Ny lohahevitra famahana olana amin'ny LC sasany dia tsy lany andro, satria misy olana amin'ny fampiharana LC, na dia mihamitombo aza ny teknolojian'ny fitaovana rehefa mandeha ny fotoana.Misy fomba maro mety hipoitra amin'ny rafitra LC ary miafara amin'ny endrika faran'izay ratsy.
Nahafinaritra ny manoratra ity tsanganana “LC Troubleshooting” ity ary mieritreritra lohahevitra isam-bolana, satria misy lohahevitra tsy lany amin’ny endriny mihitsy. Raha eo amin’ny sehatry ny chromatography dia mikaroka lohahevitra na hevitra sasany lasa lany andro satria nosoloina hevitra vaovao sy tsara kokoa, eo amin’ny sehatry ny famahana olana, hatramin’ny nivoahan’ny lahatsoratra voalohany momba ny famahana olana tamin’ity gazety ity (ny gazety LC sasany tamin’izany fotoana izany). Tao anatin'ny taona vitsivitsy lasa izay, nifantoka tamin'ny fizarana LC Troubleshooting maromaro momba ny fironana ankehitriny misy fiantraikany amin'ny chromatography ranoka (LC) aho (ohatra, ny fampitahana ny fahatakarantsika ny fiantraikan'ny tsindry amin'ny fihazonana [2] Fandrosoana Vaovao) Ny fandikana ny valin'ny LC sy ny fomba hamahana olana amin'ny fitaovana LC maoderina. Ny lohahevitra "fiainana sy fahafatesana" momba ny famahana olana amin'ny LC — singa tena tsara ho an'ny mpanakorontana rehetra dia tena ilaina, na firy taona na firy ny rafitra ampiasaintsika. isan-karazany ny mety ho antony mahatonga ny ratsy endrika tampony!Tsy afaka mandinika ireo olana rehetra ireo amin'ny an-tsipiriany ao amin'ny lahatsoratra iray isika, ka amin'ity fizarana voalohany amin'ny lohahevitra ity, dia hifantoka amin'ny sasany amin'ireo izay hitako matetika indrindra aho. Manantena aho fa ny tanora sy ny antitra LC mpampiasa dia hahita torohevitra mahasoa sy fampahatsiahivana momba ity lohahevitra manan-danja ity.
Hitako fa mihamitombo hatrany ny famaliako ireo fanontaniana famahana olana amin'ny hoe "azo atao daholo ny zava-drehetra". Mety ho mora io valinteny io rehefa mandinika ny fandinihana izay sarotra adika, saingy hitako fa mety izany matetika. Miaraka amin'ny antony maro mety mahatonga ny endrika ratsy, dia zava-dehibe ny mitazona saina misokatra rehefa mandinika ny mety ho olana, ary afaka manao laharam-pahamehana ny antony mety hanombohana ny ezaka famahana olana, mifantoka amin'ireo zavatra mety hitranga indrindra.
Ny dingana lehibe amin'ny fanazaran-tena famahana olana rehetra - fa ny iray izay heveriko ho tsinontsinona - dia ny fanekena fa misy olana mila vahana. malama, fluffy, mitarika sisiny, tailing, sns), fa koa amin'ny sakany.Tsotra ny andrandraintsika amin'ny tena tampon'isa endrika. Ny teoria (6) dia manohana tsara ny boky fanantenana fa, amin'ny ankamaroan'ny toe-javatra, ny chromatographic tampon'ny tokony ho symmetrical sy mifanaraka amin'ny endriky ny Gaussian fizarana, araka ny aseho ao amin'ny sary 1a. lahatsoratra.Ny endrika tampon'isa hafa ao amin'ny sary 1 dia mampiseho ny sasany amin'ireo zavatra hafa mety hojerena — amin'ny teny hafa, ny sasany amin'ireo fomba mety tsy mety. Amin'ny ambiny amin'ity fizarana ity, dia handany fotoana hiresahana ohatra manokana momba ny toe-javatra mety hitarika amin'ireo karazana endrika ireo isika.
Indraindray ny tampon'isa dia tsy voamarika mihitsy ao amin'ny chromatograma izay antenaina ho eluted.Ny tabilao rindrina etsy ambony dia manondro fa ny tsy fisian'ny tampony (raha heverina fa ny santionany dia tena misy ny analyte kendrena amin'ny fifantohana izay tokony hahatonga ny valin'ny detector ho ampy hahitana azy eo ambonin'ny tabataba) dia matetika mifandray amin'ny olana sasany amin'ny fitaovana na toe-javatra tsy mety amin'ny finday (raha tsikaritra mihitsy). tampon'isa, matetika "malemy" loatra).Ny lisitra fohy momba ny olana mety hitranga sy ny vahaolana amin'ity sokajy ity dia hita ao amin'ny tabilao I.
