື້ຂອງການປູກຝັງ, ຂະຫນາດຂອງເຊນໃນ MT (OS) (ຮູບ 7b) ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເມື່ອທຽບກັບພາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈ MT (ປົກກະຕິ).ນອກຈາກນັ້ນ, ການຍົກຍ້າຍນິວເຄລຍ NFATC4 ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນເນື້ອເຍື່ອທີ່ຍືດເກີນ (ຮູບ 7c).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການພັດທະນາຄວາມກ້າວຫນ້າຂອງການປັບປຸງທາງ pathological ຫຼັງຈາກ hyperdistension ແລະສະຫນັບສະຫນູນແນວຄວາມຄິດທີ່ອຸປະກອນ CTCM ສາມາດນໍາໃຊ້ເປັນເວທີເພື່ອສຶກສາສັນຍານ hypertrophy cardiac stretched.
ຮ່ອງຮອຍທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງຄວາມກົດດັນຫ້ອງອາກາດ, ຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງນ້ໍາ, ແລະການວັດແທກການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອຢືນຢັນວ່າຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງການປ່ຽນແປງຄວາມກົດດັນຂອງຫ້ອງນ້ໍາ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງເນື້ອເຍື່ອ.b ອັດຕາສ່ວນ stretch ຕົວແທນແລະເສັ້ນໂຄ້ງອັດຕາ stretched ສໍາລັບປົກກະຕິ stretched (ສີສົ້ມ) ແລະ overstretched (ສີຟ້າ) ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອ.c ເສັ້ນສະແດງແຖບສະແດງເວລາຮອບວຽນ (n = 19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ເວລາການຫົດຕົວ (n = 18-19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ເວລາພັກຜ່ອນ (n = 19 slices ຕໍ່ກຸ່ມ, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ)), ຄວາມກວ້າງຂອງການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອ (n = 14 slices/group, ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), peak4 slices / peaksystolic peaks ອັດຕາການຜ່ອນຄາຍ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ພາກສ່ວນ / ກຸ່ມ) ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ), ການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນສອງຫາງບໍ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນໃນພາລາມິເຕີໃດໆ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຕົວກໍານົດການເຫຼົ່ານີ້ຄົງທີ່ໃນໄລຍະ 6 ມື້ຂອງວັດທະນະທໍາທີ່ມີ overvoltage.ແຖບຄວາມຜິດພາດເປັນຕົວແທນຂອງຄ່າສະເລ່ຍ ± ມາດຕະຖານ deviation.
a bar graph quantification of NT-ProBNP concentration in culture media from heart slices cultured under MT normal stretch (Norm) or overstretching (OS) condition (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, and D4 MTOS)) slices/group from different pigs, two-way ANOVA. a bar graph quantification of NT-ProBNP concentration in culture media from heart slices cultured under MT normal stretch (Norm) or overstretching (OS) conditions (n ​​= 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, and D4 MTOS) slices/group from different pigs, two-way is 2.0.0.ຮິສໂຕແກຣມປະລິມານຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ NT-ProBNP ໃນຕົວກາງວັດທະນະທໍາຈາກຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ລ້ຽງພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງ MT stretch (norm) ປົກກະຕິຫຼື overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ແລະ D4).MTOS) ຕ່ອນ / ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການວິເຄາະສອງປັດໃຈແມ່ນປະຕິບັດ; ຄວາມແຕກຕ່າງກັນ.**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 ເມື່ອ​ທຽບ​ໃສ່​ການ​ຍືດ​ຕົວ​ປົກ​ກະ​ຕິ​)​. a 在MT 正常拉伸(ມາດຕະຖານ) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的匡 (2nm) 、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；。**与正常拉伛。**与正常拉伛. ປະລິມານຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ NT-ProBNP ໃນຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ປູກພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ MT normal stretch (Norm) ຫຼື overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS)) ຈາກຄວາມແຕກຕ່າງ 猪的切片/疄幑可; ເມື່ອປຽບທຽບກັບການຍືດຕົວແບບປົກກະຕິ, p <0.01).histogram ປະລິມານຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ NT-ProBNP ໃນ slices ຫົວໃຈ cultured ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງປົກກະຕິ MT stretch (norm) ຫຼື overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ແລະ D4 MTOS) slices / ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການວິເຄາະສອງທາງຂອງ variance;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 ເມື່ອ​ທຽບ​ໃສ່​ການ​ຍືດ​ຕົວ​ປົກ​ກະ​ຕິ​)​. b ຮູບພາບຕົວແທນສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ troponin-T ແລະ WGA (ຊ້າຍ) ແລະການວັດແທກຂະຫນາດຂອງເຊນ (ຂວາ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ຈຸລັງ / ກຸ່ມຈາກ 10 ຊິ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ t-test ນັກຮຽນສອງຫາງແມ່ນປະຕິບັດ <10. * ປົກກະຕິ 10. b ຮູບພາບຕົວແທນສໍາລັບຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ troponin-T ແລະ WGA (ຊ້າຍ) ແລະການວັດແທກຂະຫນາດຂອງເຊນ (ຂວາ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ຈຸລັງ / ກຸ່ມຈາກ 10 ຊິ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບ t-tailed Student ທີ່ມີສອງຫາງແມ່ນປະຕິບັດ <10. **** ປົກກະຕິ; b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗ П (слемао) и количесятрадеплестве клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиовохней, рятретва-t ий Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ຮູບພາບຕົວແທນຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ troponin-T ແລະ AZP (ຊ້າຍ) ແລະການວັດແທກຂະຫນາດຂອງເຊນ (ຂວາ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ຈຸລັງ/ກຸ່ມຈາກ 10 ພາກສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ການທົດສອບສອງຫາງຂອງນັກຮຽນທຽບກັບ t-0***1; 1 ປົກກະຕິ. b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性图像（n = 330） 0 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t 检验；与正常拉伸相比，.**0. b ຕົວແທນຮູບພາບຂອງຕ່ອນຫົວໃຈທີ່ມີ calcarein-T ແລະ WGA (ຊ້າຍ) ແລະຂະຫນາດຂອງເຊນ (ຂວາ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ຈາກ 10 slices ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (D6 MTNorm)) Cells/组，两方法有～ 330 (D6 MTOS), 369 ຈາກ 10 slices ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (D6 MTNorm)) Cells/组，两方法有２有尾学生t ການທົດສອບໂດຍປົກກະຕິ.0*** b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗ П (слева) и количлеср венкест ве (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/групкипа, двуськини двуськини *двуськини 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ຮູບພາບຕົວແທນຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ troponin-T ແລະ AZP (ຊ້າຍ) ແລະປະລິມານຂອງຂະຫນາດຈຸລັງ (ຂວາ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ຈາກ 10 ພາກສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ) ຈຸລັງ/ກຸ່ມ, ເງື່ອນໄຂສອງຫາງຂອງນັກຮຽນ;****p <0.0001 ເມື່ອ​ທຽບ​ໃສ່​ກັບ​ສາຍ​ພັນ​ປົກ​ກະ​ຕິ​)​. c ຕົວແທນຮູບພາບສໍາລັບມື້ 0 ແລະມື້ 6 MTOS slices ຫົວໃຈ immunolabeled ສໍາລັບ troponin-T ແລະ NFATC4 ແລະປະລິມານການຍົກຍ້າຍຂອງ NFATC4 ກັບ nuclei ຂອງ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slices/group ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, two-tailed test is performed Student. 0. c ຮູບພາບຕົວແທນສໍາລັບມື້ 0 ແລະມື້ 6 MTOS slices ຫົວໃຈ immunolabeled ສໍາລັບ troponin-T ແລະ NFATC4 ແລະປະລິມານການຍົກຍ້າຍຂອງ NFATC4 ກັບ nuclei ຂອງ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slices/group from different pigs , two-tailed). c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Тли NFATC4. транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , выреполня ий Стьюдента; *p < 0,05). c ຮູບພາບຕົວແທນສໍາລັບພາກສ່ວນຫົວໃຈຢູ່ທີ່ 0 ແລະ 6 ມື້ MTOS, immunolabeled ສໍາລັບ troponin-T ແລະ NFATC4, ແລະການກໍານົດປະລິມານຂອງ NFATC4 translocation ໃນ nucleus ຂອງຈຸລັງ cavernous (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slices / ກຸ່ມຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ) ດໍາເນີນການທົດສອບສອງຫາງ.*p < 0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切的片的代表性囸像，代表性囸像，易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p < 0.05). c ຮູບພາບຕົວແທນຂອງ calcanin-T ແລະ NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS ແຜ່ນຫົວໃຈ, ແລະ NFATC4 ຈາກ NFATC4 ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ 易位至CM cell nucleus的quantity 化 (n = 4 (D0), 珰匄珶郄珶 弗 MT)尾学生et 电影；*p < 0.05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для иммуномаркировки тропонином-Т и NFATCоt4 ранслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий t-критерий). c ຕົວແທນຮູບພາບຂອງ slices ຫົວໃຈ MTOS ໃນມື້ 0 ແລະ 6 ສໍາລັບ troponin-T ແລະ NFATC4 immunolabeling ແລະປະລິມານຂອງ NFATC4 translocation ໃນ nucleus ຂອງ CM ຈາກຫມູທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slices/group, two-tailed t-s. 0.5; Student < t -criterion).ແຖບຂໍ້ຜິດພາດສະແດງເຖິງຄ່າມາດຕະຖານ ± ຄວາມບ່ຽງເບນມາດຕະຖານ.
