"Nekad nešaubieties, ka neliela grupa domājošu, apņēmīgu pilsoņu var mainīt pasauli. Patiesībā tā ir vienīgā."
Cureus misija ir mainīt ilgstoši pastāvošo medicīniskās publicēšanas modeli, kurā pētījumu iesniegšana var būt dārga, sarežģīta un laikietilpīga.
Trombocītiem bagātināta plazma/prp, audu reģenerācija, trombocītu aktivācija, glikozes proliferatīvā terapija, trombocīti, proliferatīvā terapija
Citēt šo rakstu kā: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (2022. gada 17. maijs) Glikozes ietekme uz trombocītu skaitu un tilpumu: ietekme uz reģeneratīvo medicīnu. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Reģeneratīvajā medicīnā injekcijām parasti izmanto trombocītiem bagātinātu plazmu (PRP) un hipertoniskus glikozes šķīdumus, dažreiz pat kopā. Hipertoniskas glikozes ietekme uz trombocītu līzi un aktivāciju iepriekš nav ziņota. Mēs pārbaudījām paaugstinātas glikozes koncentrācijas ietekmi uz trombocītu un eritrocītu skaitu, kā arī šūnu tilpumu PRP un pilnasinīs (AB). Visos glikozes maisījumos, kas sajaukti ar PRP vai pilnasinīm, novēroja strauju daļēju trombocītu skaita samazināšanos, kas atbilst daļējai līzei. Pēc pirmās minūtes trombocītu skaits saglabājās stabils, kas liecina par atlikušo trombocītu ātru akomodāciju līdz ekstremālai (>2000 mOsm) hipertoniskumam. Pēc pirmās minūtes trombocītu skaits saglabājās stabils, kas liecina par atlikušo trombocītu ātru akomodāciju līdz ekstremālai (>2000 mOsm) hipertoniskumam. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструх аккомоданыцитою аккомоданыцитою тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Pēc pirmās minūtes trombocītu skaits saglabājās stabils, kas liecina par atlikušo trombocītu strauju akomodāciju līdz ekstremālai (>2000 mOsm) hipertoniskumam.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацитромостостацитою к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Pēc pirmās minūtes trombocītu skaits saglabājās stabils, kas liecina par atlikušo trombocītu strauju adaptāciju ekstremālajam (>2000 mOsm) hiperosmolāram stāvoklim.Glikozes koncentrācija 25% un vairāk izraisīja ievērojamu vidējā trombocītu tilpuma (MPV) palielināšanos, kas norāda uz trombocītu aktivācijas agrīnu stadiju. Ir nepieciešami turpmāki pētījumi, lai noteiktu, vai notiek trombocītu līze vai aktivācija, un vai hipertoniska glikozes injekcija atsevišķi vai kombinācijā ar PRP var sniegt papildu klīnisko ieguvumu.
20. gs. piecdesmitajos gados amerikāņu ķirurgs Džordžs Hakets atklāja, ka daudziem pacientiem var neatgriezeniski atvieglot locītavu un muguras sāpes, injicējot cīpslās un saitēs proliferatīvu šķīdumu. Viņa eksperimenti ar trušiem parādīja, ka ārstēšana, ko viņš nosauca par proliferatīvo terapiju, izraisīja cīpslu palielināšanos un nostiprināšanos. Histoloģiskie pētījumi ir apstiprinājuši, ka šī procesa laikā tiek ražots jauns kolagēns [1].
Pirmajās desmitgadēs tika izmēģināti daudzi dažādi izplatīšanas risinājumi. Līdz 20. gs. deviņdesmitajiem gadiem vairums praktiķu uzskatīja augstu glikozes koncentrāciju par drošāko un efektīvāko metodi. Tomēr darbības mehānisms joprojām nav skaidrs.
Pēc Haketa darba 20. gadsimtā tika veikti tikai daži klīniskie pētījumi. Tomēr 2000. gados interese atjaunojās, un tika pabeigti vairāki veiksmīgi proliferatīvās terapijas klīniskie pētījumi muguras sāpju [2], ceļa locītavas osteoartrīta [3] un laterālā epikondilīta [4] ārstēšanai.
Audu reģenerācijai nepieciešama cilmes šūnu līdzdalība. Tādēļ augsta glikozes koncentrācija kaut kādā veidā izraisa cilmes šūnu migrāciju, replikāciju un diferenciāciju. Mēs izvirzām hipotēzi, ka trombocīti var darboties kā ziņneši un ka augsta glikozes koncentrācija var izraisīt trombocītu citokīnu un augšanas faktoru izdalīšanos, tādējādi veicinot reģenerācijas procesus, īpaši cilmes šūnu migrāciju uz apgabaliem ar augstu glikozes koncentrāciju.
