„Javascript“ šiuo metu jūsų naršyklėje išjungtas. Kai kurios šios svetainės funkcijos neveiks, kai „Javascript“ išjungtas.
Užsiregistruokite, nurodydami konkrečią informaciją ir konkretų dominantį vaistą, ir mes suderinsime jūsų pateiktą informaciją su straipsniais mūsų didelėje duomenų bazėje ir nedelsdami atsiųsime jums el. paštu PDF kopiją.
Naudoja: Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1, 2 Silvia Rita Vitale, 1, 2 Federica Martorana, 1, 2 Michele Massimino, 1, 2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7, Catellalin Medicinos ir Catelalin universiteto 1, 7 Livia1 Manz. , 95123, Italija;2 Eksperimentinės onkologijos ir hematologijos centras, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italija;3 Medicinos onkologija, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco“, Katanija, 95123, Italija;4 Medicininė genetika, ARNAS Garibaldi, Katanija, 95123, Italija;5 Medicine Genetics, ASP, Sirakūzai, 96100, Italija;6 Katanijos universiteto Biomedicinos ir biotechnologijos mokslų katedra, Medicininė genetika, Katanija, Italija, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italija Ryšiai: Stefania Stella, tel. +39 095 378 1946, el. paštas [apsaugotas el. paštas];[apsaugotas el. paštu] Tikslas: BRCA1 ir BRCA2 gemalo linijos mutacijos ir nustatytas krūties vėžys (BC), kiaušidžių (OC) ir kiti dalykai, susiję su vėžio rizika visą gyvenimą. BRCA geno tyrimas yra labai svarbus vertinant individualią riziką, taip pat ieškant prevencijos metodų sveikiems nešiotojams ir pritaikant gydymą vėžiu sergantiems pacientams. BRCABR paplitimas įvairiuose regionuose ir įvairiuose BRCABR paplitimas yra įvairus. patogeninių variantų siciliečių šeimose, tyrimų, specialiai skirtų Rytų Sicilijos populiacijoms, trūksta. Mūsų tyrimo tikslas buvo ištirti BRCA patogeninių gemalo linijų pakitimų dažnumą ir pasiskirstymą BC pacientų grupėje iš Rytų Sicilijos ir įvertinti jų ryšį su specifiniais BC požymiais, naudojant naujos kartos navikų seką (daugiau nei 50 laipsnio RES proliferacija). %) turėjo BRCA patogeninį variantą, 17 (49 %) BRCA1 ir 18 (51 %) BRCA2. BRCA1 pakitimai vyrauja trigubai neigiamiems BC pacientams, tuo tarpu BRCA2 mutacijos dažniau pasitaiko luminaliniams BC pacientams. Palyginti su nenešiojančiais, tiriamieji, kuriems buvo nustatytas reikšmingai aukštesnio BRCA1 laipsnio naviko proliferacijos variantai. BC pacientų iš Rytų Sicilijos nacionalinę būklę ir patvirtina NGS analizės vaidmenį nustatant pacientus, sergančius paveldimu BC. Apskritai šie duomenys atitinka ankstesnius įrodymus, patvirtinančius BRCA atranką, siekiant tinkamos vėžio prevencijos ir gydymo mutacijų nešiotojams.
Krūties vėžys (BC) yra labiausiai paplitęs piktybinis navikas visame pasaulyje ir mirtiniausias moterų vėžys.1 Biologiniai požymiai, lemiantys BC prognozę ir klinikinį elgesį, laikui bėgant buvo plačiai ištirti ir iš dalies išaiškinti. Tiesą sakant, šiuo metu naudojami keli pakaitiniai žymenys, skirti BC klasifikuoti į skirtingus molekulinius potipius. Jie yra estrogeno (ER) ir (arba) proliferacijos indekso receptorių 2 receptorių (PHER) receptorių augimas (PHER). -67 ir naviko laipsnis (G).2 Šių kintamųjų derinys identifikavo šias BC kategorijas: 1) Luminal navikai, turintys ER ir (arba) PgR ekspresiją, sudarė 75% BC. Šie navikai dar buvo suskirstyti į Luminal A, kai Ki-67 buvo mažesnis nei 20%, o HER2 neigiamas, o Luminal B buvo lygus 0, kai Ki-6 amplitudė buvo didesnė nei 7. proliferacijos indeksas;2) HER2+ navikai, kurie yra ER ir PgR neigiami, bet rodo HER2 amplifikaciją. Ši grupė sudaro 10% visų krūties navikų;3) Trigubai neigiamas krūties vėžys (TNBC), kuris nerodo ER ir PgR ekspresijos bei HER2 amplifikacijos, sudaro apie 15 % krūties vėžio atvejų.2-4
