Javascript pašlaik ir atspējots jūsu pārlūkprogrammā. Dažas šīs vietnes funkcijas nedarbosies, ja JavaScript ir atspējots.
Reģistrējieties, norādot savu specifisko informāciju un interesējošo narkotiku, un mēs saskaņosim jūsu sniegto informāciju ar rakstiem mūsu plašajā datubāzē un nekavējoties nosūtīsim jums pa e-pastu PDF kopiju.
Piemēram, Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefānija Stella, 1, 2 Silvija Rita Vitale, 1, 2 Federika Martorana, 1, 2 Mišela Massimino, 1, 2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7, Catellalin University, Catelalin University, Livia 1 Manz , 95123, Itālija;2 Eksperimentālās onkoloģijas un hematoloģijas centrs, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Itālija;3 Medicīniskā onkoloģija, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Itālija;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itālija;5 Medicine Genetics, ASP, Sirakūzas, 96100, Itālija;6 Katānijas Universitātes Biomedicīnas un biotehnoloģijas zinātņu nodaļa, Medicīniskā ģenētika, Katānija, Itālija, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Itālija Sakari: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-pasts [email protected];[email protected] Mērķis: Dzimumceļu mutācijas BRCA1 un BRCA2 un konstatēts krūts vēzis (BC), olnīcu (OC) un citi, kas saistīti ar mūža risku saslimt ar vēzi. BRCA gēna testēšana ir ļoti svarīga, lai novērtētu individuālo risku, kā arī lai atrastu profilakses metodes veseliem nēsātājiem un pielāgotu ārstēšanu vēža pacientiem. BRCA prevalence of BRCA2 are is different region, andgeres. patogēnu variantu Sicīlijas ģimenēs, trūkst pētījumu, kas īpaši vērsti uz populācijām Sicīlijas austrumos. Mūsu pētījuma mērķis bija izpētīt BRCA patogēno dzimumšūnu izmaiņu biežumu un izplatību BC pacientu grupā no austrumu Sicīlijas un novērtēt to saistību ar specifiskām BC pazīmēm, izmantojot nākamās paaudzes audzēja sekvencēšanu. %) bija BRCA patogēns variants, 17 (49%) BRCA1 un 18 (51%) BRCA2. BRCA1 izmaiņas ir izplatītas trīskārši negatīviem BC pacientiem, turpretim BRCA2 mutācijas ir biežāk sastopamas luminālajiem BC pacientiem. Salīdzinot ar nenesējiem, subjekti ar mūsu mutācijas indeksa konstatējumu sniedz ievērojami augstāku BRCA1 variantu. nacionālais statuss BC pacientiem no austrumu Sicīlijas un apstiprina NGS analīzes lomu, lai identificētu pacientus ar iedzimtu BC. Kopumā šie dati atbilst iepriekšējiem pierādījumiem, kas atbalsta BRCA skrīningu pareizai vēža profilaksei un ārstēšanai mutāciju nesējiem.
Krūts vēzis (BC) ir visizplatītākais ļaundabīgais audzējs visā pasaulē un nāvējošākais vēzis sievietēm.1 Bioloģiskās pazīmes, kas nosaka BC prognozi un klīnisko uzvedību, laika gaitā ir plaši pētītas un daļēji noskaidrotas. Faktiski pašlaik tiek izmantoti vairāki surogātmarķieri, lai klasificētu BC dažādos molekulārajos apakštipos. Tie ir estrogēna (ER) un/vai proliferācijas indeksa receptoru faktors (PHER) proliferācijas receptoru2 (PHER) receptoru augšanas faktors (P. -67 un audzēja pakāpe (G).2 Šo mainīgo lielumu kombinācija identificēja šādas BC kategorijas: 1) Luminālie audzēji, kas uzrādīja ER un/vai PgR ekspresiju, veidoja 75% no BC. Šie audzēji tika tālāk iedalīti Luminal A, kad Ki-67 bija zem 20% un HER2 negatīvs, un Luminal B bija vienāds ar %l, kad Ki-6 un virs7. proliferācijas indekss;2) HER2+ audzēji, kas ir ER un PgR negatīvi, bet uzrāda HER2 amplifikāciju. Šī grupa veido 10% no visiem krūts audzējiem;3) Trīskārši negatīvs krūts vēzis (TNBC), kas neuzrāda ER un PgR ekspresiju un HER2 amplifikāciju, veido apmēram 15% krūts vēža gadījumu.2-4