Trombocītu aktivācija vienmēr notiek pirms intracelulārā kalcija līmeņa paaugstināšanās [5]. Liu et al. 2008. gadā parādīja, ka augsts glikozes līmenis palielina pārejošo receptoru potenciāla kanonisko 6. tipa (TRPC6) kanālu aktivitāti plazmas membrānā, kas noved pie kalcija jonu pieplūduma trombocītos [6]. Citā pētījumā tika parādīts, ka mikrotubulu marginālās zonas pakļaušana kalcija joniem izraisa marginālās zonas relaksāciju, paplašināšanos un deformāciju, kas savukārt izraisa formas izmaiņas no diska uz sfērisku, kā rezultātā palielinās vidējais trombocītu tilpums (MPV) [7].
Mūsu hipotēze šajā pētījumā ir tāda, ka trombocītu pakļaušana augstām glikozes koncentrācijām ietekmē mikrotubulu marginālo zonu un intracelulāro vidi, izraisot MPV palielināšanos.
Pēc pētījuma detaļu izskaidrošanas un pirms paraugu saņemšanas visi dalībnieki parakstīja informētas piekrišanas veidlapu. Šajā pētījumā tika izmantoti tikai PRP paraugi ar hematokrītu, kas lielāks par 2%, lai salīdzināšanai varētu iekļaut eritrocītu (eritrocītu) skaitu un vidējo sarkano asinsķermenīšu korpuskulāro tilpumu (MCV).
Pētījums tika veikts četrās fāzēs: pirmā fāze bija PRP, bet pārējās fāzes bija pilnasinis (1. tabula). Kā aprakstīts iepriekš [8], visi relatīvie centrbēdzes spēki (RCF, g spēks) tika aprēķināti no asins kolonnas viduspunkta (Rmid, cm) centrbēdzes šļircē. Mēs izvēlējāmies izmantot MPV kā trombocītu sensibilizācijas marķieri un trombocītu skaitu kā potenciālas trombocītu līzes indikatoru, ko var viegli izmērīt ar standarta hematoloģijas analizatoriem.
Pirmajā fāzē 47 brīvprātīgie ziedoja asins paraugus — vienu etilēndiamīntetraetiķskābes (EDTA) mēģeni un vienu PRP pilnasins paraugu (antikoagulēts ar nātrija citrātu (NaCl, 3%)) (1. tabula). Nekavējoties ievietojiet šūpojošos trauciņu mēģenē. Pilna asins aina (CBC) tika veikta ar EDTA paraugiem trīs reizes, un NaCl paraugi tika analizēti trīs reizes CBC analīzei, un pēc tam PRP tika sagatavots, izmantojot dažādas iepriekš aprakstītās metodes [8]. Visi PRP paraugi tika sagatavoti, centrifugējot ar 900–1000 g. Katru PRP paraugu sajauciet vorteksa maisītājā 5–10 sekundes, pēc tam sadaliet piecas 0,5 ml alikvotas mēģenēs.
Lai novērtētu trombocītu iedarbības ietekmi uz paaugstinātu glikozes koncentrāciju, vienāds daudzums (0,5 ml) 0%, 5%, 12,5%, 25% un 50% glikozes šķīduma ūdenī tika sajaukts ar trombocītu paraugiem, lai iegūtu 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% un 25% glikozes maisījuma koncentrācijas, un mēģenes tika sajauktas mēģenes kratītājā 15 minūtes. Katra maisījuma kopējā tilpuma koncentrācija (TAC) tika analizēta trīs reizes pēc 15 minūtēm. Katrai mēģenei tika aprēķināts vidējais trombocītu skaits (PLT), eritrocītu skaits, MCV un MPV, un visiem PRP paraugiem tika aprēķināts vidējais trombocītu skaits, eritrocītu skaits, MCV un MPV.
Pēc datu vākšanas pirmās fāzes pabeigšanas mēs novērojām ievērojamu trombocītu skaita palielināšanos PRP trombocītos pēc D50W pievienošanas. PRP trombocīti ne vienmēr pārstāv visus trombocītus asinīs, un PRP vide atšķiras no WB barotnes. Tāpēc mēs nolēmām veikt otrās fāzes pētījumu par D50W pievienošanas ietekmi uz pilnasinīm.