Tarp šių BC potipių naviko laipsnis ir proliferacijos indeksas yra skerspjūvio biomarkeriai, kurie yra tiesiogiai ir nepriklausomai susiję su naviko agresyvumu ir prognoze.5,6
Be minėtų biologinių ypatybių, per pastaruosius kelerius metus vis svarbesnis tapo paveldimų genetinių pakitimų, lemiančių BC vystymąsi.7 Maždaug 1 iš 10 krūties navikų yra paveldimas dėl specifinių genų gemalo linijos pakitimų.8 Atlikus du didelius epidemiologinius tyrimus, kuriuose dalyvavo daugiau nei 180 000 aštuonių moterų genų, TM2BR neseniai buvo nustatyta BCAARD grupė, TM1BR. CHK2, PALB2, RAD51C ir RAD51D), pirmiausia atsakingi už paveldimą BC. Tarp šių genų BRCA1 ir BRCA2 (toliau – BRCA1/2) parodė stipriausią koreliaciją su krūties navikų išsivystymu. kasos, gaubtinės ir tiesiosios žarnos ir melanomos. Nuo 13 iki 80 metų moterų, sergančių BRCA1 patogeniniu variantu (PV), kumuliacinis BC dažnis yra 72%, o moterims, turinčioms BRCA2 PV, - 69%.14
Pažymėtina, kad neseniai paskelbtoje publikacijoje teigiama, kad BC rizika priklauso nuo PV tipo. Iš tikrųjų, lyginant su patogeniniais sutrumpinimo variantais, akivaizdūs missense variantai, ypač BRCA1 geno, yra susiję su sumažėjusia BC rizika, ypač vyresnio amžiaus moterims.15
BRCA1 arba BRCA2 PV buvimas buvo susijęs su skirtingais biologiniais ir klinikopatologiniais požymiais.16,17 Su BRCA1 susiję BC yra kliniškai agresyvūs, menkai diferencijuoti ir labai daug proliferuojantys. Šie navikai dažniausiai yra trigubai neigiami ir pasireiškia ankstyvame pacientų amžiuje. Navikai, atsirandantys esant BRCA2-diferencijuotiems ir įvairaus laipsnio proliferacijai ir kitokiam ces.Šie navikai dažniau pasitaiko B spindyje ir dažniausiai atsiranda vyresnio amžiaus žmonėms.16–18 Pažymėtina, kad BRCA1 ir BRCA2 mutacijos padidina jautrumą specifiniam gydymui, įskaitant platinos druskas ir tikslinius vaistus, tokius kaip poli(ADP-ribozės) polimerazės inhibitoriai (PARPi).19,20
Per pastaruosius kelerius metus naujos kartos sekos (NGS) įdiegimas klinikinėje praktikoje leido vis didesniam BC pacientų skaičiui atlikti molekulinius vėžio jautrumo sindromų, įskaitant BRCA1/2.21, tyrimus. Tuo pačiu metu apibrėžimai, pagrįsti tiksliais šeimos istorijos, demografinių ir klinikinių patologinių požymių kriterijais, yra verti geriau identifikuoti asmeninius asmenis1cc/2. apibendrinant BRCA1/2 patikrą konkrečiose populiacijose, išryškinant skirtumus tarp geografinių regionų.24–27 Nors yra pranešimų apie BC kohortą Vakarų Sicilijoje, yra mažiau duomenų apie BRCA1/2 patikrą Rytų Sicilijos populiacijoje.28,29
Čia aprašome gemalo linijos BRCA1 / 2 atrankos rezultatus BC pacientams iš Rytų Sicilijos, toliau koreliuodami BRCA1 arba BRCA2 mutacijų buvimą su pagrindiniais šių navikų klinikiniais patologiniais požymiais.
Retrospektyvus tyrimas buvo atliktas Policlinico ligoninės „Eksperimentinės onkologijos ir hematologijos centre“. Rodolico – San Marco, Katanija. Nuo 2017 m. sausio mėn. iki 2021 m. kovo mėn. iš viso 455 pacientės, sergančios krūties ir kiaušidžių, melanoma, kasos ar prostatos vėžiu, buvo nukreiptos į mūsų genetinį diagnostinį CA/2 tyrimą. Helsinkio paaiškinimas, o visi dalyviai prieš molekulinę analizę pateikė raštišką sutikimą.
