Mba hanonerana ny tsy fahampian'ny otrikaina manokana amin'ny dingana samihafa amin'ny fiainana, ny bibikely dia afaka mahazo ireo otrikaina ireo amin'ny alàlan'ny famahanana fanampiny, ohatra, amin'ny alàlan'ny famahanana ny vertebrata amin'ny dingana antsoina hoe puddles. manombana raha An. Ny fihetsehana arabiensis amin'ny fisotron'ny omby mba hahazoana otrikaina dia manatsara ny toetran'ny tantaram-piainana.
Ataovy azo antoka fa azo antoka. Ny arabiensis dia voasarika tamin'ny fofon'ny ombivavy vaovao, 24 ora, 72 ora, ary 168 ora, ary ny vehivavy mitady mpampiantrano sy mampinono rà (48 ora aorian'ny sakafo) dia norefesina tamin'ny olfactometer Y-tube, ary ny vehivavy bevohoka dia tombanana ho an'ny fitiliana biophysiologique natambatra. Ny fisotron'ny omby amin'ny sokajin-taona efatra. Nodinihina tamin'ny fitsapam-pahaizana Y-tube sy eny an-kianja ny fangaro sintetika amin'ny fitambarana bioactive. fivelomana, sidina voafatotra, ary ny fananahana.
Tadiavo ny rà sy ny sakafon'ny mpampiantrano. Tamin'ny fandinihana laboratoara sy eny an-tsaha, ny Arabo dia voasarika tamin'ny fofona voajanahary sy sentetika avy amin'ny urine ombivavy vaovao sy efa antitra. Ny vehivavy bevohoka dia tsy miraharaha ny valin'ny urine amin'ny toerana fanatodizana. fananahana.
Anopheles arabinis ny fahazoana sy ny fitsinjarana ny fisotron'omby mba hanatsarana ny tantaram-piainana.Miantraika mivantana amin'ny fahafahan'ny vector ny famatsiana ny fisotron'omby amin'ny alalan'ny fampitomboana ny fahavelomana isan'andro sy ny hakitroky ny vector, ary amin'ny fomba ankolaka amin'ny alàlan'ny fanovana ny hetsika sidina ka tokony hodinihina amin'ny modely ho avy.
Ny fahazoana sy ny fitsinjarana ny otrikaina dia mampiditra ny fihinan'ny bibikely sy ny toetran'ny tantaram-piainana [1,2,3]. Ny bibikely dia afaka misafidy sy mahazo sakafo ary manao famatsiana fanonerana mifototra amin'ny fisian'ny sakafo sy ny fepetra takian'ny otrikaina [1, 3]. Ny fizarana ny otrikaina dia miankina amin'ny fizotry ny tantaram-piainana ary mety hitarika amin'ny fepetra samihafa amin'ny kalitao sy ny habetsahan'ny sakafo amin'ny dingan'ny fiainana samihafa. Ny otrikaina, ny bibikely dia afaka mahazo ireo otrikaina ireo amin'ny alalan'ny sakafo fanampiny, toy ny fotaka, ny diky isan-karazany ary ny sekretan'ny vertebrates, ary ny fatim-biby, dingana iray antsoina hoe puddles [2] . 6] ,7]. Ny moka tazomoka Anopheles gambiae sensu lato (sl) dia mipoitra ho olon-dehibe 'tsy ampy sakafo' [8], ka mety manana anjara toerana lehibe eo amin'ny tantaram-piainany ny fanondrahana, saingy tsy noraharahiana izany fihetsika izany hatramin'izao.
Voafetra ny fihinanana nitrogène amin'ny moka Anopheles vavy lehibe noho ny tsy fahampian'ny kalôria entin'ny dingan'ny larva sy ny tsy fahampian'ny fampiasana ny sakafon-dra [9]. Ny vehivavy Ann.gambiae sl matetika dia manonitra izany amin'ny famenoana sakafo fanampiny amin'ny rà [10, 11], ka mahatonga ny olona ho atahorana ho voan'ny aretina sy areti-mifindra. Ny moka dia afaka mampiasa famatsiana fanampiny avy amin'ny vertebrate excreta mba hahazoana ny azota azota izay manatsara ny fampifanarahana sy ny fihetsehan'ny sidina, araka ny asehon'ny bibikely hafa [2]. Amin'io lafiny io, ny fanintonana matanjaka sy miavaka amin'ny iray amin'ireo karazana mpiray tam-po ao anatin'ny An. The Gambian sl complex complex, Anopheles arabinis, ombivavy vaovao sy efa antitra dia mahaliana amin'ny urine ombivavy [12],13,14. Ny fisotron'ny omby dia loharano manankarena amin'ny fitambarana azota, miaraka amin'ny urea ny 50-95% amin'ny totalin'ny azota ao amin'ny urine vaovao [15, 16]. Rehefa mihantitra ny fisotron'ny omby, dia mampiasa ireo loharanon-karena ireo ny micro-organisms mba hampihenana ny fahasarotan'ny fitambarana azota azota ao anatin'ny 24 ora, miaraka amin'ny fihenan'ny alkaloonika azota ao anatin'ny 24 ora [15]. Miroborobo ny microorganisms (maro amin'izy ireo no mamokatra zavatra poizina ho an'ny moka), izay mety ho an'ny Ann.arabiensis vavy no tena voasarika amin'ny urine mandritra ny 24 ora na latsaka [13, 14].
Tao anatin'ity fanadihadiana ity dia nokarohina ny Ans mpampiantrano sy ny rà. Nandritra ny tsingerin'ny gonadotropin voalohany, ny arabiensis dia nodinihina ho amin'ny fahazoana kanto azota, anisan'izany ny urea, amin'ny alàlan'ny fampifangaroana urine. Nodinihina mba hamaritana raha nanome tolo-kevitra azo itokisana ho an'ny mpampiantrano sy ny sakafon-drà An. Tamin'ny fitadiavana an'io loharanon-tsakafo mety ho an'ny sakafo io, ny arabiensis dia nahita fifandraisana simika ao ambadiky ny mahasarika ny maha-samihafa azy. Ny fanintonana moka.Ny vokatra azo dia manamafy fa An. arabiensis dia mahazo sy mizara ireo kaontin'ny azota hita ao amin'ny fisotron'ny hazon-damosina mba hisy fiantraikany amin'ny toetran'ny tantaram-piainana.
