Barības vielu ieguve un izplatīšana apvieno kukaiņu barības meklējumus un dzīves vēstures iezīmes. Lai kompensētu noteiktu barības vielu trūkumu dažādos dzīves posmos, kukaiņi var iegūt šīs barības vielas, izmantojot papildu barošanu, piemēram, barojoties ar mugurkaulnieku sekrētiem procesā, kas pazīstams kā peļķes. Moskītu Anopheles arabiani mērķis ir novērtēt, vai šis pētījums ir nepieciešams, lai vielmaiņu, un tātad tas bija gan barības vielu, gan atjaunošanas produkts. An.arabiensis uzbudinājums uz govs urīna barības vielu iegūšanai uzlabo dzīves vēstures īpašības.
Pārliecinieties, ka tas ir drošs.arabiensis piesaistīja svaiga, 24 stundas, 72 stundas un 168 stundas veca govs urīna smarža, un mātītēm, kas meklē saimnieku un ar asinīm barotas (48 stundas pēc asiņu maltītes) tika izmērīti Y-caurules olfaktometrā, un pēc tam tika izmantota grūsnām mātītēm kombinētās fizioloģiskās analīzē un bioaktīvās mātītes noteikšanai. govs urīns visās četrās vecuma klasēs. Bioaktīvo savienojumu sintētiskie maisījumi tika novērtēti Y mēģenē un lauka izmēģinājumos. Lai izpētītu govs urīnu un tā galveno slāpekli saturošo savienojumu urīnvielu kā potenciālu malārijas pārnēsātāju papildbarību, tika mērīti barošanas parametri un dzīves vēstures raksturlielumi. Tika novērtēts baroto odu mātīšu īpatsvars un baroto odu daudzums un urīna daudzums. novērtēta attiecībā uz izdzīvošanu, piesietu lidojumu un vairošanos.
Meklējiet saimnieka asinis un barību.Laboratorijas un lauka pētījumos arābus piesaistīja dabīgā un sintētiskā svaiga un vecas govs urīna smarža. Grūtnieces bija vienaldzīgas pret govs urīna reakciju nārsta vietās. Saimniekus meklējošas un asinssūcējas mātītes aktīvi absorbē govs urīnu un atbilstoši visām šīm fizioloģiskajām un vēsturiskajām dzīvības īpašībām. lidojums, izdzīvošana vai vairošanās.
Anopheles arabinis govs urīna iegūšana un izplatīšana, lai uzlabotu dzīves vēstures raksturlielumus. Papildu barošana ar govs urīnu ietekmē pārnēsātāju kapacitāti tieši, palielinot ikdienas dzīvildzi un pārnēsātāju blīvumu, kā arī netieši, mainot lidojuma aktivitāti, un tāpēc tā jāņem vērā turpmākajos modeļos.
Barības vielu ieguve un izplatība integrē kukaiņu barības meklējumus un dzīves vēstures raksturlielumus [1,2,3].Kukaiņi spēj izvēlēties un iegūt barību un veikt kompensējošu barošanu, pamatojoties uz pārtikas pieejamību un barības vielu prasībām [1, 3].Uzturvielu izplatība ir atkarīga no dzīves vēstures procesa un var izraisīt dažādas barības kvalitātes un daudzuma prasības dažādos kukaiņu dzīves posmos. iegūt šīs barības vielas, izmantojot papildu barošanu, piemēram, ar dubļiem, dažādiem mugurkaulnieku ekskrementiem un sekrēcijām, kā arī kārpu, kas pazīstams kā peļķes [2]. Lai gan galvenokārt ir aprakstītas dažādas tauriņu un kožu sugas, dzirdināšanas vietas sastopamas arī citos kukaiņu kārtās, un šāda veida resursu pievilcība un barošanās ar tiem var būtiski ietekmēt veselību, 6, 6, 4 īpašības. malārijas moskīts Anopheles gambiae sensu lato (sl) parādās kā “nepietiekams” pieaugušais [8], tāpēc laistīšanai var būt nozīmīga loma tās dzīves vēstures īpašībās, taču šī uzvedība līdz šim ir atstāta novārtā. Uzbudinājuma izmantošana kā līdzeklis barības vielu uzņemšanas palielināšanai šajā svarīgajā transportlīdzeklī prasa uzmanību, jo tam var būt svarīgas epidemioloģiskas sekas.
Slāpekļa uzņemšana pieaugušām Anopheles odu mātītēm ir ierobežota zemo kaloriju rezervju dēļ, kas tiek pārnestas no kāpuru stadijas, un neefektīvas asins miltu izmantošanas [9]. Mātīte Ann.gambiae sl parasti to kompensē, pievienojot papildu asiņu maltītes [10, 11], tādējādi pakļaujot vairāk cilvēku riskam saslimt ar moskītu un moskītu priekšlaicīgas saslimšanas risku. izmantojiet mugurkaulnieku ekskrementu papildbarību, lai iegūtu slāpekļa savienojumus, kas uzlabo adaptāciju un lidojuma manevrēšanas spēju, kā to pierāda citi kukaiņi [2]. Šajā sakarā viena no An.The Gambian sl sugu kompleksā Anopheles arabinis, svaigam un vecam govs arabinis, priekšroka tiek dota 13, tā ir ophelesun13, An. ophelesun13, An. s un ir zināms, ka tas asociējas ar liellopiem un barojas ar tiem.Govs urīns ir slāpekļa savienojumiem bagāts resurss, un urīnviela veido 50-95% no kopējā slāpekļa svaigā urīnā [15, 16].Govs urīnam novecojot, mikroorganismi izmanto šos resursus, lai samazinātu nitronijas savienojuma sarežģītību. organiskā slāpekļa samazināšanās, plaukst alkalofīlie mikroorganismi (no kuriem daudzi rada odiem toksiskus savienojumus) [15], kas var būt mātītes Ann.arabiensis galvenokārt piesaista urīns, kas ir 24 stundas vai mazāks [13, 14].
Šajā pētījumā tika meklēti saimniekorganismi un ar asinīm baroti Ans. Pirmajā gonadotropīna cikla laikā arabiensis tika novērtēts attiecībā uz slāpekļa savienojumu, tostarp urīnvielas, ieguvi, sajaucot urīnu. Pēc tam tika veikta virkne eksperimentu, lai novērtētu, kā odu mātītes piešķir šo potenciālo barības vielu resursu, lai uzlabotu izdzīvošanu un turpmāku urinēšanu, reprodukciju. lai noteiktu, vai tie sniedz uzticamas norādes par saimniekorganismu un ar asinīm baroto An. Meklējot šo potenciālo uztura resursu, arabiensis atklāja ķīmiskās korelācijas aiz novērotās atšķirīgās pievilcības. Gaistošo organisko savienojumu (GOS) sintētiskie smaku maisījumi, kas identificēti 24 stundas novecojušā fizioloģiskā urīnā, tika tālāk novērtēti lauka apstākļos, paplašinot iegūto vīna laboratorisko ietekmi uz dažādu urīna stāvokli.Odu pievilcība.Iegūtie rezultāti apstiprina, ka An.arabiensis iegūst un izplata slāpekļa savienojumus, kas atrodami mugurkaulnieku urīnā, lai ietekmētu dzīves vēstures raksturlielumus. Šie rezultāti tiek apspriesti saistībā ar iespējamām epidemioloģiskām sekām un to, kā tos var izmantot pārnēsātāju uzraudzībai un kontrolei.