Araka ny voalaza tetsy ambony, ny fanontaniana hoe ohatrinona ny fanitarana ny tampony dia tokony handeferana alohan'ny hijerena sy hiezahana hanitsy izany dia lohahevitra sarotra izay horesahiko amin'ny lahatsoratra ho avy. Ny zavatra niainako dia ny fanitarana tampony manan-danja dia matetika miaraka amin'ny fiovana lehibe amin'ny endrika tampony, ary ny tailing dia mahazatra kokoa noho ny mialoha ny tampony na ny fisarahana.
Ny tsirairay amin'ireo olana ireo dia noresahina tamin'ny antsipiriany tao amin'ny laharana teo aloha momba ny Famahana olana LC, ary ireo mpamaky liana amin'ireo lohahevitra ireo dia afaka mijery ireo lahatsoratra teo aloha ireo mba hahazoana fampahalalana momba ny fototry ny olana sy ny mety ho vahaolana amin'ireo olana ireo. antsipiriany bebe kokoa.
Mety ho vokatry ny trangan-javatra simika na ara-batana avokoa ny tampon-tailing, ny tendrony anoloana, ary ny fisarahana, ary ny lisitry ny vahaolana mety ho an'ireo olana ireo dia miovaova be, miankina amin'ny hoe miatrika olana simika na ara-batana isika. tampotampoka vitsivitsy no voa, fa ny ambiny mijery tsara, ny antony dia tena simika.
Ny antony simika amin'ny tailing ambony dia sarotra loatra raha tsy resahina vetivety eto. Ny mpamaky liana dia miresaka momba ny laharana farany momba ny "LC Troubleshooting" ho an'ny fifanakalozan-kevitra lalindalina kokoa (10). faobe analyte, na ny fepetra chromatographie dia tsy maintsy ovaina mba hahazoana endrika tampony tsara na dia amin'ny faobe lehibe kokoa aza.
Maro koa ny antony ara-batana mety hitranga amin'ny tailing ambony. Ireo mpamaky liana amin'ny fifanakalozan-kevitra amin'ny antsipiriany momba ny mety ho azo atao dia resahina amin'ny olana iray vao haingana momba ny "LC Troubleshooting" (11). Ny iray amin'ireo antony ara-batana mahazatra indrindra amin'ny tailing ambony dia ny fifandraisana ratsy eo amin'ny teboka eo amin'ny injector sy ny detector (12). izay mbola tsy nampiasainay teo aloha, ary nametraka ny boky kely tsindrona tadivavarana amin'ny ferrule izay efa novolavolaina teo amin'ny Stainless vy capillary.After sasany voalohany troubleshooting fanandramana, dia nahatsapa fa ny halalin'ny seranan-tsambo ao amin'ny tsindrona valva stator dia lalina kokoa noho ny mahazatra, ka niteraka boky maty lehibe eo amin'ny farany ambany ny port. volume maty eo amin'ny faran'ny seranan-tsambo.
Ny tampon'ny loha toy ny aseho amin'ny sary 1e dia mety ho vokatry ny olana ara-batana na simika ihany koa. Ny antony ara-batana mahazatra amin'ny sisiny voalohany dia ny tsy fahampian'ny fatran'ny tsanganana, na ny firindran'ny singa rehefa mandeha ny fotoana. Ny fepetra fihazonana "tsy linear".Eo ambanin'ny fepetra tsara indrindra (linear), ny habetsahan'ny analyte tazonin'ny phase stationary (noho izany, ny anton'ny fihazonana) dia mifandraika amin'ny fifantohana amin'ny analyte ao amin'ny tsanganana. Amin'ny chromatographique, midika izany fa rehefa mitombo ny fatran'ny analyte voatsindrona ao amin'ny tsanganana, dia lasa avo kokoa ny tampony, fa tsy mivelatra kokoa io fifandraisana io, fa tsy mivelatra ny fifandraisana. Tsy vitan'ny hoe lasa lava kokoa fa koa midadasika kokoa noho ny faobe kokoa no tsindrona.Ankoatr'izay, ny nonlinear endrika mamaritra ny endriky ny chromatographic tampon'isa, ka miteraka fitarihana na trailing sisiny.Toy ny faobe be loatra izay mahatonga ny tampon-tailing (10), ny tampon'isan'ny nitarika vokatry ny nonlinear fitehirizana dia azo fantarina ihany koa amin'ny alalan'ny fampihenana ny tsindrona natsindrona ny endrika tsy maintsy hihoatra ny fomba fitarihana faobe. sisiny, na tsy maintsy ovaina ny fepetra kromatografika mba hampihenana izany fihetsika izany.