Anopheles arabicans (Dongola strain) dia notazonina tamin'ny 25 ± 2 ° C, 65 ± 5% RH ary hazavana 12: 12 h: tsingerin'ny maizina. Ny olitra dia nobeazina tao anaty lovia plastika (20 cm × 18 cm × 7 cm) feno rano voadio ary nomena sakafo Tetramin®, trondro trondro (Tetramin® 0, Tetramin®) nanangona (Tetramin® 0) ny sakafo (Tetramin® 0. (Nolato Hertila, Åstorp, SE) ary avy eo nafindra tany amin'ny tranom-borona Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) mba hamelana ny fiposahan'ny olon-dehibe. Ny olon-dehibe dia nomena vahaolana sucrose 10% ad libitum mandra-pahatongan'ny andro 4 taorian'ny fisehoana (dpe), izay natolotra ny andrana amin'ny alina na vehivavy. Alohan'ny fanandramana, araka ny voalaza etsy ambany.Ny vehivavy ampiasaina amin'ny fanandramana fantsona sidina dia noana nandritra ny 4-6 ora monja tamin'ny rano ad libitum. Mba hanomanana moka mitsentsitra rà ho an'ny bioassays manaraka, vehivavy 4 dpe dia nomena ran'ny ondry defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) amin'ny fampiasana rafitra famahanana membrane (Hemotek Accringullyton Workshops, nafindra tany UK). cages ary nanome sakafo mivantana, araka ny voalaza etsy ambany, na 10% sucrose ad libitum mandritra ny 3 andro alohan'ny fanandramana voalaza etsy ambany.Ireo vehivavy farany dia nampiasaina ho an'ny bioassays fantsona sidina ary nafindra tany amin'ny laboratoara, ary avy eo dia nanana rano distilled ad libitum mandritra ny 4-6 ora alohan'ny fanandramana.
Ny famatsiana famatsiana dia nampiasaina mba hamaritana ny fihinanana urine sy ny urea amin'ny vehivavy An.Arab olon-dehibe. Ny vehivavy mitady mpampiantrano sy mivelona amin'ny rà dia nomena sakafo misy 1% voadio amin'ny urine ombivavy vaovao sy antitra, isan-karazany ny urea, ary fanaraha-maso roa (10% sucrose sy rano) mandritra ny 48 h. Fanampin'izany, fandokoana sakafo (1 mgS ml-1 FF5; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) dia nanampy tamin'ny sakafo ary natolotra tao amin'ny 4 × 4 matrix amin'ny 250 µl microcentrifuge tubes (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figure 1A) Fenoy ny sisiny (~ 300 µl) . (12 cm ny savaivony ary 6 cm ny haavony; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figure 1A) ao anaty haizina tanteraka amin'ny 25 ± 2 cm ° C ary ny hamandoana 65 ± 5%. Naverina in-5 hatramin'ny in-10 ireo andrana ireo. Taorian'ny fiparitahan'ny sakafo dia napetraka ny moka mandra-pandinihana bebe kokoa -20 ° C.
Tadiavo ny fisotron'ny ombivavy sy ny urea alain'ny biby mampinono sy ny Anopheles arabianus vavy. Tamin'ny famahanana (A), ny moka vavy dia nomena sakafo ahitana urine vao sy antitra, urea isan-karazany, sucrose (10%), ary rano voadio (H2O). Ny vehivavy mitady mpampiantrano dia mifoka urine 72 ora latsaky ny 168 ora omby (B). Ny totalin'ny votoatiny azota (± deviation standard) amin'ny urine dia aseho eo amin'ny sisiny. Ny famakafakana post hoc an'i Tukey; p < 0.05). Ny barany diso dia maneho ny fahadisoana mahazatra amin'ny mean (BE).
Mba hamoahana ny sakafo mifoka, dia napetraka tsirairay ao anaty fantsona microcentrifuge 1,5 ml misy 230 µl rano voadio ny moka ary nopotehina tamin'ny alàlan'ny pestle fanariana sy motera tsy misy tariby (VWR International, Lund, SE), arahin'ny centrifugation amin'ny 10 krpm mandritra ny 10 min. Ny microplate (Sigma-Aldrich) sy ny absorbance (λ620) dia nofaritana tamin'ny fampiasana ny mpamaky microplate mifototra amin'ny spectrophotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). 1800, Shimadzu, Kista, SE). Mba hamaritana ny fihinanana sakafo dia nisy curve mahazatra nomanina tamin'ny alàlan'ny dilution serial mba hamokarana 0.2 µl hatramin'ny 2.4 µl of 1 mg ml-1 xylene cyanide.
Ny angon-drakitra volume dia nodinihina tamin'ny fampiasana famakafakana iray momba ny variana (ANOVA) arahin'ny fampitahana post hoc pairwise Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989-2007). v8.0.0 ho an'ny Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Manodidina ny 20 µl ny santionan'ny urine avy amin'ny sokajin-taona tsirairay dia nafatotra tamin'ny Chromosorb® W / AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ary nofonosina tao anaty kapsily fanitso (8 mm × 5 mm) . hamaritana ny votoatin'ny azota ao amin'ny urine vaovao sy antitra araka ny fitsipiky ny mpanamboatra. Ny totalin'ny azota (g N l-1) dia nofaritana mifototra amin'ny fatran'ny urea fantatra fa ampiasaina ho fenitra.
Mba hanombanana ny fiantraikan'ny sakafo amin'ny fiveloman'ny vehivavy mitady mpampiantrano sy mifoka rà, dia napetraka tsirairay ao anaty vilia Petri lehibe ny moka (12 sm ny savaivony ary 6 sm ny haavony; Semadeni) misy lavaka misy harato eo amin'ny sarony (3 sm ny savaivony) miaraka amin'ny ho an'ny rivotra sy ny famatsian-tsakafo. fanaraha-maso, sucrose 10% ary rano. Ny sakafo tsirairay dia napetaka teo amin'ny tampon nify (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) nampidirina tao anaty syringe 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), nesorina ny plunger, ary napetraka teo an-tampon'ny lovia petri (sary 1 etsy ambony). Ny moka dia isaina indroa isan'andro, raha ny moka maty kosa dia nariana mandra-pahafatin'ny moka farany (n = 40 isaky ny fitsaboana).