Anopheles arabicans (Dongola celms) tika uzturēti 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH un 12:12 h gaismas: tumsas ciklā. Kāpuri tika audzēti plastmasas paplātēs (20 cm × 18 cm × 7 cm), kas pildītas ar destilētu ūdeni, un tika iebarotas ar Metramin Werke P (Tetramin WerkeP). s (Nolato Hertila, Åstorp, SE) un pēc tam pārvietoti uz Bugdorm būriem (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taivāna), lai ļautu tiem parādīties pieaugušie. Pieaugušajiem tika nodrošināts 10% saharozes šķīdums ad libitum, līdz 4 dienas pēc dīgšanas tika piedāvāta diēta ar uzturu, pirms eksperimenta tika veikta zvaigžņošana (dpe) pirms eksperimenta, kā aprakstīts tālāk.Mātītes, kuras izmantoja eksperimentos ar lidojuma cauruli, tika badinātas tikai 4-6 stundas ar ūdeni ad libitum.Lai sagatavotu asinssūcējus odus turpmākajiem biotestiem, 4 dpe mātītēm tika nodrošinātas defibrotiskas aitas asinis (Håtunalab, Bro, SE), izmantojot membrānas barošanas sistēmu (Hemotek Accringtonges and UK individuālās diētas, un pēc tam tika piegādātas mātītes uz FCC. tieši, kā aprakstīts tālāk, vai 10% saharozes ad libitum 3 dienas pirms tālāk aprakstītajiem eksperimentiem. Pēdējās mātītes tika izmantotas lidojuma mēģenes bioloģiskajām pārbaudēm un pārvietotas uz laboratoriju, un pēc tam 4–6 stundas pirms eksperimenta tika izmantotas destilēta ūdens ad libitum.
Barošanas testi tika izmantoti, lai kvantitatīvi noteiktu urīna un urīnvielas patēriņu pieaugušām arābu mātītēm. Saimnieku meklējošām un ar asinīm barotām mātītēm tika nodrošināta barība, kas saturēja 1% atšķaidītu svaigu un vecu govs urīnu, dažādas urīnvielas koncentrācijas un divas kontroles (10% saharozes un ūdens) 48 stundas.Turklāt C02000 ml pārtikas krāsviela. 7-1; Sigma-Aldrich, Stokholma, SE) tika pievienota diētai un piegādāta 4 × 4 matricā 250 µl mikrocentrifūgas mēģenēs (Axygen Scientific, Union City, CA, ASV; 1.A attēls) Piepildiet līdz malai (~300 µl). Lai izvairītos no konkurences starp odiem un odiem un iespējamo krāsu ietekmi uz 1 cm2, ir nepieciešams novērst odu ietekmi. 6 cm augstumā; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1.A attēls) pilnīgā tumsā 25 ± 2 cm ° C temperatūrā un 65 ± 5% relatīvajā mitrumā. Šos eksperimentus atkārtoja 5 līdz 10 reizes. Pēc pakļaušanas diētai odi tika novietoti -20 ° C temperatūrā līdz turpmākai analīzei.
Meklējiet liellopu urīnu un urīnvielu, ko absorbē saimnieks un asinssūcēju mātīte Anopheles arabianus. Barošanas izmēģinājumā (A) odu mātītēm tika nodrošināta barība, kas sastāvēja no svaiga un vecas govs urīna, dažādas urīnvielas koncentrācijas, saharozes (10%) un destilēta ūdens (H2O). .Ņemiet vērā, ka saimnieku meklējošas mātītes absorbēja 72 stundu govs urīnu mazāk nekā 168 stundu govs urīns (B).Vidējais kopējais slāpekļa saturs (± standartnovirze) urīnā ir attēlots ielaidumā.Saimnieka meklēšana (D, F) un asinssūkšanas (E, G) mātītes ar atšķirīgu devu (E, atkarīgi) ar atšķirīgu daudzumu (E, atkarīgi) ar atšķirīgu devu uzņemas urīna daudzumu. viena no otras (vienvirziena ANOVA, izmantojot Tukey post hoc analīzi; p < 0,05). Kļūdu joslas attēlo vidējās vērtības (BE) standarta kļūdu. Taisna punktētā līnija apzīmē log-lineāro regresijas līniju (F, G)
Lai atbrīvotu absorbēto pārtiku, odi tika atsevišķi ievietoti 1,5 ml mikrocentrifūgas mēģenēs, kas satur 230 µl destilēta ūdens, un audi tika sadalīti, izmantojot vienreizējās lietošanas piestu un bezvadu motoru (VWR International, Lund, SE), kam sekoja centrifugēšana ar ātrumu 10 krpm 10 minūtes. Oldrihs) un absorbcija (λ620) tika noteikta, izmantojot uz spektrofotometru balstītu mikroplašu lasītāju (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Alternatīvi, odi tika samalti 1 ml destilēta ūdens, no kura 900 µl tika pārnesti uz kiveti, lai veiktu spektrofotometrisko analīzi (λn zummetriskā spektrofotometriskā,0,0,0,6 mm). Kista, SE). Lai kvantitatīvi noteiktu uzņemšanu ar uzturu, tika sagatavota standarta līkne ar sērijveida atšķaidīšanu, lai iegūtu 0,2 µl līdz 2,4 µl 1 mg ml-1 ksilēncianīda. Pēc tam tika izmantots zināmo krāsvielu koncentrāciju optiskais blīvums, lai noteiktu katra moskītu uzņemtā ēdiena daudzumu.
Apjoma dati tika analizēti, izmantojot vienvirziena dispersijas analīzi (ANOVA), kam sekoja Tukey post hoc salīdzinājumi pa pāriem (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, ASV, 1989–2007). Lineārās regresijas analīzēs tika aprakstīta no koncentrācijas atkarīga urīnvielas uzņemšana un salīdzinātas atbildes uz asinsvadiem un asinsvadiem. .0 operētājsistēmai Mac, GraphPad Software, Sandjego, Kalifornija, ASV).
Aptuveni 20 µl urīna paraugu no katras vecuma grupas tika piesaistīti Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 acs, Sigma Aldrich) un iekapsulēti skārda kapsulās (8 mm × 5 mm). , ASV), lai noteiktu slāpekļa saturu svaigā un novecojušā urīnā saskaņā ar ražotāja protokolu. Kopējais slāpeklis (g N l-1) tika kvantificēts, pamatojoties uz zināmajām urīnvielas koncentrācijām, ko izmantoja kā standartu.
