Maistinių medžiagų gavimas ir paskirstymas integruoja vabzdžių maitinimosi ir gyvenimo istorijos bruožus. Kad kompensuotų konkrečių maistinių medžiagų trūkumą skirtingais gyvenimo tarpsniais, vabzdžiai gali gauti šių maistinių medžiagų papildomai maitindami, pavyzdžiui, maitindami stuburinių gyvūnų išskyromis, vadinamą balais. Uodai Anopheles arabiani, atrodo, reikalauja medžiagų apykaitos ir todėl buvo netinkamas ir atgaivintas. An.arabiensis karvės šlapimo maišymas maistinėms medžiagoms gauti pagerina gyvenimo istorijos charakteristikas.
Įsitikinkite, kad tai saugu.arabiensis patraukė šviežio, 24 val., 72 val. ir 168 val. senumo karvių šlapimo kvapas, o šeimininko ieškančių ir krauju maitintų (48 val. po kraujo miltų) patelės buvo išmatuotos Y vamzdelio olfaktometru, o nėščioms patelėms buvo nustatyta kombinuota fiziologinė fiziologinė analizė, o nėščių patelių identifikavimas buvo atliktas. karvių šlapimas visose keturiose amžiaus klasėse. Sintetiniai bioaktyvių junginių mišiniai buvo vertinami Y vamzdžio ir lauko bandymuose. Norint ištirti karvių šlapimą ir pagrindinį azoto turintį junginį karbamidą, kaip galimą papildomą ėdalą maliarijos pernešėjams, buvo išmatuoti šėrimo parametrai ir gyvenimo istorijos charakteristikos. Įvertinta šėrimo patelių dalis ir šlapalo kiekis bei šlapimo kiekis. vertinamas dėl išgyvenimo, pririšto skrydžio ir dauginimosi.
Ieškokite šeimininko kraujo ir maisto. Laboratorinių ir lauko tyrimų metu arabus patraukė natūralus ir sintetinis šviežio ir pasenusių karvių šlapimo kvapas. Nėščios patelės buvo abejingos karvių šlapimo atsakams neršimo vietose. Šeimininko ieškančios ir kraują siurbiančios patelės aktyviai sugeria karvės šlapimą ir pagal visas fiziologines ir fiziologines šių karvių gyvenimo sąlygas. skrydis, išgyvenimas ar dauginimasis.
Anopheles arabinis karvių šlapimo gavimas ir paskirstymas, siekiant pagerinti gyvenimo istorijos charakteristikas. Papildomas šėrimas karvių šlapimu tiesiogiai veikia vektorių pajėgumą, padidindamas kasdienį išgyvenamumą ir pernešėjų tankį, o netiesiogiai – keisdamas skrydžio aktyvumą, todėl į jį reikėtų atsižvelgti būsimuose modeliuose.
Maistinių medžiagų gavimas ir paskirstymas integruoja vabzdžių maitinimosi ir gyvenimo istorijos ypatybes [1,2,3].Vabzdžiai gali pasirinkti ir įsigyti maistą bei atlikti kompensacinį maitinimą pagal maisto prieinamumą ir maistinių medžiagų poreikius [1, 3]. Maistinių medžiagų pasiskirstymas priklauso nuo gyvavimo istorijos proceso ir gali lemti skirtingus mitybos kokybės ir kiekio reikalavimus įvairiais vabzdžių gyvenimo etapais. gauti šių maistinių medžiagų papildomai šerdami, pvz., purvu, įvairiais stuburinių gyvūnų ekskrementais ir išskyromis bei dribsniais, o šis procesas žinomas kaip balos [2]. Nors pirmiausia aprašomos įvairios drugelių ir kandžių rūšys, girdyklų pasitaiko ir kitose vabzdžių grupėse, o tokių išteklių pritraukimas ir maitinimasis jais gali turėti reikšmingos įtakos sveikatai ir kitoms gyvybės savybėms,6. maliarinis uodas Anopheles gambiae sensu lato (sl) pasirodo kaip „nepakankamai maitinamas“ suaugęs žmogus [8], todėl laistymas gali turėti svarbų vaidmenį jo gyvenimo istorijoje, tačiau iki šiol toks elgesys buvo ignoruojamas. Į maišymą, kaip priemonę padidinti maistinių medžiagų suvartojimą šioje svarbioje transporto priemonėje, reikia atkreipti dėmesį, nes tai gali turėti svarbių epidemiologinių pasekmių.
Suaugusių Anopheles uodų patelių azoto suvartojimas yra ribotas dėl mažų kalorijų atsargų, pernešamų iš lervos stadijos, ir neefektyvaus kraujo miltų panaudojimo [9]. Patelė Ann.gambiae sl paprastai tai kompensuoja papildomai maitindama kraują [10, 11], todėl daugiau žmonių rizikuoja užsikrėsti uodais ir užsikrėsti uodais. naudokite papildomą stuburinių išmatų šėrimą, kad gautumėte azoto junginių, kurie pagerina prisitaikymą ir skrydžio manevringumą, kaip rodo kiti vabzdžiai [2]. Šiuo atžvilgiu stiprus ir išskirtinis vienos iš An. Gambijos sl rūšių komplekso, Anopheles arabinis, šviežio ir pasenusio karvės šeimininko šlapimas yra įdomus [14], s ir yra žinoma, kad ji asocijuojasi su galvijais ir minta jais.Karvių šlapimas yra išteklius, kuriame gausu azoto junginių, o karbamidas sudaro 50–95 % viso šviežiame šlapime esančio azoto [15, 16]. Karvių šlapimui senstant, mikroorganizmai naudoja šiuos išteklius, kad sumažintų sudėtingo junginio sudėtingumą per 5 val. organinio azoto kiekio sumažėjimas, klesti alkalofiliniai mikroorganizmai (daugelis iš kurių gamina uodams toksiškus junginius) [15], kurie gali būti patelės Ann.arabiensis dažniausiai traukia 24 valandų ar jaunesnio amžiaus šlapimas [13, 14].
Šiame tyrime buvo ieškoma šeimininko ir krauju maitinamų Ans. Pirmojo gonadotropino ciklo metu arabiensis buvo įvertintas dėl azoto junginių, įskaitant karbamidą, gavimo maišant šlapimą. Toliau buvo atlikta eksperimentų serija, siekiant įvertinti, kaip uodų patelės paskirsto šį potencialų maistinių medžiagų išteklius, kad būtų pagerintas išgyvenimas ir tolesnis reprodukcijos išgyvenimas bei tolesnis reprodukcijos kiekis. nustatyti, ar tai suteikė patikimų užuominų apie šeimininką ir krauju maitinamą An. Ieškodami šio potencialaus mitybos šaltinio, arabiensis atrado chemines koreliacijas, susijusias su pastebėtu skirtingu patrauklumu. Sintetiniai lakiųjų organinių junginių (LOJ) kvapų mišiniai, identifikuoti 24 valandas senstančiame šlapime, buvo toliau vertinami lauko sąlygomis, išplečiant rezultatus, gautus skirtingą laboratorinį poveikį šlapimui.Uodų pritraukimas.Gauti rezultatai patvirtina, kad An.arabiensis įgyja ir paskirsto azoto junginius, esančius stuburinių gyvūnų šlapime, kad paveiktų gyvenimo istorijos charakteristikas. Šie rezultatai aptariami atsižvelgiant į galimas epidemiologines pasekmes ir kaip juos galima panaudoti vektorių stebėjimui ir kontrolei.