ການຄົ້ນຄວ້າລະບົບ cardiovascular ການແປພາສາຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຕົວແບບ cellular ທີ່ຜະລິດສະພາບແວດລ້ອມ cardiac ຢ່າງຖືກຕ້ອງ.ໃນການສຶກສານີ້, ອຸປະກອນ CTCM ໄດ້ຖືກພັດທະນາແລະມີລັກສະນະທີ່ສາມາດກະຕຸ້ນພາກສ່ວນ ultrathin ຂອງຫົວໃຈ.ລະບົບ CTCM ປະກອບມີການກະຕຸ້ນກົນຈັກໄຟຟ້າທີ່ synchronized physiologically ແລະການເພີ່ມນ້ໍາ T3 ແລະ Dex.ໃນເວລາທີ່ພາກສ່ວນຫົວໃຈ porcine ໄດ້ຖືກສໍາຜັດກັບປັດໃຈເຫຼົ່ານີ້, ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງພວກມັນ, ຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງ, ກິດຈະກໍາການເຜົາຜະຫລານ, ແລະການສະແດງອອກຂອງ transcriptional ຍັງຄົງຄືກັນກັບຢູ່ໃນເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດຫຼັງຈາກວັດທະນະທໍາ 12 ມື້.ນອກຈາກນັ້ນ, ການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຫຼາຍເກີນໄປສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດ hypertrophy ຂອງຫົວໃຈທີ່ເກີດຈາກ hyperextension.ໂດຍລວມແລ້ວ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ສະຫນັບສະຫນູນບົດບາດສໍາຄັນຂອງເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທາງດ້ານ physiological ໃນການຮັກສາ phenotype cardiac ປົກກະຕິແລະເປັນເວທີສໍາລັບການກວດສອບຢາເສບຕິດ.
ປັດໃຈຈໍານວນຫຼາຍປະກອບສ່ວນໃນການສ້າງສະພາບແວດລ້ອມທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການເຮັດວຽກແລະການຢູ່ລອດຂອງ cardiomyocytes.ປັດໄຈທີ່ຊັດເຈນທີ່ສຸດຂອງເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບ (1) ປະຕິສໍາພັນລະຫວ່າງຈຸລັງ, (2) ການກະຕຸ້ນດ້ວຍກົນຈັກໄຟຟ້າ, (3) ປັດໃຈ humoral, ແລະ (4) ທາດຍ່ອຍອາຫານ.ປະຕິສໍາພັນທາງກາຍະພາບຂອງເຊນກັບເຊລຕ້ອງການເຄືອຂ່າຍສາມມິຕິທີ່ຊັບຊ້ອນຂອງຫຼາຍປະເພດເຊລທີ່ຮອງຮັບໂດຍເມທຣິກນອກເຊລ.ປະຕິສໍາພັນຂອງຈຸລັງທີ່ຊັບຊ້ອນດັ່ງກ່າວແມ່ນຍາກທີ່ຈະສ້າງຄືນໃຫມ່ໃນ vitro ໂດຍວັດທະນະທໍາຮ່ວມກັນຂອງແຕ່ລະປະເພດຈຸລັງ, ແຕ່ສາມາດບັນລຸໄດ້ງ່າຍໂດຍໃຊ້ລັກສະນະ organotypic ຂອງພາກສ່ວນຫົວໃຈ.
ການຍືດຕົວກົນຈັກແລະການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າຂອງ cardiomyocytes ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການຮັກສາ phenotype 33,34,35 ຂອງຫົວໃຈ.ໃນຂະນະທີ່ການກະຕຸ້ນກົນຈັກໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບການປັບສະພາບ hiPSC-CM ແລະການເຕີບໃຫຍ່, ການສຶກສາທີ່ສະຫງ່າງາມຫຼາຍບໍ່ດົນມານີ້ໄດ້ພະຍາຍາມກະຕຸ້ນກົນຈັກຂອງຕ່ອນຫົວໃຈໃນວັດທະນະທໍາໂດຍໃຊ້ການໂຫຼດ uniaxial.ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການໂຫຼດກົນຈັກ uniaxial 2D ມີຜົນກະທົບທາງບວກຕໍ່ phenotype ຂອງຫົວໃຈໃນລະຫວ່າງວັດທະນະທໍາ.ໃນການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້, ພາກສ່ວນຕ່າງໆຂອງຫົວໃຈໄດ້ຖືກບັນຈຸດ້ວຍ isometric tensile force17, linear auxotonic loading18, ຫຼືວົງຈອນ cardiac ໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນໃຫມ່ໂດຍໃຊ້ແຮງດັນ transducer ແລະແຮງດັນ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ວິທີການເຫຼົ່ານີ້ໃຊ້ stretch ເນື້ອເຍື່ອ uniaxial ໂດຍບໍ່ມີການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງສິ່ງແວດລ້ອມ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການສະກັດກັ້ນການເກີດຂອງຫົວໃຈຫຼາຍຫຼືການສະແດງອອກຂອງ genes ຫຼາຍເກີນໄປທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຕອບສະຫນອງ stretch ຜິດປົກກະຕິ.CTCM ທີ່ອະທິບາຍຢູ່ທີ່ນີ້ສະຫນອງການກະຕຸ້ນດ້ວຍກົນຈັກໄຟຟ້າ 3D ທີ່ mimics ວົງຈອນ cardiac ທໍາມະຊາດໃນເງື່ອນໄຂຂອງວົງຈອນເວລາແລະການຍືດຍາວທາງກາຍະພາບ (25% stretch, 40% systole, 60% diastole, ແລະ 72 ເທື່ອຕໍ່ນາທີ).ເຖິງແມ່ນວ່າການກະຕຸ້ນກົນຈັກສາມມິຕິນີ້ຢ່າງດຽວບໍ່ພຽງພໍທີ່ຈະຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງເນື້ອເຍື່ອ, ການປະສົມປະສານຂອງການກະຕຸ້ນຂອງ humoral ແລະກົນຈັກໂດຍໃຊ້ T3 / Dex ແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອຮັກສາຄວາມມີຊີວິດ, ຫນ້າທີ່ແລະຄວາມສົມບູນຂອງເນື້ອເຍື່ອ.
ປັດ​ໄຈ humoral ມີ​ບົດ​ບາດ​ສໍາ​ຄັນ​ໃນ​ການ modulating phenotype ຫົວ​ໃຈ​ຂອງ​ຜູ້​ໃຫຍ່​.ນີ້ໄດ້ຖືກເນັ້ນໃສ່ໃນການສຶກສາ HiPS-CM ເຊິ່ງ T3 ແລະ Dex ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນສື່ວັດທະນະທໍາເພື່ອເລັ່ງການເຕີບໃຫຍ່ຂອງເຊນ.T3 ອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຂົນສົ່ງອາຊິດ amino, ນໍ້າຕານແລະທາດການຊຽມໃນທົ່ວເຍື່ອເຊນ36.ນອກຈາກນັ້ນ, T3 ສົ່ງເສີມການສະແດງອອກຂອງ MHC-αແລະ MHC-β downregulation, ສົ່ງເສີມການສ້າງຕັ້ງຂອງ myofibrils twitch ໄວໃນ cardiomyocytes ແກ່ເມື່ອທຽບໃສ່ກັບ myofibrils twitch ຊ້າໃນ CM fetal.ການຂາດ T3 ໃນຄົນເຈັບ hypothyroid ສົ່ງຜົນໃຫ້ການສູນເສຍຂອງ myofibrillar bands ແລະອັດຕາການພັດທະນາຂອງໂຕນຫຼຸດລົງ37.Dex ປະຕິບັດກ່ຽວກັບ receptors glucocorticoid ແລະໄດ້ຮັບການສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການເພີ່ມສັນຍາ myocardial ໃນຫົວໃຈ perfused ໂດດດ່ຽວ;38 ການປັບປຸງນີ້ຖືກຄິດວ່າຈະກ່ຽວຂ້ອງກັບຜົນກະທົບຂອງການປ້ອນເຂົ້າດ້ວຍທາດການຊຽມ (SOCE) 39,40.ນອກຈາກນັ້ນ, Dex ຜູກມັດກັບ receptors ຂອງມັນ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການຕອບສະຫນອງ intracellular ຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສະກັດກັ້ນການເຮັດວຽກຂອງພູມຕ້ານທານແລະການອັກເສບ30.