Lai novērtētu uztura ietekmi uz saimnieka meklētāju un asinssūcēju mātīšu izdzīvošanu, odi tika atsevišķi ievietoti lielos Petri trauciņos (12 cm diametrā un 6 cm augstumā; Semadeni) ar sietu pārklātu caurumu vākā (3 cm diametrā) ar Ventilācijai un barības apgādei. Diētas tika nodrošinātas tieši pēc 4 dpe koncentrācijas un iekļāva 1% un četru urīnu. , 10% saharozes un ūdens.Katra diēta tika pipetēta uz zobu tampona (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), kas tika ievietots 5 ml šļircē (Thermo Fisher Scientific, Gēteborga, SE), virzulis tika noņemts un novietots uz Petri trauciņa (1. attēls). dienā, kamēr mirušie odi tika izmesti, līdz nomira pēdējais moskīts (n = 40 vienā ārstēšanā). Ar dažādām diētām baroto odu izdzīvošana tika statistiski analizēta, izmantojot Kaplan-Meyer izdzīvošanas līknes un log-rank testus, lai salīdzinātu izdzīvošanas sadalījuma salīdzinājumus starp diētām (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Pielāgotas moskītu lidošanas dzirnavas, kuru pamatā ir Attisano et al.[17], kas izgatavotas no 5 mm bieziem caurspīdīgiem akrila paneļiem (10 cm platums x 10 cm garš x 10 cm augsts) bez priekšējiem un aizmugurējiem paneļiem (3. att.: augšpusē). Šarnīru komplekts ar vertikālu cauruli, kas izgatavota no gāzu hromatogrāfijas kolonnas (0,25 mm), kas piekarināta starp 5 cm diametru; no neodīma magnētiem 9 cm attālumā viens no otra. Horizontāla caurule, kas izgatavota no tā paša materiāla (6,5 cm L), sadalīja vertikālo cauruli, veidojot piesietu sviru un roku, kas nes nelielu alumīnija folijas gabalu kā gaismu pārtraucošu signālu.
Diennakts badā izsalkušām mātītēm 30 minūtes pirms savaldīšanas tika dota iepriekš minētā diēta.Pilnībā barotas odu mātītes pēc tam 2-3 minūtes individuāli anestēzēja uz ledus un ar bišu vasku piestiprināja pie kukaiņu spraudītēm (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), un pēc tam tika reģistrētas ar horizontāliem lidojuma datiem. reģistrētājs, pēc tam uzglabāts un parādīts, izmantojot PC-Lab 2000™ programmatūru (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Lidojuma dzirnavas tika novietotas klimata regulētā telpā (12 h:12 h, gaišs: tumšs, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Lai vizualizētu lidojuma aktivitātes modeli, tika aprēķināts kopējais nolidotais attālums (m) un secīgo lidojumu aktivitāšu kopējais skaits stundā 24 stundu periodā. Turklāt tika salīdzināti atsevišķu sieviešu vidējie attālumi, ko nolidojušas dažādas ārstēšanas metodes un analizētas, izmantojot vienvirziena ANOVA un Tukey's post hoc analīzi (JMP Pro, v14.0.0). sabiedrotais, vidējais raundu skaits tiek aprēķināts ar 10 minūšu soli.
Lai novērtētu uztura ietekmi uz An.arabiensis reproduktīvo darbību, sešas mātītes (4 dpe) pēc asins savākšanas tika pārvietotas tieši uz Bugdorm būriem (30 cm × 30 cm × 30 cm) un pēc tam tika nodrošinātas ar eksperimentālo barību 48 stundas, kā aprakstīts iepriekš. Pēc tam diētas tika noņemtas un nārsta trauki (30 ml; Nolato 20 ml ūdens tika piepildīti ik pēc 4 stundām 8 stundām). 24 stundas.Katru diētas režīmu atkārtojiet 20-50 reizes.Olas tika skaitītas un reģistrētas katrā eksperimentālajā būrī.Olu apakšparaugi tika izmantoti, lai novērtētu atsevišķu olu vidējo izmēru un garuma izmaiņas (n ≥ 200 vienā diētā), izmantojot Dialux-20 mikroskopu (DM1000; Ernst Leitzlar, FCZD a3D, Camera) 0 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Atlikušās olas 24 stundas tika turētas kontrolētā klimata telpā standarta audzēšanas apstākļos, un tika izmērīts nesen iznirušo 1. stadijas kāpuru apakšparaugs (n ≥ 200 vienā barībā), kā aprakstīts iepriekš. Olu skaits un olu un kāpuru lielums tika salīdzināts, izmantojot vienu Pro-J analīzi un Tuho-J analīzi. 4.0.0, SAS Institute Inc.).
Gaistošās vielas no svaiga (1 stundu pēc paraugu ņemšanas), 24 stundas, 72 stundas un 168 stundas veca urīna tika savāktas no paraugiem, kas savākti no Zebu liellopiem, Arsi rases. Ērtības labad urīna paraugi tika savākti agri no rīta, kamēr govis vēl atradās kūtī. Urīna paraugi tika savākti no 10 ml. s (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 l poliamīdā ar vāku Vinilhlorīda plastmasas mucās. Gaistošās daļas no katra liellopu urīna parauga tika savāktas vai nu tieši (svaigas) vai pēc nogatavināšanas istabas temperatūrā 24 h, 72 h un 168 h, ti, katra urīna grupa bija reprezentatīva.
Gaistošo vielu savākšanai augšējā telpā tika izmantota slēgta cikla sistēma, lai cirkulētu ar aktīvās ogles filtrētu gāzes plūsmu (100 ml min-1) caur poliamīda maisu uz adsorbcijas kolonnu 2,5 stundas, izmantojot diafragmas vakuumsūkni (KNF Neuberger, Freiburg, DE). 5 cm x 3 mm id), kas satur 35 mg Porapak Q (50/80 acs; Waters Associates, Milford, MA, ASV) starp stikla vates aizbāžņiem. Pirms lietošanas kolonna tika izskalota ar 1 ml atkārtoti destilēta n-heksāna (Merck, G. Darmstadt, DE) un 1 ml adsorbēta. les tika eluētas ar 400 μl pentāna. Headspace kolekcijas tika apvienotas un pēc tam uzglabātas -20 °C temperatūrā, līdz tās izmantoja turpmākai analīzei.