Starp šiem BC apakštipiem audzēja pakāpe un proliferācijas indekss ir šķērsgriezuma biomarķieri, kas ir tieši un neatkarīgi saistīti ar audzēja agresivitāti un prognozi.5,6
Papildus iepriekšminētajām bioloģiskajām pazīmēm, iedzimtu ģenētisko izmaiņu loma, kas izraisa BC attīstību, pēdējos gados ir kļuvusi arvien svarīgāka.7 Apmēram 1 no 10 krūts audzējiem ir iedzimts specifisku gēnu dzimumšūnu izmaiņu dēļ.8 Divos lielos epidemioloģiskajos pētījumos, kuros piedalījās vairāk nekā 180 000 sieviešu, ACAARD, TM1BR nesen ir identificēta BCAARD grupa, TM1BR. CHK2, PALB2, RAD51C un RAD51D), kas galvenokārt ir atbildīgi par iedzimtu BC. Starp šiem gēniem BRCA1 un BRCA2 (turpmāk tekstā BRCA1/2) uzrādīja visspēcīgāko korelāciju ar krūts audzēju attīstību.9-12 Faktiski dzimumšūnu līnija BRBC1/2 būtiski palielina priekšdziedzera dzīves ilgumu, kā arī citas mutācijas aizkuņģa dziedzera, kolorektālās un melanomas.No 13 līdz 80 gadu vecumam BC kumulatīvā sastopamība ir 72% sievietēm ar BRCA1 patogēno variantu (PV) un 69% sievietēm ar BRCA2 PV.14
Jāatzīmē, ka nesen publicētā publikācijā ir norādīts, ka BC risks ir atkarīgs no PV veida. Patiesībā, salīdzinot ar patogēniem saīsinātiem variantiem, spilgti nepamanāmi varianti, īpaši BRCA1 gēnā, ir saistīti ar samazinātu BC risku, īpaši vecākām sievietēm.15
BRCA1 vai BRCA2 PV klātbūtne bija saistīta ar dažādām bioloģiskām un klīniski patoloģiskām pazīmēm.16,17 Ar BRCA1 saistītie BC mēdz būt klīniski agresīvi, slikti diferencēti un ļoti proliferatīvi. Šie audzēji parasti ir trīskārši negatīvi, un tie sākas agrīnā vecumā. Audzēji, kas rodas pacientiem ar BRCA2 tipisku proliferatīvu vai diferencētu, labi proliferējošu un diferencētu pakāpes proliferāciju. ces.Šie audzēji ir biežāk sastopami B lūmenā un parasti rodas gados vecākiem pieaugušajiem.16-18 Jo īpaši BRCA1 un BRCA2 mutācijas palielina jutību pret specifisku ārstēšanu, tostarp platīna sāļiem un mērķtiecīgiem medikamentiem, piemēram, poli(ADP-ribozes) polimerāzes inhibitoriem (PARPi).19,20
Dažu pēdējo gadu laikā nākamās paaudzes sekvencēšanas (NGS) ieviešana klīniskajā praksē ir ļāvusi arvien lielākam skaitam BC pacientu veikt molekulāro testēšanu, lai noteiktu pretvēža jutības sindromus, tostarp BRCA1/2.21. Vienlaikus definīcijas, kuru pamatā ir precīzi kritēriji attiecībā uz ģimenes vēsturi, demogrāfiskajiem un klīniski patoloģiskajiem pierādījumiem, ir vērtīgi, lai labāk identificētu indivīdus2. apkopojot BRCA1/2 skrīningu konkrētās populācijās, izceļot atšķirības starp ģeogrāfiskajiem reģioniem.24–27 Lai gan ir ziņojumi par BC kohortu Sicīlijas rietumos, ir pieejams mazāk datu par BRCA1/2 skrīningu Sicīlijas austrumu populācijā.28,29
Šeit mēs aprakstām dīgļu līnijas BRCA1 / 2 skrīninga rezultātus BC pacientiem no austrumu Sicīlijas, vēl vairāk korelējot BRCA1 vai BRCA2 mutāciju klātbūtni ar šo audzēju galvenajām klīniski patoloģiskajām iezīmēm.
Retrospektīvs pētījums tika veikts Policlinico slimnīcas “Eksperimentālās onkoloģijas un hematoloģijas centrā”. Rodolico – San Marco in Catania.No 2017. gada janvāra līdz 2021. gada martam kopā tika nosūtīti 455 pacienti ar krūts un olnīcu, melanomu, aizkuņģa dziedzera vai prostatas vēzi. Helsinku skaidrojums, un visi dalībnieki pirms molekulārās analīzes sniedza rakstisku informētu piekrišanu.
BC histoloģiskie un bioloģiskie raksturlielumi (ER, PgR, HER2 statuss, Ki-67 un pakāpe) tika novērtēti, izmantojot kodola biopsijas vai ķirurģiskos paraugus, ņemot vērā tikai agresīvas audzēja sastāvdaļas. Pamatojoties uz šīm īpašībām, BC tika klasificēti šādi: luminālais A (ER+ un/vai PgR+, HER2-, B++ ER,7/HER20%) un Ki-6/7. Ki-67≥20%), luminālais B-HER2+ (ER un/vai PgR+, HER2+), HER2+ (ER un PgR-, HER2+) vai trīskārši negatīvs (ER un PgR-, HER2-).