Indraindray isika dia mahita izay toa tampon'ny "fizarana", araka ny aseho ao amin'ny sary 1f. Ny dingana voalohany amin'ny famahana ity olana ity dia ny hamaritana raha ny endriky ny tendrony dia vokatry ny fiaraha-miombon'antoka amin'ny ampahany (izany hoe ny fisian'ny fitambarana roa miavaka nefa mifanakaiky). Ny tampon'ny "split" dia mifandray amin'ny Performance ara-batana dia tsy misy ifandraisany amin'ny tsanganana mihitsy.Matetika, ny famantarana lehibe indrindra amin'ity fanapahan-kevitra ity dia ny hoe ny tampon'ny chromatograma rehetra dia mampiseho endrika mizara, na iray na roa fotsiny. raha mizara ny tampony rehetra, dia mety ho olana ara-batana izany, mety misy ifandraisany amin'ny tsanganana mihitsy.
Split tampon'isa mifandray amin'ny toetra ara-batana ny tsanganana ny tenany dia matetika noho ny ampahany voasakana inlet na fivoahana frits, na ny fandaminana indray ny poti ao amin'ny tsanganana, mamela ny finday dingana mikoriana haingana kokoa noho ny finday dingana ao amin'ny faritra sasany ny tsanganana fantsona fananganana .amin'ny faritra hafa (11).Ampahany clogged frit mety ho voadio indraindray amin'ny mamadika ny fikorianan'ny ny tsanganana; na izany aza, raha ny traikefako dia matetika vahaolana fohy izany fa tsy vahaolana maharitra.Matetika izany dia mahafaty amin'ny tsanganana maoderina raha toa ka mitambatra indray ao anatin'ny tsanganana ireo singa. Amin'izao fotoana izao dia tsara ny manolo ny tsanganana ary manohy.
Ny tampony amin'ny sary 1g, koa avy amin'ny ohatra vao haingana tao amin'ny laboratoara manokana, dia matetika manondro fa ny famantarana dia avo loatra ka tonga any amin'ny faran'ny avo ny valin range. avy amin'ny loharano samihafa, toy ny hazavana manjavozavo sy ny "current maizimaizina", mahatonga ny famantarana ho "manjavozavo" amin'ny endriny ary tsy miankina amin'ny fifantohana analyte. Rehefa mitranga izany, dia mora voavaha matetika ny olana amin'ny fampihenana ny habetsaky ny tsindrona amin'ny analyte - ny fampihenana ny habetsaky ny tsindrona, ny fanalefahana ny santionany, na ny roa.
Ao amin'ny sekoly chromatography, mampiasa ny famantarana detector (izany hoe, ny y-axis ao amin'ny chromatogram) ho toy ny famantarana ny analyte fifantohana ao amin'ny santionany. Noho izany dia toa hafahafa ny mahita ny chromatograma misy famantarana eo ambanin'ny zero, satria ny fandikana tsotra dia izany dia manondro ny ratsy analyte fifantohana - izay mazava ho azy fa tsy azo atao ara-batana.
Amin'ity tranga ity, ny tampony ratsy dia midika fotsiny fa ny molekiola mivoaka avy ao amin'ny tsanganana dia mandray hazavana kely kokoa noho ny dingana finday avy hatrany alohan'ny sy aorian'ny tampony. Mety hitranga izany, ohatra, rehefa mampiasa ny halavan'ny onjam-pandrenesana ambany (<230 nm) sy ny additives finday izay mitroka ny ankamaroan'ny hazavana amin'ireo halavan'ny onjam-peo ireo. tampon'isan'ny hanomana curve calibration sy hahazo vaovao quantitative marina, noho izany dia tsy misy antony fototra hisorohana azy ireo isaky ny se (io fomba io indraindray antsoina hoe "indirect UV detection") (13). Na izany aza, raha tena te-hisoroka ny ratsy tampon'isa tanteraka, amin'ny tranga ny absorbance detection, ny vahaolana tsara indrindra dia ny mampiasa ny hafa detection halavan'ny onjam, ka ny famakafakana ny dingana dia mitroka kokoa noho ny fandrafetana ny dingana amin'ny finday. maivana noho ny analyte.
Mety hiseho ihany koa ny tendrony ratsy rehefa mampiasa ny famantarana refractive (RI) rehefa tsy mitovy ny mari-pamantarana refractive amin'ny singa hafa ankoatry ny analyte ao amin'ny santionany, toy ny solvent matrix, raha tsy mitovy amin'ny mari-pamantarana refractive amin'ny dingana finday izany. ny dingana finday.
Ao amin'ny fizarana telo amin'ny lohahevitra fototra momba ny famahana olana LC, dia niresaka toe-javatra izay tsy mitovy ny endriky ny tendrony voamarika amin'ny endrika tampony andrasana na ara-dalàna. ny antony hitako matetika.Ny fahafantarana ireo tsipiriany ireo dia manome toerana tsara hanombohana famahana olana, fa tsy misambotra ny mety rehetra. Ireo mpamaky liana amin'ny lisitra lalindalina kokoa ny antony sy ny vahaolana dia afaka manondro ny tabilao rindrina LCGC "LC Troubleshooting Guide".
(4) tabilao rindrina "LC Troubleshooting Guide" LCGC.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ary Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.