Saimnieku meklējošo un asinis ēdāju An.Headspace gaistošo ekstraktu uzvedības reakcijas, kas savāktas no svaiga, 24 h, 72 h un 168 h veca urīna, tika analizētas attiecībā uz Arabidopsis odu gaistošajiem ekstraktiem, izmantojot taisnas stikla caurules olfaktometru [18]. Eksperimenti tika veikti. 19].Stikla caurules olfaktometrs (80 cm × 9,5 cm id) tika izgaismots ar 3 ± 1 lx sarkano gaismu no augšas.Ogles filtrēta un mitrināta gaisa plūsma (25 ± 2 °C, 65 ± 2% relatīvais mitrums) izlaida biotestu pie 30 cm cauri tērauds, veidojot a sēriju a laminsta h s-1. spalvu struktūra.Zobu tamponu dozators (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), kas piekarināts no 5 cm spirāles olfaktometra pretvēja galā, ar stimulatora maiņu ik pēc 5 minūtēm.Analīzei kā kontroles stimuls tika izmantots 10 μl katra headspace ekstrakta, atšķaidīts 1:10. mātītes tika ievietotas atsevišķos izlaišanas būros 2-3 stundas pirms eksperimenta sākuma. Atbrīvošanas būris tika novietots olfaktometra pa vēja pusē, un odiem tika ļauts aklimatizēties 1 minūti, un pēc tam tika atvērts būra tauriņvārsts, lai atbrīvotos. Tika analizēta pievilcība ārstēšanai vai kontrolei, proti, ka odu avota atkārtotā izlaišanas avota proporcija 5 minūšu laikā nonāca saskarē ar odu izlaišanu. ēda vismaz 30 reizes un, lai izvairītos no vienas dienas ietekmes, katrā eksperimenta dienā tika pārbaudīts vienāds ārstēšanas un kontroles skaits. Meklējiet atbildes no saimnieka un ar asinīm barotas Ans. Arābu valodas un galvas telpas kopas tika analizētas, izmantojot nominālo loģistikas regresiju, kam sekoja pāru salīdzinājumi nepāra attiecībai (JMP Pro, v14.0.0., 0).
An nārsta reakcija. Svaiga un vecas govs urīna galvas telpas ekstrakti tika analizēti Bugdorm būros (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastmasas glāzes (30 ml; Nolato Hertila), kas pildītas ar 20 ml destilēta ūdens, nodrošināja nārsta substrātu ar cm, un tika noregulētas pretējos stūros2. μl katra augšējās telpas ekstrakta atšķaidījumā 1:10. Kontrolkrūzes regulēšanai tika izmantots vienāds daudzums pentāna. Apstrādes un kontroles krūzes tika apmainītas katrā eksperimentā, lai kontrolētu pozīcijas ietekmi. Desmit ar asinīm barotas mātītes tika izlaistas eksperimentālajos būros ZT 9-11, un olas glāzēs tika skaitītas 24 stundas vēlāk. olas, kas dētas kontroles krūzē)/(kopējais izdēto olu skaits).Katra apstrāde tika atkārtota 8 reizes.
Gāzu hromatogrāfijas un elektronu antenas modeļa noteikšanas (GC-EAD) analīze sievišķajai An.arabiensis tika veikta, kā aprakstīts iepriekš [20]. Īsumā, svaigi gaistošie ekstrakti tika atdalīti, izmantojot Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US), kas aprīkots ar HP-5 kolonnu, biezums A,0 mm2,0 μm,5 mm. noloģijas).un novecojošais urīns. Ūdeņradis tika izmantots kā kustīgā fāze ar vidējo lineāro plūsmas ātrumu 45 cm s-1.Katrs paraugs (2 μl) tika injicēts 30 sekundes nedalītā režīmā ar ieplūdes temperatūru 225 °C. GC krāsns temperatūra tika ieprogrammēta no 35 °C (3 minūšu turēšana) līdz 30 minūtes 10 ef °C. plūstošs sadalītājs, tika pievienots 4 psi slāpekļa un sadalīts 1:1 Gerstel 3D/2 mazā tukšā tilpuma krustojumā (Gerstel, Mülheim, DE) starp liesmas jonizācijas detektoru un EAD. GC notekūdeņu kapilārs EAD tika izvadīts caur Gerstel ODP-2 pārvades līniju, 0 cm, kur tā temperatūra bija g × 8 C, kas izvadīja stiklu plus 5 mm. ar oglekli filtrēts, mitrināts gaiss (1,5 l min−1). Antena tika novietota 0,5 cm attālumā no caurules izejas. Katrs atsevišķs moskīts veidoja vienu atkārtojumu, un saimnieku meklējošiem odiem tika veikti vismaz trīs atkārtojumi ar katra vecuma urīna paraugiem.
Bioaktīvo savienojumu identificēšana svaiga un veca liellopu urīna augšējās telpas kolekcijās, izmantojot kombinētu GC un masas spektrometru (GC-MS; 6890 GC un 5975 MS; Agilent Technologies), lai GC-EAD analīzē izraisītu antenas reakcijas, darbojoties elektronu trieciena jonizācijas režīmā pie 70 C-MS eV, tika izmantots a capillacoMS eV. (60 m × 0,25 mm iekšējais diametrs, 0,25 μm plēves biezums), izmantojot hēliju kā kustīgo fāzi ar vidējo lineāro plūsmas ātrumu 35 cm s-1. 2 μl paraugs tika injicēts, izmantojot tos pašus inžektora iestatījumus un cepeškrāsns temperatūru, kā GC-EAD analīzē. Savienojumi tika identificēti, pamatojoties uz to bibliotēkas aiztures laiku un pielāgoto KovátracentA un1IST. ).Identificētie savienojumi tika apstiprināti, injicējot autentiskus standartus (1. papildu fails: S2 tabula). Kvantitatīvās noteikšanas nolūkā kā ārējais standarts tika injicēts heptilacetāts (10 ng, 99,8% ķīmiskā tīrība, Aldrich).