Pirms BRCA1 un BRCA2 mutācijas statusa novērtēšanas daudznozaru komanda, kurā bija onkologs, ģenētiķis un psihologs, katram pacientam veica audzēja ģenētikas konsultāciju, lai noteiktu BRCA1 un/vai BRCA1 klātbūtni.vai indivīdiem ar augstu PV risku BRCA2 gēnā.Pacientu atlase tika veikta saskaņā ar Itālijas Medicīnas onkoloģijas biedrības (AIOM) vadlīnijām un vietējām Sicīlijas rekomendācijām.30,31 Šie kritēriji ietver: (i) ģimenes anamnēzē zināmi patogēni varianti jutības gēnos (piemēram, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) tēviņi ar BC;(iii) tiem, kuriem ir BC un OC;(iv) sievietes ar BC <36 gadi, TNBC <60 gadi vai divpusējs BC <50 gadi;(v) personīgā medicīniskā vēsture pirms mūsu ēras < 50 gadi un vismaz viens pirmās pakāpes radinieks: (a) BC < 50 gadi;(b) jebkura vecuma ne-mucinoza un ārpus robežlīnijas OC;c) divpusējs BC;d) vīrietis BC;e) aizkuņģa dziedzera vēzis;f) prostatas vēzis;(vi) divu vai vairāku personu anamnēzē BC > 50 gadi un ģimenes anamnēzē BC, OC vai aizkuņģa dziedzera vēzi radiniekiem, kuri ir viens otra pirmās pakāpes radinieki (tostarp radinieki, ar kuriem viņa ir pirmās pakāpes radinieki);(vii) OC un vismaz viena pirmās pakāpes radinieka personīgā vēsture: (a) pirms mūsu ēras < 50 gadi;b) NOC;c) divpusējs BC;d) vīrietis BC;vii) mātīte ar augstas pakāpes serozu OC.
No katra pacienta tika iegūts 20 ml perifēro asiņu paraugs un savākts EDTA mēģenēs (BD Biosciences). Genomiskā DNS tika izolēta no 0,7 ml pilnas asins paraugiem, izmantojot QIAsymphony DSP DNA Midi komplekta izolācijas komplektu (QIAGEN, Hilden, Itālija) saskaņā ar ražotāja norādījumiem un izlaista caur Qubitlumo®, SWalometer (The0ificermo®, Waltmeter). Veiciet kvantitatīvo noteikšanu.Mērķa bagātināšanu un bibliotēkas sagatavošanu veic Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, kas ir gatavs ievietošanai Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 komplektā automatizētai bibliotēkas sagatavošanai saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Komplekts sastāv no diviem multipleksiem PCR primer pūliem, kurus var izmantot visu BRCA1 (NM_3.00)N3BRCA1 (NM_0.00)N3BR.0.007 gēnu izpētei. s. Īsumā, 15 µL katra atšķaidītā DNS parauga (10 ng) tika pievienoti svītrkoda plāksnēm bibliotēkas sagatavošanai, un visi reaģenti un palīgmateriāli tika ievietoti Ion Chef™ instrumentā. Pēc tam ar Ion Chef™ instrumentu tika veikta automatizēta bibliotēkas sagatavošana un svītrkoda parauga bibliotēkas apvienošana. Pēc tam tika novērtēts sagatavoto Fisher®mociento bibliotēku skaits. Waltham, MA, ASV) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Visbeidzot, bibliotēkas tiek apvienotas ekvimolārās attiecībās Ion Chef™ bibliotēkas paraugu mēģenēs (svītrkoda mēģenēs) un ielādētas Ion Chef™ instrumentā. Sekvencēšana tika veikta, izmantojot Ion Torrent S5 (Thermo Scientific) instrumentu (Thermo Scientific analīzi, izmantojot Thermo FisherDaponific (Thermo Fisher Scientific5)1). Amplicon Suite (SmartSeq srl) un Ion Reporter programmatūra.