Otrajai kārtai mēs izvēlējāmies 30 dalībnieku parauga lielumu, pamatojoties uz pirmās sērijas rezultātiem, kā aprakstīts sadaļā “Analīze”. Šajā sērijā 20 brīvprātīgie ziedoja asins paraugus (1. tabula). Pilnas asinis (1,8 ml) tika ievilktas 3 ml šļircē un antikoagulētas ar 0,2 ml 40% NaCl. Pilnasiņu šļirces saturs tika sajaukts piecas sekundes ar vorteksa maisītāju, un asins asins analīze (KBA) tika analizēta trīs reizes. Pēc analīzes antikoagulētās asinis tika pievienotas 2 ml 50% glikozes 5 ml šļircē (galīgā glikozes koncentrācija bija aptuveni 25% (D25)) un ievietotas kratāmajā mēģenē uz 30 minūtēm. Pēc 30 minūtēm D25/KBA WB šļircēs tika analizēta trīs reizes. Tika aprēķināts trombocītu skaita, eritrocītu skaita, MCV un MPV vidējais rādītājs uz vienu šļirci, un katram paraugam pirms un pēc glikozes pievienošanas tika aprēķināts vidējais PLT, eritrocītu skaita, MCV un MPV.
Tā kā proliferatīvās glikozes terapijas laikā pilnasinīs esošie trombocīti minimāli invazīvas injekcijas dēļ bieži tiek pakļauti hipertoniskai glikozei, un nav ierasts kombinēt PRP ar hipertonisku glikozi tieši pirms injekcijas, mēs nolēmām 1. sadaļas trešajā un ceturtajā posmā pētīt hipertoniskās glikozes lietošanu kombinācijā ar balto asins pastu. Katrā posmā 20 brīvprātīgie ziedoja 7–8 ml ACD-A (skābe, kas satur trinātrija citrātu (22,0 g/l), citronskābi (8,0 g/l) un glikozi (24,5 g/l), dekstrozes citrāta šķīdums) asins antikoagulantiem (1. tabula). Lai noteiktu MPV palielināšanās robežprocentuālo daļu, tika izmantoti tikai maisījumi, kas satur vairāk nekā 12,5%. Trešajā posmā mēģenē ievieto 1 ml asiņu. Pēc tam asinis 10 sekundes maisa vorteksa maisītājā, pievienojot mēģenei 1 ml 30% glikozes, 40% glikozes vai 50% glikozes šķīduma, lai iegūtu galīgo glikozes koncentrāciju attiecīgi 15%, 20% un 25%. Glikozes asins paraugi tika analizēti attiecībā uz KBA tūlīt pēc sajaukšanas un atkārtoti ik pēc divām minūtēm 30 minūtes.
Sākotnējās sajaukšanas laikā, pievienojot 1:1 hipertonisku glikozi un WB vai PRP, trombocīti uz vairākām sekundēm tiek pakļauti koncentrācijai, kas pārsniedz 25%. Ceturtajā solī, lai novērtētu hipertoniskas glikozes ietekmi ar minimālu sākotnējo maksimālo koncentrāciju un pārbaudītu glikozes ietekmes augšējo robežu, D25W vai D50W pievienojām tikai nelielu daudzumu asiņu. Ievietojiet 1 ml D25W vai D50W mēģenē un pievienojiet 0,2 ml WB, 10 sekundes kratot paraugu. Šajos gadījumos asinis tika pakļautas glikozes koncentrācijai, kas aptuveni par 20% pārsniedz galīgo koncentrāciju, nevis par 50% pārsniedz galīgo koncentrāciju, kā tas bija 3. fāzē, kā rezultātā galīgā glikozes koncentrācija bija 20,8% un 41,6%. Jaukti paraugi tika analizēti tādā pašā laika intervālā kā 3. solī.
Katras glikozes atšķaidīšanas sērijas pirmajā posmā tika paņemti 30 paraugi, jo tas bija atbilstošs parauga lielums pilotpētījumam [9]. Katras fāzes beigās (ieskaitot pirmo fāzi) novērtējiet parauga lieluma atbilstību, izmantojot formulu, kas izmantota, lai noteiktu parauga lielumu, kas nepieciešams, lai novērtētu nepārtrauktā iznākuma mainīgā vidējo vērtību vienā populācijā. Formula n = Z2 x SD2 /E2. Šajā vienādojumā Z ir Z rādītājs, SD ir standartnovirze un E ir vēlamā kļūda [10]. Mūsu alfa ir 0,05, kas atbilst Z vērtībai 1,96, un mēs sagaidām kļūdu 5 (procentos). Tādējādi mēs atrisinām n = (1,962 x SD2)/52. Rezultāti parādīja, ka katram posmam nepieciešamais parauga lielums bija mazāks nekā faktiski savāktais skaits.