Sintētiskā smaku maisījuma, kas sastāv no bioaktīviem savienojumiem, kas identificēti svaigā un novecojušā urīnā, efektivitātes novērtējums, lai piesaistītu saimniekus meklējošus un asinssūcējus Ans.arabiensis, izmantojot to pašu olfaktometru un protokolu, kas minēts iepriekš. Sintētiskie maisījumi atdarināja savienojumu sastāvu un proporcijas jauktos gaistošos ekstraktos 24 stundu, 24 stundu un 28 stundu 68 stundu vecs urīns (attēls 5D-G; 1. papildu fails: S2 tabula). Analīzei izmantojiet 10 μl pilnībā sintētiskā maisījuma atšķaidījuma attiecībā 1:100 ar kopējo izdalīšanās ātrumu no aptuveni 140–2400 ng h-1, lai novērtētu, cik pievilcīgs ir saimniekorganisms un asinīm. tiek noņemti pilnā maisījuma atsevišķu savienojumu maisījumi. Meklējiet atbildes no saimnieka un ar asinīm barotā Ans. Arābu un sintētiskie un atņemtie maisījumi tika analizēti, izmantojot nominālo loģistikas regresiju, kam sekoja pāru salīdzinājumi nepāra attiecībai (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Lai novērtētu, vai govs urīns varētu kalpot kā malārijas odu saimnieka biotops, svaigs un novecojis govs urīns, kas savākts, kā aprakstīts iepriekš, un ūdens tika ievietoti 3 l spaiņos (100 ml) un novietoti saimnieka ēsmas slazdos.(BG-HDT versija; BioGents, Regensburg, DE). Desmit slazdi, kas novietoti 50 m attālumā viens no otra ganībās, 400 m no ciemata kopienas (Silay, Etiopija, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) un bez liellopiem, pastāvīgās audzēšanas vietās un ciematos. Pieci slazdi tika apsildīti, lai neapstrādātu. tiek pagriezts katru nakti kopumā piecas naktis. Odu skaits, kas notverts lamatās, kas iebarotas ar dažāda vecuma urīnu, tika salīdzinātas, izmantojot loģistikas regresiju ar beta binomiālo sadalījumu (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Malārijas endēmiskā ciematā netālu no Maki pilsētas, Oromijas reģionā, Etiopijā (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6.A attēls). Pētījums tika veikts laikā no augusta vidus līdz septembra vidum pirms ikgadējās iekštelpu atlieku izsmidzināšanas sezonas, kā arī 5 m2 ilgu laiku. Pētījumam tika atlasītas ciema nomales (6.A att.). Māju atlases kritēriji bija šādi: mājā nav atļauti dzīvnieki, nav atļauta ēst gatavošana telpās (malkas vai ogles vilkšana) (vismaz izmēģinājuma periodā), un mājas, kurās ir ne vairāk kā divi iedzīvotāji, guļot pret insekticīdiem.saskaņā ar apstrādāto moskītu tīklu.Ētisku apstiprinājumu ir piešķīrusi Adisabebas Universitātes Dabaszinātņu fakultātes (CNS-IRB) Institucionālās pētniecības ētikas pārskata padome (IRB/022/2016) saskaņā ar Pasaules Medicīnas asociācijas Helsinku deklarācijas noteiktajām vadlīnijām.Piekrišana no katra mājsaimniecības galvas tika iegūta ar visu rajona administrācijas speciālistu palīdzību. .Eksperimentālajā projektā tika izmantots 2 × 2 latīņu kvadrāta dizains, kurā sintētiskie maisījumi un kontroles tika piešķirti pārī savienotām mājām pirmajā naktī un apmainītas starp mājām nākamajā eksperimentālajā naktī. Šis process tika atkārtots desmit reizes. Turklāt, lai novērtētu moskītu aktivitāti atlasītajās mājās, CDC slazdi tika iestatīti tā, lai tie darbotos piecas secīgas dienas trīs dienas sākumā, vidū un beigās.
Sintētisks maisījums, kas satur sešus bioaktīvus savienojumus, tika izšķīdināts heptānā (97,0% šķīdinātāja GC pakāpe, Sigma Aldrich) un izdalīts ar ātrumu 140 ng h-1, izmantojot kokvilnas dakts dozatoru [20]. Dakts dozators ļāva visiem savienojumiem izdalīties nemainīgās proporcijās 12 stundu eksperimenta laikā. (CDC) gaismas slazds (John W. Hock Company, Geinsvila, FL, ASV; 6.A attēls). Slazdi tika pakārti 0,8–1 m augstumā virs zemes, netālu no gultas pamatnes, un brīvprātīgais gulēja zem neapstrādāta moskītu tīkla un tika darbināts no pulksten 18:00 līdz 06:30. 1] pēc tam tika pārbaudīti, izmantojot polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) analīzi, lai identificētu sugas, kas morfoloģiski identificētas kā A. gambiae sl. Kompleksa dalībnieki [23]. Lauka pētījumā pāru māju slazdošana tika analizēta, izmantojot nominālo loģistikas atbilstības modeli, kur pievilcība bija atkarīgais mainīgais un apstrāde (sintētiskais maisījums pretstatā 1 kontrolei (JMP)0. SAS Institute Inc.).Šeit mēs ziņojam par χ2 un p vērtībām no varbūtības koeficienta testa.
Novērtējiet, vai tas ir drošs.arabiensis varēja iegūt urīnu, savu galveno slāpekļa avotu, urīnvielu, ar tiešo barošanu 48 stundu laikā pēc ievadīšanas 4 dienu laikā pēc (dpe) saimnieka meklēšanas un ar asinīm barotas mātītes barošanas izmēģinājumiem (1.A att.).Gan saimnieku meklējošas, gan asinssūcošas mātītes, nekā jebkura cita, absorbēja ievērojami vairāk (5)5,0. p < 0,0001 un F(5,299) = 56,00, p < 0,0001; 1.B un C attēls. Turklāt sievietes, kas meklēja saimnieku, pēc 72 stundām ēda mazāk urīna, salīdzinot ar urīnu pēc 168 stundām (1.B attēls). mM, salīdzinot ar visām pārējām koncentrācijām un ūdeni, lai gan neatšķiras no 10% saharozes (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; 1.D attēls). Tas bija pretstatā ar asinīm barotu mātīšu reakcijai, kuras parasti absorbēja ievērojami vairāk urīnvielu saturošas diētas nekā ūdens, lai gan 10% saharozes ir ievērojami mazāk (5,7% saharozes). p < 0,0001; 1. attēls).1E).Turklāt, salīdzinot abus fizioloģiskos stāvokļus, flebotomizētas mātītes uzsūca vairāk urīnvielas nekā saimnieku meklējošās mātītes pie zemākajām koncentrācijām, un šīs mātītes absorbēja līdzīgu urīnvielas daudzumu augstākā koncentrācijā (F(1,953)= p 701 .8.1. F, G att.. Lai gan šķita, ka uzņemšanai no urīnvielu saturošas diētas ir optimālas vērtības (1. D., E. att.), mātītes abos fizioloģiskos stāvokļos spēja log-lineāri modulēt absorbētās urīnvielas daudzumu visā urīnvielas koncentrācijas diapazonā (1. F., G. att.).Līdzīgi šķiet, ka odi kontrolē savu slāpekļa uzņemšanu, regulējot absorbētā urīna daudzumu, jo slāpekļa daudzums urīnā atspoguļojas absorbētajā daudzumā (1.B, C un B attēls).