Visas variantu nomenklatūras atbilst pašreizējām Human Genome Variation Consortium vadlīnijām, kas ir pieejamas tiešsaistē (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 variantu klīniskā nozīme tika noteikta, izmantojot Starptautiskā konsorcija ENIGMA (uz pierādījumiem balstītā tīkla interpretācijas dīgļu līnijas interpretācijas tīkls) klasifikāciju, piemēram, dažādas cilmes līnijas mutācijas UP datubāzes un httpsAR Consortiumingig.org. , BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD un UMD. Klasifikācijā ir iekļautas piecas atšķirīgas riska kategorijas: labdabīgs (I kategorija), iespējams labdabīgs (II kategorija), nenoteiktas nozīmes variants (VUS, III kategorija), iespējams patogēns (IV kategorija) un patogēns (olbaltumvielu struktūras rīks, kurā tiek analizēta arī V kategorijas mutācijas funkcija, un datubāzes 3. piekļuves variācija). .32
Lai piešķirtu katrai VUS potenciālo klīnisko nozīmi, tika izmantoti šādi skaitļošanas proteīnu prognozēšanas algoritmi: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2//) un Agvutaghdlign. d_input.php).Varianti, kas klasificēti kā 1. un 2. klase, tika uzskatīti par savvaļas tipiem.
Sangera sekvencēšana apstiprināja katra patogēnā varianta klātbūtni. Īsumā, katram konstatētajam variantam tika izveidots specifisku primeru pāris, izmantojot BRCA1 un BRCA2 gēnu atsauces sekvences (NG_005905.2, NM_007294.3 un NG_012772.3, NM_007294.3, NM_000005, kam sekoja Sangere, pēc tam tika veikta CR secība, un9). .
Pacienti, kuriem BRCA1/2 gēna tests bija negatīvs, tika pārbaudīts ar multipleksu ligāciju atkarīgo zondes pastiprināšanu (MLPA) saskaņā ar ražotāja norādījumiem, lai novērtētu lielu genoma pārkārtojumu (LGR) klātbūtni.Īsi sakot, DNS paraugi tiek denaturēti un tiek izmantoti līdz pat 60 BRCA1 un BRCA2 gēnam specifisku produktu Proamplifikācijas zondes. , kas sastāv no unikāla PCR amplikonu komplekta, pēc tam tika analizēti ar kapilāro elektroforēzi un Cofalyser.Net programmatūru kopā ar atbilstošām partijām specifiskajām Cofalyser tabulām (www.mrcholland.com).
Izvēlētie klīniski patoloģiskie mainīgie (histoloģiskā pakāpe un Ki-67% proliferācijas indekss) bija saistīti ar BRCA1/2 PV klātbūtni, kas aprēķināti, izmantojot Prism programmatūras versiju 8.4, izmantojot Fišera precīzu testu, pieņemot, ka p-vērtība <0,05 ir nozīmīga.
Laikā no 2017. gada janvāra līdz 2021. gada martam 455 pacienti tika pārbaudīti attiecībā uz dīgļu līnijas BRCA1/2 mutācijām. Mutāciju pārbaude tika veikta Policlinico slimnīcas Eksperimentālās onkoloģijas un hematoloģijas centrā. Saskaņā ar Sicīlijas vadlīnijām (http://www.gurs.regione.1ndicepnai.2enerm,2ì1enerm.2.0.0cilia. o 2020), Katānijas Rodolico – San Marco” kopumā, 389 pacienti Bija krūts vēzis, 37 olnīcu vēzis, 16 aizkuņģa dziedzera vēzis, 8 prostatas vēzis un 5 melanoma.Pacientu sadalījums pēc vēža veida un analīzes rezultātiem parādīts 1. attēlā.
1. attēlā parādīta plūsmas diagramma, kurā parādīts pētījuma pārskats. Pacientiem ar krūts, melanomas, aizkuņģa dziedzera, prostatas vai olnīcu audzējiem tika pārbaudītas BRCA1 un BRCA2 gēnu mutācijas.
Saīsinājumi: PV, patogēns variants;VUS, nenoteiktas nozīmes variants;WT, savvaļas tipa BRCA1/2 secība.
Mēs selektīvi koncentrējām savus pētījumus uz krūts vēža kohortām. Pacientu vidējais vecums bija 49 gadi (diapazons 23-89) un pārsvarā bija sievietes (n=376 jeb 97%).
No šiem subjektiem 64 (17 %) bija BRCA1/2 mutācijas, un visas bija sievietes.Trīsdesmit piecām (9 %) bija PV un 29 (7,5 %) bija VUS. Septiņpadsmit (48,6 %) no 35 patogēnajiem variantiem radās BRCA1 un 18 (51,4 %) BRCA2 un 18 (51,4 %) BRCA2, savukārt 18 (51,4 %) BRCA2 un 2 % (2 %) (8 . BRCA2 (1. un 2. attēls). MLPA analīzē LGR nebija.