1., 3. un 4. periodā, izmantojot vairāk nekā vienu glikozes koncentrāciju, dažādu glikozes koncentrāciju ietekme tika analizēta, salīdzinot daļējās izmaiņas starp 0. laiku un katru nākamo laiku (1. fāze 15. minūtē, 3. periods 15. minūtē un četras reizes 15. sekundēs, pēc tam ik pēc divām minūtēm). Izmaiņu ātrumi katram laika periodam tika salīdzināti, izmantojot Manna-Vitnija U-testu, jo dati neatbilda normālam sadalījumam, ko noteica Šapiro-Vilka normalitātes tests. Tā kā pirmajā, trešajā un ceturtajā posmā (kopā piecas) tika veikta vairāku grupu (piecu) 1 pret 1 analīze, tika veikta Bonferroni korekcija, lai pielāgotu vēlamo alfa vērtību līdz ≤0,01, bet ne ≤0,05.
Trombocītu skaita samazināšanās, lietojot visas hipertoniskās dekstrozes koncentrācijas, un MPV palielināšanās PRP trombocītos, ja dekstrozes koncentrācija ir >12,5%: PRP trombocītu skaits palielinājās no vienas līdz piecām reizēm salīdzinājumā ar sākotnējo pilnasins koncentrāciju, mainoties atkarībā no metodes (nav attēlots). Trombocītu skaita samazināšanās, lietojot visas hipertoniskās dekstrozes koncentrācijas, un MPV palielināšanās PRP trombocītos, ja dekstrozes koncentrācija ir >12,5%: PRP trombocītu skaits palielinājās no vienas līdz piecām reizēm salīdzinājumā ar sākotnējo koncentrāciju pilnasinīs, mainoties atkarībā no metodes (nav attēlots). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV вхпримпритов концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исхольной кровью, в зависимости от метода (не показано). Samazināts trombocītu skaits pie visām hipertoniskām dekstrozes koncentrācijām un palielināts MPV PRP trombocītos pie >12,5% ​​dekstrozes koncentrācijas: PRP trombocītu skaits palielinājās 1-5 reizes salīdzinājumā ar sākotnējo pilnasinīm atkarībā no metodes (nav parādīts). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，䰏VMP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5倍，因方法而异（未描述）. Ja glikozes koncentrācija ir >12,5%, augstā glikozes koncentrācija samazina asins analīžu skaitu, PRP asins MPV palielinās: salīdzinot ar 与基线全血, PRP asins analīžu skaits palielinās no 1 līdz 5 reizēm salīdzinājumā ar koncentrāciju (nav aprakstīts). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количества количество тромбо в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравенцихо сравсне концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). Ja glikozes koncentrācija bija >12,5%, visas hipertensijas izraisītas glikozes koncentrācijas samazināja trombocītu skaitu un palielināja MPV PRP trombocītos: PRP trombocītu skaits palielinājās 1 līdz 5 reizes salīdzinājumā ar sākotnējo koncentrāciju asinīs atkarībā no metodes (kā aprakstīts).1. attēlā redzams, ka trombocītu skaits samazinājās gandrīz par 75% pēc atšķaidīšanas ūdenī un par 20–30% pēc 15 minūšu atšķaidīšanas ar dažādām glikozes koncentrācijām, salīdzinot ar sākotnējo PRP un 1:1 atšķaidījumu, kas koriģēts atbilstoši tilpumam (1- k1 ar tilpuma korekciju). k -1 vaislas metode).1 vaislas metode).
Šūnu skaits katrā atšķaidījumā tiek izteikts kā sākotnējā skaita daļa pirms atšķaidīšanas.
MPV minimāli samazinājās PRP ražošanas laikā, bez turpmākām atšķaidīšanas koncentrācijas izmaiņām līdz 12,5% ūdenī vai glikozē (ieskaitot 25% PRP glikozes maisījumus), un palielinājās par vairāk nekā 20% pēc atšķaidīšanas 50% glikozes šķīdumā (2. att.). Turpretī eritrocīti neuzrādīja būtiskas tilpuma izmaiņas nevienā citā atšķaidījumā, izņemot H2O.