Anopheles arabicans (Dongola padermė) buvo palaikoma 25 ± 2 °C temperatūroje, 65 ± 5% santykiniame drėgnyje ir 12:12 h šviesos: tamsos cikle. Lervos buvo auginamos plastikiniuose padėkliuose (20 cm × 18 cm × 7 cm), užpildytuose distiliuotu vandeniu ir renkami ml ml, žuvis Tetramin Werke, Tetramin Werke P. s (Nolato Hertila, Åstorp, SE), o po to perkelta į Bugdorm narvus (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taivanas), kad galėtų atsirasti suaugusiųjų. Suaugusiesiems buvo suteiktas 10% sacharozės tirpalas ad libitum, kol praėjus 4 dienoms po išdygimo buvo pasiūlyta dieta su dieta, o prieš naktinį tašką buvo apibarstoma vandeniu (dpe). prieš eksperimentą, kaip aprašyta toliau. Patelės, naudotos eksperimentams su skrydžio vamzdeliu, buvo badomos tik 4–6 valandas su vandeniu ad libitum.Kad paruošti kraują siurbiančius uodus tolesniems biologiniams tyrimams, 4 dpe patelėms buvo tiekiamas defibrozinis avies kraujas (Håtunalab, Bro, SE), naudojant membraninio maitinimo sistemą (po to individualios patelės buvo perkeltos į šėrimo membraną sistemą, o patelėms buvo suteiktas individualus šėrimo vamzdelis, UK). tiesiogiai, kaip aprašyta toliau, arba 10% sacharozės ad libitum 3 dienas prieš toliau aprašytus eksperimentus. Pastarosios patelės buvo naudojamos skrydžio vamzdžio biologiniams tyrimams ir perkeltos į laboratoriją, o po to 4-6 valandas prieš eksperimentą turėjo distiliuotą vandenį ad libitum.
Šėrimo tyrimai buvo naudojami suaugusių arabų patelių šlapimo ir karbamido suvartojimui kiekybiškai įvertinti.Šeimininko ieškančioms ir krauju maitinamoms patelėms buvo suteiktas ėdalas, kuriame buvo 1 % praskiesto šviežio ir pasenusios karvės šlapimo, įvairios koncentracijos karbamido ir dvi kontrolinės medžiagos (10 % sacharozės ir vandens) 48 val. 7-1; Sigma-Aldrich, Stokholmas, SE) buvo pridėta prie raciono ir tiekiama 4 × 4 matricoje 250 µl mikrocentrifugos mėgintuvėliuose (Axygen Scientific, Union City, CA, JAV; 1A pav.) Užpildykite iki krašto (~300 µl). Kad būtų išvengta konkurencijos tarp uodų ir uodų 1 cm skersmens ir galimo spalvos poveikio, 6 cm aukščio; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A paveikslas) visiškoje tamsoje, 25 ± 2 cm ° C temperatūroje ir 65 ± 5% santykinėje oro drėgnyje. Šie eksperimentai buvo kartojami 5–10 kartų. Po dietos uodai buvo laikomi -20 ° C temperatūroje iki tolesnės analizės.
Ieškokite galvijų šlapimo ir karbamido, kurį absorbavo šeimininkas ir kraują siurbianti Anopheles arabianus patelė. Šėrimo bandyme (A) uodų patelėms buvo suteiktas šviežias ir pasenusių karvių šlapimas, įvairios koncentracijos karbamidas, sacharozė (10 %) ir distiliuotas vanduo (H2O). .Atkreipkite dėmesį, kad šeimininko ieškančios patelės absorbavo 72 valandų karvės šlapimą mažiau nei 168 valandų karvės šlapimą (B). Vidutinis bendras azoto kiekis šlapime (± standartinis nuokrypis) pavaizduotas įdėkle.Šeimininko ieškančios (D, F) ir E, kraują siurbiančios (E, G) patelės su skirtingais pavadinimais (žymiai skirtingais tūriais) paima skirtingą šlapalo kiekį. viena nuo kitos (vienpusė ANOVA naudojant Tukey post hoc analizę; p < 0,05). Klaidų juostos rodo standartinę vidurkio paklaidą (BE). Tiesi punktyrinė linija reiškia logaritminės tiesinės regresijos liniją (F, G)
Kad išsiskirtų absorbuotas maistas, uodai buvo atskirai sudėti į 1,5 ml mikrocentrifugos mėgintuvėlius, kuriuose yra 230 µl distiliuoto vandens, ir audinys suardomas vienkartiniu grūstuvu ir belaidžiu varikliu (VWR International, Lundas, SE), po to centrifuguojama 10 krpm greičiu 10 minučių. Aldrichas) ir absorbcija (λ620) buvo nustatyta naudojant spektrofotometrinį mikroplokštelių skaitytuvą (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm. Arba uodai buvo sumalti 1 ml distiliuoto vandens, kurio 900 µl buvo perkelta į kiuvetę UV spektrofotometrinei analizei (λ,0,0,0 λ,0m6; Kista, SE). Norint kiekybiškai įvertinti suvartojamų maisto produktų kiekį, buvo sudaryta standartinė kreivė, nuosekliai skiedžiant, kad gautųsi nuo 0,2 µl iki 2,4 µl 1 mg ml-1 ksileno cianido. Tada kiekvieno uodo suvalgyto maisto kiekiui nustatyti buvo naudojamas žinomų dažų koncentracijų optinis tankis.
Tūrio duomenys buvo išanalizuoti naudojant vienpusę dispersijos analizę (ANOVA), po to Tukey post hoc porinius palyginimus (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, JAV, 1989–2007). .0, skirta „Mac“, „GraphPad Software“, San Diegas, CA, JAV).
Maždaug 20 µl šlapimo mėginių iš kiekvienos amžiaus grupės buvo surišta su Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 tinklelio, Sigma Aldrich) ir įdėta į alavo kapsules (8 mm × 5 mm). , US), kad būtų nustatytas azoto kiekis šviežiame ir senstančiame šlapime pagal gamintojo protokolą. Bendras azoto kiekis (g N l-1) buvo kiekybiškai įvertintas remiantis žinomomis karbamido koncentracijomis, naudojamomis kaip standartas.