Fikosoham-baravarankely manidina moka mifototra amin'ny Attisano et al.[17], vita amin'ny takelaka akrilika mazava 5 mm matevina (10 sm ny sakany x 10 sm ny halavany x 10 sm ny haavony) tsy misy tontonana eo anoloana sy aoriana (sary 3: ambony). Fivoriana pivot misy fantsona mitsangana vita amin'ny tsanganana chromatography entona cm (0,25 mm id ; 7,5 mm id ; eo anelanelan'ny andriamby neodymium roa mifanelanelana 9 sm. Fantsona mitsivalana vita amin'ny akora mitovy (6,5 sm L) no nanasaraka ny fantsona mitsangana mba ho lasa sandry mifatotra sy sandry iray izay mitondra tapa-kazo kely aluminium ho famantarana mampiato ny hazavana.
Ny vehivavy mosarena 24 ora dia nomena ny sakafo etsy ambony mandritra ny 30 minitra alohan'ny hifehezana azy. Ny moka vavy feno sakafo dia nodiovina tsirairay tamin'ny ranomandry nandritra ny 2-3 minitra ary napetaka tamin'ny tsimatra bibikely misy savoka (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) ary avy eo dia nafatotra tamin'ny sidina horizontaly. voarakitra an-tsoratra amin'ny logger data namboarina manokana, avy eo voatahiry sy aseho amin'ny alàlan'ny rindrambaiko PC-Lab 2000 ™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE) .Napetraka tao amin'ny efitrano voafehy ny toetr'andro (12 h: 12 h, hazavana: maizina, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH) ny milina sidina.
Mba hijerena ny lamin'ny hetsika sidina, ny totalin'ny halaviran'ny fiaramanidina (m) sy ny totalin'ny hetsika sidina misesy dia nokajiana isan'ora nandritra ny 24 ora. Fanampin'izay, kajy ao anatin'ny 10 minitra ny salan'isan'ny fihodinana.
Mba hanombanana ny fiantraikan'ny sakafo amin'ny fananan'ny An.arabiensis, vehivavy enina (4 dpe) dia nafindra mivantana tany amin'ny tranom-borona Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) taorian'ny fanangonana ra ary avy eo nanome ny sakafo fanandramana nandritra ny 48 ora araka ny voalaza etsy ambony. ora, miova isaky ny 24 ora. Avereno in-20-50 isaky ny sakafo tsirairay. Noisaina sy voarakitra an-tsoratra ny atody ho an'ny tranom-panandramana tsirairay. Ny santionan'ny atody dia nampiasaina mba hanombanana ny haben'ny habeny sy ny halavan'ny atody tsirairay (n ≥ 200 isaky ny sakafo) amin'ny fampiasana mikraoskaopy Dialux-20 (DM1000; Wetzlarst, Weitzica) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE).Ny atody sisa tavela dia notehirizina tao amin'ny efitrano iray mifehy ny toetr'andro eo ambanin'ny fepetra fitaizana mahazatra mandritra ny 24 ora, ary ny santionan'ny olitra instar voalohany vao haingana (n ≥ 200 isaky ny sakafo) dia norefesina, araka ny voalaza etsy ambony. v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ny santionany voaangona avy amin'ny omby Zebu, firazanana Arsi dia voaangona avy amin'ny santionany voaangona avy amin'ny omby Zebu, firazanana Arsi, ho an'ny fanamorana, ny santionan'ny urine dia nangonina vao maraina raha mbola tao an-tranon'omby ny omby. (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH sy Co., Minden, DE) amin'ny 3 l polyamide amin'ny sarony Ao amin'ny vinyl klôro plastika drums.Headspace volatiles avy amin'ny bovine urine santionany dia nangonina na mivantana (vaovao) na taorian'ny fahamatorana ao amin'ny efitrano mari-pana ho an'ny 24 h, 72 h sy 168 h, izany hoe isaky ny sokajin-taona santionan'ny fisotrony.
Ho an'ny fanangonana volatiles headspace, ny rafitra mihidy dia nampiasaina mba handefasana gazy entona voasivana karbônina mavitrika (100 ml min-1) amin'ny alàlan'ny kitapo polyamide mankany amin'ny tsanganana adsorption mandritra ny 2.5 h amin'ny fampiasana paompy vacuum diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Amin'ny maha fanaraha-maso, ny fanangonana ny headspace dia natao avy amin'ny tsanganana tsy misy na inona na inona. (5,5 cm x 3 mm id) misy 35 mg ny Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) eo anelanelan'ny plugs volon'ondry fitaratra. Talohan'ny fampiasana, ny tsanganana dia nopotehina tamin'ny 1 ml redistilled n-hexane (Merck, Darmstadt, DE) ary 1 ml grade pentane (99.0% GC) pentane madio (99.0% GC). dia nopotehina tamin'ny 400 μl ny pentane. Ny fanangonana headspace dia natambatra ary avy eo tehirizina amin'ny -20 ° C mandra-pampiasaina amin'ny fanadihadiana fanampiny.