ຜົນໄດ້ຮັບຂອງພວກເຮົາຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການກະຕຸ້ນກົນຈັກທາງດ້ານຮ່າງກາຍ (MS) ປັບປຸງການປະຕິບັດວັດທະນະທໍາໂດຍລວມເມື່ອທຽບກັບ Ctrl, ແຕ່ບໍ່ສາມາດຮັກສາຄວາມເປັນໄປໄດ້, ຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງ, ແລະການສະແດງອອກຂອງຫົວໃຈໃນໄລຍະ 12 ມື້ໃນວັດທະນະທໍາ.ເມື່ອປຽບທຽບກັບ Ctrl, ການເພີ່ມ T3 ແລະ Dex ກັບ CTCM (MT) ວັດທະນະທໍາປັບປຸງຄວາມເປັນໄປໄດ້ແລະຮັກສາໂປຣໄຟລ໌ການຖອດຂໍ້ຄວາມທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ຄວາມສົມບູນຂອງໂຄງສ້າງ, ແລະກິດຈະກໍາ metabolic ກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈສົດສໍາລັບ 12 ມື້.ນອກຈາກນັ້ນ, ໂດຍການຄວບຄຸມລະດັບການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອ, ຮູບແບບ hyperextension-induced cardiac hypertrophy ໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນໂດຍໃຊ້ STCM, ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມຄ່ອງແຄ້ວຂອງລະບົບ STCM.ມັນຄວນຈະສັງເກດເຫັນວ່າເຖິງແມ່ນວ່າການແກ້ໄຂ cardiac ແລະ fibrosis ມັກຈະກ່ຽວຂ້ອງກັບອະໄວຍະວະທີ່ intact ເຊິ່ງຈຸລັງທີ່ໄຫຼວຽນສາມາດສະຫນອງ cytokines ທີ່ເຫມາະສົມເຊັ່ນດຽວກັນກັບ phagocytosis ແລະປັດໃຈການປັບປຸງອື່ນໆ, ພາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈຍັງສາມາດ mimic ຂະບວນການ fibrotic ໃນການຕອບສະຫນອງຕໍ່ຄວາມກົດດັນແລະການບາດເຈັບ.ເຂົ້າໄປໃນ myofibroblasts.ນີ້ໄດ້ຖືກປະເມີນກ່ອນຫນ້ານີ້ໃນແບບຈໍາລອງຂອງເຄື່ອງຕັດຫົວໃຈນີ້.ຄວນສັງເກດວ່າຕົວກໍານົດການ CTCM ສາມາດຖືກດັດແປງໂດຍການປ່ຽນແປງຄວາມກົດດັນ / ຄວາມກວ້າງຂອງໄຟຟ້າແລະຄວາມຖີ່ເພື່ອຈໍາລອງເງື່ອນໄຂຫຼາຍຢ່າງເຊັ່ນ: tachycardia, bradycardia, ແລະການສະຫນັບສະຫນູນການໄຫຼວຽນຂອງກົນຈັກ (ຫົວໃຈ unloaded ກົນຈັກ).ນີ້ເຮັດໃຫ້ລະບົບດັ່ງກ່າວເປັນຊ່ອງທາງກາງສໍາລັບການທົດສອບຢາ.ຄວາມສາມາດຂອງ CTCM ໃນການສ້າງແບບຈໍາລອງການເກີດ hypertrophy cardiac overexertion ໄດ້ເປີດທາງໃນການທົດສອບລະບົບນີ້ສໍາລັບການປິ່ນປົວສ່ວນບຸກຄົນ.ສະຫລຸບລວມແລ້ວ, ການສຶກສາໃນປະຈຸບັນສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຍືດເຍື້ອກົນຈັກແລະການກະຕຸ້ນອາລົມແມ່ນສໍາຄັນຕໍ່ການຮັກສາວັດທະນະທໍາຂອງຈຸລັງຂອງຫົວໃຈ.
ເຖິງແມ່ນວ່າຂໍ້ມູນທີ່ນໍາສະເຫນີຢູ່ທີ່ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ CTCM ເປັນແພລະຕະຟອມທີ່ໂດດເດັ່ນສໍາລັບການສ້າງແບບຈໍາລອງ myocardium intact, ວິທີການວັດທະນະທໍານີ້ມີຂໍ້ຈໍາກັດບາງຢ່າງ.ຂໍ້ ຈຳ ກັດຕົ້ນຕໍຂອງວັດທະນະ ທຳ CTCM ແມ່ນວ່າມັນມີຄວາມກົດດັນທາງກົນຈັກແບບເຄື່ອນໄຫວຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງຕໍ່ແຜ່ນ, ເຊິ່ງກີດຂວາງຄວາມສາມາດໃນການຕິດຕາມການຫົດຕົວຂອງແຜ່ນ cardiac ໃນແຕ່ລະຮອບ.ນອກຈາກນັ້ນ, ເນື່ອງຈາກຂະຫນາດນ້ອຍຂອງພາກສ່ວນ cardiac (7 ມມ), ຄວາມສາມາດໃນການປະເມີນການເຮັດວຽກຂອງ systolic ພາຍນອກລະບົບວັດທະນະທໍາໂດຍໃຊ້ເຊັນເຊີຜົນບັງຄັບໃຊ້ແບບດັ້ງເດີມແມ່ນຈໍາກັດ.ໃນຫນັງສືໃບລານໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາບາງສ່ວນໄດ້ເອົາຊະນະຂໍ້ຈໍາກັດນີ້ໂດຍການປະເມີນແຮງດັນ optical ເປັນຕົວຊີ້ວັດຂອງຫນ້າທີ່ contractile.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຂໍ້ຈໍາກັດນີ້ຈະຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການເຮັດວຽກຕື່ມອີກແລະອາດຈະໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂໃນອະນາຄົດໂດຍການແນະນໍາວິທີການກວດສອບທາງ optical ຂອງການເຮັດວຽກຂອງ slices ຫົວໃຈໃນວັດທະນະທໍາ, ເຊັ່ນ: ແຜນທີ່ optical ໂດຍໃຊ້ທາດການຊຽມແລະສີຍ້ອມສີທີ່ລະອຽດອ່ອນແຮງດັນ.ຂໍ້ຈໍາກັດອີກອັນຫນຶ່ງຂອງ CTCM ແມ່ນວ່າຮູບແບບການເຮັດວຽກບໍ່ໄດ້ຈັດການຄວາມກົດດັນທາງຊີວະວິທະຍາ (preload ແລະ afterload).ໃນ CTCM, ຄວາມກົດດັນໄດ້ຖືກ induced ໃນທິດທາງກົງກັນຂ້າມກັບການແຜ່ພັນ 25% physiological stretch ໃນ diastole ( stretch ເຕັມ) ແລະ systole (ຄວາມຍາວຂອງການຫົດຕົວໃນລະຫວ່າງການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ) ໃນແພຈຸລັງຂະຫນາດໃຫຍ່ຫຼາຍ.ຂໍ້ຈໍາກັດນີ້ຄວນຈະຖືກໂຍກຍ້າຍອອກໃນການອອກແບບ CTCM ໃນອະນາຄົດໂດຍຄວາມກົດດັນທີ່ພຽງພໍກ່ຽວກັບເນື້ອເຍື່ອຫົວໃຈຈາກທັງສອງດ້ານແລະໂດຍການນໍາໃຊ້ຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຂອງຄວາມກົດດັນທີ່ແນ່ນອນທີ່ເກີດຂຶ້ນຢູ່ໃນຫ້ອງຂອງຫົວໃຈ.
ການປ່ຽນແປງທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດການຍືດຍາວທີ່ລາຍງານຢູ່ໃນຫນັງສືໃບລານນີ້ແມ່ນຈໍາກັດພຽງແຕ່ການຈໍາແນກສັນຍານ hypertrophic hyperstretch.ດັ່ງນັ້ນ, ຮູບແບບນີ້ສາມາດຊ່ວຍໃນການສຶກສາຂອງສັນຍານ hypertrophic stretch-induced ໂດຍບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີປັດໄຈ humoral ຫຼື neural (ທີ່ບໍ່ມີຢູ່ໃນລະບົບນີ້).ການສຶກສາເພີ່ມເຕີມແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອເພີ່ມຄວາມຫຼາກຫຼາຍຂອງ CTCM, ສໍາລັບການຍົກຕົວຢ່າງ, ການປູກຝັງຮ່ວມກັນກັບຈຸລັງພູມຕ້ານທານ, ການໄຫຼວຽນຂອງປັດໃຈ humoral plasma, ແລະ innervation ເມື່ອການປູກຝັງຮ່ວມກັນກັບຈຸລັງ neuronal ຈະຊ່ວຍປັບປຸງຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການສ້າງແບບຈໍາລອງພະຍາດກັບ CTCM.
ຫມູສິບສາມໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້.ຂັ້ນຕອນການລ້ຽງສັດທັງຫມົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍສອດຄ່ອງກັບຄໍາແນະນໍາຂອງສະຖາບັນແລະໄດ້ຮັບການອະນຸມັດໂດຍຄະນະກໍາມະການດູແລແລະນໍາໃຊ້ສັດຂອງມະຫາວິທະຍາໄລ Louisville.aortic arched ແລະຫົວໃຈໄດ້ຖືກ perfused ກັບ 1 L ຂອງ cardioplegia sterile (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH ເຖິງ 7.4); ຫົວໃຈໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນການແກ້ໄຂ cardioplegic ເຢັນຈົນກ່ວາການຂົນສົ່ງໄປຫ້ອງທົດລອງດ້ວຍກ້ອນເຊິ່ງປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນ <10 ນາທີ. ຫົວໃຈໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນການແກ້ໄຂ cardioplegic ເຢັນຈົນກ່ວາການຂົນສົ່ງໄປຫ້ອງທົດລອງດ້ວຍກ້ອນເຊິ່ງປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນ <10 ນາທີ. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обаты ຫົວໃຈຖືກເກັບໄວ້ໃນການແກ້ໄຂ cardioplegic ເຢັນຈົນກ່ວາການຂົນສົ່ງໄປຫ້ອງທົດລອງດ້ວຍກ້ອນ, ເຊິ່ງປົກກະຕິແລ້ວໃຊ້ເວລາ <10 ນາທີ.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟. Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. ຮັກສາຫົວໃຈໃສ່ cardioplegia ກ້ອນຈົນກ່ວາການຂົນສົ່ງໄປຫ້ອງທົດລອງດ້ວຍກ້ອນ, ປົກກະຕິແລ້ວ <10 ນາທີ.
ອຸປະກອນ CTCM ໄດ້ຖືກພັດທະນາໃນຊອບແວ SolidWorks computer-aided design (CAD).ຫ້ອງການວັດທະນະທໍາ, ການແບ່ງປັນແລະຫ້ອງອາກາດແມ່ນເຮັດດ້ວຍພາດສະຕິກ acrylic ທີ່ຊັດເຈນ CNC.ວົງແຫວນດ້ານຫຼັງເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 7 ມມ ແມ່ນເຮັດດ້ວຍໂພລີເອທີລີນຄວາມໜາແໜ້ນສູງ (HDPE) ຢູ່ໃຈກາງ ແລະ ມີຮ່ອງໂອລິງເພື່ອຮອງຮັບໂອແຫວນຊິລິໂຄນທີ່ໃຊ້ໃນການປະທັບຕາສື່ທີ່ຢູ່ຂ້າງລຸ່ມ.ເຍື່ອຊິລິກາບາງໆແຍກຫ້ອງວັດທະນະທໍາອອກຈາກແຜ່ນແຍກ.ເຍື່ອຊິລິໂຄນຖືກຕັດດ້ວຍເລເຊີຈາກແຜ່ນຊິລິໂຄນຫນາ 0.02″ ແລະມີຄວາມແຂງຂອງ 35A.ແຜ່ນຊິລິໂຄນດ້ານລຸ່ມແລະດ້ານເທິງແມ່ນຕັດດ້ວຍເລເຊີຈາກແຜ່ນຊິລິໂຄນຫນາ 1/16″ ແລະມີຄວາມແຂງຂອງ 50A.screws ສະແຕນເລດ 316L ແລະແກ່ນປີກແມ່ນໃຊ້ສໍາລັບການ fastening ຕັນແລະການສ້າງປະທັບຕາ airtight.
ແຜ່ນວົງຈອນພິມທີ່ອຸທິດຕົນ (PCB) ຖືກອອກແບບມາເພື່ອປະສົມປະສານກັບລະບົບ C-PACE-EM.ເຕົ້າຮັບຕົວເຊື່ອມຕໍ່ເຄື່ອງສະວິດເຊີແລນໃນ PCB ແມ່ນເຊື່ອມຕໍ່ກັບ electrodes graphite ໂດຍສາຍທອງແດງສີເງິນ plated ແລະ bronze screws 0-60 screwed ເຂົ້າໄປໃນ electrodes ໄດ້.ແຜ່ນວົງຈອນພິມຖືກວາງໄວ້ໃນຝາປິດຂອງເຄື່ອງພິມ 3 ມິຕິ.
ອຸປະກອນ CTCM ຖືກຄວບຄຸມໂດຍເຄື່ອງກະຕຸ້ນ pneumatic programmable (PPD) ທີ່ສ້າງຄວາມກົດດັນການໄຫຼວຽນຂອງການຄວບຄຸມທີ່ຄ້າຍຄືກັບວົງຈອນຂອງຫົວໃຈ.ເມື່ອຄວາມກົດດັນພາຍໃນຫ້ອງອາກາດເພີ່ມຂຶ້ນ, ເຍື່ອຊິລິໂຄນທີ່ຍືດຫຍຸ່ນໄດ້ຂະຫຍາຍຂຶ້ນ, ບັງຄັບໃຫ້ຂະຫນາດກາງພາຍໃຕ້ເນື້ອເຍື່ອ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພື້ນທີ່ຂອງເນື້ອເຍື່ອຈະໄດ້ຮັບການ stretched ໂດຍ expulsion ຂອງນ້ໍານີ້, mimicking ການຂະຫຍາຍ physiological ຂອງຫົວໃຈໃນໄລຍະ diastole.ໃນຈຸດສູງສຸດຂອງການຜ່ອນຄາຍ, ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍຜ່ານ electrodes graphite, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ຄວາມກົດດັນໃນຫ້ອງອາກາດຫຼຸດລົງແລະເຮັດໃຫ້ເກີດການຫົດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອ.ພາຍໃນທໍ່ແມ່ນປ່ຽງ hemostatic ທີ່ມີເຊັນເຊີຄວາມກົດດັນເພື່ອກວດພົບຄວາມກົດດັນໃນລະບົບທາງອາກາດ.ຄວາມກົດດັນທີ່ຮັບຮູ້ໂດຍເຊັນເຊີຄວາມກົດດັນແມ່ນໃຊ້ກັບຕົວເກັບຂໍ້ມູນທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັບຄອມພິວເຕີ້.ນີ້ອະນຸຍາດໃຫ້ຕິດຕາມກວດກາຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງຂອງຄວາມກົດດັນພາຍໃນຫ້ອງອາຍແກັສ.ເມື່ອຄວາມດັນຂອງຫ້ອງສູງສຸດໄດ້ບັນລຸ (ມາດຕະຖານ 80 mmHg, 140 mmHg OS), ອຸປະກອນການເກັບຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກສັ່ງໃຫ້ສົ່ງສັນຍານໄປຍັງລະບົບ C-PACE-EM ເພື່ອສ້າງສັນຍານແຮງດັນ biphasic ສໍາລັບ 2 ms, ກໍານົດເປັນ 4 V.
ພາກສ່ວນຫົວໃຈໄດ້ຮັບແລະເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາໃນ 6 ຂຸມໄດ້ຖືກປະຕິບັດດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ໂອນຫົວໃຈທີ່ເກັບກ່ຽວຈາກເຮືອໂອນໄປຫາຖາດທີ່ບັນຈຸຄວາມເຢັນ (4 ° C.) cardioplegia.ທໍ່ ventricle ຊ້າຍໄດ້ຖືກແຍກອອກດ້ວຍແຜ່ນໃບເປັນຫມັນແລະຕັດເປັນຕ່ອນ 1-2 cm3.ກ້ອນເນື້ອເຍື່ອເຫຼົ່ານີ້ຖືກຕິດຢູ່ກັບແຜ່ນຮອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີກາວຂອງເນື້ອເຍື່ອແລະວາງໄວ້ໃນຫ້ອງອາບນ້ໍາ microtome ທີ່ມີການສັ່ນສະເທືອນທີ່ມີການແກ້ໄຂຂອງ Tyrode ແລະມີອົກຊີເຈນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g). ), 6 mM KCl (0.447 g.MES), 10.6 mM (0.447 g.), 10 mM. 38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M solution), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M solution), ເຖິງ 1 L ddH2O).ໄມໂຄໂທມທີ່ສັ່ນສະເທືອນໄດ້ຖືກກໍານົດໃຫ້ຕັດຕ່ອນຫນາ 300 µm ໃນຄວາມຖີ່ຂອງ 80 Hz, ຄວາມກວ້າງຂອງ vibration ຕາມລວງນອນຂອງ 2 ມມ, ແລະອັດຕາລ່ວງຫນ້າຂອງ 0.03 ມມ / s.ອ່າງອາບນ້ຳຖືກອ້ອມຮອບດ້ວຍນ້ຳກ້ອນເພື່ອຮັກສາຄວາມເຢັນ ແລະ ຮັກສາອຸນຫະພູມຢູ່ທີ່ 4 ອົງສາເຊ.ໂອນພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຈາກອາບນ້ໍາ microtome ໄປອາບນ້ໍາ incubation ທີ່ປະກອບດ້ວຍການແກ້ໄຂ Tyrode ທີ່ມີອົກຊີຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງໃນກ້ອນຈົນກ່ວາພາກສ່ວນພຽງພໍໄດ້ຮັບສໍາລັບແຜ່ນວັດທະນະທໍາຫນຶ່ງ.ສໍາລັບວັດທະນະທໍາ transwell, ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໄດ້ຖືກຕິດຢູ່ເປັນຫມັນ polyurethane ກວ້າງ 6 ມມສະຫນັບສະຫນູນແລະວາງໄວ້ໃນ 6 ml ຂອງຂະຫນາດກາງ optimized (199 ຂະຫນາດກາງ, 1x ອາຫານເສີມ ITS, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline ແລະ 2X ຢາຕ້ານເຊື້ອ - ຢາຕ້ານເຊື້ອ).ການກະຕຸ້ນໄຟຟ້າ (10 V, ຄວາມຖີ່ 1.2 Hz) ຖືກນໍາໃຊ້ກັບພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຜ່ານ C-Pace.ສໍາລັບເງື່ອນໄຂ TD, T3 ແລະ Dex ສົດຖືກເພີ່ມຢູ່ທີ່ 100 nM ແລະ 1 μM ໃນແຕ່ລະການປ່ຽນແປງຂະຫນາດກາງ.ຂະຫນາດກາງແມ່ນອີ່ມຕົວດ້ວຍອົກຊີເຈນກ່ອນທີ່ຈະທົດແທນ 3 ເທື່ອຕໍ່ມື້.ພາກສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອໄດ້ຖືກນໍາໄປລ້ຽງຢູ່ໃນບ່ອນອົບທີ່ອຸນຫະພູມ 37 ອົງສາ C ແລະ 5% CO2.