Lai novērtētu urīna un urīnvielas ietekmi uz saimnieka meklētāju un asinssūcēju odu izdzīvošanu, mātītes tika barotas ar visu četru vecumu urīnu (svaigu, 24 h, 72 h un 168 h pēc nogulsnēšanās) un virkni urīnvielas koncentrāciju, kā arī destilēta ūdens un 10% saharozes kopējās analīzes (uztura kontrolanalīzē bija ievērojama ietekme uz izdzīvošanu). izdzīvošana sievietēm, kuras meklē saimnieku (urīns: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; urīnviela: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; 2.B, C att.) un ar asinīm barotām mātītēm (urīns: fχ2 = 0,0,0 . urīnviela: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; 2.D,E attēls. Visos eksperimentos mātītēm, kuras baroja ar urīna, urīnvielas un ūdens diētu, bija ievērojami zemāks izdzīvošanas rādītājs, salīdzinot ar mātītēm, kuras baroja ar saharozes diētu (2.B-E. attēls). d 72 h novecojušais urīns (p = 0,016), kam ir viszemākā izdzīvošanas iespējamība (2.B att.). Turklāt mātītes, kas meklē saimniekus, kuras baroja ar 135 mM urīnvielu, izdzīvoja ilgāk nekā ūdens kontroles (p < 0,04) (Zīm.2C).Salīdzinot ar ūdeni, sievietes, kuras baroja ar svaigu urīnu un 24 stundu urīnu, izdzīvoja ilgāk (attiecīgi p = 0,001 un p = 0,012; 2.D attēls), savukārt sievietes, kuras baroja ar 72 stundu urīnu, izdzīvoja ilgāk nekā sievietes, kuras baroja ar īsu svaigu urīnu un 24 stundu vecumu (attiecīgi 0,1 p = 0.0.0.0.0.1. attēls). 2D. Barojot ar 135 mM urīnvielu, ar asinīm barotas mātītes izdzīvoja ilgāk nekā visas citas urīnvielas un ūdens koncentrācijas (p < 0,013; 2. E attēls).
Saimnieka un asinssūcēju Anopheles arabinis mātītes izdzīvošana, kas barojas ar govs urīnu un urīnvielu.Bioloģiskā pārbaudē (A) odu mātītēm tika nodrošināta barība, kas sastāvēja no svaiga un veca govs urīna, dažādas urīnvielas koncentrācijas, saharozes (10%) un destilēta ūdens (H2O). Reģistrēta odu izdzīvošana katru reizi, kad tika novērota E, odu) un 2 stundas, līdz visas mātītes, kas barotas ar urīnu (B, D) un urīnvielu (C, E), un kontroles, saharoze un ūdens, ir mirušas.
Kopējais attālums un kārtu skaits, kas noteikts lidojuma dzirnavu pārbaudē 24 stundu periodā, atšķīrās starp saimnieku meklējošiem un asinssūcējiem odiem, kas kopumā uzrādīja mazāku lidojumu aktivitāti (3. att.). Saimnieku meklējošiem odi, kas nodrošināja svaigu un novecojušu urīnu vai saharozi un ūdeni, uzrādīja atšķirīgus lidojuma modeļus (3. att.), bet mātītes bija aktīvākas, 2. att. 168 stundu vecumā Odiem, kas barojās ar urīnu, bija dažādi lidojuma modeļi un tie galvenokārt bija diennakts laikā. Sieviešu odiem, kas nodrošināja saharozi vai 72 stundu urīnu, bija aktivitāte visu 24 stundu periodu, savukārt mātītes, kas nodrošināja ūdeni, bija aktīvākas perioda vidū. Odi bija vislielākā aktivitāte agri no rīta. 72 stundu vecuma urīns 24 stundu laikā novēroja vienmērīgu aktivitātes samazināšanos (3. attēls).
Mednieku meklējošas asinssūcējas mātītes Anopheles arabinis lidojums, kas barojas ar govs urīnu un urīnvielu. Lidojuma dzirnavu testā odu mātītes barojās ar svaigu un vecu govs urīnu, dažādas koncentrācijas urīnvielu, saharozi (10%) un destilētu ūdeni (H2O) piesieta pie horizontālas (asins rotējošas) (virzienām) un brīvi. ) sievietes, tika reģistrēts kopējais attālums un lidojumu skaits stundā katrai diētai 24 stundu periodā (tumši: pelēks; gaišs: balts).Vidējais attālums un vidējais lidojumu skaits ir parādīts diennakts aktivitātes diagrammas labajā pusē. Kļūdu joslas attēlo vidējā standarta kļūdu. Statistisko analīzi sk.
Kopumā mātīšu, kas meklē saimnieku, kopējā lidojuma aktivitāte bija līdzīga lidojuma attālumam 24 stundu periodā. Vidējo lidojuma attālumu būtiski ietekmēja uzņemtais uzturs (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), un sievietes, kas meklē saimniekus, uzņēma 72 stundas urīna, salīdzinot ar visu citu, <cross0 un 0,0 lidojumiem). odi lidoja ilgāk nekā svaigi (p = 0,022) un 24 stundu vecumā (p = 0,022) baroti odi. Atšķirībā no lidojuma aktivitātes modeļa, kas aprakstīts ar urīna diētu, ar urīnvielu barotām saimnieku meklējošām mātītēm bija noturīga lidojuma aktivitāte 24 stundu otrās fāzes laikā (tumsā otrā fāze bija līdzīga). meklējošās mātītes, kas barotas ar urīnvielu, ievērojami palielināja vidējo lidojuma attālumu atkarībā no absorbētās koncentrācijas (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Saimnieku meklējošās mātītes, kas barotas ar jebkādas koncentrācijas urīnvielu, lidoja ilgāk nekā mātītes, kuras baroja ar ūdeni vai saharozi (p < 0,03).
Asinssūcēju odu kopējā lidojuma aktivitāte bija stabila un saglabājās 24 stundu laikā visās diētās, ar paaugstinātu urīna aktivitāti tumšā perioda otrajā pusē mātītēm, kas barotas ar ūdeni, kā arī mātītēm, kas barotas svaigas un 24 stundas vecas (3. attēls). Lai gan urīna diēta būtiski ietekmēja vidējo lidojuma attālumu ar asinīm barotām mātītēm (F() ,0,0, 413), 0,0 =413. diēta nederēja (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .ar citu urīnu un kontroles diētu (svaigs, p = 0,0091; 72 stundas, p = 0,0022; 168 stundas, p = 0,001; saharoze, p = 0,001 .0, 6 = dH2O7;).
Urīna un urīnvielas barošanas ietekme uz reproduktīvajiem parametriem tika novērtēta olu dēšanas biopārbaudēs (4.A attēls) un tika pētīta pēc katras mātītes izdēto olu skaita, olu lieluma un tikko izšķīlušos pirmā zvaigznes kāpuru. Izdēto olu skaits.Ar urīnu barotas arābu mātītes mainījās atkarībā no uztura (F,4 =.8.30) ).Mātītes, kuras baroja ar 24 stundu urīnu, asins miltiem izdēja ievērojami vairāk olu nekā mātītes, kuras baroja ar citu urīna diētu, un bija līdzīgas tām, kuras baroja ar saharozi (4.B att.).Tāpat ar urīnu barotu mātīšu izdēšanas olu lielums mainījās atkarībā no uztura (F(5, 209) = 12,85, ar.20-suurseed 100, p. dēj ievērojami lielākas olas nekā ar ūdeni barotām mātītēm, savukārt mātīšu, kas barotas ar 168 h urīnu, olas bija ievērojami mazākas (4.C att.). Turklāt urīna diēta būtiski ietekmēja kāpuru izmēru (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), un ievērojami lielāki kāpuri izdēja no 2-2 olām. nekā no olām, kas izdētas no ikru kāpuriem.Ar ūdeni un 168 h urīnu barotas mātītes (4.D attēls).