Norint įvertinti dietos poveikį šeimininko ieškančių ir kraują siurbiančių patelių išgyvenamumui, uodai buvo atskirai sudėti į dideles Petri lėkštes (12 cm skersmens ir 6 cm aukščio; Semadeni), kurių dangtyje buvo tinkleliu uždengta skylė (3 cm skersmens) su ventiliacijai ir maisto tiekimui. Dietos buvo teikiamos iš karto po 4 dpe koncentracijos ir buvo įtraukta 1,4% šviežio šlapimo koncentracijos. , 10 % sacharozės ir vandens. Kiekviena dieta buvo pipete supilama ant dantų tampono (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), įdėto į 5 ml švirkštą (Thermo Fisher Scientific, Geteborgas, SE), stūmoklis buvo pašalintas ir dedamas ant Petri lėkštelės (1 pav.). per dieną, o negyvi uodai buvo išmetami iki paskutinio uodo nugaišimo (n = 40 vienam gydymui).Uodų, šertų įvairiomis dietomis, išgyvenamumas buvo statistiškai analizuojamas naudojant Kaplan-Meyer išgyvenamumo kreives ir log-rank testus, siekiant palyginti išgyvenamumo pasiskirstymo palyginimus tarp dietų (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Individualizuotas uodų skraidinimo malūnas, pagrįstas Attisano ir kt.[17], pagamintas iš 5 mm storio skaidraus akrilo plokščių (10 cm pločio x 10 cm ilgio x 10 cm aukščio) be priekinių ir galinių plokščių (3 pav.: viršuje). neodimio magnetų 9 cm atstumu vienas nuo kito. Horizontalus vamzdis, pagamintas iš tos pačios medžiagos (6,5 cm L), perpjovė vertikalų vamzdelį, kad sudarytų pririštą rankeną ir ranką, kurioje buvo nedidelis aliuminio folijos gabalėlis kaip šviesą pertraukiantis signalas.
24 valandas badaujančioms patelėms 30 minučių prieš suvaržymą buvo duodama aukščiau nurodyta dieta. Visiškai šertos uodų patelės buvo individualiai anestezuojamos ant ledo 2–3 minutes ir bičių vašku pritvirtinamos prie vabzdžių smeigtukų (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), o po to buvo registruojami horizontalūs skrydžio duomenys. logger, tada saugomas ir rodomas naudojant PC-Lab 2000™ programinę įrangą (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Skrydžio malūnas buvo patalpintas į klimato reguliuojamą patalpą (12 val.:12 val., šviesa: tamsu, 25 ± 2 °C, 65 ± 5 % santykinis drėgnis).
Norint vizualizuoti skrydžio veiklos modelį, bendras nuskraidytas atstumas (m) ir bendras iš eilės vykdomų skrydžių skaičius buvo apskaičiuotas per valandą per 24 valandų laikotarpį. Be to, vidutiniai atskirų moterų nuskridę atstumai buvo lyginami įvairiais gydymo būdais ir išanalizuoti naudojant vienpusę ANOVA ir Tukey post hoc analizę (JMP Pro, v14.0.0). sąjungininkas, vidutinis raundų skaičius skaičiuojamas 10 minučių žingsniais.
Norint įvertinti dietos poveikį An.arabiensis reprodukcinei funkcijai, šešios patelės (4 dpe) po kraujo paėmimo buvo perkeltos tiesiai į Bugdorm narvus (30 cm × 30 cm × 30 cm), o po to 48 valandoms buvo suteikta eksperimentinė dieta, kaip aprašyta aukščiau. Tada dietos buvo pašalintos ir neršimo puodeliai (30 ml; Nolato 20 ml vandens kas 4 valandas keičiami 4 valandas). 24 valandas.Kiekvieną mitybos režimą pakartokite 20–50 kartų.Kiekvieno eksperimentinio narvelio kiaušiniai buvo suskaičiuoti ir užregistruoti.Kiaušinių pavyzdžiai buvo naudojami vidutiniam atskirų kiaušinių dydžio ir ilgio pokyčiams įvertinti (n ≥ 200 per dietą), naudojant Dialux-20 mikroskopą (DM1000; Ernst Leitzlar) a3D, Camazlar, Wetzlar. 0 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Likę kiaušinėliai 24 valandas buvo laikomi kontroliuojamoje patalpoje standartinėmis auginimo sąlygomis, o neseniai atsiradusių 1 stadijos lervų pavyzdžiai (n ≥ 200 per dietą) buvo išmatuoti, kaip aprašyta aukščiau. Kiaušinių skaičius ir kiaušinių bei lervų dydis buvo lyginamas naudojant Proviena krypčių analizę, po ANOV ir Tuho-J. 4.0.0, SAS Institute Inc.).
Lakiosios medžiagos iš šviežio (1 val. po mėginių ėmimo), 24 val., 72 val. ir 168 val. senėjimo šlapimo buvo paimtos iš mėginių, paimtų iš Zebu galvijų, Arsi rasių. Patogumo dėlei šlapimo mėginiai buvo paimti anksti ryte, kol karvės dar buvo tvarte. Šlapimo mėginiai buvo paimti iš kiekvieno maišelio po 010 ml. s (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 l poliamide su dangteliu Vinilo chlorido plastikiniuose statiniuose. Lakiosios medžiagos iš kiekvieno galvijų šlapimo mėginio buvo paimtos tiesiogiai (švieži) arba po brandinimo kambario temperatūroje 24 val., 72 val. ir kiekvienai 168 val. amžiaus grupei.
Lakiųjų medžiagų viršutinėje erdvėje surinkimui buvo naudojama uždaro ciklo sistema, skirta aktyvintosios anglies filtruotų dujų srautui (100 ml min-1) cirkuliuoti per poliamido maišelį į adsorbcijos kolonėlę 2,5 val., naudojant diafragminį vakuuminį siurblį (KNF Neuberger, Freiburg, DE). 5 cm x 3 mm vid.), kuriame yra 35 mg Porapak Q (50/80 tinklelio; Waters Associates, Milford, MA, JAV) tarp stiklo vatos kamščių. Prieš naudojimą kolonėlė buvo praplaunama 1 ml perdistiliuoto n-heksano (Merck, G. Darmstadt, DE) ir 1 ml adsorbcijos laipsnio arba 99 tūrio purvino pentano. buvo eliuuojami 400 μl pentano. Headspace kolekcijos buvo sujungtos ir laikomos -20 °C temperatūroje, kol bus panaudotos tolesnei analizei.