ສໍາລັບວັດທະນະທໍາ CTCM, ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໄດ້ຖືກວາງໄວ້ໃນເຄື່ອງພິມ 3D ທີ່ເຮັດເອງໃນຖ້ວຍ Petri ທີ່ມີການແກ້ໄຂຂອງ Tyrode.ອຸປະກອນໄດ້ຖືກອອກແບບເພື່ອເພີ່ມຂະຫນາດຂອງ slice ຂອງຫົວໃຈໂດຍ 25% ຂອງພື້ນທີ່ຂອງວົງສະຫນັບສະຫນູນ.ນີ້ແມ່ນເຮັດເພື່ອໃຫ້ພາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈບໍ່ຍືດຍາວຫຼັງຈາກຖືກໂອນຈາກການແກ້ໄຂຂອງ Tyrode ໄປສູ່ຂະຫນາດກາງແລະໃນລະຫວ່າງການ diastole.ການນໍາໃຊ້ກາວ histoacrylic, ພາກສ່ວນຫນາ 300 µm ໄດ້ຖືກສ້ອມແຊມໃສ່ແຫວນສະຫນັບສະຫນູນທີ່ມີເສັ້ນຜ່າກາງ 7 ມມ.ຫຼັງຈາກຕິດສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອໃສ່ວົງແຫວນ, ຕັດສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ເກີນແລະວາງສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ຕິດຢູ່ກັບເຂົ້າໄປໃນອາບນ້ໍາຂອງ Tyrode ເທິງກ້ອນ (4 ° C) ຈົນກ່ວາພາກສ່ວນພຽງພໍໄດ້ຖືກກະກຽມສໍາລັບອຸປະກອນຫນຶ່ງ.ເວລາປະມວນຜົນທັງໝົດສຳລັບອຸປະກອນທັງໝົດບໍ່ຄວນເກີນ 2 ຊົ່ວໂມງ.ຫຼັງຈາກ 6 ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຖືກຕິດຢູ່ກັບແຫວນສະຫນັບສະຫນູນຂອງພວກເຂົາ, ອຸປະກອນ CTCM ໄດ້ຖືກປະກອບ.ຫ້ອງການວັດທະນະທໍາ CTCM ໄດ້ຖືກເຕີມລົງໄປດ້ວຍຕົວກາງທີ່ມີອົກຊີເຈນກ່ອນ 21 ມລ.ໂອນພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໄປໃສ່ຫ້ອງວັດທະນະທໍາແລະເອົາຟອງອາກາດຢ່າງລະມັດລະວັງດ້ວຍທໍ່ທໍ່.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອໄດ້ຖືກນໍາພາເຂົ້າໄປໃນຮູແລະຄ່ອຍໆກົດເຂົ້າໄປໃນສະຖານທີ່.ສຸດທ້າຍ, ເອົາຝາ electrode ໃສ່ອຸປະກອນແລະໂອນອຸປະກອນໄປ incubator.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເຊື່ອມຕໍ່ CTCM ກັບທໍ່ອາກາດແລະລະບົບ C-PACE-EM.ເຄື່ອງກະຕຸ້ນ pneumatic ເປີດແລະປ່ຽງອາກາດເປີດ CTCM.ລະບົບ C-PACE-EM ໄດ້ຖືກຕັ້ງຄ່າໃຫ້ສົ່ງ 4 V ທີ່ 1.2 Hz ໃນລະຫວ່າງຈັງຫວະ biphasic ສໍາລັບ 2 ms.ຂະຫນາດກາງໄດ້ຖືກປ່ຽນສອງຄັ້ງຕໍ່ມື້ແລະ electrodes ໄດ້ຖືກປ່ຽນຫນຶ່ງຄັ້ງຕໍ່ມື້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການສະສົມຂອງ graphite ໃນ electrodes.ຖ້າຈໍາເປັນ, ພາກສ່ວນເນື້ອເຍື່ອສາມາດຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກອ່າງເກັບນ້ໍາເພື່ອຂັບໄລ່ຟອງອາກາດທີ່ອາດຈະຕົກຢູ່ພາຍໃຕ້ພວກມັນ.ສໍາລັບເງື່ອນໄຂການປິ່ນປົວ MT, T3 / Dex ໄດ້ຖືກເພີ່ມສົດໆກັບແຕ່ລະການປ່ຽນແປງຂະຫນາດກາງດ້ວຍ 100 nM T3 ແລະ 1 μM Dex.ອຸ​ປະ​ກອນ CTCM ໄດ້​ຮັບ​ການ​ປູກ​ຝັງ​ຢູ່​ໃນ incubator ທີ່ 37 ° C ແລະ 5% CO2.
ເພື່ອ​ໄດ້​ຮັບ​ເສັ້ນ​ທາງ​ຍາວ​ຂອງ​ຕ່ອນ​ຫົວ​ໃຈ​, ລະ​ບົບ​ກ້ອງ​ຖ່າຍ​ຮູບ​ພິ​ເສດ​ໄດ້​ຖືກ​ພັດ​ທະ​ນາ​.ກ້ອງຖ່າຍຮູບ SLR (Canon Rebel T7i, Canon, ໂຕກຽວ, ຍີ່ປຸ່ນ) ຖືກໃຊ້ກັບເລນມາໂຄ Navitar Zoom 7000 18-108mm (Navitar, San Francisco, CA).ການເບິ່ງເຫັນພາບໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼັງຈາກປ່ຽນອຸປະກອນທີ່ມີຂະຫນາດກາງສົດ.ກ້ອງຖ່າຍຮູບຖືກຕັ້ງຢູ່ໃນມຸມ 51° ແລະວິດີໂອຖືກບັນທຶກດ້ວຍຄວາມໄວ 30 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ.ທຳອິດ, ຊອບແວໂອເພນຊອດ (MUSCLEMOTION43) ຖືກນໍາໃຊ້ກັບ Image-J ເພື່ອປະເມີນປະລິມານການເຄື່ອນໄຫວຂອງແຜ່ນຫົວໃຈ.ຫນ້າກາກໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນໂດຍໃຊ້ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ເພື່ອກໍານົດເຂດທີ່ມີຄວາມສົນໃຈສໍາລັບການຕີຕ່ອນຫົວໃຈເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການລົບກວນ.ໜ້າກາກທີ່ແບ່ງສ່ວນດ້ວຍມືແມ່ນນຳໃຊ້ກັບທຸກຮູບໃນລຳດັບເຟຣມ ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນສົ່ງໄປໃສ່ປລັກອິນ MUSCLEMOTION.Muscle Motion ໃຊ້ຄວາມເຂັ້ມສະເລ່ຍຂອງ pixels ໃນແຕ່ລະກອບເພື່ອຄິດໄລ່ການເຄື່ອນໄຫວຂອງມັນທຽບກັບກອບອ້າງອີງ.ຂໍ້ມູນຖືກບັນທຶກ, ກັ່ນຕອງ ແລະໃຊ້ເພື່ອປະເມີນໄລຍະເວລາຂອງຮອບວຽນ ແລະປະເມີນການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອໃນລະຫວ່າງຮອບວຽນຂອງຫົວໃຈ.ວິດີໂອທີ່ບັນທຶກໄວ້ໄດ້ຖືກປະມວນຜົນພາຍຫຼັງໂດຍໃຊ້ຕົວກອງດິຈິຕອນສູນໄລຍະທໍາອິດ.ເພື່ອປະເມີນການຍືດຕົວຂອງເນື້ອເຍື່ອ (peak-to-peak), ການວິເຄາະສູງສຸດເຖິງຈຸດສູງສຸດໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອຈໍາແນກລະຫວ່າງຈຸດສູງສຸດແລະ troughs ໃນສັນຍານທີ່ບັນທຶກໄວ້.ນອກຈາກນັ້ນ, detrending ແມ່ນປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ polynomial ຄໍາສັ່ງທີ 6 ເພື່ອກໍາຈັດການລອຍສັນຍານ.ລະຫັດໂຄງການໄດ້ຖືກພັດທະນາໃນ MATLAB ເພື່ອກໍານົດການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອທົ່ວໂລກ, ເວລາຮອບວຽນ, ເວລາພັກຜ່ອນ, ແລະເວລາການຫົດຕົວ (ລະຫັດໂຄງການເສີມ 44).