Anopheles arabinis mātītes reproduktīvā darbība, kas barojas ar govs urīnu un urīnvielu. Ar asinīm barotas odu mātītes tika barotas ar barību, kas sastāvēja no svaiga un vecas govs urīna, dažādas koncentrācijas urīnvielas, saharozes (10%) un destilēta ūdens (H2O), 48 stundas pirms ievietošanas olu likšanā (E gg 8 stundas, olu iegūšanai (E gg stundu) (E gg substrāti) bioloģiskajos testos (AB substrātos). , F) un kāpuru lielumu (D, G) būtiski ietekmēja nodrošinātais uzturs (govs urīns: BD; urīnviela: EG). Katra parametra vidējie rādītāji, kas izmērīti, izmantojot dažādus burtu nosaukumus, būtiski atšķīrās viens no otra (vienvirziena ANOVA, izmantojot Tukey post hoc analīzi; p < 0,05). Kļūdu joslas ir vidējā standarta kļūda.
Urīnviela kā galvenā urīna slāpekļa sastāvdaļa, ja tā tika nodrošināta ar asinīm barotām mātītēm, visos pētījumos būtiski ietekmēja reproduktīvos parametrus. Olu skaits, ko mātītes barojušas ar urīnvielu, pēc asins ēdienreizes atkarībā no urīnvielas koncentrācijas (F(11, 360) = 4,69; p < 0,000, mātītes koncentrācija starp 4 µ1 m3 u. M izdēja vairāk olu (4E. attēls). Mātītes, kas barotas ar urīnvielas koncentrāciju 134 µM vai vairāk, dēj lielākas olas nekā mātītes, kas barotas ar ūdeni (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; 4.F attēls) un kāpuru lielums, lai gan to ietekmē līdzīga urīnvielas koncentrācija (3 (1,0) mātēm 0,9). 001) bija mainīgāks (4.G att.).
Vispārējā pievilcība saimnieku meklējošo liellopu urīna augšdaļas gaistošajiem ekstraktiem. Stikla caurulē olfaktometrā novērtēto arabiensis (5.A att.) būtiski ietekmēja urīna vecumu (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; 5.B attēls). visas pārējās ārstēšanas metodes (72 stundas: p = 0,0060, 168 stundas: p = 0,012, pentāns: p = 0,00070), Izņemot svaiga urīna smaržu (p = 0,13; 5.B attēls). Lai gan kopējā asinssūcēju odu pievilcība urīnam neatšķīrās (χ = 8, p 7 = 8, p.8 . 067; 5.C att.), tika konstatēts, ka šīs mātītes ir ievērojami pievilcīgākas gaistošajiem ekstraktiem, salīdzinot ar 72 stundas vecu urīnu, salīdzinot ar kontrolēm (p = 0,0066; 5.C attēls).
Uzvedības reakcijas uz dabiskām un sintētiskām govs urīna smaržām, meklējot saimnieku un ar asinīm barotu Anopheles arabianus.Stikla caurules olfaktometra shēma (A). Svaiga un vecas govs urīna gaistošo ekstraktu pievilkšana virsmā (B) un asinssūcēju (C) ekstrakts, kas izolēts no odiem. Tiek parādīts stundu (E), 72 stundu (F) un 168 stundu (G) vecas govs urīns. Elektronu antenas noteikšanas (EAD) pēdas parāda sprieguma izmaiņas, reaģējot uz bioaktīvajiem savienojumiem augštelpā, kas eluēts no gāzu hromatogrāfa un noteikts ar liesmas jonizācijas detektoru (FID). Mēroga josla reprezentē izdalīšanās laika un amplitūdas vērtības (µV) izdalīšanās ātrumu. Parādīti g h-1) bioloģiski aktīvo savienojumu.Viena zvaigznīte (*) norāda uz konsekventu zemas amplitūdas reakciju.Dubultās zvaigznītes (**) norāda uz nereproducējamām atbildēm.Atrast saimnieku (H) un asinssūcēju (I) An.arabiensis ir atšķirīgi pievilcīgi sintētiskajiem maisījumiem ar svaigu un vecu odu, kas atšķiras no nosaukumiem līdz govīm. cits (vienvirziena ANOVA, izmantojot Tukey post hoc analīzi;p < 0,05). Kļūdu joslas attēlo skalas standarta kļūdu
Mātīte Ann.arabiensis, 72 stundas un 120 stundas pēc asins miltiem, nārsta laikā netika parādīta priekšroka gaistošajiem ekstraktiem no svaiga un veca govs urīna, salīdzinot ar pentāna kontroli (χ2 = 3,07, p > 0,05; Papildu fails 1: S1 attēls).
Ann.arabiensis mātītēm GC-EAD un GC-MS analīzēs tika identificēti astoņi, seši, trīs un trīs bioaktīvi savienojumi (5.D-G attēls). Lai gan tika novērotas atšķirības to savienojumu skaitā, kas izraisīja elektrofizioloģiskas reakcijas, lielākā daļa šo savienojumu bija katrā augšējās telpas gaistošajā fizioloģiskā ekstraktā, kas savākts no svaiga un veca urīna. Tāpēc no katra iepriekš minētā ekstrakta tika iegūti tikai savienojumi. aizturēšana tika iekļauta turpmākajā analīzē.
Kopējais bioaktīvo savienojumu gaistošo izdalīšanās ātrums augšējās telpas kolekcijā palielinājās no 29 µg h-1 svaigā urīnā līdz 242 µg h-1 168 stundu vecumā, galvenokārt p-krezola un m-formaldehīda dēļ. Palielinās fenola, kā arī fenola daudzums. urīna vecums, kas korelēja ar novēroto signāla intensitātes (pārpilnības) samazināšanos hromatogrammā (5.D att.)-G kreisais panelis) un fizioloģiskajām reakcijām uz šiem savienojumiem (5.D-G att. labais panelis).
Kopumā sintētiskajam maisījumam bija līdzīga bioaktīvo savienojumu dabiskā attiecība, kas identificēta svaiga un veca urīna gaistošos ekstraktos (5. D–G att.), un, šķiet, ka tas neizraisīja būtisku pievilcību saimnieka meklējumos (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; 5. att. 4, p = 0,30; 5.I attēls. Tomēr pēc hoc pāru salīdzinājumi starp ārstēšanu parādīja, ka saimnieku meklējošie odi bija ievērojami pievilcīgi 24 stundu veca urīna sintētiskajam maisījumam, salīdzinot ar pentāna kontroli (p = 0,0086; 5H attēls).