Šeimininko ieškančių ir kraują valgančių An.Headspace lakiųjų ekstraktų, surinktų iš šviežio, 24 val., 72 val. ir 168 val. senėjimo šlapimo, elgsenos atsakai buvo ištirti dėl Arabidopsis uodų lakiųjų ekstraktų, naudojant tiesioginį stiklinį vamzdelį olfaktometrą [18]. Eksperimentai buvo atlikti. 19].Stiklinio vamzdelio olfaktometras (80 cm × 9,5 cm id) buvo apšviestas 3 ± 1 lx raudona šviesa iš viršaus. Medžio anglimi filtruotas ir drėkinamas oro srautas (25 ± 2 °C, 65 ± 2 % santykinė oro drėgmė) praėjo biologinį tyrimą esant 30 cm pločio, o per plieninį srautą sukuriama 30 cm laminai. plunksnos struktūra.Dantų tamponų dozatorius (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), pakabinamas ant 5 cm spiralės olfaktometro priešvėjiniame gale, stimuliatorius keičiamas kas 5 minutes. Analizei buvo naudojama 10 μl kiekvienos viršutinės erdvės ekstrakto, praskiesto santykiu 1:10, kaip kontrolinis stimulas. uodai buvo patalpinti į atskirus paleidimo narvelius likus 2-3 valandoms iki eksperimento pradžios. Paleidimo narvas buvo pastatytas olfaktometro pavėjui pusėje, uodams buvo leista aklimatizuotis 1 min., o tada buvo atidarytas narvelio drugelio vožtuvas, kad jie išsilaisvintų. Nagrinėjama, kad gydymo ar kontrolės pritraukimas buvo tiriamas kaip uodų kontakto su uodų išleidimo kontrolė per 5 minutes. Valgyta mažiausiai 30 kartų, o kad būtų išvengta bet kurios vienos dienos poveikio, kiekvieną eksperimento dieną buvo išbandytas tiek pat procedūrų ir kontrolinių medžiagų. Siekite atsakymų iš šeimininko ir krauju maitinamo Ans. Arabų ir viršutinės erdvės rinkiniai buvo analizuojami naudojant nominalią logistinę regresiją, po to poromis lyginant nelyginius santykius (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., 0).
An neršto atsakas. Šviežio ir pasenusios karvės šlapimo ekstraktai buvo analizuojami Bugdorm narvuose (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastikiniai puodeliai (30 ml; Nolato Hertila), pripildyti 20 ml distiliuoto vandens, tiekiant neršto substratą, buvo sureguliuoti ir išdėstyti priešinguose kampuose2. μl kiekvienos viršutinės erdvės ekstrakto, praskiedus santykiu 1:10. Kontroliniam puodeliui sureguliuoti buvo naudojamas vienodas pentano kiekis. Apdorojimo ir kontroliniai puodeliai buvo keičiami tarp kiekvieno eksperimento, kad būtų galima kontroliuoti padėties poveikį. Dešimt krauju maitintų patelių buvo išleista į eksperimentinius narvus ZT 9-11, o kiaušinėliai puodeliuose buvo skaičiuojami po 24 valandų. kontrolinėje puodelyje padėtų kiaušinių)/(bendras padėtų kiaušinių skaičius).Kiekvienas gydymas kartojamas 8 kartus.
Moterų An.arabiensis dujų chromatografijos ir elektronų antenos modelio aptikimo (GC-EAD) analizė buvo atlikta taip, kaip aprašyta anksčiau [20]. Trumpai tariant, švieži lakieji ekstraktai buvo atskirti naudojant Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US), aprūpintą HP-5, 20 mm storio plėvele. nologijos).ir senstantis šlapimas.Kaip judrioji fazė buvo naudojamas vandenilis, kurio vidutinis tiesinis srautas buvo 45 cm s-1.Kiekvienas mėginys (2 μl) buvo įpurškiamas 30 sekundžių be padalijimo režimu, kai įleidimo temperatūra buvo 225 °C. GC krosnies temperatūra buvo užprogramuota nuo 35 °C (3 minučių palaikymas) iki 30 °C (3 minučių palaikymas) iki 10 ef. 10 min. sklandus skirstytuvas, 4 psi azoto buvo pridėta ir padalinta 1:1 mažo negyvojo tūrio Gerstel 3D/2 kryžme (Gerstel, Mülheim, DE) tarp liepsnos jonizacijos detektoriaus ir EAD. GC nuotekų kapiliaras EAD buvo praleidžiamas per mišrią Gerstel ODP-2 perdavimo liniją, 0 cm, kur temperatūra buvo G × 8 mm C, kurios temperatūra buvo stiklinė plius 5 mm. anglimi filtruotas, drėgnas oras (1,5 l min-1). Antena buvo pastatyta 0,5 cm atstumu nuo vamzdžio išleidimo angos. Kiekvienas atskiras uodas sudarė vieną pakartojimą, o šeimininko ieškantiems uodams buvo atlikti bent trys pakartojimai su kiekvieno amžiaus šlapimo mėginiais.
Bioaktyvių junginių identifikavimas šviežio ir pasenusio galvijų šlapimo kolekcijose, naudojant kombinuotą GC ir masės spektrometrą (GC-MS; 6890 GC ir 5975 MS; Agilent Technologies), kad GC-EAD analizėje sukeltų anteninius atsakus, veikiant elektroninio smūgio jonizacijos režimu esant 70 CMS eV. (60 m × 0,25 mm vidinis skersmuo, 0,25 μm plėvelės storis), naudojant helio kaip judriąją fazę, o vidutinis tiesinis srautas 35 cm s-1. 2 μl mėginys buvo įšvirkštas naudojant tuos pačius injektoriaus nustatymus ir krosnies temperatūrą, kaip ir atliekant GC-EAD analizę. Junginiai buvo identifikuoti pagal jų bibliotekos laikymo trukmę ir pasirinktinį Kovátralent1IST. ).Nustatyti junginiai buvo patvirtinti suleidus autentiškus standartus (1 papildoma byla: S2 lentelė). Kiekybiniam įvertinimui kaip išorinis standartas buvo įšvirkštas heptilacetatas (10 ng, 99,8 % cheminio grynumo, Aldrich).