ສໍາລັບການວິເຄາະຄວາມເຄັ່ງຕຶງ, ການນໍາໃຊ້ວິດີໂອດຽວກັນທີ່ສ້າງຂື້ນສໍາລັບການປະເມີນຄວາມຍືດຍາວຂອງກົນຈັກ, ພວກເຮົາທໍາອິດຕິດຕາມສອງຮູບພາບທີ່ສະແດງເຖິງຈຸດສູງສຸດຂອງການເຄື່ອນໄຫວ (ຈຸດສູງສຸດ (ເທິງ) ແລະຕ່ໍາສຸດ (ຕ່ໍາ) ຂອງການເຄື່ອນໄຫວ) ອີງຕາມຊອບແວ MUSCLEMOTION.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາແຍກສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອແລະນໍາໃຊ້ຮູບແບບຂອງວິທີການສ້າງຮົ່ມກັບເນື້ອເຍື່ອທີ່ແບ່ງອອກ (ຕື່ມ Fig. 2a).ແພຈຸລັງທີ່ຖືກແບ່ງອອກຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນສິບ subsurfaces, ແລະຄວາມຄຽດໃນແຕ່ລະດ້ານໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ສົມຜົນຕໍ່ໄປນີ້: Strain = (Sup-Sdown)/Sdown, ບ່ອນທີ່ Sup ແລະ Sdown ແມ່ນໄລຍະຫ່າງຂອງຮູບຮ່າງຈາກເງົາເທິງແລະລຸ່ມຂອງຜ້າ, ຕາມລໍາດັບ (ຕື່ມ Fig. 2b).
ພາກສ່ວນຫົວໃຈໄດ້ຖືກແກ້ໄຂໃນ 4% paraformaldehyde ສໍາລັບ 48 ຊົ່ວໂມງ.ເນື້ອເຍື່ອຄົງທີ່ໄດ້ຖືກຂາດນ້ໍາໃນ 10% ແລະ 20% sucrose ສໍາລັບ 1 ຊົ່ວໂມງ, ຫຼັງຈາກນັ້ນໃນ 30% sucrose ໃນຕອນກາງຄືນ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພາກສ່ວນຕ່າງໆໄດ້ຖືກຝັງຢູ່ໃນສານປະສົມອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ (OCT compound) ແລະຄ່ອຍໆແຊ່ແຂງໃນອາບນ້ໍາ isopentane / ແຫ້ງ.ເກັບຮັກສາບລັອກຝັງ OCT ທີ່ -80 °C ຈົນກ່ວາການແຍກ.ສະໄລ້ໄດ້ຖືກກະກຽມເປັນສ່ວນທີ່ມີຄວາມຫນາຂອງ 8 μm.
ເພື່ອເອົາ OCT ອອກຈາກພາກສ່ວນຫົວໃຈ, ໃຫ້ເຮັດຄວາມຮ້ອນໃສ່ແຜ່ນສະໄລ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 95 °C ເປັນເວລາ 5 ນາທີ.ຕື່ມ 1 ml PBS ໃສ່ແຕ່ລະສະໄລ້ແລະ incubate ສໍາລັບ 30 ນາທີຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ຫຼັງຈາກນັ້ນ permeate ພາກສ່ວນໂດຍການຕັ້ງຄ່າ 0.1% Triton-X ໃນ PBS ສໍາລັບ 15 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ເພື່ອປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ພູມຕ້ານທານທີ່ບໍ່ສະເພາະຈາກການຜູກມັດກັບຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມ 1 ມລຂອງ 3% ການແກ້ໄຂ BSA ເຂົ້າໄປໃນສະໄລ້ແລະ incubate ສໍາລັບ 1 ຊົ່ວໂມງໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.BSA ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຫຼັງຈາກນັ້ນແລະ slides ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍ PBS.ໝາຍແຕ່ລະຕົວຢ່າງດ້ວຍສໍ.ພູມຕ້ານທານຂັ້ນຕົ້ນ (ເຈືອຈາງ 1:200 ໃນ 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ແລະ troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນ 90% ຕ້ານອາເລັກໂຕຼິກຂອງຫນູ (ຫຼັງຈາກນັ້ນ 20% BSAluted) ຕ້ານອາລູມິນຽມ 10 ນາທີ. Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079), ຕໍ່ກັບກະຕ່າຍ Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) ເປັນເວລາ 90 ນາທີເພີ່ມເຕີມ ລ້າງ 3 ເທື່ອດ້ວຍ PBS ເພື່ອແຍກແຍະເປົ້າໝາຍການຍ້ອມສີຈາກພື້ນຫຼັງ, ພວກເຮົາໃຊ້ພຽງແຕ່ antibody ທີສອງເປັນຕົວຄວບຄຸມ. ສຸດທ້າຍ, Laboratory Slidesect DA (PI) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ໃນສະໄລ້ນິວເຄລຍ. ແລະຜະນຶກເຂົ້າກັນດ້ວຍສີເລັບ.-x magnification) ແລະກ້ອງຈຸລະທັດ Keyence ທີ່ມີການຂະຫຍາຍ 40x.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) ທີ່ 5 μg/ml ໃນ PBS ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຍ້ອມສີ WGA ແລະນໍາໃຊ້ກັບພາກສ່ວນຄົງທີ່ເປັນເວລາ 30 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ສະໄລ້ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍ PBS ແລະສີດໍາຊູດານໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ແຕ່ລະສະໄລ້ແລະ incubated ສໍາລັບ 30 ນາທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, slides ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍ PBS ແລະ vectashield embedding medium ໄດ້ຖືກເພີ່ມ.ສະໄລ້ຖືກສະແດງພາບໃນກ້ອງຈຸລະທັດຂອງ Keyence ທີ່ກຳລັງຂະຫຍາຍ 40x.
OCT ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກຕົວຢ່າງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍຂ້າງເທິງ.ຫຼັງຈາກຖອນ OCT, ເອົາແຜ່ນສະໄລ້ເຂົ້າໄປໃນການແກ້ໄຂຂອງ Bouin ໃນຄືນ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແຜ່ນສະໄລ້ໄດ້ຖືກລ້າງອອກດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນສໍາລັບ 1 ຊົ່ວໂມງແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໃສ່ໃນການແກ້ໄຂ Bibrich aloe acid fuchsin ສໍາລັບ 10 ນາທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ສະໄລ້ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນແລະໃສ່ໃນການແກ້ໄຂຂອງ 5% phosphomolybdenum / 5% ອາຊິດ phosphotungstic ສໍາລັບ 10 ນາທີ.ໂດຍບໍ່ມີການ rinsing, ໂອນ slides ໂດຍກົງເຂົ້າໄປໃນການແກ້ໄຂສີຟ້າ aniline ສໍາລັບ 15 ນາທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ສະໄລ້ໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນແລະວາງໄວ້ໃນການແກ້ໄຂອາຊິດອາຊິດ 1% ສໍາລັບ 2 ນາທີ.ສະໄລ້ໄດ້ຖືກຕາກໃຫ້ແຫ້ງໃນ 200 N ethanol ແລະໂອນໄປຫາ xylene.ສະໄລ້ທີ່ມີຮອຍເປື້ອນຖືກສະແດງພາບໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Keyence ດ້ວຍຈຸດປະສົງ 10x.ເປີເຊັນຂອງພື້ນທີ່ Fibrosis ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Keyence Analyzer.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), ໝາຍເລກລາຍການ V13154, ອີງຕາມໂປໂຕຄອນຂອງຜູ້ຜະລິດທີ່ມີການດັດແກ້ບາງອັນ.ໂດຍສະເພາະ, ເຂັມຜ່າຕັດທີ່ມີເສັ້ນຜ່າກາງ 6 ມມໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຮັບປະກັນຂະຫນາດຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ເປັນເອກະພາບໃນລະຫວ່າງການວິເຄາະ MTT.ແຜ່ນແພໄດ້ຖືກນໍາໄປໃສ່ໃນນໍ້າສ້າງຂອງແຜ່ນ 12 ແຜ່ນທີ່ມີແຜ່ນຮອງ MTT ຕາມອະນຸສັນຍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.ພາກສ່ວນຕ່າງໆແມ່ນ incubated ຢູ່ທີ່ 37 ° C. ສໍາລັບ 3 ຊົ່ວໂມງແລະເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີຊີວິດ metabolizes substrate MTT ປະກອບເປັນສານປະກອບ formazan ສີມ່ວງ.ທົດແທນການແກ້ໄຂ MTT ດ້ວຍ 1 ມລ DMSO ແລະອົບຢູ່ທີ່ 37 ° C ເປັນເວລາ 15 ນາທີເພື່ອສະກັດເອົາຟໍມາຊອນສີມ່ວງອອກຈາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈ.ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກເຈືອຈາງ 1:10 ໃນ DMSO ໃນແຜ່ນລຸ່ມທີ່ຊັດເຈນ 96 ດີ ແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງສີມ່ວງທີ່ວັດແທກຢູ່ທີ່ 570 nm ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນ Cytation (BioTek).ການອ່ານໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ເປັນປົກກະຕິກັບນ້ໍາຫນັກຂອງແຕ່ລະຕ່ອນຂອງຫົວໃຈ.