Lai novērtētu atsevišķu komponentu lomu sintētiskajos 24 stundas veca urīna maisījumos, Y-caurules testā tika novērtēti seši atņemšanas maisījumi, salīdzinot ar pilnīgiem maisījumiem, kuros tika izņemti atsevišķi savienojumi.Odiem, kas meklēja saimniekus, atsevišķu savienojumu atņemšana no visa maisījuma būtiski ietekmēja uzvedības atbildes reakcijas (χ2 = 19.06, 19.02 = 19.63 fails). 2A), visi atņemšanas maisījumi bija pievilcīgāki nekā Mazāki nekā pilnībā sajaukti. Turpretim atsevišķu savienojumu izņemšana no pilnībā sintētiskā maisījuma neietekmēja asinssūcēju odu uzvedības reakcijas (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), izņemot dekanālu, kā rezultātā tika iegūts zemāks maisījuma līmenis, salīdzinot ar 0 attēls.
Kādā malārijas endēmiskā ciematā Etiopijā 24 stundu govs urīna sintētiskā maisījuma efektivitāte odu piesaistīšanā lauka apstākļos tika novērtēta desmit naktis (6.A att.). Pavisam tika notverts un identificēts 4861 ods, no kuriem 45,7% bija Anthropus.g,enroisslambi8. 35,4% bija Culex spp. (1. papildu fails: S1 tabula). Anopheles arabinis ir vienīgais An.Gambian sugu kompleksa dalībnieks, kas identificēts ar PCR analīzi. Vidēji naktī tika notverti 320 odi, šajā laikā slazdi ar sintētisko maisījumu ēsmu noķēra vairāk odu nekā pāra slazdi bez maisījuma. 01) .Slazdi bez ēsmas tika uzstādīti katrā no piecām kontroles naktīm izmēģinājuma sākumā, vidū un beigās.Katrā slazdu pārī tika notverts līdzīgs odu skaits, kas liecina par to, ka starp mājām nav novirzes (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > slazdu skaits samazinājies ar slazdu periodu, p > 0. slazdos, kas satur sintētisko maisījumu, ievērojami palielinājās: saimnieka meklēšana (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), nesena asins barošana (χ2(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) un grūtniecība (χ2(0, 228) = 3.0; p = 60.01. papildu fails: S1 tabula. Tas atspoguļojas arī kopējā notverto odu skaitā: saimnieks meklē > asinssūcējs > grūtniece > daļēji grūtniece > tēviņš.
24 stundu sintētiskā govs urīna smakas maisījuma efektivitātes lauka novērtējums. Lauka izmēģinājumi tika veikti Etiopijas dienvidu-centrālajā daļā (karte), netālu no Maki pilsētas (ievietojiet), izmantojot Slimību kontroles centra (CDC) gaismas slazdu (pa labi) pārī savienotās mājās, ar mātītes attēlu uztveršanu (CD) un mātīšu pievilkšanas kvadrātveida attēlu (A) opheles arabesques (B), bet ne Anopheles farroes (C), citādā veidā, fizioloģiska stāvokļa atkarīga ietekme.Turklāt šie slazdi notvēra ievērojami lielāku Culex odu saimniekorganismu skaitu.(D) Salīdzinot ar kontroli.Kreisajā pusē esošās joslas attēlo vidējo odu atlases indeksu, kas notverti odu pāros, bet pa labi (=openen)ps (labajā pusē)0. attēlo vidējo atlases indeksu kontroles slazdu pāros (atvērts; N = 5).).Zvaigznītes norāda statistisko nozīmīguma līmeņus (*p = 0,01 un ***p < 0,0001)
Trīs sugas tika uztvertas atšķirīgi slazdos, kas satur sintētiskos maisījumus. Meklējot saimnieku (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), asins barošanu (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) un grūtniecību (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) un grūtniecību (χ2(1, 517) = . sis tika iesprostots slazdā, izdalot sintētisko maisījumu (6.B att.), savukārt An daudzums neatšķīrās. Konstatēts faroensis dažādos fizioloģiskos stāvokļos (6. att. C). Attiecībā uz Culex tika konstatēts tikai būtisks to odu skaita pieaugums, kas meklē saimniekus, slazdos, kas iebaroti ar sintētisko maisījumu, ( =1χ29()1, (1χ20,1) 6.D att.), salīdzinot ar kontroles slazdiem.
Saimnieka ēsmas slazdi, kas atrodas ārpus potenciālajiem saimniekiem starp vairošanās vietām un lauku kopienām Etiopijā, tika izmantoti, lai novērtētu, vai malārijas odi izmanto govs urīna smaržu kā saimnieka biotopu. Ja nebija saimnieka norādes, karstuma un ar vai bez govs urīna smakas, netika fiksēti odi. malārijas odu mātītes tika piesaistītas un notvertas, lai gan nelielā skaitā, neatkarīgi no urīna vecuma (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; 1. papildu fails: S3 attēls). Turpretim ūdens kontroles līdzekļi malārijas odus neuztvēra augstā temperatūrā (1. papildu fails: S3 attēls).
Malārijas odi iegūst un izplata slāpekli saturošus savienojumus, kompensējot barošanu ar govs urīnu (ti, peļķēm), lai uzlabotu dzīves vēstures iezīmes, līdzīgi kā citiem kukaiņiem [2, 4, 24, 25, 26]. Govju urīns ir viegli pieejams atjaunojams veģetācijas resurss laukos, kas ir cieši saistīts ar malāriju un pārnēsātāju mājām. s un nārsta vietas.Odu mātītes šo resursu nosaka pēc smaržas un spēj regulēt slāpekļa savienojumu uzņemšanu urīnā, tostarp urīnvielas, kas ir galvenā slāpekļa sastāvdaļa urīnā [15, 16].Atkarībā no mātītes odu fizioloģiskā stāvokļa, barības vielas pastiprina odu aktivitāti, lai nodrošinātu saimnieka lidojumu un odu darbību. ar asinīm barotu indivīdu izdzīvošana un reproduktīvās īpašības pirmā gonadotropā cikla laikā. Tāpēc urīna sajaukšanai ir svarīga uztura nozīme malārijas pārnēsātājiem, kas ir slēgti kā nepietiekami baroti pieaugušie [8], jo tas nodrošina odu mātītēm spēju iegūt svarīgus slāpekļa savienojumus, iesaistoties zema riska epidēmijas, reproduktivitātes palielināšanās un dzīvības palielināšanās rezultātā. no kuriem ietekmē vektora kapacitāti.Turklāt šī uzvedība var būt nākotnes vektoru pārvaldības programmu mērķis.