Sintetinio kvapo mišinio, susidedančio iš bioaktyvių junginių, identifikuotų šviežiame ir pasenusiame šlapime, veiksmingumo įvertinimas pritraukiant šeimininką ieškančius ir kraują siurbiančius Ans.arabiensis, naudojant tą patį olfaktometrą ir protokolą, kaip ir aukščiau. Sintetiniai mišiniai imitavo junginių sudėtį ir proporcijas mišriuose viršutiniuose lakiuosiuose ekstraktuose 247 val., 247 val. 68 valandų senėjimo šlapimas (5D-G pav.; 1 papildoma byla: S2 lentelė). Analizei naudokite 10 μl 1:100 praskiedimo visiškai sintetinio mišinio, kurio bendras išsiskyrimo greitis svyruoja nuo maždaug 140–2400 ng h-1, kad įvertintumėte mišinio patrauklumą uodams ir kraujui. pašalinami pavienių viso mišinio junginių mišiniai. Ieškokite atsakymų iš šeimininko ir krauju maitinamo Ans. Arabų ir sintetinių bei atimtinių mišiniai buvo analizuojami naudojant nominalią logistinę regresiją, po to poromis lyginant nelyginius santykius (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Siekiant įvertinti, ar karvės šlapimas gali būti maliarinių uodų šeimininko buveinės signalas, šviežias ir pasenęs karvės šlapimas, surinktas, kaip aprašyta aukščiau, ir vanduo buvo sudėti į tinklinius 3 l kibirus (100 ml) ir sudėti į šeimininko masalo gaudykles.(BG-HDT versija; BioGents, Regensburg, DE). Dešimt spąstų, pastatytų 50 m atstumu vienas nuo kito ganyklose, 400 m nuo kaimo bendruomenės (Silay, Etiopija, 5°53´24´´ šiaurės platumos, 37°29´24´ rytų ilgumos) ir be galvijų, nuolatinėje veisimosi vietoje ir kaimuose. Palikta penkių spąstų, kol buvo apdorojami penki spąstai. Kaitinamas kas naktį iš viso penkias naktis. Skirtingo amžiaus šlapimu gaudytose spąstuose užfiksuotų uodų skaičius buvo lyginamas naudojant logistinę regresiją su beta binominiu pasiskirstymu (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Maliarijos užsikrėtusiame kaime netoli Maki miesto, Oromijos regione, Etiopijoje (8° 11′ 08″ šiaurės platumos, 38° 81′ 70″ rytų ilgumos; 6A pav.). Tyrimas buvo atliktas nuo rugpjūčio vidurio iki rugsėjo vidurio prieš kasmetinį likutinį lietaus purškimą patalpose, kartu su 5 mln. Tyrimui buvo atrinktas kaimo pakraštys (6A pav.). Namų atrankos kriterijai buvo šie: į namus neįleidžiami gyvūnai, draudžiama gaminti maistą patalpose (bent jau bandomuoju laikotarpiu), o namai, kuriuose gyvena ne daugiau kaip du gyventojai, miegantys insekticiduose.po gydytu tinkleliu nuo uodų.Etinį patvirtinimą suteikė Adis Abebos universiteto Gamtos mokslų fakulteto (CNS-IRB) Institucinė mokslinių tyrimų etikos peržiūros taryba (IRB/022/2016), vadovaudamasi Pasaulio medikų asociacijos Helsinkio deklaracijoje nustatytomis gairėmis.Kiekvieno namų ūkio vadovo sutikimas buvo gautas padedant vietinės administracijos sveikatos priežiūros specialistų lygiu. .Eksperimentinis projektas buvo sudarytas pagal 2 × 2 lotyniško kvadrato dizainą, pagal kurį sintetiniai mišiniai ir kontroliniai elementai buvo priskirti poriniams namams pirmą naktį, o kitą eksperimentinę naktį buvo sukeisti namai. Šis procesas buvo pakartotas dešimt kartų. Be to, siekiant įvertinti uodų aktyvumą pasirinktuose namuose, CDC spąstai buvo nustatyti taip, kad jie veiktų penkias naktis iš eilės lauko pradžioje, viduryje ir pabaigoje tuo pačiu metu.
Sintetinis mišinys, kuriame yra šeši biologiškai aktyvūs junginiai, buvo ištirpintas heptane (97,0 % tirpiklio GC klasė, Sigma Aldrich) ir išleidžiamas 140 ng h-1, naudojant medvilnės dagčio dozatorių [20]. Dagties dozatorius leido visiems junginiams išsiskirti pastoviomis proporcijomis per kitą 12 valandų eksperimentą. (CDC) šviesos spąstai (John W. Hock Company, Geinsvilis, FL, JAV; 6A pav.).Spąstai buvo pakabinti 0,8–1 m aukštyje virš žemės, šalia lovos kojos, o savanoris miegojo po neapdorotu tinkleliu nuo uodų ir veikė nuo 18:00 iki 06:30. 1] vėliau buvo tikrinami naudojant polimerazės grandininės reakcijos (PGR) analizę, siekiant nustatyti rūšis, morfologiškai identifikuotas kaip A. gambiae sl. Komplekso nariai [23]. Lauko tyrime porinių namų gaudymas spąstais buvo analizuojamas naudojant nominalų logistikos pritaikymo modelį, kur patrauklumas buvo priklausomas kintamasis, o gydymas (sintetinis mišinys, palyginti su J.0.0, buvo ®1 efektas (J.0.0).0. SAS Institute Inc.).Čia pateikiame χ2 ir p vertes iš tikimybės santykio testo.
Įvertinkite, ar jis yra saugus.arabiensis galėjo gauti šlapimo, pagrindinio savo azoto šaltinio, karbamido, tiesiogiai maitindamas per 48 valandas po vartojimo 4 dienas po (dpe) šeimininko paieškos ir krauju maitinamų patelių šėrimo tyrimų (1A pav.).Ir šeimininko ieškančios, ir kraują siurbiančios patelės įsisavino žymiai daugiau vandens nei bet kuri kita dieta (5,0 arba2). p < 0,0001 ir F(5,299) = 56,00, p < 0,0001; 1B, C pav. Be to, šeimininko ieškančios patelės po 72 valandų suvalgė mažiau šlapimo, palyginti su šlapimu po 168 valandų (1B pav.). mM, palyginti su visomis kitomis koncentracijomis ir vandeniu, nors ir nesiskiria nuo 10 % sacharozės (F(10 813) = 15,72, p < 0,0001; 1D pav. Tai priešingai nei krauju maitinamų patelių atsakas, kurios paprastai pasisavindavo žymiai daugiau karbamido turinčių pašarų nei vanduo, nei 10 % sacharozės, nors ir 10 % (5 %)1,5,5. p < 0,0001; 1 pav.).1E).Be to, lyginant dvi fiziologines būsenas, flebotomizuotos patelės mažiausiomis koncentracijomis pasisavino daugiau karbamido nei šeimininko ieškančios patelės, o esant didesnei koncentracijai šios patelės pasisavino panašų kiekį karbamido (F(1,953)= p 7010.8.0).Fig. 1F, G). Nors atrodė, kad suvartojamų iš karbamido turinčios dietos vertės buvo optimalios (1D, E pav.), abiejų fiziologinių būsenų patelės galėjo logaritmine tvarka modifikuoti absorbuoto karbamido kiekį visame karbamido koncentracijų diapazone (1F, G pav.).).Panašiai atrodo, kad uodai kontroliuoja savo azoto pasisavinimą reguliuodami absorbuoto šlapimo kiekį, nes azoto kiekis šlapime atsispindi absorbuotame kiekyje (1B, C ir B pav.).