Ny valin'ny fitondran-tena amin'ny fitadiavana mpampiantrano sy ny fihinanana rà An.Headspace volatile extract nangonina avy amin'ny urine vaovao, 24-h, 72-h, ary 168-h-taona dia nodinihina ho an'ny tsiranoka mivaingana avy amin'ny moka Arabidopsis amin'ny fampiasana olfactometer fitaratra mivantana [18]. Ny andrana dia natao nandritra ny vanim-potoanan'ny ZT' rabk-15. [19] Ny fantsona fitaratra fitaratra (80 cm × 9.5 cm id) dia nohazavaina tamin'ny hazavana mena 3 ± 1 lx avy any ambony. Ny fikorianan'ny rivotra voasivana sy voadio amin'ny saribao (25 ± 2 ° C, 65 ± 2% hamandoana relatif) dia nandalo ny bioassay tamin'ny 30 cm s-1. firafitry ny plume.Dispenser dental tampon (4 cm × 1 cm; L: D; DAB Dental AB), mihantona amin'ny coil 5 sm eo amin'ny faran'ny rivotra amin'ny olfactometer, miaraka amin'ny fiovan'ny stimulator isaky ny 5 minitra. Ny moka mpitsentsitra rà dia napetraka ao anaty tranom-biby famotsorana tsirairay 2-3 ora alohan'ny hanombohan'ny andrana. Ny tranom-boaloboka dia napetraka eo amin'ny ilany ambany rivotra amin'ny olfactometer, ary ny moka dia navela hifanaraka nandritra ny 1 minitra, ary avy eo dia nosokafana ny valva lolo amin'ny tranom-borona mba hamoahana. Ny fitrandrahana sy ny fanaraha-maso ny headspace tsirairay dia averina in-30 farafahakeliny, ary mba hisorohana ny fiantraikan'ny andro iray, ny isan'ny fitsaboana sy ny fanaraha-maso dia nozahana isaky ny andro andrana. Mitadiava valiny avy amin'ny mpampiantrano sy ny Ans.Arabic versus headspace sets dia nodinihina tamin'ny fampiasana nominal logistic regression arahin'ny fampitahana tsiroaroa ho an'ny odd ratios14JMP, Inc. SAS14JMP.
Ny valin'ny fanatodizana an'i An. Ny fitrandrahana headspace avy amin'ny urine ombivavy vaovao sy efa antitra dia nodinihina tao amin'ny tranom-borona Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Kaopy plastika (30 mL; Nolato Hertila) feno rano 20 mL nohavaozina nanome ny substrate fanatodizana ary napetraka teo amin'ny zorony mifanohitra amin'ny kaopy T4 cm. Namboarina tamin'ny 10 μl ny fitrandrahana headspace tsirairay amin'ny dilution 1: 10. Ny habetsaky ny pentane mitovy dia nampiasaina hanitsiana ny kaopy fanaraha-maso. Ny fitsaboana sy ny kaopy fanaraha-maso dia nifanakalozana teo anelanelan'ny fanandramana tsirairay mba hifehezana ny fiantraikany amin'ny toerana. Ny vavy folo nahazo rà dia navotsotra tao amin'ny tranom-panandramana ZT 9-11 ary ny atody ao anaty kaopy dia isaina amin'ny 24 ora aorian'izay. atody napetraka ao amin'ny kaopy fitsaboana - ny isan'ny atody napetraka ao amin'ny kaopy fanaraha-maso)/(ny fitambaran'ny atody napetraka).Naverina in-8 ny fitsaboana tsirairay.
Ny famakafakana ny chromatographie sy electron antenna pattern detection (GC-EAD) momba ny An.arabiensis vavy dia natao araka ny voalaza teo aloha [20]. Fohy, ny fitrandrahana vaovao avy amin'ny headspace volatile dia nosarahina tamin'ny fampiasana Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) miaraka amin'ny tsanganana HP-5 (30 m × 0.25 mm ny hatevin'ny teknolojia, Agilent Technologies id). ary ny urine efa antitra.Ny hydrogène dia nampiasaina ho toy ny dingana finday miaraka amin'ny tahan'ny fikorianan'ny linear eo ho eo amin'ny 45 cm s-1. Ny santionany tsirairay (2 μl) dia natsindrona nandritra ny 30 segondra amin'ny fomba tsy misy splitless miaraka amin'ny mari-pana miditra amin'ny 225 ° C. Ny mari-pana ao amin'ny lafaoro GC dia nalamina avy amin'ny 35 ° C (3 minitra fihazonana) hatramin'ny 300 ° C amin'ny 100 ° C (100 ° C). mpizara effluent, 4 psi ny azota dia nampiana ary nizara 1: 1 tao amin'ny Gerstel 3D / 2 lakroa maty ambany (Gerstel, Mülheim, DE) eo anelanelan'ny lelafo ionization detector sy ny EAD. mifangaro amin'ny rivotra voasivana karbônina, amandoana (1,5 l min−1). Napetraka 0,5 sm avy eo amin'ny fivoahan'ny fantsona ny antenne. Ny moka tsirairay dia nanao kopia iray, ary ho an'ny moka mitady mpampiantrano, farafahakeliny telo farafahakeliny no natao tamin'ny santionan'ny urine isaky ny taona.
Famantarana ny fitambaran'ny bioactive ao amin'ny fanangonana ny lohan'ny ombivavy vaovao sy antitra amin'ny fampiasana GC sy spectrometer faobe (GC-MS; 6890 GC sy 5975 MS; Agilent Technologies) mba hahazoana valiny antenna amin'ny famakafakana GC-EAD, miasa amin'ny fomba ionization fiantraikany elektronika amin'ny 70 eV. (60 m × 0.25 mm savaivony anatiny, 0.25 μm sarimihetsika hatevin'ny) mampiasa helium ho toy ny dingana finday amin'ny salan'isa linear tahan'ny mikoriana ny 35 cm s-1.A 2 μl santionany dia natsindrona mampiasa ny injector toe-javatra sy ny mari-pana lafaoro toy ny GC-EAD fanadihadiana. Ny fitambarana dia fantatra mifototra amin'ny fotoana fitehirizana azy ireo (Kovát spectacle) sy ny masst spectacle famakiam-boky. (Agilent) .Nohamafisina tamin'ny alalan'ny fampidirana ireo fenitra tena izy ny fitambarana fantatra (Fizarana fanampiny 1: Table S2). Ho an'ny fandrefesana, heptyl acetate (10 ng, 99.8% ny fahadiovana simika, Aldrich) dia nampidirina ho fenitra ivelany.