Histologinės ir biologinės BC charakteristikos (ER, PgR, HER2 statusas, Ki-67 ir laipsnis) buvo įvertintos atliekant pagrindinę biopsiją arba chirurginius mėginius, atsižvelgiant tik į agresyvius naviko komponentus. Remiantis šiomis charakteristikomis, BC buvo klasifikuojami taip: luminalinis A (ER+ ir (arba) PgR+, HER2-, B-, B-+ ER,7 arba HER20%). Ki-67≥20%), luminalinis B-HER2+ (ER ir/arba PgR+, HER2+), HER2+ (ER ir PgR-, HER2+) arba trigubas neigiamas (ER ir PgR-, HER2-).
Prieš vertindama BRCA1 ir BRCA2 mutacijų būseną, daugiadalykė komanda, kurioje dalyvavo onkologas, genetikas ir psichologas, kiekvienam pacientui atliko naviko genetikos konsultaciją, kad nustatytų BRCA1 ir (arba) BRCA1 buvimą.arba asmenys, turintys didelę PV riziką BRCA2 gene.Pacientų atranka buvo atlikta pagal Italijos medicinos onkologijos draugijos (AIOM) rekomendacijas ir vietines Sicilijos rekomendacijas.30,31 Šie kriterijai apima: (i) šeimos istoriją apie žinomus patogeninius jautrumo genų variantus (pvz., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);ii) patinai su BC;iii) su BC ir OC;(iv) moterys, kurių BC <36 metų, TNBC <60 metų arba dvišalis BC <50 metų;(v) asmeninė ligos istorija, kai iki mūsų eros yra < 50 metų, ir bent vienas pirmos eilės giminaitis: a) prieš Kristų < 50 metų;b) bet kokio amžiaus ne gleivinės ir ne pasienio OC;c) dvišalis BC;d) vyras BC;e) kasos vėžys;f) prostatos vėžys;(vi) dviejų ar daugiau asmens BC > 50 metų istorija ir BC, OC arba kasos vėžio šeimos istorija giminaičiams, kurie yra vienas kito pirmos eilės giminaičiai (įskaitant giminaičius, su kuriais ji yra pirmos eilės giminaičiai);(vii) Asmeninė OC ir bent vieno pirmojo laipsnio giminaičio istorija: a) prieš Kristų < 50 metų;b) NOC;c) dvišalis BC;d) vyras BC;vii) patelė su didelio laipsnio serozine OC.
Iš kiekvieno paciento buvo paimtas 20 ml periferinio kraujo mėginys ir surinktas į EDTA mėgintuvėlius (BD Biosciences). Genominė DNR buvo išskirta iš 0,7 ml viso kraujo mėginių, naudojant QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italija) pagal gamintojo instrukcijas ir perleista per Qubitlumo®, SWaltmeter (The0ificermo®, Waltmeter). Atlikite kiekybinį įvertinimą.Tikslinį sodrinimą ir bibliotekos paruošimą atlieka Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, paruoštas įkelti į „Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8“ rinkinį, skirtą automatizuotai paruošti biblioteką pagal gamintojo instrukcijas. Rinkinį sudaro du multipleksiniai PGR pradmenų telkiniai, kuriuos galima naudoti tiriant visus BRCA1 (NM_0.00)N3BRCA1 (NM_0.00)5M. s. Trumpai tariant, 15 µL kiekvieno praskiesto mėginio DNR (10 ng) buvo įpilta į brūkšniniu kodu pažymėtas plokšteles bibliotekai paruošti, o visi reagentai ir eksploatacinės medžiagos buvo įdėtos į Ion Chef™ prietaisą. Tada automatizuotas bibliotekos paruošimas ir brūkšninio kodo mėginių bibliotekos sujungimas buvo atliktas naudojant Ion Schef™ prietaisą. Tada paruoštų bibliotekų skaičius buvo įvertintas naudojant Fluorometro arba Qubito bibliotekų skaičių. Waltham, MA, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Galiausiai bibliotekos sujungiamos ekvimoliniais santykiais Ion Chef™ bibliotekos mėginių mėgintuvėliuose (brūkšniniu kodu) ir įkeliami į Ion Chef™ instrumentą. Sekvenavimas atliktas naudojant Ion Torrent S5 (Thermo Scientific Scientific) instrumentą (Thermo FisherDaponific (Thermo FisherDarmo)1 analizę naudojant Ion Chef™ Fisher Scientific5. „Amplicon Suite“ („SmartSeq srl“) ir „Ion Reporter“ programinė įranga.