Siekiant įvertinti šlapimo ir karbamido poveikį šeimininko ieškančių ir kraują siurbiančių uodų išgyvenamumui, patelės buvo šeriamos visų keturių amžių šlapimu (šviežiu, 24 val., 72 val. ir 168 val. po nusodinimo) ir įvairiomis karbamido koncentracijomis, taip pat distiliuoto vandens ir 10 % bendros sacharozės analizės (ši dieta turėjo reikšmingą kontrolinį poveikį2). patelių, ieškančių šeimininko, išgyvenamumas (šlapimas: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; karbamidas: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; 2B pav., C) ir krauju maitintų patelių (šlapimas:9fχ2 = 0,0,0,0,0. karbamidas: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; 2D, E pav. Visuose eksperimentuose patelių, šeriamų šlapimu, karbamidu ir vandeniu, išgyvenamumas buvo žymiai mažesnis, palyginti su patelėmis, kurios šeriamos sacharozės dieta (2B-E pav.). d 72 val. pasenęs šlapimas (p = 0,016), turintis mažiausią išgyvenimo tikimybę (2B pav.). Be to, šeimininko ieškančios patelės, šeriamos 135 mM karbamidu, išgyveno ilgiau nei vandens kontrolinės grupės (p < 0,04) (2 pav.).2C).Palyginti su vandeniu, moterys, maitinamos šviežiu šlapimu ir 24 valandų šlapimu, išgyveno ilgiau (atitinkamai p = 0,001 ir p = 0,012; 2D pav.), o moterys, šeriamos 72 valandų šlapimu, išgyveno ilgiau nei moterys, šeriamos trumpu šviežiu šlapimu ir 24 val. 2D).Šeriamos 135 mM karbamido, krauju maitinamos patelės išgyveno ilgiau nei visos kitos karbamido ir vandens koncentracijos (p < 0,013; 2E pav.).
Šeimininko ir kraują siurbiančios Anopheles arabinis patelės, maitinančios karvės šlapimu ir šlapalu, išgyvenimas.Biologiniame tyrime (A) uodų patelėms buvo suteiktas pašaras, kurį sudarė šviežias ir pasenusios karvės šlapimas, įvairios koncentracijos karbamidas, sacharozė (10%) ir distiliuotas vanduo (H2O). 2 valandos, kol visos patelės, šeriamos šlapimu (B, D) ir karbamidu (C, E), ir kontrolinės, sacharozės ir vandens, mirs.
Bendras atstumas ir raundų skaičius, nustatytas atliekant skrydžio malūno testą per 24 valandų laikotarpį, skyrėsi tarp šeimininko ieškančių ir kraują siurbiančių uodų, kurių bendras skrydžio aktyvumas buvo mažesnis (3 pav.). Šeimininkų ieškantys uodai, kurie tiekdavo šviežią ir seną šlapimą arba sacharozę ir vandenį, rodė skirtingus skrydžio modelius (3 pav.). 168 valandų amžiaus Uodai, kurie maitinosi šlapimu, pasižymėjo skirtingais skrydžio būdais ir daugiausia buvo per parą. Mošalų patelės, tiekiančios sacharozę arba 72 valandas šlapimą, rodė aktyvumą visą 24 valandų laikotarpį, o patelės, tiekiančios vandenį, buvo aktyvesnės laikotarpio viduryje. 72 valandų amžiaus šlapimo aktyvumas nuolat mažėjo per 24 valandas (3 pav.).
Medžiotojų ieškančios kraują siurbiančios patelės Anopheles arabinis, mintančios karvės šlapimu ir šlapalu, skrydžio rezultatai. Skrydžio malūno teste uodų patelės šėrė šviežiu ir pasenusiu karvių šlapimu, įvairios koncentracijos karbamidu, sacharoze (10%) ir distiliuotu vandeniu (H2O) buvo pririštos prie horizontalių (laisvai besisukančių) šeimininkų. ) moterų, buvo užregistruotas bendras atstumas ir skrydžių skaičius per valandą pagal kiekvieną dietą per 24 valandų laikotarpį (tamsiai: pilka; šviesiai: balta).Vidutinis atstumas ir vidutinis kovų skaičius rodomas cirkadinio aktyvumo grafiko dešinėje.Klaidų juostos rodo standartinę vidurkio paklaidą.Statistinę analizę žr.
Apskritai, bendras šeimininkų ieškančių moterų skrydžio aktyvumas buvo panašus į skrydžio atstumą per 24 valandas. Vidutinį skrydžio atstumą reikšmingai paveikė suvartota dieta (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), o šeimininko ieškančios patelės nurijo 72 valandas šlapimo, palyginti su visomis kitomis dietomis (<0,0 ir daugiau nuskrido). uodai skraidė ilgiau nei švieži (p = 0,022) ir 24 val. amžiaus šlapimu (p = 0,022) šeriami uodai. Priešingai nei skrydžio aktyvumo modelis, aprašytas šlapimo dietoje, karbamido maitinamos šeimininko ieškančios patelės rodė nuolatinį skrydžio aktyvumą per 24 valandų antrąją fazę (24 val. ieškančios patelės, šeriamos karbamidu, reikšmingai padidino vidutinį skrydžio atstumą, priklausomai nuo sugertos koncentracijos (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Šeimininko ieškančios patelės, šeriamos bet kokia karbamido koncentracija, skraidė ilgiau nei patelės, šeriamos vandeniu arba sacharoze (p < 0,03).
Bendras kraują siurbiančių uodų skrydžio aktyvumas buvo stabilus ir išliko 24 valandas laikantis visų dietų, o antroje tamsiojo periodo pusėje šlapimo aktyvumas padidėjo tiek patelių, tiek šviežių ir 24 valandų amžiaus (3 paveikslas). dieta nebuvo (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .su kitu šlapimu ir kontroline dieta (šviežia, p = 0,0091; 72 val., p = 0,0022; 168 val., p = 0,001; sacharozė, p = 0,001 ., p = 0,001 ., 6 = dH2O;).
Šlapimo ir šlapalo įtaka reprodukcijos parametrams buvo vertinama atliekant kiaušinių dėjimo biologinius tyrimus (4A pav.) ir buvo tiriama pagal kiekvienos patelės padėtų kiaušinėlių skaičių, kiaušinių dydį ir naujai išsiritusias pirmos stadijos lervas. Padėtų kiaušinėlių skaičius.Šlapimu maitinamos arabų patelės skyrėsi pagal dietą (F(5,42,30) = F(5,42,30)) ).Patelės, šeriamos 24 valandas šlapimu, kraujo miltais, padėjo žymiai daugiau kiaušinėlių nei patelės, šeriamos kitais šlapimu pašarais, ir buvo panašios į tas, kurios buvo šeriamos sacharoze (4B pav.). Taip pat šlapimu šertų patelių kiaušinėlių dydis svyravo priklausomai nuo dietos (F(5, 209) = 12,85, su.20ed-4hourseurseurse 109). deda daug didesnius kiaušinėlius nei patelės, maitinamos vandeniu, o patelių, šeriamų 168 val. šlapimu, kiaušinėliai buvo žymiai mažesni (4C pav.). Be to, šlapimo mityba reikšmingai paveikė lervos dydį (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), o iš 7-24 kiaušinėlių išdygsta žymiai didesnės lervos ir 2-24 kiaušinėliai. nei iš kiaušinėlių, padėtų iš kiaušinėlių lervų.Vandens maitinamos ir 168 val. šlapimu maitinamos patelės (4D pav.).