Šūnu vidējais tilpums katrā atšķaidījumā tiek izteikts procentos no sākotnējā tilpuma pirms atšķaidīšanas.
Līdzīga, bet mazāk izteikta trombocītu skaita samazināšanās un katetruālās virpuļviesulas (CVR) palielināšanās tika novērota krūts vēža gadījumā, kas pakļauta 50% glikozes iedarbībai (formulai ar 25% glikozes). 2. tabulā salīdzināts šūnu skaits un šūnu tilpums pilnasinīs, kas atšķaidītas ar 50% dekstrozi, ar 1. fāzes PRP datiem, kas atšķaidīti ar 50% dekstrozi. Izmaiņas eritrocītu skaitā un eritrocītu minimālajā vizualizācijā (MCV) nebija acīmredzamas un nebija mūsu uzmanības centrā.
SD = standartnovirze, MD = vidējā starpība starp grupām, SE = vidējās starpības standartnovirze, RBC = eritrocīti, PLT = trombocīti, PRP = trombocītiem bagātināta plazma, WB = pilnasinis
Pēc D50W pievienošanas baltās asins masai (WB), atšķaidījumam koriģētais trombocītu zuduma procents bija 7,7 % (310 ± 73 pret 286 ± 96), salīdzinot ar 17,8 % PRP atšķaidījumam D50W (664 ± 348 pret 544 ± 277). MPV baltās asins masa (MPV) palielinājās par 16,8 % (no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6), savukārt MPV PRP palielinājās par 26 % (9,2 ± 0,8 pret 11,6 ± 0,7). Lai gan vidējās atšķirības gan trombocītu skaita samazināšanā, gan MPV palielināšanā bija ievērojami lielākas ar PRP, trombocītu skaita samazināšanās izmaiņas baltā asinsrites diapazonā bija gandrīz nozīmīgas (no 310 ± 73 līdz 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), un MPV palielināšanās bija nozīmīga (no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Lai gan vidējās atšķirības gan trombocītu skaita samazināšanā, gan MPV palielināšanā bija ievērojami lielākas ar PRP, trombocītu skaita samazināšanās izmaiņas baltā asinsrites diapazonā bija gandrīz nozīmīgas (no 310 ± 73 līdz 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), un MPV palielināšanās bija nozīmīga (no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Lai gan vidējās atšķirības gan trombocītu skaita samazināšanā, gan CVR palielināšanā bija ievērojami lielākas ar PRP, trombocītu skaita samazināšanās izmaiņas baltās asinsrites ietvaros bija gandrīz nozīmīgas (no 310 ± 73 līdz 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). MPV pieaugums bija nozīmīgs (no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MP的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 尡 膅减少 的 几乎 是 显着 的 （（(310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增劊± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.Trombocītu skaita samazināšanās izmaiņas baltajā asinsritē bija gandrīz nozīmīgas (no 310 ± 73 līdz 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), lai gan PRP grupā bija ievērojami lielākas vidējās atšķirības trombocītu skaita samazināšanā un MPV palielināšanā, un MPV palielināšanās bija nozīmīga.(no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (no 10,1 ± 0,5 līdz 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Lai redzētu būtiskas MPV izmaiņas, bija nepieciešama 20 % glikozes galīgā koncentrācija, bet MPV izmaiņas bija izteiktākas pie 25 % galīgās koncentrācijas. Trombocītu zudums pēc sākotnējā samazinājuma stabilizējās. Mēs novērojām sākotnēju strauju CVR samazināšanos, tomēr CVR ātri atjaunojās pie 25 % glikozes galīgās koncentrācijas, kas bija ievērojami augstāka nekā CVR līmeņi, kas novēroti pie 20 % un 15 % glikozes galīgajām koncentrācijām (3. attēls un 3. tabulas kreisajā pusē; iekrāsotās rūtiņas). norāda p-vērtības ≤ alfa ar Bonferroni korekciju 0,01). Sākotnējā fāzē 0–15 s bija arī straujš PLT skaita kritums, kas tika novērots, un pēc tam tas saglabājās stabils (no 15 s līdz 30 minūtēm; 4. tabulas kreisajā pusē).
Dažādu glikozes koncentrāciju pievienošana pilnasinīm sākotnēji izraisīja strauju MPV samazināšanos, kam sekoja no koncentrācijas atkarīga atjaunošanās par vairāk nekā 20%. Attēlā redzama glikozes koncentrācija pēc atšķaidīšanas. D15, D20 un D25 tika veikti atšķaidījumā 1:1. D21 un D41 tika veikti atšķaidījumā 1:5.