2. attēls. BRCA1 un BRCA2 mutāciju analīze 389 krūts vēža pacientēm. (A) Patogēno variantu (PV) (sarkans), nenoteiktas nozīmes variantu (VUS) (oranža) un WT (zils) sadalījums 389 krūts vēža pacientēm;(B) 389 krūts vēža pacientēm Trīsdesmit pieciem (9%) bija BRCA1/2 patogēni varianti (PV). No tiem 17 (48,6%) bija BRCA1 PV nesēji (tumši sarkani) un 18 (51,4%) bija BRCA2 nesēji (gaiši sarkani);(C) 29 (7,5 %) no 389 subjektiem bija VUS, 5 (17,2 %) BRCA1 gēni (tumši oranža) un 24 (82,8 %) BRCA2 gēni (gaiši oranža).
Saīsinājumi: PV, patogēns variants;VUS, nenoteiktas nozīmes variants;WT, savvaļas tipa BRCA1/2 secība.
Pēc tam mēs pētījām BC molekulāro apakštipu izplatību pacientiem ar BRCA1/2 PV. Sadalījums ietvēra 2 (5,7 %) luminālo A, 15 (42,9 %) luminālo B, 3 (8,6 %) luminālo B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ pacientus un 13 (5,7 %) HER2+ pacientus un 13 (5,7 %) pacientus ar TNBC2+ pozitīvo (37,1 %), 4 miljonu NBC, 1,1 %). bija lumināls B BC, 2 (11,8 %) bija HER2+ slimība un 10 (58,8 %) bija TNBC. Audzēji bez BRCA1 mutācijām bija vai nu luminal A vai luminal B-HER2+ (3. attēls). BRCA2 pozitīvā apakšgrupā 10 (55,6 %) audzēji bija HER2+1, B audzēji -3 bija (. 6,7%) TNBC un 2 (11,1%) bija lumināls A (3. attēls). Šajā grupā nebija HER2+ audzēju. Tādējādi BRCA1 mutācijas ir izplatītas TNBC pacientiem, savukārt BRCA2 izmaiņas dominē B lūmena indivīdiem.
3. attēls Krūts vēža apakštipu izplatība pacientēm ar BRCA1 un BRCA2 patogēniem variantiem. Histogrammas, kas parāda BRCA1- (tumši sarkans) un BRCA2- (gaiši sarkans) PV sadalījumu starp krūts vēža pacientu molekulārajiem apakštipiem. Skaitļi, kas norādīti katrā lodziņā, parāda to pacientu procentuālo daļu, kuriem ir BRCA1 un BRCA2 PV apakštips.
Saīsinājumi: PV, patogēns variants;HER2+, cilvēka epidermas augšanas faktora receptors 2 pozitīvs;TNBC, trīskārši negatīvs krūts vēzis.
Pēc tam mēs novērtējām BRCA1 un BRCA2 PV veidu un gēnu lokalizāciju.BRCA1 PV mēs novērojām 7 viena nukleotīda variantus (SNV), 6 dzēšanu, 3 dublēšanos un 1 ievietošanu.Tikai viena mutācija (c.5522delG) ir jauns atklājums.Visbiežāk tika atklāts c. Šīs izmaiņas ietver piecu nukleotīdu (CTAAT) dzēšanu BRCA1 15. eksonā, kā rezultātā aminoskābes leicīns tiek aizstāts ar tirozīnu 1679. kodonā, un translācijas kadra nobīdes dēļ ar paredzamo alternatīvo stopkodonu izraisa priekšlaicīgu proteīna saīsināšanu. Visas pārējās izmaiņas nav konstatētas tikai vienā vietā. reģions (c.4357+1G>T) (1. tabula).
Attiecībā uz BRCA2 PV mēs novērojām 6 svītrojumus, 6 SNV un 2 dublēšanos. Neviena no konstatētajām izmaiņām nav jauna. Mūsu populācijā atkārtojās trīs mutācijas, c.428dup un c.8487+1G>A, kas novērotas 3 subjektiem, kam sekoja aptuveni 5851_5854 C atkārtošanās divos AGTT atkārtošanās gadījumos. 5 no BRCA2, paredzams, ka tas kodē saīsinātu, nefunkcionālu proteīnu. C.8487+1G>A mutācija notiek BRCA2 introna 19 introniskajā reģionā (± 1,2), un tā ietekmē splicēšanas konsensa secību, kā rezultātā tiek mainīta splicēšana, kā rezultātā c.5del ir patogēns proteīns585. sakarā ar 4 nukleotīdu dzēšanu no 5851. līdz 5854. nukleotīdu pozīcijām BRCA2 gēna 10. kodošajā eksonā un izraisa translācijas kadru nobīdi ar paredzētu alternatīvu stopkodonu (p.S1951WfsTer). Proti, kā iepriekš ziņots, abas izmaiņas c.631G.70>T tika konstatētas vispirms pacientam c.631G>08. jons ietver adenozīna (A) aizstāšanu BRCA2 7. eksonā ar guanīnu (G) saturošu nukleotīdu, kā rezultātā valīns mainās uz izoleicīnu 211. kodonā, izoleicīns Aminoskābe ir aminoskābe ar ļoti līdzīgām īpašībām. Šīs izmaiņas ietekmē normālu mRNS splicēšanu. Otrais variants atrodas pirms gēna divkāršās apakšreģiona A1, un tā rezultātā tiek izveidots ekstroniskais 3 apakšreģions. BRCA2.C.7008-2A>T izmaiņas var radīt vairākus dažāda garuma transkriptus.Turklāt BRCA2 PV grupā 4 no 18 izmaiņām (22,2%) bija iekšējas.