Anopheles arabinis patelės, maitinančios karvių šlapimu ir šlapalu, reprodukcinė veikla. Krauju maitinamos uodų patelės buvo šeriamos šviežiu ir pasenusių karvių šlapimu, įvairios koncentracijos karbamidu, sacharoze (10 %) ir distiliuotu vandeniu (H2O), 48 valandas prieš dedant į kiaušinių dėjimą (AB dydis, kiaušinių skaičius 8 val., kiaušinių skaičius AB ir substratai). , F) ir lervų dydį (D, G) reikšmingai paveikė pateikta dieta (karvės šlapimas: BD; karbamidas: EG). Kiekvieno parametro, išmatuoto naudojant skirtingus raidžių pavadinimus, vidurkis labai skyrėsi (vienpusė ANOVA naudojant Tukey post hoc analizę; p < 0,05). Klaidų juostos rodo standartinę vidurkio paklaidą.
Karbamidas, kaip pagrindinis azotinis šlapimo komponentas, tiekiamas kaip pašaras krauju maitinamoms patelėms, visuose tyrimuose reikšmingai paveikė reprodukcinius parametrus. Kiaušinių skaičius, kurį patelės šeriamos karbamidu, pavalgius krauju, priklausomai nuo karbamido koncentracijos (F(11, 360) = 4,69; p < 0,000.0.00.1 µs m3 1M3 urea). M padėjo daugiau kiaušinėlių (4E pav.). Patelės, šeriamos 134 µM ar didesne karbamido koncentracija, deda didesnius kiaušinėlius nei patelės, šeriamos vandeniu (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; 4F pav.), lervos dydis, nors ir paveiktas panašios karbamido koncentracijos (F(1.0.0) motinose <3,0.0) 001) buvo kintamesnis (4G pav.).
Bendras patrauklumas šeimininko ieškantiems galvijų šlapimo viršutinės dalies lakiųjų ekstraktų ekstraktams. Stiklinio vamzdelio olfaktometru (5A pav.) įvertintą arabiensį reikšmingai paveikė šlapimo amžius (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; 5B pav.). visi kiti gydymo būdai (72 val.: p = 0,0060, 168 val.: p = 0,012, pentanas: p = 0,00070), Išskyrus šviežio šlapimo kvapą (p = 0,13; 5B pav.). Nors bendras kraują siurbiančių uodų potraukis prie šlapimo nesiskyrė reikšmingai, p7 =8, p.7 =8 d. 067; 5C pav.), buvo nustatyta, kad šios patelės yra žymiai patrauklesnės viršutinės erdvės lakiųjų ekstraktų atžvilgiu, palyginti su 72 valandų senėjimo šlapimu, palyginti su kontroline grupe (p = 0,0066; 5C pav.).
Elgesio atsakai į natūralų ir sintetinį karvių šlapimo kvapą ieškant šeimininko ir krauju šeriamų Anopheles arabianus.Stiklinio vamzdelio olfaktometro schema (A).Laiųjų ekstraktų iš šviežios ir pasenusios karvės šlapimo pritraukimas prie šeimininko (B) ir kraują siurbiančių (C) ekstraktų, išskirtų nuo uodų2 ir uodų. Rodomas valandų (E), 72 valandų (F) ir 168 valandų (G) senėjimo karvės šlapimas. Elektroninės antenos aptikimo (EAD) pėdsakai rodo įtampos pokyčius, reaguojant į bioaktyvius junginius viršutinėje erdvėje, išplautoje iš dujų chromatografo ir aptiktą liepsnos jonizacijos detektoriumi (FID). Skalės juosta rodo atleidimo greitį ir amplitudės greitį. Parodytas g h-1) biologiškai aktyvių junginių.Viena žvaigždutė (*) rodo nuoseklų mažos amplitudės atsaką.Dvigubos žvaigždutės (**) rodo neatkuriamą atsaką.Rasti šeimininką (H) ir kraują siurbiantįjį (I) An.arabiensis turi skirtingą patrauklumą sintetiniams šviežių ir pasenusių uodų mišiniams. kita (vienpusė ANOVA naudojant Tukey post hoc analizę;p < 0,05). Klaidų juostos rodo standartinę skalės paklaidą
Patelė Ann.arabiensis, praėjus 72 val. ir 120 val. po kraujo miltų, neršto metu pirmenybė nebuvo teikiama lakiesiems ekstraktams iš šviežių ir senų karvių šlapimo, palyginti su pentano kontrole (χ2 = 3,07, p > 0,05; 1 papildoma byla: S1 pav.).
Moterų Ann.arabiensis GC-EAD ir GC-MS analizės metu buvo nustatyti aštuoni, šeši, trys ir trys biologiškai aktyvūs junginiai (5D-G pav.) Nors buvo pastebėti elektrofiziologinį atsaką sukėlusių junginių skaičiaus skirtumai, dauguma šių junginių buvo kiekvienos viršutinės dalies lakiajame fiziologiniame ekstrakte, surinktame iš šviežio ir pasenusio šlapimo. sulaikymas buvo įtraukti į tolesnę analizę.
Bendras lakiųjų bioaktyvių junginių išsiskyrimo greitis viršutinės erdvės kolekcijoje padidėjo nuo 29 µg h-1 šviežiame šlapime iki 242 µg h-1 168 valandų senėjimo šlapime, daugiausia dėl p-krezolio ir m-formaldehido Padidėja fenolis, taip pat fenolis. šlapimo amžius, kuris koreliavo su pastebėtu signalo intensyvumo (gausumo) sumažėjimu chromatogramoje (5D pav.) – G kairėje pusėje) ir fiziologinėmis reakcijomis į šiuos junginius (5D pav. – G dešinysis skydelis).
Apskritai, sintetinis mišinys turėjo panašų natūralų biologiškai aktyvių junginių santykį, identifikuotą lakiuosiuose šviežio ir pasenusio šlapimo ertmių ekstraktuose (5D–G pav.) ir, atrodo, nesukėlė didelio patrauklumo ieškant šeimininko (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; 5H pav. 4, p = 0,30; 5I pav.. Tačiau post hoc porų palyginimas tarp gydymo būdų parodė, kad šeimininko ieškantys uodai buvo labai patrauklūs sintetiniam 24 val. senėjimo šlapimo mišiniui, palyginti su pentano kontroliniais mėginiais (p = 0,0086; 5H pav.).