4. tabulā parādītas trombocītu skaita izmaiņas, atšķaidot ar hipertonisku glikozi. Mēs novērojām no devas atkarīgu saistību starp tūlītēju PLT skaitļu samazināšanos 1:1 atšķaidījumā un 1:5 atšķaidījumā. Salīdzinot 1:1 atšķaidījumus kā vienu grupu ar 1:5 atšķaidījumiem, 1:1 grupā tūlītēja trombocītu skaita samazināšanās bija mazāka nekā 1:5 grupā — 66 ± 48 000 (23 %) pret 99 ± 69 000 (37 %). , p = 0,014) 1:5 grupā. Pēc sākotnējā krituma pirmajā mērījuma punktā trombocītu skaits procentos no glikozes stabilizējās (4. att.).
Pievienojot glikozei pilnasinīm attiecībā 1:1, trombocītu skaits samazinās par aptuveni 25 %. Tomēr, pievienojot pilnasinīm attiecībā 1:5, samazinājums bija daudz lielāks — aptuveni 50 %.
41% glikozes koncentrācija palielināja MPV ātrāk un dramatiskāk nekā 25% vai 21%. MPV rezultāti ir parādīti 3. attēlā. Visos citos atšķaidījumos pēc 50% glikozes pievienošanas netika novērota tūlītēja sākotnēja MPV samazināšanās. Izmantojot 25% glikozi (glikozes koncentrācija galīgajā atšķaidījumā 20,8%), MPV izmaiņas bija salīdzināmas ar 20% glikozes izmaiņām 1:1 atšķaidījumā (3. att.). Lai gan sākotnēji MPV izmaiņas bija lielākas 41% jauktajā koncentrācijā nekā 25% koncentrācijā, MPV atšķirība starp 41% un 25% pēc 16 minūtēm vairs nebija nozīmīga (3. tabula, labajā pusē). Interesanti arī tas, ka 25% glikoze palielināja MPV efektīvāk nekā 20,8%.
Šis in vitro pētījums daļēji apstiprināja mūsu hipotēzi. Tas uzrādīja potenciālu daļēju trombocītu līzi dekstrozes piejaukuma dēļ, trombocītu ātru akomodāciju līdz ekstremālai hipertoniskumam un ievērojamu MPV pieaugumu, reaģējot uz > 25% hipertoniskas dekstrozes koncentrāciju. Tas uzrādīja potenciālu daļēju trombocītu līzi dekstrozes piejaukuma dēļ, trombocītu ātru akomodāciju līdz ekstremālai hipertoniskumam un ievērojamu MPV pieaugumu, reaģējot uz > 25% hipertoniskas dekstrozes koncentrāciju. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Tas uzrādīja potenciālu daļēju trombocītu līzi ar dekstrozi, ātru trombocītu akomodāciju līdz ekstremālai hipertoniskumam un ievērojamu MPV palielināšanos, reaģējot uz hipertonisku dekstrozes līmeni >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 忼 速 适应 极 适 庯 极响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацициц адаптацию экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Tas parāda potenciālu daļēju trombocītu līzi glikozes maisījumu ietekmē, ātru trombocītu adaptāciju ekstremālai hipertoniskumam un ievērojamu MPV palielināšanos, reaģējot uz hipertonisku glikozi >25%.Sākotnējais pieaugums bija maksimāls pie 41,6% glikozes iedarbības, bet MPV pieaugums tuvojās 25% glikozes iedarbības aptuveni 20 minūtes pēc iedarbības.
Glikoze ietekmē trombocītu koncentrāciju. Mēs ievērojām, ka PLT daudzums samazinājās visos glikozes atšķaidījumos. Straujš trombocītu skaita kritums PRP sērijas H2O (0%) atšķaidījumos var būt saistīts ar osmotisko līzi. Alternatīvi, tas varētu būt artefakts, ko izraisa trombocītu salipšana, taču tas ir pretstatā MPV izmaiņu neesamībai šajā atšķaidījumā. Šis atklājums nozīmē, ka daži trombocīti ir ļoti jutīgi pret hipoosmolaritāti.