Ny fanombanana ny fahombiazan'ny fifangaroan'ny fofona sentetika misy ny kapoaky ny bioactive fantatra amin'ny urine vaovao sy efa antitra mba hisarihana ny Ans.arabiensis mitady mpampiantrano sy mpitsentsitra rà, amin'ny fampiasana ny olfactometer sy protocole mitovy amin'ny etsy ambony. Ny fangaro sintetika dia nanahaka ny firafitry ny singa sy ny ampahany amin'ny fitambarana mifangaro amin'ny headspace mivadibadika avy amin'ny ranomandry vaovao, 28ora-ora, 728ora (sary 5D-G; fisie fanampiny 1: Tabilao S2). Ho famakafakana, ampiasao 10 μl amin'ny dilution 1:100 amin'ny fangaro synthetic feno, miaraka amin'ny taham-pamoahana ankapobeny manomboka eo amin'ny 140-2400 ng h-1 eo ho eo, mba hanombanana ny mahasarika ny mpampiantrano sy ny moka mpitsentsitra rà. dia esorina. Mitadiava valiny avy amin'ny mpampiantrano sy ny fangarony Ans.Arab vs synthetic sy subtractive dia nodinihina tamin'ny fampiasana regression logistic nominal arahin'ny fampitahana tsiroaroa ho an'ny tahan'ny hafahafa (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Mba hanombanana raha mety ho toerana fonenan'ny moka tazomoka ny fisotron'ny omby, dia voaangona araka ny voalaza etsy ambony ny fisotron'ny omby, ary apetraka ao anaty siny 3 litatra (100 ml) ny rano ary apetraka ao amin'ny fandrika fandrika. (Dikan-teny BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Fandrika folo napetraka 50 m mifanelanelana amin'ny kijana, 400 m miala amin'ny vondrom-piarahamonina (Silay, Etiopia, 5°53′24′′N, 37°29′24′′E) ary tsy nisy omby, teo amin'ny toeram-piompiana maharitra sy vohitra. Nihodina isan'alina nandritra ny dimy alina. Ny isan'ny moka voasambotra tamin'ny fandrika voafandrika tamin'ny fisotron'ny sokajin-taona samy hafa dia nampitahaina tamin'ny fampiasana fihemorana ara-pitaovana miaraka amin'ny fizarana binomial beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ao amin'ny tanàna iray misy tazomoka eo akaikin'ny tanànan'i Maki, faritra Oromia, Etiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Sary 6A). nofantenana ny tanàna ho an'ny fianarana (sary 6A). Ny fepetra ampiasaina amin'ny fisafidianana ny trano dia: tsy azo atao ny mihinana biby ao an-trano, tsy mahazo sakafo an-trano (manao kitay na saribao) (farafaharatsiny mandritra ny fotoam-pitsarana), ary trano misy mponina roa farafahakeliny, matory amin'ny famonoana bibikely. eo ambanin'ny moka tsaboina.Ny fankatoavana etika dia nomen'ny Institutional Research Ethics Review Board (IRB/022/2016) ao amin'ny Faculté of Natural Sciences (CNS-IRB), Addis Abeba University, araka ny toromarika napetraky ny World Medical Association Declaration of Helsinki. Ny ambaratongan'ny distrika sy ny paroasy ('kebele'). Ny famolavolana andrana dia nanaraka ny endrika efamira latina 2 × 2, izay nametrahana ny fangaro sy ny fanaraha-maso sentetika ho an'ny trano mifanandrify amin'ny alina voalohany ary nifamadika teo anelanelan'ny trano tamin'ny alina andrana manaraka. Naverina im-polo izany dingana izany. ny andro.
Ny fifangaroan'ny sentetika misy singa bioactive enina dia levona amin'ny heptane (97.0% solvent GC grade, Sigma Aldrich) ary navoaka tamin'ny 140 ng h-1 tamin'ny fampiasana ny dispenser wick [20]. Ny dispenser wick dia namela ny fitambarana rehetra navoaka tamin'ny ampahany tsy tapaka nandritra ny andrana 12 ora. Heptane dia nampiasaina ho toy ny fanaraha-maso ny foibe fanaraha-maso ny aretina. Prevention (CDC) light trap (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figure 6A). Ny fandrika dia nahantona 0.8 - 1 m ambonin'ny tany, akaikin'ny tongotry ny fandriana, ary ny mpilatsaka an-tsitrapo iray natory teo ambanin'ny moka tsy voatsabo ary niasa teo anelanelan'ny 18:00 sy 06:30. semi-bevohoka, ary bevohoka [21] dia nojerena tamin'ny alalan'ny famakafakana polymerase chain reaction (PCR) mba hamantarana ny karazana morphologically fantatra amin'ny anarana hoe A. gambiae sl Mpikambana ao amin'ny complex [23]. SAS Institute Inc.).
Tombanana raha azo antoka izany.arabiensis dia afaka nahazo urine, loharano azota lehibe indrindra, urea, tamin'ny alàlan'ny famahanana mivantana, tao anatin'ny 48 ora taorian'ny fitantanana nandritra ny 4 andro taorian'ny (dpe) fitadiavana mpampiantrano sy fitsapam-piterahana vehivavy mampinono rà (sary 1A). 0.0001 sy F (5,299) = 56.00, p <0.0001, tsirairay avy; Fig. 1B, C). Fanampin'izany, ny vehivavy mitady mpampiantrano dia mihinana kely kokoa amin'ny urine amin'ny ora 72 raha oharina amin'ny urine amin'ny ora 168 (sary 1B) . mM raha ampitahaina amin'ny fifantohana sy ny rano hafa rehetra, raha tsy azo avahana amin'ny 10% sucrose (F(10,813) = 15.72, p <0.0001; Figure 1D). Nifanohitra tamin'ny valin-tenin'ny vehivavy mivelona amin'ny rà, izay mazàna mifoka urea kokoa noho ny 1% rano, na dia kely kokoa aza ny sakafo misy urea. (F(10,557) = 78.35, p <0.0001; Figure 1).1E).Ankoatra izany, raha ampitahaina amin'ireo toe-batana roa ireo, ny vehivavy phlebotomized dia nitroka urea bebe kokoa noho ny vehivavy mitady mpampiantrano amin'ny fifantohana ambany indrindra, ary ireo vehivavy ireo dia nitroka ny habetsahan'ny urea mitovy amin'izany (F3, 9 = p. 0.0001; Fig. 1F, G). Raha toa ny fihinanana sakafo misy urea dia toa manana soatoavina tsara indrindra (sary 1D, E), ny vehivavy amin'ny fanjakana ara-batana roa dia afaka manova ny habetsaky ny urea voaangona amin'ny fitambaran'ny urea manontolo amin'ny fomba log-linear (sary 1F, G). ).Toy izany koa, ny moka dia toa mifehy ny fidirany azota amin'ny alalan'ny fandrindrana ny habetsahan'ny fisotrony, satria ny habetsahan'ny azota ao amin'ny urine dia hita taratra amin'ny habetsahan'ny voavoly (sary 1B, C ary B).