ສື່ກາງຂອງຫົວໃຈຖືກແທນທີ່ດ້ວຍສື່ທີ່ບັນຈຸ 1 μCi/ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) ສໍາລັບການວິເຄາະການນໍາໃຊ້ນໍ້າຕານຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.ຫຼັງຈາກ 4 ຊົ່ວໂມງຂອງການອົບ, ເພີ່ມ 100 µl ຂອງຂະຫນາດກາງໃສ່ທໍ່ microcentrifuge ເປີດທີ່ມີ 100 µl ຂອງ 0.2 N HCl.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ທໍ່ດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກຈັດໃສ່ໃນທໍ່ scintillation ທີ່ມີ 500 μlຂອງ dH2O ເພື່ອລະເຫີຍ [3H]2O ເປັນເວລາ 72 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເອົາທໍ່ microcentrifuge ອອກຈາກທໍ່ scintillation ແລະຕື່ມ 10 ml ຂອງນ້ໍາ scintillation.ການນັບສະເໜ່ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງວິເຄາະການເກີດຂອງແຫຼວ Tri-Carb 2900TR (ບໍລິສັດ Packard Bioscience, Meriden, CT, USA).ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການນໍາໃຊ້ glucose ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍຄໍານຶງເຖິງ [5-3H]-glucose ກິດຈະກໍາສະເພາະ, ຄວາມສົມດຸນທີ່ບໍ່ສົມບູນແລະພື້ນຖານ, ການເຈືອຈາງຂອງ [5-3H]-glucose unlabeled, ແລະປະສິດທິພາບຕ້ານການ scintillation.ຂໍ້​ມູນ​ໄດ້​ຖືກ​ປັບ​ໃຫ້​ເປັນ​ປົກ​ກະ​ຕິ​ກັບ​ມະ​ຫາ​ຊົນ​ຂອງ​ພາກ​ສ່ວນ​ຂອງ​ຫົວ​ໃຈ​.
ຫຼັງຈາກການປະສົມພັນຂອງເນື້ອເຍື່ອໃນ Trizol, RNA ໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກສ່ວນຂອງຫົວໃຈໂດຍໃຊ້ Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 ອີງຕາມໂປໂຕຄອນຂອງຜູ້ຜະລິດ.ການກະກຽມຫ້ອງສະຫມຸດ RNAsec, ການຈັດລໍາດັບແລະການວິເຄາະຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກປະຕິບັດດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
1 μgຂອງ RNA ຕໍ່ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນອຸປະກອນການເລີ່ມຕົ້ນສໍາລັບການກະກຽມຫ້ອງສະຫມຸດ RNA.ການຈັດລໍາດັບຫ້ອງສະຫມຸດໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນໂດຍໃຊ້ NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit ສໍາລັບ Illumina (NEB, USA) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ, ແລະລະຫັດດັດສະນີໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນລໍາດັບຄຸນລັກສະນະສໍາລັບແຕ່ລະຕົວຢ່າງ.ໂດຍຫຍໍ້, mRNA ໄດ້ຖືກຊໍາລະຈາກ RNA ທັງຫມົດໂດຍໃຊ້ລູກປັດແມ່ເຫຼັກທີ່ຕິດກັບ poly-T oligonucleotides.Fragmentation ແມ່ນດໍາເນີນການໂດຍໃຊ້ divalent cations ໃນອຸນຫະພູມສູງໃນ NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X).cDNA strand ທໍາອິດຖືກສັງເຄາະໂດຍໃຊ້ primers hexamer ແບບສຸ່ມແລະ M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-).ຫຼັງຈາກນັ້ນ, cDNA strand ທີສອງຖືກສັງເຄາະໂດຍໃຊ້ DNA polymerase I ແລະ RNase H. ການ overhangs ທີ່ຍັງເຫຼືອແມ່ນຖືກປ່ຽນເປັນປາຍແຫຼມໂດຍກິດຈະກໍາ exonuclease/polymerase.ຫຼັງ​ຈາກ​ການ​ເຊື່ອມ​ຕົວ​ຂອງ 3′ ສິ້ນ​ສຸດ​ຂອງ DNA, ອະ​ແດບ​ເຕີ NEBNext ທີ່​ມີ​ໂຄງ​ປະ​ກອບ​ການ hairpin loop ແມ່ນ​ຕິດ​ກັບ​ມັນ​ເພື່ອ​ກະ​ກຽມ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ປະ​ສົມ.ສໍາລັບການຄັດເລືອກຊິ້ນ cDNA ຂອງຄວາມຍາວທີ່ຕ້ອງການ 150-200 bp.fragments ຫ້ອງສະຫມຸດໄດ້ຖືກ purified ໂດຍໃຊ້ລະບົບ AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA).ຫຼັງຈາກນັ້ນ, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) ທີ່ມີ cDNA ທີ່ເລືອກຂະຫນາດທີ່ຜູກມັດກັບອະແດບເຕີໄດ້ຖືກໃຊ້ເປັນເວລາ 15 ນາທີທີ່ 37 ° C ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເປັນເວລາ 5 ນາທີຢູ່ທີ່ 95 ° C ກ່ອນ PCR.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, PCR ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ Phusion High-Fidelity DNA polymerase, primers PCR ທົ່ວໄປ, ແລະ Index (X) primers.ສຸດທ້າຍ, ຜະລິດຕະພັນ PCR ໄດ້ຖືກບໍລິສຸດ (ລະບົບ AMPure XP) ແລະຄຸນນະພາບຫ້ອງສະຫມຸດທີ່ຖືກປະເມີນຢູ່ໃນລະບົບ Agilent Bioanalyzer 2100.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຫ້ອງສະຫມຸດ cDNA ໄດ້ຖືກຈັດລໍາດັບໂດຍໃຊ້ລໍາດັບ Novaseq.ໄຟລ໌ຮູບພາບດິບຈາກ Illumina ຖືກປ່ຽນເປັນການອ່ານດິບໂດຍໃຊ້ CASAVA Base Calling.ຂໍ້ມູນດິບຖືກເກັບໄວ້ໃນໄຟລ໌ຮູບແບບ FASTQ(fq) ທີ່ມີລໍາດັບການອ່ານ ແລະຄຸນນະພາບພື້ນຖານທີ່ສອດຄ້ອງກັນ.ເລືອກ HISAT2 ເພື່ອຈັບຄູ່ການອ່ານລໍາດັບທີ່ກັ່ນຕອງໄປຫາ genome ອ້າງອີງ Sscrofa11.1.ໂດຍທົ່ວໄປ, HISAT2 ສະຫນັບສະຫນູນ genomes ຂອງຂະຫນາດໃດກໍ່ຕາມ, ລວມທັງ genomes ຂະຫນາດໃຫຍ່ກວ່າ 4 ຕື້ຖານ, ແລະຄ່າເລີ່ມຕົ້ນແມ່ນຖືກກໍານົດສໍາລັບພາລາມິເຕີສ່ວນໃຫຍ່.Splicing ອ່ານຈາກ RNA Seq ຂໍ້ມູນສາມາດສອດຄ່ອງປະສິດທິພາບໂດຍໃຊ້ HISAT2, ລະບົບທີ່ໄວທີ່ສຸດໃນປະຈຸບັນ, ມີຄວາມຖືກຕ້ອງຄືກັນຫຼືດີກວ່າວິທີການອື່ນໆ.
ຄວາມອຸດົມສົມບູນຂອງການຖອດຂໍ້ຄວາມໂດຍກົງສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງລະດັບຂອງການສະແດງອອກຂອງ gene.ລະດັບການສະແດງອອກຂອງພັນທຸກໍາແມ່ນໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍຄວາມອຸດົມສົມບູນຂອງ transcripts (ການນັບລໍາດັບ) ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ genome ຫຼື exons.ຈໍານວນຂອງການອ່ານແມ່ນອັດຕາສ່ວນກັບລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene, ຄວາມຍາວຂອງ gene, ແລະຄວາມເລິກຂອງລໍາດັບ.FPKM (ຊິ້ນສ່ວນຕໍ່ພັນຄູ່ພື້ນຖານຂອງການຖອດຂໍ້ຄວາມຕາມລໍາດັບຕໍ່ລ້ານຄູ່ພື້ນຖານ) ຖືກຄິດໄລ່ແລະຄ່າ P-values ​​ຂອງການສະແດງຜົນທີ່ແຕກຕ່າງແມ່ນຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ຊຸດ DESeq2.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ຄິດໄລ່ອັດຕາການຄົ້ນພົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ (FDR) ສໍາລັບແຕ່ລະຄ່າ P ໂດຍໃຊ້ Benjamini-Hochberg method9 ໂດຍອີງໃສ່ຫນ້າທີ່ R-function "p.adjust".