Norint įvertinti atskirų komponentų vaidmenį sintetiniuose 24 val. senėjimo šlapimo mišiniuose, Y mėgintuvėlyje buvo įvertinti šeši atimantys mišiniai, palyginti su visais mišiniais, kurių metu buvo pašalinti atskiri junginiai. Šeimininkų ieškantiems uodams atskirų junginių atėmimas iš viso mišinio turėjo reikšmingos įtakos elgsenos atsakams (χ2, = 19,06,1 df.63 pav.) 2A), visi atimantys mišiniai buvo patrauklesni nei Mažesni nei visiškai sumaišyti. Priešingai, atskirų junginių pašalinimas iš visiškai sintetinio mišinio neturėjo įtakos kraują siurbiančių uodų elgsenai (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), išskyrus dekanalą, dėl kurio buvo mažesnis mišinio traukos lygis 0, palyginti su 2 pav. B (2 pav.).
Maliarijos endeminiame kaime Etiopijoje 10 naktų buvo vertinamas sintetinio 24 valandų karvių šlapimo mišinio veiksmingumas priviliojant uodus lauko sąlygomis (6A pav.). Iš viso buvo sugautas ir identifikuotas 4861 uodas, iš kurių 45,7 % buvo Anthropuss.gambislèslèslèslèsslès18 Antropus. 35,4% buvo Culex spp.(1 papildoma byla: S1 lentelė).Anopheles arabinis yra vienintelis An.Gambian rūšių komplekso narys, nustatytas atliekant PGR analizę. Vidutiniškai per naktį buvo sugauta 320 uodų, per tą laiką gaudyklės su sintetinio mišinio masalais sugaudavo daugiau uodų nei suporuotos gaudyklės be mišinio 06,0,0 01) .Spąstai be masalo buvo statomi kiekvieną iš penkių kontrolinių naktų bandymo pradžioje, viduryje ir pabaigoje. Panašus uodų skaičius buvo sugautas kiekvienoje spąstų poroje, o tai rodo, kad tarp namų nėra šališkumo (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p> uodų skaičius sumažėjo per tyrimo laikotarpį, p > 0. spąstuose, kuriuose yra sintetinio mišinio, žymiai padidėjo: šeimininko ieškojimas (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), neseniai maitintas krauju (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) ir nėštumas (χ2(0, 228) .1 = 60.7; p = 60.01 papildoma byla: S1 lentelė). Tai taip pat atsispindi bendrame sugautų uodų skaičiuje: ieško šeimininko > kraujasiurbiai > nėščia > pusiau nėščia > patinai.
24 valandų sintetinio karvių šlapimo kvapo mišinio veiksmingumo įvertinimas lauke. Lauko bandymai buvo atlikti Etiopijos pietuose (žemėlapis), netoli Maki miesto (įterpti), naudojant Ligų kontrolės centrų (CDC) šviesos gaudykles (dešinėje) poriniuose namuose, su lotyniškomis patelės vaizdų fiksavimu ir vaizdų fiksavimu. opheles arabesques (B), bet ne Anopheles farroes (C), kitu būdu, nuo fiziologinės būsenos priklausomas poveikis. Be to, šie spąstai užfiksavo žymiai didesnį Culex uodų šeimininkų skaičių.(D) Palyginti su kontrole. Kairėje esančios juostos rodo vidutinį uodų, sugautų poromis kvapiųjų medžiagų) ir bait (dešinėje)0 uodų atrankos indeksą. atspindi vidutinį atrankos indeksą kontrolinių gaudyklių poromis (atvira; N = 5).).Žvaigždutės nurodo statistinio reikšmingumo lygius (*p = 0,01 ir ***p < 0,0001)
Šios trys rūšys buvo gaudomos skirtingai spąstuose, kuriuose yra sintetinių mišinių. Ieškau šeimininko (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), maitinimą krauju (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) ir nėštumo (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) ir nėštumo (χ2(1, 517) sis buvo įstrigę spąstuose, išskirdami sintetinį mišinį (6B pav.), o An kiekis nesiskyrė. Nustatytas skirtingų fiziologinių būsenų faroensis (6C pav.).Culex atveju buvo nustatytas tik ženkliai padaugėjęs uodų, ieškančių šeimininkų, spąstuose, priviliotuose sintetiniu mišiniu, 6D pav.), palyginti su kontroliniais spąstais.
Kad būtų galima įvertinti, ar maliarijos uodai naudoja karvių šlapimo kvapą kaip šeimininko buveinės signalą, buvo naudojami jauko spąstai, esantys už galimų šeimininkų, tarp veisimosi vietų ir kaimo bendruomenių Etiopijoje. Nesant šeimininko užuominų, karščio ir su karvių šlapimo kvapu ar be jo, uodai nebuvo užfiksuoti (papildoma 3 pav. maliarijos uodų patelės buvo pritrauktos ir sugautos, nors ir nedideliais kiekiais, nepriklausomai nuo šlapimo amžiaus (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; 1 papildoma byla: S3 pav. Priešingai, vandens kontrolė neužfiksavo maliarijos uodų esant aukštai temperatūrai (1 papildomas failas: S3 pav.).
Maliariniai uodai įgyja ir platina azoto turinčius junginius kompensuodami šėrimąsi karvių šlapimu (ty balais), kad pagerintų gyvybės istorijos ypatybes, panašiai kaip ir kiti vabzdžiai [2, 4, 24, 25, 26]. Karvių šlapimas yra lengvai prieinamas atsinaujinantis išteklius kaimo vietovėms, glaudžiai susijusioms su maliarijos pernešėjais ir pernešėjais. s ir neršto vietas. Uodų patelės aptinka šį išteklį pagal kvapą ir gali reguliuoti azoto junginių, įskaitant karbamidą, pagrindinį azoto komponentą šlapime, pasisavinimą [15, 16]. Priklausomai nuo patelės patelės fiziologinės būklės, maistinės medžiagos, esančios uoduose, skatina visų skrydžio ir uodų išgyvenamumą šlapime. krauju maitinamų individų išgyvenamumo ir dauginimosi charakteristikos per pirmąjį gonadotropinį ciklą. Todėl šlapimo maišymasis atlieka svarbų mitybos vaidmenį maliarijos pernešėjams, kurie yra užsidarę kaip prastai maitinasi suaugusieji [8], nes tai suteikia uodų patelėms galimybę įgyti svarbių azoto junginių, užsiimdamos mažos rizikos epidemiologiniu aktyvumu, tikėtinu reproduktyvumu ir reikšmingu maitinimu. iš kurių turi įtakos vektoriaus pajėgumui.Be to, toks elgesys gali būti būsimų vektorių valdymo programų taikinys.