Visa variantų nomenklatūra atitiko dabartines Žmogaus genomo variacijų konsorciumo gaires, prieinamas internete (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 variantų klinikinė reikšmė buvo apibrėžta naudojant Tarptautinio konsorciumo ENIGMA (įrodymais pagrįstas tinklas, skirtas interpretuoti germlines, kaip skirtingų gemalų linijos mutantų duomenų bazės, httpsAR ConsortiumingUPig.orgma. , BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD ir UMD. Klasifikaciją sudaro penkios skirtingos rizikos kategorijos: gerybinis (I kategorija), tikėtinas gerybinis (II kategorija), neaiškios reikšmės variantas (VUS, III kategorija), tikėtinas patogeniškas (IV kategorija) ir patogeninis (baltymų struktūros 3 įrankis, prieiga prie 0 duomenų bazės ir V kategorija taip pat analizuojamas mutacinis poveikis). .32
Norint priskirti galimą klinikinę reikšmę kiekvienam VUS, buvo naudojami šie skaičiavimo baltymų numatymo algoritmai: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2://) ir AVGv.agh.g. d_input.php).Variantai, priskirti 1 ir 2 klasėms, buvo laikomi laukiniais.
Sangerio sekos nustatymas patvirtino kiekvieno patogeninio varianto buvimą. Trumpai tariant, kiekvienam aptiktam variantui buvo sukurta specifinių pradmenų pora, naudojant BRCA1 ir BRCA2 genų etalonines sekas (NG_005905.2, NM_007294.3 ir NG_012772.3, NM_00772.3, po to buvo atlikta Sanger seka, po to CR, 000059). .
Pacientai, kurių BRCA1/2 geno testas buvo neigiamas, buvo tiriami taikant multipleksinį nuo ligavimo priklausomą zondo amplifikaciją (MLPA) pagal gamintojo instrukcijas, siekiant įvertinti didelių genomo pertvarkymų (LGR) buvimą. Trumpai tariant, DNR mėginiai yra denatūruojami ir naudojama iki 60 BRCA1 ir BRCA2 genų specifinių produktų. , sudarytas iš unikalaus PGR amplikonų rinkinio, tada buvo analizuojamas kapiliarine elektroforeze ir Cofalyser.Net programine įranga kartu su atitinkamomis partijos Cofalyser lentelėmis (www.mrcholland.com).
Atrinkti klinikopatologiniai kintamieji (histologinis laipsnis ir Ki-67 % proliferacijos indeksas) buvo susiję su BRCA1/2 PV buvimu, apskaičiuoti naudojant Prism v. 8.4 programinę įrangą, naudojant Fišerio tikslų testą, darant prielaidą, kad p reikšmė <0,05 yra reikšminga.
Nuo 2017 m. sausio mėn. iki 2021 m. kovo mėn. 455 pacientai buvo patikrinti dėl gemalo linijos BRCA1/2 mutacijų. Mutacijų tyrimas buvo atliktas Policlinico ligoninės Eksperimentinės onkologijos ir hematologijos centre. Remiantis Sicilijos gairėmis (http://www.gurs.regione.1ndiceperm,2enerm,2enerm.2.0.0. o 2020 m.), Katanijos Rodolikas – San Markas“ iš viso, 389 pacientai. Buvo krūties vėžys, 37 kiaušidžių vėžys, 16 kasos vėžys, 8 prostatos vėžys ir 5 melanoma.Pacientų pasiskirstymas pagal vėžio tipą ir analizės rezultatus parodytas 1 pav.
1 paveiksle parodyta tyrimo apžvalga. Pacientams, sergantiems krūties, melanomos, kasos, prostatos ar kiaušidžių navikais, buvo tiriamos BRCA1 ir BRCA2 genų mutacijos.
Santrumpos: PV, patogeninis variantas;VUS, neaiškios reikšmės variantas;WT, laukinio tipo BRCA1/2 seka.
Savo tyrimus selektyviai sutelkėme į krūties vėžio kohortas. Pacientų amžiaus mediana buvo 49 metai (23–89 m.) ir daugiausia buvo moterys (n=376 arba 97 %).
Iš šių tiriamųjų 64 (17 %) turėjo BRCA1/2 mutacijas ir visos buvo moterys. Trisdešimt penkiems (9 %) buvo PV, o 29 (7,5 %) VUS. Septyniolika (48,6 %) iš 35 patogeninių variantų pasireiškė BRCA1, o 18 (51,4 %) – BRCA2, o 18 (51,4 %) – BRCA2, o 18 (51,4 %) – BRCA2, o 18 (51,4 %) – . BRCA2 (1 ir 2 pav.). MLPA analizėje LGR nebuvo.