Mba hanombanana ny fiantraikan'ny urine sy ny urea amin'ny fiveloman'ny moka mitady mpampiantrano sy mifoka rà, ny vehivavy dia nomena urine ho an'ny efa-taona rehetra (vaovao, 24 h, 72 h, ary 168 h post-deposition) ary ny habetsahan'ny urea, ary koa ny rano voadio sy ny sucrose 10% dia natao ho fanaraha-maso (Figure 2) vavy (urine: χ2 = 108.5, df = 5, p <0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p <0.0001; sary 2B, C) ary vehivavy mivelona amin’ny ra (urine: χ2 = 93.0,0, df = 93.0,0; χ2 = 137.9, df = 5, p <0.0001; Figure 2D, E). Tamin'ny fanandramana rehetra, ny vehivavy nanome sakafo ny urine, ny urea ary ny rano dia manana taham-pahavelomana ambany kokoa raha oharina amin'ny vehivavy nomena sakafo sucrose (sary 2B-E) . (p = 0.016) manana ny mety ho velona ambany indrindra (sary 2B). Ankoatra izany, ny vehivavy mitady mpampiantrano nanome sakafo 135 mM urea dia velona ela kokoa noho ny fanaraha-maso ny rano (p <0.04) (sary 2C) . Raha oharina amin'ny rano, ny vehivavy nomena ny urine vaovao ary ny 24 ora p. 2D), raha ny vehivavy nohanina tamin'ny urine 72 ora dia tafavoaka velona ela kokoa noho ireo nomena Female short fresh urine sy 24-ora antitra urine (p <0.0001 sy p = 0.013, tsirairay avy; Figure 2D). Rehefa nomena 135 mM urea, ny vehivavy bevohoka rà dia tafavoaka velona kokoa noho ny rano hafa rehetra (1 p.
Ny fahaveloman'ny Anopheles arabinis vavy mpitsoka rà sy misakafo amin'ny fihinan'ny omby sy ny urea.Tao amin'ny bioassay (A), ny moka vavy dia nomena sakafo ahitana urine ombivavy vaovao sy antitra, urea isan-karazany, sucrose (10%) ary rano voadio (H2O). mandra-pahafatin'ny vehivavy rehetra mihinana urine (B, D) sy urea (C, E), ary ny sucrose sy ny rano.
Ny totalin'ny halavirana sy ny isan'ny fihodinana voafaritra amin'ny fitsapana fikosoham-bary mandritra ny 24 ora dia samy hafa amin'ny moka mitady mpampiantrano sy mitsoka rà, izay mampiseho fa kely kokoa ny asan'ny sidina amin'ny ankapobeny (sary 3) . Ny moka antitra 168 ora izay misakafo amin'ny urine dia naneho ny fomba sidina samihafa ary ny andro voalohany indrindra. Ny urine efa antitra 72 ora dia nihena tsikelikely nandritra ny 24 ora (sary 3).
Ny zava-bitan'ny sidina amin'ny Anopheles arabinis vavy mpihaza ra mifoka rà misakafo amin'ny fisotron'ny omby sy ny urea.Tao anatin'ny fitsapana ny fikorianan'ny fiaramanidina, ny moka vavy nohanina tamin'ny urine vao sy efa antitra, urea isan-karazany, sucrose (10%), ary rano voadio (H2O) dia nafatotra tamin'ny sandry mitsivalana, mihodinkodina malalaka (ambony). vehivavy, ny totalin'ny halavirana sy ny isan'ny sidina isan'ora ho an'ny sakafo tsirairay mandritra ny 24 ora dia voarakitra (maizina: volondavenona; hazavana: fotsy).
Amin'ny ankapobeny, ny asan'ny sidina ankapobeny amin'ny vehivavy mitady mpampiantrano dia nanaraka lamina mitovy amin'ny halaviran'ny sidina nandritra ny ora 24. Ny halaviran'ny sidina dia nisy fiantraikany be tamin'ny fihinanana sakafo (F (5, 138) = 28.27, p <0.0001), ary ny vehivavy mitady mpampiantrano dia nihinana 72 ora an'ny urine sy ny 000 lavitra lavitra (p00). Ny moka mihinana sucrose dia nanidina lava kokoa noho ny vaovao (p = 0.022) ary ny moka 24-h-taona (p = 0.022). Ny lamina dia mitovy, ny vehivavy mitady mpampiantrano nanome sakafo urea dia nitombo be ny halaviran'ny sidina miankina amin'ny fifantohana mivaingana (F (5, 138) = 1310.91, p <0.0001) .
Ny hetsika sidina amin'ny ankapobeny amin'ny moka mifoka rà dia tsy miova ary maharitra mandritra ny 24 ora amin'ny sakafo rehetra, miaraka amin'ny fitomboan'ny asan'ny urine mandritra ny tapany faharoa amin'ny vanim-potoana maizina ho an'ny vehivavy omena rano ary koa amin'ny vehivavy nomena sakafo vaovao sy 24 ora (sary 3) . 0.0004), ny sakafo urea dia tsy (F (5, 138) = 1.36, p = 0.24) .miaraka amin'ny sakafo hafa sy ny fanaraha-maso (vaovao, p = 0.0091; ora 72, p = 0.0022; ora 168, p = 0.001; sucrose, pO1; 6).