Pēc tam mēs kartējām BRCA1/2 kaitīgās mutācijas funkcionālajos domēnos un proteīnus saistošajos reģionos (4. att.). BRCA1 gēnā 50% PV atradās krūts vēža klastera reģionā (BCCR), savukārt 22% mutāciju atradās olnīcu vēža klastera reģionā (OCCR) (BRCA1 5. att. PV 7. attēls. un 42,8% mutāciju atradās OCCR (4.B att.). Pēc tam mēs novērtējām PV atrašanās vietu BRCA1 un BRCA2 proteīna domēnos. Attiecībā uz BRCA1 proteīnu mēs atradām trīs PV cilpas un spirāles domēnos, un divas mutācijas BRCA domēnā, PV mapped domēnā, savukārt PV atkārtotajā domēnā BRC2 (att. 4. BRC2s). Introniskas un 3 eksoniskas izmaiņas tika konstatētas oligo/oligosaharīdu saistošajā (OB) un torņa (T) domēnā (4.B attēls).
4. attēls BRCA1 un BRCA2 proteīnu shematisks attēlojums un patogēno variantu lokalizācija. Šajā attēlā parādīts BRCA1 (A) un BRCA2 (B) patogēno variantu sadalījums krūts vēža slimniekiem. Eksoniskās mutācijas ir parādītas zilā krāsā, savukārt introniskie varianti ir parādīti oranžā krāsā. Joslas augstums atspoguļo to funkcionālo proteīnu skaitu un CA2 domēnu1BR.The CA BR1. satur cilpas domēnu (RING) un kodola lokalizācijas secību (NLS), spirālveida domēnu, SQ/TQ klastera domēnu (SCD) un BRCA1 C-terminālo domēnu (BRCT).(B) BRCA2 proteīns satur astoņus BRC atkārtojumus, DNS saistošu domēnu ar spirālveida domēnu (Helical), trīs oligonukleotīdu domēnu (AOB tonfold) un anoligonukleotīdu (AOB to fold) C pusē.Apgabali, ko sauc par Breast Cancer Cluster Region (BCCR) un Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR), ir parādīti apakšā.*Attēlo mutācijas, kas nosaka stopkodonus.
Pēc tam mēs pētījām BC klīniski patoloģiskās pazīmes, kas varētu korelēt ar BRCA1/2 PV klātbūtni. Pilnīgi klīniskie ieraksti bija pieejami par 181 BRCA1/2 negatīvu pacientu (nenesējiem) un visiem nesējiem (n = 35). Pastāvēja korelācija starp audzēja proliferācijas ātrumu un pakāpi.
Mēs aprēķinājām Ki-67 sadalījumu, pamatojoties uz mūsu kohortas mediānu (25%, diapazons <10-90%). Subjekti ar Ki-67 < 25% tika definēti kā “zems Ki-67”, savukārt indivīdi ar vērtībām ≥ 25% tika uzskatīti par “augstiem Ki-67″. Konstatētas būtiskas Ki-67 nesēju un PV <6070-1 nesēju atšķirības. (5.A att.).
5. attēls. Ki-67 korelācija ar pakāpes sadalījumu krūts vēža sievietēm ar un bez BRCA1 un BRCA2 PV.(A) Boksploks, kas parāda Ki-67 vidējās vērtības 181 BC pacientei, kas nav nēsātājs, salīdzinot ar BRCA1 (18) vai BRCA2 (17) PV pacientēm. P BC vērtības, kas ir statistiski nozīmīgas no vēža, kas ir zemākas par 0,5 t. loģiskās pakāpes grupas (G2 un G3) atbilstoši BRCA1 un BRCA2 mutācijas statusam (WT subjekti, BRCA1 un BRCA2 PV nesēji).
Tāpat mēs pārbaudījām, vai audzēja pakāpe korelē ar BRCA1/2 PV klātbūtni. Tā kā mūsu populācijā nebija G1 BC, mēs sadalījām pacientus divās grupās (G2 vai G3). Saskaņā ar Ki-67 rezultātiem analīzē tika atklāta statistiski nozīmīga korelācija starp audzēja pakāpi un BRCA1 mutāciju, ar lielāku G3 audzēju īpatsvaru, salīdzinot ar BRCA1 audzējiem. 5B).