2 pav. 389 krūties vėžiu sergančių pacientų BRCA1 ir BRCA2 mutacijų analizė.(A) Patogeninių variantų (PV) (raudona), neaiškios reikšmės variantų (VUS) (oranžinė) ir WT (mėlyna) pasiskirstymas 389 krūties vėžiu sergantiems pacientams;(B) 389 krūties vėžiu sergantys pacientai 35 (9%) turėjo BRCA1/2 patogeninius variantus (PV). Iš jų 17 (48,6%) buvo BRCA1 PV nešiotojai (tamsiai raudoni), o 18 (51,4%) buvo BRCA2 nešiotojai (šviesiai raudoni);(C) 29 (7,5 %) iš 389 tiriamųjų turėjo VUS, 5 (17,2 %) BRCA1 genus (tamsiai oranžinė) ir 24 (82,8 %) BRCA2 genus (šviesiai oranžinė).
Santrumpos: PV, patogeninis variantas;VUS, neaiškios reikšmės variantas;WT, laukinio tipo BRCA1/2 seka.
Toliau ištyrėme BC molekulinių potipių paplitimą tarp pacientų, sergančių BRCA1/2 PV. Pasiskirstymas apėmė 2 (5,7 %) luminalinį A, 15 (42,9 %) luminalinį B, 3 (8,6 %) luminalinį B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ ir 13 (5,7 %) pacientų, kuriems buvo teigiamas TNB 27,1 % 4 NBC2. turėjo luminalinį B BC, 2 (11,8 %) sirgo HER2+ liga ir 10 (58,8 %) TNBC. Navikai be BRCA1 mutacijų buvo arba luminalinis A, arba luminalinis B-HER2+ (3 pav.). BRCA2 teigiamo pogrupio grupėje 10 (55,6 %) B navikų buvo . 6,7 %) TNBC ir 2 (11,1 %) buvo luminalinis A (3 pav.). Šioje grupėje HER2+ navikų nebuvo. Taigi BRCA1 mutacijos vyrauja pacientams, sergantiems TNBC, o BRCA2 pakitimai vyrauja B liumeno asmenims.
3 pav. Krūties vėžio potipių paplitimas tarp pacientų, sergančių BRCA1 ir BRCA2 patogeniniais variantais. Histogramos, rodančios BRCA1- (tamsiai raudonos) ir BRCA2- (šviesiai raudonos) PV pasiskirstymą tarp krūties vėžiu sergančių pacientų molekulinių potipių. Kiekviename langelyje pateikti skaičiai rodo pacientų, sergančių BRCA1 ir BRCA2 potipių PV, procentą.
Santrumpos: PV, patogeninis variantas;HER2+, žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptorius 2 teigiamas;TNBC, trigubai neigiamas krūties vėžys.
Vėliau įvertinome BRCA1 ir BRCA2 PV tipą ir genų lokalizaciją. BRCA1 PV stebėjome 7 vieno nukleotido variantus (SNV), 6 delecijas, 3 pasikartojimus ir 1 intarpą.Tik viena mutacija (c.5522delG) yra naujas atradimas.Dažniausiai aptikta cTA5C5 PV30CA1150del0. .Šis pakeitimas apima penkių nukleotidų (CTAAT) ištrynimą BRCA1 15 egzone, todėl aminorūgštis leucinas 1679 kodone pakeičiamas tirozinu, o dėl transliacijos rėmo poslinkio su numatytu alternatyviu stop kodonu, įvyko priešlaikinis baltymo sutrumpinimas. Visi kiti pokyčiai buvo aptikti netiesiogiai, tik viena vieta. regione (c.4357+1G>T) (1 lentelė).
Kalbant apie BRCA2 PV, mes pastebėjome 6 ištrynimus, 6 SNV ir 2 pasikartojimus. Nė vienas iš rastų pokyčių nėra naujas. Mūsų populiacijoje pasikartojo trys mutacijos, c.428dup ir c.8487+1G>A, pastebėtos 3 tiriamiesiems, o po to pasikartojo C.5851_5854del 24 kartotiniai AGTTpakartojimai. 5 BRCA2, kuris, kaip prognozuojama, koduoja sutrumpintą, neveikiantį baltymą. C.8487+1G>A mutacija įvyksta BRCA2 introno 19 (± 1,2) introniniame regione ir paveikia sujungimo konsensuso seką, todėl pakitęs sujungimas, dėl kurio atsiranda c. dėl 4 nukleotidų ištrynimo iš 5851–5854 nukleotidų pozicijų BRCA2 geno 10 koduojančiame egzone ir dėl to atsiranda transliacijos kadrų poslinkis su numatomu alternatyviu stop kodonu (p.S1951WfsTer).Pažymėtina, kaip buvo pranešta anksčiau, abu pakitimai c.631A70>T buvo aptikti pirmą kartą c.631G>08. jonas apima adenozino (A) BRCA2 egzone 7 pakeitimą guanino (G) turinčiu nukleotidu, todėl valinas pakeičiamas izoleucinu 211 kodone, izoleucinas Amino rūgštis yra aminorūgštis, pasižyminti labai panašiomis savybėmis. Šis pokytis turi įtakos normaliam mRNR susijungimui. Antrasis variantas yra prieš troninį A1 substituciją (dvigubą A1 poskyrį). BRCA2. Pakeitimas c.7008-2A>T gali generuoti kelis skirtingo ilgio nuorašus. Be to, BRCA2 PV grupėje 4 iš 18 pakeitimų (22,2 %) buvo vidiniai.