Ny vokatry ny fihinanana urine sy urea amin'ny mari-pamantarana ara-pananahana dia nodinihina tamin'ny bioassays manatody (sary 4A) ary nohadihadiana araka ny isan'ny atody napetraky ny vavy tsirairay, ny haben'ny atody, ary ny olitra instar voalohany vao foy. Sary 4B) .Ny vehivavy dia nanome urine 24 ora, ny sakafon'ny rà dia nametraka atody betsaka kokoa noho ny vehivavy nanome sakafo urine hafa ary nitovitovy tamin'ny sucrose nomena sakafo (sary 4B). Toy izany koa, ny haben'ny atody napetraky ny vehivavy misakafo dia miovaova amin'ny sakafo (F (5, 209) = 12.85, p01, p01. Ny vehivavy mihinana sucrose dia manatody lehibe kokoa noho ny vehivavy misotro rano, raha ny atodin'ny vavy omena amin'ny 168 h ny urine dia kely kokoa (sary 4C). Ankoatra izany, ny fihinanana urine dia misy fiantraikany be amin'ny haben'ny larva (F (5, 187) = 7.86, p <0.0001), miaraka amin'ny atody 2-ora lehibe kokoa avy amin'ny lavenona 4-ora. vavy mivoky rano mihoatra noho ny atody avy amin’ny olitra atody.Vehivavy mivoky rano sy 168h misakafo (sary 4D).
Ny fananan'ny vehivavy Anopheles arabinis mamahana ny fihin'ny omby sy ny urea.Ny moka vavy mivelona amin'ny rà dia nomena sakafo ahitana urine ombivavy vaovao sy efa antitra, urea isan-karazany, sucrose (10%), ary rano voadio (H2O) mandritra ny 48 ora alohan'ny hametrahana azy amin'ny bioassays (ora B) ary ny haben'ny atody. (C, F) sy ny haben'ny olitra (D, G) dia nisy fiantraikany be tamin'ny sakafo nomena (firin'ny omby: BD; urea: EG) .
Amin'ny maha singa azota lehibe indrindra amin'ny urine, ny urea, rehefa omena ho sakafo ho an'ny vehivavy mivelona amin'ny rà, dia misy fiantraikany be eo amin'ny mari-pamantarana fananahana amin'ny fianarana rehetra. Nanatody betsaka kokoa ny mM (sary 4E) 37.9; p <0.0001) dia miovaova kokoa (sary 4G).
Ny fanintonana amin'ny ankapobeny ho an'ny biby fiompy biby mpitaingin-tsoavaly. (72 ora: p = 0,0060, 168 ora: p = 0,012, pentane: p = 0,00070), Afa-tsy ny fofon'ny urine vaovao (p = 0,13; sary 5B). 0.067; Fig. 5C), ireo vehivavy ireo dia hita fa manintona kokoa amin'ny fitrandrahana tsy misy dikany raha oharina amin'ny urine 72 ora raha oharina amin'ny fanaraha-maso (p = 0.0066; Figure 5C).
Valiny amin'ny fitondran-tena ny fofon'omby voajanahary sy sentetika amin'ny fikarohana ny Anopheles arabianus mpampiantrano sy ra-fahan-dra.Skema amin'ny fantsona fitaratra olfactometer (A). Ny fanintonana ny fatran'ny headspace mivadibadika avy amin'ny fisotron'ny omby vao sy antitra amin'ny moka mampiantrano (B) sy ny mpitsentsitra (C) moka. (E), 72-ora (F), ary 168-ora (G) ny fisotron'omby antitra dia aseho. Electron antenna detection (EAD) dia mampiseho fiovan'ny voltase ho setrin'ny zavatra simika bioactive ao amin'ny lohan-doha nalaina avy amin'ny chromatograph entona ary hitan'ny lelafo ionization detector (FID). h-1) amin'ireo zavatra biolojika mavitrika dia aseho.Ny asterisk tokana (*) dia manondro valiny ambany amplitude. tsy mitovy amin'ny tsirairay (ANOVA tokana amin'ny fampiasana ny famakafakana post hoc an'i Tukey; p <0.05).
Vehivavy Ann.arabiensis, 72 h sy 120 h aorian'ny sakafon'ny rà, mandritra ny fanatodizana, dia tsy misy safidy naseho ho an'ny tsiranoka mipoitra avy amin'ny urine ombivavy vaovao sy antitra raha oharina amin'ny fanaraha-maso pentana (χ2 = 3.07, p> 0.05; rakitra fanampiny 1: sary S1).
Ho an'ny vehivavy Ann.arabiensis, GC-EAD sy GC-MS famakafakana dia fantatra fa valo, enina, telo ary telo kapoaky ny bioactive (sary 5D-G). ambonin'ny tokonam-baravarana dia nampidirina tamin'ny fanadihadiana fanampiny.
Ny totalin'ny tahan'ny famotsorana ireo kapoaky ny bioactive ao amin'ny fanangonana headspace dia nitombo avy amin'ny 29 μg h-1 amin'ny urine vaovao ho 242 μg h-1 amin'ny urine efa antitra 168 ora, indrindra noho ny p-cresol sy m-formaldehyde Phenol mitombo ary koa ny phenol. Ny taonan'ny urine, izay mifandray amin'ny fihenan'ny mari-pamantarana (be dia be) ao amin'ny chromatogram (sary 5D)-G ankavia tontonana) sy ny valin'ny physiologique amin'ireo fitambarana ireo (sary 5D-G tontonana havanana).
Amin'ny ankapobeny, ny fifangaroan'ny sentetika dia manana taham-boajanahary voajanahary mitovy amin'ny fitambarana bioactive fantatra amin'ny fitrandrahana mivaingana amin'ny lohan'ny urine vaovao sy antitra (sary 5D-G) ary toa tsy nahatonga ny antso lehibe tamin'ny fitadiavana mpampiantrano iray (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) na rà mandriaka (χ2 = s. 4, p = 0.30; Fig. 5I) .Na izany aza, ny fampitahana post hoc pairwise eo amin'ny fitsaboana dia mampiseho fa ny moka mitady mpampiantrano dia tena manintona ny fifangaroan'ny synthetic amin'ny urine 24-h raha oharina amin'ny fanaraha-maso pentane (p = 0.0086; Figure 5H).