DNS sekvencēšanas tehnoloģiju attīstība ir nodrošinājusi nepieredzētu progresu BRCA1/2 ģenētiskajā testēšanā, kas būtiski ietekmē pacientus, kuru ģimenes anamnēzē ir vēzis. Līdz šim ir identificēti un klasificēti aptuveni 20 000 BRCA1/2 variantu atbilstoši Amerikas Medicīnas ģenētikas biedrībai35 un ENIGMA sistēmai. ographic regions.37 Itālijas iekšienē BRCA1/2 PV rādītājs svārstījās no 8% līdz 37%, parādot plašu valsts iekšienē mainīgu.38,39 Ar gandrīz 5 miljoniem iedzīvotāju Sicīlija ir piektais lielākais reģions Itālijā iedzīvotāju skaita ziņā. Kaut arī pastāv dati par BRCA1/2 izplatību salā, austrumu daļā nav pierādījumu.
Mūsu pētījums ir viens no pirmajiem ziņojumiem par BRCA1/2 PV sastopamību BC pacientiem Sicīlijas austrumos.28 Mēs savā analīzē koncentrējāmies uz BC, jo šī ir mūsu grupā visizplatītākā slimība.
Pārbaudot 389 BC pacientus, 9% bija BRCA1/2 PV, kas vienmērīgi sadalīti starp BRCA1 un BRCA2. Šie rezultāti saskan ar tiem, kas iepriekš tika ziņoti Itālijas populācijā.28 Interesanti, ka 3% (13/389) no mūsu kohortas bija vīrieši. Šis rādītājs ir augstāks nekā gaidīts attiecībā uz vīriešu krūts vēzi, pamatojoties uz mūsu mutācijas risku (140% no visām CA populācijām, pamatojoties uz mūsu krūts vēža risku). Tomēr nevienam no šiem vīriešiem neattīstījās BRCA1/2 PV, tāpēc viņi bija kandidāti turpmākai molekulārajai analīzei, lai izslēgtu mazāk izplatītu mutāciju, piemēram, PALB2, RAD51C un D, ​​klātbūtni. Neskaidras nozīmes varianti tika iegūti 7% subjektu, kuriem BRCA2 VUS bija acīmredzams. Pat šis rezultāts atbilst22,24, ir iepriekšējie pierādījumi4.
Analizējot BC molekulāro apakštipu izplatību sievietēm ar BRCA1/2 mutantēm, mēs apstiprinājām zināmās asociācijas starp TNBC un BRCA1 PV (58,8%) un starp luminālo B BC un BRCA2 PV (55,6%).16,43 Luminālie A un HER2+ audzēji BRCA1 un HER2+ audzēji atbilst BRCA1 un HER2+ audzējiem, esošie literatūras dati3 BRCA.
Pēc tam mēs koncentrējamies uz BRCA1/2 PV veidu un atrašanās vietu.Mūsu grupā visizplatītākais BRCA1 PV bija c.5035_5039delCTAAT. Lai gan Incorvaia et al.nav aprakstījuši šo variantu savā Sicīlijas kohortā, citi autori ir ziņojuši par to kā dīgļu līniju BRCA1 PV.34 Mūsu kohortā tika atrasti vairāki BRCA1 PV – piemēram, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA un c.5266dupC –, kas ir novēroti Sicīlijā, c.1BRCA1 un28. .5266dupC) parasti ir sastopami Aškenazi ebrejiem Austrumeiropā un Centrāleiropā (Polija, Čehija), Slovēnijā, Austrijā, Ungārijā, Baltkrievijā un Vācijā, 44,45 un Amerikas Savienotajās Valstīs un Argentīnā nesen tika definēts kā “atkārtots dzimumšūnu līnijas variants” Itālijas pacientēm ar BC un OC. 34c. ina.Interesanti, ka pat Incorvaia u.c.atrada c.3253dupA variantu dažās ģimenēs Katānijā.28 Visreprezentatīvākie BRCA2 PV ir c.428dup, c.5851_5854delAGTT un introniskais variants c.8487+1G>A, par kuriem sīkāk ziņots 28 pacientam Palermo ar c.4258dupA mājsaimniecībā tika novērota c.458dup inTT1AG. Sicīlijas rietumos, galvenokārt Trapāni un Palermo reģionos, savukārt c.5851_5854delAGTT PV tika novērots mājsaimniecībās Sicīlijas ziemeļrietumos. 8487+1G>A variants bija biežāk sastopams personām no Mesīnas, Palermo un Kaltanisetas.28 Rebbeck et al.iepriekš aprakstīja c.5851_5854delAGTT izmaiņas Kolumbijā.37 Vēl viens BRCA2 PV, c.631+1G>A, ir konstatēts BC un OC pacientiem no Sicīlijas (Agridžento, Sirakūzas un Ragūzas).28 Konkrēti, mēs novērojām divu BRCAG2>2 variantu līdzāspastāvēšanu. tas pats pacients, kuru mēs uzskatījām par nošķirtu cis režīmā, kā jau iepriekš tika ziņots.34,46 Šīs BRCA2 uble mutācijas patiešām bieži tiek novērotas Itālijas reģionā, un ir konstatēts, ka tās ievada priekšlaicīgus stopkodonus, ietekmējot ziņotāja RNS splicēšanu un izraisot BRCA2 proteīna neveiksmi.47,48