Visos glikozes atšķaidījumos attiecībā 1:1 PLT daudzums samazinājās par 20–30 % pat pie D5W (hipotoniski pie 252 mOsm), kas var liecināt par specifisku glikozes neosmotisku efektu, jo gan PLT, gan MPV nemainījās, glikozes koncentrācijai trīs reizes palielinoties no D5W līdz D25W. Faktiski PLT koncentrācijai bija tendence nedaudz palielināties, palielinoties osmolaritātei.
PLT samazināšanās starp 1:1 un 1:5 atšķaidījumiem nozīmē, ka šķīšanas efekts ir atkarīgs no sākotnējās un galīgās glikozes koncentrācijas. Ja tas būtu atkarīgs tikai no sākotnējās koncentrācijas, tad varētu sagaidīt atšķirību PLT samazinājumā starp 1:1 koncentrācijām. Bet mēs to neredzam. Ja līzes efekts ir atkarīgs tikai no galīgās glikozes koncentrācijas, tad mēs negaidām lielu atšķirību starp 20% 1:1 atšķaidījumu un 20,8% 1:5 atšķaidījumu. Un tomēr mēs to izdarījām.
Ja trombocītu zudums rodas trombocītu līzes dēļ, veidojas daļēja lizāts, pēc kura citokīni un augšanas faktori tiek izdalīti ārpusšūnu vidē. Vairāki pētījumi ir pierādījuši, ka trombocītu lizāts ir gandrīz tikpat efektīvs kā PRP kā proliferācijas šķīdums [11]. Ir pierādīts, ka PRP pats par sevi ir efektīvs risinājums proliferācijas ārstēšanā [12–14].
Neaktīvās trombocītes cirkulē diska formā, kas pastiprināta ar vairākām iekšējām struktūrām. Aktivācijas laikā tās iegūst sfēriskāku vai amēbas formu, kā rezultātā palielinās to tilpums. Tilpuma palielināšanās prasa virsmas laukuma palielināšanos, kas ir atvērto kanāliņu sistēmas (OCS) ekstrūzijas un eksocitāru granulu pievienošanas membrānai rezultāts. Vēl jānoskaidro, vai hipertoniskās glikozes izraisītais MPV pieaugums ietver vienu vai abus šos mehānismus, bet, ja runa ir par pēdējo, tad MPV pieaugums liecinātu par degranulāciju.
Šis pētījums parādīja, ka pakļaušana augstām glikozes koncentrācijām uz PRP vai pilnasins trombocītiem izraisīja MPV palielināšanos 15 minūšu laikā ar glikozes koncentrāciju attiecīgi 25% un 41,6%.
Trombocītu MPV palielināšanās var būt saistīta ar apkārtējo mikrotubulu sapiņu paplašināšanos, reaģējot uz kalcija pieplūdumu. Liu et al. Ir pierādīts, ka glikoze mediē kalcija pieplūdumu caur trombocītu TRPC6 kanālu [6]. Mūsu hipotēze ir tāda, ka glikoze izraisa mikrotubulu sapiņu relaksāciju, izraisot MPV palielināšanos un trombocītu sensibilizāciju un/vai aktivāciju. Tomēr, spriežot pēc mūsu rezultātiem, tā ir tikai daļa no stāsta. Mūsu testos neviena koncentrācija, kas zemāka par D25W, neizraisīja MPV palielināšanos. Ņemot vērā, ka mēs neesam pārbaudījuši glikozes koncentrāciju no 12,5% līdz 25%, mūsu 1. fāzes rezultāti liecina, ka šajā glikozes koncentrācijas diapazonā var būt robežvērtība, kas noved pie MPV palielināšanās. Turpmāka testēšana 3. un 4. posmā parādīja, ka 20–25% glikozes, šķiet, ir šī robežvērtība, taču joprojām nav skaidrs, kāpēc.
Mēs arī novērojām ~9% MPV samazināšanos pēc centrifugēšanas. Nav skaidrs, vai šis MPV samazinājums ir saistīts ar lielākiem un blīvākiem trombocītiem, kas iesprostoti centrifūgas RBC slānī. Šis novērojums var būt svarīgs klīnicistiem, jo ​​tas var nozīmēt, ka PRP trombocīti ir mazāka un mazāk blīva WB trombocītu apakškopa.
Iepriekšējā pētījumā mēs parādījām, ka PRP sagatavošana ar manuālām metodēm ir lēta [8]. Ja glikoze sensibilizē audu trombocītus vai PRP, padarot tos uzņēmīgākus pret aktivāciju, vai ja PRP tiek ražots ar daļējas lizāta īpašībām, tas var veicināt reģenerāciju un samazināt terapijas nepieciešamību. Tādēļ PRP un ļoti koncentrētas glikozes kombinācija var būt izmaksu ziņā efektīvāka nekā PRP vai glikoze atsevišķi.