Tada nubrėžėme BRCA1/2 žalingas mutacijas funkciniuose domenuose ir baltymus surišančiuose regionuose (4 pav.). BRCA1 gene 50 % PV buvo krūties vėžio klasterio regione (BCCR), o 22 % mutacijų buvo kiaušidžių vėžio klasterio regione (OCCR) (BRCA1 5 pav. PV variantas buvo 7, 4 pav. A regione). ir 42,8 % mutacijų buvo OCCR (4B pav.). Tada įvertinome PV vietą BRCA1 ir BRCA2 baltymų domenuose. BRCA1 baltymo atveju aptikome tris PV kilpos ir susuktos ritės domenuose ir dvi mutacijas BRCA domene, o PV pakartojo domeną BRC2 (4 pav. BRRC2, 3 pav.). Introniniai ir 3 egzoniniai pokyčiai buvo aptikti oligo/oligosacharidų surišimo (OB) ir bokšto (T) srityse (4B pav.).
4 pav. Scheminis BRCA1 ir BRCA2 baltymų vaizdavimas ir patogeninių variantų lokalizacija. Šiame paveikslėlyje parodytas BRCA1 (A) ir BRCA2 (B) patogeninių variantų pasiskirstymas pacientams, sergantiems krūties vėžiu. Egzoninės mutacijos rodomos mėlynai, o introniniai variantai rodomi oranžine spalva. Juostos aukštis rodo jų funkcinių baltymų skaičių. BRCA2 baltymas1BR. yra kilpos domenas (RING) ir branduolio lokalizacijos seka (NLS), susuktos ritės domenas, SQ/TQ klasterio domenas (SCD) ir BRCA1 C-galinis domenas (BRCT).(B) BRCA2 baltyme yra aštuoni BRC kartojimai, DNR surišantis domenas su spiraliniu domenu (Helical), trys oligonukleotido domenai (T domenas) ir n-oligonukleotidai. C pusėje.Sritys, vadinamos Breast Cancer Cluster Region (BCCR) ir Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR), rodomos apačioje.*Nurodo mutacijas, kurios nustato stop kodonus.
Tada ištyrėme BC klinikopatologines ypatybes, kurios gali koreliuoti su BRCA1/2 PV buvimu. Buvo gauti visi klinikiniai įrašai apie 181 BRCA1/2 neigiamą pacientą (nenešiotojai) ir visus nešiotojus (n = 35). Buvo koreliacija tarp naviko proliferacijos greičio ir laipsnio.
Mes apskaičiavome Ki-67 pasiskirstymą pagal mūsų kohortos medianą (25%, diapazonas <10-90%). Tiriamieji, kurių Ki-67 < 25%, buvo apibrėžiami kaip "mažas Ki-67", o asmenys, kurių vertės ≥ 25%, buvo laikomi "dideliais Ki-67". Buvo rasta reikšmingų Ki-67 PV nešiotojų (CA1p) nenešiojimų tarp BR1070. (5A pav.).
5 pav. Ki-67 koreliacija su laipsnio pasiskirstymu krūties vėžiu sergančių moterų, turinčių ir neturinčių BRCA1 ir BRCA2 PV.(A) Boxplot, rodantis vidutines Ki-67 vertes 181 nenešiojančiam BC pacientei, palyginti su BRCA1 (18) arba BRCA2 (17) PV pacientėmis. P BC vertės statistiškai atspindi vėžį, mažesnės nei 0,5 B. loginio laipsnio grupės (G2 ir G3) pagal BRCA1 ir BRCA2 mutacijų būklę (WT tiriamieji, BRCA1 ir BRCA2 PV nešiotojai).
Taip pat ištyrėme, ar naviko laipsnis koreliuoja su BRCA1/2 PV buvimu. Kadangi mūsų populiacijoje G1 BC nebuvo, pacientus suskirstėme į dvi grupes (G2 arba G3). Remiantis Ki-67 rezultatais, analizė atskleidė statistiškai reikšmingą koreliaciją tarp naviko laipsnio ir BRCA1 mutacijos, palyginti su didesne G3 navikų dalimi (palyginti su BRCA1 nešiotojais. 5B).