RNA ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກພາກສ່ວນຫົວໃຈໄດ້ຖືກປ່ຽນເປັນ cDNA ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 200 ng/μl ໂດຍໃຊ້ SuperScript IV Vilo Master mix ຈາກ Thermo (Thermo, cat. no. 11756050).Quantitative RT-PCR ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well transparent reaction plate (Thermo, cat. no. 4483319) ແລະ microamp optical adhesive (Thermo, cat. no. 4311971).ປະສົມປະຕິກິລິຍາປະກອບດ້ວຍ 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat #4444557), 0.5 µl Taqman Primer ແລະ 3.5 µl H2O ປະສົມຕໍ່ດີ.ຮອບວຽນ qPCR ມາດຕະຖານໄດ້ຖືກດໍາເນີນການແລະຄ່າ CT ໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍໃຊ້ Applied Biosystems Quantstudio 5 ເຄື່ອງມື PCR ເວລາຈິງ (ໂມດູນ 384 ດີ; ຜະລິດຕະພັນ # A28135).ຜ້າປູພື້ນ Taqman ໄດ້ຊື້ຈາກ Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss809090188_m1), RGL1 (Ss808909_m1), mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss042455) GAT ທັງໝົດໃນເຮືອນເປັນຄ່າປົກກະຕິ 188 CT. PDH.
ການປ່ອຍສື່ມວນຊົນຂອງ NT-ProBNP ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ຊຸດ NT-ProBNP (ຫມູ) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) ອີງຕາມໂປໂຕຄອນຂອງຜູ້ຜະລິດ.ໂດຍຫຍໍ້, 250 µl ຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງແລະມາດຕະຖານໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນຊ້ໍາກັນກັບແຕ່ລະນ້ໍາ.ທັນທີຫຼັງຈາກເພີ່ມຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມ 50 µl ຂອງ Assay Reagent A ໃສ່ແຕ່ລະນໍ້າສ້າງ.ຄ່ອຍໆສັ່ນແຜ່ນແລະປະທັບຕາດ້ວຍ sealant.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເມັດໄດ້ຖືກອົບຢູ່ທີ່ 37 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ.ຈາກ​ນັ້ນ​ໃຫ້​ດູດ​ນ້ຳ​ລ້າງ​ນ້ຳ​ລ້າງ​ນ້ຳ 4 ເທື່ອ​ດ້ວຍ​ນ້ຳ​ຢາ​ລ້າງ​ນ້ຳ 350 µl 1X, ຟອກ​ນ້ຳ​ລ້າງ​ນ້ຳ​ປະ​ມານ 1-2 ນາ​ທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕື່ມ 100 µl ຂອງ Assay Reagent B ຕໍ່ຂຸມແລະປະທັບຕາດ້ວຍ sealant ແຜ່ນ.ເມັດໄດ້ຖືກສັ່ນຄ່ອຍໆແລະ incubated ຢູ່ທີ່ 37 ° C ເປັນເວລາ 30 ນາທີ.ຖອກນໍ້າໃສ່ນໍ້າ ແລະລ້າງນໍ້າໃຫ້ສະອາດ 5 ເທື່ອດ້ວຍນໍ້າຢາລ້າງ 1X 350 µl.ຕື່ມ 90 µl ຂອງສານລະລາຍ substrate ໃສ່ແຕ່ລະນ້ໍາແລະປະທັບຕາແຜ່ນ.ອົບໃສ່ຈານທີ່ອຸນຫະພູມ 37 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 10-20 ນາທີ.ຕື່ມ 50 µl Stop Solution ໃສ່ແຕ່ລະຂຸມ.ແຜ່ນໄດ້ຖືກວັດແທກທັນທີໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງອ່ານແຜ່ນ Cytation (BioTek) ທີ່ຕັ້ງຢູ່ທີ່ 450 nm.
ການວິເຄາະພະລັງງານໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອເລືອກຂະຫນາດຂອງກຸ່ມທີ່ຈະສະຫນອງພະລັງງານ > 80% ເພື່ອກວດພົບການປ່ຽນແປງຢ່າງແທ້ຈິງ 10% ໃນພາລາມິເຕີທີ່ມີອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງປະເພດ I 5%. ການວິເຄາະພະລັງງານໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອເລືອກຂະຫນາດຂອງກຸ່ມທີ່ຈະສະຫນອງພະລັງງານ > 80% ເພື່ອກວດພົບການປ່ຽນແປງຢ່າງແທ້ຈິງ 10% ໃນພາລາມິເຕີທີ່ມີອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງປະເພດ I 5%. Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обята 10гощности для обята нения параметра с 5% частотой ошибок типа I. ການວິເຄາະພະລັງງານໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອເລືອກຂະຫນາດກຸ່ມທີ່ຈະສະຫນອງພະລັງງານ > 80% ເພື່ອກວດພົບການປ່ຽນແປງພາລາມິເຕີຢ່າງແທ້ຈິງ 10% ດ້ວຍອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງປະເພດ I 5%.进行功效分析以选择将提供 > 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。进行功效分析以选择将提供 > 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности дляж обнонти дляж обнонти дляж обнонти дляж обнонти дляжоности изменения параметров и 5% частоты ошибок типа I. ການ​ວິ​ເຄາະ​ພະ​ລັງ​ງານ​ແມ່ນ​ໄດ້​ປະ​ຕິ​ບັດ​ເພື່ອ​ເລືອກ​ຂະ​ຫນາດ​ກຸ່ມ​ທີ່​ຈະ​ໃຫ້​> 80% ພະ​ລັງ​ງານ​ໃນ​ການ​ກວດ​ສອບ 10% ການ​ປ່ຽນ​ແປງ​ຕົວ​ກໍາ​ນົດ​ການ​ຢ່າງ​ແທ້​ຈິງ​ແລະ 5​% ອັດ​ຕາ​ຄວາມ​ຜິດ​ພາດ​ປະ​ເພດ I​.ພາກສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອໄດ້ຖືກເລືອກແບບສຸ່ມກ່ອນການທົດລອງ.ການວິເຄາະທັງຫມົດແມ່ນຕາບອດສະພາບແລະຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກຖອດລະຫັດພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກຂໍ້ມູນທັງຫມົດໄດ້ຖືກວິເຄາະ.ຊອບແວ GraphPad Prism (San Diego, CA) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປະຕິບັດການວິເຄາະສະຖິຕິທັງຫມົດ. ສໍາລັບສະຖິຕິທັງຫມົດ, p-values ​​ໄດ້ຖືກພິຈາລະນາທີ່ສໍາຄັນຢູ່ທີ່ຄ່າ <0.05. ສໍາລັບສະຖິຕິທັງຫມົດ, p-values ​​ໄດ້ຖືກພິຈາລະນາທີ່ສໍາຄັນຢູ່ທີ່ຄ່າ <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ສໍາລັບສະຖິຕິທັງຫມົດ, p-values ​​ໄດ້ຖືກພິຈາລະນາທີ່ສໍາຄັນຢູ່ທີ່ຄ່າ <0.05.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ສໍາລັບສະຖິຕິທັງຫມົດ, p-values ​​ໄດ້ຖືກພິຈາລະນາທີ່ສໍາຄັນຢູ່ທີ່ຄ່າ <0.05.ການທົດສອບ t-test ຂອງນັກຮຽນສອງຫາງໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນຂໍ້ມູນໂດຍມີພຽງແຕ່ 2 ການປຽບທຽບ.ANOVA ທາງດຽວ ຫຼືສອງທາງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດຄວາມສໍາຄັນລະຫວ່າງຫຼາຍກຸ່ມ.ໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດການທົດສອບ post hoc, ການແກ້ໄຂຂອງ Tukey ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເຂົ້າໃນບັນຊີສໍາລັບການປຽບທຽບຫຼາຍ.ຂໍ້ມູນ RNAsec ມີການພິຈາລະນາສະຖິຕິພິເສດເມື່ອຄິດໄລ່ FDR ແລະ p.adjust ຕາມທີ່ອະທິບາຍໄວ້ໃນພາກວິທີການ.
ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມກ່ຽວກັບການອອກແບບການສຶກສາ, ເບິ່ງບົດລາຍງານການຄົ້ນຄວ້າທໍາມະຊາດ abstract ເຊື່ອມຕໍ່ກັບບົດຄວາມນີ້.