Mūsu pētījumam ir vairāki trūkumi. Pirmkārt, mēs izmantojam PRP, kas iegūts ar vairākām dažādām metodēm. Tas var novest pie pretrunīgiem rezultātiem. Otrkārt, mēs nevarējām veikt neviena no mūsu paraugiem bioķīmisko analīzi, lai precīzāk noteiktu, vai ir notikusi trombocītu aktivācija. Mēs vēlētos izmērīt P-selektīnu, trombocītu faktoru 4, monocītu trombocītu agregātus vai citus trombocītu aktivācijas marķierus, lai labāk izprastu alfa granulu degranulācijas pakāpi vai klātbūtni, taču tas neietilpst šī pētījuma tvērumā. Treškārt, mēs nevarējām ar elektronmikroskopiju vai citām metodēm apstiprināt, ka MPV palielināšanās glikozes iedarbībai pakļautajās trombocītēs bija saistīta ar ietekmi uz mikrotubulu sapīšanos.
WB vai PRP maisījumi ar 25% glikozes palielināja MPV, signalizējot par trombocītu aktivācijas sākumu, lai gan šajā pētījumā netika pierādīta agregācijas vai degranulācijas progresēšana. Hipertoniskais glikozes maisījums izraisīja trombocītu zudumu, kas, iespējams, liecina par lītisku efektu. Trombocītu daļēja aktivācija vai līze var izraisīt audu reģenerāciju pēc trombocītu injekcijas. Nav skaidrs, kādas klīniskās sekas šīs izmaiņas var izraisīt. Turpmākie pētījumi ir parādījuši precīzākus aktivācijas vai līzes mērījumus un ir izvērtējuši hipertonisku glikozes maisījumu ar WB vai PRP atšķirīgo klīnisko iedarbību.
Glikozes proliferatīvā terapija ir vienkārša un lēta reģeneratīvā terapija, kas strauji paplašinās un atbalsta klīniskos pētījumus. Šis pētījums liecina par fizioloģisku mehānismu, kas, ja tiks apstiprināts, varētu palīdzēt mums izprast daļu no proliferatīvās terapijas reģeneratīvā mehānisma.
Biomedicīnas un veselības informātika Misūri Universitātē, Kanzasas Sitijas Medicīnas skolā, Kanzasas Sitijā, ASV
Cilvēki, kas piedalījās pētījumā: Visi šī pētījuma dalībnieki deva vai nedeva piekrišanu. Starptautiskā šūnu medicīnas biedrība ir izsniegusi ICMS-2017-003 apstiprinājumu. Starptautiskās šūnu medicīnas biedrības Institucionālā pārskata padome ir apstiprinājusi šādu protokolu turpmākai lietošanai: Nosaukums: Trombocītiem bagātinātas plazmas zāļu daudzuma aprēķins, pamatojoties uz sākotnējo KBL trombocītu skaitu. Dzīvnieki, kas piedalījās pētījumā: Visi autori apstiprināja, ka šajā pētījumā netika iesaistīti dzīvnieki vai audi. Interešu konflikti: Saskaņā ar ICMJE Vienoto informācijas atklāšanas veidlapu visi autori deklarē sekojošo: Maksājumu/pakalpojumu informācija: Visi autori deklarē, ka iesniegtajam darbam nav saņēmuši finansiālu atbalstu no nevienas organizācijas. Finansiālās attiecības: Visi autori deklarē, ka viņiem pašlaik vai pēdējo trīs gadu laikā nav finansiālu attiecību ar nevienu organizāciju, kas varētu būt ieinteresēta iesniegtajā darbā. Citas attiecības: Visi autori deklarē, ka nav citu attiecību vai darbību, kas varētu ietekmēt iesniegto darbu.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (2022. gada 17. maijs) Glikozes ietekme uz trombocītu skaitu un tilpumu: ietekme uz reģeneratīvo medicīnu. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Autortiesības 2022 Harrison et al. Šis ir brīvas piekļuves raksts, kas izplatīts saskaņā ar Creative Commons Attribution licences CC-BY 4.0 noteikumiem. Atļauta neierobežota izmantošana, izplatīšana un reproducēšana jebkurā vidē, ja tiek norādīts sākotnējais autors un avots.