DNR sekos nustatymo technologijos pažanga leido pasiekti precedento neturinčią pažangą atliekant BRCA1/2 genetinius tyrimus, o tai turi lemiamos reikšmės pacientams, kurių šeimoje yra sirgęs vėžiu. Iki šiol buvo nustatyta ir klasifikuota apie 20 000 BRCA1/2 variantų pagal Amerikos medicinos genetikos draugiją35 ir ENIGMA sistemą. grafinius regionus.37 Italijoje BRCA1/2 PV dažnis svyravo nuo 8 % iki 37 %, o tai rodo didelį skirtumą šalies viduje.38,39 Sicilija, turinti beveik 5 milijonus gyventojų, yra penktas pagal gyventojų skaičių Italijos regionas. Nors duomenų apie BRCA1/2 paplitimą vakarinėje Sios dalyje nėra daug, rytinėje Sios dalyje nėra.
Mūsų tyrimas yra vienas iš pirmųjų pranešimų apie BRCA1/2 PV paplitimą tarp BC sergančių pacientų Rytų Sicilijoje.28 Savo analizę sutelkėme į BC, nes tai yra labiausiai paplitusi liga mūsų grupėje.
Ištyrus 389 BC pacientus, 9 % pacientų turėjo BRCA1/2 PV, tolygiai paskirstytus tarp BRCA1 ir BRCA2. Šie rezultatai atitinka tuos, kurie anksčiau buvo pateikti Italijos populiacijoje.28 Įdomu tai, kad 3 % (13 iš 389) mūsų kohortos buvo vyrai. Šis rodiklis yra didesnis nei tikėtasi vyrų krūties vėžio atveju. Tačiau nė vienas iš šių vyrų nesukūrė BRCA1/2 PV, todėl jie buvo kandidatai į tolesnę molekulinę analizę, kad būtų išvengta rečiau paplitusių mutacijų, tokių kaip PALB2, RAD51C ir D, be kita ko. Neaiškios reikšmės variantai buvo gauti 7 % tiriamųjų, kuriems BRCA2 VUS pasireiškė.
Kai išanalizavome BC molekulinių potipių pasiskirstymą tarp BRCA1/2 mutantų moterų, patvirtinome žinomus ryšius tarp TNBC ir BRCA1 PV (58,8 proc.) ir tarp luminalinio B BC ir BRCA2 PV (55,6 proc.).16,43 Luminaliniai A ir HER2+ navikai, esantys BRCA1 ir HER2+, atitinka esamus PV nešiotojų3 literatūrinius duomenis BRCA.24.
Tada sutelkiame dėmesį į BRCA1/2 PV tipą ir vietą.Mūsų grupėje dažniausiai pasitaikantis BRCA1 PV buvo apytikslis 5035_5039delCTAAT.Nors Incorvaia ir kt.neaprašė šio varianto savo Sicilijos kohortoje, kiti autoriai pranešė apie tai kaip gemalo liniją BRCA1 PV.34 Mūsų grupėje buvo rasta keletas BRCA1 PV – pvz., c.181T>G, c.514del, c.3253dupA ir c.5266dupC – kurios buvo pastebėtos Sicilijoje, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA ir c.5266dupC. .5266dupC) dažniausiai aptinkami aškenazių žydams Rytų ir Vidurio Europoje (Lenkijoje, Čekijoje), Slovėnijoje, Austrijoje, Vengrijoje, Baltarusijoje ir Vokietijoje, 44,45, o Jungtinėse Amerikos Valstijose ir Argentinoje neseniai buvo apibrėžtas kaip „pasikartojantis gemalo linijos variantas“ Italijos pacientėms, sergančioms BC ir OC. 34c. ina.Įdomu, kad net Incorvaia ir kt.Kai kuriose Katanijos šeimose aptiktas c.3253dupA variantas.28 Tipiškiausi BRCA2 PV yra c.428dup, c.5851_5854delAGTT ir introninis variantas c.8487+1G>A, apie kuriuos buvo pranešta išsamiau 28 pacientui Palerme, kurio namų ūkyje buvo c.4258dup1AG. Vakarų Sicilijoje, daugiausia Trapanio ir Palermo regionuose, o apie 5851_5854delAGTT PV buvo pastebėtas namų ūkiuose šiaurės vakarų Sicilijoje. 8487+1G>A variantas buvo labiau paplitęs tiriamiesiems iš Mesinos, Palermo ir Kaltanisetos.28 Rebbeck ir kt.anksčiau aprašytas c.5851_5854delAGTT pakitimas Kolumbijoje.37 Kitas BRCA2 PV, c.631+1G>A, buvo rastas BC ir OC pacientams iš Sicilijos (Agrigento, Siracusa ir Ragusa).28 Pažymėtina, kad mes stebėjome dviejų BRCAG22 variantų sambūvį ir c.3BR. tas pats pacientas, kuris, kaip manėme, yra atskirtas cis režimu, kaip buvo pranešta anksčiau.34,46 Šios BRCA2 uble mutacijos iš tiesų dažnai stebimos Italijos regione ir buvo nustatyta, kad jos įveda priešlaikinius stop kodonus, paveikdamos pasiuntinio RNR susijungimą ir sukeldamos BRCA2 baltymo gedimą.47,48