Mēs arī kartējām BRCA1 un BRCA2 PV iespējamos proteīna domēnu un gēnu OCCR un BCCR reģionos. Šos reģionus aprakstīja Rebbeck et al.kā riska zonas attiecīgi olnīcu un krūts vēža attīstībai.49 Tomēr pierādījumi par saistību starp dzimumšūnu variantu atrašanās vietu un krūts vai olnīcu vēža risku joprojām ir pretrunīgi.28,50-52 Mūsu populācijā BRCA1 PV pārsvarā atradās BCCR reģionā, turpretim BRCA2 PV pārsvarā atradās starp BCCR un nevienā mērā neatradām saistību starp OCCR reģionu. BCCR reģioni un BC pazīmes. Tas var būt saistīts ar ierobežotu pacientu skaitu ar BRCA1/2 mutācijām. No proteīna domēna viedokļa BRCA1 PV ir sadalīti pa visu proteīnu, un BRCA2 izmaiņas galvenokārt tiek konstatētas BRC atkārtošanās domēnā.
Visbeidzot, mēs korelējām BC klīniski patoloģiskās pazīmes ar BRCA1/2 PV. Ierobežotā iekļauto pacientu skaita dēļ mēs konstatējām tikai būtisku korelāciju starp Ki-67 un audzēja pakāpi. Lai gan Ki-67 novērtējums un interpretācija joprojām ir diezgan pretrunīga, ir skaidrs, ka augstie proliferācijas rādītāji ir saistīti ar paaugstinātu slimības “izdzīvošanas” un “izdzīvošanas” samazināšanās risku. -67 ir 20%.Tomēr šis slieksnis neattiecas uz mūsu BRCA1/2 mutāciju pacientu populāciju, kuras Ki-67 vidējā vērtība ir 25%.Šo augsto Ki-67 rādītāju tendenci var izskaidrot ar izplatību mūsu luminālajā B un TNBC grupās, no kurām daži luminālā A audzēji ir labāki (šķiet, ka daži pierādījumi liecina, ka ir augstāki Ki-5 stratēģiskie rādītāji). uzlabot pacientus atbilstoši viņu prognozei.53,54 No mūsu analīzes rezultātiem būtiska korelācija nav pārsteidzoša.Notiek starp augstu Ki-67 un pakāpi un BRCA1 PV klātbūtni.Faktiski ar BRCA1 saistīti audzēji ir tipiski TNBC un uzrāda agresīvākas pazīmes.16,17
Noslēgumā jāsaka, ka šajā pētījumā ir sniegts ziņojums par BRCA1/2 mutācijas statusu BC kohortā no Sicīlijas austrumiem. Kopumā mūsu atklājumi saskan ar jau esošajiem pierādījumiem gan attiecībā uz mutāciju izplatību, gan klīniski patoloģiskajām iezīmēm BC. Vairāk pētījumu par lielākām BRCA1/2 mutācijas BC pacientu populācijām, piemēram, tiek novērtēta retāk izteikta PV klātbūtne, izmantojot daudzu ģenētisku mutāciju analīzi. nekā BRCA1/2. Tas ļaus identificēt un pareizi pārvaldīt pieaugošo skaitu subjektu, kuriem ir paaugstināts vēža risks ģenētisko mutāciju dēļ.
Mēs apstiprinājām, ka pacienti parakstīja informētu piekrišanu anonīmi izlaist savus audzēju paraugus pētniecības nolūkos.Visi pacienti parakstīja rakstisku informētu piekrišanu saskaņā ar Helsinku deklarāciju.Saskaņā ar AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” politiku, šis pētījums tika atbrīvots no ētiskās pārbaudes, jo BRCA1/2 analīze tika veikta.
Mēs pateicamies prof. Paolo Vigneri par palīdzību krūts vēža pacientu aprūpē, kā to pieprasījusi Ētikas komiteja.
Federika Martorana ziņo par honorāriem no Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Pārējie autori paziņo, ka šajā darbā nav nekādu interešu konfliktu.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN novērtē 36 vēža gadījumu sastopamību un mirstību 185 pasaules valstīs.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.60ac.321.