Mba hanombanana ny anjara andraikitry ny singa tsirairay ao amin'ny fifangaroan'ny synthetic amin'ny urine 24-h, dia nodinihina ny fifangaroana enina amin'ny fifangaroana feno ao amin'ny Y-tube assay, izay nesorina ny fitambaran'ny tsirairay. Figure S2A), ny fifangaroan'ny subtractive rehetra dia manintona kokoa noho ny kely kokoa noho ny mifangaro tanteraka. Mifanohitra amin'izany kosa, ny fanesorana ny kapoaky ny tsirairay avy amin'ny fifangaroan'ny sentetika tanteraka dia tsy nisy fiantraikany tamin'ny fihetsiky ny moka mifoka rà (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), afa-tsy ny fangaro fanampiny (2 = 0.077), afa-tsy ny fangaro fanampiny (2 = 0. File 1: Sary S2B).
Tao amin'ny tanàna iray tsy voan'ny tazomoka any Etiopia, dia nodinihina nandritra ny folo alina ny fahombiazan'ny fifangaroan'ny fihin'omby 24 ora amin'ny fisarihana ny moka amin'ny toe-javatra any an-tsaha (sary 6A). Miisa 4.861 ny moka voasambotra sy fantatra, ka ny 45,7% amin'ireo dia Anthropus.gambiae.9% ary ny Anthropus.gambiae.9. Ny 35,4% dia Culex spp.(rakitra fanampiny 1: Tabilao S1).Anopheles arabinis no hany mpikambana ao amin'ny complexe karazana An.Gambiana fantatra amin'ny alàlan'ny fanadihadiana PCR. Amin'ny ankapobeny dia moka 320 no azo isan'alina, nandritra izany fotoana izany ny fandrika miaraka amin'ny baoty mifangaro synthétique dia tratra moka bebe kokoa noho ny fandrika tsy misy fangarony (χ10. . Nitombo be ny isan'ny moka tratra tao amin'ny fandrika misy ny fangaro synthetic: mitady mpampiantrano (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), famahanana ra vao haingana (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) ary bevohoka (χ28) 0,0123 ; rakitra fanampiny 1: Tabilao S1). Hita taratra amin'ny fitambaran'ny moka azo: mpampiantrano mitady > mampinono > bevohoka > semi-bevohoka > lahy.
Tombanana eny an-kianja ny fahombiazan'ny fifangaroan'ny fofon'omby synthetic mandritra ny 24 ora. Ny fitsapana eny an-kianja dia natao tany atsimo-atsinanan'i Etiopia (sarintany), akaikin'ny tanànan'i Maki (ampidiro), amin'ny fampiasana fandrika maivana Centers for Control Disease (CDC) (ankavanana) ao amin'ny trano mitambatra, miaraka amin'ny endrika efamira latina (sary avy amin'ny rivotra) (A). Anopheles farroes (C), amin'ny fomba hafa, fiantraikany ara-batana miankina amin'ny fanjakana. Fanampin'izany, ireo fandrika ireo dia nisambotra ny isan'ny moka Culex mpampiantrano.(D) Raha oharina amin'ny fanaraha-maso. fandrika fanaraha-maso tsiroaroa (misokatra; N = 5). ).Ny asterisk dia manondro ny lanjan'ny statistika (* p = 0.01 ary *** p < 0.0001)
Ny karazany telo dia nosamborina tamin'ny fomba hafa tao anaty fandrika misy fangaro synthetic. Mitady mpampiantrano (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001), famahanana ra (χ2(1, 517) = 16.7, p <0.0001) ary ny fitondrana vohoka (χ2(1, = 610). Ny .arabiensis dia voafandrika tao amin'ny fandrika namoaka ny fangaro synthetic (sary 6B), raha toa kosa ny habetsahan'ny An dia tsy mitovy. Ny Pharoensis amin'ny toe-batana ara-batana samihafa dia hita (sary 6C). Ho an'ny Culex, ny fitomboan'ny isan'ny moka mitady mpampiantrano dia hita ao amin'ny fandrika natao tamin'ny fangaro synthetic (1, χ29) (1, χ29). 0,0004; sary 6D), raha ampitahaina amin'ny fandrika fanaraha-maso.
Ny fandrika fandrika ho an'ny mpampiantrano izay hita any ivelan'ny toerana mety hampiantranoana eo anelanelan'ny toeram-piompiana sy ny vondrom-piarahamonina ambanivohitra any Etiopia dia nampiasaina mba hanombanana raha mampiasa fofon'omby ny moka tazomoka ho famantarana ny toeram-ponenany. Raha tsy misy famantarana ny mpampiantrano, hafanana, ary misy na tsy fisian'ny fofon'omby na tsy misy, dia tsy nisy moka azo nalaina (rakitra fanampiny 1: Sary S3). voasarika sy voasambotra ny moka, na dia kely aza, tsy miankina amin'ny taonan'ny urine (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; rakitra fanampiny 1: Sary S3 ).Mifanohitra amin'izany kosa, ny fanaraha-maso ny rano dia tsy nisambotra ny moka tazomoka amin'ny hafanana avo (Fizarana fanampiny 1: sary S3).
Ny moka tazomoka dia mahazo sy mizara ny zavatra misy azota amin'ny alàlan'ny famatsiana onitra amin'ny fihinan'ny omby (izany hoe, fotaka) mba hanatsarana ny toetran'ny tantaram-piainana, mitovy amin'ny bibikely hafa [2, 4, 24, 25, 26]. Ny moka vavy dia mahita io loharano io amin'ny alàlan'ny fofona ary afaka mandrindra ny fidiran'ireo singa azota ao amin'ny urine, anisan'izany ny urea, singa lehibe azota ao amin'ny urine [15, 16]. Miankina amin'ny toetry ny moka vavy, ny otrikaina ao amin'ny urine dia omena mba hanatsarana ny asan'ny sidina sy ny fahaveloman'ny olona mitady ra ho velona, ​​​​toy ny fiveloman'ny olona mitady ra sy vokatra tsara. Nandritra ny tsingerin'ny gonadotropika voalohany.Noho izany, ny fampifangaroana urine dia mitana anjara toerana manan-danja amin'ny sakafo ho an'ireo mpifindra monina tazomoka izay mihidy toy ny olon-dehibe tsy ampy sakafo [8], satria manome ny moka vavy ny fahafahana mahazo kapoaky ny azota manan-danja amin'ny fandraisana anjara amin'ny sakafo tsy dia misy risika. amin'ny programa fitantanana vector ho avy.