Taip pat nustatėme BRCA1 ir BRCA2 PV tariamuose baltymų domenų ir genų OCCR ir BCCR regionuose. Šiuos regionus aprašė Rebbeck ir kt.kaip atitinkamai kiaušidžių ir krūties vėžio išsivystymo rizikos sritis.49 Tačiau įrodymai apie ryšį tarp lytinių ląstelių variantų vietos ir krūties ar kiaušidžių vėžio rizikos išlieka prieštaringi.28,50-52 Mūsų populiacijoje BRCA1 PV daugiausia buvo BCCR regione, o BRCA2 PV daugiausia buvo BCCR regione. BCCR regionai ir BC ypatybės. Tai gali būti dėl riboto pacientų, turinčių BRCA1/2 mutacijų, skaičiaus. Žvelgiant iš baltymų srities perspektyvos, BRCA1 PV pasiskirsto visame baltyme, o BRCA2 pakitimai pirmiausia randami BRC kartojimo srityje.
Galiausiai, mes koreliavome BC klinikopatologines ypatybes su BRCA1/2 PV. Dėl riboto įtrauktų pacientų skaičiaus nustatėme tik reikšmingą koreliaciją tarp Ki-67 ir naviko laipsnio. Nors Ki-67 vertinimas ir aiškinimas tebėra šiek tiek prieštaringas, neabejotina, kad didelis proliferacijos lygis yra susijęs su padidėjusia ligos „išgyvenimo“ ir „išgyvenimo“ sumažinimo rizika. -67 yra 20%.Tačiau ši riba netaikoma mūsų pacientų, sergančių BRCA1/2 mutacija, populiacijai, kurios Ki-67 vertės mediana yra 25%. Šią aukšto Ki-67 rodiklio tendenciją galima paaiškinti paplitimu mūsų luminalinėse B ir TNBC grupėse, iš kurių keli luminaliniai A navikai, atrodo, yra geresni, gali būti, kad kai kurie įrodymai gali reikšti, kad Ki-5 lygis 7 %. nustatyti pacientus pagal jų prognozę.53,54 Remiantis mūsų analizės rezultatais, reikšminga koreliacija nestebina. Atsiranda tarp didelio Ki-67 ir laipsnio bei BRCA1 PV buvimo.Iš tikrųjų su BRCA1 susiję navikai yra tipiški TNBC ir pasižymi agresyvesniais požymiais.16,17
Apibendrinant galima pasakyti, kad šiame tyrime pateikiama ataskaita apie BRCA1/2 mutacijų būklę BC grupėje iš Rytų Sicilijos. Apskritai mūsų išvados atitinka jau esamus įrodymus, tiek mutacijų paplitimo, tiek klinikopatologinių ypatybių BC atžvilgiu. Daugiau tyrimų su didesnėmis BRCA1/2 mutantų BC pacientų populiacijomis, pvz., rečiau vertinama, kad PV buvimas karu, ir rečiau vertinama, kad PV buvimas yra daug mažesnis. nei BRCA1/2.Tai leis identifikuoti ir tinkamai valdyti vis didesnį skaičių tiriamųjų, kuriems dėl genetinių mutacijų yra padidėjusi vėžio rizika.
Patvirtinome, kad pacientai pasirašė informuotą sutikimą anonimiškai išleisti jų auglio mėginius tyrimo tikslais. Visi pacientai pasirašė rašytinį informuotą sutikimą pagal Helsinkio deklaraciją. Vadovaujantis AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“ politika, šiam tyrimui netaikoma etinė peržiūra. BRCA1/2 analizė buvo atlikta.
Dėkojame prof. Paolo Vigneri už pagalbą slaugant krūties vėžiu sergančius pacientus, kaip prašė Etikos komitetas.
Federica Martorana praneša apie honorarus iš Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Kiti autoriai pareiškia, kad šiame darbe nėra interesų konfliktų.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL ir kt.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN įvertina 36 vėžio atvejų paplitimą ir mirtingumą 185 pasaulio šalyse.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10/ca60ac.321